KR20030005720A - A cosmetic composition containing an extract of ampelopsis japonica - Google Patents

A cosmetic composition containing an extract of ampelopsis japonica Download PDF

Info

Publication number
KR20030005720A
KR20030005720A KR1020010041140A KR20010041140A KR20030005720A KR 20030005720 A KR20030005720 A KR 20030005720A KR 1020010041140 A KR1020010041140 A KR 1020010041140A KR 20010041140 A KR20010041140 A KR 20010041140A KR 20030005720 A KR20030005720 A KR 20030005720A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
extract
effect
cosmetic composition
melanin
skin whitening
Prior art date
Application number
KR1020010041140A
Other languages
Korean (ko)
Inventor
박성민
조영호
김진화
이정재
홍승국
이범천
표형배
Original Assignee
한불화장품주식회사
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 한불화장품주식회사 filed Critical 한불화장품주식회사
Priority to KR1020010041140A priority Critical patent/KR20030005720A/en
Publication of KR20030005720A publication Critical patent/KR20030005720A/en

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9789Magnoliopsida [dicotyledons]
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61QSPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00Preparations for care of the skin
    • A61Q19/02Preparations for care of the skin for chemically bleaching or whitening the skin
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/74Biological properties of particular ingredients
    • A61K2800/75Anti-irritant
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/84Products or compounds obtained by lyophilisation, freeze-drying

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

PURPOSE: A cosmetic composition containing an Ampelopsis japonica extract exhibiting a skin whitening effect, skin irritation reducing effect and immunostimulating effect as a main component is provided. The extract has a cell membrane binding inhibiting effect of MSH for protecting melanin formation, human tyrosinase activity inhibiting effect, tyrosinase-synthesis inhibiting effect, melanin-production inhibiting effect and cell death inhibiting effect, and inflammation-inducing enzyme activity inhibiting effect, it can be thus used as a cosmetic having the above effect. CONSTITUTION: The skin whitening cosmetic composition contains 0.01 to 30% by weight of an Ampelopsis japonica extract, based on the total weight of the composition. The extract is prepared by extracting Ampelopsis japonica(Thunb.) Makino in one or more solvents selected from purified water, lower alcohol, glycerin, ethyl acetate, butylene glycol, propylene glycol, dichloro methane and hexane, filtrating and concentrating or freeze-drying.

Description

백렴 추출물을 함유하는 화장료 조성물{A COSMETIC COMPOSITION CONTAINING AN EXTRACT OF AMPELOPSIS JAPONICA}Cosmetic composition containing the extract of baekryeom {A COSMETIC COMPOSITION CONTAINING AN EXTRACT OF AMPELOPSIS JAPONICA}

본 발명은 백렴으로부터 추출한 유효 활성성분을 함유하는 피부 화장료에 관한 것이다.The present invention relates to a skin cosmetic containing an active ingredient extracted from baekryeom.

최근 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 화장품이 많이 개발되고 있다. 각종 한방 원료를 소정의 방법으로 추출하고, 그 추출물의 기능을 확인하여 각종 기능성 화장품을 개발하는 사례도 늘고 있다.Recently, many cosmetic products using natural products have been developed to reduce skin irritation. Various herbal raw materials are extracted by a predetermined method, and the function of the extracts is being increased to develop various functional cosmetics.

예를 들면 녹두는 피부를 청결하게 하는 기능이 알려져 있고, 그 외 인삼추출물, 상황버섯 추출물 등에 대해서도 그 특유의 노화방지 또는 미백 등의 효과가 밝혀져 각종 화장품에 응용되고 있다.For example, mung beans have a known function to clean the skin, and other ginseng extracts, mushroom extracts, etc., have been found to have unique anti-aging or whitening effects and are applied to various cosmetic products.

이러한 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발가치가 한층 높아지고 있다.These natural ingredients have less side effects on the skin, and as the consumer's response to cosmetics using natural materials has recently increased, the development value of cosmetics as a raw material for cosmetics is further increased.

이에, 본 발명자들은 이제까지 알려지지 않은 다른 한방재료들에 있어서 화장품으로의 응용가능성을 연구한 결과, 백렴의 추출물이 미백효과 등과 같은 화장품으로서의 효능이 기대 이상으로 우수함을 발견하게 되었다.Accordingly, the present inventors have studied the applicability to cosmetics in other herbal ingredients that have not been known so far, it has been found that the extract of baekryeom than the expected efficacy as a cosmetic such as whitening effect.

백렴은 포도과의 낙엽활엽 덩굴나무로 염초, 백초(白草)라고도 한다. 한국, 중국, 일본 등의 들에서 자라는 여러해살이 풀이다. 길이 2m이상 뻗으며 갈홍색의 덩이 뿌리가 있다. 꽃은 양성화로 취산꽃차례(聚花序)이고 담황색이며, 6~7월에 핀다. 열매는 장과로 9~10월에 익는다. 한방에서는 가을에 뿌리를 채취하여 껍질을 벗기고 썰어 볕에 말린 것을 백렴 또는 백근이라 하며, 소아경기, 결핵성림프선염, 자궁내막염, 장염, 치루, 화상, 창독 등에 처방한다. 성분은 뮤신(mucin), 전분, 앰펠롭신(ampelopsin), 점질, 녹말 등이 있으며 학명은 앰펠로시스 자포니카(Ampelopsis japonica)이다(한대석, 생약학, 동명사, 1998).White leaf is a deciduous broad-leaved vine of grape family, also known as salt, white vine (白草). It is a perennial plant that grows in Korea, China, and Japan. It extends more than 2m in length and has a reddish lump root. Flowers are bisexual, inflorescences of inflorescences, pale yellow, and bloom in June-July. Fruits ripen in September-October with berries. In oriental medicine, the roots are taken in the fall, peeled, sliced, and sun-dried, called pneumonia or white root. It is prescribed for children's games, tuberculous lymphadenitis, endometritis, enteritis, dental fever, burns, and venom. Ingredients include mucin, starch, ampelopsin, slime, and starch. The scientific name is Amelopsis japonica (Han Dae-seok, Pharmacology, Dong-myung, 1998).

이러한 백렴을 화장품으로 응용한 예가 국내 특허출원 98-49138호에 개시되어 있다. 그러나, 이 출원에 개시된 추출물은 백렴 외에 천화분, 백지, 고본, 천궁, 살구씨, 황금, 당귀, 녹두, 삼백초, 인삼잎, 부자, 두충, 방풍, 표고버섯 등을 적당한 배율로 배합하여 1,3부틸렌글리콜에 의해 추출한 것으로서, 이미 녹두나 살구씨 같은 미백효과 등의 기능이 잘 알려진 원료가 같이 포함되어 있어, 백렴만을 따로 추출한 추출물의 효능에 대해서는 개시되어 있지 않다.An example of applying such baekryeom as a cosmetic is disclosed in Korean Patent Application No. 98-49138. However, the extract disclosed in this application is a combination of baekryeomhwa, white paper, gobon, cheongung, apricot seed, golden, donkey, mung bean, three hundred seconds, ginseng leaf, rich, tofu, windproof, shiitake mushrooms 1,3 It is extracted with butylene glycol, and already contains well-known raw materials such as a whitening effect such as mung beans and apricot seeds, and the efficacy of the extract extracted only from baekrye is not disclosed.

이에 본 발명자들은 여러 가지 한방 원료 중 백렴을 선택하여 이것의 화장품 원료로서의 효능을 확인하고 그 사용방법을 개발함으로써 다양한 화장품의 원료의선택범위를 높이고, 또한 이 원료를 사용하여 좀더 자극이 없으면서도 소정의 기능성 효과를 나타내는 화장품을 제조할 수 있는 방법을 제공하고자 한다.Accordingly, the present inventors select baekryeom among various herbal raw materials to confirm its efficacy as a cosmetic raw material and develop a method of using the same to increase the selection range of various cosmetic raw materials, and also use this raw material without any stimulus, It is intended to provide a method for producing a cosmetic exhibiting a functional effect of.

또한, 백렴의 추출물 제조시 특정 추출용매 선택시 목적 효능이 더욱 크게 나타난 점으로부터 화장품 원료로서의 이들 물질을 이용하여 화장료를 제조하는 방법 및 그 화장료를 제공하고자 한다.In addition, from the point of view that the target efficacy was more greatly selected when selecting a specific extraction solvent when extracting baekryeom, to provide a method for producing a cosmetic using these materials as a cosmetic raw material and the cosmetic.

상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 백렴 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a cosmetic composition for skin whitening containing baekryeom extract as the main active ingredient.

또한, 본 발명은 백렴 추출용매로서 정제수, 저급 알코올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하는 것을 특징으로 한다.In addition, the present invention is characterized by using at least one solvent selected from purified water, lower alcohol, glycerin, ethyl acetate, butylene glycol, propylene glycol, dichloromethane and hexane as the extract.

또한, 본 발명은 추출용매로서 에탄올 40∼95% 용액을 이용하여 추출하는 것을 특징으로 한다.In addition, the present invention is characterized in that the extraction using the ethanol 40-95% solution as the extraction solvent.

뿐만 아니라, 본 발명은 냉침 또는 가열방법으로 추출을 수행하는 것을 특징으로 한다.In addition, the present invention is characterized in that the extraction is carried out by a cooling or heating method.

나아가, 본 발명은 추출 후 여과, 농축 또는 동결건조를 더 수행하는 것을 특징으로 한다.Furthermore, the present invention is characterized by further performing filtration, concentration or lyophilization after extraction.

또한, 본 발명의 화장료는 백렴 추출물을 0.01∼30중량% 함유함을 특징으로 한다.In addition, the cosmetic of the present invention is characterized by containing 0.01 to 30% by weight of baekryeom extract.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형의 제형 중 하나인 것을 특징으로 한다.In addition, the cosmetic composition of the present invention is characterized in that one of the formulation of a lotion, gel, water-soluble liquid, oil-in-water (O / W) type and water-in-oil (W / O) type.

상기 화장료 조성물은 피부 미백용으로 사용되는 것을 특징으로 한다.The cosmetic composition is characterized in that it is used for skin whitening.

상기 화장료 조성물은 피부 자극완화용으로 사용되는 것을 특징으로 한다.The cosmetic composition is characterized in that it is used for skin irritation relief.

상기 화장료 조성물은 피부 면역증강용으로 사용되는 것을 특징으로 한다.The cosmetic composition is characterized in that it is used for skin immunity enhancement.

이하, 실시예를 통해 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 단, 이들 실시예는 본 발명의 예시적인 기재일 뿐이며 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. However, these Examples are only illustrative description of the present invention and the scope of the present invention is not limited to these Examples.

[실시예 1]백렴 추출물 제조 Example 1 Preparation of Extract

세절하여 음건한 백렴을 뜨거운(hot) 95%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결건조하였다. 감압농축물 및 동결건조물이 0.01 내지 30.0중량% 함유되게 정제수, 에탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 백렴 추출물을 제조하였다.The dry and white pneumonia was chopped and refluxed three times for 5 hours with a hot 95% (V / V) ethanol aqueous solution, and then cooled and filtered through Whatman # 5 filter paper. The filtered extract was concentrated under reduced pressure and lyophilized at 50 ° C or lower. The pneumonia extract was prepared using one or more solvents selected from purified water, ethanol, butylene glycol, and propylene glycol so as to contain 0.01 to 30.0 wt% of the reduced pressure concentrate and the lyophilisate.

[실시예 2]멜라노싸이트 자극 호르몬(MSH)을 이용한 멜라노싸이트의 멜라닌 합성 저해 실험 Example 2 melanoma sites stimulating hormone (MSH) melanin synthesis of the melanocytes site inhibition experiment using

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 백렴 추출물의 미백효과를 확인하기 위해 멜라노싸이트 자극 호르몬(MSH)를 이용하여 멜라노싸이트의 멜라닌 합성 저해정도로 미백효과를 평가한 것이다.This Example is to evaluate the whitening effect to the degree of inhibition of melanin synthesis of melanocytes using melanocyte stimulating hormone (MSH) to confirm the whitening effect of the extract of the baekryeom obtained in Example 1.

본 실시예에 사용된 A375SM 멜라노싸이트는 사람에서 유래한 세포주이며 정상적인 조건에서는 멜라닌이라는 흑색색소를 분비하지 않다가 멜라노싸이트 자극 호르몬(MSH)을 처리하면 멜라닌을 분비하는 세포이다. 이 세포의 인공배양 중에 α-MSH와 백렴 추출물을 처리하여 멜라닌 흑색색소의 합성 정도를 비교, 평가하였다. 본 실시예에 사용된 A375SM 멜라노싸이트는 KCLB(Korea Cell Line Bank, 기탁번호:80004)로부터 분양받아 사용하였다.The A375SM melanocytes used in this example are human-derived cell lines, which do not secrete melanin under normal conditions, but melanocyte stimulating hormone (MSH). During the artificial culture of these cells, the synthesis degree of melanin black pigment was compared and evaluated by treatment with α-MSH and baekryeum extract. The A375SM melanocytes used in this example were used from KCLB (Korea Cell Line Bank, Accession No.:80004).

멜라노싸이트 자극 호르몬은 멜라노싸이트의 세포막 수용체와 결합하여 세포내로 멜라닌 합성 신호를 전달하는 싸이토카인으로 α-타입과 β-타입으로 나누어지는데, β-타입은 동물개체간 특이성이 높아 사람과 마우스 등 동물 개체간 교차반응이 일어나지 않고, α-타입은 모든 동물개체간 동일한 구조를 가지고 있어 실험실내 미백효과 평가를 위하여 폭넓게 사용되고 있다.Melanosite stimulating hormone is a cytokine that binds to the membrane receptor of melanocytes and transmits melanin synthesis signal into cells. The melanocyte stimulating hormone is divided into α- and β-types. Liver cross-reaction does not occur, and α-type has the same structure among all animal subjects and is widely used for the evaluation of whitening effect in the laboratory.

α-MSH를 이용한 A375SM 멜라노싸이트의 멜라닌 합성 억제효과 측정은 다음과 같이 행하였다.The melanin synthesis inhibitory effect of A375SM melanocytes using α-MSH was measured as follows.

A375SM 멜라노싸이트를 6 웰 플레이트에 각 웰당 2×106농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 α-MSH(Sigma사) 200nM과 백렴 추출물을 독성을 유발하지 않는 농도로 동시에 처리하여 48시간 동안 배양하였다. 48시간 배양 후 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 세포내 멜라닌 정량은 로탄(Lotan : Cancer Res., 40:3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 완충액{homogenization buffer(50mM 소듐 포스페이트, pH6.8, 1% Triton X-100, 2mM PMSF)} 1㎖을 첨가하여 5분간 와류(vortexing)하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리(3,000rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액(cell lysate)에 1N NaOH(10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로플레이트 판독기(microplate reader, ELx800, 미국)로 405㎚에서 멜라닌의 흡광도를 측정하여 합성된 멜라닌을 정량한 다음 시료의 멜라닌 합성 저해율(%)을 측정하였다.A375SM melanocytes were dispensed in 6 well plates at a concentration of 2 × 10 6 per well, cells were attached, and 200-nm of α-MSH (Sigma Co., Ltd.) and pneumococcal extracts were simultaneously treated at a concentration that did not cause toxicity and incubated for 48 hours. . After 48 hours of incubation, the cells were detached with trypsin-EDTA, the cell number was measured, and the cells were recovered by centrifugation. Intracellular melanin quantification was performed by slightly modifying the method of Rotan (Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980). After washing the cell pellet with PBS once, 1 ml of homogenization buffer (50 mM sodium phosphate, pH6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) was added and vortexed for 5 minutes to disrupt the cells. It was. Melt the extracted melanin by adding 1N NaOH (10% DMSO) to the cell lysate obtained by centrifugation (3,000 rpm, 10 minutes), and then melanin at 405 nm with a microplate reader (ELx800, USA). The absorbance of the melanin was measured to quantify the synthesized melanin synthesis rate (%) of the sample was measured.

A375SM 멜라노싸이트의 멜라닌 합성 저해율(%)은 다음 수학식 1에 의하여 계산하였으며, IC50값은 멜라노싸이트의 세포막에 결합하는 α-MSH를 저해하여 멜라닌 생성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.Melanin synthesis inhibition rate (%) of the A375SM melanocytes was calculated by the following equation (1), IC 50 value is the concentration of a substance that inhibits melanin production by inhibiting α-MSH binding to the cell membrane of melanocytes.

저해율(%) = [(A-B)/A]×100% Inhibition = [(A-B) / A] × 100

A : α-MSH만 첨가한 웰의 멜라닌 양A: the amount of melanin in the well containing only α-MSH

B : 시료와 α-MSH를 동시에 첨가한 웰의 멜라닌 양B: Melanin amount in the wells to which the sample and α-MSH were simultaneously added

α-MSH를 이용한 A375SM 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 억제 효과를 시험한 결과 백렴 추출물의 IC50값은 0.01%로 나타나 기존의 미백제인 코지산, 알부틴, 유용성 감초 추출물, 상백피 추출물 등에 비해 우수한 효과를 나타내었다(표 1).The result of testing the melanin production inhibitory effect of A375SM melanocytes using α-MSH showed that the IC 50 value of P. aeruginosa extract was 0.01%, which was superior to that of conventional whitening agents such as kojic acid, arbutin, oil-soluble licorice extract, and lettuce extract. (Table 1).

이와 같은 결과로 볼 때 본 발명의 백렴 추출물의 경우 기존의 미백제가 단순히 티로시나제만을 저해하는 것과는 달리 멜라노싸이트 자극 호르몬인 α-MSH가멜라노싸이트에 결합하는 것을 저해하여 멜라닌 합성을 저해하는 것임을 알 수 있다.These results suggest that the whitening extract of the present invention inhibits melanin synthesis by inhibiting the binding of the melanosite stimulating hormone α-MSH to melanocytes, unlike the conventional whitening agent, which merely inhibits tyrosinase. .

시 료sample 멜라닌 합성 저해 효과(IC50)Melanin synthesis inhibitory effect (IC 50 ) 코지산Kojisan 00 알부틴Arbutin 00 백렴 추출물Baekryeum extract 0.01%0.01% 상백피 추출물Lettuce extract 00 유용성 감초추출물Soluble Licorice Extract 00

[실시예 3]머쉬룸 티로시나제를 이용한 티로시나제 억제효과 측정 실험 EXAMPLE 3 Experimental Measurement of Tyrosinase Inhibitory Effect Using Mushroom Tyrosinase

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 백렴 추출물의 미백효과를 확인하기 위해 티로시나제(tyrosinase)라는 효소의 기능이 억제되는 정도를 보고 미백효과를 판단한 것이다.This Example is to determine the whitening effect by looking at the degree of inhibition of the function of the enzyme called tyrosinase (tyrosinase) to confirm the whitening effect of the extract of the baekryeom obtained in Example 1.

티로시나제는 생체내에서 티로신(tyrosine)이라는 물질의 산화과정을 촉진하여 멜라닌이 생성되게 도와주는 효소이다. 본 실시예에서는 이 효소의 기능을 억제하여 티로신이 산화되어 멜라닌이라는 흑색의 고분자를 형성하는 것을 억제하는 정도를 측정하는 방법(Pomerantz S.H., J. Biochem., 24:161-168, 1966)을 응용해 미백 효과를 판정하였다.Tyrosinase is an enzyme that accelerates the oxidation of tyrosine in vivo and helps melanin production. In this example, the method of inhibiting the function of this enzyme to inhibit the oxidation of tyrosine to form a black polymer called melanin (Pomerantz SH, J. Biochem., 24: 161-168, 1966) is applied. The sun whitening effect was determined.

상백피 추출물, 백렴 추출물, 코지산, 알부틴, 유용성 감초 추출물을 시료로 사용하여 티로시나제 활성 억제효과를 조사하였다.The inhibitory effect of tyrosinase activity was investigated using lettuce extract, baekryeom extract, kojic acid, arbutin, oil-soluble licorice extract as a sample.

각 시료들의 티로시나제에 대한 저해활성은 시료 15㎕를 96 웰 플레이트에 넣고, 50mM 인산완충액(pH6.5) 150㎕, 1.5mM L-티로신 용액 25㎕를 넣은 후, 머쉬룸 티로시나제(1,500units/㎖, Sigma社 ) 10㎕를 첨가하여 37℃에서 20분간 반응시킨후 마이크로플레이트 판독기(microplate reader, ELx800, 미국)를 사용하여 490㎚에서 흡광도를 측정하여 티로시나제에 대한 저해율을 측정하였다. 티로시나제에 대한 저해율(%)은 다음 수학식 2에 의하여 계산하였으며, IC50값은 티로시나제 효소 활성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.The inhibitory activity against tyrosinase of each sample was determined by placing 15 μl of the sample into a 96 well plate, adding 150 μl of 50 mM phosphate buffer (pH6.5), 25 μl of 1.5 mM L-tyrosine solution, and then using mushroom tyrosinase (1,500 units / ml, Sigma) 10 μl was added and reacted at 37 ° C. for 20 minutes, and then the absorbance was measured at 490 nm using a microplate reader (ELx800, USA) to measure the inhibition rate against tyrosinase. Inhibition rate (%) for tyrosinase was calculated by the following equation (2), IC 50 value is the concentration of a substance that inhibits the tyrosinase enzyme activity by 50%.

저해율(%) = {[(D-C)-(B-A)]/(D-C)}×100% Inhibition = {[(D-C)-(B-A)] / (D-C)} × 100

A : 시료를 넣은 웰의 반응전 흡광도A: Absorbance before reaction of the well containing the sample

B : 시료를 넣은 웰의 반응후 흡광도B: Absorbance after reaction of the well containing the sample

C : 시료를 넣지 않은 웰의 반응전 흡광도C: Absorbance before reaction of the well without sample

D : 시료를 넣지 않은 웰의 반응후 흡광도D: Absorbance after reaction of well without sample

티로시나제 활성 억제 효과를 시험한 결과 백렴 추출물의 IC50값은 0.02%로 나타나 티로시나제 저해효과가 뛰어나다고 알려진 기존의 미백제인 코지산, 알부틴, 상백피 추출물 등에 비해 우수한 효과를 나타내었다(표 2).As a result of testing the inhibitory effect of tyrosinase activity, the IC 50 value of P. aeruginosa extract was 0.02%, which was superior to the conventional whitening agents known as kojic acid, arbutin, and lettuce extract, which are known to be excellent in tyrosinase inhibition (Table 2).

시 료sample 머쉬룸 티로시나제 저해효과(IC50)Inhibitory effect of mushroom tyrosinase (IC 50 ) 코지산Kojisan 0.037%0.037% 알부틴Arbutin 0.4%0.4% 백렴 추출물Baekryeum extract 0.02%0.02% 상백피 추출물Lettuce extract 10%10% 유용성 감초추출물Soluble Licorice Extract 0.02%0.02%

[실시예 4]방선균을 이용한 멜라닌 생성 억제효과 측정 실험 [Example 4] Melanin production inhibitory effect measurement experiment using actinomycetes

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 백렴 추출물의 미백효과를 확인하기 위해 방선균에 대한 멜라닌 생성 억제 정도를 보고 미백효과를 판단한 것이다.This Example is to determine the whitening effect by looking at the degree of inhibition of melanin production against actinomycetes in order to confirm the whitening effect of the baekryeom extract obtained in Example 1.

방선균(Streptomyces bikiniensis NRRL B1049)은 생명과학연구원(KCTC)으로부터 분양(기탁번호:9172)받아 사용하였다.Actinomycetes (Streptomyces bikiniensis NRRL B1049) were used by the Korea Science Institute (KCTC).

방선균을 파파비자스(papavizas) VDYA 한천 슬랜트 배지(V-8 juice 200㎖, 포도당 2g, 효모 추출물 2g, CaCO31g, 한천 20g, 증류수 800㎖, pH7.2)에서 2주간 28℃로 배양시켜 포자를 생성시킨 후 멸균수로 포자 현탁액을 만들었다. 0.2%의 효모 추출물을 첨가한 ISP No.7 평판배지에 포자 현탁액을 0.2㎖씩 도포한 후 배지표면에 시료(30㎍/㎖)를 200㎕씩 적신 페이퍼 디스크(paper disc)를 올리고 28℃에서 배양하였다. 48시간 배양한 후 생성된 멜라닌 생성 저해환의 크기를 대표적 멜라닌 생성 저해물질로 알려진 4-하이드록시아니졸을 대조군으로 하여 측정하여 멜라닌 생성 저해여부를 관찰하였다(이충환, 산업미생물학회지, 21:139-143, 1993).Actinomycetes were incubated at 28 ° C. for 2 weeks in papavizas VDYA agar slant medium (V-8 juice 200 ml, glucose 2 g, yeast extract 2 g, CaCO 3 1 g, agar 20 g, distilled water 800 ml, pH7.2) for 2 weeks. Spores were produced to produce spores with sterile water. 0.2 ml of spore suspension was applied to ISP No. 7 flat medium containing 0.2% yeast extract, and a paper disc moistened with 200 µl of sample (30 µg / ml) was placed on the surface of the medium. Incubated. After 48 hours of incubation, the size of the melanogenesis inhibitory ring produced was measured using 4-hydroxyanisol, which is known as a typical melanogenesis inhibitor, as a control group and the inhibition of melanogenesis was observed (Lee Chung-hwan, Journal of the Industrial Microbiology, 21: 139- 143, 1993).

백렴 추출물의 방선균에 대한 멜라닌 생성 저해환은 30㎜로 대조군인 4-하이드록시아니졸이나 기존의 미백제인 코지산, 알부틴보다 우수한 멜라닌 생성 저해효과를 나타내었다(표 3).Melanin production inhibitory ring against actinomycetes of P. aeruginosa was 30mm, showing melanin production inhibitory effect better than that of 4-hydroxyanisol, which is a control group, or conventional whitening agents, koji acid and arbutin (Table 3).

물 질matter 방선균 저해환 지름(㎜)Actinomycetes Inhibitory Ring Diameter (mm) 4-하이드록시아니졸4-hydroxyanisol 2424 코지산Kojisan 00 알부틴Arbutin 00 하이드로퀴논Hydroquinone 2525 백렴 추출물Baekryeum extract 3030 상백피 추출물Lettuce extract 1212 유용성 감초 추출물Soluble Licorice Extract 1616 p-메톡시페놀p-methoxyphenol 2828

[실시예 5]B16F1 멜라노싸이트를 이용한 멜라닌 생성 억제효과 측정 실험 Example 5 Measurement of melanin production inhibitory effect using B16F1 melanocytes

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 백렴 추출물의 효과를 확인하기 위해 B16F1 멜라노싸이트에 대한 멜라닌 생성 억제 정도를 보고 미백효과를 판단한 것이다.This Example was to determine the whitening effect by looking at the degree of melanin production inhibition on B16F1 melanocytes in order to confirm the effect of the baekryeom extract obtained in Example 1.

본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 마우스에서 유래한 세포주이며 멜라닌이라는 흑색색소를 분비하는 세포이다. 이 세포의 인공배양중에 시료를 처리하여 멜라닌 흑색색소가 감소하는 정도를 비교 평가하였다. 본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 ATCC(American Type Culture Collection, 기탁번호 : 6323)로부터 분양받아 사용하였다.The B16F1 melanocytes used in this example are cell lines derived from mice and cells that secrete a black pigment called melanin. Samples were treated during the artificial culture of these cells to evaluate the degree of melanin black pigment reduction. The B16F1 melanocytes used in this example were used after being sold from ATCC (American Type Culture Collection, Accession No .: 6323).

B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생합성 억제효과 측정은 다음과 같이 행하였다.The melanin biosynthesis inhibitory effect of B16F1 melanocytes was measured as follows.

B16F1 멜라노싸이트를 6 웰 플레이트에 각 웰당 2×106농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 시료를 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다.B16F1 melanocytes were dispensed in 6-well plates at a concentration of 2 × 10 6 per well, cells were attached, and the samples were incubated for 72 hours by treating the samples at a concentration that does not cause toxicity. After 72 hours of incubation, the cells were detached with trypsin-EDTA, and the cells were counted and centrifuged to recover the cells.

세포내 멜라닌 정량은 Lotan(Cancer Res., 40:3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 완충액(50mM 소듐 포스페이트, pH6.8, 1% Triton X-100, 2mM PMSF) 1㎖을 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리(3,000rpm,10분)하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH (10%DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 판독기로 405㎚에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 저해율(%)은 다음 수학식 3에 의하여 계산하였으며, IC50값은 멜라닌 생성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.Intracellular melanin quantification was performed by slightly modifying the method of Lotan (Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980). The cell pellet was washed once with PBS, and then 1 ml of homogenization buffer (50 mM sodium phosphate, pH6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) was added to vortex for 5 minutes to disrupt the cells. Melt the extracted melanin by adding 1N NaOH (10% DMSO) to the cell filtrate obtained by centrifugation (3,000 rpm, 10 minutes), and then measured the absorbance of melanin at 405 nm with a microplate reader, and then quantified the melanin. Melanin production inhibition rate (%) was measured. Melanin inhibition rate (%) of B16F1 melanocytes was calculated by the following equation (3), IC 50 value is the concentration of a substance that inhibits melanin production by 50%.

저해율(%) = [(A-B)/A]×100% Inhibition = [(A-B) / A] × 100

A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양A: Melanin amount in wells without sample

B : 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양B: Melanin amount in the wells to which the sample was added

B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 억제 효과를 시험한 결과 백렴 추출물의 IC50값은 0.01%로 나타나 기존의 미백제인 코지산, 알부틴, 유용성 감초 추출물, 상백피 추출물 등에 비해 우수한 효과를 나타내었다(표 4).As a result of testing the melanin production inhibitory effect of B16F1 melanocytes, the IC 50 value of the baekryeom extract was 0.01%, which was superior to the existing whitening agents, koji acid, arbutin, oil-soluble licorice extract, and extract of lettuce extract (Table 4).

시 료sample 멜라닌 생성 억제효과(IC50)Melanin production inhibitory effect (IC 50 ) 코지산Kojisan 0.05%0.05% 하이드로퀴논Hydroquinone 0.03%0.03% 알부틴Arbutin 0.5%0.5% 백렴 추출물Baekryeum extract 0.01%0.01% 상백피 추출물Lettuce extract 5%5% 유용성 감초추출물Soluble Licorice Extract 0.03%0.03%

[실시예 6]B16F1 멜라노싸이트를 이용한 세포내 티로시나제 효소 합성 억제효과 측정 실험 Example 6 Inhibitory Effect of In Vitro Tyrosinase Enzyme Synthesis Using B16F1 Melanosite

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 백렴 추출물의 미백효과를 확인하기 위해 B16F1 멜라노싸이트내 티로시나제 효소 합성 억제 정도를 세포내 티로시나제 효소합성량을 측정하여 판단한 것이다.In this example, the degree of inhibition of tyrosinase enzyme synthesis in B16F1 melanocytes was determined by measuring the amount of intracellular tyrosinase enzyme synthesis in order to confirm the whitening effect of the extract obtained in Example 1.

본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 마우스에서 유래한 세포주이며 티로시나제라는 효소를 합성하는 세포이다. 이 세포의 인공배양 중에 시료를 처리하고 세포에서 티로시나제를 분리하여 효소 합성량을 측정하므로서 티로시나제 효소 합성 억제 정도를 비교 평가하였다.The B16F1 melanocytes used in this example are cell lines derived from mice and cells that synthesize an enzyme called tyrosinase. The degree of inhibition of tyrosinase enzyme synthesis was compared by evaluating the amount of enzyme synthesis by treating the sample during the artificial culture of the cells and by separating the tyrosinase from the cells.

본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 ATCC(American Type Culture Collection, 기탁번호 : 6323)로부터 분양받아 사용하였다.The B16F1 melanocytes used in this example were used after being sold from ATCC (American Type Culture Collection, Accession No .: 6323).

B16F1 멜라노싸이트의 티로시나제 효소 합성억제효과 측정은 다음과 같이 행하였다.The tyrosinase enzyme synthesis inhibitory effect of B16F1 melanocytes was measured as follows.

B16F1 멜라노싸이트를 6 웰 플레이트에 각 웰당 2×106농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 시료를 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼(50mM 소듐 포스페이트, pH6.8, 1% Triton X-100, 2mM PMSF) 1㎖을 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하고, 원심분리(3,000rpm,10분)하여 상등액을 회수하였다. 50mM 소듐 포스페이트 버퍼(pH6.5)에 1.5mM L-티로신, 0.06mM L-DOPA, 세포 상등액을 각각 넣고, 37℃에서 30분간 배양한 후 마이크로플레이트 판독기로 490㎚에서 흡광도를 측정하여 티로시나제 효소 합성 억제효과를 측정하였다. B16F1 멜라노싸이트의 티로시나제 효소 합성 억제율(%)은 다음 수학식 4에 의하여 계산하였으며, IC50값은 티로시나제 효소 합성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.B16F1 melanocytes were dispensed in 6-well plates at a concentration of 2 × 10 6 per well, cells were attached, and the samples were incubated for 72 hours by treating the samples at a concentration that does not cause toxicity. After 72 hours of incubation, the cells were detached with trypsin-EDTA, and the cells were counted and centrifuged to recover the cells. Wash the cell pellet once with PBS, add 1 ml of homogenization buffer (50 mM sodium phosphate, pH6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF), vortex for 5 minutes, disrupt the cells, and centrifuge (3,000 rpm). 10 minutes) to recover the supernatant. Put 1.5mM L-tyrosine, 0.06mM L-DOPA, and cell supernatant into 50mM sodium phosphate buffer (pH6.5), incubate for 30 minutes at 37 ° C, and measure the absorbance at 490nm with a microplate reader to synthesize tyrosinase enzyme. Inhibitory effect was measured. The inhibition rate of tyrosinase enzyme synthesis (%) of B16F1 melanocytes was calculated by the following equation (4), IC 50 value is the concentration of a substance that inhibits 50% tyrosinase enzyme synthesis.

저해율(%) = [(A-B)/A]×100% Inhibition = [(A-B) / A] × 100

A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 티로시나제 효소 합성량A: Synthesis amount of tyrosinase enzyme in wells without sample

B : 시료를 첨가한 웰의 티로시나제 효소 합성량B: Tyrosinase enzyme synthesis amount of wells to which sample was added

B16F1 멜라노싸이트의 티로시나제 효소 합성 억제 효과를 시험한 결과, 백렴 추출물의 IC50값은 0.015%로 나타나 기존의 미백제인 코지산, 알부틴, 유용성 감초 추출물, 상백피 추출물 등에 비해 매우 우수한 효과를 나타내었다(표 5). 이와 같은 결과를 볼 때 본 발명의 백렴 추출물의 경우는 기존의 미백제가 단순히 티로시나제 효소의 활성만을 저해하는 것과는 달리 티로시나제 효소의 합성을 저해하여 미백효과를 나타내는 것을 알 수 있다.As a result of testing the inhibitory effect of tyrosinase enzyme synthesis of B16F1 melanocytes, the IC 50 value of P. aeruginosa extract was 0.015%, which was much better than the existing whitening agents, koji acid, arbutin, oil-soluble licorice extract, and extract from lettuce. 5). In view of the above results, it can be seen that the whitening extract of the present invention exhibits a whitening effect by inhibiting the synthesis of tyrosinase enzyme, unlike the conventional whitening agent merely inhibiting the activity of tyrosinase enzyme.

시 료sample 티로시나제 효소 합성 억제효과(IC50)Inhibitory effect of tyrosinase enzyme synthesis (IC 50 ) 코지산Kojisan 00 알부틴Arbutin 00 백렴 추출물Baekryeum extract 0.015%0.015% 상백피 추출물Lettuce extract 00 유용성 감초추출물Soluble Licorice Extract 00

[실시예 7]염증유발관련 효소 활성 억제효과 측정 실험 Example 7 Inflammation-Induced Enzyme Activity Inhibitory Effect Measurement Experiment

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 백렴 추출물의 항염증효과를 확인하기 위해 염증유발관련 효소인 히아루로니디아제의 효소 활성을 측정하여 판단한 것이다.This example is to determine the anti-inflammatory effect of the baekryeomyeon extract obtained in Example 1 by determining the enzyme activity of the hyaluroniadiaze enzyme, an inflammation-associated enzyme.

히아루로니디아제(Hyaluronidase)는 히아루론산을 가수분해하는 효소로 염증을 유발하는 기능을 가지고 있다. 본 실시예에서는 이 효소의 활성을 억제하여 항염증효과를 측정하는 방법(Kakegawa Y., Japanese J. of Inflammation, 4:437-438, 1984)을 응용해 항염증효과를 판정하였다.Hyaluronidase is an enzyme that hydrolyzes hyaluronic acid and has the function of causing inflammation. In this example, the anti-inflammatory effect was determined by applying a method (Kakegawa Y., Japanese J. of Inflammation, 4: 437-438, 1984) to inhibit the activity of this enzyme to measure the anti-inflammatory effect.

컴프리, 시소, 삼백초, 유용성 감초 추출물, 백렴 추출물을 시료로 사용하여 히아루로니디아제 활성 억제효과를 조사하였다.The inhibitory effect of hyaluronidiase activity was investigated using comfrey, seesaw, triticale, oil-soluble licorice extract, and baekryeom extract as samples.

각 시료들의 히아루로니디아제 대한 저해활성은 다음과 같이 행하였다.Inhibitory activity of hyaluronidiases of each sample was performed as follows.

시료 100㎕와 히아루로니디아제 용액(type IV-S, Sigma사, 400U/㎖) 50㎕를 넣고 37℃에서 20분간 반응시킨후, 효소활성화용액(Compound 48/80 CaCl2H2O, Sigma사, 0.1㎎/㎖)을 100㎕ 첨가하고 다시 37℃에서 20분간 반응시킨다. 히아루론산(hyaluronic acid) 용액(0.4㎎/㎖)을 250㎕ 넣고 37℃에서 40분간 반응시키고, 0.4N NaOH 100㎕를 넣어 반응을 종결시킨다. 포타슘보레이트 용액을 100㎕ 첨가하여 95℃에서 3분간 반응시키고 냉각시킨 다음 p-디메틸아미노벤즈알데히드 용액을 3㎖ 넣고 다시 20분간 37℃에서 반응시켜 발색시킨다. 585㎚에서 흡광도를 측정하여 히아루로니디아제에 대한 저해율을 측정하였다.100 μl of sample and 50 μl of hyaluronidiase solution (type IV-S, Sigma, 400U / mL) were added and reacted at 37 ° C. for 20 minutes, followed by enzyme activation solution (Compound 48/80 CaCl 2 · 2H 2 O, 100 μl of Sigma Co., Ltd., 0.1 mg / ml) was added and reacted again at 37 ° C. for 20 minutes. 250 μl of hyaluronic acid solution (0.4 mg / ml) was added thereto, followed by reaction at 37 ° C. for 40 minutes, and 100 μl of 0.4N NaOH was added to terminate the reaction. 100 μl of potassium borate solution was added thereto, reacted at 95 ° C. for 3 minutes, cooled, and 3 ml of p-dimethylaminobenzaldehyde solution was added thereto. Absorbance was measured at 585 nm to determine the inhibition rate for hyaluronidiases.

히아루로니디아제에 대한 저해율(%)은 다음 수학식 5에 의하여 계산하였으며, IC50값은 히아루로니디아제 효소 활성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.Inhibition rate (%) for the hyaluronia diase was calculated by the following equation (5), IC 50 value is the concentration of a substance that inhibits the hyaluronia diase enzyme activity by 50%.

저해율(%) = [(A-B)/A] ×100% Inhibition = [(A-B) / A] × 100

A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 효소활성A: Enzyme activity of wells without sample

B : 시료를 첨가한 웰의 효소활성B: Enzyme Activity of Well Added Samples

히아루로니디아제 효소 활성 억제 효과를 시험한 결과 백렴 추출물의 IC50값은 0.05%로 나타나 히아루로니디아제 저해효과가 뛰어나다고 알려진 기존의 항염증제인 유용성 감초 추출물, 컴프리 추출물, 삼백초 추출물, 시소 추출물 등에 비해 우수한 효과를 나타내었다(표 6).As a result of testing the inhibitory effect of hyaluronidiaze enzyme activity, IC 50 value of P. erythematosus extract was 0.05%, which is a useful anti-inflammatory licorice extract, comfrey extract, triticale extract, and seesaw extract, which are known to be excellent in inhibiting hyaluronidiase. It showed a superior effect (Table 6).

시 료sample 히아루로니디아제 활성 억제효과(IC50)Inhibitory effect of hyaluronidiases (IC 50 ) 컴프리 추출물Comfrey Extract 0.22%0.22% 시소 추출물Seesaw extract 0.58%0.58% 유용성 감초 추출물Soluble Licorice Extract 0.08%0.08% 삼백초 추출물Triticale extract 0.3%0.3% 백렴 추출물Baekryeum extract 0.05%0.05%

[실시예 8]피부 면역증강작용 평가 실험 [Example 8] Evaluation of Skin Immune Boosting Activity

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 백렴 추출물의 피부 면역증강작용을 평가하고자 마우스 복강 내에서 활성화된 마크로파아지에 의해 생성되는 수퍼옥사이드 음이온의 분비정도를 정량하여 평가하였다. 면역증강작용 실험은 다음과 같이 실시하였다.This Example was evaluated by quantifying the degree of secretion of superoxide anion produced by activated macrophages in the mouse abdominal cavity to evaluate the skin immune enhancing action of the extract of the baekryeomyeon obtained in Example 1. Immunopotentiation experiments were carried out as follows.

마크로파아지는 인체 면역을 담당하는 세포중의 하나로 외부 물질에 의해 자극을 받으면 수퍼옥사이드 음이온을 분비하여 외부 물질을 용해시키거나 세포 외부로 방출시켜 생체를 보호하게 된다. 본 면역증강작용 평가실험에는 ICR계 마우스(9주령, 수컷)를 사용하였다. 마우스의 복강으로부터 마크로파아지 세포를 회수하여 37℃, 5% CO2배양기에서 48시간 배양하면서 면역증강작용이 우수한 인터페론과 리포폴리사카리드(lipopolysaccharides:LPS)를 대조군으로 하여 실시예 1에서 수득한 백렴 추출물을 첨가한 후 마크로파아지 세포의 분비물 중의 수퍼옥사이드 음이온인 이산화질소 음이온에 대한 양을 가시광선 흡수 스펙트럼으로 540㎚에서 정량하였다. 그 결과 마크로파아지 세포 배양중 백렴 추출물을 첨가했을 때 인터페론을 첨가한 경우보다 2배, LPS를 첨가한 경우보다 4배 정도 높은 이산화질소 음이온을 분비하는 것으로 나타나는 것으로 보아 면역증강작용이 매우 우수함을 알 수 있었다.Macrophages are one of the cells responsible for human immunity and when stimulated by an external substance, secrete superoxide anions to dissolve external substances or release them to the outside of the cell to protect the living body. ICR mice (9 weeks old, males) were used for this immunopotentiation evaluation experiment. Macrophage cells were recovered from the abdominal cavity of the mouse and incubated for 48 hours at 37 ° C. and 5% CO 2 incubator, and the pneumonia obtained in Example 1 using interferon and lipopolysaccharides (LPS) having excellent immunopotentiation as a control group. After adding the extract, the amount of the superoxide anion, the nitrogen dioxide anion, in the secretion of the macrophage cells was quantified at 540 nm in the visible light absorption spectrum. As a result, it was found that the addition of P. aeruginosa extract in macrophage cell cultures releases nitrogen dioxide anion about 2 times higher than that of interferon and 4 times higher than that of LPS. there was.

[실시예 9]세포배양기술을 이용한 자극완화 효과 평가 Example 9 Evaluation of Stimulation Relaxation Effect Using Cell Culture Technology

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 백렴 추출물의 자극완화 효과를 평가하기 위하여 세포 배양 기술을 이용하여 피부자극을 유발하는 물질인 소듐라우릴썰페이트(Sodium Lauryl Sulfate:SLS)에 의한 세포 사멸을 저해시키는 정도로 자극완화 효과를 평가한 것이다.In this example, the cell death by Sodium Lauryl Sulfate (SLS), a substance that causes skin irritation using cell culture technology, was evaluated in order to evaluate the stimulating alleviation effect of the extract of P. aeruginosa obtained in Example 1 The degree of stimulation relaxation was evaluated to the extent of inhibition.

SLS는 화장품 기재의 피부 자극 평가의 기준이 되는 물질로 세포막에 결합되어 세포대사억제와 세포막을 파괴하여 피부 자극을 유발시키는 물질이다.SLS is a substance that is used as a criterion for evaluating skin irritation based on cosmetics and is bound to cell membranes to inhibit cell metabolism and destroy cell membranes to cause skin irritation.

본 실시예는 사람 섬유아세포에 SLS와 백렴 추출물을 동시에 첨가하였을 때 SLS에 의한 세포 사멸을 감소시키는 효과를 평가한 것이다.This example evaluates the effect of reducing cell death by SLS when SLS and P. aeruginosa extracts are added to human fibroblasts at the same time.

본 실시예에 사용된 Hs68 섬유아세포는 사람의 피부 진피세포로 ATCC(American Type Culture Collection, 기탁번호:1635)에서 분양받아 사용하였다.Hs68 fibroblasts used in this example were used as human dermal dermal cells from ATCC (American Type Culture Collection, Accession No.:1635).

세포배양기술을 이용한 자극완화 평가 실험은 다음과 같이 행하였다.Stimulation relaxation evaluation experiment using the cell culture technology was carried out as follows.

사람 유래의 섬유아세포를 96 웰 플레이트에 각 웰당 1×105농도로 분주하고, 24시간 동안 배양한 후 0.01% SLS 단독, 0.01% SLS와 백렴 추출물(0.01%)을 동시에 처리하고 24시간 동안 추가배양하였다. 배양후 MTT(Sigma사)시약을 첨가하고 4시간 동안 배양한 후, 배양액을 제거하고 1N NaOH/이소프로판올용액을 첨가하여 20분간 교반한 후 마이크로플레이트 판독기로 565㎚에서 흡광도를 측정하여 백렴 추출물이 SLS에 의한 세포사멸을 저해하는 효과를 측정하였다.Human-derived fibroblasts were dispensed in 96 well plates at a concentration of 1 × 10 5 per well, incubated for 24 hours, treated with 0.01% SLS alone, 0.01% SLS and pneumoniae extract (0.01%) simultaneously and added for 24 hours. Incubated. After incubation, MTT (Sigma) reagent was added and incubated for 4 hours, the culture medium was removed, 1N NaOH / isopropanol solution was added and stirred for 20 minutes, and the absorbance was measured at 565 nm using a microplate reader. The effect of inhibiting apoptosis by was measured.

시험결과 백렴 추출물은 SLS에 의해서 유발되는 세포 사멸을 억제시키므로써 화장료 기재와 함께 처방하였을 때 화장료 기재로 인하여 일어날 수 있는 피부 자극을 감소시키는 자극완화 물질임이 밝혀졌다(표 7).The test results showed that the extract of P. leucine is an irritant that reduces skin irritation that can occur due to cosmetic substrates by inhibiting cell death induced by SLS (Table 7).

시 료sample 섬유아세포 생존율(%)Fibroblast survival rate (%) 0.01% SLS0.01% SLS 2525 0.01% SLS + 0.01% 백렴 추출물0.01% SLS + 0.01% White Pleat Extract 8080

[실시예 10 내지 12 및 비교예 1][Examples 10 to 12 and Comparative Example 1]

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 백렴 추출물을 함유한 화장료를 제조하여 사람을 대상으로 피부 미백효과를 비교예 1과 비교실험을 행하여 평가하였다.This Example prepared the cosmetic containing the extract of baekryeom obtained in Example 1 and evaluated the skin whitening effect in a comparative experiment with Comparative Example 1 in humans.

비교실험에 사용된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 표 8에 나타낸 바와 같다. 우선 표 8에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존한다. 이것에 가)상을 가하여 예비유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 다음에 서서히 냉각하여 크림(실시예 10 내지 12, 비교예 1)을 제조한다. 실험자(20세-35세의 여성) 20명을 대상으로 얼굴 오른쪽부위에는 실시예 10 내지 12에서 제조된 크림을 얼굴 왼쪽부위에는 비교예 1에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다. 실험완료 후 얼굴 좌우 양편의 도포 부위 피부를 화상분석기 및 색차계로 얼굴색을 비교하여 가장 어두운 색을 5, 중간색을 3, 가장 환한 색을 1로 정하고 그 중간정도를 어림잡아 평가하였다. 표 9는 실시예 12에서 제조된 크림을 사용한 실험자의 안면 피부색을 비교예 1로 만든 크림을 사용한 실험자의 안면 피부색과 비교한 것이다.The cosmetics used in the comparative experiments are in the form of a cream, the composition of which is shown in Table 8. First, the phase b) recorded in Table 8 is heated and stored at 70 ° C. To this, a) phase is added, and after pre-emulsification, it is emulsified uniformly with a homomixer, and then cooled slowly to prepare a cream (Examples 10 to 12, Comparative Example 1). For 20 experimenters (20-35 year old female), the cream prepared in Examples 10 to 12 was applied to the right side of the face and the cream prepared in Comparative Example 1 was applied to the left side of the face twice a day for 2 consecutive months. It was. After completion of the experiment, the skins of the application areas on the left and right sides of the face were compared by using an image analyzer and a color difference meter, and the darkest color was set to 5, the middle color to 3, and the brightest color to 1. Table 9 compares the facial skin color of the experimenter using the cream prepared in Example 12 with the facial skin color of the experimenter using the cream made in Comparative Example 1.

표 9에 나타난 바와같이 백렴 추출물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 피부에서 미백효과가 우수함을 알 수 있다.As shown in Table 9, it can be seen that the whitening effect is excellent in the facial skin of the experimenter who applied the cream containing baekryeom extract.

원 료Raw material 실 시 예Example 비교예1Comparative Example 1 1010 1111 1212 end 스테아릴알콜Stearyl alcohol 88 88 88 88 스테아린산Stearic acid 22 22 22 22 스테아린산콜레스테롤Stearic Acid Cholesterol 22 22 22 22 스쿠알란Squalane 44 44 44 44 2-옥틸도데실알콜2-octyldodecyl alcohol 66 66 66 66 폴리옥시에틸렌(25몰 부가) 알콜에스테르Polyoxyethylene (25 mol addition) alcohol ester 33 33 33 33 글리세릴모노스테아린산아스테르Glyceryl monostearic acid ester 22 22 22 22 I 백렴 추출물Baekryeum extract 1010 1One 0.10.1 -- 프로필렌글리콜Propylene glycol 55 55 55 55 정제수Purified water 적량Quantity 적량Quantity 적량Quantity 적량Quantity

주) 단위:중량 %Note) Unit: Weight%

사용 제품Used products 실시예 12Example 12 비교예 1Comparative Example 1 실험 인원 번호Experiment number 오른쪽 피부색Right skin color 왼쪽 피부색Left skin color 1One 1.51.5 2.52.5 22 22 33 33 22 33 44 1.51.5 33 55 2.52.5 3.53.5 66 33 44 77 1.51.5 2.52.5 88 22 33 99 22 33 1010 2.52.5 3.53.5 1111 1.51.5 33 1212 2.52.5 33 1313 22 33 1414 33 44 1515 2.52.5 33 1616 22 33 1717 22 3.53.5 1818 2.52.5 33 1919 22 33 2020 22 33

[실시예 13]Example 13

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 백렴 추출물을 함유한 화장료의 자극 완화 효과를 인체 첩포 실험으로 평가한 것이다.This Example is to evaluate the stimulating alleviation effect of the cosmetics containing the baekryeom extract obtained in Example 1 by human patch experiment.

본 평가는 실시예 9에서 얻어진 결과를 인체에 직접 적용하여 얻어진 평가의 결과이다. 일반적 화장품 처방(크림, 로션, 스킨, 에센스)에 자극을 일으키는 SLS와 실시예 10 내지 12에서 제조된 제품을 혼용하여 24시간, 48시간, 72시간 동안 첨포하여 자극 유발 지수를 바탕으로 자극완화 효과를 평가한 것이다.This evaluation is a result of evaluation obtained by directly applying the result obtained in Example 9 to the human body. SLS alleviates the effects of irritation on the basis of irritation index by mixing SLS that causes irritation to general cosmetic prescriptions (cream, lotion, skin, essence) and the products prepared in Examples 10 to 12 for 24 hours, 48 hours and 72 hours Is evaluated.

20-50세의 건강한 남녀 50명의 팔 상박부위에 FINN CHAMBER (FINLAND)를 이용하여 각각의 제품을 0.2㎎씩 첩포하고, 24시간 후 급성자극 지수를 평가하였다. 평가 후 재차 동일한 부위에 동량의 제품을 첩포하고 48시간 및 72시간 후의 지연성 자극 지수를 평가하였다.FINN CHAMBER (FINLAND) was used to coat 0.2 mg of each product on the upper arm of 50 healthy men and women aged 20-50 years, and the acute stimulation index was evaluated after 24 hours. After evaluation, the same amount of product was applied to the same site again, and the delayed stimulation index after 48 and 72 hours was evaluated.

시험 결과 백렴 추출물을 함유하는 제품을 첩포하고 24시간, 48시간, 72시간 경과 후에도 아무런 피부 발적을 일으키지 않았다.The test resulted in no skin redness even after 24 hours, 48 hours, 72 hours of patching the product containing the baekryeom extract.

이 평가의 결과는 백렴 추출물이 화장료에 혼용되었을 때 자극을 유발시키는 기재(계면활성제, 향, 알콜)에 의한 피부 자극을 감소시킬 수 있는 유의한 효과가 있음을 나타낸다.The results of this evaluation indicate that there is a significant effect of reducing skin irritation by substrates (surfactants, fragrances, alcohols) that cause irritation when the extract of Pleurotus erythematosus is used in cosmetics.

이하에 그 외의 실시예를 나타내었다. 즉, 앞에서와 같이 미백효과, 자극완화효과, 면역증강효과 등 피부개선에 우수한 효과를 나타내었다.Other examples are shown below. That is, as shown above, the skin whitening effect, the stimulating alleviation effect, the immune enhancing effect and the like showed the excellent effect on skin improvement.

[실시예 14]실시예 1에서 수득한 백렴 추출물을 함유한 화장수의 제조 [Example 14] Preparation of the lotion containing the baekryeom extract obtained in Example 1

95%에탄올 8g에 폴리피로리돈 0.05g, 올레일알콜 0.1g, 폴리옥시에틸렌모노올레이트 0.2g, 향료 0.2g, 파라옥시안식향산메틸에스테르 0.1g, 소량의 산화방지제, 소량의 색소를 혼합, 용해하였다. 실시예 1에서 수득한 백렴 추출물 0.05g, 글리세린 5g을 정제수 85.33g에 용해한 것에 상기 혼합액을 첨가한 후 교반하여 피부개선효과가 있는 화장수를 얻었다.To 8 g of 95% ethanol, 0.05 g of polypyrrolidone, 0.1 g of oleyl alcohol, 0.2 g of polyoxyethylene monooleate, 0.2 g of fragrance, 0.1 g of paraoxybenzoic acid methyl ester, a small amount of antioxidant and a small amount of pigment are dissolved and mixed. It was. 0.05 g of baekryeom extract obtained in Example 1, 5 g of glycerine was dissolved in 85.33 g of purified water was added to the mixed solution and stirred to obtain a lotion having a skin improvement effect.

[실시예 15]실시예 1에서 수득한 백렴 추출물을 함유한 유액의 제조 Example 15 Preparation of Latex Containing the Pleurotus Extract Obtained in Example 1

세틸알콜 1.2g, 스쿠알란 10g, 바세린 2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.2g, 글리세린모노에스테아레이드 1g, 폴리옥시에틸렌(20몰부가)모노올레이트 1g 및 향료 0.1g을 70℃에서 가열혼합용해하고, 실시예 1에서 수득한 백렴 추출물 0.5g, 디프로필렌글리콜 5g, 폴리에틸렌글리콜1500 2g, 트리에탄올아민 0.2g, 정제수 76.2g을 75℃로 가열해서 용해시킨다. 양자를 혼합하여 유화시킨 후 냉각하여 수중유(O/W)형의 피부개선효과가 있는 유액을 얻었다.1.2 g of cetyl alcohol, 10 g of squalane, 2 g of petrolatum, 0.2 g of paraoxybenzoic acid ethyl ester, 1 g of glycerin monoesteralide, 1 g of polyoxyethylene (20 mole added) monooleate and 0.1 g of fragrance were mixed and dissolved at 70 ° C. , 0.5 g of the white chlorosis extract obtained in Example 1, 5 g of dipropylene glycol, 2 g of polyethylene glycol 1500, 0.2 g of triethanolamine, and 76.2 g of purified water were dissolved by heating to 75 ° C. Both mixtures were emulsified and cooled to obtain an emulsion having an oil-in-water (O / W) type skin improvement effect.

[실시예 16]실시예 1에서 수득한 백렴 추출물을 함유한 미용액의 제조 Example 16 Preparation of Cosmetic Liquid Containing the Pleurotus Extract Obtained in Example 1

95% 에틸알콜 5g에 폴리옥시에틸렌솔비탄모노올레이트 1.2g, 키툴로오즈 0.3g, 히야론산나트륨 0.2g, 비타민 E-아세테이트 0.2g, 감초산 나트륨 0.2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.1g, 실시예 1에서 수득한 백렴 추출물 1g 및 적량의 색소를 혼합하여 피부개선효과가 있는 미용액을 얻었다.5 g of 95% ethyl alcohol, 1.2 g of polyoxyethylene sorbitan monooleate, 0.3 g of kitulose, 0.2 g of sodium hyaluronate, 0.2 g of vitamin E-acetate, 0.2 g of sodium licorice, 0.1 g of paraoxybenzoic acid ethyl ester, 1 g of the baekryeom extract obtained in Example 1 and a suitable amount of pigment was mixed to obtain a cosmetic liquid having an effect of improving the skin.

이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 따른 백렴 추출물은 기미, 주근깨 및 피부 색소침착의 원인이 되는 물질인 멜라닌의 생성을 막아주는 멜라노싸이트 자극 호르몬(MSH)의 세포막 결합저해효과, 티로시나제 활성억제효과, 티로시나제 합성억제효과, 멜라닌 합성억제효과 등의 미백효과와 화장품 기재에 의해 야기되는 피부 자극을 감소시키는 피부세포사멸 억제효과, 염증유발관련효소 활성 억제효과 등의 피부자극 완화효과와 면역증강작용에 우수한 효과를 나타내었다. 따라서, 이러한 백렴 추출물을 함유하는 화장수, 크림, 유액, 팩 등의 화장료 조성물은 피부 미백효과, 자극완화효과 및 면역증강작용이 있음을 알 수 있다.As described above, the baekryeom extract according to the present invention, the inhibition of cell membrane binding of melanocyte stimulating hormone (MSH), tyrosinase activity inhibitory effect, which prevents the production of melanin, a substance causing blemishes, freckles and skin pigmentation, Skin whitening effect such as tyrosinase synthesis inhibitory effect, melanin synthesis inhibitory effect, skin cell death suppression effect that reduces skin irritation caused by cosmetic substrates, and skin stimulation alleviation effect such as inhibitory activity of inflammation-related enzymes The effect was shown. Therefore, it can be seen that the cosmetic composition, such as a lotion, cream, milky lotion, pack, etc. containing the baekryeom extract has a skin lightening effect, irritation-releasing effect and immune enhancing effect.

Claims (7)

백렴 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.Cosmetic composition for skin whitening containing baekryeom extract as the main active ingredient. 제1항에 있어서, 추출용매로서 정제수, 저급 알코올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 추출하는 것을 특징으로 하는 백렴 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.The extract of claim 1, wherein the extract is extracted using at least one solvent selected from purified water, lower alcohol, glycerin, ethyl acetate, butylene glycol, propylene glycol, dichloromethane, and hexane. Cosmetic composition for skin whitening. 제2항에 있어서, 추출용매로서 에탄올 40∼95% 용액을 이용하여 추출하는 것을 특징으로 하는 백렴 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.The cosmetic composition for skin whitening according to claim 2, wherein the composition is extracted using a 40-95% ethanol solution as an extraction solvent. 제2항 또는 제3항에 있어서, 추출은 냉침 또는 가열방법으로 수행하여 얻어지는 것을 특징으로 하는 백렴 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.The cosmetic composition for skin whitening according to claim 2 or 3, wherein the extraction is performed by a cooling or heating method. 제4항에 있어서, 추출 후 여과, 농축 또는 동결건조를 수행하여 얻어지는 것을 특징으로 하는 백렴 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.The cosmetic composition for skin whitening according to claim 4, which is obtained by performing filtration, concentration or lyophilization after extraction. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 백렴 추출물을 0.01∼30중량% 함유함을 특징으로 하는 백렴 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.The cosmetic composition for skin whitening according to any one of claims 1 to 3, wherein the composition contains an extract of 0.01 to 30% by weight. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형의 제형 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 백렴 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.The cosmetic composition according to any one of claims 1 to 3, wherein the cosmetic composition is selected from a lotion, gel, water-soluble liquid, oil-in-water (O / W) type and water-in-oil (W / O) type formulations. Cosmetic composition for skin whitening containing baekryeom extract.
KR1020010041140A 2001-07-10 2001-07-10 A cosmetic composition containing an extract of ampelopsis japonica KR20030005720A (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020010041140A KR20030005720A (en) 2001-07-10 2001-07-10 A cosmetic composition containing an extract of ampelopsis japonica

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020010041140A KR20030005720A (en) 2001-07-10 2001-07-10 A cosmetic composition containing an extract of ampelopsis japonica

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20030005720A true KR20030005720A (en) 2003-01-23

Family

ID=27714190

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020010041140A KR20030005720A (en) 2001-07-10 2001-07-10 A cosmetic composition containing an extract of ampelopsis japonica

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR20030005720A (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100588830B1 (en) * 2004-09-01 2006-06-14 한불화장품주식회사 A cosmetic composition for anti-aging containing an extract of melothria heterophylla
JP2019062847A (en) * 2017-10-03 2019-04-25 日本メナード化粧品株式会社 Dna methylation regulatory agent

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100588830B1 (en) * 2004-09-01 2006-06-14 한불화장품주식회사 A cosmetic composition for anti-aging containing an extract of melothria heterophylla
JP2019062847A (en) * 2017-10-03 2019-04-25 日本メナード化粧品株式会社 Dna methylation regulatory agent

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101971837B1 (en) Cosmetic composition for improving skin whitening and wrinkle comprising adventitious root extract of Centella asiatica as effective component
KR102255580B1 (en) Cosmetic composition comprising Ilex paraguayensis extract and Tranexamic acid
KR101071414B1 (en) Composition for Whitening Containing Extract of Annona muricata as an active ingredient
KR100361592B1 (en) An extract of angelica dahurica and angelica tenuissima and a cosmetic composition therefrom
KR100860605B1 (en) Cosmetic composition comprising extract of pinus strobus bark and niacinamide
KR102632084B1 (en) Cosmetic composition for anti-oxidation, skin whitening, and improving of skin wrinkle containing Sanguisorba officinalis extract
KR19980050697A (en) Green mushroom extract and skin cosmetic containing same
KR102325393B1 (en) Skin whitening cosmetic composition with bioconversion of Breea segeta extract
KR20090117364A (en) Cosmetic composition for whitening of the skin comprising the extract of brucea javanica as active ingredient
KR102471009B1 (en) Cosmetic composition containing Albiggia kalkora extract for skin whitening and improving wrinkles
KR100563547B1 (en) A cosmetic composition containing extract of Lespedeza bicolor turczaninow var and/or Solanum nigrum L
KR20030005721A (en) A cosmetic composition containing an extract of trichosanthes kirilowii
KR100542446B1 (en) A cosmetic composition containing an extract of capsosiphon fulvescens
KR19990081226A (en) Skin cosmetic using natural mushrooms
KR20030005720A (en) A cosmetic composition containing an extract of ampelopsis japonica
KR20030005719A (en) A cosmetic composition containing an extract of viscum album
KR101176525B1 (en) Cosmetic Composition Comprising Acer tegmentosum Maxim as Active Ingredient
KR100508528B1 (en) method for manufacturng the Skin Cosmetics using horse bean and Golden larch extract
KR101006341B1 (en) Cosmetic Composition for Whitening of the Skin Comprising the Extract of Changium smyrnioides Wolff as Active Ingredient
KR102459512B1 (en) Method for preparing complex extracts of neungi, chrysanthemum, and magnolia using Cyclodextrin Glucanotransferas and cosmetic composition containing the same
KR101521579B1 (en) Skin Whitening and Anti―oxidative Composition Containing Boesenbergia rotunda Extract
KR101079713B1 (en) Composition for Whitening Containing Extract of Talinum crassifolium as an active ingredient
KR101068808B1 (en) Composition for Whitening Containing Extract of Delonix regia
KR20100043717A (en) Composition for whitening containing extract of ixora coccinea
KR101078766B1 (en) Composition for Whitening Containing Extract of Ficus nota as an active ingredient

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application