KR20000049064A

KR20000049064A - Ｈｉｖ 및 암 치료제

Info

Publication number: KR20000049064A
Application number: KR1019990703137A
Authority: KR
Inventors: 캠덴제임스버저
Original assignee: 데이비드 엠 모이어; 더 프록터 앤드 갬블 캄파니
Priority date: 1997-05-16
Filing date: 1997-11-26
Publication date: 2000-07-25
Also published as: SK46999A3; BR9712981A; IL129351A0; JP2000510156A; EP0954309A1; CZ124999A3; PE11499A1; HUP9904092A2; ZA979095B; WO1998051303A1; NO991701L; CA2268848A1; CO5070657A1; PL335160A1; NO991701D0; CN1254281A; HUP9904092A3; AR009968A1; AU7402998A; TR199901530T2

Abstract

동물 또는 인간에게 제초제 또는 살진균제 또는 그의 유도체를 투여함으로써 HIV 또는 기타 바이러스 감염을 치료하는 방법. HIV 의 치료를 위해, 살진균제 또는 제초제를 다른 치료 예를 들어 AZT 또는 프로테아제 억제제와 같이 사용할 수 있다. 예를 들어, 티아벤다졸 및 클로로프로팜은 HIV-1 에 만성적으로 감염된 세포 개체군으로부터 바이러스 생산의 수준이 급속히 감소되고 항바이러스 효과가 계속되는 화합물 노출과 함께 지속됨을 나타냈다. 상기 바이러스 생산의 감소는 숙주에 비독성이고 세포 DNA, RNA 및 단백질의 합성에 영향을 미치지 않는 농도에서 발생한다. 또한, 티아벤다졸 및 클로로프로팜으로 장기간 치료하기위해 만성적으로 감염된 세포는 HIV 로 슈퍼 감염되지 않았다. 제초제 또는 살진균제 유도체를 투여함을 포함하는 포유동물에서 종양 및 암의 성장 억제 방법이 또한 본원에 개시되어 있다. 제초제 또는 살진균제를 다근 치료제 예컨대 유방암 치료용 탁솔과 함께 사용할 수 있다. 상승제는 또한 제초제 또는 살진균제 조성물에 포함될 수 있다. 상기 방법은 특히 암 또는 바이러스가 일반적으로 식물 또는 진균 유전자 물질에 의해 변성된 동물 세포일 때, 유효하다. 화학치료제를 또한 우선 투여하여 암의 크기를 현저하게 감소시킬 수 있고, 다음에 제초제 또는 살진균제를 사용하여 치료한다. 상기 방법들은 특히 암 또는 바이러스가 식물 또는 진균 유전자 물질을 포함하는 돌연변이 세포일 때 유효하다.

Description

ＨＩＶ 및 암 치료제{HIV AND CANCER TREATMENT}

HIV와 다른 바이러스성 감염은 사망의 주요원인이 되고 있다. HIV는 바이러스가 신체 내에서 복제되어 신체의 면역체계를 공격하는 질병이다. HIV 바이러스는 쉽게 소멸되지 않으며, 숙주세포가 바이러스 복제하는 것을 막을 유용한 기작 또한 없다. 헤르페스 심플렉스 (Herpes Simplex)는 불가능하지는 않지만 치료가 어려운 다른 바이러스성 감염이다. 이러한 질병과 다른 바이러스성 감염을 치료할 수 있는 방법이 매우 요구된다.

놀랍게도, 살진균제, 제초제 , 몰드 억제제 및 그들의 유도체가 바이러스 복제를 억제할 수 있다는 것을 밝혀내었다. 살진균제 또는 제초제는 다른 치료제, 예로써, HIV 치료를 위한 AZT, 3TC 또는 프로테아제 억제제 (protease inhibitor)와 공용될 수 있다. 이러한 HIV 치료제는 만성 감염 세포와 치료제에 대하여 저항성을 가지지 않는 것으로 나타나는 세포의 치료에 독특한 효능을 가진다. 일례로, 티아벤다졸 (thiabendazole)과 클로로프로팜 (chloropropham)은 HIV-1으로 만성 감염된 세포들에서의 바이러스 생성 수준을 신속하게 강하시킴이 밝혀졌고, 항바이러스성 효과가 화합물에 대한 지속적인 노출 (1 년 까지)에도 유지되었다. 또한, 만성 감염 세포의 바이러스 생성을 완전 억제하는 이와 같은 독특한 효능은, 약물이 없어진 후에도 80일간 지속되며, 이러한 '백신' 효과는 양 약물에 대해 투여량 의존적으로 나타난다. 후자의 효과는 HIV 치료 문헌에서 일찍이 보고되지 않은 것이다. 바이러스 생성 감소는 숙주세포에 무해한 농도에서 이루어지며, 세포의 단백질, DNA 및 RNA 합성에 영향을 미치지 않는다. 나아가, 티아벤다졸과 클로로프로팜으로 장기간 처리된 만성 감염 세포는 HIV에 의해 수퍼-감염 (super-infected)되지 않는다. 또한 이들 화합물의 고유한 점으로는 일년 이상 장기간의 시도 이후에도 저항성 균주를 유도하지 않는다는 것이다. 반면에 프로테아제 억제제는 이러한 방법에서 몇 주만에 저항성 균주를 유도하고 RT 억제제는 모두 1 개월 또는 2 개월 내에 저항성 균주를 유도한다.

암은 동물과 인간에서 사망원인을 주도하고 있다. 암의 정확한 원인은 규명되지 않았으나, 흡연 또는 발암 물질에의 노출과 같은 특정 행위와 특정형의 암 및 종양의 발병간의 관계가 많은 연구자들에 의해 밝혀졌다. 그러나, 밝혀진 것은 암세포는 비정상 세포로서, 어느 시간 동안 잠복해 있다가 급작히 성장할 수 있다는 것이다. 많은 암세포는 정상의 동물 또는 인간 세포처럼 사멸하지 않고 자기복제를 지속하기 때문에 불멸로 여겨진다.

고유의 특정성을 가지면서 종양 세포를 공격하는 물질을 개발하는 것은 분명히 큰 수확이 될 것이다. 이와 다르게는, 종양 세포에는 조직독성을 가지면서, 정상세포에는 미미한 효과를 가지는 물질도 바람직하다.

식물 및 동물 세포가 이종 세포 유전 물질의 삽입에 의해 유전적으로 변형될 수 있음이 알려져있다. 이러한 유전적 변형 세포는 한 세포의 DNA, 또는 유전자의 부분 또는 유전자 물질이 새로운 세포에 혼입되는 것이다. 이러한 새로운 세포는 두 종류 세포의 특성을 모두 가지나, 완전한 식물 또는 동물 세포로는 더이상 정의되지 못한다. 그러한 변이 또는 비정상 세포는 신속 성장하여, 정상세포와 달리 "노화"에 반응하지 않는다.

신체는 몰드, 진균 및 화분 (pollen) 물질을 여과 또는 제거하는 특정 기작을 가지고 있다. 이들이 흡수되면, 신체의 소화체계가 적절량의 물질을 제거 또는 해독할 수 있다. 코, 폐 및 피부는 외부 물질 여과를 위한 활성기작을 가지고 있다. 그러나, 언제나 신체의 방어 기작에 침투하여 혈류, 림프계로 들어가거나, 폐와 피부 점막을 침투하는 식물, 진균 및 몰드 물질이 존재한다. 이러한 물질은 동물세포에 침투하여 변이시킬 수 있다. 변이 세포는 동물세포와 결합된 화분에 의해 만들어진 동물 세포와 식물세포의 조합으로 생성될 수 있다. 화분은 호흡을 통해 흡수되어 화분이 폐 조직과 접촉하고 코, 입 및 목 세포가 식물 물질과 접촉된다. 다른 세포는 진균 물질 또는 몰드가 동물 세포의 유전 물질과 결합하여 동일한 방식으로 형성된다.

식물 및 동물 또는 진균 및 동물 세포의 유전 물질을 함유하는 비정상 또는 변이 세포는 환경적으로 변형된 세포이다. 신체는 보통 이러한 물질을 항체를 형성함으로써 제거하나, 세포가 동물 세포 및 식물, 또는 몰드를 포함한 진균 물질의 특성을 가지면 항체가 동일한 방식으로 작용하지 않을 수 있다. 이는 세포가 성장하도록 허용하는 것으로서, 세포는 정상이 아니기 때문에 백혈병 같은 소위 "액체 암"을 포함한, "암" 또는 종양 성장으로 일컬어진다.

바이러스는 또한 세포에 침투하여 세포 기질 내에서 자기 복제하는 능력을 소지한다. 이러한 새로운 세포는 출발의 두 세포와는 상이하다. 바이러스 자체도 진균, 몰드 및 식물 물질, 특히 화분과 상호 작용하여 변이 및 변화하게된다. 이러한 바이러스는 살진균제, 몰드 억제제 및 제초제 치료에 의해 사멸되거나 복제가 저해된다. 이러한 화합물들의 일부가 또한 구충제로 작용하는 것은 흥미롭다.

15%의 암이 바이러스에 의해 야기되는 것은 주목할 만하다. 특히 잔디에서 발견되는 진균의 존재와, 지역 및 이러한 물질의 성장 및 증식 조절을 위한 제초제와 살진균제의 사용을 살펴보면, 지역 내의 암 발생과 연관이 있다. 제초제와 살진균제의 광범위한 사용에 의해 진균 성장과 식물생장이 감소될수록 그 지역에는 암이 적게 발생한다.

본 발명의 목적은 바이러스 성장이 억제되는 HIV 치료 방법의 제공에 있다. 본 방법은 안전 유효량의 제초제 또는 살진균제 단독 또는 기타 HIV 약물, 예로써 AZT 또는 3TC와 공용하여 투여함을 포함한다.

본 발명의 다른 목적은 바이러스, 특히 환경적으로 변형되고 변이된 세포를 사멸시키는 능력을 가지는 바이러스 성장 억제제를 안전 유효량으로 투여함을 포함하는 항-바이러스 치료법을 제공하는 것이다. 이러한 물질은 식물 세포를 사멸시킬 수 있는 제초제이거나, 몰드를 포함하는 진균 물질에 유효한 살진균제들이다. 이러한 제제는 상승제, 항염제, 또는 항산화 비타민을 포함하는 비타민과 함께 투여할 수 있다.

본 발명의 다른 목적은 암세포, 특히 환경적으로 변형된 세포를 사멸시킬 수 있는 능력을 가지는 종양감소제의 안전 유효량을 투여함을 포함하는 항-암 치료법을 제공하는 것이다. 이러한 물질은 식물 세포를 사멸시킬 수 있는 제초제이거나, 몰드를 포함하는 진균 물질에 유효한 살진균제들이다. 이러한 제제는 동시 또는 순차적으로 화학치료제와 함께 및/또는 상승제와 함께 투여할 수 있다.

이들 및 다른 목적은 이하의 발명의 상세한 설명에 의해 명백해질 것이다.

발명의 요약

포유 동물, 특히 온혈 동물 및 인간에서의 HIV 및 다른 바이러스성 감염 및 암을 치료하는 방법이 청구되었다. 방법은 종양 또는 암의 질량을 현저하게 감소시키거나, 바이러스와 암 세포의 복제를 억제하는 안전 유효량의 제초제 또는 살진균제, 또는 그의 유도체를 투여하는 것을 포함한다. 제초제와 그의 유도체는 동물 세포와 식물 세포의 결합에 의해 유전적으로 변형된 동물 세포인 암 또는 바이러스의 치료에 유용하고, 살진균제와 그의 유도체는 진균 또는 몰드에서 유도된 유전 물질을 포함한 동물 세포인 암 또는 바이러스의 치료에 유용하다.

이러한 조성은 유효량을 구강, 직장, 국소, 또는 비경구, 정맥내 및 종양내 주사로 투여함으로써, 동물 및 인간의 암 및 다른 종양 성장의 억제에 이용된다. 상승제 또한 조성과 공용될 수 있다. 이 조성은 기타 치료법과 순차적 또는 동시에 공용될 수 있다.

본 발명은 인간과 온혈 동물에서 바이러스, 특히 HIV, 암 및 종양의 성장을 억제하는 방법에 관한 것으로, 제초제와 살진균제의 투여와 관련된다. 종양 크기가 감소하고, 암 성장이 지연되며, 바이러스의 복제가 억제된다. 이러한 치료는 특히 바이러스 또는 암이 세포 변이의 결과일 때, 즉 동물세포가 식물, 진균 또는 몰드 (mold)의 유전자 물질 도입으로 변이된 경우이다.

A. 정의

여기에서 사용된, "포함"이라는 용어는 다양한 성분이 본 발명의 약학 조성과 함께 사용되는 것을 의미한다. 또한 "필요 구성의" 및 "구성의"라는 용어는 '포함' 용어에 해당된다.

여기에서 사용된, "변이 세포" 또는 "환경적으로 변형된 세포" 유전 물질, 예로써, 식물 또는 진균세포의 DNA 또는 RNA 단편이 동물세포의 유전 물질과 결합하여 유전적으로 변형되어, 식물, 진균 또는 동물세포도 아니면서 생활성을 가지는 기생체로서 숙주 동물 내에 잔존하는 동물 세포이다.

여기에서 사용된, "약제학적으로 허용 가능한" 성분은 인간 및/또는 동물에 사용 적합한 것으로 적당한 이익/위험 비율에 상응하는 불필요한 부작용 (독성, 자극, 및 알레르기 반응 등)이 없는 것이다.

여기에서 사용된, "안전 유효량"은 본 발명의 방법에 따라 사용시, 목적하는 치료반응을, 적당한 이익/위험 비율에 상응하는 불필요한 부작용 (독성, 자극, 및 알레르기 반응 등) 없이 얻기에 충분한 성분의 양을 의미한다. 특정의 "안전 유효량"은 치료의 특정 조건, 환자의 신체적 조건, 치료되는 포유 동물의 형태, 치료 기간, 동시 치료 (존재한다면)의 성격, 및 사용된 특수 제제와 화합물 및 그 유도체의 구조와 같은 요인에 따라 변하게된다.

여기에서 사용된, "약제학적 첨가 염"은 제초제 또는 살진균제 및 그의 유도체와 유기 또는 무기산의 염이다. 바람직한 이러한 산 첨가 염은 클로라이드, 브로마이드, 설페이트, 니트레이트, 포스페이트, 설포네이트, 포르메이트, 타르트레이트, 말레이트, 말리에이트, 시트레이트, 벤조에이트, 살리실레이트, 아스코르베이트 등이다.

여기에서 사용된, "유도체"는 제초제 또는 살진균제 화합물의 화학 변형 유도체로, 보다 가용성이거나 보다 쉽게 대사되는 것이지만, 제초제 또는 살진균제로의 효능이 현저히 변화된 것은 아니다. 일례로, 히드록시기나 다른 친수성기의 첨가는 용해도와 신체 흡수성을 증가시키나, 대부분의 경우에서, 화합물의 작용성은 크게 변화시키지 않는다. 당업자라면 쉽게 그러한 화합물을 확인할 수 있다.

여기에서 사용된, "약제학적 담체"는 항암제를 인간 또는 동물에 전달하기 위한, 약학적으로 허용 가능한 용매, 현탁제 또는 리포좀을 포함한 부형제이다. 담체는 액체 또는 고체일 수 있으며, 목적하는 투여 계획 형태에 따라 선택되어진다.

여기에서 사용된, "암"은 포유 동물에서 발견되는 모든 종류의 암 또는 네오플라즘 (neoplasm) 또는 악성 종양으로, 종양과 백혈병을 포함한다.

여기에서 사용된, "화학치료제"는 DNA-작용제, 항대사제, 튜불린-작용제, 호르몬제 등으로 아스파라기나제 또는 히드록시유레아 같은 것을 포함한다.

여기에서 사용된, "바이러스"는 HIV 바이러스, 헤르페스, 인플루엔자 및 라이노바이러스 (rhinovirus)와 같은 인간 및 온혈 동물에서 질병 (바이러스성 감염)을 일으키는 바이러스를 포함한다.

여기에서 사용된, "상승제"는 트리프롤리딘 (triprolidine)과 그의 cis-이성질체 및 프로코다졸 (procodazole)과 같은 물질로서, 화학치료제 및 제초제 또는 살진균제와 함께 쓰이는 것이다.

여기에서 사용된, "현저하게 감소시키는"은 종양의 질량을 현저한 량만큼 감소시킨다는 의미이다. 이는 보통 원래 질량의 50% 미만으로, 바람직하게는 질량을 측정 불가량까지 감소시키는 것이다.

여기에서 사용된 "살균제" 는 균류의 성장을 억제하거나 사멸시키는데 효과적인 물질을 의미한다. 곰팡이를 균류라고 간주할 수 있으므로, 곰팡이 저해제는 살균제라는 용어에 포함된다.

여기에서 사용된 "제초제" 는 식물 성장을 억제하는데 효과적인 물질, 특히 식물 세포를 사멸시키는 물질을 의미한다.

B. 살균제

임의의 수의 살균제 및 그 유도체, 및 약제학적으로 허용가능한 염을 사용할 수 있다. 특히 살균제는 균류의 성장을 방지함에 있어서의 그것의 효과 및 안정성 면에서 선택된다. 더 넓은 스펙트럼 살균제가 바람직하다. 효과적인 것으로 나타난 일부 살균제가 하기 목록에 나와 있다.

1. 벤즈이미다졸 화합물.

벤즈이미다졸 유도체는 그것의 항균 활성으로 알려져 있다. 놀랍게도, 이 화합물들은 또한 암 세포 라인에서 아포프토시스를 유발시킬 수 있음이 밝혀졌다. 아포프토시스는 회저와 다른, 특이적 세포 사멸이다. 대부분의 암 세포는 무기한 살아갈 수 있어, 암 세포를 종종 불명 세포 라인이라고 한다. 그러므로 아포프토시스를 유출하는 능력은 매우 중요하다.

그 화합물은 하기 구조식을 가진다 :

[식 중에서, X 는 수소, 할로겐, 탄소수 7 미만의 알킬, 또는 탄소수 7 미만의 알콕시이며; n 은 4 미만의 양의 정수이고; Y 는 수소, 염소, 니트로, 메틸 또는 에틸이며; R 은 수소, CONHR₃(식 중, R₃은 탄소수 7 미만의 알킬, 바람직하게는 부틸 또는 이소부틸임), 또는 탄소수 1 내지 8 의 알킬기이고, R₂는 NHCOOR₁(식 중, R₁은 탄소수 7 미만의 지방족 탄화수소임), 바람직하게는 탄소수 7 미만의 알킬기이다]. 바람직하게 그 조성물은 다음 화합물 또는 유기 및 무기산 모두와의 비독성 약제학적으로 허용가능한 산 부가염이다 :

[식 중, R 은 수소, CONHR₃(식 중, R₃은 탄소수 7 미만의 알킬, 바람직하게는 부틸 또는 이소부틸임), 또는 탄소수 1 내지 8 의 알킬기이다].

가장 바람직한 화합물은 메틸-(부틸카르바모일)-2-벤즈이미다졸카르바메이트 및 2-메톡시카르보닐아미노-벤즈이미다졸, 및 Y 가 클로로이고 X 가 수소인 화합물이다. 이 화합물들은 1973 년 6 월 12 일 Adams 등에게 허여된 미국 특허 3,738,995 에 기재된 방법에 따라 제조된다.

2. 티아벤즈이미다졸 화합물.

티아벤다졸은 세포가 그에 대한 저항 없이 바이러스 생성을 억제하는 것으로 나타나는 만성 HIV 의 치료에 특히 효과적인 것으로 밝혀졌다.

화합물은 하기 구조식을 가진다 :

[식 중에서, X 는 수소, 할로겐, 탄소수 7 미만의 알킬 또는 탄소수 7 미만의 알콕시이며; n 은 4 미만의 양의 정수이고; Y 는 수소, 염소, 니트로, 메틸 또는 에틸이며; R 은 수소, CONHR₃(식 중, R₃은 탄소수 7 미만의 알킬, 바람직하게는 부틸 또는 이소부틸임), 또는 탄소수 1 내지 8 의 알킬기이고, R₂는 티아졸릴이다]. 바람직하게 조성물은 하기 화합물 또는 유기 및 무기산과의 비독성 약제학적으로 허용가능한 산부가염이다 :

[식 중에서, R 은 수소이고, R₂는 4-티아졸릴이다]. 가장 바람직한 화합물은 2-(4-티아졸릴)벤즈이미다졸이다. 티아벤다졸도 또한 구충제이다.

티아졸릴 유도체는 Brown 등, J. Am. Chem. Soc., 83, 1764(1961) 및 Grenda 등, J. Org. Chem., 30, 259(1965) 에 기재된 방법에 따라 제조된다.

3. 치환된 벤즈이미다졸 유도체.

더욱 용해성이 있는 벤즈이미다졸 화합물도 또한 본 발명에서 유용하다. 이 화합물들은 제초 또는 살균 용도로 알려져 있지는 않으나, HIV, 암 및 기타 바이러스 감염에 대해 효과적인 것으로 믿어지고 있다. 이 유도체는 하기 화학식을 가진다 :

[식 중에서, R 은 H, 카르복실(-CO₂H), 히드록실, 아미노 또는 에스테르(-CO₂R') (식 중, R' 은 알콕시, 할로알킬, 알케닐 및 시클로알킬(이 알킬기는 탄소수가 1 내지 8 임), 또는 CH₃CH₂(OCH₂CH₂)_n- 또는 CH₃CH₂CH₂(OCH₂CH₂CH₂)_n- 또는 (CH₃)₂CH-, 및

및 (OCH(CH₃)CH₂)_n- (식 중, n 은 1 내지 3 임)이다]. 더욱 바람직한 알킬기는 직쇄이다. 바람직하게 할로겐은 말단 탄소 상에 치환되고, 할로겐은 염소이다. 바람직한 시클로알킬기는 탄소수 3 내지 6 이다. 시클로알킬기는 또한 알킬 사슬, 2-시클로프로필에틸, 시클로프로필메틸, 2-시클로프로필 프로필 또는 2-시클로프로필프로필 또는 시클로헥실메틸 상에 치환된 것들을 포함한다. 바람직한 화합물은 하기 구조식을 갖는 화합물 및 그것들의 약제학적으로 허용가능한 염이다 :

및

.

4. 1H-1,2,4-트리아졸 유도체

1H-1,2,4-트리아졸 유도체는 그것의 항균 활성으로 알려져 있다. 그것들은 균류를 억제하거나 박멸하는데 사용되는 계통적 물질이다. 그 화합물은 하기 구조식을 가진다 :

[식 중, Z 는 CH₂-CH₂-, -CH₂-CH₂-CH₂-, -CH(CH₃)-CH(CH₃)- 및 -CH₂-CH(알킬) (식 중, 알킬은 탄소수 1 내지 약 10 임) 로 이루어진 군으로부터 선택되는 알킬렌이고; Ar 은 페닐, 치환된 페닐(이는 할로, 저급 알킬, 저급 폴리알콕시, 시아노 및 니트로로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3 개의 치환체를 갖는 페닐 라디칼을 의미함), 티에닐, 할로티에닐, 나프틸 및 플루오레닐로 이루어진 군으로부터 선택된 원이다]. 상기 화학식 I 의 치료상 활성을 갖는 산부가염도 또한 본 발명의 영역 내에 포함된다.

상기 Z 의 정의에서 사용된 "알킬" 이란 용어는 탄소수 1 내지 약 10 의 직쇄 및 측쇄 탄화수소 라디칼, 예를 들어 메틸, 에틸, 1-메틸에틸, 프로필, 1,1-디메틸에틸, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 데실 등을 포함하고; 여기에서 사용되는 "저급 알킬" 은 탄소수 1 내지 6 의 직쇄 또는 측쇄 포화 탄화수소, 예들 들어 메틸, 에틸, 프로필, 1-메틸에틸, 부틸, 1,1-디메틸에틸, 펜틸, 헥실 등의 알킬일 수 있으며; "할로" 라는 용어는 원자량 127 미만의 할로겐 원자, 예컨대 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도를 총칭한다.

그것의, 유기 및 무기산 모두와의 약제학적으로 허용가능한 산 부가염도 여기에서 사용될 수 있다.

바람직한 유도체에는 하기 것들; 및 그것들의 치료상의 활성 산 부가염.이 포함된다 :

1-[2-(2,4-디클로로페닐)-1,3-디옥솔란-2-일메틸]-1H-1,2,4-트리아졸;

1-[2-(2,4-디클로로페닐)-4-메틸-1,3-디옥솔란-2-일메틸]-1H-1,2,4-트리

아졸;

1-[2-(2,4-디클로로페닐)-4-에틸-1,3-디옥솔란-2-일메틸]-1H-1,2,4-트리

아졸;

1-[2-(2,4-디클로로페닐)-4-프로필-1,3-디옥솔란-2-일메틸]-1H-1,2,4-트리

아졸;

1-[2-(2,4-디클로로페닐)-4-펜틸-1,3-디옥솔란-2-일메틸]-1H-1,2,4-트리

아졸.

이 화합물들은 1978 년 3 월 14 일 Van Reet 등에게 허여된 미국 특허 4,079,062 에 기재된 방법에 따라 제조된다.

5. 1,3-비스-트리아졸릴-2-프로판올 유도체.

1,3-비스-트리아졸릴-2-프로판올 유도체는 그것의 항균 활성으로 알려져 있다. 그것들은 균류를 억제하고 박멸하는데 사용되는 계통적 살균제이다. 화합물은 하기 구조식을 갖는 화합물, 및 그것들의 염, 금속 착물, 및 에테르 또는 에스테르, 및 그것의, 비독성 유기산 및 무기산 모두와의 약제학적으로 허용가능한 염이다 :

[식 중, R¹은 임의 치환된 알킬, 시클로알킬 (예 : 시클로펜틸 또는 시클로헥실), 아릴 또는 할로아릴 (예 : 페닐 또는 2,4-디클로로페닐) 또는 아르알킬 (예 : 벤질) 이다]. 상세하게는, 2-(2,4-디클로로페닐)-1,3-비스(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)프로판-2-올 및 그것에 상응하는 2- 및 4-클로로페닐 유사체, 및 2,4-디플루오로페닐 유사체와 같은 그러한 비스 트리아졸 유도체도 여기에서 유용하다. 바람직하게 그 조성물은 2-(2,4-디플루오로페닐)-1,3-비스(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)프로판-2-올 및, 그것의, 유기 및 무기산 모두와의 약제학적으로 허용가능한 산부가염이다.

이 화합물들은 1983년 9월 13일 Richardson 에게 허여된 미국 특허 4,404,216 및, 영국 특허 2,078,719A(1982년 1월 13일) 와 유럽 특허 44,605(1982년 1월 27일) (이 두 특허 모두 출원인이 Imperial Chemical Industries Ltd. 임) 에 기재된 방법에 따라 제조된다.

6. 그리세오풀빈

그리세오풀빈은 하기 구조식을 가진다 :

그것은 Hockenhull 에게 허여된 미국 특허 3,069,328 (1962) 및 Dorey 등에게 허여된 미국 특허 3,069,328 (1962) 에 기재된 방법에 따라 제조된다.

C. 제초제

임의의 수의 제초제 및 그 유도체, 및 약제학적으로 허용가능한 염을 본 발명의 실행에서 사용할 수 있다. 바람직한 제초제는 하기 기재된 것들이다.

1. N-클로로페닐카르바메이트 및 N-클로로페닐티오카르바메이트

N-클로로페닐카르바메이트 및 N-클로로페닐티오카르바메이트는 제초 활성으로 알려져 있다. 그것들은 특정 식물 및 잡초를 억제하고 사멸시키는데 사용되는 계통적 제초제이다. 계통적 제초제는 식물에 의해 흡수되고 식물을 통해 이동하는 능력으로, 다른 제초제와 차별화된다. 이 계통적 능력은 본 발명의 화합물의 필수적인 필요 조건은 아니다.

클로로프로팜, 즉 이소프로필 N-(3-클로로페닐)카르바메이트는 HIV 의 치료에 특히 효과적인 것으로 나타난다.

그 화합물은 하기 구조식을 갖는 화합물, 및 그것들의 약제학적으로 허용가능한 염이다 :

[식 중에서, n 은 1 내지 3 이고, X 는 산소 또는 황이며, R 은 수소, 저급 알킬 및 저급 알케닐, 시클로헥실, 탄소수 8 이하의 펜알킬, 및 페닐로 이루어진 군으로부터 선택된다].

바람직한 화합물은 R 이 탄소수 1 내지 4 의 알킬, 바람직하게는 이소프로필이고, X 가 산소이며, n 은 1 이며, 클로로기는 페닐기 상의 3 위치에 있는 화합물이다. N-3-클로로페닐카르바메이트가 가장 바람직한 화합물이다.

이 화합물들은 Witman 에게 허여된 미국 특허 2,695,225 (1954) 및 Strain 에게 허여된 미국 특허 2,734,911 (1956) 에 기재된 방법에 따라 제조된다.

2. N-포스포노글리신

N-포스포노글리신 유도체는 제초 활성으로 알려져 있다. 그것들은 특정 식물 또는 잡초을 억제하고 사멸하는데 사용되는 계통적 제초제이다.

화합물은 하기 구조식을 갖는 화합물 및, 그것들의 특정 염으로서 원소 번호 30 이하의 1 및 2 족 금속, 히드로클로라이드, 피리딘, 암모늄, 저급 지방족 탄화수소 아민, 저급 알칸올 아민 및 아닐린으로 이루어진 군으로부터 선택된 염이다 :

[식 중에서, X 는 탄소수 12 이하의 클로록시, 히드록시, 티올 또는 알콕시; 저급 알케녹시, 시클로헥실옥시, 모르폴리노, 피릴디닐, 피페리디노 및 NHR' 로 이루어진 군으로부터 선택되고; Y 및 Z 는 수소 및 저급 알킬기로부터 각기 독립적으로 선택되며; R 은 수소, 포르밀, 아세틸, 벤조일, 니트로벤조일 및 염소화 벤조일로 이루어진 군으로부터 선택되며; R' 은 수소, 저급 알킬, 및 저급 알케닐, 시클로헥실, 탄소수 8 이하의 펜알킬, 페닐, 염소화 페닐 및 아니실로 이루어진 군으로부터 선택된다].

가장 바람직한 화합물은 하기 구조식을 갖는 화합물이다 :

저급 알킬아민염, 특히 이소프로필 아민염이 바람직하다.

이 화합물들은 1974년 12월 10 일 Franz 에게 허여된 미국 특허 3,794,758 에 기재된 방법에 따라 제조된다.

포유 동물, 특히 온형 동물 및 인간의 치료용 약제학적 조성물은 약제학적 담체 및, (1) N-포스포노글리신 유도체 및 (2) N-클로로페닐카르바메이트 또는 N-클로로페닐티오카르바메이트로 이루어진 군으로부터 선택된, 유효량의 항암 화합물을 함유하는 조성물로서 여기에서 또한 사용된다.

C. HIV 약제

HIV 는 2 종류의 일반적인 약제인, 리버스 트랜스크립타제 (reverse transcriptase) 저해제 및 프로테아제 저해제로 치료된다. AZT 및 3TC 는 급성 HIV 를 치료하는데 널리 사용된다. 제초제 및 진균제 및 그들의 유도체가 급성 HIV 를 치료하기 위해 AZT 또는 3TC 와 함께 사용될 수 있다. 그것들은 AZT 의 활성을 방해하지 않는다.

그외 HIV 및 항바이러스성 제제들은 본 발명에 의해 제공되는 치료법과 함께 사용될 수 있다. 상기 제제로는 리버스 트랜스크립타제 저해제 및 프로테아제 저해제가 포함될 수 있다. 상기 약제는 제초제 또는 진균제 및 그들의 유도체와 동시에 사용되거나 또는 연계되어 사용될 수 있다.

D. 화학치료제

진균제 및 제초제는 화학치료제와 함께 투여될 수 있다. 상기 제제들은 일련으로 투여될 수 있는데, 화학효법제은 종양의 크기를 줄이는데 사용되고, 이어서 제초제, 진균제 또는 그들의 유도체로의 치료가 시작되며, 또는 상기 두 물질이 함께 투여될 수도 있다.

화학치료제는 일반적으로 DNA-상호작용제, 항대사물질, 튜블린-상호작용제, 호르몬 제제 및 아스파라기나제 또는 히드록실우레아와 같은 기타로 분류된다. 상기 그룹의 화학치료제 각각은 활성 또는 화합물 형태에 의해 더 세분될 수 있다. 제초제 또는 진균제와 조합된 순차적 방법에 사용되는 화학치료제에는 DNA-상호작용제, 항대사물질, 튜블린-상호작용제 그룹의 구성원을 포함한다. 화학치료제 및 그의 투여방법에 대해 보다 상세한 것은 문헌 [Dorr et al. Cancer Chemotherapy Handbook, 2d edition, pages 15-34, Appleton & Lange (Connecticut, 1994)] 를 참고로 한다.

종양의 크기를 감소시키거나 또는 암세포의 성장을 정지시키기 위해서, 화학치료제는 세포가 복제되는 것을 막아야 하며 또한 그 자신을 유지시키는 세포의 능력을 방해해야 한다. 이와 같이 작용하는 상기 제제는 우선적으로 시스플라틴과 같은 DNA-상호작용제 및 튜블린 상호작용제이다.

DNA-상호작용제에는 알킬화제, 예를 들어, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 알트레타민; 블레오마이신과 같은 DNA 가닥-절단제; 삽입 (intercalating) 토포이소머라제 II 저해제, 예를 들어, 닥티노마이신 및 독소루비신; 에토포시드 및 테니포시드와 같은 비삽입 (nonintercalating) 토포이소머라제 II 저해제; 및 플리카마이신과 같은 DNA 마이너 그로브 결합제가 포함된다.

알킬화제는 세포성 DNA, RNA 및 단백질 분자와 및 작은 아미노산, 글루타티온 및 유사한 화학물질과 공유결합의 화학적 부가 생성물을 형성한다. 일반적으로, 상기 알킬화제는 핵산, 단백질, 아미노산 또는 글루타티온에서의 아미노기, 카르복실기, 포스페이트기, 술프히드릴기와 같은 세포 구성성분내에 있는 친핵성 원자와 반응한다. 암 치료에서 상기 알킬화제의 기작 및 역할은 잘 알려져 있지 않다. 대표적인 알킬화제로는 하기를 들 수 있다 :

클로람부실, 시클로포스파미드, 이소파미드, 메클로레타민, 멜팔란, 우라실 머스타드와 같은 질소 머스타드;

티오테파와 같은 아지리딘;

버술판과 같은 메탄술포네이트 에스테르;

카머스틴, 로무스틴, 스트렙토조신과 같은 니트로소 우레아;

시스플라틴, 카르보플라틴과 같은 플라늄 착물;

미토마이신 및 프로카르바진, 다카르바진 및 알트레타민과 같은 생환원성 알킬화제;

블레오마이신과 같은 DNA 가닥 절단제;

하기와 같은 DNA 토코이소머라제 II 저해제 : 암사크린, 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 이다루비신 및 미톡산트론과 같은 삽입제 (Intercalator); 에토포시드 및 테니포시드와 같은 비삽입제.

DNA 마이너 그로브 결합제는 플리카마이신이다.

항대사물질은 두가지 주요 기작중 어느 하나에 의해 핵산의 생성을 방해한다. 일부 약제들은 DNA 합성의 중간 전구체인 데옥시리보뉴클레오시드 트리포스페이트의 생성을 저해하여 DNA 복제를 저해한다. 일부 화합물들은 동화작용성 뉴클레오티드 경로에서 그들을 대체할 수 있는 퓨린 또는 피리미딘을 충분히 선호한다. 상기 유사체들은 그들의 일반적인 대응물 대신에 DNA 및 RNA 로 치환될 수 있다. 본 발명에서 유용한 항대사물질로는 하기를 들 수 있다 :

메토트렉세이트 및 트리메트렉세이트와 같은 폴레이트 길항제;

플루오로우라실, 플루오로데옥시우리딘, CB3717, 아자시티딘, 시타라빈 및 플록스우리딘과 같은 피리미딘 길항제;

메르캅토푸린, 6-티오구아닌, 플루다라빈, 펜토스타틴과 같은 푸린 길항제;

시크트라빈, 플루다라빈과 같은 당 변형 유사체;

히드록시우레아와 같은 리보뉴클레오티드 리덕타제 저해제.

튜블린 상호작용제는 중합화되어 마이크로튜블을 형성하는 단백질인, 튜블린상의 특정 부위에 결합하므로써 작용한다. 마이크로튜블은 중요한 세포 구조 단위이다. 상호작용제가 단백질상에 결합하는 경우, 세포는 마이크로튜블을 형성할 수 있다. 튜블린 상호작용제에는 빈크리스틴 및 빈블라스틴, 알칼로이드와 파클리탁셀 모두가 포함된다.

아드레날 코르티코스테로이드는 천연 아드레날 코르티솔 또는 히드로코르티손으로 부터 유래된다. 그들은 그들의 항 염증성 뿐아니라 유사분열을 저해하고 DNA 합성을 중단시킬 수 있는 성질로 인해 사용된다. 상기 화합물로는 프레드니손, 덱사메타손, 메틸프레드니솔론 및 프레드니솔론이 포함된다.

히드록시우레아는 효소 리보뉴클레오티드 리덕타제를 저해시키므로써 일차적으로 작용하는 것을 보인다.

아스파라기나제는 아스파라긴을 비작용성 아스파르트산으로 전환시키므로서 종양에서의 단백질 합성을 차단하는 효소이다.

호르몬 제제 및 황체형성 호르몬이 종양 크기를 실질적으로 줄이는데 통상 사용되는 것은 아니다. 그러나, 그들은 화학치료제 또는 제초제 또는 진균제 또는 그들의 유도체와 함께 사용될 수 있다.

호르몬 차단제는 암 및 종양의 치료에 또한 유용하다. 그들은 호르몬 민감성 종양에 사용되고 통상적으로 천연 원료로 부터 유래된다. 상기 제제로는 하기를 들 수 있다 :

에스트로겐, 접합 에스트로겐 및 에티닐 에스트라디올 및 디에틸스틸베스테롤, 클로로트리아니센 및 이데네스트롤;

히드록시프로게스테론 카프로에이트, 메드록시프로게스테론 및 메게스트롤과 같은 프로게스틴;

테스토스테론, 테스토스테론 프로피오네이트, 플루옥시메스테론, 메틸테스토스테론과 같은 안드로겐.

황체형성 호르몬 분비 호르몬 제제 또는 고나도트로핀-분비 호르몬 길항제가 전립선암의 치료에 우선적으로 사용된다. 상기 제제에는 류프로리드 아세테이트 및 고세렐린 아세테이트가 포함된다. 이들은 고환에서의 스테로이드의 생합성을 방해한다.

항호르몬성 항원으로는 하기가 포함된다 :

타모시펜과 같은 항스트로겐제;

플루타미드와 같은 항안드로겐제; 및

미토탄 및 아미노글루테티미드와 같은 항아드레날제.

E. 증강제

"증강제 (potentiator)" 는 약학 조성물의 효능을 증진시키거나 또는 증가시키고 및/또는 면역계에 작용하는 임의의 물질일 수 있다. 그러한 증강제는 화학치료제 및 진균제 또는 제초제와 조합하여 사용되는 트리프롤리딘 및 그의 시스-이성질체이다. 트리프롤리딘은 US 5,114,951 호 (1992) 에 기재되어 있다. 또 다른 증강제는 프로코다졸, 1H-벤즈이미다졸-2-프로판산; β-(2-벤즈이미다졸)프로피온산; 2-(2-카르복시에틸)벤즈이미다졸; 프로파졸이다. 프로코다졸은 바이러스 및 박테리아 감염에 대한 비특이성 활성 면역방어제이고, 본 발명에서 청구되는 조성물과 함께 사용될 수 있다.

증강제는 제초성 또는 진균성 화합물의 효능을 증진시킬 수 있고 안전 유효량으로 사용될 수 있다. 상기 조합은 경구, 직장내, 국소 또는 비경구 투여에 의해 환자 또는 동물에게 투여될 수 있다.

아스코르브산, 베타-카로텐, 비타민 A 및 비타민 E 와 같은 항산화성 비타민은 본 발명의 조성물과 함께 투여될 수 있다.

F. 투여량

본 발명의 방법에서는 모든 적합한 투여량이 가능하다. 화합물 및 담체의 유형 및 양은 온혈동물 또는 사람의 종류, 체중, 및 치료해야할 바이러스 또는 암 또는 종양에 따라 매우 다양할 것이다. 사용되는 진균제 또는 제초제 및 그들의 유도체 및/또는 화학치료제의 범위 및 비율이 제제의 종류 및 치료해야할 암에 따라 다양할 것이다. 일반적으로, 제초제 또는 진균제 및 그들의 유도체에 대해서, 체중 1 kg 당 2 밀리그램 (mg) 및 체중 1 kg 당 4000 mg 만큼 많은 투여량이 적합하다. 6000 mg/kg 미만의 더 많은 투여량이 또한 사용될 수 있다. 바람직하게는 15 mg 내지 3000 mg/체중 kg 이 제초제 또는 진균제에 대해 사용된다. 화학치료제에 대해서는, 더 적은 투여량이 적절할 수 있는데, 예를 들면, 1500 mg/kg 미만의 양이 사용될 수 있다해도 약 0.01 mg/체중 kg 약 400 mg/체중 kg 이 적합할 수 있다. 일반적으로, 인간에 대한 투여량은 쥐와 같은 작은 온혈동물에 대한 것 보다 적다. 단위 투여량은 단일 화합물 또는 다른 화합물 또는 다른 암 저해 화합물들과의 혼합물을 함유할 수 있다.

HIV 를 치료하기 위한 본 발명의 방법에 있어서 모든 적합한 투여량이 가능하다. 화합물 및 담체의 유형 및 양은 종 및 온혈동물 또는 사람의 체중에 따라 매우 다양할 것이다. 사용되는 진균제 또는 제초제 및 그들의 유도체 및 HIV 치료제의 범위 및 비율은 제제의 종류에 따라 다를 것이다. 일반적으로, 제초제 또는 진균제 및 그들의 유도체에 대해서, 체중 1 kg 당 약 0.2 밀리그램 (mg) 내지 약 4000 mg 의 투여량이 적합하다. 6000 mg/kg 미만의 더 많은 투여량이 또한 사용될 수 있다. 제초제 또는 살진균제 및 이들의 유도체로서, 바람직하게는 체중에 대해 2 ㎎/㎏, 더욱 바람직하게는 약 20 ㎎/㎏ 내지 고수준으로는 약 3,000 ㎎/㎏ 이 사용된다. 일반적으로, 사람에 대한 투여량은 마우스와 같은 소형 온혈 동물에 대한 것보다 낮다. 단위 투여량은 단일 화합물 또는 다른 화합물과의 혼합물 또는 다른 HIV 치료 화합물을 함유할 수 있다.

단위 투여량은 또한, 희석제, 증량제, 담체 등을 함유할 수 있다. 단위는 환제, 정제, 캡슐제, 리포좀 등과 같은 고체 또는 겔 형태, 또는 종양의 주변 또는 종양 내로의 경구 투여, 직장내 투여, 국소 투여, 정맥내 주사 또는 비경구적 투여 또는 주사에 적합한 액체 형태일 수 있다.

G. 투여 송달 형태

제초제 또는 살진균제 및 이들의 유도체는 통상, 약제학적으로 허용가능한 담체와 혼합된다. 이러한 담체는 고체 또는 액체 또는 리포좀일 수 있고, 그 종류는 일반적으로 사용되는 투여형에 따라 선택된다. 활성제는 정제 또는 캡슐제의 형태, 리포좀, 또는 응괴 분말로서 또는 액체 형태로 함께 투여될 수 있다. 적당한 고체 담체의 예로 락토스, 수크로스, 젤라틴 및 한천이 포함된다. 캡슐 또는 정제는 용이하게 제형화될 수 있고, 삼키거나 씹기에도 용이하게 될 수 있으며; 다른 고체 형태로는 과립제 및 벌크 분말이 포함된다. 정제는 적당한 결합제, 윤활제, 희석제, 붕해제, 착색제, 향미제, 유동제 및 융해제를 함유할 수 있다. 적당한 액체 투여 형태의 예로는 물, 약제학적으로 허용가능한 지방 및 오일중의 용액 또는 현탁액, 알콜, 또는 에스테르를 포함한 다른 유기 용매, 에멀젼, 시럽 또는 엘릭서, 거품이 일지 않는 과립으로부터 재구성된 용액 및/또는 현탁액, 및 거품이 이는 과립으로부터 재구성된 거품이 이는 제제가 포함된다. 이러한 액체 투여 형태는 예를 들어, 적당한 용매, 방부제, 유화제, 현탁화제, 희석제, 감미제, 증점제 및 융해제를 함유할 수 있다. 경구 투여 형태는 임의로, 향미제 및 착색제를 함유한다. 비경구 및 정맥내 형태는 또한, 선택된 주사 또는 송달 시스템의 유형에 상용가능한 미네랄 및 다른 물질을 함유할 수 있다.

본 발명의 경구 투여 형태를 제형화하는 데 사용될 수 있는 약제학적으로 허용가능한 담체 및 부형제의 구체적인 예는 미국 특허 제 3,903,297 호 (Robert, Sept. 2, 1975, Techniques] 에 기재되어 있고, 본 발명에서 유용한 투여 형태를 위한 조성물은 하기 참고 문헌에 기재되어 있다: [7 Modern Pharmaceutics, Chapters 9 and 10 (Banker & Rhodes, Editors, 1979)]; [Lieberman 등, Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets (1981)]; 및 [Ansel, Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms 2nd Edition (1976)].

H. 처리방법

본 처리방법은 처리될 특정 바이러스, 암 또는 종양유형의 처리에 유효한 임의의 적당한 방법일 수 있다. 처리는 경우, 국소, 비경구 또는 정맥내 투여이거나, 종양 등으로의 주입에 의한 것일 수 있다. 유효량의 적용 또는 투여 방법 또한 처리될 종양 또는 바이러스에 따라 달라진다. 적당한 담체와 함께 제형화된 제초성 또는 살진균성 화합물의 정맥내, 피하 또는 근육내 투여에 의한 비경구 처리가 바람직한 것으로 생각되어진다. 제초제 또는 살진균제와 함께 추가적인 항바이러스성 물질이 사용될 수 있을 뿐만 아니라, 추가적인 암 억제 화합물이 처리에 병행되어 사용될 수 있다. 적용 또는 투여를 촉진시키기 위하여 희석제가 사용될 수 있으며, 온혈동물에 상기 화합물을 투여하는 바람직한 방법이다.

바이러스 감염의 처리를 위하여, 본 제초제 또는 살진균제는 7 내지 21 일간, 또는 바이러스의 생장을 억제하거나 죽이기에 필요한 기간동안 투여된다. 만성 간염의 경우, 상기 시약은 수년이내의 보다 긴 기간동안 투여될 필요가 있을 수도 있다.

급성 바이러스 감염 또는 HIV 의 처리를 위해서는, 본 제조성 또는 살진균성 시약을 AZT 처리후 또는 기타 HIV 처리법과 병행하여 투여할 수 있다. 상기 약물은 또한 일차로 체내 HIV 바이러스를 감소시킨 후 상기 바이러스의 복제를 억제하기 위하여 본 제초제 또는 살진균제를 투여하는 순차적인 섭생법에서 투여될 수도 있다. AZT 처리법은 본 제초제 또는 살진균제를 사용하는 처리중에 계속되어질 수 있다. 질병이 초기인 경우, 바이러스의 복제 또는 생장을 멈추게 함으로써 질병의 진행을 완화시키기 위하여, 본 제초제 또는 살진균제가 투여될 수 있다.

바람직하게는, 암처리에서, 암 또는 종양 덩어리의 크기를 현저하게 줄이기 위하여 일차로 본 제초제 또는 살진균제를 투여한다. 이는 대개 3 내지 약 14 일이 소요된다. 종양 또는 암세포의 크기 감소는 원래크기의 50% 미만이 될 때까지이다. 본 제초제 또는 살진균제 처리와 병행하여 방사선 처리법이 사용될 수 있다.

일단 종양이 감소되면, 본 제초제 또는 살진균제를 투여한다. 본 물질은 상대적으로 안전하기 때문에, 암의 생장을 감소시키는 그의 효능을 유지하기 위하여 필요한 14 일 내지 365 일간 투여될 수 있다.

하기의 실시예는 예시를 위한 것으로, 본 발명을 제한하지 않는다.

베노밀(benomyl)은 메틸 1-(부틸카르보닐)-2-벤즈이미다졸카르바메이트이다.

카르벤다짐(carbendazim)은 2-벤즈이미다졸 카르바메이트이다.

티아벤다졸은 2-(4-티아졸릴)-1H-벤즈이미다졸이다.

실시예 1

HIV 시험

HIV 바이러스 복제 연구

만성 감염 HIV 바이러스에서 클로로프로팜(chloropropham) 및 티아벤다졸을 시험하였다. 상기 세포군은 HIV 게놈이 여러개 끼어들어가 있으며, 상대적으로 높은 농도로 HIV 를 지속적으로 제조하거나 (CEM-SK1, U937-SK1 및 H9-SK1; 프레드릭 연구소, 메릴랜드 소재), 또는 잠재적으로 감염되어 포볼 에스테르, 종양괴사인자 또는 IL6 (U1 및 ACH2) 로 자극후에 바이러스만을 생성한다. 시험된 모든 세포주에서 바이러스 생성이 감소되었고, 상기 화합물은 잠재적으로 감염된 세포의 바이러스 생성을 자극하지 않았다. 상청액 리버스 트랜스크립타아제 활성, 상청액 p24 및 세포내 p24 를 정량할 경우, 바이러스 생성의 감소가 관찰되었으며, 이는 상기 화합물들이 세포내 단백질의 생성 이전에 복제단계에서 바이러스 생성을 저해함을 의미한다.

감염된 세포로부터 생성된 비리온의 감염성의 정량화는 상청액 RT 또는 p24 에서의 감소와 비례하여 감염성 비리온의 수에서 감소를 보여주며, 이는 비리온의 질을 감소시키는 것이 아니라 생성된 바이러스의 양을 감소시킴을 의미한다. 표적군에 대해 비독성인 농도에서 만성 감염 세포에서의 바이러스 생성 억제가 관찰되었다. 티아벤다졸은 1-10㎍/ml 이상의 농도에서 바이러스 생성을 억제하는 반면, 클로로프로팜은 0.25㎍/ml 이상의 농도에서 바이러스 생성을 억제하였다.

만성 감염 세포에 대한 독성은 비감염 세포에서 관찰된 것과 유사하였다. 세포 거대분자로의 티미딘 (DNA), 유리딘 (RNA) 및 류신 (단백질) 유입을 측정하여 클로로프로팜 및 티아벤다졸의 만성 감염 세포에 대한 평가를 수행하였다. 예상된 바와 같이 보다 낮은 농도에서는 일어나지 않는 상기 두 화합물의 독성과 비례하는 세포 거대분자 합성의 억제는 만성 감염 세포에서의 바이러스 생성을 억제하는 것이 확인되었다.

상기 화합물을 만성 감염 세포에 처리한 지 28 일후에, 표적세포에 대한 상기 화합물의 독성은 비감염 및 만성 감염 세포 모두에서 유사한 것으로 나타났다. 상기 화합물은 HIV-감염 세포를 우선적으로 죽이지는 않는다. 바이러스 생성 수준의 감소는 안정적이고, 티아벤다졸의 경우 10㎍/ml 이상의 농도에서, 클로로프로팜의 경우 1㎍/ml 이상의 농도에서 관찰되었다.

상기 결과는 클로로프로팜 및 티아벤다졸이 HIV-1 으로 만성 감염된 세포군에서의 바이러스 생성 수준을 신속하게 감소시킬 수 있고, 장기간 화합물 노출의 경우에도 항바이러스 효과가 유지됨을 시사한다. 이러한 바이러스 생성의 감소는 숙주세포에는 비독성이고, 세포내 DNA, RNA 및 단백질의 합성에 영향을 주지 않는 농도에서 일어난다.

바이러스 저항성 연구

첫번째 달에는 1㎍/ml, 두번째 달에는 5㎍/ml, 세번째 달에는 10㎍/ml, 네번째 달에는 20 및 40㎍/ml, 다섯번째 및 여섯번째 달에는 80㎍/ml 티아벤다졸의 존재하에 만성 감염 HIV 세포를 배양하였다. 상기 6 개월의 각각에 대하여 1, 2, 4, 8 및 16㎍/ml 농도의 클로로프로팜을 사용하였다. 각 달의 끝무렵에, 상기 화합물로 처리하지 않은 만성 감염 세포와 비교하여 세포의 바이러스 생성을 평가하였다. 처리 처리 경과 6개월 각각에 대하여, 상기 화합물의 항바이러스 효과에 변화가 없음이 확인되었으며, 상기 화합물의 독성은 동일하게 유지되었다. 상기 화합물은 HIV 에 대하여 활성을 유지하였고, 이러한 저항성은 내성 바이러스의 선별 또는 세포가 화합물에 의해 유도되는 독성을 방지하는 적응을 통하여 신속하게 달성되지는 않았다. 40 및 80㎍/ml의 티아벤다졸 및 8 및 16㎍/ml 의 클로로프로팜을 처리한 배양액에서 바이러스 생성은 전체적으로 억제되었다.

예비처리된 만성 감염 세포에서 바이러스 생성의 재현

장기간 상기 화합물로 처리된 만성 감염 세포에서 상기 화합물을 완전히 세정한 후, 바이러스 생성이 재개되는지의 여부 및 언제 재개되는지를 확인하기 위하여 배양하였다. 본 검정에서는, 상기 화합물을 처리하여 바이러스의 생성이 완전히 제거된 배양물을 사용하였다. 상기 배양물로는 20, 40 및 80㎍/ml의 티아벤다졸 및 4, 8 및 16㎍/ml 의 클로로프로팜의 존재하에 배양한 만성 감염 세포가 있다. 보다 낮은 농도의 각 화합물의 존재하에 (20㎍/ml 및 4㎍/ml) 배양한 세포에서, 4 일 이내에 바이러스 생성이 재개되었다. 40㎍/ml 티아벤다졸 농도에서는 12 일째에, 8㎍/ml 클로로프로팜 농도에서는 54 일째에 바이러스 생성이 재개되었다. 최대 농도에서는, 약 70 일째에 바이러스 생성이 관찰되었다.

클로로프로팜 및 티아벤다졸로 처리한 세포의 감염성

장기간 클로로프로팜 및 티아벤다졸로 예비처리된 세포에서 상기 화합물을 완전히 세정하여 표적세포군으로 사용하였다. 상기 세포를 3 개의 군으로 나누어 1, 2, 또는 3 군으로 표시하였다. 1 군은 상기 화합물로 24 시간동안 (장기간 처리 상에서 사용된 것과 동일한 농도) 처리한 후, 상기 화합물을 완전히 세정하고, 감염성 바이러스 및 새로운 화합물의 존재하에 배양하였다. 2군은 24 시간동안 예비처리한 후, 상기 화합물을 완전히 세정하고, 감염성 바이러스만의 존재하에 배양하였다. 3군은 예비처리 및 신선한 배지(바이러스나 화합물이 없음)에서의 감염 상 모두를 위해 배양하였다. 세포군에서의 바이러스 생성은 배양조건과 관계없이 동일하였다. 이러한 결과는 장기간 처리한 만성 감염 세포가 HIV 로 슈퍼감염되지 않았음을 나타낸다.

만성 HIV 의 추가적인 연구

만성 HIV-1 감염 세포 U1 은 프로모노사이트 세포주인 U937 의 급성 HIV-1 감염으로부터 유래되었다. 만성 HIV-1 감염세포인 ACH-2 는 T 세포주인 A3.01 의 급성 HIV-1 감염으로부터 유래되었다.

상기 세포를 포볼 에스테르, PMA 를 함유하는 배지에서 배양하였다. PMA 는 세포 (U1 및 ACH-2 모두) 를 활성화시키고, 분열시키지는 않으나, U1 세포의 분화를 유도한다. 이는 배지에서만 자란 배양물에서보다 PMA-처리 배양물내 세포의 수가 더 적어지는 결과를 초래한다. 상기 세포를 시험 화합물로 처리한 경우 세포의 생존력을 측정하였다.

두 세포주 모두 지속적으로 소량의 HIV-1 을 생성한다. ACH-2 세포주는 p-24 ELISA 에 의해 나타낸 바와 같이 U1 세포에서보다 많은 HIV-1 을 생성하는 경향이 있다. 둘중 하나의 세포주를 PMA 존재하에 배양할 경우, p-24 항원 ELISA 에 의해 측정할 경우, 생성되는 HIV-1 의 양에 증가가 있다.

추가로, 현미경 필드당 포지티브 HIV mRNA 발현세포의 수를 측정한다. 각 약물 농도당 글래스 슬라이드에 동일한 수의 세포가 부착되기 때문에 (10x10⁶세포/ml), 상기의 수와 비교할 수 있다.

상기 세포를 시험시료로 처리하였다. 60㎍/ml 농도의 티아벤다졸은 HIV 모노사이트에서의 복제를 74% 까지 억제하였으며, T-세포 HIV 복제는 26% 로 증가하였다. 포지티브 대조군은 AZT 로서, HIV 모노사이트에서의 복제를 1㎍/ml 농도에서 98% 까지 억제하였으며, T-세포 HIV 복제는 60% 까지 억제하였다. 약물의 유효 투여량에 대한 독성 투여량의 비율인 처리지수 (TI) 는, 티아벤다졸의 경우 2.8 인데 비해 AZT 의 경우 12,500 이다.

급성 HIV 모델

급성 HIV 체외 모델에서, 그리세오풀빈은 처리지수 5.3 으로서 10㎍/ml 농도에서 바이러스의 복제를 98% 까지 억제하였다. 공지된 HIV 약물인 AZT 또한 처리지수 12,500 으로서 1㎍/ml 농도에서 바이러스의 복제를 98% 까지 억제하였다. 처리지수는 약물의 유효 투여량에 대한 독성 투여량의 비율이다.

실시예 2

결장, 유방 및 폐 종양세포 시험

본 제초성 또는 살진균성 화합물의 결장, 유방 및 폐 인간 종양세포에 대한 독성을 시험하기 위하여 하기의 세포 배양 시험을 수행하였다. 세포의 생존력은 MTT (3-[4,5-디메틸티아졸-2-일]-2,5-디페닐테트라졸륨 브로미드) 감소를 조사함으로써 시험하였다.

결장 종양세포 (HT29; American Type Culture Collection (ATCC)) 및 유방세포 (MX1; ATCC 세포주) 를 10% 소 태아 혈청을 함유하는 이글의 최소 필수배지에서 배양하였다. 폐 종양세포 (A549; ATCC 세포주) 는 10% 소 태아 혈청을 함유하는 햄의 F12 배지에서 배양하였다.

상기 종양세포를 증식시켜 원하는 세포밀도로 배양 플라스크에 접종하였다. 배양배지를 따라낸 후, 세포층을 인산염으로 완충시킨 생리식염수 (PBS) 로 2회 세정하였다. 세포에 트립신을 처리하여 플라스크에 접종하기 전에 단일세포화시켰다. 따로 나타내지 않는다 할지라도, 배양액을 공기중에 5±1% 이산화탄소를 함유하는 37±1℃ 의 가습대기에서 항온배양하였다. 배양액을 50-80% 정도로 찰 때까지 항온배양하였다.

플라스크가 거의 찼을 때, 상기 세포를 계대배양하였다. 배지를 플라스크로부터 흡입해내고, 세포층을 PBS 로 2회 헹구었다. 다음으로, 각 플라스크에 세포층을 덮도록 트립신 용액을 첨가하였다. 30-60 초후에 트립신 용액을 제거하고, 플라스크를 실온에서 2 내지 6 분동안 항온배양하였다. 90% 의 세포가 떨어져 나왔을때, 생장배지를 첨가하였다. 세포를 단일화시키고 멸균 원심분리 튜브에 옮겼다. 현탁액중 세포의 농도를 측정하고, 5000 세포/ml 의 밀도가 되도록 적당히 희석하였다. 세포를 96-웰 바이오어세이 플레이트의 표시된 웰에 계대배양하였다 (웰당 200 마이크로리터). 나머지 웰에는 PBS 를 첨가하여 습도를 유지하였다. 이후, 상기 플레이트를 시험물 처리전까지 밤새 항온배양하였다.

각 희석액 100 마이크로리터를 사용하여 4중으로 배양중인 웰에 처리하여 시험물을 각 투여량별로 시험하였다. 용매 대조군용으로 표시된 웰에는 추가로 100 마이크로리터의 메탄올 대조군을 첨가하였고 네가티브 대조군 웰에는 추가로 100 마이크로리터의 처리배지를 첨가하였다. 시험물 또는 배지를 처리하지 않은 나머지 웰에는 PBS 를 첨가하였다. 상기 플레이트를 약 5 일동안 항온배양하였다.

배양 5 일 후, 각각의 투여군은 독성 평가를 위해 현미경으로 검사한다. 0.5 mg/ml 의 MTT 희석액을 처리 배양액으로 만들고, 희석액은 0.45 마이크로미터 필터를 통해 여과하여 용해되지 않은 결정을 제거한다. 배양액은 생물검사 플레이트의 웰로부터 기울여 따른다. 바로 직후에, 2000 마이크로리터의 여과된 MTT 용액을 두 미처리 블랭크 시험 웰을 제외한 모든 테스트 웰에 가한다. 두 블랭크 웰은 200 마이크로리터의 처리 배양액을 받는다. 플레이트를 약 3 시간 동안 배양기로 반송시킨다. 배양 후, 배양액을 함유하는 MTT 를 기울여 따른다. 과량의 배양액을 각각의 웰에 가하고 플레이트를 실온에서 약 2 시간 동안 진탕한다.

각각의 웰의 550 nm 에서의 흡광도를 몰레큐러 디바이스 (Menlo Park, CA) VMax 플레이트 판독기로 측정한다.

용매 대조 웰, 각 시험 품목 희석액, 각 블랭크 웰, 및 포지티브 대조의 평균 OD₅₅₀을 계산한다. 블랭크 웰의 평균 OD₅₅₀을 용매 대조 웰 및 시험 품목 웰의 평균에서 각기 빼서 대응하는 평균 OD₅₅₀을 얻는다.

대조 % =

[(시험 품목 희석액의 보정 평균 OD₅₅₀)/(용매 대조의 보정 평균 OD₅₅₀)] X 100

투여량 반응 곡선은 세로좌표 (일차) 의 대조 % 와 가로좌표 (대수) 의 시험 품목 농도를 세미-로그 플롯하여 제작한다. EC₅₀은 각 시험 품목에 대한 플롯으로 부터 보간한다.

메탄올 내에서 투여된 시험 품목에 대하여, 개별 반응은 메탄올 자료에 대한 보정으로 제작된다.

아드리아마이신은 포지티브 대조로 사용한다. 모든 경우에, 1 또는 2 로그 만큼 시험 물질의 독성 보다 더 독성이 있었다. 아드리아마이신은 현재 사용되고 있는 더 효능있고 유의적인 부효과가 없는 약품중의 하나이다. 꽤 효과적인 화학치료제인 기타 약제의 피이크 플라즈마 농도는 아드리아마이신 보다 10 내지 50 배 더 높을 수 있다.

EC₅₀은 세포의 반이 죽는 농도이다.

하기 표는 여러 살균제 및 제초제에 대한 시험 결과를 나타낸다. 정상의 건강한 세포에 대한 이들 동일한 물질의 효과도 제공한다.

시험 물질	EC-50 결과 (ppm)
	HT29	HT29	MXI	MXI	A549	A549
아드리아마이신	0.03	0.006	0.02	0.001	0.03	0.009
베노밀	0.742	0.747	1.42	2.42	0.980	1.02
카르벤다짐	0.621	0.662	0.829	0.856	0.856	0.836

정상의 건강한 세포는 하기 결과가 얻어진다.

시험 물질	EC-50
	기관지 세포	케로티노일 세포	섬유 아세포
베노밀	0.728	0.682	3.26	2.4	3.24	2.81
카르벤다진	0.320	0.506	0.752	0.822	1.52	1.42
아드리아마이신	0.015	0.0020	0.0035	0.0093	0.065	0.10

폐 종양 세포 (A-549), 유방 종양 세포 (MCF-7), 및 결장 종양 세포 (HT-29) 를 사용한 관련 연구에서, 전신계 살균제인 티아벤다졸은 효과적으로 이들 세포를 죽인다. 표 3 은 결과를 요약한 것이다.

농도 (ppm)	광학 밀도
	A-549	MCF-7	HT-29
0-대조	0.600	0.245	0.398
173	0.007	0.007	0.005
35	0.411	0.025	0.011
17.3	0.851	0.258	0.204
3.46	1.12	0.466	0.713
0.87	1.32	0.507	0.852

클로로프로팜의 시험 결과를 표 4 및 표 5 에 나타낸다.

시험 물질	EC-50 결과 (ppm 또는 마이크로그램/ml)
	HT29	HT29	MXI	MXI	A549	A549
아드리아마이신	0.003	0.006	0.02	0.001	0.03	0.009
클로로프로팜	13.3	11.4	91.8	108	12.6	92.5

정상의 건강한 세포에서 하기 결과가 얻어진다.

시험 물질	EC-50
	기관지 세포	케로티노일 세포	섬유 아세포
클로로프로팜	0.002	>15.2	3.9	13.0	>152	64.2
아드리아마이신	0.015	0.0020	0.0035	0.0093	0.065	0.10

글리포세이트의 시험 결과를 표 6 및 7 에 제공한다.

시험 물질	EC-50 결과 (ppm)
	HT29	HT29	MXI	MXI	A549	A549
아드리아마이신	0.003	0.006	0.02	0.001	0.03	0.009
글리포세이트	5.41	3.73	36.5	14.6	25.9	22.3

정상의 건강한 세포에서, 하기 결과를 수득한다:

시험 물질	EC-50
	기관지 세포	케로티노일 세포	섬유 아세포
글리포세이트	1.59	3.54	3.09	3.21	86.1	35.8
아드리아마이신	0.015	0.0020	0.0035	0.0093	0.065	0.10

클로로프로팜 및 글리포세이트 혼합물도 또한 시험된다. 결과를 표 8 및 9 에 나타낸다.

시험 물질	EC-50 결과 (ppm)
	HT29	HT29	MXI	MXI	A549	A549
아드리아마이신	0.003	0.006	0.02	0.001	0.03	0.009
클로로프로팜	13.3	11.4	91.8	108	12.6	92.5
글리포세이트	5.41	3.73	36.5	14.6	25.9	22.3
1:1 혼합물^*	1.96	1.61	9.70	8.78	10.8	10.1
* 클로로프로팜 및 글리포세이트 등록상표의 혼합물

보통의 건강한 세포에서 하기 결과를 얻는다.

시험 물질	EC-50
	기관지 세포	케로티노일 세포	섬유 아세포
클로로프로팜	0.002	>15.2	3.9	13.0	>152	64.2
글리포세이트	1.59	3.54	3.09	3.21	86.1	35.8
1:1 혼합물^*	0.001	0.497	0.242	0.286	129	5.95
아드리아마이신	0.015	0.0020	0.0035	0.0093	0.065	0.10
* 클로로프로팜 및 글리포세이트 등록상표의 혼합물

표 10 은 프로피콘아졸을 사용한 시험 결과를 나타낸다.

시험 물질	EC-50 결과 (ppm)
	HT29	MX1	AS549
아드리아마이신	0.00639	0.00078	0.00373
프로피콘아졸	0.0331	0.0284	0.113

백혈병 연구

마우스를 무작위로 선택하여 처리군으로 나눈다. 5 군은 백혈병으로 감염시킨다. 병이든 동물들은 5 일간 복용시키고, 2 일간 복용시키지 않은 후 다른 5 일간 복용 시키고 이어서 3 일간 복용 시키지 않은 후 5 일간 복용시키고 2 일간 복용 시키지 않는다. 불규칙적인 패턴으로 복용을 시키고 안시키는 것은 이상적인 식이요법이 아니지만 결과는 카르벤다짐^TM에 대하여 양성 효과를 나타낸다. 1 군의 마우스를 시톡산^TM, 2-[비스(2-클로로에틸)아미노-1-옥소-2-아자-5-옥소포스포리딘, 으로 처리하고, 대조군은 카놀라 오일을 복용시키며 3 군은 여러가지 레벨의 카르벤다짐^TM, 메틸 (부틸카르바모일)-2-벤즈이미다졸-카르바메이트로 처리한다. 비처리된 대조군도 또한 사용된다. 카르벤다짐^TM는 4000 mg/kg, 2500 mg/kg 및 1000 mg/kg 의 세 레벨로 복용시킨다. 시톡산^TM은 125 mg/kg 으로 복용시킨다. 8 일 후, 비 처리군은 1 마리의 마우스가 손실되고, 10 일 까지 8 마리의 마우스가 죽었으며 11 일 째는 10 마리의 마우스 모두가 죽었다. 시톡산^TM처리군에서 마우스는 21 일 이상 생존하였다. 가장 많은 복용을 한 카르벤다짐^TM군은 14 일에 한 마리의 마우스가 죽었고, 15, 16 및 17 일에 두 마리의 마우스가 죽었으며, 20, 21 및 22 일에 각기 한 마리의 마우스가 죽었다. 이러한 군에 대한 평균 일 수는 17.3 이다. 중간 복용군은 14 일에 2 마리의 마우스가 죽었고, 15 일에 4 마리의 마우스가 죽었으며, 16 일에 한 마리의 마우스가 죽었고, 19 일에 2 마리의 마우스가 죽었으며 21 일에 1 마리의 마우스가 죽었다. 이러한 군에 대한 평균 일 수는 16.50 이다. 가장 작은 복용군은 12, 13, 14 및 15 일에 2 마리의 마우스가 죽었고, 16 및 17 일에 각기 1 마리의 마우스가 죽었다. 이러한 군에 대한 평균 일 수 는 14.1 이다.

백혈병에 대한 생체내 마우스 모델에서, P388, 카르벤다진은 1000 mg/kg 에서 129 % 만큼, 2000 mg/kg 에서 148 % 만큼, 4000 mg/kg 에서 189 % 만큼 대조군에 대하여 마우스의 수명을 연장 시켰다.

마우스 암 모델

유방, 폐 및 결장 암에 대한 마우스 모델에서 카르벤다짐은 종양의 성장을 늦추었다. 마우스 피부 하에서 피하 이식된 MXI 유방 암 종양을 500 mg/kg 의 카르벤다짐으로 처리한다. 종양 성장은 42 % 로 늦추어 졌다. 카르벤다짐은 마우스 피부하에서 피하 이식된 폐 A549 종양에서 종양 성장을 동일한 복용량에서 57 % 까지 늦추었다. 마우스 피부 하에서 피하 이식된 HT29 종양의 스크린 시험에서, 종양 성장은 카르벤다짐 2500 mg/kg 복용에서 54 % 늦추어 졌다.

유방 암에 대한 마우스 모델에서 시톡산은 동물에 투여되었을 때 종양 매스를 상당히 감소시켰다. 카르벤다짐은 별개의 다리에 4000, 5000, 및 6000 mg/체중 kg 으로 마우스에 투여되었다. 종양은 크기가 연속해서 감소되었으며 종양의 재성장은 카르벤다짐 치료로 180 일 이후에도 제한되었다. 성장은 복용량에 의존된다. 시톡산 처리 된 대조군은 100 일 후에 종양이 재성장되었으며; 115 일에 에스트로겐으로 자극되었을 때 빠르게 재성장되었다. 에스트로겐 자극으로도, 카르벤다짐 처리 동물들은 종양 매스에서 유의적인 변화는 없었다. 130 일 후, 시톡산으로 처리된 (4000, 5000, 및 6000 mg/체중 kg) 마우스에 카르벤다짐을 투여한다. 종양은 연속해서 크기가 줄었고 그의 재성장은 180 일 후에도 제한되었다.

백혈병 (P388) 에 대한 생체내 마우스 연구에서, 그리세오풀빈은 비처리군에 대하여 4000 mg/kg 복용량에서 156 %, 5000 mg/kg 에서 188 %, 6000 mg/kg 복용량에서 218 % 만큼 생존 시간을 증가시키는 것으로 나타났다.

흑색종에 대한 마우스 모델

흑색종 (B16) 에 대한 생체내 마우스 모델에서, 카르벤다진은 대조군에 대하여 1000 mg/kg 에서 131 %, 2000 mg/kg 에서 163 %, 4000 mg/kg 에서 187 % 만큼 수명을 연장시켰다.

카르벤다진이 0.5 mg/kg 내지 2.0 mg/kg 으로 나벨바인과 화합되었을 때, 카르벤다진의 유료 복용량은 흑생종에 대한 생체내 마우스 모델에서 작아진다.

투여량 카르벤다진 (㎎/㎏)	투여량 나벨빈 (㎎/㎏)	비처리 마우스에 대한 생존 시간에서의 증가율 %
4,000	0.5	255
4,000	1.0	298
4,000	2.0	268
2,000	0.5	259
2,000	1.0	265
2,000	2.0	287
1,000	0.5	207
1,000	1.0	233
1,000	2.0	245
-	0.5	190
-	1.0	245
-	2.0	265

흑색종 (B16) 에 대한 마우스 생체내 연구에서, 그리세오풀빈은 비처리 대조군에 비해 생존 시간에 있어서 하기와 같이 증가를 나타낸다: 4,000 ㎎/㎏ 투여시 165 %; 5,000 ㎎/㎏ 투여시 179 %; 및 6,000 ㎎/㎏ 투여시 201 %. 300 ㎎/㎏ 에서 사이톡산은 192 % 의 증가된 생존율을 나타낸다.

실시예 3

사람 인플루엔자 바이러스를 사용한 항바이러스 평가

수령시 5∼7 주령인 암컷 CD (마우스, Charles River Breeding Laboratories, Portage, MI) 를 사용한다. 마우스는 약 6∼9 주령이며, 시험 시작시 약 20∼28 그램이다. 연구에 사용된 모든 마우스는 나이 차이가 10 일 이하이다. 마우스를 베드가 있는 케이지에 6 마리씩 사육한다. 마우스에게 설치류 식이 5002 (PMI, St. Louis Missouri) 를 임의 섭식시킨다. 신선한 물을 마우스에게 임의 섭식시킨다.

사람 인플루엔자 바이러스, 균주 AT2/대만/1/64 를 사용하여 마우스에게 감염 시도한다. 미생물을 약 -70 ℃ 에 보관한다. 감염 시도전, 동결된 원액의 바이알을 해동하고, 완충 식염수에 적당한 비율로 희석한다. 마우스를 할로탄으로 마취시키고, 바이러스 감염량을 50 마이크로리터의 부피로 비강내 투여한다.

시험 물질을 하기에 나타낸 농도 및 부피로 투여한다. 제 1∼14 일에, 군당 10 마리의 마우스에게 시험 물질을 경구 세척에 의해 투여한다. 식염수 대조 동물 (10) 에게는 시험 물질을 투여한 마우스와 비슷한 부피의 식염수를 투여한다. 시험 물질 투여는 약 24 시간 간격으로 수행한다. 제 0 일에 시험 물질 또는 식염수의 두번째 투여로부터 약 4 시간 후, 모든 마우스에게 약 90 % 의 치사율을 나타낼 것으로 계산된 감염 투여량을 비강내로 감염시킨다. 감염 시도후 21 일 동안 치사율 및 빈사율에 대해 동물들을 관찰한다.

시험 물질 투여량 (㎎/㎏) 치사율

플루코나졸 350 0 %

플루코나졸 700 30 %

식염수 - 100 %

아만타딘 75 0 %

식염수 대조군에서는 마우스가 전혀 생존하지 못한 데 비해, 프로피코나졸을 175 ㎎/㎏ 투여했을 때 40 % 의 마우스가 생존했다.

실시예 4

리노바이러스를 사용한 항바이러스 평가

리노바이러스 타입 A-1, 세포주 WI-38 에 대한 스크리닝 (in vitro) 에서, 프로피코나졸은 32 ㎕/㎖ 에서 유효하다. 양성 대조는 Abbot Company 의 A-36683, (S,S)-1,2-비스(5-메톡시-2-벤즈이미다졸릴)-1,2-에탄디올이다. A-36683 은 1,000∼3,200 의 치료 지수를 갖는다. 피로피코나졸은 1∼3 의 치료 지수를 갖는다. (참조: 문헌[Schleicher 등, Applied Microbiology, 23, No. 1, 113∼116 (1972)]).

리노바이러스, 타입 A-1, 세포주 WI-38 에 대한 스크리닝 (in vitro) 에서, 그리세오풀빈은 100 ㎕/㎖ 에서 유효하다. 양성 대조는 Abbot Company 의 A-36683, (S,S)-1,2-비스(5-메톡시-2-벤즈이미다졸릴)-1,2-에탄디올이다. A-36683 은 1,000∼3,200 의 치료 지수를 갖는다. 그리세오풀빈은 1∼2 의 치료 지수를 갖는다. (참조: 문헌[Schleicher 등, Applied Microbiology, 23, No. 1, 113∼116 (1972)]).

실시예 5

사람 종양 콜로니를 형성하는 단위 시험 (in vitro)

환자에 의해 제거된 고체 종양을 2∼5 ㎜ 분절로 분쇄한 후, 즉시 맥코이 배지 5A + 10 % 열 불활성화된 신생 송아지 혈청 + 1 % 페니실린/스트렙토마이신에 보관한다. 4 시간 내에, 이들 고체 종양을 가위로 물리적으로 분해한 후, 스테인레스 스틸 메시 100 호로 통과시키고, 25 게이지 바늘로 통과시킨 다음, 상기 맥코이 배지로 세척한다. 복수, 늑막, 위심액 및 골수를 통상적인 기술에 의해 수득한다. 유액 또는 골수를, 악성 유액 또는 골수 1 ㎖ 당 10 단위의 방부제가 없는 헤파린을 함유한 멸균 용기에 보관한다. 150×g 에서 10 분간 원심분리한 후, 세포를 맥코이 배지 + 10 % 열 불활성화된 송아지 혈청으로 배양 및 세척한다. 세포 현탁액의 생존율을 트리판 블루를 사용하여 혈구계수기 상에서 측정한다.

크로닝할 세포를 하기 물질이 보충된 CMRL 1066 내의 0.3 % 한천에 현탁시킨다: 15 % 열 불활성화된 말 혈청, 페니실린 (100 단위/㎖), 스트렙토마이신 (2 ㎎/㎖), 글루타민 (2 mM), 인슐린 (3 단위/㎖), 아스파라긴 (0.6 ㎎/㎖) 및 HEPES 완충액 (2 mM). 연속적 노출 시험을 위해, 각 화합물을 상기 혼합물에 첨가한다. 한천 하부층 위의 한천 상부층이 있는 35 ㎜ 페트리 접시에 세포를 둔어 섬유아세포의 증식을 방지한다. 3 개의 플레이트를 각 데이타 지점을 위해 준비한다. 플레이트를 37 ℃ 배양기에 두고 14 일 후, 각 플레이트의 콜로니 수를 센다. 3 가지 화합물이 처리된 플레이트에 형성된 콜로니의 수 (50 세포로 정의됨) 를 3 개지 대조 플레이트에 형성된 콜로니의 수와 비교하고, 화합물의 농도에서 생존한 콜로니의 백분율을 계산한다. 3 개의 양성 대조 플레이트를 사용하여 생존율을 측정한다. 200 ㎕/㎖ 의 오르토소듐 바나데이트를 양성 대조로 사용한다. 비처리 대조군과 비교하였을 때 양성 대조군의 콜로니가 < 30% 이면, 시험이 평가된다.

단일 투여량 실험에서 농도가 0.5 내지 5.0 ㎕/㎖ 일 때, 프로피코나졸은 본 시험의 종양에 대해 유효하지 않다 (0/1). 연속적 노출 실험에서 농도가 50.0 ㎕/㎖ 일 때, 프로피코나졸은 결장, 폐 (비 소세포) 흑색종 및 난소암에 대해 유효하다. 전체 8 중 6 이 ≤ 50 % 의 생존율을 나타낸다.

단일 투여량 실험에서 농도가 0.5 내지 5.0 ㎕/㎖ 일 때, 그리세오풀빈은 본 시험의 종양에 대해 유효하지 않다 (0/1). 연속적 노출 실험에서 농도가 50.0 ㎕/㎖ 일 때, 그리세오풀빈은 결장, 폐, 비 소세포, 흑색종 및 난소암에 대해 유효하다. 전체 6 중 5 가 ≤ 50 % 의 생존율을 나타낸다.

단일 투여량 실험에서 농도가 0.5 내지 5.0 ㎕/㎖ 일 때, 프로피코나졸은 본 시험의 종양에 대해 유효하지 않다 (각각 0/3 및 0/13). 연속적 노출 실험에서 농도가 50.0 ㎕/㎖ 일 때, 프로피코나졸은 결장, 폐, 비 소세포, 흑색종 및 난소암에 대해 유효하다. 전체 13 중 4 가 ≤ 50 % 의 생존율을 나타낸다.

Claims

약제학적으로 허용가능한 부형제와 함께 제초제, 살진균제, 제초제 유도체, 살진균제 유도체, 그의 약제학적으로 허용가능한 유기 또는 무기 산 부가염, 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나를 700 mg 내지 6000 mg 포함하는 것을 특징으로 하는, 온혈 포유동물의 바이러스 감염을 치료하기위한 약제학적 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 바이러스 감염이 식물, 진균 또는 몰드의 유전 물질을 포함하는 바이러스에 의해 야기되는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 바이러스 감염이 HIV 감염인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 3 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물에 항바이러스제, 바람직하게는 전사효소 억제제 또는 프로테아제 억제제를 첨가하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 1 항 내지 4 항중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물내에 약 3000 mg 내지 약 6000 mg 의 상기 제초제 또는 살진균제가 존재하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 5 항에 있어서, 수용액, 알콜 용액, 유화액, 현탁액, 및 비거품성 제제 및 거품성 제제로 재구성된 현탁액, 및 약제학적으로 허용 가능한 지방 또는 오일중 현탁액으로 구성된 군으로부터 선택되는 액체 형태로 제조된 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 3 항 내지 5 항중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물에 HIV 약물을 첨가하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 1 항 내지 7 항중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물에 상승제를 첨가하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
약제학적 허용 가능한 부형제와 함께 제초제, 살진균제, 제초제 유도체, 살진균제 유도체 또는 약제학적으로 허용가능한 그의 유기 또는 무기 산 부가염으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나를 700 mg 내지 6000 mg 함유하는 것을 특징으로 하는, 암 치료용 약제학적 조성물.
제 9 항에 있어서, 상기 암 세포가 식물, 진균 또는 몰드의 유전 물질을 함유하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 9 항 또는 10 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물에 상승제를 첨가하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 10 항 또는 11 항에 있어서, 약 3000 mg 내지 약 6000 mg 의 상기 제초제 또는 살진균제 또는 살진균제 유도체 또는 제초제 유도체를 포함하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 12 항에 있어서, 상기 제초제 또는 살진균제와 함께 화학치료제를 첨가하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 13 항에 있어서, 상기 화학치료제가 DNA-내부반응제(intrareactive agent), 항대사물 또는 튜불린-내부반응제, 바람직하게는, 아스파라기나제, 히드록시우레아, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 알트레타민 ; 블레오마이신, 닥티노마이신, 독소루비신, 에토포사이드, 테니포사이드, 및 플리카마이신, 메토트렉세이트, 플루오로우라실, 플루오로데옥시우리딘, CB3717, 아자시티딘, 시타라빈, 플록스우리딘, 메르캅토퓨린, 6-티오구아닌, 펜토스타틴, 시크트라빈 및 플루다라빈으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 14 항에 있어서, 상기 화학치료제가 리포좀 형태인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 9 항 내지 15 항중 어느 한 항에 있어서, 약 0.5 mg 내지 약 400 mg 의 화학치료제가 사용되는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 13 항 내지 16 항중 어느 한 항에 있어서, 상기 제초제 또는 살진균제가 수용액, 알콜 용액, 유화액, 현탁액, 및 비거품성 제제 및 거품성 제제로 재구성된 현탁액, 및 약제학적으로 허용 가능한 지방 또는 오일중 현탁액으로 구성된 군으부터 선택된 액체 형태인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제초제, 살진균제, 제초제 유도체, 살진균제 유도체, 그의 약제학적으로 허용가능한 유기 또는 무기 산 부가염, 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나의 안전 유효량을 약제학적으로 허용가능한 부형제와 혼합하는 것을 특징으로 하는, 온혈 포유동물의 바이러스 감염을 치료하기위한 약제학적 조성물의 제조 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물을 제조하여 식물, 진균 또는 몰드의 유전 물질을 포함하는 바이러스에 의해 야기된 바이러스 감염을 치료하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 또는 2 항에 있어서, 바이러스 감염이 HIV 감염인 것을 특징으로 하는 방법.
제 3 항에 있어서, 약제학적 조성물에 항바이러스제, 바람직하게는 트랜스크립타제 저해제 또는 프로테아제 저해제를 첨가하는 방법.
제 1 항 내지 제 4 항중 어느 한 항에 있어서, 조성물의 제조에 상기 제초제 또는 살진균제 약 0.2 mg 내지 약 6000 mg 을 사용하는 방법.
제 5 항에 있어서, 수용액, 알콜 용액, 유탁액, 현탁액, 비거품성 및 거품성 제제로 재구성된 현탁액, 및 약제학적으로 허용가능한 지방 또는 오일로 구성된 군으로부터 선택되는 액체 형태로 혼합물을 제조하는 방법.
제 3 항 내지 제 5 항중 어느 한 항에 있어서, 상기 제초제 또는 살진균제 약제학적 조성물에 HIV 약물을 첨가하는 방법.
제 1 항 내지 제 7 항중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물에 상승제를 첨가하는 방법.
약제학적으로 허용가능한 담체에 안전 유효량의 제초제, 살진균제, 제초제 유도체, 살진균제 유도체 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 유기 또는 무기 산부가염을 첨가하는 것을 특징으로 하는 암치료용 조성물의 제조방법.
제 9 항에 있어서, 식물, 진균 또는 몰드의 유전물질을 포함하는 암을 치료하기 위하여 상기 조성물을 제조하는 방법.
제 9 항 또는 제 10 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물에 상승제를 첨가하는 방법.
제 11 항에 있어서, 약 2 mg 내지 약 4000 mg 의 상기 제초제 또는 살진균제 또는 제초제 유도체 또는 살진균제 유도체를 첨가하는 방법.
제 12 항에 있어서, 상기 제초제 또는 살진균제와 함께 화학치료제를 첨가하는 방법.
제 13 항에 있어서, 상기 화학치료제가 DNA-내부반응제, 항대사물 또는 튜불린-내부반응제, 바람직하게는, 아스파라기나제, 히드록시우레아, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 알트레타민 ; 블레오미신, 닥티노미신, 독소루비신, 에토포시드, 테니포시드, 및 플리사미신, 메토트렉세이트, 플루오로우라실, 플루오로데옥시우리딘, CB3717, 아자시티딘, 시타라빈, 플록스우리딘, 메르캅토퓨린, 6-티오구아닌, 펜토스타린, 시크트라빈 및 플루다라빈으로 구성된 군으로부터 선택된 것임을 특징으로 하는 방법.
제 14 항에 있어서, 상기 화학치료제가 리포좀의 형태인 것을 특징으로 하는 방법.
제 9 항 내지 15 항중 어느 한 항에 있어서, 약 150 mg 내지 약 4000 mg 의 상기 제초제 또는 살진균제를 첨가하고 약 0.5 mg 내지 약 400 mg 의 화학치료제를 사용한 것을 특징으로 하는 방법.
제 13 내지 16 항중 어느 한 항에 있어서, 상기 제초제 또는 살진균제가 수용액, 알콜 용액, 유화액, 현탁액, 및 비거품성 제제 및 거품성 제제로 재구성된 현탁액 및 약제학적으로 허용 가능한 지방 또는 오일중 현탁액으로부터 선택된 액체 형태인 것을 특징으로 하는 방법.