KR20010042964A

KR20010042964A - 활성성분들을 포함하는 피부 탈색용 수성 조성물

Info

Publication number: KR20010042964A
Application number: KR1020007011792A
Authority: KR
Inventors: 케네쓰엔. 존스; 어베이싱헤 파드마프리야; 가브리엘레 블룸; 에른스트 에. 테이크뮐러
Original assignee: 로비 게엠베하; 스티브 에이. 온돌프; 유니베라 파아마슈티컬스,인크.
Priority date: 1998-04-24
Filing date: 1999-04-15
Publication date: 2001-05-25
Also published as: US6123959A; EP1073418A4; WO1999055308A1; DE69937679D1; EP1073418A1; JP2002512948A; EP1073418B1; ES2299243T3; DE69937679T2

Abstract

본 발명은 인지질들 및 멜라닌의 합성을 위한 효소의 적어도 하나의 비경쟁적 저해제와 함께 멜라닌의 합성을 위한 효소의 적어도 하나의 경쟁적 저해제를 포함하는 리포좀(liposome)들을 포함하여 이루어지는 수성 조성물을 기술하고 있다. 본 발명은 또한 피부의 탈색용으로의 본 발명의 조성물의 이용 방법을 포함한다.

Description

활성성분들을 포함하는 피부 탈색용 수성 조성물 {Aqueous composition comprising active ingredients for the de-pigmentation of the skin}

피부의 과도한 착색(pigmentation)을 억제하거나 또는 저해할 수 있는 제품에 대한 수요가 범 세계적으로 있어왔다. 유럽에서는 이들 제품들이 노화 및 간반(liver spot) 또는 주근깨(freckles) 등을 치료하는데 사용되는 경향이 있는 반면에, 아시아에서는 미백의 흠집없는 피부를 위한 미적인 목적을 달성하고자 하는데 사용되는 경향이 있다.

피부의 자연색소인 멜라닌(melanin)은 피부타입(유전적 성향) 및 환경 영향들에 따라 멜라노사이트(melanocytes) 내에서 여러 농도로 합성된다. 멜라노사이트들은 표피(epidermis)의 기저막(basal membrane)에서 발생하며, 세포량(cellular content)(대략 1,200 내지 1,500멜라노사이트/㎠)의 5 내지 10% 정도의 수를 차지한다. 자외선은 상기 기저막내의 세포들을 자극하여 보다 빨리 분화하도록 하는 원인이 된다. 멜라노사이트들은 또한 자외선에 의해 자극되어 보다 많은 양의 멜라닌을 생산한다. 계속해서, 상기 멜라닌은 케라티노사이트(keratinocytes) 내로 전이되고, 여기에서 갈색의 피부색으로 가시화된다.

인간 피부내의 멜라노사이트들의 수는 피부색에 관계없이 같은 수에서 더 많거나 또는 더 적다. 피부색은 생산된 멜라닌(흑색 유멜라닌 또는 황색 내지 적갈색의 페오멜라닌)의 양 및 형태에 크게 의존한다. 아시아인들 및 엷은 피부색의 사람들은 짙은 피부색의 사람들에 비해 낮은 수준의 유멜라닌(eumelanin)을 가지며, 또한 그에 따라 방사효과(effects of radiation)에 대해 보호를 덜 받는다. 붉은 머리카락을 갖는 사람들은 페오멜라닌(pheomelanin)으로의 착색으로 특징지어지며, 광-보호(photo-protection)에 대해 거의 또는 전혀 보호를 받지 못한다. 게다가, 피부에서의 멜라닌의 분포 역시 다양하다. 엷은 피부색을 갖는 사람들에서는 색소(pigment)의 대부분이 기저층 내에 분포하는 반면에, 짙은 피부색을 갖는 사람들에서는 멜라닌은 각질층(horny layer)에 다다르기까지 전체에 걸쳐 확산된다.

기질(substrate)을 생산물(product)로 전환시키는 촉매로서 효소가 작용한다. 저분자량을 갖는 물질(substance)에 의한 하나의 효소의 경쟁적 저해 동안은 상기 물질은 상기 효소의 실제 기질을 그 촉매적 도메인(catalytic domain) 밖으로 축출하고, 그에 따라 상기 기질은 더 이상 효소의 도움으로 전환되지 못하게 된다. 비경쟁적 저해 동안은 비록 상기 기질의 전환에 필요한 지점과는 다른 지점일지라도 상기 저해제는 직접 효소와 상호작용한다. 경쟁적 및 비경쟁적 저해가 서로 다른 메카니즘으로 작용한다는 점 때문에 경쟁적 및 비경쟁적 저해제의 조합은 특히 유리하며, 이는 상기 저해제들은 다른 하나에 대해 독립적으로 작용하며, 각각은 하나 및 동일한 효소에 대해 그 자체의 효과를 갖는다는 것을 의미한다. 비록 본 경우에 필수적인 것은 아니나, 하나의 저해제의 효과는 다른 하나의 저해제를 보충한다. 당해 기술분야에서 숙련된 자는 통상의 생화학적 측정 방법(biochemical measuring methods)과 같은 수단에 의하여, 예를 들면 라인위버 버크 다이아그램(Lineweaver Burk diagram)의 사용에 의하여 경쟁적 및 비경쟁적 저해제 사이를 쉽게 구분할 수 있다.

티로지나제(Tyrosinase)는 멜라닌의 합성에서 주요 효소(key enzyme)이다. 이는 자외선에 노출되었을 때 활성화되며, 하기 표시한 계통도 1에 나타낸 색소 형성의 여러 중간단계들에서 유도적으로 참여한다.

계통도 1

티로지나제는 그 촉매적 활성을 위하여 기질과 2가의 금속이온들 모두를 필요로 한다는 것이 밝혀졌다. 현재 피부 미백의 관점에서 멜라닌의 합성을 저해하는 데 사용되는 방법들은 상기 티로지나제와 직접 상호작용하거나 또는 예를 들면 필요한 금속이온들의 착체화(complexing)에 의한 것과 같이 간접적으로 그 활성을 조절하는 물질들에 기초하고 있다.

지금까지, 탈색용으로 가장 잘 알려진 물질은 히드로퀴논(hydroquinone)이다. 그러나, 오랜 시간에 걸쳐 적용하는 경우, 히드로퀴논은 심각한 부작용을 가지며, 이는 일부 국가들에서는 제한된 농도로만으로 허용되고, 다른 일부 국가들에서는 그 적용 자체가 완전히 금지되기에 이르렀다. 더욱이, 히드로퀴논은 영구적인 탈색화가 되며, 그에 따라 자외선에 노출되었을 때 피부의 광민감성(photosensitivity)를 증가시킨다.

현재 사용되고 있는 피부에 보다 더 허용되는 피부 미백 물질들은 천연 물질, 예를 들면 아르부틴(arbutin ; 통상의 월귤나무(bearberry), 우바에 우르시(Uvae ursi)의 잎으로부터 수득됨), 리커리스 추출물(liquorice extract ; 리커리스 뿌리로부터 수득됨), 아스코르빈산(ascrobic acid ; 감귤류의 과실로부터 수득된 비타민 씨) 및 그들의 유도체들 뿐만 아니라 코지산(kojic acid ; 특정의 박테리아들의 영향 하의 탄수화물 용액들로부터 수득됨) 들이 있다. 물에 매우 잘 용해되는 이들 물질들은 경쟁적 저해제로서 티로지나제에 작용하나, 이들은 특정의 조성들에서는 매우 불안정하며, 단지 극소량 만이 피부층 깊숙히 침투하여 기저막내의 멜라노사이트에 도달한다는 단점이 있다. 이들 물질들은 극히 낮은 효율을 가지며, 이는 고농도로 사용되어야 한다는 단점이 있다. 사용된 히드로퀴논의 양과 비교하면, 아스코르빈산은 17배, 아르부틴은 100배가 더 사용되어야 유사한 효과를 얻을 수 있다.

곰베르트(Gombert)는 두가지 모두 식물들로부터 생산되는 피부 미백용의 두가지 화장품을 기술하고 있다(Gombert(1997) Cosmetics and Toiletries Manufacture Worldwide, pp.151-157). 이들 두 화장품들은 크림(cream)으로 에멀젼화된 수성 용액내에 다수의 경쟁적 티로지나제 저해제들의 혼합물을 포함한다. 시험관내 효소 시험이 수행되었으며, 여기에서는 사용된 물질이 유효한 저해 효과를 갖는다는 것을 확인하는 것이 가능하나, 반면에 생체내 시험에서는 10% 활성 성분 함량을 갖는 크림을 적어도 42일간 적용시켜야 입증될 수 있는 피부의 탈색화가 일어났다. 3% 활성 성분 함량을 갖는 크림을 사용하여 10인에 대하여 한 시험에서는, 어떠한 정(正)효과의 증거는 단지 2인에게서만 발견될 수 있었다. 상기 조성 내의 천연 물질들이 극히 불안정하기 때문에 강한 항산화제들이 상기 조성에 반드시 포함되어야 한다. 또한, 마감된 조성들이 15℃ 이하의 온도에서 저장된다면, 상기 물질들은 결정화될 수 있다.

리와 김(Lee and Kim)은 뽕나무 덤불(mulberry bush), 브로우소네티아 파피리페라(Broussonetia papyrifera)의 뿌리의 껍질로부터 단리된 물질을 기술하고 있으며, 이는 자유라디칼 스캐빈저(free radical scavenger)로 작용한다(cosmetics and Toiletries 110:51-56, October 1995). 멜라노제네시스(melanogenesis)라고 일컬어지는 멜라닌의 형성이 피부 내의 자유라디칼의 존재에 의하여 증가됨에 따라, 이러한 형태의 자유라디칼 스캐빈저의 도움으로 감소될 수 있다. 이 논문의 주제는 피부의 탈색화라기 보다는 자유라디칼 스캐빈저의 도움에 의한 멜라노제네시스의 억제이다. 더욱이, 상기한 효과가 일어나기 위하여는 40일 이상이 소요된다. 역시 여기에서 상기 조성 내의 활성 물질들의 불안정성이 문제가 된다.

알로에(Aloe)는 많은 생물학적 활성물질들을 포함하는 까다로운 식물이다((Cohen et al. in Wound Healing/Biochemical and Clinical Aspects, 1st ed. WB Saunders, Philadelphia(1992)). 300종 이상의 알로에들이 알려져 있으며, 이들의 대부분은 아프리카에 고유한 것이다. 생물학적 활성물질들이 알로에 잎의 3개의 구분된 영역들 즉, 잎의 중심부, 잎의 껍질 중 또는 잎의 코르텍스(cortex) 중에 위치하는 투명한 겔 필레트(gel fillet) 및 잎의 껍질과 그 내부의 겔 필레 사이에 위치하며, 라텍스(latex)라 칭하여지는 유관속(vascular bundles)의 pericyclic cells 중에 포함된 황색 액체 중에서 발견된다는 것이 실험에 의해 밝혀졌다. 역사적으로, 알로에 제품들은 화상, 염증 및 다른 상처들의 치료를 위한 피부용으로 사용되어 왔다. 이들 용도들은 알로에 식물로부터 치료적 활성, 특히 항-염증 활성을 갖는 화합물들을 확인하기 위한 아주 많은 연구들을 촉진시켰다(Grindlay and Reynolds(1986) J. of Ethnopharmacology 16:117-151; Hart et al.(1988) J. of Ethnopharmacology 23: 61-71을 참조). 이들 연구들의 결과로서, 항-종양 활성, 항-위궤양, 항-당뇨, 항-티로지나제 활성(Yagi et al.(1977) Z. Naturforsch 32c:731-734를 참조) 및 항-산화 활성(International Application Serial No. PCT/US95/07404를 참조)을 포함한 다양한 생물학적 활성을 갖는 알로에 화합물들에 대한 수많은 보고들이 있었다.

야기(Yagi)와 그의 동료들은 알로에로부터 단리된 일단의 화합물들, 특히 알로에신(aloesin)과 그의 유도체들 2"-O-페룰로일알로에신을 설명하고 있으며, 이들은 티로지나제의 유효한 저해제들이다(Yagi et al.(1987) Plant Medica 515-517). 라인위버 버크 다이아그램과 같은 수단에 의한 상기 효소 저해의 생화학적 시험은 이들 물질들이 티로지나제의 비경쟁적 저해제들 임을 보여주고 있다. 이 저해제들이 생체내 시험에 적용되었다는 설명은 없었다.

본 발명의 목적은 외용적으로 적용되었을 때 빠르고, 안전하고, 효과적이고 그리고 가역적인 피부 탈색의 결과를 가져오는 피부-적합성 조성물을 제공하는 것이다.

발명의 요약

본 발명은 인지질(phospholipid)들 및 멜라닌의 합성을 위한 효소의 적어도 하나의 비경쟁적 저해제와 함께 멜라닌의 합성을 위한 효소의 적어도 하나의 경쟁적 저해제를 포함하는 리포좀(liposome)들을 포함하여 이루어진다. 상기 저해제들의 상기 리포좀 내로의 캡슐화는 수성 용액들 중에서 가수분해되는 경향이 있는 상기 저해제들의 생체응용성(bioavaiability) 및 상기 화합물들을 안정화시킨다.

바람직한 실시예에서 본 발명의 상기 조성물들은 상기 효소 티로지나제를 저해하도록 선택된다. 티로지나제가 멜라닌의 대사에서 주요 효소들 중의 하나이기 때문에 티로지나제의 저해는 특히 유리하다. 따라서, 멜라닌 합성의 초기 단계에서 저해가 될 뿐만 아니라 멜라닌 대사의 중간단계들 또한 조절된다.

본 발명의 가장 바람직한 실시예들에서, 상기 경쟁적 저해제는 아르부틴이고, 상기 비경쟁적 저해제는 알로에신 또는 그들의 유도체이다. 아르부틴이 알로에신 또는 그들의 유도체와 함께 사용되는 경우 이들 두 물질들의 저해 효과가 부가적이라는 것이 밝혀졌다.

본 발명의 바람직한 실시예에서, 우수한 피부 적합성의 바람직하고도 우수한 결과를 가져오기 때문에 상기 조성물 중에 조성된 상기 저해제들은 식물 유래가 된다.

본 발명은 또한 본 발명의 조성물의 피부의 탈색을 위한 용도를 포함한다.

앞서의 개괄적인 설명들 및 후속하는 상세한 설명들 모두는 단지 예시적이고 설명적인 것이고, 본 발명을 한정하는 것은 아니다.

본 발명은 멜라닌의 합성에 관련된 효소인 티로지나제(tyrosinase)를 저해하는 활성성분들을 포함하는 수성 리포좀 조성물 및 피부 탈색화(백화 ; de-pigmentation(whitening))를 위한 상기 조성물의 사용에 관한 것이다.

본 발명은 인지질들 및 멜라닌의 합성을 위한 효소의 적어도 하나의 비경쟁적 저해제와 함께 멜라닌의 합성을 위한 효소의 적어도 하나의 경쟁적 저해제를 포함하는 리포좀들을 포함하여 이루어지는 수성 조성물을 기술한다. 바람직한 실시예에서, 본 발명의 상기 조성물은 멜라닌의 대사 중에서 주요 효소들의 하나인 효소 티로지나제를 저해하는 것으로 선택된다. 본 발명은 또한 본 발명의 조성물의 피부의 탈색을 위한 용도를 포함한다.

본 발명의 조성물은 또한 상기 조성에 포함되는 다른 활성 물질들과 독립적으로 작용하는 탈색을 위한 하나 또는 그 이상의 부가의 활성 물질들을 포함할 수 있다.

본 발명을 기술하는 데 사용된 특정의 용어들을 정의하면 다음과 같다.

여기에서 사용된 '경쟁적 저해제'는 효소의 활성자리들과의 가역적인 상호작용에 의하여 멜라닌의 합성에 포함된 효소의 작용을 억제하는 물질을 지칭한다. 따라서, 경쟁적 저해제는 기질에 부착된 효소 분자들의 비율을 감소시키는 것에 의하여 촉매작용의 속도를 감소시킨다.본 발명의 바람직한 실시에에서 상기 효소는 티로지나제이다. 본 발명의 조성물 및 방법에서 사용될 수 있는 티로지나제에 대한 상기 경쟁적 저해제들에는 당해 기술분야에서 숙련된 자들에게는 잘 알려진 어떠한 저해제들도 포함된다. 특히, 본 발명의 조성물 및 방법에서 사용될 수 있는 상기 경쟁적 저해제들에는 아르부틴, 비타민 씨 및 그들의 유도체들, 코지산, 글루타치온, 리커리스 추출물 및 뽕나무 추출물들을 포함하나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

바람직한 실시예에서, 상기 경쟁적 저해제는 아르부틴이며, 이는 이하에서 기술하는 바와 같이 알로에신 또는 이들의 유도체들과 함께 사용되는 경우 부가의 저해 효과를 나타낸다는 것이 밝혀졌다.

'비경쟁적 저해제'는 상기 효소의 활성 자리 이외의 자리에 결합되는 물질을 의미한다. 따라서, 효소 및 비경쟁적 저해제는 상기 기질에 동시적으로 결합될 수 있다. 본 발명의 비경쟁적 저해제들에는 하기의 화학식 1의 구조를 갖는 알로에신과, 하기 화학식 2, 화학식 3, 화학식 4 및 화학식 5의 구조를 갖는 화합물들 중에서 선택된 그들의 유도체들을 포함한다:

여기에서, R¹, R², R³, R⁴및 R⁵들은 각각 수소, 알킬, 알콕시, 아실, 아실옥시, 아실아미노 및 당유도체들을 포함하나 이에 제한되지 않는 폴리알코올 또는 그들의 유도체들로 이루어진 그룹 중에서 독립적으로 선택되는 것이고, 여기에서 상기 알킬, 알콕시, 아실, 아실옥시, 아실아미노 및 폴리알코올들과 그들의 유도체들은 포화되거나 불포화된 것이며, 1 내지 20의 탄소수를 갖는 것임;

여기에서, R¹, R², R³, R⁴, R⁵및 R⁶들은 각각 수소, 알킬, 알콕시, 아실, 아실옥시, 아실아미노 및 당유도체들을 포함하나 이에 제한되지 않는 폴리알코올 또는 그들의 유도체들로 이루어진 그룹 중에서 독립적으로 선택되는 것이고, 여기에서 상기 알킬, 알콕시, 아실, 아실옥시, 아실아미노 및 폴리알코올들과 그들의 유도체들은 포화되거나 불포화된 것이며, 1 내지 20의 탄소수를 갖는 것임;

여기에서, R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶및 R⁷들은 각각 수소, 알킬, 알콕시, 아실, 아실옥시, 아실아미노 및 당유도체들을 포함하나 이에 제한되지 않는 폴리알코올 또는 그들의 유도체들로 이루어진 그룹 중에서 독립적으로 선택되는 것이고, 여기에서 상기 알킬, 알콕시, 아실, 아실옥시, 아실아미노 및 폴리알코올들과 그들의 유도체들은 포화되거나 불포화된 것이며, 1 내지 20의 탄소수를 갖는 것임;

여기에서, R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶및 R⁷들은 각각 수소, 알킬, 알콕시, 아실, 아실옥시, 아실아미노 및 당유도체들을 포함하나 이에 제한되지 않는 폴리알코올 또는 그들의 유도체들로 이루어진 그룹 중에서 독립적으로 선택되는 것이고, 여기에서 상기 알킬, 알콕시, 아실, 아실옥시, 아실아미노 및 폴리알코올들과 그들의 유도체들은 포화되거나 불포화된 것이며, 1 내지 20의 탄소수를 갖는 것이다.

상기 R치환체들은 상기 조성에서 상기 화합물을 안정화시키고, 저해제의 효율을 증가시키며, 또한 피부 내로의 상기 화합물의 침투력을 증가시키는 기능을 한다.

본 발명의 바람직한 실시예에서, 상기 알로에신 유도체는 하기 화학식 6의 구조를 갖는 화합물들로 이루어진 그룹 중에서 선택된 것이다:

여기에서, R¹, R²및 R³들은 각각 수소, 히드록시, 탄소수 1 내지 20의 알킬, 탄소수 1 내지 20의 알콕시, 탄소수 1 내지 20의 아실, 탄소수 1 내지 20의 아실옥시, 탄소수 1 내지 20의 아실아미노, 폴리알콜이며, 여기에서, 상기 알킬, 알콕시, 아실, 아실옥시 및 아실아미노 각각은 포화되거나 불포화되고, 또 치환될 수 있으며, 또한, R⁴는 카르복실의 탄소를 경유하여 연결 산소에 부착되어 그에 의하여 에스테르를 형성하는 방향족 치환 카르복실산들로 이루어진 그룹 중에서 선택된 것이며, 여기에서, 상기 카르복실산들은 페룰산을 포함(이에 제한되지 않음)하여, 페닐아세트산, DOPA, 티로신 및 신남산들과 그들의 유도체들로 이루어지나 이에 제한되지는 않는 그룹으로부터 선택된 것이다. 비록 진정한 의미에서의 카르복실산은 아니지만(코지산은 카르복실기를 포함하지 않음), R⁴는 또한 코지산의 잔류물들이 될 수 있다.

바람직한 실시예에서, 상기 아실기들은 히드록시 치환체이며, 상기 아실옥시기들은 지방산과 디카르복실산들로부터 유래된 것들이다.

특히 바람직한 실시예에서, 상기 비경쟁적 저해제는 하기 화학식 7의 구조를 갖는 옥틸알로에신 또는 2"-O-페룰로일알로에신(상기 화학식 6에서 R¹은 OH, R²및 R³는 CH₃, R⁴는 페룰산인 화합물)이다:

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알로에신과 비교하여, 옥틸알로에신은 티로지나제에 대해 명백하게 높은 저해 효과를 가지며, 그에 따라 상당히 낮은 농도로 사용될 수 있다.

당해 기술분야에서 숙련된 자들에게 알려진 티로신의 다른 비경쟁적 저해제들이 또한 본 발명에 따른 조성물에서 사용될 수 있다.

'리포좀'들은 지방산 쇄들로 이루어진 두개의 소수성 꼬리들을 포함하는 인지질 분자들로 주로 구성된 구체 구조체(소포)이다. 물에 노출되면, 이들 분자들은 즉각적으로 각 층 내에서 이들 분자들의 친유성 말단들이 막의 중심으로 연합하고, 그 대향되는 극성 말단들이 이중층 막들의 내측 및 외측 표면들을 형성하도록 구형의, 이중층의 막들로 배열된다. 따라서, 상기 막의 각 측면에는 친수성 표면이 나타나는 반면에 상기 막의 내부는 친유성 매질를 구성한다. 이들 막들은 양파의 층들과 유사한 방법으로, 내부의 수성 공간들 주위에 얇은 수층으로 구분된 일련의 공심적인, 구형의 막들로 배열될 수 있다.

본 발명의 조성물 및 방법에서 사용될 수 있는 상기 인지질들에는 이에 제한되지는 않으나 포스포글리세리드(phosphoglycerides)를 포함하여 당해 기술분야에서 숙련된 자에게 리포좀을 만드는데 유용한 것으로 알려진 어떠한 인지질들도 포함된다. 포스포글리세리드들은 글리세리드 골격, 하나 또는 두개의 지방산 쇄 및 포스페이트 또는 포스포릴화 알코올(phosphorylated alcohol)들로 이루어진다. 주요 포스포글리세리들은 포스파티데이트(phosphatidate)의 유도체들이다. 본 발명의 조성물에서 사용될 수 있는 포스파티딜기들의 예들에는 포스파티딜 콜린(phosphatidyl choline), 라이소-포스파티딜 콜린(lyso-phosphatidyl choline), 포스파티딘산((phosphatidic acid), 포스파티딜 에탄올 아민(phosphatidyl ethanolamine) 및 이들의 여러 조합들을 포함되나 이들에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 조성물에서 사용될 수 있는 지방산 잔류물들의 예들에는 리놀레인산(linoleic acid), 올레인산(oleic acid), 팔미트산(palmitic acid) 및 스테아린산(stearic acid)들이 포함되나 이들에 제한되는 것은 아니다. 수소화된 인지질들 또한 본 발명의 조성물들에서 사용될 수 있다. 바람직한 실시예들에서, 대두 인지질(soya phospholipids)의 리포좀들이 사용되었다.

리포좀들은 유리 상태에서 독성인 약물들을 전달하고, 또한 연장된 시간 동안에 걸쳐 약물들을 방출하여 복용의 빈도를 감소시키기 위하여 사용되었다. 게다가, 리포좀들은 또한 소수성 또는 양친성 약물들의 수성 현탁액으로 형성하는데 사용될 수 있다. 소포들이 양친성이기 때문에, 캡슐화된 물질들은 가장 바람직한 주변을 선택할 수 있게 된다. 본 발명에서는, 상기 경쟁적 저해제 및 비경쟁적 저해제들 모두가 리포좀들에 캡슐화된다. 상기 리포좀들은 상기 저해제들의 피부의 기저층 내의 멜라노사이트들에의 생체응용성을 증가시키고, 또한 수성 용액 중에서 가수분해되는 경향이 있는 상기 저해제들을 안정화시키는 기능을 한다. 특히 상기 식물성 피부-미백 활성 물질들의 안정성은 상기 지질 소포 내로의 캡슐화를 통하여 4배 이상 향상시킨다. 부가적으로, 예를 들면 리놀레인산과 같은 상기 리포좀들 내의 일부 지방산들은 또한 멜라민의 합성을 저해하고, 그에 따라 탈색화를 증가시킨다(Maeda and Fukuda(1991) J. Soc. Cosmet. Chem. 42:361-368). 본 발명에서의 상기 리포좀의 소포 크기는 직경 80 내지 400㎚ 사이이다.

본 발명의 바람직한 실시예에서, 상기 저해제들은 상기 조성물의 전체 중량에 대하여 0.05 내지 7.5중량%의 경쟁적 저해제 및 0.05 내지 1.5중량%의 비경쟁적 저해제의 농도로 사용된다. 가장 바람직한 실시예에서, 상기 저해제들은 상기 조성물의 전체 중량에 대하여 3.5 내지 5.5중량%의 경쟁적 저해제 및 0.75 내지 1.25중량%의 비경쟁적 저해제의 농도로 사용된다. 아르부틴과 알로에신 또는 그의 유도체들 중의 하나의 조합이 사용되는 경우, 바람직한 농도는 3.5 내지 5.5중량%의 아르부틴과 0.75 내지 1.25중량%의 알로에신 또는 알로에신 유도체가 된다. 상기 조성물의 전체 중량에 대하여 대략 4중량%의 아르부틴과 대략 1중량%의 알로에신 또는 알로에신 유도체를 포함하는 수성 용액이 가장 바람직하다.

상기 수성 조성물의 인지질 함량은 상기 조성물의 전체 중량에 대하여 5 내지 20중량%이다. 바람직한 실시예에서, 상기 조성물의 상기 인지질 함량은 8 내지 12중량%이다. 바람직한 실시예에서, 적어도 73중량%의 포스파티딜 콜린을 갖는 대두 인지질로부터 얻어진 리포좀들이 사용되었다. 73 내지 79중량%의 포스파티딜 콜린이 특히 바람직하다. 인지질 분율로는 (가) 73 내지 79중량%의 포스파티딜 콜린, 0 내지 6중량%의 라이소-포스파티딜 콜린, 대략 8중량%의 포스파티딘산, 대략 4중량%의 포스파티딜 에탄올 아민 및 대략 9중량%의 다른 지질들; (나) 90 내지 96중량%의 포스파티딜 콜린 및 0 내지 6중량%의 라이소-포스파티딜 콜린; 또는 (다) 최소 95중량%의 포스파티딜 콜린 및 최소 2중량%의 라이소-포스파티딜 콜린;들을 포함하는 것을 예로 들 수 있으나, 이들에 제한되는 것은 아니다.

상기 대두 인지질의 지방산 잔류물들은 리놀레인산이 대부분을 이루는 불포화 지방산으로부터 주로 파생된다. 61 내지 71중량%의 리놀레인산, 3 내지 7중량%의 리놀레닌산(linolenic acid), 6 내지 13중량%의 올레인산, 10 내지 15중량%의 팔미트산 및 1.5 내지 4중량%의 스테아린산들이 지방산의 전형적인 조성이다.

적어도 73중량%, 바람직하게는 75 내지 95중량%의 포스파티딜 콜린 함량을 갖는 수소화된 인지질들 또한 사용될 수 있다.

앞서 언급한 상기 조성물에 더해, 본 발명에 따른 상기 조성물은 조성물 전체 중량에 대하여 최대 20중량%의 농도로 하나 또는 그 이상의 알코올을 포함할 수 있다. 사용될 수 있는 알코올에는 에탄올 및 이소프로판올이 포함되나 이들에 제한되는 것은 아니다. 바람직한 실시예에서, 사용된 알코올은 에탄올이다.

알코올에 더해, 본 발명의 상기 수성 조성물은 또한 보존제(preservative)를 포함할 수 있다. 적절한 보존제들에는 포름알데히드(formaldehyde), 파라벤(parabene) 및 육자일 케이400°(Euxyl K400°)들이 포함되나, 이들에 제한되는 것은 아니다. 상기 보존제와 알코올이 함께 존재한다면, 상기 알코올 함량은 일반적으로 1 내지 4중량%가 된다.

본 발명에 따른 상기 조성물의 pH는 일반적으로 5 내지 7.5가 된다. 피부용의 생리학적으로 이상적인 pH값은 개개의 특정 적용에 의하여 결정된다. 상기 pH를 조절하기 위하여는, 상기 조성물은 또한 인산 완충액(phosphate buffer ; KH₂PO₄/Na₂HPO₄)와 같은 완충 시스템을 포함할 수 있다.

상기 조성물은 또한 화장품의 조성에서 통상적으로 사용되는 보조 물질들을 더 포함할 수 있다. 이들 물질들은 당해 기술분야에서 숙련된 자에게는 알려진 것들이다.

가장 바람직한 실시예에서, 본 발명의 상기 조성물은 조성물의 전체 중량에 대하여 각각 경쟁적 저해제로서 대략 4중량%의 아르부틴과 비경쟁적 저해제로서 대략 1중량%의 알로에신 또는 그의 유도체들 중의 하나, 대략 16중량%의 알코올 및 대략 10중량%의 인지질들을 포함한다.

본 발명에 따른 상기 조성물은 당해 기술분야에서 공지된 리포좀의 어떠한 제조방법에 의하여도 생산될 수 있다(예를 들면, Liposomes - A Practical Approach, published by R.C. New(Oxford University Press, 1990)을 참조). 본 발명의 하나의 실시예에 따라 알코올을 포함하는 수성 조성물은 다음과 같이 제조될 수 있다. 우선 수용성 저해제를 증류수에 용해시키고, 상기 인지질들 및 수불용성인 다른 저해제들을 일부의 알코올에 용해시킨다. 그 결과의 지질 용액을 상기 수성 용액에 천천히 가하면서 상기 혼합물을 저어준다. 상기 활성 물질들을 캡슐화한 리포좀들이 동시적으로 생성되며, 이들 리포좀들은 고속 교반, 고압 여과, 초음파 처리, 압출 또는 균질화 등과 같은 에너지의 적용에 의하여 파괴된다. 계속해서, 잔여 알코올 및 필요한 경우 완충 시스템을 포함하는 여분의 물을 가하고, 소정의 리포좀의 입경 및 분포(바람직하게는 다중분산도가 1.0 미만임)가 얻어질 때까지 그 혼합물을 다시 교반한다.

적용예에 따라, 본 발명에 따른 상기 조성물은 사용 전에 물로 더 희석될 수 있다.

본 발명의 상기 조성물은 미백화시킬 피부의 표면(국부 적용)에 균일하게 조성물을 적용시키는 것에 의하여 피부를 탈색시키는데 사용된다. 이러한 방법으로, 상기 조성물은 넓은 피부 영역 뿐만 아니라 주근깨, 노화 및 간반 등과 같은 강한 착색 영역에 특별히 적용시켜 미백화시키는 데 사용될 수 있다. 바람직한 실시예에서, 상기 조성물은 크림 또는 로션의 형태로 사용된다.

본 발명의 상기 조성물을 사용하여, 당해 기술분야에서 공지된 다른 조성물로 달성될 수 있는 것 보다 훨씬 빠른 피부의 탈색이 이루어질 수 있다. 이는 경쟁적 저해제와 비경쟁적 저해제의 부가적 효과와 리포좀 내로의 캡슐화의 결과로서 증가된 생체응용성 및 상기 활성 물질들의 안정성의 결과이다. 게다가, 상기 탈색은 가역적이며, 피부에 어떠한 자국(반점)도 형성하지 않는다.

상기 저해제들의 부가 효과 및 상기 활성 물질들의 증가된 생체응용성들은 또한 피부 탈색에 요구되는 저해제의 용량을 어떠한 용량-관련 부작용도 가져오지 않도록 하는 수준까지 감소시킬 수 있다. 단독으로 사용되는 경우, 친수성 활성 물질들이 피부 층을 투과하기 어려우며, 이것이 바로 당해 기술분야에서 전에 기술된 조성물들에 상대적으로 높은 용량이 포함되었던 이유이었다.

실시예 1은 아르부틴과 알로에신을 포함하는 수성 리포좀 현탁액의 제조를 기술하고 있다.

실시예 2는 실시예 1의 조성물을 사용하는 생체내 연구를 기술하고 있다. 이 생체내 연구는 캡슐화되지 않은 수성 용액 중의 동일한 활성 물질을 적용시킨 경우에 비해, 리포좀으로 캡슐화된 활성 물질들을 적용시킨 후, 자외선에 노출된 후에 명백하게 높은 수준의 피부 탈색이 달성될 수 있음을 나타내고 있다.

실시예 3은 저해제들 아르부틴과 알로에신을 개별적으로 그리고 조합하여 사용하는 시험관 내 티로신 저해 분석을 기술하고 있다. 이 실시예에서 티로지나제의 기질인 엘-도파(L-Dopa)의 도파크롬(dopachrome)으로의 전환을 475㎚의 빛의 흡수율의 측정에 의하여 관찰하였다. 이 실시예는 알로에신과 아르부틴의 조합이 부가 효과를 가지며, 그에 따라 결합시키는 경우 각 저해제를 개별적으로 사용하는 것에 비해 보다 큰 티로지나제 저해를 가져온다는 것을 설명하고 있다. 경쟁적 저해제 및 비경쟁적 저해제의 두가지 작용 원리의 조합이 서로 부가될 필요가 없었기 때문에, 이는 전혀 예기치 못한 결과이다.

하기의 실시예들은 상기 조성물의 높은 효율을 입증하여 본 발명을 설명하기 위한 것이다. 이들 실시예들은 단지 설명을 목적으로 제공되며, 본 발명을 한정하는 것은 아니다.

실시예 1. 아르부틴과 알로에신을 포함하는 수성 리포좀 현탁액의 제조

아르부틴과 알로에신을 포함하는 수성 리포좀 현탁액의 제조에서 각 단계에서 사용되는 물질들 및 사용량들을 표 1에 요약하였다. 간단하게 말해, 상기 알로에신 및 아르부틴들을 물에 용해시켰다(단계 A). 인지질들을 알코올 33g에 용해시켰다(단계 B). 9℃에서 교반(2,700rpm)하면서, 17분 간에 걸쳐 상기 단계 B로부터 수득된 알코올성 지질 용액을 상기 단계 A로부터 수득된 수성 용액으로 적가하였다. 동일한 조건에서 20분간 더 교반을 계속하였다. 계속해서 알코을 더 가하고(단계 C), 상기 혼합물을 10분간 더 교반시켰다. 계속해서, 단계 D에 앞서 준비된 완충액(KH₂PO₄)을 상기 현탁액에 가하고, 10분간 더 교반하였다. 이러한 방법으로 수득된 리포좀 현탁액의 pH는 6.83이고, 리포좀들의 평균 직경은 158.6이며, 다중분산도(polydispersity)는 0.226이었다.

표 1. 아르부틴과 알로에신을 포함하는 리포좀 현탁액의 제조의 요약
단 계	사용량	물질
A	648.20g	증류수
	10.00g	알로에신
	40.00g	아르부틴
B	100.00g	인지질^*
B	33.30g	에탄올(순수)
C	132.00g	에탄올(순수)
D	30.00g	증류수
	5.00g	KH₂PO₄
	1.50g	수산화나트륨 수용액(30%)
	1000.00g
* 인지질 분율(독일 나터만(Nattermann)으로부터 구입할 수 있음)포스파티딜 콜린 (73 내지 76중량%)라이소-포스파티딜 콜린 (0 내지 6중량%)포스파티딘산 (8중량% 미만)포스파티딜 에탄올 아민 (4중량% 미만)다른 지질들 (대략 9중량%)(백분율은 건조 물질을 기준으로 함)

실시예 2. 실시예 1의 조성물에 의한 피부 탈색의 생체 내 시험

실시예 1로부터 수득된 조성물을 비희석(100%) 및 1 : 1의 비율로 물로 희석(50%)의 서로 다른 두가지 농도에서 시험하였다.

대조로서 3가지 용액들을 준비하였다:

대조용액 1 ; 인지질들을 포함하지 않거나 또는 리포좀으로 조성되지 않는 것을 제외하고는 실시예 1의 조성물과 동일한 농도로 동일한 활성 성분들 - 아르부틴 및 알로에신 - 을 포함하는 수성 용액으로 구성된 용액,

대조용액 2 ; 활성 성분 - 아르부틴 및 알로에신 - 들을 포함하지 않는 것을 제외하고는 대조용액 1과 동일한 용액,

대조용액 3 ; 활성 성분 - 아르부틴 및 알로에신 - 들을 포함하지 않는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사하게 리포좀 현탁액으로 구성된 대조용액 3과 유사한 용액. 다섯가지 조성물들을 4인의 밝은 피부색의 시험요원(피부타입 II)들의 전완(팔뚝)에 아침 및 저녁으로 하루 2회(매회 20㎕ 씩) 적용시켰다. 상기 용액들은 피부 상에 30분 동안 방치하고, 계속해서 적용된 피부 부위를 필립스 HB311 UV 솔라리움(소량의 UV-B를 포함하는 UV-A)으로부터 나오는 빛에 25분간 노출시켰다. 10 내지 14일 이내에, 본 발명에 따른 조성물로 처리된 영역들에서 탈색 효과가 가시화되었다. 이 효과는 시험된 조성물의 두가지 용액들 모두에서 명백하게 가시적이었다. 대조용액들로 처리된 영역들 중에서는 시험 기간 동안에 육안으로 가시적인 효과가 나타나지 않았다. 상기 탈색은 상기 활성 물질들이 더 이상 적용되지 않은 이후 14일에 걸쳐 육안으로 가시적이었으며, 그후 점차 사라졌다. 자국은 검출되지 않았다.

실시예 3. 아르부틴과 알로에신의 존재 중에서의 티로지나제의 시험관 내 효소 활성

시험관 내 티로지나제 저해 시험이 Pomerantz(1993) J. Biol. Chem. 238:2351-2357에 기술된 절차의 변형예를 사용하여 수행되었다. 이 방법에 따르면, 티로지나제의 기질인 엘-도파의 도파퀴논으로 그리고 그 후 도파크롬으로의 전환을 분광분석기(spectrophotometer)에서 475㎚의 흡수율을 관측하는 것으로 추적하였다. 착색된 물질 도파크롬이 475㎚의 파장을 갖는 빛을 흡수하기 때문에, 시간에 대한 전한의 정량적인 측정 및 그에 따른 티로지나제의 활성의 측정이 수행될 수 있다.

모든 시료들은 1.5㎖의 최종 용적을 갖는다. 각 시료를 pH 6.8로 조절되고, 10% DMSO로 안정화시킨 50mM 인산칼륨 완충액 내에서 준비하였다. 티로지나제(48u ; 'u'는 분당 기저(substratum) 전환을 mM로 측정한 효소의 활성 단위를 나타냄)를 각 시료에 가하였다. 서로 다른 2개의 초기 엘-도파의 농도 0.4mM 및 0.2mM를 사용하여 각 저해제에 대해 이중 평가를 수행하였다. 중성값(neutral value)으로 기능하도록 동일한 농도의 비저해 티로지나제를 사용하여 대조 시험을 수행하였다. 대조 시료들에서, 저해제의 용적은 50mM 인산칼륨 완충액으로 대체되었다. 그 다음에, 흡수에서의 시간-관련 차이 및 그에 따른 엘-도파의 전환이 2분간에 걸쳐 수행되었다.

상기 티로지나제의 전환 키네틱스(conversion kinetics)가 하기의 저해제의 농도 즉, 아르부틴(0.9mM) ; 알로에신(0.0192mM ; 0.0385mM 및 0.0769mM)의 적가 및 상기 저해제들 두가지의 개개 조합에 대해 측정되었다. 효소 저해는 저해 키네틱스 및 비저해 키네틱스들 사이의 차이로부터 결정되었다. 그 결과를 하기 표 2에 정리하였다. 시험관 내 시험에 있어서는 투과력 및 생체응용성들에서 차이가 없기 때문에 이 실시에서 검사된 상기 조성물들이 리포좀을 포함하지 않는다는 것은 의미가 없다. 이들 시험관 내 시험들의 목적은 저해제(아르부틴 및 알로에신)의 효율을 개별적으로 그리고 이들의 조합으로 결정하는 것이다. 표 2에 나타낸 바와 같이, 측정된 모든 농도들에서 더하거나 또는 덜한 부가적인 효소 억제 효과가 얻어졌다.

표 2. 저해제의 농도 및 티로지나제의 저해%
저해제	농도(mM)	티로지나제 저해%
아르부틴	0.9	29%
알로에신	0.0192	20%
알로에신	0.0385	32%
알로에신	0.0769	46%
아르부틴알로에신	0.90.0192	53%
아르부틴알로에신	0.90.0385	61%
아르부틴알로에신	0.90.0769	73%

따라서 본 발명에 의하면 외용적으로 적용되었을 때 빠르고, 안전하고, 효과적이고 그리고 가역적인 피부 탈색의 결과를 가져오는 피부-적합성 조성물을 제공하는 효과가 있다.

Claims

인지질들 및 멜라닌의 합성을 위한 효소의 적어도 하나의 비경쟁적 저해제와 함께 멜라닌의 합성을 위한 효소의 적어도 하나의 경쟁적 저해제를 포함하는 리포좀들을 포함하여 이루어짐을 특징으로 하는 수성 조성물.
제 1 항에 있어서,

상기 효소가 티로지나제임을 특징으로 하는 상기 수성 조성물.
제 1 항에 있어서,

상기 경쟁적 저해제 및 비경쟁적 저해제들이 식물 유래임을 특징으로 하는 상기 수성 조성물.
제 2 항에 있어서,

상기 비경쟁적 저해제가 하기의 구조식들을 갖는 화합물들로 이루어진 그룹 중에서 선택된 것임을 특징으로 하는 상기 수성 조성물:

여기에서, R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶및 R⁷들은 각각 수소, 알킬, 알콕시, 아실, 아실옥시, 아실아미노 및 당유도체들을 포함하나 이에 제한되지 않는 폴리알코올 또는 그들의 유도체들로 이루어진 그룹 중에서 독립적으로 선택되는 것이고, 여기에서 상기 알킬, 알콕시, 아실, 아실옥시, 아실아미노 및 폴리알코올들과 그들의 유도체들은 포화되거나 불포화된 것이며, 1 내지 20의 탄소수를 갖는 것임.
제 4 항에 있어서, 상기 비경쟁적 저해제가 하기의 구조식을 갖는 화합물들로 이루어진 그룹 중에서 선택된 것임을 특징으로 하는 상기 수성 조성물:

여기에서, R¹, R²및 R³들은 각각 수소, 히드록시, 탄소수 1 내지 20의 알킬, 탄소수 1 내지 20의 알콕시, 탄소수 1 내지 20의 아실, 탄소수 1 내지 20의 아실옥시, 탄소수 1 내지 20의 아실아미노, 폴리알콜이며, 여기에서, 상기 알킬, 알콕시, 아실, 아실옥시 및 아실아미노 각각은 포화되거나 불포화되고, 또 치환될 수 있으며, 또한, R⁴는 카르복실의 탄소를 경유하여 연결 산소에 부착되어 그에 의하여 에스테르를 형성하는 방향족 치환 카르복실산들로 이루어진 그룹 중에서 선택된 것이며, 여기에서, 상기 카르복실산들은 페닐아세트산, DOPA, 티로신 및 신남산들과 그들의 유도체들, 페룰산 및 코지산들로 이루어진 그룹 중에서 선택된 것임.
제 3 항에 있어서,

상기 비경쟁적 저해제가 옥틸알로에신임을 특징으로 하는 상기 수성 조성물.
제 3 항에 있어서,

상기 경쟁적 저해제가 아르부틴임을 특징으로 하는 상기 수성 조성물.
제 3 항에 있어서,

상기 경쟁적 저해제가 아르부틴이고, 상기 비경쟁적 저해제가 알로에신 또는 그들의 유도체들로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 상기 수성 조성물.
제 1 항에 있어서,

상기 조성물의 전체 중량에 대하여 0.05 내지 7.5중량%의 경쟁적 저해제 및 0.05 내지 1.5중량%의 비경쟁적 저해제의 농도를 포함하여 이루어짐을 특징으로 하는 상기 수성 조성물.
제 8 항에 있어서,

상기 조성물의 전체 중량에 대하여 3.5 내지 5.5중량%의 아르부틴 및 0.75 내지 1.25중량%의 알로에신 또는 알로에신 유도체의 농도를 포함하여 이루어짐을 특징으로 하는 상기 수성 조성물.
제 1 항에 있어서,

조성물 전체 중량에 대하여 최대 20중량%의 농도로 하나 또는 그 이상의 알코올을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 상기 수성 조성물.
제 11 항에 있어서,

상기 알코올이 에탄올 및 이소프로판올로 이루어진 그룹 중에서 선택된 것임을 특징으로 하는 상기 수성 조성물.
제 1 항에 있어서,

5 내지 20중량%의 인지질을 포함하는 것을 특징으로 하는 상기 수성 조성물.
제 8 항에 있어서,

조성물의 전체 중량에 대하여 경쟁적 저해제로서 대략 4중량%의 아르부틴과 비경쟁적 저해제로서 대략 1중량%의 알로에신 또는 그의 유도체들 중의 하나, 대략 10중량%의 인지질들 및 대략 16중량%의 알코올을 포함하는 것을 특징으로 하는 상기 수성 조성물.
제 1 항에 있어서,

탈색을 위한 부가의 활성 물질을 하나 또는 그 이상 더 포함하는 것을 특징으로 하는 상기 수성 조성물.
제 1 항에 있어서,

상기 인지질들이 대두로부터 추출된 것이고, 인지질 전체 중량에 대하여 적어도 73중량%의 포스파티딜 콜린 함량을 가지는 것임을 특징으로 하는 상기 수성 조성물.
제 1 항에 있어서,

상기 인지질들이 수소화된 것이고, 인지질 전체 중량에 대하여 적어도 73중량%의 포스파티딜 콜린 함량을 가지는 것임을 특징으로 하는 상기 수성 조성물.
제 16 항에 있어서,

상기 인지질들이 지방산 잔류물들의 전체 중량에 대하여 61 내지 71중량%의 리놀레인산, 3 내지 7중량%의 리놀레닌산(linolenic acid), 6 내지 13중량%의 올레인산, 10 내지 15중량%의 팔미트산 및 1.5 내지 4중량%의 스테아린산들이 지방산 조성을 가지는 것임을 특징으로 하는 상기 수성 조성물.
제 1 항에 있어서,

상기 리포좀의 소포 크기가 직경 80 내지 400㎚ 사이임을 특징으로 하는 상기 수성 조성물.
청구항 1의 조성물을 포함하는 조성물을 피부의 표면에 적용시키는 것을 포함하는 피부의 가역적 탈색방법.
티로지나제의 경쟁적 저해제 및 비경쟁적 저해제를 포함하는 피부의 가역적 탈색용 조성물.
제 21 항에 있어서,

상기 비경쟁적 저해제가 알로에신 또는 알로에신 유도체임을 특징으로 하는 상기 피부의 가역적 탈색용 조성물.