KR20010032878A - 유전자전달을 위한 혼성 다인자 생분해성 미포 - Google Patents

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Abstract

선택된 핵산을 표적숙주세포로 전달하기 위하여 사용하는 혼성 다인자 생분해성 미포는 양친화성 폴리에스테르-다가양이온 공중합체(12) 및 양친화성 폴리에스테르-당 공중합체(18)를 보유한다. 폴리에스테르-다가양이온(12)은 다가음이온 핵산과 정전상호작용을 형성하고, 폴리에스테르-당 공중합체(18)는 미포-핵산 복합체를 생체내 세포로 안내한다. 유사한 성질을 지닌 추가의 공중합체가 또한 포함된다. 조성물은 특정 유전자담체를 제공하여 전달효능을 향상시키는데, 상기 유전자 담체의 크기와 전하밀도는 다양한 방법으로 쉽게 조절한다. 다양한 종류의 리간드 및 다른 기능 화합물 또한 상기 조성물을 통해 도입할 수 있다. 상기 조성물은 선택된 핵산으로 표적숙주세포를 형질전환시키기 위한 방법에 사용할 수 있다.

Description

유전자전달을 위한 혼성 다인자 생분해성 미포{BIODEGRADABLE MIXED POLYMERIC MICELLES FOR GENE DELIVERY}
본 발명은 유전자를 진핵세포로 전달하는 시스템에 관한다. 좀더 구체적으로, 본 발명은 혼성 다인자 생분해성 미포(微胞)를 이용하여, 선택된 핵산을 숙주로 전달하는 조성물 및 방법에 관하는데, 상기 미포는 양친화성 폴리에스테르-다가양이온 공중합체와 양친화성 폴리에스테르-당 공중합체로 이루어진다.
핵산을 조직배양세포로 전달하는 방법을 찾으려는 초기의 노력은 1950년대 중반에 시작되었다(H.E.Alexander et al., 5 Virology 172-173 (1958)). 이후로, 기능성 DNA, RNA, 시험관 및 생체내 앤티센스 뉴클레오티드(RNA 기능 억제제)의 전달을 향상하는 방향으로 지속적인 진보가 이루어져 왔다. 실제적인 진보는 지난 20년동안 이루어졌는데, 이는 1970년대 후반의 트랜스펙션 기술 및 재조합 DNA 기술의 수렴에 의한 것이다. 이런 수렴은 배양된 포유동물 세포에서 인산칼슘 및 디에틸아미노에틸덱스트란을 재조합 플라스미드의 발현에 적용하면서 시작되었다(P.J. Southern et al., 1 J. Mol. Appl. Gen. 327-341, 1982), 현재, 핵산의 전달 및 발현은 과학적으로 관심을 받고있는 토픽중의 하나다.
시험관내에서 기능성 비-복제 플라스미드의 전달에는 얼마간의 성공이 있었지만, 생체내 기능성 비-복제 플라스미드의 전달을 위한 방법은 초기단계에 있다. 트랜스펙션 기술에는 불용성 비유기 염(F. Graham, 52 Virology 456-462(1973), 양이온 지질(E.R.Lee et al., 7 Human Gene Therapy 1701-1717(1996), 양이온 중합체(B.A.Demeneix et al., 7 Human Gene Therapy 1947-1954(1996); A. V. Kabanov et al., 6 Bioconjugate Chem. 7-20(1995); E. Wagner, 88 Proc.Natl.Acad. Sci. USA4255-4259(1991)), 바이러스 벡터(A.H.Jobe, 7 Human Gene Therapy 697-704(1996); J.Gauldie, 6 Current Opinion in Biotechnology 590-595(1995)), 세포 에렉트로포레이션(U.S. 특허 5,501,662(1996); U.S. 특허 5,273,525(1993)), 미량주입(U.S. 특허 5,114,854(1992))을 이용한 방법이 포함된다. 상기-제시한 방법 각각은 특정의 단점과 한계를 갖는다. 가장 광범위하게 연구되고 있는 유전자 전달 담체는 바이러스 벡터로, 이런 바이러스 벡터의 예로는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스, 포진바이러스계를 들 수 있다. 바이러스 벡터는 비-바이러스 벡터에 비하여 트랜스펙션 효율이 높지만, 이들의 생체내 용도는 극히 제한적이다. 이들의 단점에는 분화세포만 표적화, 숙주 게놈으로의 임의 삽입, 복제위험, 숙주 면역반응 가능성이 포함된다(J.M.Wilson, 96 J.Clin. Invest. 2547-2554 (1995)).
바이러스 벡터에 비하여, 비-바이러스 벡터는 제조하기 쉽고, 면역반응을 야기할 가능성이 적고, 복제반응을 야기하지도 않는다. 디메틸아미노에틸덱스트란-, 인산칼슘-, 다가양이온-매개의 트랜스펙션 처리는 조직배양세포를 위해 실험실에서 이용한다. 일부 조건하에서, 거의 100%에 가까운 세포 트랜스펙션 효율을 시험관내에서 얻을 수있다. 하지만, 일반적으로, 비-바이러스 벡터는 유전자물질의 세포내 생체도입에 비효율적이고, 상대적으로 유전자 발현이 저조한 것으로 밝혀졌다. 다양한 양이온 양친화체가 광범위하게 연구되고 있으며, 유전자 트랜스펙션 목적의 리포좀 조성물에 부가하였다(F.D.Ledley, 6 Human Gene Therapy 1129-1144(1995)). 지금까지, 양이온 지질계는 가장 유망한 트랜스펙션 프로토콜로 간주되어왔는데, 그 이유는 양이온 지질계는 바이러스 벡터를 사용할 경우의 문제점을 극복하기 때문이다. 하지만, 양이온 지질을 이용한 트랜스펙션 효율은 바이러스 벡터만큼 높지 못하고, 세포독성에 대한 불만이 제기되고 있다. 따라서, 신규한 유전자 전달 프로토콜을 찾는 노력이 부단히 요구된다.
앞서 말한 바대로, 안전하고 효율적인 생체내 용도의 유전자 전달계의 개발은 당분야에 상당한 도움이 될 것이다.
본 발명의 간단한 요약
본 발명의 목적은 핵산을 세포로 전달하는 조성물 및 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 목적은 특정 유전자 담체를 제공하여 전달효율을 향상시키는 것으로, 여기서 상기 담체의 크기와 전하는 다양한 방법으로 쉽게 조절한다.
본 발명의 또 다른 목적은 유전자 전달의 조성물 및 방법을 제공하는 것으로, 여기서 유전자 담체는 생분해성이고, 생상보성이다.
이런 목적은 선택된 핵산을 숙주세포로 전달하는 담체를 제공함으로써 해결되는데, 상기 담체는 양친화성 폴리에스테르-다가양이온 공중합체와 양친화성 폴리에스테르-당 공중합체로 이루어진다. 본 발명의 적절한 구체예에서, 폴리에스테르-다가양이온 공중합체는 담체의 5 내지 95% wt로 이루어진다. 폴리에스테르-당 공중합체 또한, 가급적 담체의 5 내지 95% wt로 이루어진다. 폴리에스테르 다가양이온 공중합체는 아미드 결합에 의해 친수성 다가양이온 블록에 연결된 소수성 폴리에스테르 블록으로 이루어진 이중블록 공중합체, 또는 소수성 폴리에스테르 영역 과 친수성 양이온 영역으로 이루어진 이식편 공중합체가 된다. 폴리에스테르는 가급적 폴리(L-락트산), 폴리(D-락트산), 폴리(D-,L-락트산), 폴리(글리콜산), 폴리(L-락트-글리콜산), 폴리(D-락트-글리콜산), 폴리(ε-카프로락톤), 폴리부티로락톤, 폴리프로피오락톤에서 선택된다. 좀더 바람직하게는, 폴리에스테르는 폴리(L-락트산)이 된다. 본 발명의 적절한 구체예에서, 폴리에스테르는 500 내지 10,000의 분자량을 갖는다. 다가양이온은 가급적 폴리(L-세린 에스테르), 폴리(D-세린 에스테르), 폴리(L-리신), 폴리(D-리신), 폴리오르니틴, 폴리아르기닌에서 선택되고, 좀더 바람직하게는 폴리(L-세린 에스테르)가 된다. 본 발명의 적절한 구체예에서, 다가양이온은 500 내지 10,000 분자량을 갖는다.
폴리에스테르-당 공중합체는 소수성 폴리에스테르 분절과 친수성 당 분절로 이루어진다. 폴리에스테르 분절은 가급적 폴리(L-락트산), 폴리(D-락트산), 폴리(D-,L-락트산), 폴리(글리콜산), 폴리(L-락트-글리콜산), 폴리(D-락트-글리콜산), 폴리(ε-카프로락톤), 폴리부티로락톤, 폴리프로피오락톤에서 선택되고, 좀더 바람직하게는, 폴리에스테르는 폴리(L-락트산)이 된다. 본 발명의 적절한 구체예에서, 폴리에스테르 분절은 500 내지 10,000의 분자량을 갖는다. 당 분절은 다당류 또는 당부가된 중합체로 이루어진다. 이런 당부가된 중합체는 가급적 갈락토스, 글루코오스, 푸코스, 과당, 락토오스, 자당, 만노오스, 셀로비오스, 니토로스, 트리오스, 덱스토로스, 트레할로스, 말토오스, 갈락토사민, 글루코사민, 갈락투론산, 글루쿠론산, 글루콘산, 락토비온산에서 선택되는 하나이상의 당성분으로 이루어진다. 당부가된 중합체성분은 폴리(L-세린 에스테르), 폴리(D-세린 에스테르), 폴리(L-리신), 폴리(D-리신), 폴리오르니틴, 폴리아르기닌에서 선택되고, 좀더 바람직하게는 폴리(L-세린 에스테르)가 되고, 이보다 좀더 바람직하게는 폴리(L-리신)이 된다.
담체는 추가로 공중합체를 선택적으로 포함할 수 있는데, 상기 공중합체는 소수성 영역(a), 소수성 영역에 결합된 친수성 영역(b), 친수성 영역과 연결된 기능성분으로 이루어지고, 이때, 상기 기능성분은 리간드, 융합원성 작용제, 리소좀영양성 작용제, 핵국소화 시그널, 이들의 혼합물에서 선택된다. 상기 리간드는 트랜스페린, 상피생장인자, 인슐린, 아시알로오로소무코이드, 만노오스-6-인산염, 만노오스, 루이스X, 시알일 루이스X, N-아세틸락토사민, 갈락토스, 글루코오스, 트롬보모둘린에서 선택되고; 융합원성 작용제는 가급적 폴리믹신 B, 헤마글루티닌 H2에서 선택되고; 핵국소화 시그널은 가급적 T-항원이 된다.
선택된 핵산을 숙주세포로 전달하기 위한 조성물은 수용성 배지에서 혼성-다인자-미포/핵산 복합체로 이루어지고, 여기서, 상기 혼성-다인자-미포/핵산 복합체는 양친화성 폴리에스테르-다가양이온 공중합체와 양친화성 폴리에스테르-당 공중합체의 혼합물(a), 선택된 핵산의 효과량(b)으로 이루어진다.
선택된 핵산을 숙주세포로 전달하기 방법은 수용성 배지에서 혼성-다인자-미포/핵산 복합체의 효과량을 투여하는 것으로 이루어지고, 여기서, 상기 혼성-다인자-미포/핵산 복합체는 양친화성 폴리에스테르-다가양이온 공중합체 및 당성분으로 이루어진 양친화성 폴리에스테르-당 공중합체의 혼합물(a), 상기 선택된 핵산의 효과량(b)으로 이루어지는데, 이때, 상기 복합체는 숙주세포에 접촉하고, 당성분은 혼성-다인자-미포/핵산 복합체의 수용체 매개 세포내이입을 야기하여 핵산을 숙주세포로 전달한다.
관련 출원에 관한 참고
본 출원은 U.S. 출원 No. 60/069,551(December 12, 1997)을 우선권으로 주장한다.
도1은 자가-결합된 혼성 다인자 미포 및 핵산으로부터 만든 정전 복합체의 개요도이다.
생리활성 작용제의 전달을 위한 본 조성물 및 방법을 밝히기 전에, 본 발명은 이 글에서 밝힌 특정 구조, 처리단계, 물질에 한정하지 않는데, 그 이유는 이런 구조, 처리단계, 물질은 어느 정도 바뀔 수 있기 때문이다. 이 글에서 이용한 전문용어는 단지 특정 구체예를 설명하기 위한 것이지 한정하기 위한 것이 아니며, 본 발명의 범위는 첨부된 청구항에 의해서만 한정된다.
본 명세서 및 첨부된 청구항에서 사용한 바와 같이, 단수형 "어(a)," "언(an)," "더(the)"는 문장내에서 구체적으로 지시하기 전까지, 복수의 지시대상을 포함한다. 따라서, 가령, "폴리에스테르-양이온 공중합체"를 보유한 조성물에 대한 참고대상에는 두개이상의 이런 폴리에스테르-양이온 공중합체의 혼합물이 포함되고, "올리고뉴클레오티드"에 대한 참고대상에는 하나이상의 이런 올리고뉴클레오티드가 포함되고, "당성분"에 대한 참고대상에는 두개이상의 이런 당성분이 포함된다.
본 발명을 설명하고 주장함에 있어, 다음의 전문용어는 아래에 제시한 정의에 따라 사용한다.
이 글에서 "효과량"은 비-독성이면서도 핵산을 선택된 세포로 전달하는 할 수 있는 미포/핵산 복합체의 일정량을 의미하는데, 이때, 임의의 의료치료에 수반되는 이익/위험 비율은 적당하다. 이 글에서 핵산의 효과량은 세포내 핵산의 선택된 효과, 예를 들면, mRNA 발현, 단백질 발현, mRNA와의 앤티센스 혼성화에 의한 발현 억제등을 제공하도록 선택된 양을 의미한다. 담체의 효과량은 수용성 배지에서 미포를 형성할 수 있고, 정전 상호작용으로 선택된 핵산과 복합체를 구성할 수 있는 양을 의미한다.
"다당류" 및 "올리고당류"는 이 글에서 특정 크기를 명시하지 전까지는 크기 제한하지 않는다.
이 글에서 "투여" 및 유사한 용어는 치료할 개체에 조성물을 전달하는 것을 의미하는데, 이때, 상기 조성물은 체내의 여러 부위로 전신순환하고, 이때 상기 조성물의 리간드 또는 당 영역은 이의 동계 수용체 또는 결합위치에 결합할 수 있다. 따라서, 조성물은 가급적 전신투여, 전형적으로 피하, 근육내 또는 정맥내 투여, 또는 복강내 투여하여 개체에 투여한다. 이런 용도의 주사용액은 액체용액 또는 현탁액과 같은 통상적인 형태, 주사직전 용액에 녹여 용액 또는 현탁액으로의 제조에 적당한 고형형태, 또는 유제로 만들 수 있다. 적당한 부형제에는 물, 식염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올등이 포함되며, 원하는 경우, 습윤제 또는 유화제등과 같은 첨가물질, 버퍼등을 미량 첨가할 수 있다.
본 발명은 유전자 구성체를 특정 진핵세포로 전달하기 위한 자가-결합된 혼성 다인자 미포를 형성하는 조성물에 관한다. 다인자 미포 및 핵산은 정전 복합체를 형성하는데, 상기 복합체는 수용체-매개의 세포내이입에 의해 세포로 이입된다. 적당한 핵산에는 DNA, RNA, 그리고 앤티센스 올리고뉴클레오티드와 같은 특정 유전자 또는 RNA 기능 억제물질이 포함된다. 혼성 다인자 미포는 두 개이상의 구성성분으로 이루어지는데, 상기 구성성분 모두 생분해성 양친화공중합체이다. 제 1 구성성분인 폴리에스테르-다가양이온 공중합체는 다가음이온 핵산과 정전상호작용을 형성한다. 제 2 구성성분인 폴리에스테르-당 공중합체는 특히 미포-핵산 복합체를 생체내 선택된 세포로 안내한다. 본 발명은 추가로 하나 또는 복수의 폴리에스테르-다가양이온 공중합체 또는 폴리에스테르-당 공중합체를 선택적으로 포함한다. 양친화성 공중합체는 중합체 사슬에 친수성 및 소수성 분절을 갖는 블록 또는 이식편 공중합체로 이루어진다. 폴리에스테르-다가양이온 공중합체에서, 친수성 분절은 폴리(세린 에스테르)와 같은 생분해성 양이온 중합체로 이루어진다. 폴리에스테르-당 공중합체에서, 친수성 분절은 다당류, 단당류- 또는 올리고당류-보유 중합체로 이루어진다. 두 구성성분에서 폴리(락트산)과 같은 생분해성 폴리에스테르를 소수성 분절로 사용한다.
물에서, 두 개이상 구성성분의 충분한 농도가 존재하는 경우, 구성성분은 열역학적으로 안정한 다인자 미포로 동시에 응집된다. 미포입자는 접형골형을 취하고, 필수적으로 이중층을 보유한다. 심부"층"은 소수성 폴리에스테르사이에 소수성 상호작용에 의해 이루어진다. 유사하게, 표면"층"은 물과 친수성 다가양이온 및 당의 상응하는 친수성 상호작용에 의해 이루어진다. 순양성전하는 미포의 표면근처에 존재하는데, 그 이유는 제 1 구성성분의 친수성 분절이 다가양이온이기 때문이다. 양성전하는 핵산(다가음이온)과의 정전상호작용을 가능하게 하는데, 이런 상호작용은 핵산의 압축 및 보호에 필수적이다. 표면 당 그룹에는 미포-핵산복합체를 생체내 특정 장기 또는 조직으로 안내하는 리간드가 포함된다. 또한 당그룹은 수용체-매개의 세포내이입을 유발하여 유전자의 이입과 발현을 야기한다.
입자크기는 유전자 전달계의 최적화에 필수적인데, 그 이유는 입자크기가 종종 트랜스펙션 효율, 세포독성, 생체내 조직표적화를 지배하기 때문이다(F.C. Szoka, 4 Bioconjugate Chem. 372-279 (1993)). 일반적으로, 유전자 전달입자의 크기는 바이러스의 크기를 초과하지 않도록 하여, 유전자 전달입자가 조직에 효과적으로 침투하게 한다. 본 발명에서, 입자크기는 공중합체의 다양한 화합물을 사용하여 쉽게 바꿀 수 있다. 개별 공중합체의 크기와 구조는 응집수를 결정하는데, 여기서 응집수란 응집하여 미포를 형성하는 개별 공중합체의 수를 의미한다. 따라서, 크기와 구조는 부분적으로 다인자 미포의 특정크기를 조절한다. 입자크기는 추가로 입자의 제조상태 및 방법으로 조절할 수 있다. 전하 밀도 또한, 쉽게 조절할 수 있는데, 이런 조절은 다가양이온 공중합체의 화학조성, 다가양이온 분절의 분자량 및 전하밀도, 다가양이온 공중합체 대 당-보유 공중합체와의 몰비율을 변경하여 이루어진다. 또한, 추가의 이온 및/또는 비-이온 구성성분을 통합하여 초기 및 잔류 전하밀도를 조절할 수 있다.
미포로 삽입될 수 있는 특정세포를 표적으로 하는 리간드에는 특히, 트랜스페린, 상피생장인자(EGF), 인슐린, 아시알로오로소무코이드, 만노오스-6-인산염(단핵세포를 목표로 함), 만노오스(대식분자, 일부 B-세포를 목표로 함), 루이스x및 시알일 루이스x(내피세포를 목표로 함), N-아세틸락토사민(T-세포를 목표로 함), 갈락토스(흑색종 세포를 목표로 함), 글루코오스(결장암(종)세포를 목표로 함), 트롬보모둘린(생쥐 폐 내피세포를 목표로 함)이 포함된다. 미포로 삽입할 수 있는 다른 기능성 화합물에는 특히, 폴리믹신 B와 헤마글루티닌 HA2와 같은 융합원성 작용제, 리소좀영양성 작용제, T-항원과 같은 핵국소화시그널(NLS)이 포함된다. 기능성 화합물은 외인성 핵산의 전달과 발현을 더 효율적으로 만들기 때문에, 성공적인 유전자 전달과 발현을 위해서는 기능성 화합물이 중요하다. 기능성 화합물은 미포를 통해 쉽게 도입할 수 있는데, 이것은 (1) 화합물을 보유한 제 3 공중합체 구성성분을 기능성 그룹에 만들고, (2) 선-조합한 다인자 미포와 공중합체를 결합시킴으로써 이루어진다. 다른 방법으로, 기능성 화합물-보유 제 3 구성성분은 미포가 처음 형성되는 시점에서, 제 1, 2 구성성분과 함께 미포로 삽입할 수 있다. 이런 경우, 기능성 그룹이 친수성 분절에 위치하여 미포 표면층에서 노출되는 공중합체를 사용하는 것이 바람직하다. 따라서, 당, 리간드, 다른 기능성 화합물의 다양한 화합물은 제 2 및 이후의 구성성분에 위치시켜 미포-핵산 복합체의 트랜스펙션효율을 최대화시킬 수 있다. 제한없이, 기능성 그룹의 종류와 함량을 쉽게 변경할 수 있다는 점이 본 발명의 장점이다.
본 발명에 따른 미포는 생분해성, 생상보성 공중합체로 이루어지는데, 면역원성 및 세포독성을 전혀 야기하지 않는다. 이 글에서 공개한 적절한 공중합체는 비-독성 소분자 개체로 분해되어 신장 배출되고, 유전자발현의 필요기간동안 불활성 상태가 된다. 분해는 단순한 가수분해 또는 효소반응을 통해 이루어진다. 공중합체의 골격이 에스테르 결합으로 이루어지는 경우, 단순 가수분해를 통한 분해가 주도적으로 일어난다. 효소 분해는 리소솜과 같은 특정 (세포)소기관의 존재하에서는 중요해진다. 분해기간은 수일 내지 수개월로 다양한데, 이것은 상이한 종류와 분자량의 중합체를 사용하기 때문이다. 따라서, 유전자 전달을 위한 생분해성 중합체를 사용하는 경우, 다가양이온 유전자 담체와 관련된 독성문제를 해결하는 방법을 찾을 수 있다. 대부분의 다가양이온 유전자 담체는 상당한 세포독성을 지니는데, 이런 독성이 체내에 장기간 존재하는 경우, 심각한 영향을 끼치는 것으로 알려져 있다. 따라서, 유전자 담체는 역할을 수행한 후, 무독성 산물로 분해되는 것이 바람직하다. 본 발명에서는 생분해성 폴리에스테르 또는 폴리펩티드를 이용하는데, 이들은 안전하고 생상보적인 분해경로를 갖는다. 또한, 본 발명의 고도-분기된 미포구조는 추가로 세포독성을 줄일 수 있는데, 그 이유는 수상돌기 폴리아미도아민과 같은 분기된 다가양이온은 선형 다가양이온보다 세포독성이 덜하기 때문이다(F.C.Szoka, 4 Bioconjugate Chem. 372-379(1993)). 따라서, 본 발명에 따른 다인자 미포의 유익한 성분 및 구조의 장점은 감소된 세포독성에 잘 알 수 있다.
도1에서 보인 바와 같이, 본 발명에 따른 다인자 미포(10)는 두 개 이상의 생분해성 양친화공중합체로 이루어진다. 제 1 공중합체(12)는 폴리에스테르-다가양이온 블록 또는 이식편 공중합체로, 이들은 친화성 다가양이온 분절(14)과 소수성 폴리에스테르 분절(16)로 이루어진다. 친수성 다가양이온 분절(14)은 공중합체에 수용성을 부여할 수 있을 만큼 충분한 크기를 가져야한다. 제 1 공중합체는 이중-, 삼중- 또는 다중-블록 또는 이식편 공중합체로 만들어지는데, 가급적 이중-블록 또는 이식편 공중합체로 만들어진다. 폴리에스테르 분절(16)은 가급적 폴리(L-락트산), 폴리(D-락트산), 폴리(D-,L-락트산), 폴리(글리콜산), 폴리(L-락트-콜린산), 폴리(D-락트-콜린산), 폴리(ε-카프로락톤), 폴리부티로락톤, 폴리프로피오락톤이고, 좀더 바람직하게는 폴리(L-락트산)이 된다. 다가양이온 분절(14)은 가급적 다가양이온이 되는데, 여기서 단량체 단위는 에스테르 또는 아미드 결합에 의해 연결되며, 이런 결합은, 폴리(L-세린 에스테르), 폴리(D-세린 에스테르), 폴리(L-리신), 폴리(D-리신), 폴리오르니틴 또는 폴리아르기닌이 되고, 가급적 폴리(L-세린 에스테르)가 되는데, 이것은 생분해성이 다른 것보다 높기 때문이다.
제 2 공중합체(18)는 폴리에스테르-당-블록 또는 이식편 공중합체인데, 여기서 당분절(20)은 물에서 공중합체를 용해시킬 만큼 충분한 크기를 갖는다. 폴리에스테르 분절(22)은 제 1 공중합체(12)에서와 동일하거나 또는 상이할 수 있는데, 가급적 제 1 공중합체(12)의 폴리에스테르 분절(16)에 대해 전술한 동일군에서 선택된다. 당분절(20)은 가급적 다당류 또는 당부가된 중합체인데, 좀더 바람직하게는 당부가된 중합체이다. 도1에서 예시하여 보인 바와 같이, 당부가된 중합체는 하나 또는 복수 단당류, 올리고당류 또는 이들의 유도체(24)를 중합체(26)에 결합시켜 만드는데, 상기 중합체(26)는 하나 또는 복수의 기능성 돌출기(예, 히드록실, 카르복실, 아미노기)를 보유한다. 단당류, 올리고당류 또는 이들의 유도체는 가급적 갈락토스, 글루코오스, 푸코스, 과당, 락토오스, 자당, 만노오스, 셀로비오스, 니트로스, 트리오스, 덱스트로스, 트레할로스, 말토오스, 갈락토사민, 글루코사민, 갈락투론산, 글루쿠론산, 글루콘산, 락토비온산이다. 산 형태의 당과 다가양이온 중합체와의 접합체가 가장 바람직하다. 따라서, 본 발명의 가정 적절한 구체예는 폴리(L-세린 에스테르) 또는 폴리(L-리신)과 결합된 락토비오산(4-O-β-D-갈락토피라노실-D-글루콘산)이 된다. 락토오스의 갈락토실 단위는 손쉽게 간세포를 목표로 하는데, 이것은 세포에 존재하는 갈락토스 수용체의 높은 친화성과 결합활성에 기인한다.
도1에서 보인바와 같이, 혼성 다인자 미포(10)와 선택된 핵산(28)을 혼합하면, 핵산 음전하와 미포 양전하의 정전결합이 일어나고, 이를 통해 미포-핵산 복합체(30)가 만들어진다.
혼성 다인자 미포는 적절하게 중량비율로 혼합된 두 개이상의 공중합체로 이루어진다. 다시 말하면, 입자 크기는 대략 10 내지 100nm가 되고, 중합체 조성 및 두 개이상의 공중합체의 혼합비율에 따라 달라진다. 본 발명의 가장 적절한 구체예에서, 선택된 핵산은 세포내이입을 통해 간세포로 효과적으로 전달되는데, 상기 세포내이입은 세포표면상의 갈락토실 수용체에 의해 매개된다. 핵산의 다른 세포로의 전달은 지닌 선택 수용체를 보유한 세포와 선택된 당을 대합시켜 이룰 수 있다. 가령, 혼성 미포는 대식분자를 트랜스펙션시키는 만노오스-매달린 공중합체, T-세포를 트랜스펙션시키는 N-아세틸락토사민, 결장(암)종 세포를 트랜스펙션시키는 글루코스로부터 만들 수 있다.
따라서, 본 발명은 선택된 핵산을 특히 간세포, 일반적으로 다른 세포로 전달하는 생분해성, 비-독성, 비-바이러스 벡터를 제공한다. 또한, 본 발명은 다양하고 잘-특징지어진 미포구조를 작제하고, 다양한 당 리간드 및 융합원성 작용제(예, 엔도좀 분열 펩티드(EDP)로 표면의 기능부여를 위한 간편하고, 효율적인 방법을 제공한다.
실시예 1
이 실시예에서는, 폴리(L-락트산)-폴리(L-세린 에스테르) 이중블록 공중합체, 폴리(L-락트산)-폴리(N-락토실-L-세린 에스테르)이중블록 공중합체로부터 혼성 다인자 미포의 제조를 설명한다.
폴리(N-벤질옥시카르보닐-L-세린 에스테르). 먼저, 4-(디메틸아미노)피리디움 4-톨루엔황산염은 23 거대분자 65-70(1990)에서 밝힌 과정을 따라 동몰량의 4-(디메틸아미노)피리딘과 p-톨루엔 황산을 무수벤젠에서 반응시켜 만들었다. N-벤질옥시카르보닐(N-CBZ) 세린(2.392 g)은 교반막대가 있고 질소 분기관 및 고무격막이 부착된 이중-목 원형바닥 플라스크에 넣고, 질소대기하에서 시린지를 통해 테트라하이드로퓨란(30 ml)을 첨가하여 용해시켰다. 4-(디메틸아미노)피리디움4-톨루엔황산염(2,94 g)과 디이소프로필 카르보디이미드의 염화메틸렌 용액(80 ml)은 시린지를 통하여 연속적으로 첨가하고, 반응혼합물은 실온에서 1 내지 5일 교반하였다. 반응완성직후, 반응혼합물은 여과하여 디이소프로필 요소를 제거하고, 이후 회전 증발기를 이용하여 완전히 건조시켰다. 반응산물은 메탄올에서 재결정하여 얻고, 폴리스틸렌 표준을 이용한 겔 침투 크로마토그래피(GPC)로 특성화하였다.
폴리(L-락트산). 3g의 L-락트산은 교반막대가 있고 진공 증류기가 부착된 단일-목 원형바닥 플라스크에서 넣었다. 반응플라스크는 질소로 완전히 채우고, 이후 혼합물은 진공(5mmHg)하에서 160℃로 가열하였다. 반응시간은 1 내지 10시간으로 변화시켜, 다양한 분자량의 폴리(L-락트산)을 얻었다. 산물은 다량의 메탄올에 클로로포름용액의 침전으로 얻고, 폴리스틸렌 표준을 이용한 GPC로 특성화하였다.
폴리(L-락트산)-폴리(L-세린 에스테르)이중블록 공중합체. 1g의 폴리(L-락트산)(MW 1200)는 테트라하이드로퓨란에 용해하고, 디사이클로헥실카르보디이미드의 존재하에서 두배 몰량의 디아미노에탄을 첨가하여 아미노-절두된 폴리(L-락트산)을 만들었다. 실온에서 2시간 교반한후, 반응 산물은 메탄올에서 침전시켜 얻었다. 아민-절두된 폴리(L-락트산)는 이후, 디사이클로헥실카르보디이미드를 이용하여 실온에서 디메틸포름아마이드에 녹인 동물량의 폴리(N-벤질옥시카르보닐-L-세린 에스테르)(MW 2900)와 반응시키고, 이후 촉매 수소첨가를 이용하여 벤질옥시카르보닐기를 제거하였다(23 거대분자 3399-34063406(1990)).
폴리(L-락트산)-폴리(N-락토실-L-세린 에스테르)이중블록 공중합체. 건조 테트라하이드로퓨란(50ml)을 용매로 하는 락토비온산(1.33 g) 용액은 동몰량의 트리에틸아민(500 ml)으로 중화시키고, 이후 실온에서 염화탄산 이소부틸(500 ml)을 첨가하였다. 교반 10분후, 반응혼합물은 폴리(L-락트산)-폴리(L-세린 에스테르)(0.67 g)의 디메틸황산화염 용액(50 ml)에 첨가하고, 실온에서 20분동안 교반하였다. 반응산물은 여과 및 디에틸 에테르에서 침전시켜 얻고, SPECTRAPOR 막 고무관(MW cutoff 1,000)을 이용하여 물에 대해 투석하여 정제하였다.
혼성 다인자 미포. 폴리(L-락트산)-폴리(L-세린 에스테르)와 폴리(L-락트산)-폴리(N-락토실-L-세린 에스테르)의 혼합물은 인산염 버퍼(pH 7.4)에서 만들고, β-갈락토시다제 유전자 및 HepG2 세포를 이용한 실시예 4의 트랜스펙션 과정을 실시한다.
실시예 2
이 실시예에서는, 폴리(L-락트산)-폴리(L-세린 에스테르)이중블록 공중합체와 폴리(L-락트산)-폴리(L-락트산)-폴리(N-락토실-L-세린 에스테르)이중블록 공중합체로부터 혼성 다인자 미포의 제조를 설명한다.
과정은 실시예 1에서와 동일하게 실시하였는데, 단 아민-절두된 폴리(L-락트산)은 N-트리틸 에탄올아민에서 시작하여 L-락티드 고리-개방 중합화로 합성하였다. N-트리틸 에탄올아민은 실온에서 에탄올아민(20ml)에 염화트리틸(3g)을 교반하여 만들었다. 침전된 산물은 여과로 얻고, 메탄올-물(9:1)에서 재결정화로 정제하였다. L-락티드 중합화는 옥트산 주석 촉매량의 존재하에, 환류된 톨루엔에 녹인 N-트리틸 에탄올아민으로 개시하였다. 폴리(L-락트산)은 과량의 디에틸 에테르에서 침전시켜 얻었다. 트리틸기는 디옥산에 녹인 0.1 M 트리플루오르아세트산을 이용하여 제거하였다.
실시예 3
이 실시예에서는, 폴리(L-락트산)-폴리(L-리신)이식편 공중합체와 폴리(L-락트산)-폴리(N-락토실-L-리신)이식편 공중합체로부터 혼성 다인자 미포의 제조를 설명한다.
혼성 다인자 미포는 폴리(L-락트산)-폴리(L-리신)과 폴리(L-락트산)-폴리(N-락토실-L-리신)공중합체로부터 만들었다. 폴리(L-리신)(MW 2700)은 Sigma Chemical Co.(St. Louis, MO)에서 구입하였고, 폴리(L-락트산)(MW 1200)은 실시예 1의 과정을 따라 다중응축하여 만들었다. 폴리(L-락트산)의 카르복실 말단기는 동몰량의 이소부틸클로로포름산염으로 활성화시키고, 이후 동몰량의 폴리(L-리신)과 반응시켜, 폴리(L-락트산)-폴리(L-리신)공중합체를 만들었다. 폴리(L-락트산)-폴리(N-락토실-L-리신)은 실시예 1의 과정을 따라 락토비온산과 폴리(L-락트산)-폴리(L-리신)을 반응시켜 만들었다. 폴리(L-락트산)-폴리(L-리신)과 폴리(L-락트산)-폴리(N-락토실-L-리신)의 다양한 화합물은 인산염 버퍼(pH 7.4)에서 만들고, 사람 간암(종) HepG2 세포에 대한 β-갈락토시다제-인코딩 유전자를 이용하여 실시예 4의 트랜스펙션 과정을 실시한다.
실시예 4
이 실시예에서는, HepG2 세포를 이용한 혼성 다인자 미포의 트랜스펙션 및 세포독성 검사를 설명한다.
혼성 다인자 미포의 In vitro 트랜스펙션 효율(HepG2)은 10% 태아 소혈청을 보충한 MEM 배지에서 생장시킨 사람 간암(종) 세포(HepG2)에서 검사하였다. 세포를 수거하여, 혈색소계를 이용하여 계수하고, 96-웰 평판에 2x105세포/ml 밀도로 도말하였다. 하루후, 폴리(L-락트산)-폴리(L-리신) 및/또는 폴리(L-락트산)-폴리(N-락토실-L-리신)공중합체, pSV-β-gal 플라스미드 DNA(Promega Corp., Madison, Wisconsin; EMBL accession No. X65335)로 이루어진 미포-유전자 복합체의 다양한 조성물은 트랜스펙션 30분전 새로 만들었다. 각 96-웰 평판에서 생장배지는 새로운 무(無)혈청 생장배지로 바꾸고, 미포-유전자 복합체를 첨가하여 최종부피가 10㎕가 되게 하였다. 4시간 배양한 후, 생장배지는 혈청-보유 배지로 대체하고, 세포는 5% CO2인큐베이터에서 37℃로 44시간동안 추가로 배양하였다. 세포는 이후, 0.25% 트립신-EDTA 처리를 이용하여 수거하고, 세포 용해질은 각 웰에 100㎕ lx 용해버퍼(Promega, Madison, WI)를 첨가하여 얻었다.
플라스미드 pSV-β-gal은 포유동물 세포의 트랜스펙션 효율을 조절하는 양성 조절 벡터다. pSV-β-gal 플라스미드는 SV40 초기 프로모터와 증폭제 서열, 전사개시 위치, β-갈락토시다제를 인코드한 대장균(E.coli)lacZ 코딩 영역, SV40 T 소항원 폴리아데닐화 시그널을 보유한다. SV40 초기 프로모터 및 증폭제는 lacZ 유전자의 전사를 유도한다.
트랜스펙션 효율은 세포 용해질에서 β-갈락토시다제 효소활성을 결정하여 측정하였다. 2x 분석버퍼(Promega)에 녹인 동량의 세포 용해질 및 O-니트로페닐-β-D-갈락토피라노시드(ONPG, 1.33 mg/ml)의 혼합물은 4시간동안 37℃에서 배양하였다. 반응은 150㎕의 1M 탄산나트륨용액을 각 웰에 첨가하여 종결시키고, 420nm에서 흡수도는 β-갈락토시다제 활성용 분광광도계로 판독하였다. 리포펙틴(LIPOFECTIN) 시약(GIBCO/BRL, Gaithersburg, MD)을 컨트롤로 사용하여 트랜스펙션 효율을 비교하였다. 리포펙틴 시약은 막-여과된 물에 녹인 양이온 지질 N-[1-(2,3-디올레이옥시)프로필]-n,n,n-염화트리메틸암모늄(DOTMA)과 디올레일포스파티딜에탄올아민(DOPE) 1:1(w/w) 리포좀 조성물이다.
혼성 다인자 미포의 HepG2 세포에 대한 독성은 T. Mosmann(Rapid Colorimetric Assay for Celluler Growth and Survival: Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays, 65 J.Immunol.Methods 55-63 (1983))가 최초로 제시한 MTT 비색정량분석으로 결정하였다. 간단히 말하면, 세포는 지수적으로 생장한 배양물에서 수거하고, 96-웰 평판에서 2x105세포/ml 밀도로 도말하였다. 24 시간-배양후, 세포는 다양한 양의 폴리(L-락트산)-폴리(L-리신) 및/또는 폴리(L-락트산)-폴리(N-락토실-L-리신) 공중합체 무(無)-혈청용액으로 처리하였다. 4시간-배양후, 생장배지는 혈청-보유 생장배지로 바꾸고, 세포는 5% CO2인큐베이터에서 37℃로 44시간동안 추가 배양하였다. 이후, 25㎕의 3-[4,5-디메틸티오졸-2-일]-2,5-브롬화디페닐테트라졸륨(MTT)용액(최종 농도, 0.5 mg/ml)을 각 웰에 첨가하고, 이후, 37℃에서 4시간동안 배양하였다. 생장배지는 조심스럽게 제거하고, 150㎕ DMSO를 첨가하여, 형성된 포르마잔(formazan) 결정을 용해시켰다. 최적밀도(OD)는 Bio-Tek EL-3311 극소평판 판독기(Bio-Tek Instrument, Whnooski, VT)를 이용하여 570 nm에서 측정하였다. 세포 생존율(%)은 다음의 공식에 따라 계산하였다.
생존율(%) =[OD570(샘플)/OD570(컨트롤)] x 100,
여기서, OD570(컨트롤)은 PBS 버퍼만을 처리한 웰에서 얻은 수치를 나타내고, OD570(샘플)은 다양한 양의 중합체를 처리한 웰에서 얻은 수치를 나타낸다.
표1에서 보이는 바와 같이, 본 발명에 따른 혼성 다인자 미포의 트랜스펙션 효율은 in vitro 무(無)혈청 HepG2 세포에서 리포펙틴 시약과 비슷했다. HepG2 세포에 대한 혼성 다인자 미포의 세포독성은 표2에서 보인 바와 같이, 리포펙틴 시약에 비하여 훨씬 적거나 또는 거의 없었는데, 이것은 이들 미포가 간세포뿐만 아니라 다른 조직 또는 장기에도 광범위하게 사용될 수 있음을 의미한다.
HepG2세포를 이용하여 리포펙틴 시약에 대한 폴리(L-락트산)-폴리(L-리신)(PLL)과 폴리(L-락트산)-폴리(N-락토실-L-리신)(PGLG)으로 이루어진 혼성 다인자 미포의 상대적 트랜스펙션 효율(%)
코드 조성(PLGL Wt%) 사용한 미포의 전체 중량
5㎍ 10㎍ 20㎍ 30㎍
PLLGL 30 30 71 74 67 58
PLLGL 50 50 64 62 63 71
PLLGL 70 70 73 66 66 74
HepG2세포를 이용하여 리포펙틴 시약에 대한 폴리(L-락트산)-폴리(L-리신)(PLL)과 폴리(L-락트산)-폴리(N-락토실-L-리신)(PGLG)으로 이루어진 혼성 다인자 미포의 세포독성(100 - 세포생존율(%))
코드 조성(PLGL Wt%) 사용한 미포의 전체 중량
5㎍ 10㎍ 20㎍ 30㎍
PLLGL 0 0 23 30 24 19
PLLGL 30 30 7 0 0 17
PLLGL 50 50 0 0 7 45
PLLGL 70 70 0 0 5 61
PLLGL 100 100 0 0 22 63
리포펙틴 - - - 24 59

Claims (51)

  1. 약물을 숙주세포로 전달하는 담체에 있어서, 양친화성 폴리에스테르-다가양이온 공중합체 및 양친화성 폴리에스테르-당 공중합체의 혼합물로 이루어지는 것을 특징으로 하는 담체.
  2. 제 1항에 있어서, 폴리에스테르 다가양이온 공중합체는 이중블록 공중합체이고, 상기 이중블록 공중합체는 아미드 결합에 의해 친수성 다가양이온 블록과 결합된 소수성 폴리에스테르 블록으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 담체.
  3. 제 2항에 있어서, 폴리에스테르 블록은 폴리(L-락트산), 폴리(D-락트산), 폴리(D-,L-락트산), 폴리(글리콜산), 폴리(L-락트-글리콜산), 폴리(D-락트-글리콜산), 폴리(ε-카프로락톤), 폴리부티로락톤, 폴리프로피오락톤에서 선택되는 것을 특징으로 하는 담체.
  4. 제 3항에 있어서, 폴리에스테르 블록은 폴리(L-락트산)인 것을 특징으로 하는 담체.
  5. 제 3항에 있어서, 폴리에스테르 블록은 500 내지 10,000 분자량을 갖는 것을 특징으로 하는 담체.
  6. 제 2항에 있어서, 다가양이온 블록은 폴리(L-세린 에스테르), 폴리(D-세린 에스테르), 폴리(L-리신), 폴리(D-리신), 폴리오르니틴, 폴리아르기닌에서 선택되는 것을 특징으로 하는 담체.
  7. 제 6항에 있어서, 다가양이온 블록은 폴리(L-세린 에스테르)인 것을 특징으로 하는 담체.
  8. 제 6항에 있어서, 다가양이온 블록은 500 내지 10,000 분자량을 갖는 것을 특징으로 하는 담체.
  9. 제 1항에 있어서, 폴리에스테르-당 공중합체는 소수성 폴리에스테르 분절과 친수성 당 분절로 이루어지는 것을 특징으로 하는 담체.
  10. 제 9항에 있어서, 폴리에스테르 분절은 폴리(L-락트산), 폴리(D-락트산), 폴리(D-,L-락트산), 폴리(글리콜산), 폴리(L-락트-글리콜산), 폴리(D-락트-글리콜산), 폴리(ε-카프로락톤), 폴리부티로락톤, 폴리프로피오락톤에서 선택되는 것을 특징으로 하는 담체.
  11. 제 10항에 있어서, 폴리에스테르 분절은 폴리(L-락트산)인 것을 특징으로 하는 담체.
  12. 제 10항에 있어서, 폴리에스테르 분절은 500 내지 10,000 분자량을 갖는 것을 특징으로 하는 담체.
  13. 제 9항에 있어서, 당 분절은 다당류로 이루어지는 것을 특징으로 하는 담체.
  14. 제 9항에 있어서, 당 분절은 당부가된 중합체로 이루어지는 것을 특징으로 하는 담체.
  15. 제 14항에 있어서, 당부가된 중합체는 하나이상의 당성분으로 이루어지고, 상기 당성분은 갈락토스, 글루코오스, 푸코스, 과당, 자당, 만노오스, 셀로비오스, 니토로스, 트리오스, 덱스토로스, 트레할로스, 말토오스, 갈락토사민, 글루코사민, 갈락투론산, 글루쿠론산, 글루콘산, 락토비온산에서 선택되는 것을 특징으로 하는 담체.
  16. 제 15항에 있어서, 당성분은 락토비온산인 것을 특징으로 하는 담체.
  17. 제 14항에 있어서, 당부가된 중합체는 폴리(L-세린 에스테르), 폴리(D-세린 에스테르), 폴리(L-리신), 폴리(D-리신), 폴리오르니틴, 폴리아르기닌에서 선택되는 중합체 성분으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 담체.
  18. 제 17항에 있어서, 중합체 성분은 폴리(L-세린 에스테르)인 것을 특징으로 하는 담체.
  19. 제 17항에 있어서, 중합체 성분은 폴리(L-리신)인 것을 특징으로 하는 담체.
  20. 제 1항에 있어서, 폴리에스테르-다가양이온 공중합체의 5 내지 95% wt로 이루어지는 것을 특징으로 하는 담체.
  21. 제 1항에 있어서, 담체는 추가의 공중합체를 포함하고, 상기 공중합체는 소수성 영역(a), 소수성 영역과 연결되는 친수성 영역(b), 친수성 영역과 결합된 기능성분으로 이루어지고, 이때, 상기 기능성분은 리간드, 융합원성 작용제, 리소좀영양성 작용제, 핵국소화 시그널, 이들의 혼합물에서 선택되는 것을 특징으로 하는 담체.
  22. 제 21항에 있어서, 리간드는 트랜스페린, 상피생장인자, 인슐린, 아시알로오로소무코이드, 만노오스-6-인산염, 만노오스, 루이스X, 시알일 루이스X, N-아세틸락토사민, 갈락토스, 글루코오스, 트롬보모둘린에서 선택되고; 융합원성 약물은 폴리믹신 B, 헤마글루티닌 H2에서 선택되고; 핵국소화 시그널은 T-항원인 것을 특징으로 하는 담체.
  23. 제 1항에 있어서, 작용제는 핵산인 것을 특징으로 하는 담체.
  24. 선택된 핵산을 숙주세포로 전달하는 조성물에 있어서, 상기 조성물은 수용성 배지에 혼성-다인자-미포/핵산 복합체로 이루어지고, 여기서, 혼성-다인자-미포/핵산 복합체는 양친화성 폴리에스테르-다가양이온 공중합체 및 양친화성 폴리에스테르-당 공중합체의 혼합물(a), 상기 선택된 핵산의 효과량(b)으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 조성물.
  25. 제 24항에 있어서, 폴리에스테르 다가양이온 공중합체는 이중블록 공중합체이고, 상기 이중블록 공중합체는 아미드 결합에 의해 친수성 다가양이온 블록과 결합된 소수성 폴리에스테르 블록으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 조성물.
  26. 제 25항에 있어서, 폴리에스테르 블록은 폴리(L-락트산), 폴리(D-락트산), 폴리(D-,L-락트산), 폴리(글리콜산), 폴리(L-락트-글리콜산), 폴리(D-락트-글리콜산), 폴리(ε-카프로락톤), 폴리부티로락톤, 폴리프로피오락톤에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  27. 제 26항에 있어서, 폴리에스테르 블록은 폴리(L-락트산)인 것을 특징으로 하는 조성물.
  28. 제 26항에 있어서, 폴리에스테르 블록은 500 내지 10,000 분자량을 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
  29. 제 25항에 있어서, 다가양이온 블록은 폴리(L-세린 에스테르), 폴리(D-세린 에스테르), 폴리(L-리신), 폴리(D-리신), 폴리오르니틴, 폴리아르기닌에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  30. 제 29항에 있어서, 다가양이온 블록은 폴리(L-세린 에스테르)인 것을 특징으로 하는 조성물.
  31. 제 29항에 있어서, 다가양이온 블록은 500 내지 10,000 분자량을 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
  32. 제 24항에 있어서, 폴리에스테르-당 공중합체는 소수성 폴리에스테르 분절과 친수성 당 분절로 이루어지는 것을 특징으로 하는 조성물.
  33. 제 32항에 있어서, 폴리에스테르 분절은 폴리(L-락트산), 폴리(D-락트산), 폴리(D-,L-락트산), 폴리(글리콜산), 폴리(L-락트-글리콜산), 폴리(D-락트-글리콜산), 폴리(ε-카프로락톤), 폴리부티로락톤, 폴리프로피오락톤에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  34. 제 33항에 있어서, 폴리에스테르 분절은 폴리(L-락트산)인 것을 특징으로 하는 조성물.
  35. 제 33항에 있어서, 폴리에스테르 분절은 500 내지 10,000 분자량을 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
  36. 제 32항에 있어서, 당 분절은 다당류로 이루어지는 것을 특징으로 하는 조성물.
  37. 제 32항에 있어서, 당 분절은 당부가된 중합체로 이루어지는 것을 특징으로 하는 조성물.
  38. 제 37항에 있어서, 당부가된 중합체는 하나이상의 당성분으로 이루어지고, 상기 당성분은 갈락토스, 글루코오스, 푸코스, 과당, 자당, 만노오스, 셀로비오스, 니토로스, 트리오스, 덱스토로스, 트레할로스, 말토오스, 갈락토사민, 글루코사민, 갈락투론산, 글루쿠론산, 글루콘산, 락토비온산에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  39. 제 38항에 있어서, 당성분은 락토비온산인 것을 특징으로 하는 조성물.
  40. 제 37항에 있어서, 당부가된 중합체는 폴리(L-세린 에스테르), 폴리(D-세린 에스테르), 폴리(L-리신), 폴리(D-리신), 폴리오르니틴, 폴리아르기닌에서 선택되는 중합체 성분으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 조성물.
  41. 제 40항에 있어서, 중합체 성분은 폴리(L-세린 에스테르)인 것을 특징으로 하는 조성물.
  42. 제 40항에 있어서, 중합체 성분은 폴리(L-리신)인 것을 특징으로 하는 조성물.
  43. 제 24항에 있어서, 폴리에스테르-다가양이온 공중합체의 5 내지 95% wt로 이루어지는 것을 특징으로 하는 조성물.
  44. 제 24항에 있어서, 담체는 추가의 공중합체를 포함하고, 상기 공중합체는 소수성 영역(a), 소수성 영역과 연결된 친수성 영역(b), 친수성 영역과 결합된 기능성분으로 이루어지고, 이때, 상기 기능성분은 리간드, 융합원성 작용제, 리소좀영양성 작용제, 핵국소화 시그널, 이들의 혼합물에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  45. 제 44항에 있어서, 리간드는 트랜스페린, 상피생장인자, 인슐린, 아시알로오로소무코이드, 만노오스-6-인산염, 만노오스, 루이스X, 시알일 루이스X, N-아세틸락토사민, 갈락토스, 글루코오스, 트롬보모둘린에서 선택되고; 융합원성 약물은 폴리믹신 B, 헤마글루티닌 H2에서 선택되고; 핵국소화 시그널은 T-항원인 것을 특징으로 하는 조성물.
  46. 선택된 핵산을 숙주세포로 전달하는 방법에 있어서, 상기 방법은 수용성 배지에서 혼성-다인자-미포/핵산 복합체의 효과량을 투여하는 것으로 이루어지고, 여기서, 혼성-다인자-미포/핵산 복합체는 양친화성 폴리에스테르-다가양이온 공중합체 및 양친화성 폴리에스테르-당 공중합체의 혼합물(a), 상기 선택된 핵산의 효과량(b)으로 이루어지고, 이때, 상기 혼성-다인자-미포/핵산 복합체는 숙주세포에 접촉하고, 상기 당성분은 혼성-다인자-미포/핵산 복합체의 수용체 매개 세포내이입을 유발하여 상기 핵산을 숙주세포로 전달하는 것을 특징으로 하는 방법.
  47. 제 46항에 있어서, 당성분은 갈락토스이고, 숙주세포는 간세포인 것을 특징으로 하는 방법.
  48. 제 46항에 있어서, 당성분은 만노오스이고, 숙주세포는 대식세포인 것을 특징으로 하는 방법.
  49. 제 46항에 있어서, 당성분은 N-아세틸락토사민이고, 숙주세포는 T 세포인 것을 특징으로 하는 방법.
  50. 제 46항에 있어서, 당성분은 글루코스이고, 숙주세포는 결장암(종)세포인 것을 특징으로 하는 방법.
  51. 제 46항에 있어서, 당성분은 갈락토스이고, 숙주세포는 흑색종 세포인 것을 특징으로 하는 방법.
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