KR19990028819A - Hgf 동결 건조 제제 - Google Patents

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이시카와 데쓰로
유키지루시 뉴교 가부시키가이샤
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Abstract

본 발명은 HGF를 함유하는 수용액을 동결 건조시킨 HGF 동결 건조 제제 및 안정화제, 염화나트륨, 완충제 및/또는 계면활성제 등을 첨가한 HGF 동결 건조 제제에 관한 것이다. 본 발명에 따르면 HGF를 안정화시킬 수 있으며 장기간 동안 보존할 수 있게 된다.

Description

ＨＧＦ 동결 건조 제제
HGF는 간 실질 세포의 증식 활성이 있는 단백질이며 상이한 아미노산 서열을 갖는 것으로 보고되어 있으며 이의 명칭도 HGF, TCF, SCF 등이 사용되고 있다. 본 발명에서 이들 공지된 간 실질 세포 증식 활성이 있는 단백질을 HGF라고 총칭한다.
HGF는 다양한 약리작용을 나타내는 생리활성 펩타이드이며 이의 약리작용에 대해서, 예를 들면, 문헌[참조: 짓켄이가쿠 Vol. 10, No. 3(증간) 330 내지 339(1992)]에 기재되어 있다. HGF는 이의 약리작용으로부터 간경변 치료제, 신질환 치료제, 상피세포증식촉진제, 항암제, 암요법용 부작용 방지제, 폐장애 치료제, 위 및 십이지장 손상 치료제, 뇌신경 장애 치료제, 면역 억제 부작용 방지제, 콜라겐 분해 촉진제, 연골 장애 치료제, 동맥질환 치료제, 폐선유증 치료제, 간장 질환 치료제, 혈액응고 이상 치료제, 혈장 저단백 치료제, 창상 치료제, 신경 장애 개선약제, 조혈 간세포 증가제, 모발 생육촉진제 등[참조: 일본 공개특허공보 제(평)4-18028호, 제(평)4-49246호, 제(평)6-25010호, 제(평)6-172207호, 제(평)7-89869호, 제(평)6-40934호, 제(평)6-40935호, 제(평)6-56692호, 제(평)7-41429호 및 제(평)5-213721호 및 EP 제492614호, WO 93/8821호, WO 94/2165호 및 WO 93/3061호]으로서의 개발이 기대되고 있다.
HGF의 제제에 대해 WO 90/10651호 및 일본 공개특허공보 제(평)6-247872호에 기재되어 있다. WO 90/10651호에는 HGF와 비교하여 아미노산 잔기 5개가 결실된 딜리션 타입(delition type)의 HGF(dLeHGF)에 관해 개시되어 있으며 TCFII라고 호칭되어 있다. 당해 명세서에서 알부민, 사람 혈청, 젤라틴, 소르비톨, 만니톨, 크실리톨 등이 HGF를 안정화시키는 것으로 기재되어 있다. 이들은 수용액 제제에 관한 것이며 HGF를 수용액 속에서 안정화시킨다. 또한, 일본 공개특허공보 제(평)6-247872호는 염기성 아민산 등과 HGF(TCF)를 공존시킴으로써 HGF를 고농도로 함유시킨 제제에 관해 기재하고 있다.
그런데, 단백질은 일반적으로 동결 조작에서 그 정도로 안정적이 아니다[참조: 「단빠쿠시츠가쿠산고우소」37(9), 1517(1992)]. 또한, 수용액 속에서 단백질의 안정화제는 물 분자와 단백질의 상호작용으로 인해 안정화되며, 따라서 물이 존재하지 않는 단백질의 동결 건조 제품에서 수용액에서의 단백질의 안정화제는 대부분의 경우, 안정화 효과를 나타내지 않는다[참조: 「단빠쿠시츠가쿠산고우소」37(9), 1517(1992)].
한편, HGF의 동결 건조 제제에 대해서 전혀 공지되어 있지 않으며, 또한 HGF의 동결 건조 제제가 어느 정도의 물리적 및 생물 활성적 안정성을 나타내는가는 예상할 수 있다.
HGF의 수용액 제제 자체는 저온 또는 실온에서 수일 동안 보존하면 응집, 백탁 및 겔화가 확인되며 성상이 변화되고 유연체와 중합체가 형성되는 등의 물리적 안정성이 낮으며, 또한 생물 활성이 저하되는 등의 생물 활성 안정성이 낮으며 장기간의 보존에 대해 안정적인 제제는 아니다. 이러한 점은 HGF를 주사용 제제 등으로 하는 의약 또는 동물 약제로서 개발하는데 커다란 장애로 되고 있다. 본 발명은 상기한 종래의 과제를 해결하는 것이다. 즉, 본 발명의 목적은 의료용 약품 또는 동물용 약제로서 장기간의 보존에도 안정적인 제제를 제공하는 것이다.
발명의 개시
본 발명은 HGF 동결 건조 제제이다. 당해 HGF 동결 건조 제제는 글리신, 아닐린, 소르비톨, 만니톨, 덱스트란황산 등의 안정화제를 함유할 수 있으며, 또한 시트르산염 등의 완충제를 함유할 수 있다.
또한, 본 발명의 기타 발명은 안정화제, 염화나트륨, 완충제 및 계면활성제를 함유하는 HGF 동결 건조 제제이다.
본 발명의 HGF 동결 건조 제제에서 HGF가 안정화되고 장기 보존할 수 있게 된다.
발명을 실시하기 위한 최량의 형태
본 발명에서 사용하는 HGF는 약제로서 사용할 수 있을 정도로 정제된 것이면 각종 방법으로 정제한 것을 사용할 수 있다.
HGF의 정제방법은 각종 방법이 공지되어 있다. 예를 들면, 래트, 소, 말, 양 등의 포유 동물의 간장, 비장, 폐, 골수, 뇌, 신장, 태반 등의 장기, 혈소판, 백혈구 등의 혈액 세포나 혈장, 혈청 등으로부터 추출 및 정제하여 수득할 수 있다[참조: FEBS Letters,224, 312, 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA.86, 5844, 1989 등].
또한, HGF를 생성하는 초대 배양 세포나 주화 세포를 배양하고 배양물(예: 배양 상등액, 배양 세포 등)로부터 분리 정제하여 HGF를 수득할 수 있다. 또는 유전공학적 수법을 사용하여 HGF를 암호화하는 유전자를 적절한 벡터에 편입하고 이것을 적당한 숙주에 삽입하여 형질 전환하고 이러한 형질 전환체의 배양 상등액으로부터 목적하는 재조합 HGF를 수득할 수 있다[참조: Nature,342, 440, 1989, WO 92/01053호, 일본 공개특허공보 제(평)5-111383호, Biochem. Biophys. Res. Commun.,163, 967, 1989 등]. 상기한 숙주 세포는 특별히 한정하지 않으며 종래부터 유전공학적 수법으로 사용되는 각종 숙주 세포, 예를 들면, 대장균, 고초균, 효모, 사상균, 식물 또는 동물 세포 등을 사용할 수 있다.
보다 구체적으로 HGF를 생체 조직으로부터 추출 정제하는 방법으로서, 예를 들면, 래트에 사염화탄소를 복강내 투여하고 간염 상태인 래트의 간장을 적출하여 분쇄하고 S-세파로오즈, 헤파린세파로오즈 등의 겔 칼럼 크로마토그래피, HPLC 등의 통상적인 단백질 정제법으로 정제할 수 있다.
또한, 유전자 재조합법을 사용하여 사람 HGF의 아미노산 서열을 암호화하는 유전자를 소파피로마 바이러스 DNA 등의 벡터에 편입한 발현 벡터를 사용하여 동물 세포, 예를 들면, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포, 마우스 C127 세포, 원숭이 COS 세포 등을 형질 전환하고 이의 배양 상등액으로부터 수득할 수 있다.
이와 같이 수득한 HGF는 간 세포의 증식 효과가 있으면 당해 아미노산 서열의 일부가 결실되거나 다른 아미노산으로 치환되거나 기타 아미노산 서열이 일부 삽입되거나 N 말단 및/또는 C 말단에 하나 이상의 아미노산이 결합되거나 당쇄가 동일하게 결실 또는 치환될 수 있다.
「HGF 동결 건조 제제」란 HGF를 함유하는 수용액을 통상적인 동결 건조 방법으로 동결 건조시킨 제제를 말한다.
「안정화제」로서 글리신, 알라닌 등의 아미노산류, 헤파린, 덱스트란황산 등의 다당류, 소르비톨, 만니톨 등의 당알콜 등을 들 수 있으며 둘 이상을 병용할 수 있다. 안정화제를 가하여 제조하는 HGF 동결 건조 제제는 HGF의 보존 안정성이 보다 증가된 제제이다. 바람직한 안정화제는 글리신, 알라닌, 소르비톨, 만니톨, 덱스트란황산 등을 들 수 있다. 예를 들면, 글리신, 알라닌, 소르비톨 또는 만니톨의 첨가량으로서 바람직한 것은 HGF의 중량에 대해 0.01 내지 100배의 중량을 들 수 있으며, 특히 바람직한 것은 0.1 내지 10배의 중량을 들 수 있다.
「완충제」로서, 예를 들면, 인산 완충제, 시트르산 완충제 등을 들 수 있다. 완충제는 재용해 후의 수용액의 pH를 조정하고 HGF의 용해성을 유지하는 작용이 있다. 즉, 예를 들면, 실시예에서 사용하는 재조합 HGF의 경우, pH에 따라 HGF의 용해도는 변화되며 pH 7 부근에서 0.1 내지 5.0mg/ml의 용해도를 나타내며 pH 5 부근에서 20mg/ml 이상의 용해도를 나타내므로 pH를 5.0 내지 6.0으로 하는 것이 바람직하다. 완충제로서 바람직하게는 시트르산 완충제를 들 수 있으며, 특히 바람직하게는 시티르산나트륨 완충제를 들 수 있다. 이러한 구연산 완충제는 재용해 후의 수용액 속에서 HGF의 안정화에 기여한다. 완충제의 첨가량으로서 바람직한 범위는, 예를 들면, 재용해 후의 물 중량에 대해 1 내지 100mM이다.
「계면활성제」로서, 예를 들면, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 플로닉 F-68, 폴리에틸렌 글리콜 등을 들 수 있으며 둘 이상을 병용할 수 있다. 계면활성제로서 특히 바람직하게는 폴리소르베이트 80을 들 수 있다. HGF는 용기의 재질인 유리나 수지 등에 흡착하기 쉽다. 따라서, 계면활성제를 첨가함으로써 재용해 후의 HGF 용기에 대한 흡착을 방지할 수 있다. 계면활성제의 첨가량으로써 바람직한 범위는, 예를 들면, 재용해 후의 물 중량에 대해 0.001 내지 2.0중량%이다.
「염화나트륨」은 HGF의 용해성을 유지하는 작용이 있다. 즉, 예를 들면, 실시예에서 사용하는 재조합 HGF의 경우, 염화나트륨을 첨가함으로써 용해도가 향상되고 특히 300mM 이상에서 현저하게 용해성이 향상된다[일본 공개특허공보 제(평)6-247872호 참조]. 염화나트륨의 첨가량은 침투압비에 따라 제한을 받으며 일반적으로 사용되는 주사제의 침투압비를 나타내는 양일 수 있다. 특히 의료용 또는 동물 약제용 주사제의 침투압비로서 허용되는 침투압비 1 내지 2가 바람직하며, 예를 들면, 재용해 후의 수량에 대해 150 내지 300mM로 하는 것이 바람직하다.
HGF 동결 건조 제제는 HGF를 함유하는 수용액을 통상적인 동결 건조방법으로 동결 건조시켜 제조할 수 있다. 예를 들면, HGF를 적절한 용제(예: 멸균수, 완충액, 생리식염수 등)에 용해시킨 다음, 필터 등으로 여과하여 멸균하고, 필요에 따라, 안정화제, 완충제, 계면활성제, 염화나트륨 등을 가하여 동결 건조시킨다. 본 발명의 제제는 정제화에 필요한 첨가물, 예를 들면, 용해 보조제, 산화방지제, 무통증화제, 등장화제 등을 함유할 수 있다. 동결 건조방법으로서, 예를 들면, ① 상압하에서 동결 건조시키는 동결 과정, ② 용질에 구속되지 않는 자유수를 감압하에 승화 건조시키는 1차 건조 과정, ③ 용질 고유의 흡착수나 결정수를 제거하는 2차 건조 과정에서 세가지 단위 소자를 사용하는 방법을 들 수 있다[참조: Pharm. Tech. Japan,8(1), 75 내지 87 (1992)]. HGF는 용액 조제시, 동결 건조시 및 당해 동결 건조 제제를 재용해시킨 수용액에서 매우 안정적이다. 또한, HGF 함량은 적용 질환 및 적용 투여 경로 등에 따라 적절하게 조정할 수 있다.
동결 건조 제제는 사용시에 주사용 증류수 등을 가하고 재용해시켜 사용한다.
본 발명은 HGF(Hepatocyte Growth Factor; 간세포 성장 인자)를 함유하는 용액을 동결 건조시켜 수득하는 HGF 동결 건조 제제에 관한 것이다. 보다 상세하게는 안정화제, 염화나트륨, 완충제 또는 계면활성제의 하나 이상을 함유하는 HGF 동결 건조 제제에 관한 것이다. 본 발명에 따라 HGF를 안정화시킨, 장기 보존할 수 있는 제제가 제공된다.
본 발명의 HGF 동결 건조 제제는 HGF를 안정화시킬 수 있으며 장기간 동안 보존할 수 있게 된다.
실시예
하기에 실시예를 열거하여 본 발명을 보다 상세하게 설명하며 본 발명은 이들 실시예로 조금도 한정되지 않는다. 또한, 본 실시예에서 WO 90/10651호에 기재된 dLeHGF(5개의 아미노산 결실형 HGF, 별명 TCFII)를 사용한다.
실시예 1
HGF 동결 건조 제제의 제조
300mM 염화나트륨 및 0.01% 폴리소르베이트 80을 함유하는 10mM 시트르산 완충액(pH 5.0)에 HGF 20mg/ml로 되도록 용해시키고 무균적으로 HGF 수용액을 수득한다. 본 수용액의 pH를 조정한 다음, 무균적으로 바이알에 충전시키고 표 1에 기재된 조건에 따라 동결 건조시켜 HGF 동결 건조 제제를 수득한다. 또한, 표내의 →는 온도를 변화시키는 것을 나타낸다.
동결 과정 1차 건조 과정 2차 건조 과정
온도(℃) 5→-40 -40 -40→0 0 0→20 20
시간(hr) 1 10 8 24 1 24
압력(mmHg) 760 760 <1 <1 <1 <1
실시예 2
HGF 동결 건조 제제의 제조
실시예 1에서 10mM 시트르산 완충액(pH 5.0) 대신에 10mM 시트르산 완충액(pH 6.0)을 사용하여 HGF 동결 건조 제제를 수득한다.
실시예 3
HGF 동결 건조 제제의 제조
실시예 1에서 10mM 시트르산 완충액(pH 5.0) 대신에 10mM 인산 완충액(pH 6.0)을 사용하여 HGF 동결 건조 제제를 수득한다.
실시예 4
HGF 동결 건조 제제의 제조
실시예 1에서 10mM 시트르산 완충액(pH 5.0) 대신에 10mM 인산 완충액(pH 7.0)을 사용하여 HGF 동결 건조 제제를 수득한다.
실시예 5
HGF 동결 건조 제제의 제조
300mM 염화나트륨 및 0.01% 폴리소르베이트 80을 함유하는 10mM 시트르산 완충액(pH 5)에 HGF 20mg/ml로 되도록 용해시킨다. 이어서, 글리신을 50mg/ml로 되도록 용해시키고 무균적으로 HGF 용해액을 수득한다. 본 용해액의 pH를 조정한 다음, 무균적으로 바이알에 충전시키고 실시예 1의 동결 건조 조건과 동일한 조건에 따라 HGF 동결 건조 제제를 수득한다.
실시예 6
HGF 동결 건조 제제의 제조
실시예 5에서 글리신 대신에 알라닌을 사용하여 HGF 동결 건조 제제를 수득한다.
실시예 7
HGF 동결 건조 제제의 제조
300mM 염화나트륨 및 0.01% 폴리소르베이트 80을 함유하는 10mM 시트르산 완충액(pH 5)에 HGF 20mg/ml로 되도록 용해시킨다. 이어서, 소르비톨을 200mg/ml로 되도록 용해시키고 무균적으로 HGF 용해액을 수득한다. 본 용해액의 pH를 조정한 다음, 무균적으로 바이알에 충전시키고 실시예 1의 동결 건조 조건과 동일한 조건에 따라 HGF 동결 건조 제제를 수득한다.
실시예 8
HGF 동결 건조 제제의 제조
300mM 염화나트륨 및 0.01% 폴리소르베이트 80을 함유하는 10mM 시트르산 완충액(pH 6)에 HGF 20mg/ml로 되도록 용해시킨다. 이어서, 덱스트란황산을 50mg/ml로 되도록 용해시키고 pH를 조정하여 HGF 용해액을 수득한다. 이어서, 바이알에 충전시키고 실시예 1의 동결 건조 조건과 동일한 조건에 따라 HGF 동결 건조 제제를 수득한다.
실시예 9
HGF 동결 건조 제제의 제조
실시예 1에서 10mM 시트르산 완충액(pH 5.0) 대신에 10mM 시트르산 완충액(pH 6.0)을 사용하고, 또한 HGF 농도를 10mg/ml로 하여 HGF 동결 건조 제제를 수득한다.
시험예 1
HGF의 생물 합성에 미치는 동결 건조 과정의 영향
동결 건조 제조 과정에서 HGF의 생물 활성의 변화를 확인하기 위해 실시예 1에서 동결 건조 전의 HGF 수용액 및 동결 건조 후에 그대로 재용해시킨 HGF 수용액을 사용하여 HGF의 생물 활성을 측정한다(생물 활성 측정법은 하기에 기재한다). 그 결과를 표 2에 기재한다. 동결 건조 전후에 비활성으로 변화가 확인되지 않으므로 동결 건조 과정 및 재용해에서 HGF의 생물 활성을 잃지 않으며 HGF를 동결 건조 제제로 할 수 있는 것으로 나타난다.
생물 활성 측정 방법
위스타계 수컷 래트를 간 관류하여 수득한 간 세포를 정제하고 세포 생존율을 확인한 다음, 1x104/웰로 플레이트에 파종한다. 5% 탄산가스 배양기에서 20시간 동안 예비 배양한 후에 HGF 샘플 및 표준 제품을 첨가한다(n=3). 또한, 5% 탄산가스 배양기에서 24시간 동안 예비 배양한 후에 [3H-티미딘]을 첨가하고 2시간 동안 분류한다. 세포를 셀 하비스터로 회수하고 세포 속의 거두어 들인 [3H] 양을 측정한다. 측정 결과를 평행성 검정법을 거쳐 표준 제품에 대한 비활성을 구한다.
동결 건조 전후의 생물 활성
샘플 비활성
동결 건조 전 용액 제제동결 건조 제제 용해 직후 0.890.94
실시예 2
동결 건조 제제 용해 후의 성상
실시예에서 제조한 동결 건조 제제를 -40℃, 25℃ 및 50℃에서 1개월 동안 보존한 다음, 용해시키고, 용해 후의 성상을 육안으로 관찰한다. 동결 건조 제제의 용해는 정제수로 실시한다. 그 결과를 표 3에 기재한다. -40℃ 및 25℃의 보존에서 어느 실시예의 제제도 성상에 관해 안정적이다. 또한, 50℃의 보존에서 실시예 1의 제제는 용해 직후에 백탁이며 실시예 5, 6 및 7의 제제는 성상에 관해 안정적이다.
동결 건조 제제 용해 후의 성질(1개월 보존품)
제제 성상
-40℃ 25℃ 50℃
실시예 1실시예 5실시예 6실시예 7 투명투명투명투명 투명투명투명투명 백탁투명투명투명
시험예 3
동결 건조 제제의 중합체 함량 변화
실시예 1, 5, 6 및 7에서 제조한 동결 건조 제제를 -40℃, 25℃, 40℃ 및 50℃에서 1개월 동안 또는 2개월 동안 보존하고 당해 동결 건조 제제에 함유된 중합체 함량과 HGF 함량의 비를 측정한다. 측정 방법은 하기에 기재된 겔 여과법을 사용한다. 이러한 결과를 표 4 및 표 5에 기재한다. 모든 온도의 보존 및 모든 실시예의 제제는 중합체의 생성이 적으며 물리적으로 안정적이다. 또한, 특히 실시예 5, 6 및 7의 제제는 중합체의 생성이 극단적으로 적으며 물리적으로 안정하다.
중합체 함량 측정 방법
HGF 농도를 2mg/ml로 희석한 다음, 겔 여과법을 사용하여 하기의 조건으로 측정한다.
칼럼 : TOSOH TSK G-3000SW XL (ψ0.78x30cm)
유속 : 0.5ml/분
검출 : OD 280
온도 : 25℃
캐리어 : 10mM 트리스, 150mM NaCl, 0.05% SDS, pH 7.0
적용 : 20㎕
중합체의 보존시간 : 13.0분
HGF의 유지 시간 : 14.4분
1개월 보존의 동결 건조 제제의 중합체 함량/HGF 함량
-40℃ 25℃ 40℃ 50℃
실시예 1실시예 5실시예 6실시예 7 1.07%0.92%0.93%0.90% 1.59%1.39%1.54%1.35% 2.76%1.83%1.81%2.57% 6.17%4.09%2.90%6.64%
2개월 보존의 동결 건조 제제의 중합체 함량/HGF 함량
-40℃ 25℃ 40℃ 50℃
실시예 1실시예 5실시예 6 0.92%0.88%0.85% 1.44%1.21%1.10% 3.91%2.49%1.96% 12.23%7.49%5.76%
시험예 4
중합체 생성에 미치는 덱스트란황산의 영향
실시예 8에서 조제한 동결 건조 제제를 50℃에서 1개월 동안 보존하고 이러한 동결 건조 제제에 함유된 중합체 함량과 HGF 함량의 비를 측정한다. 또한, 측정은 시험예 3과 동일하게 실시한다. 또한, 비교 실시예로서 덱스트란황산을 함유하지 않는 점 이외에는 동일한 성분 및 방법을 사용하여 조제한 실시예 9의 동결 건조 제제를 사용하여 동일한 시험을 실시한다. 그 결과를 표 6에 기재한다. 표 6에 기재된 바와 같이 덱스트란황산을 첨가함으로써 고온에서 보존해도 중합체의 생성은 적으며 안정성이 향상되는 것으로 판명된다.
동결 건조 제제의 중합체 함량/HGF 함량
보존 개시 전 50℃, 1개월 보존 후
실시예 8실시예 9 2.46%1.78% 9.45%14.01%
시험예 5
동결 건조 제제의 생물 활성 변화
실시예 1, 5, 6 및 7에서 제조한 동결 건조 제제를 -40℃, 40℃, 50℃, 60℃에서 1개월 동안 또는 2개월 동안 보존하고 이러한 동결 건조 제제를 재용해시킨 수용액의 생물 활성을 시험예 1에 기재한 생물 활성 측정 방법으로 측정한다. 그 결과를 표 7 및 표 8에 기재한다. 또한, 실시예 1, 5, 6 및 7의 제제를 재용해시킨 후의 수용액의 생물 활성의 초기치는 각각 1.01±0.25, 0.91±0.18, 0.88±0.05, 1.03±0.04이다. 60℃의 보존에서 생물 활성이 저하되는 경향이 약간 보이지만 50℃ 이하의 보존에서는 어느 실시예의 제제도 생물 활성에 거의 변화가 없으며 생물 활성적으로 안정하다.
1개월 보존의 동결 건조 제제의 생물 활성(비활성)
-40℃ 40℃ 50℃ 60℃
실시예 1실시예 5실시예 6실시예 7 0.96±0.130.80±0.140.92±0.140.92±0.02 0.92±0.130.99±0.101.02±0.060.97±0.04 0.81±0.070.80±0.160.94±0.080.83±0.06 0.54±0.050.72±0.030.78±0.03---
2개월 보존의 동결 건조 제제의 생물 활성(비활성)
-40℃ 40℃ 60℃
실시예 1실시예 5실시예 6 1.14±0.140.95±0.051.11±0.14 0.98±0.010.84±0.091.09±0.03 0.46±0.090.57±0.010.52±0.02

Claims (6)

  1. HGF 동결 건조 제제.
  2. 제1항에 있어서, 안정화제를 함유하는 HGF 동결 건조 제제.
  3. 제2항에 있어서, 안정화제가 글리신, 알라닌, 소르비톨, 만니톨 또는 덱스트란황산인 HGF 동결 건조 제제.
  4. 제1항 내지 제3항 중의 어느 한 항에 있어서, 완충제를 함유하는 HGF 동결 건조 제제.
  5. 제4항에 있어서, 완충제가 시트르산염인 HGF 동결 건조 제제.
  6. 안정화제, 염화나트륨, 완충제 및 계면활성제를 함유하는 HGF 동결 건조 제제.
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