KR20090118030A

KR20090118030A - Ｈｇｆ 제제

Info

Publication number: KR20090118030A
Application number: KR1020097016540A
Authority: KR
Inventors: 키이치 아다치; 케이고 하나다
Original assignee: 크링글파마 가부시키가이샤
Priority date: 2007-02-22
Filing date: 2008-02-21
Publication date: 2009-11-17
Also published as: EP2119449A4; CA2675622A1; US8461112B2; EP2119449B1; CN101578106A; WO2008102452A1; CA2675622C; US20090233863A1; CN103356995A; EP2119449A1; WO2008102849A1; KR101492511B1

Abstract

HGF(Hepatic Growth Factor) 및 정제 백당을 함유하는 HGF 제제를 기술한다. 당해 HGF 제제는 장기간 저장시에도 안정한 상태를 유지하는 것이 특징이다.

HGF, 정제 백당, 안정화, 완충제, 안정화제, 동결건조

Description

ＨＧＦ 제제{HGF preparation}

본 발명은, HGF (Hepatic Growth Factor, 간세포증식인자)를 함유하는 제제에 관한 것이다.

HGF는, 나카무라 등에 의해 발견된, 성숙 간세포에 대해서 가장 강력한 증식촉진 활성을 갖는 생리활성 펩티드이며(참조예: Biochem. Biophys. Res. Commun., 122, 1450, 1984), 최근 생물 공학적 방법에 의해 대량 생산이 가능하게 되었다 (참조예: Nature, 342, 440, 1989). 이 HGF는, 간염 또는 간경변 뿐만 아니라, 신장염이나 암 등에 대한 치료·예방약으로서, 또한 항암제의 부작용 억제제 또는 창상 치유제 등에의 적용도 기대되고 있다.

HGF의 제제로는, 국제 공개 공보 제WO90/10651호에서 HGF에 알부민, 사람 혈청, 젤라틴, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨 등을 안정화제로서 함유한 수용액 제제가 개시되어 있다. 그러나, 앞에서 기술된 HGF 수용액 제제는 보존 중에 HGF가 응집, 백탁, 겔화가 진행한다고 하는 문제가 있으며, 또한 중합체가 형성되는 등 물리화학적 안정성이 낮고, 생물 활성이 저하된다고 하는 문제가 있다.

이러한 문제를 해결하기 위해, 국제 공개 공보 제WO00/72873호에서는 HGF에 알기닌, 리신, 히스티딘, 글루타민, 프롤린, 글루타민산, 아스파라긴산 등을 안정화제로서 함유한 동결건조 제제가 개시되어 있다. 또한, 일본 특개평 제9-25241호에서는 HGF에 글리신, 알라닌, 솔비톨, 만니톨, 덱스트란 황산 등을 안정화제로서 함유한 동결건제조가 개시되어 있다.

상기의 동결건조 제제는, HGF의 안정화를 어느 정도 달성하는 것이 가능하지만, 안정화 효과가 더욱 개선된 HGF 제제가 요망되고 있다.

발명의 개시

발명이 해결하려고 하는 과제

본 발명은, 종래의 HGF 제제에 비해, 장기간의 보존에도 보다 안정한 HGF 제제를 제공하는 것을 목적으로 한다.

과제를 해결하기 위한 수단

본 발명자들은, 상기 과제를 해결하기 위해서 예의 연구를 거듭한 결과, HGF에 정제 백당을 첨가함으로써 HGF의 중합체 생성이 저해되고 안정한 HGF 제제를 얻을 수 있음을 밝혀내고, 이러한 지견에 기초해 연구를 거듭한 결과, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

즉, 본 발명은,

[1] HGF 및 정제 백당을 함유하는 HGF 제제,

[2] 상기 [1]에서, 정제 백당의 함유량이 HGF 1 중량부에 대해서 0.01 내지 9 중량부인, HGF 제제,

[3] 상기 [1] 또는 [2]에서, 중성 아미노산을 추가로 함유하는, HGF 제제,

[4] 상기 [3]에서, 상기 중성 아미노산이 알라닌인, HGF 제제,

[5] 상기 [1] 내지 [4] 중 어느 하나에서, 완충제를 추가로 함유하는, HGF 제제,

[6] 상기 [5]에서, 상기 완충제가 구연산염인, HGF 제제,

[7] 상기 [1] 내지 [6] 중 어느 하나에서, 염화나트륨을 추가로 함유하는, HGF 제제,

[8] 상기 [1] 또는 [2]에서, HGF 및 정제 백당 외에, 중성 아미노산, 염화나트륨, 완충제 및 계면활성제를 추가로 함유하는, HGF 제제,

[9] 상기 [8]에서, 상기 중성 아미노산이 알라닌이며, 상기 완충제가 구연산염이며, 상기 계면활성제가 폴리소르베이트인, HGF 제제,

[10] 상기 [1] 내지 [9] 중 어느 하나에서, 동결건조 제제인, HGF 제제,

[11] HGF에 정제 백당을 첨가하여 HGF 중합체 생성을 억제시키는 것을 특징으로 하는 HGF의 안정화 방법, 및

[12] 상기 [11]에서, 상기 정제 백당의 첨가량이 HGF 1 중량부에 대해서 0. 01 내지 9 중량부인, 방법에 관한 것이다.

발명의 효과

본 발명의 HGF 제제는, 장기간 보존에도 종래의 HGF 제제에 비해 보다 안정한 효과를 나타낸다.

발명을 실시하기 위한 최선의 형태

본 발명은, HGF 및 정제 백당을 함유하여 구성된 HGF 제제이다.

본 발명의 유효 성분인 HGF는, 의약으로서 사용 가능할 정도로 정제된 것이라면, 다양한 방법으로 제조된 것을 사용할 수 있다. 또한, 본 발명에 사용되는 HGF는 아미노산 5잔기가 결실된 결손형 HGF(dLeHGF)일 수 있다.

HGF의 제조 방법으로서는, 각종 방법이 알려져 있으며, 예를 들어, 랫트, 소, 말, 양 등의 포유동물의 간장, 비장, 폐장, 골수, 뇌, 신장, 태반 등의 장기, 혈소판, 백혈구 등의 혈액 세포와 혈장, 혈청 등에서 추출, 정제하여 얻어질 수 있다. 또한, HGF를 생산하는 초대배양세포와 주화세포를 배양하여, 배양물(배양 상청, 배양 세포 등)로부터 분리, 정제해서 HGF를 수득할 수 있다. 또는, 유전자 공학적 방법에 의해 HGF를 코딩하는 유전자를 적절한 벡터에 삽입하고, 이것을 적당한 숙주에 삽입하여 형질 전환하여, 이 형질 전환체의 배양물로부터 목적하는 재조합 HGF를 얻을 수 있다(참조예: Nature, 342, 440, 1989 등). 상기의 숙주 세포는 특히 한정되지 않고, 종래부터 유전자 공학적 방법에 사용되고 있는 각종의 숙주 세포, 예를 들면 대장균, 고초균, 효모, 사상균, 식물 또는 동물 세포 등을 사용할 수 있다.

보다 구체적으로는, HGF를 생체 조직으로부터 추출 및 정제하는 방법으로서 는, 예를 들어, 랫트에 사염화탄소를 복강 내에 투여하고, 간염 상태인 랫트의 간장을 적출하고 분쇄하여, S-세팔로스, 헤파린 세팔로스 등의 겔 컬럼 크로마토그래피, HPLC 등의 통상의 단백질 정제법에서 정제하는 것이 가능하다. 또한, 유전자 조환법을 사용하여 사람 HGF의 아미노산 배열을 코딩하는 유전자를, 유두종 바이러스 DNA 등의 벡터에 혼입시킨 발현 벡터에 의해 동물세포, 예를 들어, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포, 마우스 C127 세포, 원숭이 COS 세포 등을 형질 전환하여, 이의 배양 상청에 의해 수득할 수 있다.

본 발명의 정제 백당은, 제15 개정 일본약전 제2부에 기재되어 있는 정제 백당을 안정화제로서 적합하게 사용할 수 있다. 정제 백당의 첨가량은, HGF 1 중량부에 대해, 0.01 내지 9 중량부가 바람직하며, 특히 0.1 내지 5 중량부의 범위가 바람직하지만, 바람직한 하한은 0.5 중량부이며, 바람직한 상한은 4 중량부, 더욱 바람직하게는 3 중량부, 특히 바람직한 것은 2 중량부이다.

본 발명의 제제는 여러 가지의 제제 형태(예를 들면, 액제, 고형제, 캅셀제, 크림제, 스프레이제등)를 취할 수 있지만, 일반적으로는 유효 성분인 HGF 및 정제 백당, 또는 이들과 관용 첨가물 (담체 등)과 함께 수용성 제제, 동결건조 제제 등인 것이 바람직하고, 특히 동결건조제제가 바람직하다.

본 발명의 HGF 제제는, HGF 및 정제 백당을 함유하는 수용액인 수용액 제제일 수 있으며, 또한 당해 수용액을 통상의 동결건조 방법으로 동결건조시킨 HGF 동결건조 제제일 수 있다. 상기 수용액에 있어 정제 백당의 함유량은 0.1 중량% 이상, 바람직하게는 0.5 중량% 이상이며, 9 중량% 이하, 바람직하게는 5 중량% 이하, 보다 바람직하게는 4 중량% 이하, 더욱 바람직하게는 3 중량% 이하, 특히 바람직하게는 2 중량% 이하이다. 동결건조 제제에 있어서 정제 백당의 함유량은 10 내지 80 중량%가 바람직하고, 특히 20 내지 60 중량%가 바람직하다. 예를 들어, 동결건조제제제는, HGF를 적절한 용제(예를 들어, 멸균수, 주사용 증류수, 완충액, 생리 식염수 등)에 용해시킨 후, 정제 백당을 바람직하게는 0.1 내지 5 중량%, 특히 바람직하게는 0.5 내지 2 중량%가 되도록 첨가하고, 필요에 따라서, 정제 백당 이외의 안정화제, 완충제, 계면활성제, 염화나트륨 등을 첨가하여 필터 등으로 여과하고 멸균하여, 바이알 또는 앰플에 주입해 동결건조한다. 필터는, 세공 크기가 0.22㎛이하의 멸균용 필터를 사용하는 것이 바람직하다. 멸균용 필터로는, 예를 들어, 듀라포아(등록상표, 일본 Millipore(주) 제품) 또는 자르트포아2(등록상표, Sartorius(주) 제품)등을 들 수 있다. 동결건조 방법으로서는, 예를 들면, 상압 하에서 냉각 동결하는 동결 과정, 용질에 구속되지 않는 자유수를 감압하에서 승화 건조하는 일차 건조 과정, 용질 고유의 흡착수나 결정수를 제거하는 2차 건조 과정의 3개의 단위 조작에 의한 방법을 들 수 있다. 동결 과정의 냉각 온도는 -60℃ 내지 -40℃가 바람직하고, 일차 건조 과정의 온도는 -50℃ 내지 0℃가 바람직하고, 또한 2차 건조 과정의 온도는 4℃ 내지 40℃가 바람직하다. 진공 압력은 0.1 내지 1.5 Pa가 바람직하고, 특히 0.5 내지 1.2 Pa가 바람직하다. 동결건조 후의 건조 창고 내는 복압시킨다. 복압 방법으로는, 무균의 공기 또는 불활성 가스(예를 들어, 무균 질소 가스, 무균 헬륨 가스 등)를 창고 내에 송입하여 약 70 내지 100 kPa, 바람직하게는 약 80 내지 95 kPa까지 일차 복압하고, 다음으로 대기압까지 복 압(2차 복압)하는 방법이 바람직하다. 바이알의 타전은, 일차 복압 후에 실시하는 것이 바람직하다.

안정화제로 정제 백당만을 사용할 수 있으나, 정제 백당과 함께 종래 안정화제로서 사용되고 있던 글리신, 알라닌, 아르기닌, 리신, 히스티딘 등의 아미노산, 헤파린, 덱스트란 황산 등의 다당류, 솔비톨, 만니톨 등의 당 알코올 등을 적합하게 사용할 수 있다. 이들 중 아미노산이 바람직하고, 아미노산 중에서도 글리신, 알라닌 등의 중성 아미노산이 바람직하다. 이러한 정제 백당 이외의 안정화제의 첨가량은 특별히 제한되지 않지만, 예를 들어 글리신, 알라닌 등의 중성 아미노산을 사용하는 경우의 첨가량은, 정제 백당 1 중량부에 대해, 0.01 내지 50 중량부가 바람직하고, 0.1 내지 20 중량부가 더욱 바람직하다.

안정화제로서 정제 백당과 함께 중성 아미노산 등의 종래의 안정화제를 병용함으로써, 정제 백당만을 사용하는 경우에 비해 안정성을 보다 향상시킬 수가 있다.

본 발명으로 사용되는 완충제로는, 예를 들면 인산완충액, 구연산 완충액 등을 들 수 있다. 완충제는, 재용해 후의 수용액의 pH를 조정해 HGF의 용해성을 유지시키는 작용을 갖는다. 완충제는, 재용해 후 수용액의 pH를 4.5 내지 6.5가 되게 하는 것이 바람직하다. 완충제로서 바람직한 것은, 구연산 완충액을 들 수 있고, 특히 바람직하게는 구연산나트륨 완충액을 들 수 있다. 이 구연산 완충액은, 재용해 후 수용액 중 HGF의 안정화에도 기여한다. 완충제의 첨가량은, 동결건조제제를 제조시, 동결건조 직전의 수용액 중 농도가, 1 내지 100mM의 범위가 되도록 하는 것이 바람직하다.

본 발명으로 사용되는 계면활성제로서는, 예를 들면 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 플루로닉F-68, 폴리에틸렌글리콜 등을 들 수 있으며, 2종 이상을 병용할 수 있다. 계면활성제로서 특히 바람직하게는, 폴리소르베이트계 계면활성제가 바람직하고, 특히 폴리소르베이트 80이 바람직하다. HGF가 용기의 재질인 유리나 수지 등에 흡착되기 쉽기 때문에, 이러한 계면활성제를 첨가함으로써 재용해 후 HGF가 용기에 흡착되는 것을 방지할 수 있다. 계면활성제의 첨가량은, 동결건조 제제를 제조시, 동결건조 직전의 수용액 중 농도가 0.001 내지 2.0 중량%의 범위인 것이 바람직하다.

염화나트륨은, HGF의 용해성을 유지하는 작용을 가진다. 즉, 예를 들면 실시예에서 사용한 조환 HGF의 경우, 염화나트륨의 첨가에 의해 조환 HGF의 용해도가 향상되고, 특히 300mM 이상에서는 현저히 용해성이 향상한다. 염화나트륨의 첨가량은 침투압비에 의해 제한을 받지만, 일반적으로 사용되는 주사제의 침투압비를 나타내는 양이 사용될 수 있다. 특히 의료용 또는 동물 약용 주사제의 침투압비로서 허용되는 침투압비 1 내지 3이 되는 양이 바람직하다. 통상, 동결건조제제를 제조할 때 동결건조 직전의 수용액 중의 염화나트륨 농도를 150 내지 1000mM로 하는 것이 바람직하다.

본 발명에 있어서, 제제화에 필요한 다른 첨가제, 예를 들면, 용해 보조제, 산화방지제, 무통화제, 등장화제 등을 포함할 수 있다.

상기한 바와 같이 하여 수득될 수 있는 본 발명의 제제, 예를 들어 동결건조 제제는, 사용에 있어 HGF 농도가 0.1 내지 40 mg/mL가 되도록 주사용 증류수에 용해시켜, 주사액으로 사용할 수 있다. 또한 동결건조제제를 함유하는 크림제, 스프레이제 등의 외용제로 할 수도 있다.

실시예

아래에서는 실시예를 사용하여 본 발명을 설명하지만, 본 발명은 이들 실시예로 한정되는 것은 아니다. 한편, 본 실시예에 있어서, HGF로서 5 아미노산 결실형 HGF를 사용했다. HGF의 중합체의 면적 백분율(%)(이하, 중합체 함량(%)이라고 한다)은 고속 액체 크로마토그래피(HPLC)에서 정량한 값을 사용해 하기 식 1로부터 구하였다.

[식 1]

상기 식에서, A_M은 HGF 피크 면적이고, A_A는 중합체 피크 면적을 나타낸다.

(HLPC조건)

컬럼: 겔 여과 컬럼 (상품명: Superdex 2000 10/300, Amersham Biosciences사 제품)

이동상: 염화나트륨 58.44 g, 구연산3나트륨2수화물 2.94 g, 폴리소르베이트 80 0.1 g을 물에 용해시키고, 1 L로 한 액을 A액으로 한다. 염화나트륨 58.44 g, 구연산 1수화물 2.10 g, 폴리소르베이트80 0.1 g을 물에 녹이고, 1 L로 한 액을 B액으로 한다. A액에 B액을 첨가하고 pH 6.0으로 조정 후, 0.45㎛의 필터(상품명: Millcup-HV, 세경: 0.45㎛, Millipore사 제품)로 여과하여, 사용 전에 탈기한다. 실온으로 보존하고, 2주 이내 사용한다.

컬럼 온도: 25℃

유량: 0.5mL/분

검액주입량: 25㎕

분석 시간: 60분

검출기: 흡광 광도계

검출 파장: 280nm

샘플 쿨러: 5분

분자량 마커는, Gel Filtration Standard(카탈로그 번호:151-1901, Bio-Rad 사 제품) 바이알 1개에 물 500㎕를 첨가하고 용해시켜, 소량 시액 조정용 여과 필터(상품명:Ultrafree-MC, 세경: 0.45㎛, Millipore사 제품)로 여과시켜, 2 내지 8℃로 보존하고, 3개월 이내의 것을 사용한다.

또한, 하기 실시예 및 시험예에서 사용한 희석용 완충액은 하기와 같이 제조하였다.

(희석용 완충액의 제조)

염화나트륨 1.1688 g, 구연산3나트륨2수화물 2.94 g, 폴리소르베이트80 0.3 g를 초순수한 물에 녹여, 전량 1 L로 한 액을 A액으로 하였다. 염화나트륨 1.1688g, 구연산 일수화물 2.10 g, 폴리소르베이트80 0.3 g를 초순수한 물(초순수한 물의 제조 장치(상품명:MilliQ Gradient, Millipore사 제품)를 사용해 제조, 이하 동일하다)에 녹여, 전량 1 L로 한 액을 B액으로 하였다. A액에 B액을 첨가하여 pH 6.0으로 조정하고, 희석용 완충액(1)으로 하였다.

염화나트륨 17.53 g, 구연산3나트륨2수화물 2.94 g, 폴리소르베이트80 0.1 g를 초순수한 물에 녹여 전량 1 L로 한 액을 C액으로 하였다. 염화나트륨 17.53 g, 구연산 일수화물 2.10 g, 폴리소르베이트80 0.1 g를 초순수한 물에 녹여, 전량 1 L로 한 액을 D액으로 하였다. C액에 D액을 첨가하여 pH 6.0으로 조정하고, 희석용 완충액(2)으로 하였다.

[실시예 1]

희석용 완충액(1)에, 5 아미노산 결실형 HGF(이하, 간단히 'HGF'라 한다)를 10 mg/mL가 되도록 첨가하고, 정제 백당을 0.5 중량% 농도가 되도록 첨가하여, 아래 표 1의 조성의 용액을 수득하였다.

성분	농도
HGF	10mg/ml
구연산3나트륨2수화물	10mM
염화나트륨	300mM
폴리소르베이트 80	0.03 중량%
정제 백당	0.5 중량%

수득된 상기 용액을 바이알(

23×43 mm)에 2 m씩 무균적으로 분주하였다. 바이알에 고무마개를 반타전하고, 트레이에 정렬시켜, 동결건조기(트리오 마스터；교와진공기술주식회사 제품)에 넣어 하기 표 2에 기재한 조건으로 동결건조를 실시했다. 또한, 표 중 '→'는, 온도를 변화시킨 것을 나타낸다.

	동결 과정		일차 건조 과정		2차 건조 과정
온도(℃)	10→－50	－50	－50→－20	－20	－20→20	20
진공도(Pa)	－	－	1	1	1	1
시간	6	5	8	33.5	8	11

동결건조 종료 후, 트리오마스터 창고 내에 무균질소를 송입하고, 복압(창고 내 압력: 88.0 kPa; 일차복압)하여, 고무마개를 전체 타전하고 나서 무균질소로 트리오 마스터 창고 내를 대기압으로 되돌리고(2차 복압), 바이알을 꺼낸 후, 신속하게 바이알을 캡으로 마감했다. 이와 같이 하여, 본 발명의 HGF 동결건조 제제를 수득하였다.

본 HGF 동결건조 제제에 있어서, 정제 백당의 함유량은, HGF 1중량부에 대해 0.5 중량부이며, HGF 동결건조 제제에 대해서 26.3 중량%이다.

[실시예 2]

정제 백당의 첨가 농도를 1.0 중량%로 하는 것 외에는, 실시예 1과 같게 하여, HGF 동결건조제제를 수득하였다.

본 HGF 동결건조제제에 있어서 정제 백당의 함유량은, HGF 1 중량부에 대해서 1 중량부이며, HGF 동결건조 제제에 대해서 41.7 중량%이다.

[실시예 3]

정제 백당의 첨가 농도를 2.0 중량%로 하는 것 외에는, 실시예 1과 같게 하여, HGF 동결건조제제를 수득하였다.

본 HGF 동결건조제제에 있어서 정제 백당의 함유량은, HGF 1 중량부에 대해서 2 중량부이며, HGF 동결건조제제에 대해서 58.8 중량%이다.

[실시예 4]

정제 백당의 첨가 농도를 1.0 중량%로 하고, 또한 알라닌을 5 mg/mL의 농도로 첨가하는 것 외에는, 실시예 1과 같게 하여, HGF 동결건조제제를 수득하였다.

본 HGF 동결건조제제에 있어서 정제 백당의 함유량은, HGF 1 중량부에 대해서 1 중량부이며, HGF 동결건조 제제에 대해서 34.5 중량%이다.

[비교예 1]

첨가제를 정제 백당 대신에, 알라닌을 20 mg/mL의 농도로 첨가하는 것 이외에는, 실시예 1과 같이 하여, HGF 동결건조제제를 수득하였다.

[비교예 2]

정제 백당을 첨가하지 않는 것 이외에는, 실시예 1과 같이(이하, '기본 처방'이라고 한다) 하여, HGF 동결건조제제를 수득하였다.

[시험예 1]

상기 실시예 및 비교예에 기재된 동결건조제제를 50℃로 보존하여, 1주일 후에 샘플링하고, 단백질 농도 5 mg/mL가 되도록 희석용 완충액(2)로 희석하고, HPLC를 사용해 정량한 후, 상기 식 1로부터 중합체 함량(%)을 산출했다. 그 결과를 하기 표 3에 나타낸다.

	첨가제(농도)		중합체 함량(%)
실시예 번호	정제 백당	알라닌	동결건조전	보존개시시 (초기)	50℃－1주간
실시예 1	＋(0.5 중량%)	－	0.47	0.61	1.90
실시예 2	＋(1.0 중량%)	－	0.48	0.58	1.29
실시예 3	＋(2.0 중량%)	－	0.48	0.56	0.92
실시예 4	＋(1.0 중량%)	＋(5 mg/mL)	0.44	0.56	0.90
비교예 1	－	＋(20 mg/mL)	0.50	0.63	2.32
비교예 2	－	－	0.55	0.84	6. 12

표 3로부터 분명해지는 바와 같이, 기본 처방에 정제 백당 또는 정제 백당과 알라닌을 첨가한 본 발명의 HGF 제제가, 기본 처방 또는 기본 처방에 알라닌을 첨가한 HGF 제제에 비해, 현저하게 중합체 함량이 억제되고 있었다.

[시험예 2]

희석용 완충액(20mM 구연산완충액, 1M 염화나트륨, 폴리소르베이트80 0.01 중량%)에, HGF를 10 mg/mL가 되도록 첨가하고, 정제 백당을 0 중량% 농도, 1 중량% 농도, 5 중량% 농도, 10 중량% 또는 20 중량% 농도가 되도록 첨가한 시료 용액 1 내지 5를 각각 50㎕ 제조했다. 각 시료 용액은, 측정으로 제공될 때까지, 약 24시간 동결했다. 동결한 각 시료 용액을 재융해해, HGF의 분자량(약 84kDa) 분포를 동적광산란(Dynamic Light Scattering, DLS) 법으로 측정했다. 측정장치는, 단백질 용액 전용의 Protein-Solution사 제품 Dyna-Pro를 사용했다. 측정 온도는 4℃로 설정했다. 배경에는, HGF를 포함하지 않는 희석용 완충액(각 50㎕)을 사용했다. 각 시료 용액 중에 있어서의 HGF 분자량의 다분산도(Pd%)를 표 4에 나타낸다.

	HGF(mg/mL)	정제 백당(중량%)	Pd%
시료 용액 1	10	0	22. 8
시료 용액 2	10	1	21. 7
시료 용액 3	10	5	13. 6
시료 용액 4	10	10	32. 3
시료 용액 5	10	20	28. 5

표 4에서 밝혀진 바와 같이, 정제 백당을 1 중량% 또는 5 중량%가 되도록 첨가한 시료 용액 2 및 3에서는, Pd%치가 극히 작고, HGF의 분자량 분포가 단분산 (단일 양상)인 것을 나타냈다. 시료용액 1, 4 및 5에서는, HGF의 분자량 분포 피크가 폭넓게 나타나며, 상이한 분자량을 갖는 것을 포함하고 있음이 시사되었다. 또한 시료용액 4 및 5에서는 고분자측에 추가적 1개의 피크가 나타나고, 시료용액 5에 있어서는, 한층 더 저분자의 것이 다량으로 포함되어 있음을 나타내는 피크도 나타났다.

산업상의 사용 가능성

본 발명에 의하면, 의약으로서 유용한 보존안정성이 우수한 HGF 제제를 제공할 수 있다.

Claims

HGF(Hepatic Growth Factor, 간세포증식인자) 및 정제 백당을 함유하는 HGF 제제.
제1항에 있어서, 상기 정제 백당의 함유량이 HGF 1 중량부에 대해서 0.01 내지 9 중량부인, HGF 제제
제1항 또는 제2항에 있어서, 중성 아미노산을 추가로 함유하는, HGF 제제.
제3항에 있어서, 상기 중성 아미노산이 알라닌인, HGF 제제.
제1항 내지 제4항 중 어느 하나의 항에 있어서, 완충제를 추가로 함유하는, HGF 제제.
제5항에 있어서, 상기 완충제가 구연산염인, HGF 제제.
제1항 내지 제6항 중 어느 하나의 항에 있어서, 염화나트륨을 추가로 함유하는, HGF 제제.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 HGF 및 정제 백당 외에, 중성 아미노산, 염화나트륨, 완충제 및 계면활성제를 추가로 함유하는, HGF 제제.
제8항에 있어서, 상기 중성 아미노산이 알라닌이고, 상기 완충제가 구연산염이고, 상기 계면활성제가 폴리소르베이트인, HGF 제제.
제1항 내지 제9항 중 어느 하나의 항에 있어서, 동결건조제제인, HGF 제제.
HGF에 정제 백당을 첨가하여 HGF 중합체 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는 HGF의 안정화 방법.
제11항에 있어서, 정제 백당의 첨가량이 HGF 1 중량부에 대해 0.01 내지 9 중량부인, 방법.