KR20030086276A

KR20030086276A - 탁산의 규칙적 투여

Info

Publication number: KR20030086276A
Application number: KR10-2003-7011251A
Authority: KR
Inventors: 조세프 파르그놀리; 윌리암 씨. 로즈; 파멜라 트레일
Original assignee: 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니
Priority date: 2001-02-28
Filing date: 2002-02-26
Publication date: 2003-11-07
Also published as: NO20033809D0; EP1372636A2; YU66603A; TR200400375T3; HUP0402115A2; ZA200306450B; WO2002067928A2; JP2004538253A; RU2003129233A; DE60212813D1; DK1372636T3; CZ20032232A3; MXPA03007655A; ES2211374T3; EP1372636B1; IL157356A0; AR033609A1; DE60212813T2; SK10332003A3; BR0207519A

Abstract

동물의 종양 성장을 억제하는 탁산에 대한 규칙적 투여 요법이 제공된다.

Description

탁산의 규칙적 투여{METRONOMIC DOSING OF TAXANES}

관련 출원

본 출원은 2001년 2월 28일에 출원된 미국 가출원 일련 번호 제 60/271,944호의 35 §119(e) 하의 권리를 주장한다.

종래에는, 암 치료를 위한 화학치료적 약물 요법이 이들 세포독성제들의 "최대 허용량"(MTD)으로 치료함으로써 가능한 한 많은 종양 세포를 죽이도록 설계되어 왔다(문헌[Hanahan et al. J. Clinical Invest. 2000 105(8): 1045-1047] 참조). 이 MTD 투여 요법은 통상 유도 요법으로도 불리운다. 그러나, 이들 MTD의 투여로 인한, 건강한 조직에서 증식하는 세포 손상과 결부된 독성 부작용은 이들 약제의 사용을 심각하게 제한한다. 효능과 독성의 균형을 이루기 위하여, 통상적인 투여 스케쥴은 MTD 또는 이에 근접한 양의 세포독성제를 간헐적으로 적용한 후에, 정상 조직이 회복되게 하는 휴식기를 요구한다(문헌[Hanahan et al. J. Clinical Invest. 2000 105(8) : 1045-1047] 참조). 그러나, 이 표준 MTD 요법은 환자의 생활의 질을 심각하게 손상시킬 뿐만 아니라, 단지 일시적으로 반응한 후에, 세포독성제에 내성을 가진 보다 공격적인 암으로 종종 재발을 일으킬 수 있다.

따라서, 대체 요법이 활발하게 연구되고 있다. 한 대체 연구법은 종양 세포 그 자체에 대항하여 종양의 혈관을 형성하는 맥관계의 세포를 목표로 삼아 왔다.혈관신생은 기존 맥관계로부터의 혈관 형성 과정이며, 기존 내피의 보충 및 증식을 포함한다. 혈관신생은 여성의 생식 주기 및 상처의 치유시에 정상적으로 발생하는 생리적 과정이다. 그러나, 기능적 미세맥관계의 확립이 종양 성장 및 전파에 있어서 중요하기 때문에, 혈관신생은 암에서도 발생한다.

최근의 전임상의학 연구는 210 일 미만의 요법을 중단없이 보다 짧은 간격으로 세포비독성 VEGF 수용체-2 항체(문헌[Klement et al. J. Clinical Invest. 2000 105(8): R15-R24] 참조)를 투여한 경우의 효능을 증명하였을 뿐만 아니라, 세포독성제 시클로포스파미드(문헌[Browder et al. Cancer Res. 2000 60: 1878-1886] 참조) 및 빈블라스틴을 투여한 경우의 효능도 증명하였다.

문헌[Browder et al.]은 내약물성 루이스 폐암종인 마우스에게 시클로포스파미드를 매일 또는 3, 4, 5, 6, 7 또는 8 일마다 투여하는 것을 기술하고 있다. 이 실험에서, 6 일마다 시클로포스파미드(170 mg/kg)를 투여하는 것이, 4 일마다 135 mg/kg을 투여하는 것과 같이 보다 높은 투여량 강도를 갖는 스케쥴을 포함하는 시험된 다른 시클로포스파미드 스케쥴보다 종양 성장을 제어하는 데 더 효과적이라는 것을 발견하였다(문헌[Browder et al. Cancer Res. 2000 60: 1878-1886] 참조).

문헌[Klement et al.]은 두 독립적인 신경모세포종 세포주의 이종이식을 빈블라스틴, VEGF에 대한 flk-1/KDR(타입 2) 수용체를 목표로 하는 단일클론 중화 항체(DC101) 또는 두 가지 모두의 약제를 저 투여량으로 지속적으로 치료하는 것을 제시하였다. 이들 실험에서, 빈블라스틴은 대략 1.5 mg/m²으로 3 일마다 투여되는데, 이 투여량은 인간에 대해서는 이 약물의 MTD의 대략 1/4이고 마우스에 대해서는 MTD의 1/16 내지 1/20이다(문헌[Klement et al. J. Clinical Invest. 2000 105(8): R15-R24] 참조).

WO 00/64436은 치료적 이익을 달성하기에 충분한 투여 기간에 걸쳐 치료적 투여량 이하의 양으로 약리 활성제를 투여함으로써 한 개체의 허약의 치료 방법을 개시하고 있다. 그러나, 본 출원의 10-16 페이지에 기재된 42개 군의 제약상 활성제에 대한 이 방법의 효능에 관해서는 어떠한 데이터도 제공되지 않고 있다.

최대 허용량 미만의 투여량으로 지속적으로 또는 중단없이 보다 짧은 간격으로 약물을 투여하는 것을 만성 또는 "규칙적" 투여라고 지칭한다(문헌[Hanahan et al. J. Clinical Invest. 2000 105(8): 1045-1047] 참조).

발명의 요약

본 발명의 목적은 탁산에 대한 규칙적 투여 요법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적은 규칙적 투여 요법을 통하여 종양을 탁산에 노출시키는 것을 포함하는 종양 성장의 억제 방법을 제공하는 것이다. 이 규칙적 투여 요법은 단독으로 또는 다른 확립된 항암 치료와 함께 사용될 수 있다.

발명의 상세한 설명

일반적으로 튜뷸린 중합은 암 화학요법에 있어서 가장 효과적인 목표 중의 하나로서 인정되고 있다. 상업적으로 입수가능한 탁산인 탁솔(파크리탁셀) 및 탁소텔(도시탁셀)의 경우에 모두 광범위한 암에서의 임상적인 성공이 증명되었다.이들 약물의 효능은 스케쥴 의존적이고, 이점은 연장된 종양 노출 시간으로부터 나타난다. 예를 들면, 최근에는 매주 1회 탁솔의 반복 투여를 사용하여 임상적 효용이 증명되었다.

또한, 전임상의학 보고들은 탁솔이 강력한 항혈관신생 활성을 가질 수 있음을 나타내고 있다(문헌[Dordunoo et al. Cancer Chemother. Pharmacol. 1995 36: 279-82; Burt et al. Cancer Letters 1995 88: 73-9; Oktaba et al. Proc. Annu. Meet. Am. Assoc. Cancer Res. 1995 36: A2597; Belotti et al. Proc. Annu. Meet. Am. Assoc. Cancer Res. 1996 37: A397; Belotti et al. Clinical Cancer Res. 1996 2: 1843-9; Klauber et al. Cancer research 1997 57: 81-6; 및 Velasco et al. J. invest. Dermatol. 1999 112: 655] 참조). 항혈관신생 화합물의 목표 집단이 종양보다는 오히려 내피이므로, 효과적이기 위해서는 항혈관신생제가 만성적으로 투여되어야 한다고 제안되어왔다. 불행하게도, 상업적으로 입수가능한 탁산의 경구 생체이용률이 매우 낮아서(쥐에서 1% 미만임) 만성적인 반복적 투여를 극히 부담스럽게 한다.

3'-tert-부틸-3'-N-tert-부틸옥시카르보닐-4-데아세틸-3'-데페닐-3'-N-데벤조일-4-0-메톡시카르보닐-파크리탁셀은 경구 활성을 가진 파크리탁셀의 유사체이다. 3'-tert-부틸-3'-N-tert-부틸옥시카르보닐-4-데아세틸-3'-데페닐-3'-N-데벤조일-4-0-메톡시카르보닐-파크리탁셀의 구조는 화학식 I에 도시되어 있다. 따라서, 이하에서는 이 경구적으로 생체이용가능한 탁산을 화학식 I의 경구 활성을 가진 탁산이라 지칭한다.

화학식 I의 경구 활성을 가진 탁산은 쥐 및 개 모두에서 우수한 경구 생체이용률을 나타내고, 다수개의 인간 세포주에서 정맥내로 투여되는 파크리탁셀과 동등한 항종양 활성을 갖는다. IDN 5109로 지칭되는 경구적으로 효과적인 탁산도 기술되었다(문헌[Polizzi et al. Clicical Cancer Res. May 2000 6(5): 2070-4; Nicoletti et al. Cancer Res. February 15, 2000 60(4): 842-6] 참조). 또한, W099/49848은 파크리탁셀 및 도세탁셀과 같은 탁산의 경구용 제제를 기술하고 있고, W098/53811은 경구용 강화제가 또한 투여되는 탁산 투여 요법을 기술하고 있다.

본 발명은 종양 성장을 억제하고 암을 치료하기 위한 탁산, 바람직하게는, 화학식 I의 경구 활성을 가진 탁산, IDN 5109 또는 탁솔의 경구용 제제와 같은 경구적으로 생체이용가능한 탁산의 규칙적 투여 요법에 관한 것이다. 본 발명에 있어서, "규칙적 투여 요법"은 반복 투여시에 휴식기를 갖는 종래의 스케쥴을 통하여 최대 허용량으로 투여할 때의 약물에서 관찰되는 것에 비해 감소된 독성 부작용과 함께 원하는 약리 효과를 내는 약물에 대해 확립된 최대 허용량 미만의 투여량으로 약물을 반복적으로 투여하는 것을 의미한다. 휴식기의 기간은 휴식기에 선행하는치료 기간과 동일하거나 또는 더 길 수 있다. 규칙적 투여에서는, 본 명세서에서 유도 요법이라고도 지칭되는 표준 MTD 스케쥴을 통하여 투여되는 것과 동일한 누적 투여량이 궁극적으로 투여될 수 있다. 어떤 경우에는, 이는 각각의 단위 투여량으로 투여되는 양을 줄이면서 투여 요법을 행하는 동안에 고정시간표 및(또는) 빈도를 연장함으로써 달성된다. 따라서, "반복적인"은 만성 및(또는) 지속적인 투여 요법을 포함하는 것을 의미한다. 그러나, 규칙적 투여는 약물이 그 표준 MTD 스케쥴을 통하여 투여되는 경우 약물에 의해 환자에게 발생하는 이익을 유지할 수 있는 비교적 안전한 치료이므로, 규칙적 투여에 대한 중요성은 요법의 빈도 또는 요법의 기간만큼 중요하지는 않다. 따라서, 환자는 본 발명의 규칙적 투여 요법을 통하여 투여되는 탁산에 대해 보다 잘 견뎌낸다. 규칙적 투여는 또한 지속 투여 또는 만성 투여로도 지칭된다.

본 발명에 있어서, 탁산의 규칙적 투여로 얻는 원하는 약리 효과는 종양 성장의 억제이다. "종양 성장의 억제"는 종양 성장의 억제를 일으키고(일으키거나) 종양 크기를 감소시키는 것을 의미한다. 특정 기전이라 하지는 않더라도, 탁산의 규칙적 투여가 종양 세포 그 자체에 대한 것과는 대조적으로 종양의 혈관을 형성하는 맥관계 세포를 목표로 할 수 있는 것으로 믿고 있다. 따라서, 종양 성장의 억제는 종양 세포가 종양 성장 및 전파에 중요한 기능적 미세맥관계를 확립할 수 없도록 함으로써 야기될 수 있다.

본 발명의 투여 요법에 의해 감소되는 독성 부작용은 신경독성, 증식하는 정상 세포의 손상 및 체중 감소를 포함하며 이에 한정되지 않는다.

경구용 탁산의 규칙적 투여는 암치료로서 단독으로 또는 표준 MTD 요법을 통하여 투여되는 다른 확립된 항암 요법과 병행하여 또는 협력하여 사용될 수 있다. 본 발명의 규칙적 투여 요법과 병행하여 또는 협력하여 사용될 수 있는 확립된 항암 요법의 예는 파크리탁셀, 도세탁셀, 시클로포스파미드, 카르보플라틴, 에토포시드, 독소루비신, 이리노테칸, 토포테칸, 빈블라스틴, 젬시타빈, 테가푸르/우라실 조합물, 카페시타빈, 5-플루오로우라실, 헤르셉틴, 또는 세툭시맵(a. k. a., (어비턱스)(ERBITUX)(등록상표))과 같은 항체, 비칼루타마이드 또는 플루타마이드와 같은 항호르몬 요법 및 방사선 요법을 포함하며 이에 한정되지 않는다. "병행하여 또는 협력하여"는 본 발명의 규칙적 투여 요법이 확립된 항암 요법의 표준 MTD 요법으로서 동시에, 또는 보다 바람직하게는, 유도 치료 요법에 의하여 환자에게 발생하는 이익을 유지하도록 유도 요법 과정들 사이에서 행해지는 것을 의미한다. 유도 요법 과정들 사이에서 행해지는 경우, 그 취지는 다음 과정의 유도 요법을 견딜 수 있는 환자의 건강 또는 환자의 능력을 과도하게 손상시키지 않으면서 종양 성장의 억제를 유지하는 데에 있다.

화학식 I의 경구용 탁산의 항혈관신생 활성은 시험관내 내피 세포에서 및 종양독립적인 생체내 혈관신생 모델에서 평가된다. 증식 및 혈관신생 분석시험 모두가 시험관내 내피 세포 활성을 평가하는 데 사용된다.

시험관내 활성을 평가하기 위해, 혈관신생 과정에 관련된 내피 세포 기능에 미치는 화학식 I의 경구용 탁산의 효과를 탁솔(파크리탁셀)과 비교하여 평가하였다. 평가된 기능은 팽창하는 맥관계의 관강을 형성하는 내피 세포의 증식을 포함한다. 표 1에 나타낸 바와 같이, 화학식 I의 경구용 탁산은 두 개의 별개의 실험에서 인간 제정맥 내피 세포(HUVEC) 증식을 억제하는 데에 탁솔과 거의 동등한 효능이 있었다. 또한, HUVEC에 대해 관찰하였을 때와 거의 동일한 농도에서 종양 세포주 H3396에 대한 억제가 관찰되어, 이들 탁산이 내피 및 종양 세포 모두의 증식을 억제하는 세포독성 효과를 나타낸다는 것을 보여주었다.

HUVEC 및 H3396 증식의 억제

화합물	세포내 IC₅₀[μM]
화합물	HUVEC	H3396	H3396/HUVEC
화학식 I	0.002, 0.002	0.002, 0.003	1.25
탁솔	0.003, 0.005	0.003, 0.004	0.88

또한, 마트리겔(MATRIGEL) 상에서 내피 세포가 혈관신생으로 분화하는 것을 포함하는 내피 세포 기능에 미치는 효과를 평가하였다. 표 2에 나타낸 바와 같이, 이들 탁산 모두에 대하여 마트리겔 상에서 혈관신생을 완전히 억제하는 탁산의 최저 농도는 0.0500 μM이었다. 또한, 농도를 추가로 감소시켜도 이들 탁산 모두는 억제 효과를 여전히 보유하였다.

마트리겔 상에서의 HUVEC 혈관신생의 억제

화합물	5.OOOμM	0.5000μM	0.0500μM	0.0050μM	0.0005μM
화학식 I	C	C	C	P	P
탁솔	C	C	C	P	P

C= 완전함; P= 부분적임

따라서, 이들 탁산은 혈관신생의 두 중요한 과정, 즉 내피 세포 증식 및 분화를 억제하였다. 따라서, 그들의 항 종양 효과는 그들의 항증식 활성의 결과일 뿐만 아니라 다른 내피 세포 기능에 대한 그들의 활성의 결과이기도 하다.

또한, 이들 탁산을 마트리겔 플러그를 사용하여 생체내에서 평가하였다. 이들 실험에서, 혈관신생 반응은 다양한 치료적 투여량 및 치료적 투여량 이하의 투여량에서 마트리겔 플러그에서 발생하는 내피 세포의 수를 평가함으로써 측정하였다. 플러그에서 발생하는 내피 세포의 수는 탁솔 및 화학식 I의 경구용 탁산 모두에 대해 투여량 의존 방식으로 시험된 투여량과 상호관련되어 있다. 이 스케쥴(5 일간 격일로 실시함; q2dx5)에 따른 대조군과 비교할 때, 24 mg/kg인 탁솔의 최대 허용량(MTD)에서 50%를 초과하는 세포 수의 감소가 관찰되었다. 화학식 I 경구용 탁산의 경우, MTD인 60 mg/kg 및 36 mg/kg 및 18 mg/kg인 두개의 보다 낮은 투여량에서 50%를 초과하는 플러그 내 세포의 수의 감소가 관찰되었다. 따라서, MTD의 30% 정도로 낮은 투여량에서도 세포 수의 감소가 여전히 50%를 초과하였다. 또한, 내피 세포 수에 미치는 이들 탁산의 효과는, 비록 보다 낮은 투여량에서 시험하면 그 효과가 덜하더라도, 대조 동물군과 비교할 때 이들 세포가 적혈구 세포를 포함하는 관 유사 구조로 조직화하는 능력에 의하여 증명되는 바와 같이 여전히 형태적 결함을 일으킨다. 따라서, 항혈관신생 효과는 화학식 I의 경구용 탁산의 투여량이 최대 허용량보다 대략 13 배 낮은 경우에서도 여전히 생체내에서 관찰된다.

또한, 화학식 I의 경구용 탁산은 유도 화학요법 과정들 사이에서 지속 요법으로서 투여될 때, 정맥내로 투여되는 파크리탁셀과 동등한 증상 발현 전의 항종양 효능을 갖는 것으로 증명되었다. 이들 실험에서, 유방 16/C 쥐 매개 종양을 갖는마우스들이 두 일반적인 치료 연구법을 수여받도록 하였다: a) 18 일간의 휴식기가 그들 사이에 있는 두 번의 연속적인 매일 치료 스케쥴에 따라 정맥내로 투여되는 파크리탁셀(즉, qdx5; 10, 32); 또는 b) 정맥내 파크리탁셀의 제 1 과정이 끝난 후 1 주일 뒤에 개시되는 화학식 I의 경구용 탁산의 경구 투여로 이루어진 추가의 qdx5 요법 과정을 갖는 18 일간의 휴식기가 그들 사이에 있는 두 번의 연속적인 매일 치료 스케쥴에 따라 정맥내로 투여되는 파크리탁셀(즉, 파크리탁셀 qdx5; 10, 32 + 화학식 I qdx5; 21). 투여량 반응 적정을 각 치료 연구법을 사용하여 수행하였다. 선택된 치료 요법으로 얻어진 전 로그 세포사(LCK)값의 요약을 표 3에 나타내었다.

단계적으로 생기는 피하 유방 16/C 암종을 갖는 마우스에서 정맥내 파크리탁셀 치료 과정 사이에 경구용 탁산 지속 요법을 끼워 넣었을 때의 효과

치료(mg/kg/주사)	효과
파크리탁셀qd 10-14, iv	화학식 Iqd 21-25, po	파크리탁셀qd 32-36, iv	전 LCK(치유수/총계*)
30	-	30	10.1(2/8)
30	-	20	9.5
20	-	30	4.7(1/8)
20	-	20	4.5
30	20	30	독성
30	13	30	LD25
20	20	20	>13.8(4/8)
20	13	20	9.0(1/8)

* 치유수는 종양 이식 후 88일 째에 평가했음.

따라서, 파크리탁셀 단독으로 얻은 최적의 효과(8회 중 2회 치유를 포함하는 10.1 LCK)를 각각의 두 과정의 치료를 하는 동안에 거의 MTD 요법에서 즉, 주사당 30mg/kg의 파크리탁셀에서 얻었다. 각각 또는 두 과정의 요법에서 파크리탁셀을 더 적게 사용한 경우에는 효능이 감소되었다. 이에 비하여, 화학식 I의 경구용 탁산을 특정 정맥내 파크리탁셀 치료 과정에 첨가하는 경우에는, 전반적인 효능의 개선이 관찰되었다. 이들 실험에서 화학치료 요법의 최적의 조합은 화학식 I의 경구용 탁산의 투여당 20 mg/kg을 매 파크리탁셀 과정 당 정맥내 파크리탁셀의 주사당 20 mg/kg과 협력하는 것으로 이루어졌다. 또한, 치료 과정 사이의 기간 동안에 일부 종양 재성장이 발생하는 파크리탁셀의 단독 치료와는 달리, 파크리탁셀 과정 사이에 화학식 I의 경구용 탁산을 투여하면, 억제되었으며, 심지어는 이 조합 치료 군의 평균 종양 크기가 약간 감소되었다.

추가 실험에서, 경구용 탁산은 정맥내 파크리탁셀을 사용하는 단일 유도 요법 과정 후의 지속 요법으로서 제공되었다. 오직 정맥내 파크리탁셀만을 수여받은 마우스의 경우, 종양 이식 후 제 10 일째 시작되는 주사당 45 mg/kg, qdx5, 정맥내 투여로 이루어진 MTD 요법은 다음의 보다 낮은 투여량인 주사당 30 mg/kg과, 동일한 최적의 치료 결과 1.9 LCK를 가져왔다. 대조적으로, 다른 마우스 군은 파크리탁셀을 사용하는 유도 화학요법을 수여받았으나, 그 다음, 화학식 I의 경구용 탁산을 사용하는 두 상이한 지속 요법 중의 하나를 수여받았다. 표 4는 다양한 치료의 요약 및 이 실험으로부터의 결과를 제공한다.

단계적으로 생기는 피하 유방 16/C 암종을 갖는 마우스에서 정맥내 파크리탁셀을 사용하는 유도 요법에 이어 화학식 I의 경구용 탁산을 사용하는 지속 요법을 행한 효과

치료(mg/kg/주사)	효과
파크리탁셀qd 10-14, iv	화학식 I, po	전 LCK(치유수/총계)*
파크리탁셀qd 10-14, iv	q2dxll; d. 21	전 LCK(치유수/총계)*	q4dx6; d. 21
45	-	-	1.9(1/8)
30	-	-	1.9(2/8)
45	30	-	독성
45	13	-	3.9(2/8)
30	30	-	독성
30	20	-	독성
30	13	-	3.5(2/8)
20	30	-	독성
20	20	-	4.0(1/8)
20	13	-	2.5
45	-	45	LD25
45	-	30	5.5(1/8)
45	-	20	2.8
30	-	45	4.6(3/8)
30	-	30	4.4(2/8)
30	-	20	3.7
20	-	45	2.4
20	-	30	2.3

*치유수는 종양 이식 후 60일 째에 평가하였음.

경구용 탁산의 별도의 대략 4 주간의 이익은 이들 결과 내에서 분명히 드러난다. 최대 허용 조합(파크리탁셀 + 화학식 I) 요법에서, 실험 종결시에(60일째) 판단한 결과, 얻어진 가장 우수한 LCK는 간헐적으로 치유되는 5.5였다. 경구용 탁산 지속 치료는 종양의 진행을 방지하는 것 이상으로 더 효과적이었으며, 또한 종양 부하를 감소시켰다.

또한, 탁산을 단독으로 사용하는 규칙적 투여 요법은 마우스에서 인간 종양 세포의 성장을 억제시키는 데에 성공적이었다. 이들 실험에서는, MTD 미만의 화학식 I의 경구용 탁산의 투여량을 사용하는 연장된 30일 치료 스케쥴을 L2987 인간 폐 종양 성장을 억제하는 데 통상적으로 사용되는 MTD 및 통합된 스케쥴 연구법과매우 합리적으로 비교하였다. L2987 인간 폐 종양을 이식하고, 약물 투여 전에 50 내지 100 mm³에 도달하도록 하였다. 통상적으로 사용된 MTD 및 통합된 스케쥴 연구법은 표준 스케쥴(Q2DX5)에 따라 경구적으로 전달되는 투여당 60 mg/kg의 투여량으로 이루어졌다. 규칙적 투여 요법은 300 mg/kg의 동일한 누적 투여량을 전달하지만, 수정된 스케쥴(15일간 격일 실시; Q2DX15)에 따라 경구적으로 전달되는 투여당 20 mg/kg의 투여량으로 이루어졌다. 표준 스케쥴의 경우, 항종양 반응이 더 크게 관찰되었지만, 체중 감소도 또한 관찰되었다. 대조적으로, 규칙적 투여 요법은 또한 종양 성장을 억제하였고, 체중 감소가 관찰되지 않았다. 따라서, 탁산으로 규칙적 투여를 하는 것이 안전하면서도 또한 종양 성장을 억제하는 효과적인 수단을 제공한다.

이 내용을 읽을 때 당업자가 이해하는 바와 같이, 이들 실험에서 사용된 규칙적 투여 요법은 단지, 최적의 규칙적 투여 요법에 도달하기 위하여 표준 MTD 스케쥴에 대해서 이루어질 수 있는 투여 간격 및 기간에서의 가능한 변화들 중 일례를 제공하는 것 뿐이다. 예를 들면, 화학식 I의 경구용 탁산에 대하여, 종양 성장을 억제하는 데 효과적일 것으로 기대되는 규칙적 투여 요법은 일일 투여, 격일 투여 및 매주 1회 투여를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 이들 투여 요법은 대략 1개월로부터 1년 이상까지의 시간 범위의 기간에 걸쳐 진행된다. 이들 예시적인 규칙적 투여 요법에서 투여되는 약물은 각각 대략 0.25 mg/M²내지 120 mg/M², 0.50 mg/M²내지 240 mg/M²및 1 mg/M²내지 700 mg/M²의 범위일 수 있다. 또한, 시험관내 및 생체내 혈관신생 실험은 300 mg/kg 미만의 누적 투여량이 또한 종양 성장을 억제하는 데에 효과적일 것이라는 증거를 제공한다. 따라서, 화학식 I의 경구용 탁산에 대한 규칙적 투여 요법은 또한 225 mg/kg, 150 mg/kg, 75 mg/kg, 37.5 mg/kg 및 심지어 18.75 mg/kg과 같은 보다 적은 누적 투여량을 전달하도록 설계될 수 있다. 또한, 다른 탁산들에 대한 규칙적 투여 요법은 그들의 개별적 표준 MTD 스케쥴 및 하기 실시예에서 기술되는 바와 같은 그들의 시험관내 및 생체내 혈관신생 분석시험에서의 활성에 기초하여 본 명세서에서 화학식 I의 경구용 탁산에 대하여 제공되는 교시에 따라 통상적으로 설계될 수 있다.

또한, 본 발명은 동물에 있어서 탁산이 종양 성장을 억제하게 하기 위한 규칙적 투여 요법의 사용 방법에 관한 것이다. 바람직한 실시태양에서, 이들 방법에서 사용되는 탁산은 경구적으로 생체이용가능한 것이다. 바람직한 경구용 탁산은 화학식 I의 탁산이다. 그러나, 다른 탁산 및 탁산을 지속적인 저투여량으로 투여하기 위한 다른 수단이 또한 사용될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 규칙적 투여량의 다른 투여 방법은 흡입을 통하여, 진피내로, 즉, 경피 패치를 통하여, 좌약을 통하여, 직장내로, 근육내로, 복강내로, 정맥내로 및 피하를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

본 발명에 있어서, "동물"은 종양이 성장하는 임의의 동물 및 특히 인간을 포함하는 것을 의미한다.

본 발명을 추가로 예시하기 위해, 하기의 비제한적인 실시예가 제공된다.

실시예 1: HUVEC 증식

1차 인간 제정맥 내피 세포(HUVEC)를 클로네틱스 인크.(CLONETICS Inc.)(켈리포니아주 샌디에고 소재)로부터 구입하여 2 내지 3번 계대하여 사용하였다. 세포 배양물을 수확하기 24 시간 전에 펄스시킴으로써 세포내³H-티미딘 혼입을 사용하여 증식을 측정하였다. 종양 세포에 미치는 화합물의 활성을 평가하는 데에 인간 유방암종주 H3396을 사용하였다. 세포(2 ×10³)를 콜라겐 IV 코팅된 96 웰 플에이트 상에서 평판배양하였다. 24 시간이 지난 후, 화합물을 다양한 농도로 첨가하였다. 48 시간이 지난 후,³H-티미딘을 첨가하여, 세포가 24 시간에 걸쳐 이 표지를 혼입하도록 하였다. 세포 추출물을 유리 필터에 수집하고, 혼입된 방사능을 베타 섬광계측기에서 카운팅함으로써 측정하였다.³H-티미딘 혼입의 50% 억제를 일으키는 약물 농도로 정의되는 IC₅₀을 플로팅한 데이터로부터 추정하였다. 특정 화합물에 의한 내피 세포에 대한 세포 선택적 억제는 H3396 종양 세포주와 비교할 때, 적어도 10 배를 초과하는 HUVEC 1차 세포 배양의 억제로 정의하였다.

실시예 2: 시험관내 혈관신생

혈관신생은 적혈구 세포를 포함하는 기능적 혈관의 망상조직을 생성시킨다. 부분적으로 그 과정을 모방하는 시험관내 분석시험이 확립되어 있다. HUVEC와 같은 1차 내피 세포를 마트리겔(콜래버레이티브 리서치, 인크.(Collaborative Research, Inc.)) 에 올려놓았을 때, 다발로 정렬하는 혈관의 3차원 망상조직을 형성한다. 이 분석시험 체계에서, 혈관신생은 배양 배지(EBM-2; 클로네틱스 인크.)로 1:1 희석시킨 마트리겔로 이루어진 세포외 단백질 메트릭스 상에서 평가하였고, 60 분간 37 ℃에서 중합시켰다. 24 웰 플레이트 중의 웰당 HUVEC(3.5 ×10⁴)를 비히클 또는 시험 화합물을 포함하는 배지 0.5 ml 중에서 중합된 마트리겔 0.3 ml 상에 분배시켰다. 세포를 평판배양한 후 18 시간이 경과한 뒤에, 배지를 제거하고, 배양액을 포르말린 중에서 고정시켰다. 마트리겔 상에서의 혈관의 억제를 상 대비 조명을 사용하는 역상 현미경으로 평가하였다.

이 분석시험에서 화합물의 효과를 측정하기 위해, 상세한 연구법이 개발되었다. 억제의 완전한 결여는 주어진 농도의 화합물 노출이, 단일 세포 및 나머지 세포가 망상조직 또는 분지가 있거나 또는 없는 종장형 혈관유사 구조를 형성할 때 평판배양된 HUVEC의 1% 미만인 경우로 정의된다. 부분적인 억제는 많은 수의 단일 세포와의 불완전한 망상조직을 갖는 것으로 정의된다. 완전한 억제는 단일 세포가 종장형 또는 분지 구조를 갖지 않을 때 생기는 세포의 99%를 초과하는 것으로 정의된다. 배경 효과를 확립하기 위하여 시험 화합물의 효과를 평가하기 전에 치료된 군에서 생기는 단일 세포의 총 수로부터 비히클 치료(대조군) 후에 생기는 단일 세포를 뺀다.

실시예 3: 생체내 모델 및 연구

무흉선(nu/nu) Balb/c 마우스에서 일련의 피하 계대접종으로 지속되는 LX1 인간 폐 종양 단편을 크기가 대략 0.1 mm³인 소단편으로 피하 이식하였다. 이 연구에서 이 종양의 종양부피 배가시간은 2.8 일이었다. 종양의 크기가 150-200 mm³의 범위에 도달했을 때, 액체 마트리겔을 종양의 측면 반대쪽으로 피하 주사하였다. 24 시간 뒤에, 다양한 투여량 및 스케쥴로 치료를 개시하였다. 이식 전에, 마트리겔을 문헌[Passiniti et al.(Lab. Invest. 1992 67: 519-28)]에 기술된 방법에 따라 고화된 마트리겔을 밤새 4 ℃에서 얼음위에 놓음으로서 제조하였다. 액체 상에서 및 얼음위에 있는 동안, VEGF 및 bFGF(뉴저지주 록키힐에 위치한 페프로테크, 인크(Peprotech, Inc.))를 각 최종 농도가 75 ng/ml 및 300 ng/ml이도록 마트리겔에 첨가하였다. 이들 성장 인자의 저장 용액을 PBS 중에서 10 mg/ml의 농도로 바로 만들었다. 최종 처리한 뒤 24 시간이 경과한 후, 동물을 경추 골절시킴으로써 희생시키고, 처리 동물군 및 대조 동물군으로부터의 마트리겔 플러그를 절개하고, 48 시간 이상 동안 10% 중성 완충 포르말린 중에서 고정시켰다. 그 다음, 이들 플러그를 파라핀 임베딩 처리를 하고, 5 μm 두께로 나눈 다음, 정량 분석 전에 헤마톡시린 및 에오신으로 염색하였다. 플러그내 내피 세포의 수를 20배 비율로 이마게프로 플러스 소프트웨어(IMAGEPRO PLUS software)(메디아 사이버네틱스, 인크(Media Cybernetics, Inc.), 메릴랜드주 실버 스프링 소재)를 사용하여 측정하였다. 각 플러그로부터 50개의 시계를 사용하여 내피 세포의 수를 세었다. 세포 수를 정리하고, 대조군과 통계적으로 비교하였다.

혈관신생은 이들 플러그 내에서 비히클 처리군에 대한 화합물 처리군으로부터의 플러그로 이주한 내피 세포의 수로서 측정하였다. 치료적 투여량에서 화합물효능을 보장하기 위하여, 이들 연구 전반에 걸쳐 이들 화합물의 항종양 효과를 모니터링하기 위한 목적으로 종양을 이식하였다.

투여를 위하여, 탁솔 및 화학식 I의 경구용 탁산을 1:1 크레모프르/에탄올 용액 중에서 현탁하고, 각 화합물을 포함하는 10% 크레모프르 및 10% 에탄올의 최종 농도에서 전달하였다. 탁솔의 경우, 정상 염수를 희석제로 사용하고, 정맥내로 전달하였다. 화학식 I의 경구용 탁산의 경우에는 멸균수를 희석제로 사용하고, 경구 급식으로써 전달하였다.

실시예 4: 확립된 파크리탁셀 요법과 조합하여 규칙적 투여를 사용한 전임상의학 연구

파크리탁셀 및 화학식 I의 경구용 탁산을 크레모프르/에탄올(50/50)에 용해시킨 다음, 사용전 대략 1 시간 내에 물(화학식 I) 또는 염수(파크리탁셀)로 희석시켰다. 비히클의 각 성분의 최종 농도는 다음과 같았다: 크레모프르 10%; 에탄올 10%; 수용성 80%.

C3H 통상적인 마우스를 할란(Harlan)-스프라그 다우리(Sprague Dawley)(인디애나주 인디애나폴리스 소재)로부터 구입하고, 마우스에게 먹이 및 물을 자유로이 먹였다.

전이 유방 16/C 쥐 매개 암종을 C3H 마우스에서 격주로 증식시켰다. 실험은 종양 단편의 투단침에 의한 피하 삽입으로 개시하였다.

생체내 종양 시험을 위하여, C3H 마우스에게 유방 16/C 종양 단편을 피하 이식하였다. 미처리 대조군을 제외하고는, 모든 처리를 종양 이식 후 10 일째에 개시하였다. 모든 군은 8 마리의 마우스를 포함하였다. 종양을 주당 1 회 또는 2 회 측정하였고, 그 치수를 수학식 중량(밀리그램) = a ×b²(식 중, a=길이 및 b=폭(밀리미터))을 사용하여 중량으로 전환하였다. 종양이 1 그램에 도달하는데 걸린 각 마우스의 군 내의 평균 시간을 측정하고, 처리군(T) 대 대조군(C)에 대하여 1 그램의 종양 목표 크기에 도달하는 데 걸린 평균 시간의 지연을 계산하였다. 또한, 종양 성장의 지연(일 단위의 T-C 값)을 수학식 T-C/(대조군의 종양 부피 배가시간, TVDT) ×(3.32)를 사용하여 전 로그 세포사(LCK) 값으로 전환하였다. 1 LCK를 초과하거나 또는 이와 동등한 LCK를 활성적인 결과로 간주하였다. 치유를 각 실험 말에 평가하여 종양 질량이 35 밀리그램을 초과하는 종양이 없을 때로 정의하였다. 실험은 모든 치료가 끝난 후에 10 × TVDT가 경과한 후에 종료하였다.

실시예 5: 진행성 악성종양이 있는 환자에게서 지속적 규칙적 일일 스케쥴에 따라 투여되는 화학식 I의 경구용 탁산의 상 I 안전성, 약동학적 및 투여량의 단계적 확대 연구

안전성, 투여량 제한 독성 및 화학식 I의 경구용 탁산의 최적의 생체활성 투여량을 평가하기 위하여 외래환자를 대상으로 진행성 또는 전이성 암에 걸린 한 무리의 환자들이 매일 구강으로 화학식 I의 경구용 탁산의 단계적으로 확대되는 투여량을 수여 받도록 한 상 I, 개방-표지, 단일 아암(arm) 투여량 단계적 확대 연구를 설계하였다. 또한, 약동학 및 약역학도 수행될 것이다. 연구는 대략 45 내지 65명의 환자를 대상으로 행할 것이다. 경구용 탁산의 개시 투여량 수준은 공복시지속적으로 1 일당 주어진 1 회에 2 mg의 투여량으로 고정될 것이다. 투여량을 다음과 같이 단계적으로 확대하였다:

투여량 수준	화학식 I 투여량*	최소 환자수#/무리
1	2 mg/일	6
2	4 mg/일	6
3	4 mg/m²/일	6
4	6 mg/m²/일	6
5	9 mg/m²/일	6
6	12 mg/m²/일	6
7	16 mg/m²/일	6
8 이상	이전 투여량의 33% 증분으로 증가	6

모든 환자를 기록을 위하여 다음 투여량 수준을 개시하기 전에 28 일 이상 동안 관찰할 것이다. 연구 전반에 걸쳐서, 환자를 동시에 개시 투여량 수준으로 참여시켰다. 현재 투여량 수준에서 모든 6명의 환자가 그들의 치료의 제 1 과정를 마치고, 1 명 미만의 환자가 제 1 과정 중에서 투여량-제한 독성을 경험하는 경우, 다음 투여량 수준으로의 단계적 확대를 허용하였다.

대용약 마커 평가 뿐만 아니라 약동학 및 약역학적 평가를 위한 혈액 샘플 을 모든 환자로부터 수집할 것이다. sICAM-1, sVCAM-1, sET-1, sE-셀렉틴(Selectin) 및 sMCP-1을 포함하는 내피 세포 활성화의 혈장 마커가 평가될 것이다. 또한, 동의하는 환자들에게서 약물류전체학에 대한 혈액 및(또는) 종양 샘플을 수집할 것이다.

연구에 적격이되기 위해서는 환자는 1) 표준 요법으로 진행되거나 또는 어떠한 표준 요법도 공지되지 않은 비혈액학적 악성종양의 조직학적으로 또는 세포학적으로 확인된 진단; 2) 측정가능한 또는 측정불가능한 질환; 3) 적합한 골수, 간 및신장 기능; 4) 면역요법, 방사선요법 또는 탁산을 포함한 화학요법을 마지막으로 투여한 후 4주 경과(니트로소우레아 또는 미토마이신-C의 경우에는 6 주); 5) 이전 치료로부터 기인하는 독성으로부터 환자는 기준 단계 또는 1 등급으로 회복되어야함; 및 6) 이스턴 코퍼레이티브 온코로지 그룹(Eastern Cooperative Oncology Group) 성능 상태(performance status) 0-1을 포함하지만 이에 한정되지 않는 모든 적격 기준을 만족시켜야 한다.

독성은 국립암학회(National Institute of Cancer)의 표준 독성 기준 버젼 2.0에 따라 평가할 것이다.

모든 환자로부터 화학식 I의 경구용 탁산의 혈장 약동학적 샘플을 제 1, 8, 15, 22, 29, 및 56일에 수집하고, 그 후에는 환자가 요법을 계속하도록 매 4 주마다 제한적으로 샘플링하였다.

실시예 6: 화학식 I의 경구용 탁산(3'-tert-부틸-3'-N-tert-부틸옥시카르보닐-4-데아세틸-3'-데페닐-3'-N-데벤조일-4-0-메톡시카르보닐-파크리탁셀)의 합성

(±)-시스-4-tert-부틸-1-tert-부틸옥시카르보닐-3-트리에틸실릴옥시-아제티딘-2-온의 제조

트리메틸아세트알데히드 20.3 mL (1.25 당량)를 실온에서 무수 디클로로메탄250 mL 중의 p-아니시딘 18.4 gm (0.150 mole) 및 무수 Na₂SO₄150 gm의 교반된 현탁액에 첨가하였다. 2 시간 후에, 이를 여과하고, 고형물을 추가의 무수 디클로로메탄으로 세척하였다. 용매를 여액으로부터 제거하고, 결정성 잔여물을 무수 디클로로메탄 750 mL에 용해시키고, 질소 분위기 하에 두었다. 트리에틸아민 48.0 mL (2.3 당량)를 첨가하고, 반응물을 -78 ℃로 냉각시켰다. 벤질옥시아세틸 클로라이드 27.2 mL (1.15 당량)를 적가한 다음, 반응물을 실온으로 가온시켰다. 24 시간이 지난 후, 이를 0.5 M HCl(2 회), 포화 NaHCO₃수용액, 염수로 세척하고, 건조시켰다(Na₂SO₄). 용매를 제거하고, 잔여물을 실리카겔 칼럼(0 내지 20%의 EtOAc를 포함하는 헥산 중의 20%의 디클로로메탄을 사용한 구배 용출)에서 크로마토그래피하여 (±)-시스-4-tert-부틸-3-벤질옥시-1-p-메톡시벤질-아제티딘온을 결정성 고형물 46.9 gm (92%)으로 얻었다:¹H NMR(CDCl₃) 1.09(s, 9H), 3.81(s, 3H), 4.15(d, 1H, J=5.5 Hz), 4.77(d, 1H, J=11.9 Hz), 4.81(d, 1H, J=5.5 Hz), 5.03(d, 1H, J=11.9 Hz), 6.87-7.43(m, 9 Hz); LRMS(ESI) 340 ([M+H]⁺). 물 900 mL 중의 세륨 암모늄 니트레이트 60.4 gm (3.6 당량)의 용액을 1 시간에 걸쳐 빙조에서 아세토니트릴 600 mL 중의 아제티딘온 10.38 gm (30.6 mmole)의 잘 교반된 용액에 첨가하였다. 그 다음, 반응물을 EtOAc로 2 회 추출하고 및 한데 합친 유기 추출물을 포화 NaHCO₃수용액(2 회), 20%의 NaHS0₃수용액, 포화 NaHCO₃수용액 및 염수로 세척하였다. 건조시킨 후에(Na₂SO₄), 용매를 제거하고, 잔여물을 실리카겔 칼럼(10 내지 40%의 EtOAc를 포함하는 헥산의 일부를 사용한 구배 용출)에서 크로마토그래피하여 약간 불순한 (±)-시스-3-벤질옥시-4-tert-부틸-아제티딘-2-온을 5.64 gm 얻었다:¹H NMR(CDCl₃) 1.04(s, 9H), 3.51(d, 1H, J=5.2 Hz), 4.71(m, 2H), 4.96(d, 1H, J=11.9 Hz), 6.10(brs, 1H), 7.35(m, 5H). 무수 EtOH 100 mL 중의 이 물질 5.54 gm (23.8 mmole) 및 활성탄상의 10%의 Pd 2.5 gm의 현탁액을 23 시간동안 수소첨가하였다(34 psi H₂, 파르(Parr) 장치). Pd 촉매 2 gm을 추가로 첨가하고, 수소첨가를 추가 17 시간동안 50 psi H₂에서 계속하였다. 촉매를 여과하여 제거하고, 용매를 여액으로부터 제거하여 조 [(±)-시스-3-히드록시-4-(tert-부틸)-아제티딘-2-온을 얻었다:¹H NMR(CDCl₃+ 1 방울의 D₂O) 1.05(s, 9H), 3.48(d, 1H, J=5.0 Hz), 4.98(d, 1H, J=5.0 Hz). 이 물질을 건조 N,N-디메틸포름아미드 40 mL 및 이미다졸 3.24 gm (2 당량)에 용해시키고, 트리에틸실릴 클로라이드 4.0 mL(1 당량)를 첨가하였다. 10 분 후, 반응물을 물 및 EtOAc와 헥산(1:1)의 혼합물 사이에 분배시켰다. 유기상을 물(2 회), 염수로 세척한 다음, 건조시켰다(Na₂SO₄). 용매를 제거하고, 잔여물을 실리카겔 칼럼(헥산 중의 20 내지 25%의 EtOAc를 사용한 구배 용출)에서 크로마토그래피하여 (±)-시스-4-tert-부틸-3-트리에틸실릴옥시-아제티딘-2-온 3.86 gm을 얻었다:¹H NMR(CDCl₃) 0.70(m, 6H), 0.98(m, 18H), 3.39(d, 1H,J=5.0 Hz), 4.88(dd, 1H, J = 2.1, 5.0 Hz), 6.08(brs, 1H). 건조 디클로로메탄 24 mL 중의 이 아제티딘온 2.04 gm (7.92 mmole), 디이소프로필에틸 아민 1.66 mL (1.2 당량), 디-tert-부틸 디카르보네이트 1.90 gm (1.1 당량) 및 p-디메틸아미노피리딘 194 mg (0.2 당량)의 용액을 실온에서 3 시간동안 교반하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄으로 희석시키고, 염수로 세척하고, 건조시켰다(Na₂SO₄). 용매의 제거에 이어서, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(헥산 중의 0 내지 20%의 EtOAc를 사용한 구배 용출)를 행하여 표제 화합물 2.71 gm(96%)을 오일로 얻었다:¹H NMR(CDCl₃) 0.70(m, 6H), 1.00(m, 9H), 1.09(s, 9H), 1.53(s, 9H), 3.90(d, 1H, J = 6.5 Hz), 4.93(d, 1H, J = 6.5 Hz).

박카틴(baccatin) 유도체 A의 제조

무수 N,N-디메틸포름아미드(DMF) 500 mL 중의 10-데스아세틸박카틴 47.4 g (87 mmol)의 용액에 주위온도에서 이미다졸 47g (691 mmol)을 첨가하였다. 투명한 용액이 관찰될 때까지 용액을 10-15 분동안 교반하였다. 디이소프로필디클로로실란 58 mL (322 mmol)를 반응 혼합물에 적가하였다. 반응 혼합물을 16 시간 동안 주위온도에서 교반하였다. 디이소프로필디클로로실란의 추가량 6 mL를 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 60 분간 교반하였다. 이 시점에서 HPLC를 한 결과, 반응이완결되었음을 나타내었다. 메탄올 36 mL를 혼합물에 첨가하고, 용액을 60 분동안 교반하였다. 반응을 정지시키고, tert-부틸 메틸 케톤(TBME) 500 mL 및 물 200 mL의 혼합물로 희석시켰다. 층이 분리되었고, 유기 상을 염수 250 mL로 세척하고, 건조시키고(황산나트륨) 증발시켜서 트리실릴화된 박카틴 유도체 A,(91 g, ＞100% 수율)를 흰색 비결정질 화합물로 얻었고, 이를 추가 정제없이 다음 단계에서 사용하였다.

LRMS(ESI) M+ C₅₀H₈₄013Si₃에 대한 이론치: 977. 실측치 977

박카틴 유도체 B의 제조

0 ℃에서 DMF 500 mL 중의 박카틴 유도체 A 90 g (92 mmol)의 용액에 이미다졸 22 g (320 mmol)을 첨가하였다. 디메틸클로로실란 35 mL (320 mmol)을 0 ℃에서 적가하였다. 이 시점에서 화합물의 침전을 관찰하였다. 반응 혼합물(슬러리)을 0 ℃에서 0.5 시간동안 교반하였다. 고형물을 여과하고 차가운 DMF 150 mL로 3회 세척하였다. 공기 건조 후에, 고형물을 TBME 700 mL에 재용해시키고, 용액을 물 200 mL(3회), 염수 250 mL로 세척하고, 건조시켰다(황산나트륨). 용액을 짧은 실리카 패드를 통하여 여과하였다. 진공 하에서 용매를 제거하여 B를 77% 수율(70 g)로 얻었다.

LRMS (ESI) M+ C₅₀H₉₀O₁₃Si₄에 대한 이론치: 1035. 실측치 1035

박카틴 유도체 C의 제조

-34 ℃에서 톨루엔 680 mL 중의 B 66.3 g (64 mmol)의 교반된 용액에 레드-알(Red-Al)(등록상표)(50 mL, 160 mmol, 톨루엔 중의 소듐 비스 (2-메톡시에톡시) 수소화알루미늄의 65 중량%의 용액)을 10 분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 -25 ℃로 가온하고, 1.5 시간 동안 교반하였다. 내부 온도를 -20 및 -25 ℃ 사이에서 유지하면서 메탄올 62 mL를 반응 혼합물에 적가하였다. 용액을 TBME 500 mL로 희석시키고, 이어서 1N 수산화나트륨 용액 60 mL 및 염수 60 mL를 첨가하였다. 용액을 30 분동안 교반하였다. 규조토 12 g을 혼합물에 첨가하고, 10 분동안 교반하고, 규조토 패드를 통하여 여과하였다. 층이 분리되었다. 유기층을 물, 염수로 세척하고, 건조시켰다(황산나트륨). 그 다음, 용매를 제거하기 전에, 용액을 짧은 실리카 패드를 통과시켰다. 화합물을 97% 수율(62 g)로 흰색 고형물로서 얻었다.

LRMS(ESI) M+ C₅₀H₈₈0₁₂Si₄에 대한 이론치: 993. 실측치 993

박카틴 유도체 D의 제조

아르곤 분위기 하에서, -60 ℃에서 무수 테트라히드로푸란(THF) 600 ml 중의박카틴 유도체 C 62 g (62 mmol)의 용액에 THF중의 1M의 용액인 리튬 비스(트리메틸실릴) 아미드 125 mL (125 mmol)를 적가하였다. 용액을 15 분동안 교반하고, 이어서 메틸 클로로포름에이트 9 mL (116 mmol)를 첨가하고, 용액의 내부 온도를 -60℃로 유지하였다. 반응물을 천천히 0 ℃로 가온하고, 혼합물을 3 시간동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 포화 염화암모늄 300 mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 TBME 100 mL로 추출하였다. 유기층을 포화 염화암모늄 200 mL, 물 200 mL, 염수 200 mL로 세척하고, 건조시키고(황산나트륨), 증발시켜서 D를 오일(67 g, ＞100%)로 얻었다. 조 물질을 추가 정제없이 다음 단계에서 사용하였다.

LRMS(ESI) M+ C₅₂H₉₀O₁₄Si₄에 대한 이론치: 1051. 실측치 1051.

박카틴 유도체 E의 제조

주위온도에서, 건조 THF 260 mL 중의 박카틴 유도체 D 62 g (59 mmol)의 용액에 트리에틸아민 불산화수소 복합체 56 mL (344 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 3시간동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 350 mL로 희석시키고, 물 200 mL, 염수 200 mL로 세척하고, 건조시키고(황산나트륨), 증발시켜서 E(43 g, ＞ 100% 조 수율)를 얻었다. 고온 에틸 아세테이트 350 mL 및 헥산 50 mL의 혼합물 중에서 조 화합물을 재슬러리화하여 순수한 E를 90% 수율로 얻었다.

LRMS(ESI) M+ C₂₉H₃₆0₁₁: 560. 실측치 560.

박카틴 유도체 F의 제조

-65 ℃에서, 박카틴 유도체 E 32 g (57 mmol) 및 DMF 220 mL 중의 이미다졸 11.7 g (172 mmol)의 교반된 용액에 아르곤 하에서 디이소프로필디클로로실란 26.8 mL를 첨가하였다. 반응 혼합물의 온도를 -60 ℃에서 유지시키고, 혼합물을 2 시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후(HPLC), 메탄올 중의 이미다졸의 용액(메탄올 35 mL에 용해된 이미다졸 11.7 g)을 첨가하고, 용액을 0 ℃에서 30 분동안 교반하였다. 혼합물을 TBME 500 mL로 추출하였다. 유기상을 물 150 mL로 4회 세척하고, 건조시키고(황산나트륨), 증발시켜서 조 F 45 g을 얻었다. 조 물질을 아세토니트릴 150 mL에 추가 용해시키고, 용액을 헥산 100 ml로 3회 세척하였다. 아세토니트릴을 제거하여 순수한 F를 흰색 고형물 34 g (84% 수율) 얻었다.

LRMS(ESI) M+ C₃₆H₅₂0₁₂Si에 대한 이론치: 704. 실측치 704.

4-데아세틸-7-[비스이소프로필(메톡시)]실릴옥시-4-메톡시카르보닐-박카틴의제조

-43 ℃에서 DMF 200 mL 중의 박카틴 유도체 F 33.2 g (47 mmol)의 용액에 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드 61.2 mL (61.2 mmol, THF 중의 1M 용액)을 적가하였다. 반응 혼합물을 15 분 동안 교반하고, 이어서 아세트산 무수물 5.8 mL (63 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 -40 ℃에서 30 분동안 교반하였다. 아세트산 3.6 mL를 첨가하고, 냉각조를 제거하였다. 반응 혼합물을 TBME 300 mL로 추출하였다. 유기층을 분리하고, 물 150 mL로 3회 및 염수 150 mL로 세척하고, 건조시키고(황산나트륨), 증발시켜서 조 생성물을 얻었다. THF: 헵탄(1:6)의 혼합물로 결정화하여 이 화합물을 정제하였다. 40 g를 주입하여 결정화된 표제의 생성물 21 g (수율 60%)을 얻었다.

LRMS(ESI) M+ C₃₈H₅₄0₁₃Si에 대한 이론치: 746. 실측치 746.

3'-tert-부틸-3'-N-tert-부틸옥시카르보닐-4-데아세틸-3'-데페닐-3'-N-데벤조일-4-0-메톡시카르보닐-파크리탁셀(화학식 I의 경구용 탁산)의 제조

질소 하에서, 건조 THF 100 ml 중의 (±)-시스-4-tert-부틸-l-(tert-부틸옥시카르보닐)-3-트리에틸실릴옥시-아제티딘-2-온 2.71 gm (5 당량) 및 4-데아세틸-7-[비스이소프로필(메톡시)]실릴옥시-4-메톡시카르보닐-박카틴 1.13 gm (1.52 mmole)의 용액을 -50 ℃로 냉각시키고, THF 중의 1.0 M의 리튬 비스(트리메틸실릴) 아미드 1.97 mL (1.3 당량)의 용액을 첨가하였다. 5 분이 지난 후, 이를 욕(bath)으로 옮겨서 -35 내지 -30 ℃에서 20 시간동안에 이어, -25 ℃에서 24 시간동안 유지시켰다. 그 다음, 반응을 포화 수성 NH₄Cl 용액으로 켄칭시키고, EtOAc 및 헥산(1:1)의 혼합물로 추출하였다. 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조시켰다(Na₂SO₄). 용매를 제거하고, 잔여물을 크로마토그래피하여(6 mm 실리카겔 판 상의 방사형 크로마토그래피; 헥산 중의 5 내지 20%의 EtOAc를 사용한 구배 용출) 3'-tert-부틸-3'-N-tert-부틸옥시카르보닐-7-[비스이소프로필(메톡시)]실릴옥시-4-데아세틸-3'-데페닐-3'-N-데벤조일-4-0-메톡시카르보닐-2'-트리에틸실릴옥시 파크리탁셀 1.55 gm을 2',3'-부분입체이성질체의 혼합물로 얻었다. 이 혼합물을 건조 THF 60 mL에 용해시키고, 트리에틸아민 트리히드로플루오라이드 0.92 mL(4 당량)를 첨가하였다. 실온에서, 22 시간 후에 반응 혼합물을 포화 NaHCO₃수용액으로 중화시킨 다음, EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물 염수로 세척하고, 건조시키고(Na₂SO₄), 용매를 제거하였다. 잔여물을 크로마토그래피하여(방사형 크로마토그래피; 2 mm 실리카겔 판; 헥산 중의 10 내지 50%의 EtOAc를 사용한 구배 용출),: 2'S,3'R-3'-tert-부틸-3'-N-tert-부틸옥시카르보닐-4-데아세틸-3'-데페닐-3'-N-데벤조일-4-O-메톡시카르보닐-파크리탁셀 210 mg (18%){¹H NMR(CDCl₃) 1.04(s, 9H), 1.13(s, 3H), 1.20(s, 3H), 1.37(s, 9H), 1.65(s, 1H), 1.66(s, 3H), 1.84-1.93(m, 2H), 2.17(s, 3H), 2.25(s, 3H), 2.55(m, 3H), 3.00(d, 1H, J = 6.5 Hz), 3.74(d, 1H, J = 10.8 Hz), 3.79(d, 1H, J = 6.9 Hz), 3.92(s, 3H), 16(d, 1H, J = 8.5 4.33(d, 1H, J = 8.5 Hz), 4.42(m, 1H), 4.54(d, 1H, J = 6.5 Hz) 4.87 1H, J = 6 5.01(d, 1H, J = 7.7 Hz), 5.68(d, 1H, J = 7.0 Hz), 5.76(m, 1H), 6.32(s, 1H), 7.44-8.05(m, 5H); LRMS(ESI) 846 [(M+H)⁺]} 및 표제 화합물 668 mg(56 %){¹H NMR(CDCl₃) 1.07(s, 9H), 1.14(s, 3H), 1.24(s, 3H), 1.33(s, 9H), 1.66(s, 4H), 2.23(s, 3H), 2.38 - 2.59(m, 4H), 3.11(d, 1H, J = 5.8 Hz), 3.77(d, J 1 Hz), 3.82(d, 1H, J = 7.0 Hz), 3.96(s, 3H), 4.20(d, 1H, J = 8.6 Hz), 4.33(d, 1H, J = 8.6 Hz), 4.39(m, 4.53(d, J = 5.4 Hz) 4.88(d, 1H, J = 10.6 Hz), 4.98(d, J = 7.9 Hz), 5.69(d, 1H, J = 7.1 Hz), 6.03(m, 1H), 6.28(s, 1H), 7.40-8.11(m, 5H); LRMS(ESI) 846 [(M+H)⁺]}을 (용출 순서대로) 얻었다.

Claims

반복 투여시에 종양 성장을 억제하고 최대 허용량의 탁산을 투여한 경우에 비하여 독성 부작용을 적게 일으키는, 탁산에 대해 확립된 최대 허용량 미만의 투여량으로 탁산을 투여하는 것을 포함하는 탁산의 규칙적 투여 요법.
제 1항에 있어서, 상기 탁산이 경구적으로 생체이용가능한 것인 규칙적 투여 요법.
제 2항에 있어서, 상기 탁산이 화학식 I의 경구용 탁산인 규칙적 투여 요법.
규칙적 투여 요법을 통하여 종양 세포를 탁산에 노출시키는 것을 포함하는 종양 세포의 성장 억제 방법.
규칙적 투여 요법을 통하여 탁산을 동물에게 투여하는 것을 포함하는 동물의종양 성장 억제 방법.
탁산의 규칙적 투여 요법과 함께 표준 최대 허용 투여 요법을 통한 확립된 항암 요법을 동물에게 투여하는 것을 포함하는 동물의 종양 성장 억제 방법.
제 4항 내지 제 6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 탁산이 경구적으로 생체이용가능한 것인 방법.
제 7항에 있어서, 상기 탁산이 화학식 I의 경구용 탁산인 방법.