KR20030016399A

KR20030016399A - 암 치료용 지방산 유사체

Info

Publication number: KR20030016399A
Application number: KR10-2003-7000477A
Authority: KR
Inventors: 베르게롤프
Original assignee: 티아 메디카 에이에스
Priority date: 2000-07-13
Filing date: 2001-07-13
Publication date: 2003-02-26
Also published as: NO20025930L; AU7286001A; ES2261441T3; CA2414480A1; KR20080071598A; BR0112399A; RU2283105C2; MXPA02012944A; CN100569228C; NO20003591L; DE60118198T2; HK1057473A1; DE60118198D1; KR100861428B1; WO2002003983A1; NO20003591D0; NO20025930D0; JP2004502732A; NZ523316A; CN1441671A

Abstract

본 발명은 하기의 일반식 (Ⅰ)의 지방산 유사체에 관한 것으로,

R₁-[xi - CH₂]_n- COOR₂(Ⅰ)

- 여기서 R₁은 하나 이상의 이중결합을 갖거나 하나 이상의 삼중 결합을 갖는 C₁-C₂₄알킨 및/또는, C₁-C₂₄알킨 및/또는, C₁-C₂₄알킬 또는, 플로라이드, 클로라이드, 하이드록시, C₁-C₄알콕시, C₁-C₄알킬티오, C₂-C₅알콕시 또는 C₁-C₄알킬을 포함한 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 화합물로 하나 또는 수개의 위치들에서 치환된 알킬, 및 여기서 R₂는 하이드로겐 또는 C₁-C₄알킬, n는 1에서 12 까지의 정수이며, i는 홀수이며, COOR₂에 대한 위치를 나타내며, 여기서 서로 독립된 xi 는 O, S, SO₂, Se 및 CH₂, xi 의 적어도 하나는 CH₂가 아닌 단서를 가지며, 주 및 이차적인 전이적인 네오플라즘의 치료 및/또는 예방에 사용될 수 있다.

Description

암 치료용 지방산 유사체{FATTY ACID ANALOGUES FOR THE TREATMENT OF CANCER}

본 발명의 변성 지방산에 의한 치료는 상기한 질병들을 치료하는 새로운 방법을 제시한다.

유럽특허 EP 345.038호에는 포유류의 혈중 콜레스테롤 및 트리글리세라이드의 농도를 감소시키기 위하여 그리고 고지질혈증 상태를 치료하기 위한 비-베타-산화성 지방산의 사용이 개시되어 있다.

PCT/NO95/00195호에는 암세포의 증식을 감소시키기 위하여 그리고 LDL의 산화 변성을 억제하기 위한 알킬-S-CH2COOR과 알킬-Se-CH2COOR을 개시하고 있다. 그러나, 이러한 증식 작용은 암의 특성으로서 본 발명자등은 본 발명의 화합물이 다른 세포계에서는 세포의 성장이나 증식에 하등의 영향을 주지 않음을 입증하였다.

PCT/NO99/00135호, 00136호 및 00149호에는 비만, 당뇨 및 협착증 치료용으로 지방산 유사체의 사용을 개시하고 있다.

상기 선행기술 공보들에 개시된 지방산 유사체, 즉 비-베타-산화성 지방산 유사체는 본 발명에 따라 광범위한 이용 영역을 갖는 것으로 밝혀졌다. 본 발명자들은 본 발명의 화합물이 이식된 종양을 갖는 동물의 전체 생존기간을 증대시키고 종양의 전이 양태와 성장을 억제하는 것으로 밝혔다.

암

암치료용의 새롭고 보다 효과적인 화학약품제제의 개발은 세포 유독성, 종양 세포 증식, 침입 및 전이 를 포함한 여러가지 요소들을 고려해야 한다. 통상의 항암제는 통상적으로 세포 독성만을 기초로 하여 검증되어 왔다.

선택적 성장 특성들을 갖는 변화되기 쉬운 세포들이 종양 세포집단내에서 생길 때 종양의 진행이 발생되는 것으로 생각되며, 종양 진행의 최종 단계들중 하나는 전이적인 표현형태로 나타난다. 전이과정에서, 종양 세포는 혈관에 침입하고 순환하는 숙주 면역 방어체계에서 생존하고 있다가 삼출되어 이식되고, 주 종양으로 부터 떨어진 장소에서 성장하게 된다. 이웃하는 조직에 침투하고 다른 기관들에 이주하는 종양 세포의 이러한 능력은 암 관련 사망의 주요인들에 속한다.

말기 전이는 대부분 암으로 사망하게 하는 심각한 문제를 일으키게 하는 많은 표현형 특징들을 포함한다. 세포들은 유기화된 조직에서 부착력을 잃고 제위치에서 인접한 장소로 이동하게 되고 혈관으로 침입하고 그로부터 빠져나가는 능력을 갖게 되어 다른 장소와 환경에서 증식할 수 있게 된다. 성장 패턴에서 이러한 변경들은 전이과정에서 촉진될 수 있는 능력을 갖는 생화학적 변화들의 축적에 의해 달성될 수 있다.

지금까지는 전이 단계들에 포함된 내부적인 매카니즘에 대해서는 거의 알려져 있지 않다. 어떤 경우에 있어서, 종양 세포들의 발전된 전이 잠재능력은 발암의 증가된 발현의 원인이 될 수도 있으며 그것은 또한 보통때는 세포의 분화, 증식, 세포 자동력 및 정보 교환등을 포함한 여러 가지의 세포 기능들의 제어를 위해 책임이 있다. 더욱이, 신호 전달 경로를 조절하는 물질이 종양의 전이 행태를 금지시킬 수 있다는 것으로 밝혀져 있으며, 또한 표면 관련 효과를 갖는 화합물이 전이로 이르는 과정에 내포될 수 있는 세포막을 조정하는 것으로 추측된다.

암은 부적당한 조직 축적의 질병이다. 이러한 교란은 종양 조직들이 생명 기관들의 기능을 손상시킬 때 임상적으로 명백하다. 일반적으로 생각하고 있는 것과 반대로, 인간의 악성 질병들은 항상 급속한 세포 증식의 질병인 것은 아니다. 실제로, 대부분의 보통의 암의 세포들은 정상적인 조직의 세포들보다 더 느리게 증식된다. 생명 기관내에서의 종양 조직의 상대적으로 느린 축적은 암으로 사망하는 대부분의 환자들에게 치명적이다.

화학요법제들은 한가지 특징을 갖는다. 즉, 화학요법제들은 항상 정상적인 세포들보다 악성 세포들을 죽이거나 손상시키는데 보다 효과적인 것이다. 그러나, 화학요법제들이 정상 세포들을 해롭게 한다는 잠재적인 독성을 나타내는 것이다.

통상적으로 사용되고 있는 거의 모든 화학요법제들은 DNA 합성, DNA 및 RNA 합성용 전구체들의 제공, 유사분열에 간섭한다. 그러한 약제는 순환하는 세포들에 대해서 대부분 효과가 있다. 어떤 단일의 약제나 복합 약제들로 치료한 후에 세포의 죽음 메카니즘은 복잡하고 한가지 이상의 과정들을 포함하기 쉽다. 대부분의 임상적으로 탐지할 수 있는 종양들은 대부분 비순환 세포들로 이루어져 있으며, 화학요법이 암 박멸에 항상 효과적이지 않다는 것은 놀랄만한 일이 아니다.

암치료의 전략은 비순환부로부터 순환부로 종양세포들을 이동시키는 것이다. 이러한 이동을 촉진하는 몇가지 방법들은 복합 양식의 치료에 기초를 이룬다. 외과 수술은 종양 세포의 크기를 감소시키고 암세포들의 세포 사이클로의 재진입을 용이하게 한다. 주종양이 완전히 제거된 다음에도 멀리 떨어져 있는 곳에서의 미소 전이가 남을 수 있다. 그 크기가 작기 때문에 미소전이들은 원칙적으로 순환하는 세포로 구성된다. 주종양 위치에 남아 있는 작은 수의 세포들은 세포 순환에 진입하기 쉽다. 그래서, 남아 있는 암세들도 흔히 화학요법을 받아들이게 된다. 방사선치료 또는 화학요법 어느 하나만으로도 종양 덩어리를 감소시킬 수 있으며 그래서 세포들을 순환 세포군으로 재진입시킬 수도 있다.

복합 약제 치료법은 그래서 현재까지 채용되고 있는 대부분의 화학요법의 기본이 된다. 복합적인 화학요법은 복수 약제의 잠재적인 작용 및 독성의 상이한 메카니즘을 이용한다.

그러나, 화학요법제들이 정상세포보다 악성 세포들을 죽이거나 손상시키는데 보다 효과적이기는 하지만, 정상 세포들을 해롭게 할 수 있다는 사실은 큰 잠재적인 독성을 나타낸다. 유효한 화학요법에 대하여, 환자들은 좋은 신체적 조건의 상태에 있어야 한다.

암치료는 종양 세포의 증식, 신체의 다른 부위로의 암세포의 전이적인 확산, 침입, 종양 세포내의 신혈관의 생성 및 숙주의 면역학적 응답성과 독성의 향상등을포함한 여러 인자들의 억제를 필요로 한다. 통상의 암 화학요법제들은 보통 종양 세포들의 독성에 기초하여 선택되어 왔다. 그러나, 항암제들은 환자의 면역체계에 악영향을 준다. 불행히도, 통상의 항종양제들의 대부분에 대하여 유효 복용량과 독성의 복용량 사이의 한도는 극히 낮다. 그래서 성장, 진행 및 침입적인 암으로의 전이에 대하여 비독성적인 보호를 제공할 수 있는 암 처치 또는 치료가 개발된다면 매우 유익할 것이다.

본 발명은 암 치료 및/또는 예방을 위해 사용되는 지방산 유사체에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 주 종양 및 이차적 종양의 치료 및/또는 억제를 위해 지방산 유사체의 사용에 관한 것이다.

도 1은 D-54Mg 스페로이드의 직경에 대한 TTA의 효과를 보여준다.

도 2는 GaMg 스페로이드의 직경에 대한 TTA의 효과를 보여준다.

도 3은 D-54Mg 스페로이드의 직경에 대한 TTA의 여러 농도들의 효과를 보여준다.

도 4는 피하 이식된 BT4Cn 종양의 성장에 대한 TTA의 효과를 보여준다.

도 5는 피하 이식된 BT4Cn 종양을 갖는 쥐의 생존에 대한 TTA의 효과를 보여준다 .

본 발명은 암에 걸린 환자를 치료하기 위하여 본 발명의 지방산 유사체 사용을 포함한 주종양 및 전이적인 종양의 치료 및 예방을 위한 방법에 관한 것이다.

암의 두가지 기본적인 특징은 침입과 전이이다. 한편으로는, 기본 막의 미소 침입은 종양 형성에서 암으로의 변이 특징으로 나타내고, 다른 한편으로 진이는 대체로 죽음으로 이르게 된다.

주종양에 의한 근원적인 연결조직으로의 침입은 단계별로 진행되며 종양 세포에 의해 생성된 여러 중개 인자들에 의해 용이하게 된다. 기본막이 침입되지 않고 피막조직내에 한정된 종양 세포는 그 위치에서 암종으로 끝난다.

전이는 한편으로는 임파구와 혈소판과 결합한 순환하는 종양 세포들이 모세관에 갇혀서 종양 세포막이 모세혈관 조직에 상호작용할 때 형성될 수 있다. 모세관 내복조직의 연결부가 오그러들고, 종양 세포 리간드(ligands)가 내보조직과 기초막의 수용체에 결합된다. 종양 세포들은 콜라게나제(collagenase) Ⅳ를 방출하며, 그것은 콜라겐 Ⅳ, 하층의 기초막의 주성분을 파괴한다. 부속모세관 연결조직의 침입은 글리코프로테인 라미닌과 피브로넥틴(fibronectin)에 결합에 의해, 세포간질을 파괴하는 프로테아제의 방출에 의해, 그리고 운동성 및 주화성 인자들의 분비물에 의해 촉진된다. 종양 세포들은 증식하고 트롬복산과 프로코애길런트(procoagulants)와 같은 혈소판 집합인자들을 합성할 수 있으며, 이로써 세포주변의 피브린 코쿤(fibrin cocoon)의 침전되게 한다. 쿠쿤은 숙주의 면역체계에 의한 공격으로부터의 미소전이를 보호한다.

본 발명의 화합물과 방법에 의해 예방되고 치료될 수 있는 암들은, 제한적으로서가 아니라, 인간 육종과 암종(카서노마), 예를들어 콜론 카서노마, 팬크레틱 캔서, 유방암, 난소암, 전립선암, 피브로서코마, 코르도마, 엔지오서코마, 내복조직의 서코마, 림프엔지오서코마, 림프엔지오엔도셀리오서코마, 세이노바이오마, 메소셀리오마, 어윙스 종양, 레이오마이오서코마, 라브도마이오서코마, 스퀘이머스 셀카서노마, 베이스 셀 카서노마, 아데노카시노마, 스웨이트 글랜드 카서노마, 시베이셔스 글랜드 카서노마, 파필러리 카서노마, 파필러리 아데노카서노마, 사이스타데노마카서노마, 메둘러리 카서노마, 브론코겐 카서노마, 리널 셀 카서노마, 헤퍼토마, 빌레 덕트 카서노마, 코리오카서노마, 세미노마, 엠브리오날 카서노마, 빌름스 종양, 자궁경부암, 렁 카서노마, 스몰 셀 렁 카서노마, 블레이더 카서노마, 에피셀리얼 카서노마, 글리노마, 아스트로사이토마, 메둘로블라스토마, 크레니오파린지오마, 올리고덴드로글리오마, 메닝지오마, 멜라노마, 뉴로블라스토마, 레티노블라스토마, 루키미어, 예를들어 어큐트 림포사이틱 루키미어 (미엘로블라스틱, 프로미엘로사이틱, 미엘로모노사이틱, 모노사이틱 및 에리트로루키미아); 크로닉 루키미어 (크로닉 미엘로사이틱 (그라뉼로사이틱) 루키미어와 크로닉 림포사이틱 루키미어); 및 폴리사이테미어 베라, 림포마 (호킨스병 및 비-호킨스병), 멀티플 미엘로마, 발덴스트롬스 마크로글로부리네미어, 및 체비 체인 디지즈. 그러한 암들의 특정 예들은 이하에서 설명된다.

본 발명의 화합물은 여러 가지의 스페로이드의 평균 직경을 감소시키키는 것과 BT4Cn 종양의 종양 체적이 감소되는 것으로 확인하였다. 더욱이, 본 발명자들은 이식된 종양을 갖는 TTA 치료된 쥐의 전체 생존 쥐들이 상당히 증가되는 것을 확인하였다.

더욱이, 본 발명의 지방산 유사체는 종양의 성장, 침입 및 전이에 대하여 현저한 효과를 갖는 것으로 밝혀졌다.

테트라데실티오케틱산(TTA)은 본 발명의 거의 완전히 연구된 화합물이며, 본 발명자들은 다양한 비트로 및 인 비보 테스트 시스템에서 몇가지의 유익한 효과를 밝혔다.

본 발명은 비-독성 농도의 변성된 지방산 유사체가 암의 예방 및/또는 치료에 사용될 수 있음을 개시한다.

본 발명은 하기의 일반식 (Ⅰ)의 지방산 유사체의 사용에 관한 것이다:

R₁-[xi - CH₂]_n- COOR₂(Ⅰ)

- 여기서 R₁은

- 하나 이상의 이중결합을 갖거나 하나 이상의 삼중 결합을 갖는 C₁-C₂₄알킨 및/또는,

- C₁-C₂₄알킨 및/또는,

- C₁-C₂₄알킬 또는, 플로라이드, 클로라이드, 하이드록시, C₁-C₄알콕시, C₁-C₄알킬티오, C₂-C₅알콕시 또는 C₁-C₄알킬을 포함한 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 화합물로 하나 또는 수개의 위치들에서 치환된 알킬, 및

- 여기서 R₂는 하이드로겐 또는 C₁-C₄알킬,

- n는 1에서 12 까지의 정수이며,

- i는 홀수이며, COOR₂에 대한 위치를 나타내며,

- 여기서 서로 독립된 xi 는 O, S, SO₂, Se 및 CH₂,

- xi 의 적어도 하나는 CH₂가 아닌 단서를 가지며,

또는 주 및 이차적인 전이적인 네오플라즘의 치료 및/또는 억제를 위한 약학적 조성물을 마련하기 위한 염, 프로드러그와 그 복합물이다.

본 발명의 바람직한 실시예들은 TTA 화합물과 TSA(테트라데실셀레니오아세틱 산)에 대한 것이다.

보다 특히, 본 발명은 종양의 성장, 침입 및 전이 특성을 억제하기 위한 화합물의 사용에 관한 것이다.

본 발명의 다른 면은 주 및 이차적인 전이 네오플라즘의 치료 및/또는 억제를 위한 방법에 관한 것이며, 그러한 방법은 하기 일반식 (Ⅰ)의 지방산 유사체의유효량을 필요로하는 포유동물에 투여하는 방법에 관한 것이다:

R₁-[xi - CH₂]_n- COOR₂(Ⅰ)

- 여기서 R₁은

- C₁-C₂₄알킨 및/또는,

- 여기서 R₂는 하이드로겐 또는 C₁-C₄알킬,

- n는 1에서 12 까지의 정수이며,

- i는 홀수이며, COOR₂에 대한 위치를 나타내며,

- 여기서 서로 독립된 xi 는 O, S, SO₂, Se 및 CH₂,

- xi 의 적어도 하나는 CH₂가 아닌 단서를 가지며,

또는 염, 프로드러그와 그 복합물이다.

본 발명의 치료는 치료에 유효한 농도를 치료가 필요한 포유동물에 투여하는 것을 포함하며, 그 유효 농도는 그 투여 주기 기간동안에 동물의 혈액에 사실상 일정하게 유지된다.

본 발명의 화합물의 투여

약학적 약제로서 본 발명의 화합물은 비경구적으로, 근육내에, 경구으로, 또는 피부를 통한 흡수를 포함한 어떤 적당한 기술에 의해 포유동물에 직접 투여될 수 있다. 그 약제들은 국소적으로 또는 전신에 투여될 수 있다. 각 약제의 투여 경로는 예를들어 동물의 의료적인 역사에 의존된다.

비경구적인 투여의 예는 피하내, 근육내, 정맥내, 동맥내, 및 복막내 투여를 포함한다.

일반적인 제안으로서, 비경구적으로 투여된 화합물의 약학적으로 유효량은 환자 체중의 약 5mg/kg/day에서 1000mg/kg/day의 범위가 바람직하다. 하지만, 위에서 지적한 바와같이, 치료적인 결정을 받게 될 것이다. TTA에 대하여, 100 -500mg/kg/day의 복용량이 바람직한 것으로 예상되며, TSA에 대한 복용량은 10 - 100mg/kg/day의 범위일 수 잇다.

계속적으로 주어진다면, 본 발명의 화합물은 예를들어 미니 펌프를 사용하여연속적인 피하 주입에 의해 또는 하루에 1-4회의 주사에 의해 투여된다. 정맥내의 백 용해도 이용될 수 있다.

비경구 투여에 있어서, 한 실시예에서 본 발명의 화합물은 조성물의 다른 성분들과 양립할 수 있으며 복용량과 이용된 농도로 수용체에 비독성인 약학적으로 허용가능한 담체로, 주입가능한 형태(용액, 현탁액, 또는 에멀젼)의 단위 복용량으로 바람직한 정도의 순도로 혼합함으로써 조성될 수 있다.

일반적으로, 조성물은 액상의 담체들과 또는 미세하게 분할된 고형의 담체즐중 하나와 또는 그 두가지와 균일하게 그리고 밀접하게 본 발명의 화합물을 접촉시킴으로써 준비된다. 그래서, 필요하면, 그 제품은 바람직한 조성물 형태로 성형된다. 담체는 비경구 담체인 것이 바람직하며, 특히 바람직한 것은 수용체인 혈액과 등장의 용액인 것이다. 그러한 담체의 전달수단의 예는 물, 염수 링거용액, 및 포도당 용액을 포함한다. 고정 오일과 에틸 올레산염과 같은 비수용성 담체 전달수단은 리포솜과 같이 여기서도 사용될 수 있다.

담체는 등장성과 화학적 안정성을 향상시키는 물질과 같은 미소량의 첨가제를 포함하는 것이 적당할 수 있다. 그러한 재료는 이용되는 복용량과 농도에서 수용체에 비독성의 것이며, 인산염, 구연산염, 아세트산 및 다른 유기산 또는 그 염들과 같은 완충제; 아스코르브산염과 같은 산화방지제; 면역글로브린항체; 폴리비닐피로리돈과 같은 친수성 폴리머; 글리세린, 글루타민산, 아스파틱산 또는 아르기닌과 같은 아미노산; 모노사카라이드, 디사카라이드, 및 셀룰로스나 그 유도체와 글루코스, 만노스나 덱스트린을 포함한 다른 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 마니톨이나 소르비톨과 같은 슈거 알콜; 나트륨과 같은 반대 자극제; 및/또는 폴리소르베이트, 폴록사머 또는 PEG와 같은 비이온성 계면활성제를 포함한다.

경구의 약리학적 조성물에 대하여, 예를들어 물, 젤라틴, 검, 락토스, 스타치, 마그네슘-스테아르산, 활석, 오일, 폴리알킨 글리콜, 석유 젤리등의 담체 재료가 사용될 수 있다. 그러한 약리학적 제제는 단위 복용 형태로 될 수 있으며, 보존제, 안정제, 유제, 완충제등과 같은 통상의 약학적 첨가제나 다른 치료에 유용한 물질을 부가적으로 포함할 수 있다. 약학적 제제는 태블릿, 캡슐, 알약, 앰퓰등과 같은 통상의 액상 형태나 좌약제등과 같은 것으로 될 수 있다.

더욱이, 본 발명의 화합물은 암을 예방하거나 치료하기 위한 다른 치료제와 함께 적합하게 투여될 수도 있다.

본 발명은 이하의 예들을 참고하여 보다 상세히 설명될 것이다. 이하의 예들은 그러나 본 발명의 범위를 제한하는 것이 아님을 밝혀둔다.

예 1. 화합물의 준비와 특징

베타-치환된 지방산 유사체의 합성

본 발명에 따라 사용되는 화합물은 (여기서 치환기 Xi=3 가 황원자 또는 셀레늄 원자임) 하기한 일반적인 과정에 따라 마련될 수 있다:

X가 황원자이다:

본 발명에 따라 사용되는 티오-치환 화합물은 아래에 표시된 과정을 통해 마련될 수 있다:

베이스

알킬-Hal + HS-CH₂COOR ⇒ 알킬-S-CH₂-COOR

황-화합물, 즉, 테트라데실티오아세틱산(TTA), (CH₃-(CH₂)₁₃-S-CH₂-COOH)는 유럽특허 EP-345.038에서 보여준 바와같이 마련된다.

X가 셀레늄 원자이다:

본 발명에 따라 사용되는 셀레노-치환 화합물은 아래에 표시된 과정을 통해 마련될 수 있다:

1. 알킬-Hal + KSeCN ⇒ 알킬-SeCN...

2. 알킬-SeCN + BH4- ⇒ 알킬-Se-

3. 알킬-Se- + O₂⇒ 알킬-Se-Se-알킬

이 화합물은 에타놀 또는 메타놀에서 주의깊게 결정화에 의해 정제된다.

BH4-

4. 알킬-Se-Se-알킬 ⇒ 2 알킬-Se-

5. 알킬-Se- + Hal-CH2-COOH ⇒ 알킬-Se-CH2-COOH

최종 화합물, 예를들어 알킬이 테트라데실일 때, (CH3-(CH2)13-Se-CH2-COOH (테트라데실셀린이오하세트산(TSA))은 디에틸에테르와 핵산에서 결정화에 의해 정제될 수 있다.

본 발명에 따라 다른 화합물은 본 출원인의 특허출원 PCT/NO99/00135호와 NO 20001123호에 기재된 바와같이 합성될 수 있다.

예 2.

TTA의 독성 연구

GLP 가이드 라인에 따라 개에게서 28일간의 독성 연구가 영국의 (유럽) 코닝 해즐레톤에 의해 수행되었다. 500 mg/kg/day까지의 복용 수준으로 TTA의 경구 투여가 허용되었다. 지질 관련 변수들이 높은 복용량으로 주어진 동물에서 강하되었다. 이것은 TTA의 약학적 활성도와 일치하였다. 50 - 500 mg/kg/day 수준의 복용량에서 독성의 증거는 없었다.

영국의 코반스 래보레토리스 리미티드는 돌연변이적인 활동성에 대하여 수행하였다. TTA와 TSA는 살로넬라 티피머리움과 에스케리치아 콜리의 스트레인에서의 돌연변이를 유발하지 않았다. 더욱이, TTA는 쥐의 림포머 셀과 L5178Y에서 시험하였을 때 돌연변이적이지 않았다.

에스. 티피머리움과 이. 콜리에서 시험한 화합물의 농도는 TTA의 경우 3-1000 mg/plate 이고, TSA의 경우 2-5000 mg/plate 였다. 쥐 림포마 세포, L5178Y에서 농도는 2.5 - 50mg/ml였다.

TTA와 TSA는 이들 시험에서 돌연변이적임이 발견되지 않았다. TSA와 TTA는 배양된 중국 햄스터 난소 세포에서 염색체 변이에 대하여 시험되었으며, 시험된 복용량 (12-140 mg/ml)에서 변이가 유도되지 않았다.

본 발명의 화합물은 그러므로 이와 관련하여 약제적인 화합물로서 잠재적인유용성이 있다.

예 3

스페로이드 성장에 대한 TTA의 효과

복수 세포의 종양 스퍼로이드들은 10ml (KB/KJT=20 ml) 0.75%-배지 DMEM 용액(KB/KJT=3%)으로 코팅된 80 ㎠의 조직 배양 플라스크 베이스에 3×106 세포들을 살포함으로써 얻어졌다. 7일의 인큐베이션후에, 100-300 ㎛ 사이의 직경을 갖는 스퍼로이드들을 스테레오마이크로스코프하에서 파스퇴르 피펫으로 선택하였다. 그 스퍼로이드의 크기는 대안렌즈의 조정된 눈금으로 반전된 현미경을 사용하여 결정되었다.

종양 스퍼로이드 성장에 대한 여러 지방산 유사체들의 효과를 비교하기 위하여, D-54Mg와 GaMg스퍼로이드들은 각각 0.5 ml 0.75%- DMEM 배지로 코팅된 16mm 24개-웰(well) 접시로 옮겨졌다. D-54Mg와 GaMg는 인간의 세포 라인(lines)들이다. D-54Mg 세포 라인은 혼합된 아나플라스틱 글리오마로부터 유도되었고, 노스 캐롤라이나, 듀르햄, 듀크 유니버서티의 닥터. 다렐 디. 비그너에 의해 공급되었다. GaMg 세포 라인은 본 발명자의 연구소에서 설정되었고 다른 장소에 상세하게 설명되었다(Bjerkvik et al.: 항암연구 1998: 8권, 797-803면). 스퍼로이드들은 각각 4개씩 5그룹으로 분할되었다. 4개의 그룹들은 100이나 250μM의 최종 지방산 농도로 여러 지방산 유사체로 처치되었다. 5번째의 (제어) 그룹은 어떠한 처치도 받지 않았다. 덮혀진 현탁액의 체적은 1.0 ml이다. 스퍼로이드의 크기는 2일마다 대물렌즈의 조정된 눈금망을 갖는 반전된 상의 비교 현미경을 사용하여 두 개의 직교직경을 측정함으로써 결정되었다. 이것은 14일간동안 행하여졌다.

이 실험결과는 도 1-3에 표시되었다. 표시된 바와같이, 지방산들은 14일의 장기간동안 스퍼로이드에 노출되었다. 제어 그룹(▲표시선)에는 지방산이 보충되지 않았다. 값들은 ±SD로 표시되었다.

도 1은 D-54Mg 스퍼로이드의 평균 스퍼로이드 직경(㎛)에 대하여 250μM TTA (■표시선)와 PA (◆표시선)의 효과를 보여준다.

도 2는 GaMg 스퍼로이드의 평균 스퍼로이드 직경(㎛)에 대하여 250μM TTA (■표시선)와 PA (◆표시선)의 효과를 보여준다.

스퍼로이드 성장에 대한 TTA의 효과에 따른 복용량을 연구하기 위하여, 셀 라인들로부터 24개의 종양 스퍼로이드들은 0, 50, 100, 150, 200 및 250μM TTA를 수용한 6개의 그룹으로 분할되었다. 이러한 실험은 (미국, 메사추세츠주, 코스타르에서 얻을 수 있는) SF-X 매체에서 수행되었으며 그 결과가 도 3에 표시되어 있다.

예 4

세포 이주

세포 이주에 대한 지방상 유사체의 효과는 플라스틱 표면에 부착된 스퍼로이드들에서 이주하는 세포능력을 측정함으로써 연구되었다. 200 - 300㎛의 직경을 갖는 GaMg와 D-54MG 스퍼로이드들을 각각 16mm 24-웰 접시들로 옮겼다. 1.5의 DMEM에 여러 농도의 여러가지의 지방산 유사체들이 첨가되었다. 3일간 배양한 후에 시편들은 PBS에 4%의 포름알데히드로 고정되고 96%의 에타놀에서 2%의 크리스탈 바이올렛으로 착색시켰다. 성장 면적의 크기는 (독일, 에칭, 콘트론의) 콘트론 모르포메트리 시스템을 이용하여 판단하였다. 본 발명자들은 SF-X 매체에서 플라스틱 표면에 글리오마 세포가 비교적 느슨하게 부착되기 때문에 분석에서 세륨이 보충된 매체(DMEM)를 사용하였다. GaMg와 D-54MG 세포들의 이주 능력은 100μM의 농도에서 TTA에 의해 상당히 억제되었다.

예 5

피하 이식된 BT4Cn의 성장에 대한 TTA의 효과

메일 노르웨이산 갈색 쥐들, BD IX들은 노르웨이, 베르겐, 호클랜드 호스피탈, 개더 연구소에서 얻었다. 그 쥐들은 케이지에 쌍으로 수용되어 20±3℃의 온도에서 12시간 주기의 밤낮으로 유지되었다. 시험중에 그 쥐들의 체중은 250-400g였다. 그 쥐들에는 시판하는 표준의 팰릿화된 식품이 공급되었고 애드 리비텀의 급수전 물을 공급하였다. 테스트 그룹들은 TTA로 처리되고, 제어 그룹들은 팔미트산염 및/또는 카복시메틸 셀룰로스(CMC)로 치료되었다.

TTA는 위삽관법에 의해 투입되었다. TTA와 PA는 75mg/ml의 최종 스토크 용액에서 0.5중량%의 나트륨 카복시메틸 셀룰로스에 부유시켰다. 동물들에는 300mg/kg의 체중당 복용량으로 하루에 한번 투여하였다.

쥐들은 100g의 체중에 0.2 ml의 하이프노름-도르미컴으로 마취되었고, 쥐의 목에 (1ml의 염화나트륨에) 5*106 종양 세포들을 피하주사에 의해 인 비보로 설정되었다. 3-4주후에, 종양을 제거하여 2*2mm의 조직 조각들로 절단하였다. 그 조각들은 다리의 s.c. 종양들의 설정에 사용되었다. 쥐들은 100g의 체중에 0.2 ml의 하이프노름-도르미컴으로 마취되었고, 피부 절개를 행하여 조직편을 피부 조직밑에약 1cm 밑에 투입되어 설정되었다. 그 종양은 2주동안 성장되었다. 쥐들은 종양에 직접 주사하거나 위삽관법에 의해 치료되었다.

(다리에서의) 종양의 부피를 측정하였다.

도 4는 피하 이식된 BT4Cn 종양의 성장에 대하여 PA(▲표시선)과 TTA(■표시선)의 효과를 보여준다.

예 6

두개내에 이식된 BT4Cn 종양을 갖는 쥐들의 생존에 대한 TTA의 효과

예 5에서 설명된 바와같은 메일 노르웨이산 갈색 쥐, BD IX들은 위삽관법에 의해 투여되었다.

종양은 스테레오택티컬 이식에 의해 이식되었다. 쥐들은 체중 100g당 0.4ml의 에퀴세신으로 마취되었다. 피부주사를 하였으며, 과산화수소에 의해 혈액을 제거하고 치과용 드릴을 사용하여 관상수술을 하였다.

거친 홀은 두부 봉합선 뒤쪽 3.3 mm, 시상봉합선에 측방으로 2.5mm로 국소화되었다.

세포들을 채취하여 상기한 바와같이 계산하여 20,000 cells/㎕에 대해 최종 농도로 DPBS에 희석되었다. 2㎕의 세포 부유물을 2.8mm의 깊이로 0.7mm 원추형 팁의 주사바늘을 갖는 해밀턴 주사기로 주사하였다. 표피는 스틸제 스테이플로 밀폐되고 동물들을 케이지로 되돌려보냈다.

도 5는 피하 이식된 BT4Cn 종양들을 갖는 쥐의 생존에 대한 PA와 TTA의 효과를 보여준다.

Claims

하기의 일반식 (Ⅰ)의 지방산 유사체의 용도:

R₁-[xi - CH₂]_n- COOR₂(Ⅰ)

- 여기서 R₁은

- 하나 이상의 이중결합을 갖거나 하나 이상의 삼중 결합을 갖는 C₁-C₂₄알킨 및/또는,

- C₁-C₂₄알킨 및/또는,

- C₁-C₂₄알킬 또는, 플로라이드, 클로라이드, 하이드록시, C₁-C₄알콕시, C₁-C₄알킬티오, C₂-C₅알콕시 또는 C₁-C₄알킬을 포함한 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 화합물로 하나 또는 수개의 위치들에서 치환된 알킬, 및

- 여기서 R₂는 하이드로겐 또는 C₁-C₄알킬,

- n는 1에서 12 까지의 정수이며,

- i는 홀수이며, COOR₂에 대한 위치를 나타내며,

- 여기서 서로 독립된 xi 는 O, S, SO₂, Se 및 CH₂,

- xi 의 적어도 하나는 CH₂가 아닌 단서를 가지며,

또는 주 및 이차적인 전이적인 네오플라즘의 치료 또는 억제를 위한 약학적조성물을 마련하기 위한 염, 프로드러그와 그 복합물이다.
제 1항에 있어서, 상기 화합물은 테트라데실티오아세트산인 지방산 유사체의 용도.
제 1항에 있어서, 상기 화합물은 테트라데실셀레노아세트산인 지방산 유사체의 용도.
제 1항에 있어서, 종양의 성장을 억제하기 위한 지방산 유사체의 용도.
제 1항에 있어서, 주종양의 성장을 억제시키기 위한 지방산 유사체의 용도.
제 1항에 있어서, 종양의 전이 특성, 즉 이차 종양의 형성을 억제하기 위한 지방산 유사체의 용도.
제 1항에 있어서, 종양을 갖는 포유동물의 전체 생존율을 향상시키기 위한 지방산 유사체의 용도.
하기 일반식 (Ⅰ)의 지방산 유사체의 유효량을 필요로하는 포유동물에 투여하는 단계를 포함하는 주 및 이차적인 전이 네오플라즘의 치료 또는 억제시키는 방법:

R₁-[xi - CH₂]_n- COOR₂(Ⅰ)

- 여기서 R₁은

- 하나 이상의 이중결합을 갖거나 하나 이상의 삼중 결합을 갖는 C₁-C₂₄알킨 및/또는,

- C₁-C₂₄알킨 및/또는,

- C₁-C₂₄알킬 또는, 플로라이드, 클로라이드, 하이드록시, C₁-C₄알콕시, C₁-C₄알킬티오, C₂-C₅알콕시 또는 C₁-C₄알킬을 포함한 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 화합물로 하나 또는 수개의 위치들에서 치환된 알킬, 및

- 여기서 R₂는 하이드로겐 또는 C₁-C₄알킬,

- n는 1에서 12 까지의 정수이며,

- i는 홀수이며, COOR₂에 대한 위치를 나타내며,

- 여기서 서로 독립된 xi 는 O, S, SO₂, Se 및 CH₂,

- xi 의 적어도 하나는 CH₂가 아닌 단서를 가지며,

또는 염, 프로드러그와 그 복합물이다.
제 8항에 있어서, 상기 화합물은 테트라글리티오아세트산인 방법.
제 8항에 있어서, 상기 화합물은 상기 화합물은 테트라데실셀레노아세트산인 방법.
전기한 항들중 어느 한 항에 있어서, 상기 지방산 유사체들은 그 투여 기간중에 포유동물의 혈액에 사실상 계속하여 치료에 유효한 농도가 유지되도록 투여되는 방법.
전기한 항들중 어느 한 항에 있어서, 상기 지방산 유사체 조성물의 조성은 단위 투약 형태로 된 방법.