KR19980070317A - 폴리하이드록시알카노에이트 분해효소 및 그 제조방법 - Google Patents

폴리하이드록시알카노에이트 분해효소 및 그 제조방법 Download PDF

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KR19980070317A
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Abstract

이 발명은 ω-하이드록시알카노에이트, 특히, 4HB의 호모폴리에스테르 또는 그 것을 함유하는 공중합 폴리에스테르의 분해활성을 갖는 신규의 폴리하이드록시알카노에이트 분해효소 및 그 효율적인 제조방법을 제공하기 위한 것이다. 이 발명은 배열번호 1로 표기되는 아미노산배열의 N-말단 프래그먼트를 갖고 SDS 폴리아크릴라미드 겔 전기영동법에 의해 측정한 분자량이 33,000인 폴리하이드록시알카노에이트 분해효소를 제공한다. 또한, 이 발명은 코리네박테륨속에 속하고 폴리하이드록시알카노에이트 분해효소의 생산능력을 갖는 미생물을 배지에서 배양하고, 그렇게 얻어진 배양물로부터 폴리하이드록시알카노에이트 분해효소를 채취하는 것을 특징으로 하는 폴리하이드록시알카노에이트 분해효소의 제조방법을 제공한다. 또한, 이 발명은 폴리하이드록시알카노에이트 분해효소의 유전자를 함유하는 재조합형 벡터에 의해 형질전환된 형질전환체를 배지에서 배양하고, 그렇게 얻어지는 배양물로부터 폴리하이드록시알카노에이트 분해효소를 채취하는 것을 특징으로 하는 폴리하이드록시알카노에이트 분해효소의 제조방법을 제공한다.

Description

폴리하이드록시알카노에이트 분해효소 및 그 제조방법
[발명의 분야]
이 발명은 새로운 폴리하이드록시알카노에이트 분해효소 및 그 제조방법에 관한 것이다.
[발명의 배경]
미생물들의 에너지저장물질로서 세포내에 축적되어 있는 폴리하이드록시알카노에이트(이하에서는 PHA라고 지칭함)는 미생물로 분해할 수 있는 열가소성 폴리에스테르이며, 일종의 미생물로 분해할 수 있는 플라스틱물질로서 관심을 끌고 있다. PHA의 가장 대표적인 예는 [R]-3-하이드록시부티레이트 (3HB) 호모폴리에스테르, 즉, P([R]-3HB)이며, 그 것은 폴리프로필렌과 비슷한 강도를 갖고, 미생물에 의한 분해성이 양호하다. 그러나, 그 것은 극도로 부숴지기 쉬운 성질을 갖기 때문에 미생물분해성 플라스틱으로서 실용화되지 못했다.
한편, 이용되는 미생물이나 탄소원에 따라서는 [R]-3HB/4-하이드록시부티레이트 (4HB) 공중합체 등과 같은 공중합 폴리에스테르의 생합성이 최근에 확인되었다. 이러한 공중합 폴리에스테르는 구성요소인 모노머유니트의 종류나 공중합체의 조성비에 따라서는 결정질의 플라스틱으로부터 고탄성의 고무에 이르기까지 폭넓은 물성을 나타내므로, 미생물분해성 플라스틱으로서의 이용이 기대된다.
PHA를 분해하는 대표적 효소로서는 알칼리제네스 페칼리스(Alcaligenes faecalis)나 코마노나스 액시도보란스(Comamonas acidovorans)나 슈도모나스 픽케티(Pseudomonas picketii)나 슈도모나스 레모이그네이(Pseudomonas lemoignei)나 슈도모나스 테스토스테로니(Pseudomonas testosteroni)나 페니실륨 피노필륨(Penicillium pinophilum) 등과 같은 미생물이 세포외로 분비하는 PHA 분해효소가 확인되고 있다. 이러한 효소의 활성부위는 세린잔기(serine residue)이고, 효소의 활성은 폴리에스테르의 결정성의 정도에 의해 크게 영향을 받음이 밝혀졌다. 리조푸스 딜레머 (Rizopus delemer) 등과 같은 균류에 의해 생성되는 리파제도 PHA를 분해하는 효소로 확인되었으며, 폴리프로필락톤 및 폴리카프롤락톤 등과 같은 측부의 체인을 갖지 않은 PHA를 분해하는 것으로 알려져 있다. 즉, 지금까지 확인된 PHA의 분해효소로는 PHA 분해효소 및 리파제뿐이다.
이 발명의 목적은 새로운 PHA 분해효소 및 그러한 효소를 효율적으로 제조하는 방법을 제공하려는 것이다.
도 1은 3HB-4HB 랜덤 공중합체에서의 4HB의 함량과 이 발명의 효소에 의한 수용성 탄소의 용출속도의 관계를 도시한 그래프이고,
도 2는 이 발명의 효소에 의해 각종의 ω-하이드록시알카노에이트 중합체로부터 수용성 탄소를 용출해내는 용출속도를 도시한 그래프이며,
도 3은 이 발명의 효소의 최적의 pH를 도시한 그래프이고,
도 4는 이 발명의 효소의 최적온도를 도시한 그래프이며,
도 5는 이 발명의 효소의 안정온도를 도시한 그래프이고,
도 6은 이 발명의 효소의 SDS-PAGE 전기영동사진이다.
이 발명의 발명자들은 활성 오니에서 PHA 분해효소를 탐색한 결과로 코리네박테륨속에 속하는 균주 IM-1이 세포외에서 새로운 PHA 분해효소를 생산한다는 것을 발견했고, 그에 따라, 이 발명의 완성에 이르렀다.
이 발명은 배열번호1(SEQ ID NO: 1)로 표기되는 아미노산 배열의 N말단 프래그먼트를 갖고 SDS 폴리아크릴라미드 겔 전기영동법에 의해 측정된 분자량이 약 33,000인 PHA 분해효소에 관한 것이다.
또한, 이 발명은 PHA 분해효소를 생산하는 능력을 갖는 미생물을 배지에서 배양하고 얻어진 배양물로부터 PHA 분해효소를 찾아내는 것을 포함하는 PHA 분해효소의 제조방법에 관한 것이다.
또한, 이 발명은 PHA 분해효소의 유전자를 함유하는 재조합형 벡터에 의해 형질전환된 형질전환체를 배지에서 배양하고 얻어진 배양물로부터 PHA 분해효소를 찾아내는 것을 포함하는 PHA 분해효소의 제조방법에 관한 것이다.
아래에서는 이 발명을 상세히 설명하겠다.
이 발명의 PHA 분해효소는 다음과 같은 물성을 갖는다.
1. 작용 및 기질특성
이 발명의 PHA 분해효소는 3-하이드록시프로피오네이트나 4-하이드록시부티레이트(4HB)나 5-하이드록시발레레이트나 6-하이드록시카프로네이트 등과 같은 호모폴리에스테르 또는 그 것들을 함유하는 공중합 폴리에스테르를 분해한다. 그 것들 중에서도 특히 4HB 호모폴리에스테르 또는 4HB를 함유하는 공중합 폴리에스테르의 활성이 높다.
이 발명의 효소의 활성을 아래와 같이 조사했다.
(1) 알칼리게네스 유트로퓨스(Alclaligenes eutrophus) 또는 코마모나스 액시도보란스에 의해 생합성된 5종류의 3HB-4HB 랜덤 공중합체를 이용해서 이 발명의 효소의 활성을 조사했다. 각각의 공중합체의 수량평균 분자량 및 4HB는 표1에 나타낸 바와 같다.
수량평균 분자량 4HB의 함량(몰%)
공중합체1공중합체2공중합체3공중합체4공중합체5 712,50083,800177,900140,70086,300 014416997
공중합체 1 내지 5는 솔벤트캐스팅법에 의해 필름화했으며, 그러한 필름들을 1cm2의 크기(약 8mg)로 절단하여 시험편으로 사용하였다. 각각의 시험편은 pH6.5의 인산완충액에 넣어지고 1500μg의 효소가 첨가되었다. 시험편은 120rpm으로 흔들리는 조건하의 37℃에서 효소와 반응되었다. 시간이 지나면서 반응액의 일부를 채취해서 0.45μm의 멤브레인필터로 여과하고, 얻어진 여과액에서 수용성 유기화합물의 탄소(수용성 탄소)의 함량을 측정해서 반응액 1ml 중에서의 1시간 당 수용성 탄소의 용출속도(μg-C/ml/h)를 구했다.
도 1에 3HB-4HB 랜덤 공중합체에서의 4HB의 함량과 수용성 탄소의 용출속도의 관계를 도시한다. 또한, 이미 알고 있는 분해효소인 알칼리게네스 페칼리스에서 유래된 PHA 분해효소와 리조포스 디레머로부터 유래한 리파제의 분해활성도 함께 나타나 있다. 결과적으로, 이 발명의 PHA 분해효소는 공중합체의 4HB의 함량이 0몰%인 경우에는 분해활성이 나타나지 않았지만, 4HB의 함량의 증대에 따라 그 분해활성이 지수함수적으로 상승된다는 특징이 있다. 또한, 4HB의 함량이 97몰%인 공중합필름의 분해생성물을 HPLC로 분석해서 FAB-Mass 및 LC-Mass로 확인해보니 주요한 분해생성물은 4HB-4HB 다이머(분자량 191)인 것으로 분석되었다.
(2) 3번에서 6번 탄소의 직선 체인의 ω-하이드록시알카노에이트 중합체에 대해서 이 발명의 효소의 활성을 조사했다. 이용된 중합체들은 표2와 같다.
수량평균 분자량
폴리프로필락톤 (PPL)폴리-4-하이드록시부티레이트 (4HB)폴리발레롤락톤 (PVL)폴리카프롤락톤 (PCL) 25,00099,00013,00059,000
각각의 중합체를 솔벤트캐스팅법에 의해 필름으로 형성하고 그러한 필름을 시험편으로 이용했다. 각각의 시험편은 아래와 같이 시험되었다. 시험편 9mg을 pH6.5의 인산완충액 6ml에 넣었다. 그 후에 1500μg의 효소를 첨가했다. 시험편은 120rpm으로 흔들리는 조건하의 37℃에서 효소와 반응되었다. 시간이 지나면서 반응액의 일부를 채취해서 0.45μm의 멤브레인필터로 여과하고, 얻어진 여과액에서 수용성 탄소의 함량을 측정해서 반응액 1ml 중에서의 1시간 당 수용성 탄소의 용출속도(μg-C/ml/h)를 구했다.
도 2에 각각의 중합체에 대한 수용성 탄소의 용출속도를 도시한다. 이 결과로부터 이 발명의 효소는 ω-하이드록시알카노에이트 중합체들 중에서도 P (4HB)에 대해서 높은 분해활성을 니타내는 것으로 분석되었다.
2. N-말단 배열
순화한 PHA 분해효소의 N-말단 프래그먼트22의 잔기의 아미노산 배열을 프로테인시퀀서(Perkin Elmer: Model 492)에 의해 분석했다. 그 결과로 N-말단 프래그먼트는 배열번호 1로 표기되는 아미노산 배열을 가짐을 알았다. 이 배열과 각종의 이미 알려진 효소의 N-말단 배열의 호모로지 시험을 하였더니, 합치하는 효소가 없고 신규의 효소인 것으로 판명되었다.
3. 분자량
분자량을 SDS 폴리아크릴라미드 겔 전기영동법으로 측정하였더니, 약 33,000이었다.
4. 최적의 pH
이 발명의 PHA 분해효소의 반응에 가장 적절한 pH를 초산완충액(pH 4.0∼5.5)과 인산완충액(pH 4.5∼8.9)과 트리스완충액(pH 7.5∼9.5)과 글리신완충액(pH 9.0∼10.5)을 이용해서 측정했다. 또한, 기질로서는 4HB의 함량이 97몰%인 3HB-4HB 공중합체 필름을 이용했다. 솔벤트캐스팅법에 의해 준비한 3HB-4HB 공중합체 필름을 1cm2의 크기(약 6mg)로 절단하고 각각의 완충액에 1장씩 넣고, 효소를 250μg/ml의 농도로 첨가한 후에 30℃로 덮히고 흔들면서 7시간 동안 반응시켰다. 반응이 종료된 후에 각각의 필름을 꺼내어 건조시키고 그 건조질량을 측정해서 필름분해량을 조사했다. 도 3은 pH와 필름분해량의 관계를 도시한다. 도 3에 도시된 바와 같이 pH4∼9의 범위에서 분해가 있었음이 확인되고 가장 분해량이 많은 조건은 pH6.5이었다. 이 결과로부터 최적의 pH는 5 내지 8임을 알았다.
5. 최적온도
pH6.5의 인산완충액 1ml에 효소 250μg을 넣고, 4HB의 함량이 97몰%인 3HB-4HB 공중합체 필름(1cm2, 약 6mg) 1장을 넣어서 다양한 온도로 덮히고 흔들면서 7시간 동안 반응시켰다. 도 4는 온도와 필름분해량의 관계를 도시한다. 도 4에 도시된 바와 같이 20∼60℃의 범위에서 분해가 있었음이 확인되고 최적온도는 37∼42℃이었다.
6. 안정온도
pH6.5의 인산완충액 6ml에 효소 1500μg을 넣고, 다양한 온도로 덮히면서 30분 동안 흔들었다. 그 후에 4HB의 함량이 97몰%인 3HB-4HB 공중합체 필름(1cm2, 약 6mg) 1장을 넣고 37℃에서 흔들면서 배양시켰다. 시간이 지나면서 각각의 배양액의 일부를 채취해서 0.45μm의 멤브레인필터로 여과하고, 얻어진 여과액에서 수용성 탄소의 함량을 측정해서 반응액 1ml 중에서의 1시간 당 수용성 탄소의 용출속도(μg-C/ml/h)를 구했다. 도 5는 처리전의 용출속도를 100% 활성상태로 간주할 경우의 각각의 온도에서 처리한 후의 활성상태를 도시한다. 도 5에 도시된 바와 같이 42℃보다 고온이면 활성이 급격히 저하된다. 그러므로, 이 효소는 42℃까지 안정적이다.
7. 등전점
등전점(isoelectric point)을 아크릴라미드 겔 초점전기영동법으로 측정해보니 약 8.6이었다.
8. 각종 물질의 영향
효소 1500μg을 함유한 pH6.5의 인산완충액 6ml에 억제제로서 페닐메틸설포닐 플루오라이드(PMSF)나 디티오트레이톨(DTT) 또는 디이소프로필 플루오로포스페이트(DFP)의 각각을 적절한 농도로 함유시켰다. 또한, 4HB의 함량이 97몰%인 공중합체 필름(1cm2, 약 6mg) 1장씩을 각각의 억제제를 함유한 효소액에 넣고 37℃에서 흔들면서 배양시켰다. 시간이 지나면서 배양액의 일부를 채취해서 0.45μm의 멤브레인필터로 여과하고, 얻어진 여과액에서 수용성 탄소의 함량을 측정해서 반응액 1ml 중에서의 1시간 당 수용성 탄소의 용출속도(μg-C/ml/h)를 구했다. 억제제가 없을 경우의 용출속도를 100%활성상태로 했다. 표 3은 50%활성상태로 되는 억제제의 농도를 나타낸다. 특히, DFP에서는 0.15μM에 의해 활성이 50%로 되고 현저한 효과가 있었다.
억제제 50%활성억제농도
PMSFDTTDFP 1.92mM73mM0.15μM
이 발명의 PHA 분해효소의 제조에 이용하는 미생물은 코리네박테리움속에 속하고 그러한 PHA 분해효소 생산능력을 갖는 균주이기만 한다면 어떤 미생물을 이용해서든지 제조할 수 있다. 그러한 미생물로는 예를 들어 코리네박테륨 아쿼티쿰(Corynebacterium aquaticum) IM-1이 있다. 또한, 이 IM-1은 다른 세균과 마찬가지로 그 성상이 변화하기 쉽고, 예를 들어 자외선 X선 약품 등을 이용한 인공적 변환수단에 의해 변이될 수 있으며, 그러한 변이균주나 변종도 마찬가지의 활성을 갖는다면 이용이 가능하다.
IM-1균주의 미생물학적 성질은 다음과 같다.
1. 형태적 성질
CGY배지(카시톤 5g/l, 글리세롤 5g/l, 효모엑기스 1g/l) 속에서 발육시킨 IM-1균주의 영양세포는 0.5∼0.7×1.5∼3.0미크론의 간상균이다. 또한, 30℃에서 2일간 배양해서 포자를 형성시키지 않고 구형으로 세포형태가 변화하는 다형성(polymorphism)을 보이는 그램 양성 간상균이었다.
2. 배양적 성질
IM-1균주는 통상적인 세균용 배지를 이용하여 25∼40℃에서 1∼3일간 배양하여 증식시킨다.
3. 생리학적 성질
(1) 산소에 대한 태도 : 호기성
(2) Acid-fast : 음성
(3) 항산성 : 음성
(4) Rod-coccus cycle : 양성
(5) 군체의 색상 : 황색계
(6) 질산염의 환원 : 음성
(7) 옥시다제 : 음성
(8) 갈락타제 : 양성
(9) β-글루쿠로니다제 : 음성
(10) β-글루코시다제 : 양성
(11) N-아세틸-β-글루코시다제 : 양성
(12) 우레아제 : 음성
(13) 전분의 가수분해 : 양성
(14) 글루코스로부터의 발효 : 음성
(15) 당(sugar)의 이용성 : 리보스나 크실로스나 마니톨이나 말토스나 락토스나 슈크로스 또는 글리코겐으로부터의 발육은 없음
이상의 미생물학적 성질을 갖는 IM-1균주를 API코리네 시리즈를 이용하여 확인하고 Bergey's Manual of Determinative Bacteriology에 기재된 이미 알려진 균종과 비교해보니 IM-1균주는 코리네박테륨 아쿼티쿰인 것으로 판명되었다. 코리네박테륨 아쿼티쿰 IM-1균주는 국제기탁기관인 일본통상산업성 공업기술원 생명공학공업기술연구소에 1996년 11월 13일자로 기탁했으며, 수탁번호는 FERM BP-6160이 주어졌다.
코리네박테륨속에 속하는 미생물을 이용해서 PHA 분해효소를 제조하기 위해서는 CGY배지 또는 뉴트리언트 브로드 등과 같은 천연배지에서 호기적으로 배양함으로써 세포를 증식시키고나서 회수한 세포를 PHA 분해효소의 유도배지로 옮기고, 또한, 호기적으로 배양하는 방법을 이용한다.
PHA 분해효소의 유도에 사용되는 배지로서는 유일한 탄소원으로서 초산이나 프로피온산이나 낙산이나 푸마르산이나 부탄올이나 메탄올이나 트리올레인이나 파라핀이나 4-하이드록시낙산 또는 폴리4-하이드록시낙산을 함유하고 질소원으로서는 염화암모늄 또는 황산암모늄을 함유하며 황산마그네슘을 부가적으로 함유한다.
배양은 통기교반 등에 의해 호기적으로 행한다. 배양온도는 통상적으로는 25∼37℃, 양호하게는 27∼32℃이다. 또한, 유도배양에 의한 배양개시시의 pH는 통상적으로는 6.0∼8.0, 양호하게는 7.0정도이다. 배양시간은 통상적으로는 20∼96시간, 양호하게는 40∼96시간이다.
배양물로부터의 PHA 분해효소의 분리 및 제조는 배양물을 원심분리하여 균체를 제거하고 얻어진 상청액을 칼럼 크로마토그래피나 황산암모늄에 의한 분편침전법이나 겔 여과법 등과 같은 종래에 통상적으로 이용해오던 효소정제방법으로 정제함으로써 행할 수 있다. 이와 같이 해서 순화된 PHA 분해효소가 얻어진다.
또한, 이 발명의 PHA 분해효소는 그러한 효소의 유전자를 함유하는 재조합형 벡터에 의해 형질전환된 형질전환체를 배지에서 배양하고, 얻어진 배양물로부터 그러한 효소를 채취함으로써도 제조할 수 있다. 이 발명의 PHA 분해효소의 유전자는 예를 들어 코리네박테륨 아쿼티쿰 IM-1균주로부터 분리할 수 있고, 그러한 유전자를 함유하는 재조합형 벡터에 의해 형질전환된 형질전환체는 아래와 같이 얻어진다. 우선, PHA 분해효소의 N-말단 아미노산배열, 즉, 배열번호1의 아미노산배열에 기초해서 그 전체배열 또는 부분배열을 코딩하는 염기배열을 갖는 DNA프로브를 생화합성한다. 한편, 코리네박테륨 아쿼티쿰 IM-1균주를 CGY배지 또는 뉴트리언트 브로드 등의 천연배지에서 호기적으로 배양해서 균주를 모으고, 통상적인 방법으로 염색체 DNA를 추출하여 정제한다. 정제된 염색체 DNA를 적당한 제한효소에 의해 절단해서 DNA단편 혼합물을 얻는다. 상기 합성 DNA프로브를 이용한 하우던 하이브리다이제이션법에 의해 이 DNA단편 혼합물로부터 DNA프로브와 하이브리드를 형성하는 DNA단편을 취득한다. 동일한 접착말단을 만드는 제한효소로 처리한 클로닝 벡터에 앞서 취득된 DNA단편을 삽입해서 연결한다. 클로닝 벡터는 통상의 클로닝에 이용하는 플라스미드 벡터나 페이지 벡터 중의 어느 것이든지 좋다. 이렇게 해서 얻어진 재조합형 벡터를 이용해서 숙주의 형질전환을 행하고 클로닝 하이브리다이제이션법에 의해 목적하는 형질전환체를 얻을 수 있다. 숙주로서는 예를 들어 4대장균 등을 이용할 수 있다.
[실시예]
아래에서는 이 발명을 실시예에 의해 구체적으로 설명하겠지만, 이 발명의 범위가 그러한 실시예의 범위로 한정되는 것은 아니다.
실시예1
3L의 자르 퍼멘터(jar fermenter) 3기에 각각 4-하이드록시낙산 나트륨 5g/l과 NH4Cl 1g/l 및 MgSO4-7H2O 0.5g/l을 함유하는 유도배지 2L을 넣고, 121℃에서 15분간 멸균했다. 또한, CGY 액체배지 100ml를 함유하는 500ml 삼각플라스크에서 종배양한 코리네박테륨 아쿼티쿰 IM-1균주를 각각의 자르 퍼멘터에 무균적으로 식균하고 30℃에서 24시간 동안 통기교반배양을 행했다. 배양하는 동안에 pH는 1N-H2SO4에 의해 항상 7.0으로 조절했다.
배양이 종료된 후에 6000rpm으로 30분간 원심분리를 행한 배양상청액을 얻었다. 그리고, 분편분자량이 30,000인 한외여과막(ultrafiltration membrane : Dicel : FB02-CC-FUY03AI)을 통과시킴으로써 분자량 30,000 이상의 분편을 회수했다. 회수한 분자량 30,000 이상의 분편은 증발기에 의해 35ml까지 농축한 거친 효소액으로 했다. 세파덱스 G-50을 450ml 충전한 칼럼(길이 900mm, 직경 30mm)에 거친 효소액을 첨가하여 증류수에 의해 전개했다. 용출액은 분편 당 10ml로 발견되었고, 각각의 분편의 0.1ml를 4HB의 함량이 97몰%인 3HB-4HB 공중합체 분말을 현탁된 PHA 아가르플레이트(agar plate)에 떨어뜨리고 스폿의 주변에 형성된 클리어존의 직경으로 효소의 활성을 판단했다.
PHA분해활성의 확인된 분편을 모아서 농축하고 동결건조시켜 360mg의 거친 효소분말을 얻었다. 그리고, 증류수 15ml에 거친 효소분말360mg을 용해시키고 토요펄(Toyo Pearl) HW40(Fine) 450ml를 충전한 칼럼(길이 900mm, 직경 30mm)에 첨가하여 증류수에서 전개했다. 최종적으로 PHA분해활성을 보이는 효소의 분편을 모아서 230㎎을 취득하였다. 각각의 분편을 SDS-PAGE 전기영동에 의해 처리하여 단일밴드로 했다. 도 6에 SDS-PAGE 전기영동사진을 도시한다. 도 6에서 가장 우측의 밴드는 분자량마커이고, 우로부터 2번째의 밴드는 세파덱스 G-50 칼럼처리후의 PHA분해활성의 확인된 분편의 것이며, 우로부터 3번째 이하는 토요펄 HW40 칼럼처리후의 PHA분해활성을 도시한 분편의 것이다.
이 발명에 의해 ω-하이드록시알카노에이트, 특히, 4HB의 호모폴리에스테르 또는 그 것을 함유하는 공중합폴리에스테르의 분해활성을 갖는 신규의 PHA 분해효소 및 그 효율적인 제조방법을 제공할 수 있다.
배열목록
배열번호 : 1
배열길이 : 22 아미노산
배열형태 : 아미노산
모양 : 직선형
분자형태 : 펩티드
프래그먼트형태 : N-말단 프래그먼트
배열설명 :
Ala Gly Pro Val Thr Leu Glu Ala Thr Phe Thr Ser Ser Cys Cys Gly Trp Glu
1 5 10 15
Lys Val Glu Arg
20

Claims (3)

  1. 배열번호 1로 표기되는 아미노산배열의 N-말단 프래그먼트를 갖고 SDS 폴리아크릴라미드 겔 전기영동법에 의해 측정한 분자량이 33,000인 폴리하이드록시알카노에이트 분해효소.
  2. 코리네박테륨속에 속하고 청구항 1에 기재된 폴리하이드록시알카노에이트 분해효소의 생산능력을 갖는 미생물을 배지에서 배양하고, 그렇게 얻어진 배양물로부터 폴리하이드록시알카노에이트 분해효소를 채취하는 것을 특징으로 하는 폴리하이드록시알카노에이트 분해효소의 제조방법.
  3. 청구항 1에 기재된 폴리하이드록시알카노에이트 분해효소의 유전자를 함유하는 재조합형 벡터에 의해 형질전환된 형질전환체를 배지에서 배양하고, 그렇게 얻어지는 배양물로부터 폴리하이드록시알카노에이트 분해효소를 채취하는 것을 특징으로 하는 폴리하이드록시알카노에이트 분해효소의 제조방법.
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