KR102659073B1 - 인간 제6형 콜라겐 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트로 형질전환된 균주를 포함하는 피부 상태 개선용 조성물 - Google Patents
인간 제6형 콜라겐 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트로 형질전환된 균주를 포함하는 피부 상태 개선용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 인간 제6형 콜라겐 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트로 형질전환된 균주, 이의 배양액, 이의 파쇄액, 이의 추출물 또는 이의 발효물을 포함하는 피부 상태 개선용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 본 발명의 형질전환 균주, 이의 배양액, 이의 파쇄액, 이의 추출물 또는 이의 발효물이 피부에서 제1형 콜라겐 유전자의 발현을 향상시키고 콜라겐 분해효소인 MMP-1의 발현을 감소시킴을 확인하였으므로, 상기 균주, 이의 배양액, 이의 파쇄액, 이의 추출물 또는 이의 발효물을 포함하는 조성물은 피부 상태 개선용 화장료 조성물 또는 식품 조성물로서 활용될 수 있다.
Description
본 발명은 인간 제6형 콜라겐 (human collagen type 6) 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트 (construct)로 형질전환된 균주, 이의 배양액, 이의 파쇄액, 이의 추출물 또는 이의 발효물을 포함하는 피부 상태 개선용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 본 발명의 형질전환 균주, 이의 배양액, 이의 파쇄액, 이의 추출물 또는 이의 발효물이 피부에서 제1형 콜라겐 유전자의 발현을 향상시키고 콜라겐 분해효소인 MMP-1의 발현을 감소시킴을 확인하였으므로, 상기 균주, 이의 배양액, 이의 파쇄액, 이의 추출물 또는 이의 발효물을 포함하는 조성물은 피부 상태 개선용 화장료 조성물 또는 식품 조성물로서 활용될 수 있다.
신체의 가장 바깥쪽에 존재하며, 신체를 보호하는 역할을 하는 피부는 표피, 진피, 피하지방의 3개 층으로 구성되어 있다. 표피층은 각질형성세포와 멜라닌형성세포가 존재하여, 멜라닌 색소를 생산하고 각질층을 형성하여 자외선 등과 같은 외부 유해인자를 차단하는 역할을 한다. 진피층은 섬유아세포에 의해 콜라겐(collagen), 엘라스틴(elastin)과 같은 섬유상 단백질을 포함한 세포 외 기질 성분이 생산되고, 세포외 기질을 통해 망상층 구조를 형성함으로써 피부의 탄력을 조절하는 역할을 한다.
피부는 신체의 노화가 가장 먼저 확인되는 기관으로 내인적, 외인적 요인에 의하여 노화가 진행된다. 내인적 노화는 나이가 들어가면서 발생되는 자연스러운 노화현상으로 체내 활성산소 생성량이 증가하면서 피부 세포들의 기능이 저하되어 발생한다. 외인적 노화는 흡연, 과음, 자외선 등에 의한 외부요인에 의하여 발생되는 것으 로 피부세포들의 기능저하 현상이 발생하게 된다.
이러한 피부 노화가 진행되면 표피층은 수분 부족 현상이 발생하여 피부가 거칠어지고 각질형성세포의 각화주기에 이상이 생겨 비정상적인 각질층이 형성된다. 진피층의 경우 진피 섬유아세포의 콜라겐 합성 저해로 인해 세포외 기질 부족현상이 발생하여 진피 망상층의 구조 변형이 일어나게 된다. 이러한 구조 변형은 피부의 탄력 감소와 주름 생성을 초래하게 된다.
콜라겐 (collagen)은 신체 조직 곳곳에 존재하는 섬유상 단백질로서 다양한 타입으로 구성되어 있다. 16가지 종류의 콜라겐이 알려져 있으며, 발견 순서대로 제1형, 제2형, 제3형 등으로 번호가 매겨져 있다. 콜라겐은 피부의 주요 구성 요로서, 피부를 강화하는 역할을 하며 탄력과 보습에 도움이 된다. 나이가 들어감에 따라 신체에서 콜라겐이 적게 생성되어 피부가 건조해지고 주름이 생기게 된다.
이에 본 발명자들은 인간 제6형 콜라겐 (human collagen type 6) 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트 (construct)로 형질전환된 균주, 이의 배양액, 이의 파쇄액, 이의 추출물 또는 이의 발효물의 콜라겐 발현 증가능 및 MMP-1 발현 감소능을 확인하여, 본 발명을 완성하게 되었다.
이에, 본 발명의 목적은 인간 제6형 콜라겐 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트로 형질전환된 균주, 이의 배양액, 이의 파쇄액, 이의 추출물 또는 이의 발효물을 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
발명의 다른 목적은 인간 제6형 콜라겐 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트로 형질전환된 균주, 이의 배양액, 이의 파쇄액, 이의 추출물 또는 이의 발효물을 포함하는 피부 상태 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
발명의 또 다른 목적은 인간 제6형 콜라겐 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트로 형질전환된 균주를 제조하는 형질전환 균주 제조 단계를 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물의 제조 방법을 제공하는 것이다.
발명의 또 다른 목적은 인간 제6형 콜라겐 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트로 형질전환된 균주를 제조하는 형질전환 균주 제조 단계를 포함하는 피부 상태 개선용 식품 조성물의 제조 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 인간 제6형 콜라겐 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트로 형질전환된 균주, 이의 배양액, 이의 파쇄액, 이의 추출물 또는 이의 발효물의 피부 상태 개선 용도를 제공하는 것이다.
본 발명은 인간 제6형 콜라겐 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트로 형질전환된 균주, 이의 배양액, 이의 파쇄액, 이의 추출물 또는 이의 발효물을 포함하는 피부 상태 개선용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
이하 본 발명을 더욱 자세히 설명하고자 한다.
본 발명의 일 양태는 인간 제6형 콜라겐 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트로 형질전환된 균주, 이의 배양액, 이의 파쇄액, 이의 추출물 또는 이의 발효물을 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 명세서에서 용어 “발현 컨스트럭트”는 세포 내에서 단백질 발현을 위한 최소한의 구성 (element)만을 포함하는 핵산분자를 의미한다.
본 발명에 있어서, 발현 컨스트럭트는 재조합 벡터일 수 있다.
본 명세서에서 용어 “벡터 (vector)”는 적합한 숙주, 특히 재조합 효모 내에서 목적하는 단백질을 발현할 수 있도록 하는 작동 가능하게 연결된 필수적인 조절 요소를 포함하는 핵산 제작물 (construct)을 의미한다. 상기 벡터는 플라스미드, 파지 입자, 또는 간단하게 잠재적 게놈 삽입물일 수 있다. 적당한 숙주로 형질전환되면, 벡터는 숙주 게놈과 무관하게 복제하고 기능할 수 있거나, 또는 일부 경우에 게놈 그 자체에 통합될 수 있다. 본 명세서에서 “플라스미드 (plasmid)” 및 “벡터 (vector)”는 때로 상호 교환적으로 사용된다. 그러나, 본 명세서는 당업계에 알려진 또는 알려지게 되는 바와 동등한 기능을 갖는 벡터의 다른 형태를 포함한다.
본 발명에 있어서, 재조합 벡터는 프로모터, 형질전환용 핵산 또는 유전자, 제한효소 인식 염기서열, 전사 종결 서열, 항생제 내성 유전자 등이 작동 가능하게 연결된 벡터일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니고, 상기 각 구성 요소는 당업계에서 통상적으로 이용되는 것이라면 제한 없이 사용할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "작동 가능하게 연결"은 발현 조절 서열이 형질전환용 핵산 등의 구성 요소를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열의 전사 및 해독을 조절하도록 연결된 것을 의미하며, 프로모터를 포함하는 발현 조절 서열에 의해 코딩되는 형질전환용 핵산 등의 구성 요소가 생성되도록 정확한 해독 프레임을 유지시키는 것을 포함할 수 있다. 또한，본 명세서에서 용어 "항생제 내성 유전자"는 형질전환시에 외래 핵산의 삽입 여부를 판단하고 선별하기 위해 형질전환용 핵산과 연결하여 발현되도록 하는 구성 요소를 의미하며, 이에 제한되지는 않으나 당업자는 목적에 따라 적절한 항생제 내성 유전자를 사용할 수 있다.
본 발명에 있어서, 균주는 효모인 것일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "효모"는 맥주, 포도주, 막걸리 등을 만드는 데 사용되는 미생물로서 곰팡이나 버섯 무리지만 균사가 없고 광합성능이나 운동성도 없는 단세포 생물의 총칭이다.
본 발명에 있어서, 균주는 사카로마이세스 (Saccharomyces) 속 효모 또는 피키아 (Pichia) 속 효모, 예를 들어, 피키아 (Pichia) 속 효모인 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 균주는 사카로마이세스 세레비지에 (Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 칼스버젠시스 (Saccharomyces carlsbergensis), 사카로마이세스 서바지 (Saccharomyces servazzii), 및 피키아 파스토리스 (Pichia pastoris)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상, 예를 들어, 피키아 파스토리스(Pichia pastoris)인 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 발현 컨스트럭트를 균주의 세포에 형질전환하는 방법은 당업계에 공지된 진핵 세포에 벡터를 형질전환하는 방법을 이용할 수 있으며, 예를 들어, 미세 주입법, 칼슘 포스페이트 침전법, 전기 천공법, 리포좀-매개 형질감염법, DEAE-덱스트란 처리 법, 유전자 밤바드먼트, 초산-리튬 DMSO법 등을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 형질전환 균주는 당업계의 통상의 방법에 따라 배양될 수 있다.
본 발명에 있어서, 형질전환 균주의 배양에 이용되는 배양 배지는 메탄올이 포함된 배지로 YPM (Bacto-peptone 2%(w/v), Bacto-Yeast Extract 1%(w/v), Methanol 3%(w/v)) 배지, YPD (Bacto-peptone 2%(w/v), Bacto-Yeast Extract 1%(w/v), D-glucose 2%(w/v)), 또는 최소배지인 YNBD (YNB without amino acids 0.67%(w/v), amino acid mixture, D-glucose 2%(w/v)) 배지, 예를 들어, YPM 배지를 사용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 형질전환 균주의 배양에 이용되는 배양 탄소원은 메탄올을 사용할 수 있으며, 메탄올의 농도는 1 내지 10 %(w/v), 1 내지 5 %(w/v), 1 내지 4 %(w/v), 2 내지 10 %(w/v), 2 내지 5 %(w/v), 또는 2 내지 4 %(w/v)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 형질전환 균주의 배양 온도는 25 내지 45 ℃, 25 내지 40 ℃, 25 내지 39 ℃, 30 내지 45 ℃, 30 내지 40 ℃, 30 내지 39 ℃, 35 내지 45 ℃, 35 내지 40 ℃, 또는 35 내지 39 ℃일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 형질전환 균주의 배양 pH는 pH 4.5 내지 7.0, pH 4.5 내지 6.5, pH 4.5 내지 6.3, pH 5.0 내지 7.0, pH 5.0 내지 6.5, pH 5.0 내지 6.3, pH 5.7 내지 7.0, pH 5.7 내지 6.5, 또는 pH 5.7 내지 6.3일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 형질전환 균주의 배양 교반 속도는 100 내지 300 rpm, 100 내지 250 rpm, 100 내지 220 rpm, 150 내지 300 rpm, 150 내지 250 rpm, 150 내지 220 rpm, 180 내지 300 rpm, 180 내지 250 rpm, 또는 180 내지 220 rpm일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 인간 제6형 콜라겐 (human collagen type 6)의 아미노산 서열에 대한 정보는, National Library of Medicine, NCBI (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)의 데이터베이스로부터 제공받아 사용할 수 있고, 상기 펩타이드 서열 정보로부터 합성하여 얻은 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 인간 제6형 콜라겐 (human collagen type 6) 유전자는 서열번호 3의 염기 서열을 포함하는 것일 수 있다.
본 명세서상의 용어 “추출물”은 균주의 배양액에서 분리한 것을 의미하며, 추출물은 배양 상층액 및 배양 여액을 포함한다.
본 명세서상의 용어 “배양 상층액”은 원심분리 방법을 통해 배양액으로부터 대부분의 미생물을 제거한 후 획득한 상층의 액을 의미한다.
본 명세서상의 용어 “배양 여액”은 원심분리 및 여과를 수행함으로써 배양액으로부터 균체를 여과하여 제거한 뒤에 남은 액체를 의미한다. 배양 여액은 미생물이 자라는 과정에서 형성하여 배출한 물질들이 포함되어 있어서 그 물질을 정제하거나 추출할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "파쇄액"은 효모 자체에서 화학적 또는 물리적 힘에 의하여 세포벽을 파쇄하여 얻은 산물을 의미할 수 있다. 본 명세서에서 상기 “파쇄액”은 “파쇄물”, “용해액”, 또는 “용해물 (lysate)”과 상호교환적으로 사용될 수 있다.
본 명세서에서 배양된 효모의 파쇄 방법은 효모 세포의 전체 파쇄물을 얻을 수 있는 방법이면 제한 없이 사용될 수 있다. 예를 들어, 초음파 파쇄법 (sonication)에 의한 파쇄, 유리 비드 (glass beads)에 의한 파쇄, 계면활성제를 이용한 파쇄, 또는 이들의 조합을 이용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 용어 "배양액의 추출물"은 상기 배양액 또는 그의 농축액로부터 추출한 것을 의미하며, 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물, 이를 분획한 분획물을 포함할 수 있다.
인간 제6형 콜라겐은 사람 피부에 존재하는 콜라겐 다발인 제1형 콜라겐과 제3형 콜라겐과 함께 세포외 기질 (Extracellular matrix)을 이루어서 피부 탄력에 중요한 역할을 한다.
본 발명의 인간 제6형 콜라겐 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트로 형질전환된 균주, 이의 배양액, 이의 파쇄액, 이의 추출물 또는 이의 발효물은 피부 세포에서 제1형 콜라겐 유전자의 발현을 향상시키고, 콜라겐 분해효소인 MMP-1의 발현을 감소시킴에 따라, 피부 주름, 피부 노화 및 피부 탄력을 개선할 수 있다.
본 발명에 있어서, 인간 제6형 콜라겐 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트로 형질전환된 균주, 이의 배양액, 파쇄액, 이의 추출물 또는 이의 발효물은 조성물 총 중량 대비 0.001 내지 99 중량%, 0.001 내지 70 중량%, 0.001 내지 50 중량%, 0.001 내지 30 중량%, 0.001 내지 20 중량%, 1 내지 99 중량%, 1 내지 70 중량%, 1 내지 50 중량%, 1 내지 30 중량%, 1 내지 20 중량%, 5 내지 99 중량%, 5 내지 80 중량%, 5 내지 70 중량%, 5 내지 60 중량%, 5 내지 50 중량%, 5 내지 40 중량%, 5 내지 30 중량%, 또는 5 내지 20 중량%, 5 내지 10 중량%, 예를 들어, 5 중량% 포함된 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 피부 상태는 피부 주름, 피부 노화 및 피부 탄력으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것일 수 있다.
본 발명에 있어서 화장료 조성물은 보습제, 피부컨디셔닝제, pH조절제, 점도조절제, 금속이온봉쇄제 및 용제로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서 보습제는 글리세린, 다이프로필렌글라이콜, 부틸렌글라이콜, 소듐하이알루로네이트, 글루코오스, 프룩토오스, 하이드롤라이즈드하이알루로닉애씨드 및 베타글루칸으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 피부컨디셔닝제는 소듐락테이트, 판테놀, 알란토인, 폴리글리세릴-10라우레이트, 폴리글리세릴-10미리스테이트, 카프릴릴글라이콜 및 에틸헥실글리세린으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 pH조절제는 트로메타민인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 점도조절제는 잔탄검인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 금속이온봉쇄제는 다이소듐이디티에이인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 용제는 정제수, 1,2-헥산다이올 및 에탄올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 화장료 조성물은 방부제, 향료 및 첨가제로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 추가로 포함하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 방부제는 펜틸렌글라이콜, 1,2-헥산디올, 카프릴릴글라이콜, 페녹시에탄올, 파라벤 및 에칠헥실글리세릴로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 향료는 인공향료, 에센셜 오일 및 향취가 강한 식물 유래 추출물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 첨가제는 사용감 증진을 위한 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 첨가제는 실리카인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 화장료 조성물은 통상적으로 이용되는 보조제 및 담체를 추가로 포함할 수 있으며, 예를 들어 안정화제, 용해화제, 비타민 및 안료로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 화장료 조성물은 스킨, 토너, 유연화장수, 영양화장수, 세럼, 로션, 수분크림, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 팩, 젤 또는 앰플 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 다른 양태는 인간 제6형 콜라겐 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트로 형질전환된 균주, 이의 배양액, 이의 파쇄액, 이의 추출물 또는 이의 발효물을 포함하는 피부 상태 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 있어서, 균주는 효모인 것일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "효모"는 맥주, 포도주, 막걸리 등을 만드는 데 사용되는 미생물로서 곰팡이나 버섯 무리지만 균사가 없고 광합성능이나 운동성도 없는 단세포 생물의 총칭이다.
본 발명에 있어서, 균주는 사카로마이세스 (Saccharomyces) 속 효모 또는 피키아 (Pichia) 속 효모, 예를 들어, 피키아 (Pichia) 속 효모인 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 균주는 사카로마이세스 세레비지에 (Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 칼스버젠시스 (Saccharomyces carlsbergensis), 사카로마이세스 서바지 (Saccharomyces servazzii), 및 피키아 파스토리스 (Pichia pastoris)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상, 예를 들어, 피키아 파스토리스(Pichia pastoris)인 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 피부 상태는 피부 주름, 피부 노화 및 피부 탄력으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것일 수 있다.
본 발명에 있어서 식품 조성물은 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조 및 가공될 수 있다.
본 발명에 있어서 식품 조성물은 "건강기능성식품 조성물"인 것일 수 있으며, 건강기능성식품 조성물은 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 말하며, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
본 발명에 있어서 건강기능성식품은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전청에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다. 상기 '식품 첨가물 공전'에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼슘, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물; 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물; L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료 제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류 등을 들 수 있다. 예를 들어, 정제 형태의 건강기능성식품은 본 발명의 유효성분을 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와 혼합한 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축성형할 수 있다. 또한 상기 정제 형태의 건강기능성식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수도 있다. 캅셀 형태의 건강기능성식품 중 경질 캅셀제는 통상의 경질 캅셀에 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질 캅셀제는 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 젤라틴과 같은 캅셀기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질 캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다. 환 형태의 건강기능성식품은 본 발명의 유효성분과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 제피제로 제피할 수 있으며, 또는 전분, 탈크와 같은 물질로 표면을 코팅할 수도 있다. 과립 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분의 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태는 인간 제6형 콜라겐 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트로 형질전환된 균주를 제조하는 형질전환 균주 제조 단계를 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물 제조 방법을 제공하는 것이다.
본 발명에 있어서, 화장료 조성물 제조 방법은 제조한 균주의 배양액, 파쇄액, 추출물 또는 발효물을 수득하는 수득 단계를 추가적으로 포함하는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 균주는 효모인 것일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "효모"는 맥주, 포도주, 막걸리 등을 만드는 데 사용되는 미생물로서 곰팡이나 버섯 무리지만 균사가 없고 광합성능이나 운동성도 없는 단세포 생물의 총칭이다.
본 발명에 있어서, 균주는 사카로마이세스 (Saccharomyces) 속 효모 또는 피키아 (Pichia) 속 효모, 예를 들어, 피키아 (Pichia) 속 효모인 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 균주는 사카로마이세스 세레비지에 (Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 칼스버젠시스 (Saccharomyces carlsbergensis), 사카로마이세스 서바지 (Saccharomyces servazzii), 및 피키아 파스토리스 (Pichia pastoris)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상, 예를 들어, 피키아 파스토리스(Pichia pastoris)인 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 피부 상태는 피부 주름, 피부 노화 및 피부 탄력으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태는 인간 제6형 콜라겐 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트로 형질전환된 균주를 제조하는 형질전환 균주 제조 단계를 포함하는 피부 상태 개선용 식품 조성물 제조 방법을 제공하는 것이다.
본 발명에 있어서, 식품 조성물 제조 방법은 제조한 균주의 배양액, 파쇄액, 추출물 또는 발효물을 수득하는 수득 단계를 추가적으로 포함하는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 균주는 효모인 것일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "효모"는 맥주, 포도주, 막걸리 등을 만드는 데 사용되는 미생물로서 곰팡이나 버섯 무리지만 균사가 없고 광합성능이나 운동성도 없는 단세포 생물의 총칭이다.
본 발명에 있어서, 균주는 사카로마이세스 (Saccharomyces) 속 효모 또는 피키아 (Pichia) 속 효모, 예를 들어, 피키아 (Pichia) 속 효모인 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 균주는 사카로마이세스 세레비지에 (Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 칼스버젠시스 (Saccharomyces carlsbergensis), 사카로마이세스 서바지 (Saccharomyces servazzii), 및 피키아 파스토리스 (Pichia pastoris)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상, 예를 들어, 피키아 파스토리스(Pichia pastoris)인 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 피부 상태는 피부 주름, 피부 노화 및 피부 탄력으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것일 수 있다.
본 발명은 인간 제6형 콜라겐 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트로 형질전환된 균주, 이의 배양액, 이의 파쇄액, 이의 추출물 또는 이의 발효물을 포함하는 피부 상태 개선용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 본 발명의 형질전환 균주, 이의 배양액, 이의 파쇄액, 이의 추출물 또는 이의 발효물이 피부에서 제1형 콜라겐 유전자의 발현을 향상시키고 콜라겐 분해효소인 MMP-1의 발현을 감소시킴을 확인하였으므로, 상기 균주, 이의 배양액, 이의 파쇄액, 이의 추출물 또는 이의 발효물을 포함하는 조성물은 피부 상태 개선용 화장료 조성물 또는 식품 조성물로서 활용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 형질전환 균주가 인간 제6형 콜라겐 펩타이드를 발현함을 확인한 웨스턴 블랏 사진이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 형질전환 균주의 제1형 콜라겐 유전자 발현 증가능을 보여주는 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 형질전환 균주의 콜라겐 분해효소 MMP-1 발현 억제능을 보여주는 그래프이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 형질전환 균주의 제1형 콜라겐 유전자 발현 증가능을 보여주는 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 형질전환 균주의 콜라겐 분해효소 MMP-1 발현 억제능을 보여주는 그래프이다.
이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 형질전환 효모 용해물 제조
1-1. 형질전환 효모의 제조
효모 균주 발현벡터를 구축하고, 이를 효모 균주 내로 도입하여 형질전환 효모를 제조하였다. 구체적으로, 효모 균주용 발현벡터에 발현 유도 프로모터, 인간 제6형 콜라겐 유전자의 염기서열 및 전사 종결 서열을 포함하도록 제작하였다.
인간 제6형 콜라겐 아미노산 서열 (human collagen type 6 peptide)은 하기 표 1에 나타냈고, 발현 유도 프로모터 (inducible promoter), 인간 제6형 콜라겐 유전자의 염기서열 (human collagen type 6 gene) 및 전사 종결 서열 (terminator)은 하기 표 2에 나타냈다.
| 서열번호 | 명칭 | 서열 (N -> C) |
| 1 | human collagen type 6 peptide | MQDEPETPRAVAFQDCPVDLFFVLDTSESVALRLKPYGALVDKVKSFTKRFIDNLRDRYYRCDRNLVWNAGALHYSDEVEIIQGLTRMPGGRDALKSSVDAVKYFGKGTYTDCAIKKGLEQLLVGGSHLKENKYLIVVTDGHPLEGYKEPCGGLEDAVNEAKHLGVKVFSVAITPDHLEPRLSIIATDHTYRRNFTAADWGQSRDAEEAISQTIDTIVDMIKNNVEQVCCSFECQPARGPPGLRGDPGFEGERGKPGLPGEKGEAGDPGRPGDLGPVGYQGMKGEKGSRGEKGSRGPKGYKGEKGKRGIDGVDGVKGEMGYPGLPGCKGSPGFDGIQGPPGPKGDPGAFGLKGEKGEPGADGEAGRPGSSGPSGDEGQPGEPGPPGEKGEAGDEGNPGPDGAPGERGGPGERGPRGTPGTRGPRGDPGEAGPQGDQGREGPVGVPGDPGEAGPIGPKGYRGDEGPPGSEGARGAPGPAGPPGDPGLMGERGEDGPAGNGTEGFPGFPGYPGNRGAPGINGTKGYPGLKGDEGEAGDPGDDNNDIAPRGVKGAKGYRGPEGPQGPPGHQGPPGPDECEILDIIMKMCSCCECKCGPIDLLFVLDSSESIGLQNFEIAKDFVVKVIDRLSRDELVKFEPGQSYAGVVQYSHSQMQEHVSLRSPSIRNVQELKEAIKSLQWMAGGTFTGEALQYTRDQLLPPSPNNRIALVITDGRSDTQRDTTPLNVLCSPGIQVVSVGIKDVFDFIPGSDQLNVISCQGLAPSQGRPGLSLVKENYAELLEDAFLKNVTAQICIDKKCPDYTCPITFSSPADITILLDGSASVGSHNFDTTKRFAKRLAERFLTAGRTDPAHDVRVAVVQYSGTGQQRPERASLQFLQNYTALASAVDAMDFINDATDVNDALGYVTRFYREASSGAAKKRLLLFSDGNSQGATPAAIEKAVQEAQRAGIEIFVVVVGRQVNEPHIRVLVTGKTAEYDVAYGESHLFRVPSYQALLRGVFHQTVSRKVALG* |
| 서열번호 | 명칭 | 서열 (5' -> 3') |
| 2 | inducible promoter | tttttgtagaaatgtcttggtgtcctcgtccaatcaggtagccatctctgaaatatctggctccgttgcaactccgaacgacctgctggcaacgtaaaattctccggggtaaaacttaaatgtggagtaatggaaccagaaacgtctcttcccttctctctccttccaccgcccgttaccgtccctaggaaattttactctgctggagagcttcttctacggcccccttgcagcaatgctcttcccagcattacgttgcgggtaaaacggaggtcgtgtacccgacctagcagcccagggatggaaaagtcccggccgtcgctggcaataatagcgggcggacgcatgtcatgagattattggaaaccaccagaatcgaatataaaaggcgaacacctttcccaattttggtttctcctgacccaaagactttaaatttaatttatttgtccctatttcaatcaattgaacaactat |
| 3 | human collagen type 6 gene | atgcaagacgaacctgagactcctagggccgtcgcatttcaagattgccctgtagatctgttcttcgtgcttgatacgagtgagtctgtggccttgcgtttgaagccttacggagccttggtggataaagtaaagtctttcactaagcgttttatagataatcttagggatcgttactataggtgtgatagaaatttagtttggaatgcaggcgctttacattacagtgacgaggtcgagattatacagggattaacaaggatgcctggaggcagggatgcattaaagtcatccgtagacgcagtgaagtacttcggtaaaggcacatatacagactgtgctatcaaaaaaggcctagaacaactgttggtaggcggcagtcatttgaaggaaaataagtacttgatcgtcgtcaccgatggtcatcccctagagggatataaagaaccatgtggcggacttgaagatgccgtcaacgaagctaagcacctgggagttaaggtgtttagtgtggctatcacgccagatcacttagaacctagattgagtataatcgctaccgaccacacatacaggagaaacttcacggccgctgattggggtcagtcacgtgacgctgaggaggctatttcacaaaccatcgacactattgtagatatgataaaaaataatgtagagcaagtatgctgtagttttgagtgtcagccagcccgtggtcctcccggacttaggggtgaccctggattcgagggcgagagaggcaaaccaggtttgcccggtgaaaaaggcgaggccggtgatccaggtcgtcccggcgaccttggcccagtcggctaccagggtatgaagggcgagaagggttctagaggagaaaagggatctcgtggtcccaaaggttacaaaggagagaaaggcaagaggggcattgacggcgtcgacggcgtaaaaggtgagatgggttatccaggcctgcctggatgtaagggctcacctggattcgatggtatccagggaccacctggacctaaaggagatcccggcgcatttggcttgaaaggagaaaagggagagcccggagccgacggagaggccggtcgtcctggatcatccggccctagtggagacgaaggtcaaccaggcgagcctggtccacctggagagaaaggcgaggctggtgacgaaggaaatcctggaccagatggtgctccaggcgaacgtggtggtccaggcgaaagaggtccaagaggtactcctggtacaagaggacctagaggtgaccctggcgaagctggtcctcaaggtgatcaaggtagagaaggtcctgttggtgttcctggcgatccaggtgaagccggacctattggtcctaagggttacagaggtgatgagggtcctccaggatctgagggtgctagaggtgctcccggtcctgctggcccaccaggcgatcctggtttaatgggtgaacgtggtgaggatggacctgctggtaatggtactgaaggtttcccaggttttcctggatacccaggtaatagaggtgccccaggtattaacggtactaagggataccctggattgaagggcgacgaaggtgaggctggcgaccctggtgacgataacaatgatattgcaccaagaggcgtcaagggtgccaaaggttatagaggtcctgaaggtccacaaggaccaccaggtcatcagggacctccaggtccagatgaatgtgagattctggacatcattatgaagatgtgctcttgctgcgagtgcaagtgtggtccaattgacttgttgtttgtcctggactcctccgagtccattggtctgcaaaacttcgagatcgccaaggacttcgttgtcaaggtcatcgacagattgtctagggacgagttggttaagttcgagccaggtcaatcttacgccggtgttgttcaatactctcactcccagatgcaagaacacgtttccttgagatccccatccatcagaaacgtgcaagagttgaaagaggccatcaagtcccttcaatggatggctggtggtacttttactggtgaagccctgcagtacactagagatcagttgttgccaccatctccaaacaacagaatcgccttggttatcaccgacggtagatccgatactcagagagacactaccccattgaacgttttgtgctctccaggtattcaggtcgtttccgttggtatcaaggacgtgttcgacttcattccaggttccgaccagttgaacgttatctcctgtcaaggattggctccatctcaaggtcgtccaggtttgtctttggtcaaagagaactacgccgagttgttggaggatgccttcttgaagaacgttactgcccagatctgcatcgacaagaagtgcccagattacacctgtccaatcaccttctcatccccagctgacatcaccattttgttggacggttctgcttctgtcggttcccacaactttgacaccactaagagattcgctaagagactggccgagagattcttgactgctggtagaactgatccagctcacgacgttagagttgccgttgttcagtattccggtactggtcagcaaagaccagaaagagcttccttgcagttcctgcagaactacactgctttggcttccgctgttgatgccatggacttcattaacgatgccaccgatgttaacgacgccttgggttacgttaccagattctacagagaagcttcctccggtgctgctaagaagagattgctgttgttctctgacggtaactcccaaggtgctactccagctgctattgagaaagctgttcaagaagctcagagagccggtatcgagatcttcgttgttgttgtcggtagacaggttaacgagccacacatcagagttttggtcactggtaagactgccgagtacgatgttgcttacggtgaatcccacttgttcagagttccatcctaccaggctttgctgagaggtgttttccaccagactgtttccagaaaggtcgctttgggttaa |
| 4 | terminator | tcgatttgtatgtgaaatagctgaaattcgaaaatttcattatggctgtatctactttagcgtattaggcatttgagcattggcttgaacaatgcgggctgtagtgtgtcaccaaagaaaccattcgggttcggatctggaagtcctcatcacgtgatgccgatctcgtgtattttattttcagataacacctgaggacttt |
제작한 벡터를 이용하여 상업적으로 구매한 피키아 파스토리스 (Pichia pastoris)를 형질전환 (transformation) 시킨 뒤, 발현벡터를 가지는 균주 라인을 선별하였다.
1-2. 형질전환 효모의 인간 제6형 콜라겐 펩타이드 발현 확인
웨스턴 블랏을 통해 선별한 균주 라인에서의 인간 제6형 콜라겐 펩타이드의 발현을 확인하여 그 결과를 도 1에 나타냈다. 도 1에서 확인할 수 있듯이 형질전환되지 않은 야생종 피키아 파스토리스 균주에서는 인간 제6형 콜라겐 펩타이드 밴드가 관찰되지 않았으나, 제작한 벡터로 형질전환한 피키아 파스토리스 균주에서는 인간 제6형 콜라겐 펩타이드 사이즈에 해당하는 약 107 kDa의 위치에서 단백질 밴드가 관찰됨을 확인하였다.
1-3. 형질전환 효모 용해물 제조
형질전환 효모는 아가 (agar) 1.5%가 첨가된 YPD 배지(Bacto-peptone 2%(w/v), Bacto-Yeast Extract 1%(w/v), D-glucose 2%(w/v))에서 30℃ 조건으로 24시간 동안 배양하였다. 상기 YPD 배지에서 배양된 콜로니 (colony)를 25mL YPD (Bacto-peptone 2%(w/v), Bacto-Yeast Extract 1%(w/v), D-glucose 2%(w/v)) 배지액이 들어간 250mL 베플 플라스크 (baffled flask)에 접종한 후, 30℃에서 250rpm 조건으로 배양하였다. 배양은 균체의 현탁정도가 파장 600nm에서 OD 8~10이 될 때까지 24~48시간 동안 수행하였다. 그런 다음, 상기 배양액을 5분 동안 3000rpm으로 상온에서 원심분리하여 세포만을 회수하였다. 회수한 형질전환 효모 세포를 멸균된 최소배지인 YPD으로 한 번 세척하고, 다시 원심분리하여 상등액을 제거하였다. 획득한 효모 세포를 Q 700 초음파 분산기 (QSONICA, USA)를 이용하여 용해시켰다. 온도는 30℃ 미만으로 유지하고, 초음파의 출력은 100~500 와트, pulse on/off를 10s/10s로 설정하여 파쇄물 (형질전환 효모 용해물)을 수득하였다.
실험예 1. 피부 상태 개선능 확인
1-1. 인간 섬유아세포의 배양
인간 섬유아세포인 Hs68 세포를 10% 우태아혈청(FBS), 1% 페니실린이 첨가된 Dulbeco's Modified Eagle's medium (DMEM) 배지가 들어있는 6 웰 플레이트에서 배양하였다. 형질전환 효모 용해물을 0.2㎛ 시린지 필터 (Syringe filter)로 여과하여 시료를 준비하고, 세포 배양액에 상기 시료를 최종 농도가 각 1%(v/v) 및 5%(v/v)가 되도록 첨가하였다.
무처리 대조군을 제외한 대조군 및 실험군은 자외선 (Ultraviolet; UV) 25mJ/cm2 조사하여 광노화를 유도하였다. 양성대조군은 UV 조사만 진행하였고, 음성대조군은 UV 조사와 함께, MMP 발현 감소능이 있는 레티노산 (retinoic acid; RA)을 10μM 농도로 사용하였다. 시료가 포함된 배양액을 37℃, 5% CO2 농도와 습도 95%가 유지되는 배양기에서 24시간 동안 배양하였다.
1-2. 콜라겐 발현 증가능 및 MMP-1 발현 감소능 확인
실험예 1-1에서 배양한 세포를 회수하여 냉각된 인산완충용액 (PBS)으로 세척하고 PureLink® RNA Mini Kit (Thermo Fisher Scientific)을 이용하여 총 RNA를 추출하였다. 구체적인 RNA 추출은 제품과 같이 제공되는 매뉴얼에 따라 수행하였다. 유전자 발현 변화는 중합효소 연쇄 반응 (PCR)에서 증폭되는 DNA 산물에 형광물질을 결합하고 형광물질을 지속적으로 검출하는 qRT-PCR (quantitative real time PCR)로 측정하였다.
제1형 콜라겐 유전자 (COL1A1) 및 MMP1 유전자의 발현을 정량하고자 SYBR 그린 (Thermo Fisher Scientific)을 통해 PCR 산물이 발산하는 형광 값을 측정하였다. PCR 튜브에 0.2 μM 프라이머, 50 mM KCl, 20 mM Tris/HCl pH 8.4, 0.8 mM dNTP, 0.5U Extaq DNA 폴리머라제, 3 mM MgCl2, 및 1×SYBR 그린을 혼합하여 반응액을 제조하였다. PCR 기계를 이용하여 94 ℃에서 3분 동안 예비적 변성 (primary denaturation) 시킨 후 변성 (denaturation), 어닐링 (annealing), 중합 (polymerization)을 94℃에서 30초, 58℃에서 30초, 72℃에서 30초로 총 40 사이클을 수행하였고, 매 사이클이 종료된 후 형광강도를 측정하였다. 실험에 사용한 프라이머 서열은 하기 표 3에 나타냈다.
| 서열번호 | 유전자 | 서열 (5' -> 3') | |
| 5 | COL1A1 | Forward primer | GCTTGGTCCACTTGCTTGAAGA |
| 6 | Reverse primer | GAGCATTGCCTTTGATTGCTG | |
| 7 | MMP1 | Forward primer | AAAATTACACGCCAGATTTGCC |
| 8 | Reverse primer | GGTGTGACATTACTCCAGAGTTG | |
| 9 | Actin | Forward primer | GGCCATCTCTTGCTCGAAGT |
| 10 | Reverse primer | GACACCTTCAACACCCCAGC | |
제1형 콜라겐 유전자 (COL1A1)의 형광강도를 액틴 (actin) 값으로 표준화하여 대조군을 100%로 환산한 뒤 그에 대한 차이를 비교하여 각 유전자 발현량을 측정한 결과를 도 2 및 표 4에 나타냈다.
| 군 | COL1A1 (%) | |
| None | 100 | |
| UV | 44 | |
| 1% | + UV | 59 |
| 5% | 80 | |
도 2 및 표 4에서 확인할 수 있듯이, UV 처리군은 무처리 대조군에 비해 44%의 COL1A1 발현량 감소를 나타낸 반면, 5%의 실시예 1 처리군은 UV 처리에 의해 감소한 COL1A1 발현을 무처리 대조군의 약 80%까지 증가시켜 UV 처리에 의한 COL1A1 발현 감소를 회복시킴을 확인하였다.
MMP1 유전자의 형광강도를 액틴 (actin) 값으로 표준화하여 대조군을 100%로 환산한 뒤 그에 대한 차이를 비교하여 각 유전자 발현량을 측정한 결과를 도 3 및 표 5에 나타냈다.
| 군 | MMP1 (%) | |
| None | 100 | |
| UV | 588 | |
| RA | + UV | 403 |
| 1% | 565 | |
| 5% | 558 | |
도 3에서 확인할 수 있듯이, UV 처리군은 무처리 대조군에 비해 MMP-1 발현량이 약 588%로 증가한 반면, 1% 및 5%의 실시예 1 처리군은 각각 UV 처리에 의해 증가한 MMP-1 발현량을 무처리 대조군의 약 565% 및 558%까지 감소시켜 콜라겐 분해를 억제하는 효과가 있음을 확인하였다.
상기 결과를 통해, 본 발명의 인간 제6형 콜라겐 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트로 형질전환된 균주, 이의 배양액, 이의 파쇄액, 이의 추출물 또는 이의 발효물은 피부에서 제1형 콜라겐 유전자의 발현을 향상시키고 콜라겐 분해효소인 MMP-1의 발현을 감소시켜, 피부 주름, 피부 노화 및 피부 탄력 등의 피부 상태를 효과적으로 개선할 수 있음을 확인하였다.
Claims (14)
- 인간 제6형 콜라겐 (human collagen type 6) 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트 (construct)로 형질전환된 효모, 이의 배양액, 이의 파쇄액, 이의 추출물 또는 이의 발효물을 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물.
- 삭제
- 제1항에 있어서, 상기 효모는 사카로마이세스 (Saccharomyces) 속 효모 또는 피키아 (Pichia) 속 효모인 것인, 피부 상태 개선용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 효모는 사카로마이세스 세레비지에 (Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 칼스버젠시스 (Saccharomyces carlsbergensis), 사카로마이세스 서바지 (Saccharomyces servazzii), 및 피키아 파스토리스 (Pichia pastoris)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것인, 피부 상태 개선용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 피부 상태는 피부 주름 및 피부 탄력으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것인, 피부 상태 개선용 화장료 조성물.
- 인간 제6형 콜라겐 (human collagen type 6) 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트 (construct)로 형질전환된 효모, 이의 배양액, 이의 파쇄액, 이의 추출물 또는 이의 발효물을 포함하는 피부 상태 개선용 식품 조성물.
- 삭제
- 제6항에 있어서, 상기 효모는 사카로마이세스 (Saccharomyces) 속 효모 또는 피키아 (Pichia) 속 효모인 것인, 피부 상태 개선용 식품 조성물.
- 제6항에 있어서, 상기 효모는 사카로마이세스 세레비지에 (Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 칼스버젠시스 (Saccharomyces carlsbergensis), 사카로마이세스 서바지 (Saccharomyces servazzii), 및 피키아 파스토리스 (Pichia pastoris)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것인, 피부 상태 개선용 식품 조성물.
- 제6항에 있어서, 상기 피부 상태는 피부 주름 및 피부 탄력으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것인, 피부 상태 개선용 식품 조성물.
- 인간 제6형 콜라겐 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트로 형질전환된 효모를 제조하는 형질전환 효모 제조 단계를 포함하는, 피부 상태 개선용 화장료 조성물 제조 방법.
- 제11항에 있어서, 상기 화장료 조성물 제조 방법은 제조한 효모의 배양액, 파쇄액, 추출물 또는 발효물을 수득하는 수득 단계를 추가적으로 포함하는 것인, 피부 상태 개선용 화장료 조성물 제조 방법.
- 인간 제6형 콜라겐 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트로 형질전환된 효모를 제조하는 형질전환 효모 제조 단계를 포함하는, 피부 상태 개선용 식품 조성물 제조 방법.
- 제13항에 있어서, 상기 식품 조성물 제조 방법은 제조한 효모의 배양액, 파쇄액, 추출물 또는 발효물을 수득하는 수득 단계를 추가적으로 포함하는 것인, 피부 상태 개선용 식품 조성물 제조 방법.
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|---|---|---|---|
| KR1020220175129A KR102659073B1 (ko) | 2022-12-14 | 2022-12-14 | 인간 제6형 콜라겐 유전자를 포함하는 발현 컨스트럭트로 형질전환된 균주를 포함하는 피부 상태 개선용 조성물 |
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| KR20110113287A (ko) * | 2010-04-09 | 2011-10-17 | 경희대학교 산학협력단 | 비단나무 추출물 발효액을 함유하는 미백 또는 주름개선용 조성물 |
| KR101848881B1 (ko) * | 2016-06-28 | 2018-04-13 | 이스트힐(주) | 미선나무 효모 발효물을 포함하는 주름개선용 화장료 조성물 |
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