KR102594028B1

KR102594028B1 - 항-pd-1 항체 조성물

Info

Publication number: KR102594028B1
Application number: KR1020207028149A
Authority: KR
Inventors: 시예드 살림 아메드; 브라이언 마크 발타조르; 안잘리 프라모드 메타; 티하미 쿠레시
Original assignee: 화이자 인코포레이티드
Priority date: 2018-03-07
Filing date: 2019-03-04
Publication date: 2023-10-24
Also published as: RU2020129226A; MX2020009275A; WO2019171253A8; US20210002369A1; CA3093036A1; RU2020129226A3; BR112020017935A2; CN112105343B; AU2019232625A1; CN112105343A; JP7312188B2; KR20200128115A; WO2019171253A1; EP3761954A1; IL277095A; JP2021517129A

Abstract

본 발명은 일반적으로 항체의 제약 제제 분야에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 고농도 항체 제제 및 그의 제약 제제 및 용도에 관한 것이다. 본 발명은 항-PD-1 항체의 제제에 의해 예시된다.

Description

항-PD-1 항체 조성물

본 발명은 항체의 제약 제제 분야에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 항-PD-1 항체 제제 및 그의 제약 제제 및 용도에 관한 것이다.

항체 치료제는 전형적으로 규칙적으로 투여되고, 일반적으로 주사에 의한 수회 mg/kg 투여를 수반한다. 비경구 전달이 치료 항체의 통상적 투여 경로이다. 각각의 용량의 부피를 최소화하기 위해서는 비경구 투여에 비교적 높은 농도의 항체 제제가 요구된다.

고도로 농축된 단백질 제제의 개발은 단백질의 물리적 및 화학적 안정성, 제조, 저장, 및 단백질 제제의 전달과 관련된 문제로 인해 어려울 수 있다. 항체 제제의 증가된 점도는 약물 제조에서부터 환자에 대한 약물 전달에 이르기까지 문제를 야기할 수 있다. 고도로 농축된 수성 단백질-함유 제제에 대한 점도-감소제의 효과를 연구하기 위한 다양한 시도가 이루어져 왔다.

항-PD-1 항체는 제1형 암을 포함한 과다증식성 장애의 치료에 유용하다는 것이 밝혀졌다. PD-1에 의해 매개되는 상태, 예컨대 암을 앓고 있는 환자의 의료 필요를 충족시키기에 적합한 점도를 갖는 항-PD-1 항체의 안정한 고농도 항체 제제가 필요하다.

항-PD-1 항체 및 항체를 포함하는 제제의 점도를 감소시킬 수 있는 부형제를 포함하는 조성물이 제공된다. 특정 제제가 점도를 감소시키는데 효과적인 것으로 입증되어 있다. 유리하게는, 본원에 제공된 조성물은 치유적 치료를 위해 사용되는 약물 제품에 대해 100 mg/mL 초과의 농도를 달성하기에 적합한 점도 거동을 나타낸다.

용액 중 고농도의 생물활성 항체를 지지하고 피하, 정맥내, 근육내, 복강내 또는 피내 주사를 포함한 비경구 투여에 적합한 제약 조성물이 본원에 제공된다. 조성물은 항-PD-1 항체, 디사카라이드, 완충제, 킬레이트화제 및 폴리소르베이트를 포함한다. 일부 실시양태에서 조성물의 pH는 약 4.5 내지 5.5일 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 바람직하게는 약 1 센티포아즈 (cP) 내지 약 20 cP의 점도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 바람직한 투여 경로는 피하 주사이다.

일부 실시양태에서, 조성물은 약 100 mg/ml 내지 약 200 mg/ml 항-PD-1 항체, 디사카라이드, 완충제, 킬레이트화제 및 폴리소르베이트를 포함하거나 또는 이로 본질적으로 이루어질 수 있고, 약 4.5 내지 약 5.5의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서, 조성물은 약 150 mg/ml 항-PD-1 항체, 디사카라이드, 완충제, 킬레이트화제 및 폴리소르베이트로 본질적으로 이루어질 수 있고, 약 5.0의 pH를 갖는다.

일부 실시양태에서, 조성물은 항산화제를 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 조성물은 메티오닌, 예컨대, 예를 들어 비제한적으로 L-메티오닌 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 조성물은 아르기닌을 포함하지 않는다.

일부 실시양태에서, 조성물은 20℃에서 약 50 cP 미만, 약 40 cP 미만, 약 30 cP 미만, 또는 약 20 cP 미만의 점도를 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 20℃에서 약 5 내지 약 50 cP의 점도를 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 20℃에서 약 5 내지 약 40 cP의 점도를 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 20℃에서 약 5 내지 약 30 cP의 점도를 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 20℃에서 약 5 내지 약 20 cP의 점도를 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 20℃에서 약 10 내지 약 20 cP의 점도를 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 20℃에서 약 14 내지 약 16 cP의 점도를 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 20℃에서 약 14 cP의 점도를 가질 수 있다.

일부 실시양태에서, 폴리소르베이트의 농도는 약 0.01 내지 약 0.3 mg/ml일 수 있다. 일부 실시양태에서, 폴리소르베이트의 농도는 약 0.2 mg/ml이다. 일부 실시양태에서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 80이다.

일부 실시양태에서, 디사카라이드는 트레할로스일 수 있다. 일부 실시양태에서 트레할로스는 트레할로스 2수화물이다. 일부 실시양태에서 트레할로스의 농도는 약 1 mg/ml 내지 약 100 mg/ml일 수 있다. 일부 실시양태에서, 트레할로스의 농도는 약 84 mg/ml이다. 다른 실시양태에서, 트레할로스의 농도는 약 50 mg/ml이다.

다른 실시양태에서, 디사카라이드 작용제는 수크로스일 수 있다. 일부 실시양태에서, 수크로스의 농도는 약 1 mg/ml 내지 약 100 mg/ml일 수 있다. 일부 실시양태에서, 수크로스의 농도는 약 50 mg/ml이다.

일부 실시양태에서, 완충제는 히스티딘 완충제일 수 있다. 일부 실시양태에서, 히스티딘 완충제의 농도는 약 1.0 내지 약 30 mM일 수 있다. 일부 실시양태에서, 히스티딘 완충제의 농도는 약 20 mM 히스티딘이다.

다른 실시양태에서, 완충제는 아세테이트 완충제일 수 있다. 일부 실시양태에서, 아세테이트 완충제의 농도는 약 1.0 내지 약 30 mM일 수 있다. 일부 실시양태에서, 아세테이트 완충제의 농도는 약 20 mM 아세테이트이다.

일부 실시양태에서, 킬레이트화제는, 예를 들어 비제한적으로 디소듐 EDTA 및 디소듐 EDTA 2수화물을 포함한 EDTA일 수 있다. 일부 실시양태에서, EDTA의 농도는 약 0.01 내지 약 0.3 mg/mL일 수 있다. 일부 실시양태에서, EDTA의 농도는 약 0.01mg/mL, 약 0.05 mg/mL, 약 0.1 mg/mL, 약 0.15 mg/mL, 약 0.2 mg/mL, 약 0.25 mg/mL, 또는 약 0.3 mg/mL일 수 있다. 일부 실시양태에서, EDTA의 농도는 약 0.04, 약 0.045, 또는 약 0.05 mg/mL이다.

일부 실시양태에서, 항체 농도는 약 100 mg/ml 내지 약 150 mg/ml일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 농도는 약 130 mg/ml, 약 135 mg/ml 및 약 140 mg/ml일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 농도는 약 150 mg/ml이다. 일부 실시양태에서, 항체 농도는 약 120 mg/ml이다.

일부 실시양태에서, 조성물은 아르기닌을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 아르기닌의 농도는 약 25mM 내지 약 300mM, 바람직하게는 약 50 mM, 약 100 mM, 약 150 mM, 약 200 mM, 또는 약 250 mM이다.

일부 실시양태에서, 조성물은 프롤린을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 프롤린의 농도는 약 25mM 내지 약 300mM, 바람직하게는 약 100 mM 또는 약 200 mM이다.

일부 실시양태에서, 조성물은 약 150 mg/ml 항-PD-1 항체; 약 20 mM 히스티딘 완충제; 약 84 mg/ml 트레할로스 2수화물; 약 0.2 mg/ml PS80; 및 약 0.05 mg/ml EDTA로 본질적으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 조성물은 5.0 +/- 0.5의 pH를 갖는다.

일부 실시양태에서, 조성물은 약 150 mg/ml 항-PD-1 항체; 약 20 mM 히스티딘 완충제; 약 100 mM 아르기닌 HCl, 약 50 mg/ml 트레할로스 2수화물; 약 0.2 mg/ml PS80; 및 약 0.05 mg/ml EDTA로 본질적으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 조성물은 5.0 +/- 0.5의 pH 및 20℃에서 약 10 cP 내지 약 16 cP의 점도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 조성물은 20℃에서 약 15 cP의 점도를 갖는다.

일부 실시양태에서, 조성물은 약 100 mg/ml, 약 110 mg/ml, 약 120 mg/ml, 약 130 mg/ml, 약 140 mg/ml, 약 145 mg/ml, 약 148 mg/ml, 약 149 mg/ml, 약 150 mg/ml, 약 151 mg/ml, 또는 약 152 mg/ml의 항체, 약 20 mM 히스티딘 완충제, 약 84 mg/ml 트레할로스 2수화물, 약 0.2 mg/ml PS80, 약 0.05 mg/ml EDTA로 본질적으로 이루어지고, 조성물은 pH 5.0 +/- 0.5이다. 일부 실시양태에서, 조성물은 20℃에서 약 10 cP 내지 약 16 cP의 점도를 갖는다.

일부 실시양태에서, 조성물은 약 100 mg/ml, 약 110 mg/ml, 약 120 mg/ml, 약 130 mg/ml, 약 140 mg/ml, 약 145 mg/ml, 약 148 mg/ml, 약 149 mg/ml, 약 150 mg/ml, 약 151 mg/ml, 또는 약 152 mg/ml의 항-PD-1 항체, 약 20 mM 히스티딘 완충제, 약 84 mg/ml 트레할로스, 약 0.2 mg/ml PS80, 약 0.05 mg/ml EDTA로 본질적으로 이루어지고, 조성물은 pH 5.0 +/- 0.5이다.

일부 실시양태에서, 조성물은 약 150 mg/ml의 항-PD-1 항체, 약 20 mM 히스티딘 완충제, 약 84 mg/ml 트레할로스 2수화물, 약 0.2 mg/ml PS80, 약 0.05 mg/ml EDTA로 본질적으로 이루어지고, 조성물은 pH 5.0 +/- 0.5이다.

일부 실시양태에서, 항체는 인간 항체, 인간화 항체 또는 키메라 항체일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간 IgG₁, IgG₂, IgG_2Δa, IgG₃, IgG₄, IgG_4Δb, IgG_4Δc, IgG₄S228P, IgG_4Δb S228P, 및 IgG_4Δc S228P 하위부류의 것이다. 일부 실시양태에서, 항체는 IgG4 이소형의 것이고, 안정화된 힌지, 예를 들어 S228P를 포함한다.

일부 실시양태에서, 항체는 PF-06801591, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 세미플리맙 또는 스파르탈리주맙일 수 있다. 다른 실시양태에서, 항체는 PF-06801591, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 세미플리맙 또는 스파르탈리주맙의 항원 결합 부분일 수 있다.

일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 2에 제시된 중쇄 가변 영역 (VH) 서열의 VH 상보성 결정 영역 1 (CDR1), VH CDR2 및 VH CDR3을 포함하는 VH; 및/또는 서열식별번호: 3에 제시된 경쇄 가변 영역 (VL) 서열의 VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, VH CDR1은 서열식별번호: 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VH CDR2는 서열식별번호: 5에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VH CDR3은 서열식별번호: 6에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL CDR1은 서열식별번호: 7에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL CDR2는 서열식별번호: 8에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL CDR3은 서열식별번호: 9에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시양태에서, VH 영역은 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열 또는 CDR 내에 존재하지 않는 잔기에 1개 또는 여러개의 보존적 아미노산 치환을 갖는 변이체를 포함하고/거나 VL 영역은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열 또는 CDR 내에 존재하지 않는 아미노산에 1개 또는 여러개의 아미노산 치환을 갖는 그의 변이체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 2에 제시된 중쇄 가변 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열 및 서열식별번호: 3에 제시된 경쇄 가변 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 10에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열 및 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 ATCC 수탁 번호 PTA-121183을 갖는 발현 벡터에 의해 생산된 VH 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 ATCC 수탁 번호 PTA-121182를 갖는 발현 벡터에 의해 생산된 VL 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 본원에 기재된 바와 같은 항체와 경쟁하고/거나 그와 동일한 PD-1 에피토프에 결합하는 항체이다.

일부 실시양태에서, 조성물은 약 150 mg/ml의 PF-06801591, 약 20 mM 히스티딘 완충제, 약 84 mg/ml 트레할로스 2수화물, 약 0.2 mg/ml PS80 및 약 0.05 mg/ml EDTA로 본질적으로 이루어지며; 여기서 조성물은 pH 5.0 +/- 0.1이고, 메티오닌 또는 아르기닌을 함유하지 않는다. 일부 실시양태에서, 조성물은 약 150 mg/ml의 니볼루맙, 약 20 mM 히스티딘 완충제, 약 84 mg/ml 트레할로스 2수화물, 약 0.2 mg/ml PS80 및 약 0.05 mg/ml EDTA로 본질적으로 이루어지며; 여기서 조성물은 pH 5.0 +/- 0.1이고, 메티오닌 또는 아르기닌을 함유하지 않는다. 일부 실시양태에서, 조성물은 약 150 mg/ml의 펨브롤리주맙, 약 20 mM 히스티딘 완충제, 약 84 mg/ml 트레할로스 2수화물, 약 0.2 mg/ml PS80 및 약 0.05 mg/ml EDTA로 본질적으로 이루어지며; 여기서 조성물은 pH 5.0 +/- 0.1이고, 메티오닌 또는 아르기닌을 함유하지 않는다.

일부 실시양태에서, 조성물은 동결건조되지 않을 수 있다. 다른 실시양태에서, 조성물은 동결건조될 수 있다.

또한, 상태의 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 본원에 기재된 바와 같은 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 상태를 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 상태는 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 위암, 육종, 림프종, 백혈병, 두경부암, 비인두암, 흉선암, 상피암, 상피 난소암, 타액선암, 간암, 위암, 갑상선암, 폐암 (예를 들어 비제한적으로 비소세포 폐암 포함), 난소암, 난관암, 유방암 (예를 들어 비제한적으로 삼중-음성 유방암 포함), 전립선암, 식도암, 췌장암, 신경교종, 백혈병, 다발성 골수종, 신세포 암종, 방광암, 자궁경부암, 융모막암종, 결장암, 결장직장암, 구강암, 피부암, 복막암 및 흑색종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 국부 진행성 또는 전이성 흑색종, 편평 세포 두경부암 (SCHNC), 난소 암종, 육종, 또는 재발성 또는 불응성 전형적 호지킨 림프종 (cHL)을 갖는 이전에 치료된 성인 환자이다. 일부 실시양태에서, 암은 백금 내성 및/또는 백금 불응성 암, 예컨대, 예를 들어 백금 내성 및/또는 불응성 난소암, 백금 내성 및/또는 불응성 유방암, 또는 백금 내성 및/또는 불응성 폐암일 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항-PD-1 항체 제약 조성물은 약 25mg 내지 약 1000mg, 바람직하게는 약 50 mg, 약 100 mg, 약 125 mg, 약 150 mg, 약 200 mg, 약 250 mg, 약 300 mg, 약 350 mg, 약 400 mg, 약 450 mg, 약 500 mg, 약 525 mg, 약 550 mg, 약 600 mg, 약 650 mg, 약 700 mg, 약 750 mg, 또는 약 800 mg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 약 0.5mg/kg 내지 약 15mg/kg, 바람직하게는 약 0.5 mg/kg, 약 1.0 mg/kg, 약 3.0 mg/kg, 약 5.0 mg/kg, 또는 약 10 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 7, 14, 21 또는 28일마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 피하로 투여된다. 다른 실시양태에서, 조성물은 정맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 단일 2 ml 피하 주사로서 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 3주마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 4주마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 300 mg의 용량으로 피하로 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 28일마다 1회 300 mg의 피하 용량으로서 투여된다.

또한, 종양을 갖는 대상체에게 유효량의 본원에 기재된 바와 같은 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 종양 성장 또는 진행을 억제하는 방법이 본원에 제공된다.

또한, 암 세포의 전이의 억제 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 유효량의 본원에 기재된 바와 같은 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 암 세포의 전이를 억제 또는 예방하는 방법이 본원에 제공된다.

또한, PD-1 발현 종양을 갖는 대상체에게 유효량의 본원에 기재된 바와 같은 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 종양 퇴행을 유도하는 방법이 본원에 제공된다.

일부 실시양태에서, 본원의 항체는 대상체에서 비경구로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.

일부 실시양태에서, 방법은 유효량의 적어도 1종의 다른 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료제는, 예를 들어 크리조티닙, 팔보시클립, 탈라조파립, 항-CTLA4 항체, 항-4-1BB 항체, 항-OX40 항체, 제2 PD-1 항체, CAR-T 세포 또는 화학요법제이다.

또한, 암의 치료 또는 종양 성장 또는 진행의 억제를 필요로 하는 대상체에서의 암의 치료 또는 종양 성장 또는 진행의 억제를 위한 의약의 제조에 있어서 본원에 제공된 임의의 항-PD-1 항체 제약 조성물의 용도가 본원에 제공된다.

또한, 암의 치료 또는 종양 성장 또는 진행의 억제를 필요로 하는 대상체에서의 암의 치료 또는 종양 성장 또는 진행의 억제에 사용하기 위한 항-PD-1 항체 제약 조성물이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 암은, 예를 들어 비제한적으로 위암, 육종, 림프종, 호지킨 림프종, 백혈병, 두경부암, 흉선암, 상피암, 타액선암, 간암, 위암, 갑상선암, 폐암 (예를 들어 비소세포 폐 암종 포함), 난소암, 유방암, 전립선암, 식도암, 췌장암, 신경교종, 백혈병, 다발성 골수종, 신세포 암종, 방광암, 자궁경부암, 융모막암종, 결장암, 구강암, 피부암 및 흑색종이다.

또한, 백신을 투여받은 포유동물에게 본 개시내용에 의해 제공된 항-PD-1 항체 조성물의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물, 특히 인간에서 암의 치료를 위해 백신의 면역원성 또는 치료 효과를 증진시키는 방법이 본원에 제공된다.

또한, 포유동물에게 (1) 암 세포에 대한 면역 반응을 도출할 수 있는 백신의 유효량 및 (2) 본 개시내용에 의해 제공된 항-PD-1 항체 제약 조성물의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물, 특히 인간에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 약 125 내지 약 300 mg의 피하 양측 용량으로서 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 300 mg의 피하 양측 용량으로서 투여된다.

도 1은 상이한 pH 값에서 항-PD-1 항체 제제의 점도를 비교하는 그래프를 도시한다.
도 2는 다양한 농도의 아르기닌 HCl을 갖는 항-PD-1 항체 제제의 점도를 비교하는 그래프를 도시한다.
도 3은 상이한 pH 값에서 항-PD-1 항체 제제의 점도를 비교하는 그래프를 도시한다.
도 4는 프롤린을 갖거나 갖지 않는, 100 mM 아르기닌 HCl이 첨가된 항-PD-1 항체 제제의 점도를 비교하는 그래프를 도시한다.
도 5는 항-PD-1 항체 제제 7 및 8의 점도를 비교하는 그래프를 도시한다.
도 6은 항-PD-1 항체 mAb7에서 글리칸 이종성을 보여주는 그래프를 도시한다.
도 7은 제제 7에서 다양한 항-PD-1 항체의 열적 특성을 보여주는 그래프를 도시한다.

감소된 점도를 갖는 조성물이 개시된다. 유리하게는, 조성물은 용액 중 고농도의 생물활성 항체를 안정하게 지지하고, 피하, 정맥내, 근육내, 복강내 또는 피내 주사를 포함한 비경구 투여에 적합하다.

일반적 기술

본 발명의 실시는 달리 나타내지 않는 한 분자 생물학 (재조합 기술 포함), 미생물학, 세포 생물학, 생화학 및 면역학의 전형적인 기술을 사용할 것이며, 이들은 관련 기술분야의 숙련범위 내에 있다. 이러한 기술은, 예컨대 하기 문헌에 상세하게 설명되어 있다: [Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook et al., 1989) Cold Spring Harbor Press; Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-1998) J. Wiley and Sons; Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel et al., eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: a practical approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal antibodies: a practical approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using antibodies: a laboratory manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J.D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995)].

정의

하기 용어는, 달리 나타내지 않는 한, 하기 의미를 갖는 것으로 이해될 것이다: 용어 "단리된 분자" (여기서 분자는, 예를 들어 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 또는 항체 또는 그의 단편임)는 그의 유래 기원 또는 공급원에 의해 (1) 그의 천연 상태에서 동반되는 자연적으로 회합되는 성분과 회합되지 않거나, (2) 동일한 종으로부터의 다른 분자가 실질적으로 없거나, (3) 상이한 종으로부터의 세포에 의해 발현되거나, 또는 (4) 자연에서 발생하지 않는 분자이다. 따라서, 화학적으로 합성되거나 또는 그것이 자연적으로 기원하는 세포와 상이한 세포 시스템에서 발현되는 분자는 그의 자연적으로 회합되는 성분으로부터 "단리"될 것이다. 관련 기술분야에 널리 공지된 정제 기술을 사용하여, 단리에 의해 자연적으로 회합된 성분이 분자에 실질적으로 없게 할 수 있다. 관련 기술분야에 널리 공지된 다수의 수단에 의해 분자 순도 또는 균질성을 검정할 수 있다. 예를 들어, 폴리아크릴아미드 겔 전기영동을 사용하고 관련 기술분야에 널리 공지된 기술을 사용하여 폴리펩티드를 가시화하도록 겔을 염색하여 폴리펩티드 샘플의 순도를 검정할 수 있다. 특정 목적을 위해, HPLC 또는 정제에 대해 관련 기술분야에 널리 공지된 다른 수단을 사용함으로써 보다 고도의 분해를 제공할 수 있다.

본원에 사용된 용어 "제제" 또는 "조성물"은 항체와 관련된 것일 때 적어도 1종의 장성 작용제, 적어도 1종의 완충제, 적어도 1종의 킬레이트화제, 적어도 1종의 계면활성제를 포함하는 제약상 허용되는 부형제와 조합된 항체를 기재하는 것으로 의도되며, 여기서 pH는 정의된 바와 같다.

용어 "제약 조성물" 또는 "제약 제제"는 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이도록 하는 형태의 제제를 지칭한다.

"제약상 허용되는 부형제" (비히클, 첨가제)는 사용되는 활성 성분의 유효 용량을 제공하기 위해 대상체에게 안전하게 투여될 수 있는 것이다. 본원에 사용된 용어 "부형제" 또는 "담체"는 약물용 희석제, 비히클, 보존제, 결합제 또는 안정화제로서 통상적으로 사용되는 불활성 물질을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "희석제"는 제약상 허용되는 (인간에게 투여하기에 안전하고 비-독성인) 용매를 지칭하고, 본원에서 액체 제제의 제조에 유용하다. 예시적인 희석제는 멸균수 및 정박테리아 주사용수 (BWFI)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

"항체"는 이뮤노글로불린 분자의 가변 영역에 위치한 적어도 1개의 항원 인식 부위를 통해, 탄수화물, 폴리뉴클레오티드, 지질, 폴리펩티드 등과 같은 표적에 특이적으로 결합할 수 있는 이뮤노글로불린 분자이다. 본원에 사용된 상기 용어는 무손상 폴리클로날 또는 모노클로날 항체, 뿐만 아니라 달리 명시되지 않는 한, 특이적 결합에 대해 무손상 항체와 경쟁하는 그의 임의의 항원 결합 부분, 항원 결합 부분을 포함하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위를 포함하는 이뮤노글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 구성을 포괄한다. 항원 결합 부분은, 예를 들어 Fab, Fab', F(ab')₂, Fd, Fv, 도메인 항체 (dAb, 예를 들어 상어 및 낙타류 항체), 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함한 단편, 단일 쇄 가변 단편 항체 (scFv), 맥시바디, 미니바디, 인트라바디, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, v-NAR 및 비스-scFv, 및 폴리펩티드에 대한 특이적 항원 결합을 부여하기에 충분한 이뮤노글로불린의 적어도 한 부분을 함유하는 폴리펩티드를 포함한다. 항체는 임의의 부류의 항체, 예컨대 IgG, IgA 또는 IgM (또는 이들의 하위부류)를 포함하며, 항체는 임의의 특정한 부류의 것일 필요는 없다. 항체 중쇄의 불변 영역의 항체 아미노산 서열에 따라, 이뮤노글로불린은 상이한 부류로 지정될 수 있다. 이뮤노글로불린의 5개의 주요 부류: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 존재하고, 이들 중 몇몇은 하위부류 (이소형), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 추가로 분류될 수 있다. 이뮤노글로불린의 상이한 부류에 상응하는 중쇄 불변 영역은 각각 알파, 델타, 엡실론, 감마 및 뮤로 불린다. 이뮤노글로불린의 상이한 부류의 서브유닛 구조 및 3차원 형상은 널리 공지되어 있다.

항체의 "가변 영역"은 항체 경쇄의 가변 영역 또는 항체 중쇄의 가변 영역 단독 또는 조합을 지칭한다. 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 각각, 초가변 영역으로도 공지되어 있는 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)에 의해 연결된 4개의 프레임워크 영역 (FR)으로 이루어지고, 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여한다. 대상 가변 영역의 변이체, 특히 CDR 외부의 (즉, 프레임워크 영역 내의) 아미노산 잔기가 치환된 변이체가 요구되는 경우, 적절한 아미노산 치환, 바람직하게는 보존적 아미노산 치환은 대상 가변 영역을 대상 가변 영역과 동일한 정규 부류의 CDR1 및 CDR2 서열을 함유하는 다른 항체의 가변 영역과 비교함으로써 확인될 수 있다 (Chothia and Lesk, J Mol Biol 196(4): 901-917, 1987).

특정 실시양태에서, CDR의 확정적 설명 및 항체의 결합 부위를 포함하는 잔기의 확인은 항체의 구조를 해석하고/거나 항체-리간드 복합체의 구조를 해석함으로써 달성된다. 특정 실시양태에서, 이는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 임의의 다양한 기술, 예컨대 X선 결정학에 의해 달성될 수 있다. 특정 실시양태에서, 다양한 분석 방법을 사용하여 CDR 영역을 확인하거나 근사화할 수 있다. 특정 실시양태에서, 다양한 분석 방법을 사용하여 CDR 영역을 확인하거나 근사화할 수 있다. 이러한 방법의 예는 카바트(Kabat) 정의, 코티아(Chothia) 정의, AbM 정의, 접촉 정의 및 입체형태적 정의를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

카바트 정의는 항체에서 잔기를 넘버링하기 위한 표준이고, 전형적으로 CDR 영역을 확인하는데 사용된다. 예를 들어, 문헌 [Johnson & Wu, 2000, Nucleic Acids Res., 28: 214-8]을 참조한다. 코티아 정의는 카바트 정의와 유사하지만, 코티아 정의는 특정 구조적 루프 영역의 위치를 고려한다. 예를 들어, 문헌 [Chothia et al., 1986, J. Mol. Biol., 196: 901-17; Chothia et al., 1989, Nature, 342: 877-83]을 참조한다. AbM 정의는 항체 구조를 모델링하는 옥스포드 몰레큘라 그룹(Oxford Molecular Group)에 의해 제조된 컴퓨터 프로그램의 통합 모음을 사용한다. 예를 들어, 문헌 [Martin et al., 1989, Proc Natl Acad Sci (USA), 86:9268-9272; "AbM™, A Computer Program for Modeling Variable Regions of Antibodies," Oxford, UK; Oxford Molecular, Ltd]을 참조한다. AbM 정의는 문헌 [Samudrala et al., 1999, "Ab Initio Protein Structure Prediction Using a Combined Hierarchical Approach," in PROTEINS, Structure, Function and Genetics Suppl., 3:194-198]에 기재된 바와 같은 순이론적 방법과 지식 데이터베이스의 조합을 사용하여 1차 서열로부터 항체의 3차 구조를 모델링한다. 접촉 정의는 이용가능한 복합체 결정 구조의 분석에 기초한다. 예를 들어, 문헌 [MacCallum et al., 1996, J. Mol. Biol., 5:732-45]을 참조한다. 본원에서 CDR의 "입체형태적 정의"로 지칭되는 또 다른 접근법에서, CDR의 위치는 항원 결합에 대한 엔탈피 기여를 이루는 잔기로서 확인될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Makabe et al., 2008, Journal of Biological Chemistry, 283:1156-1166]을 참조한다. 또 다른 CDR 경계 정의는 상기 접근법 중 하나를 엄격하게 따르지 않을 수 있지만, 그럼에도 불구하고 카바트 CDR의 적어도 한 부분과 중첩될 것이며, 이들은 특정한 잔기 또는 잔기의 군이 항원 결합에 유의하게 영향을 미치지 않는다는 예측 또는 실험적 소견에 비추어 단축 또는 연장될 수도 있다. 본원에 사용된 CDR은 관련 기술분야에 공지된 접근법들의 조합을 포함한 임의의 접근법에 의해 정의되는 CDR을 지칭할 수 있다. 본원에 사용된 방법은 임의의 이들 접근법에 따라 정의된 CDR을 이용할 수 있다. 1개 초과의 CDR을 함유하는 임의의 주어진 실시양태에서, CDR은 카바트, 코티아, 연장형, AbM, 접촉 및/또는 입체형태적 정의 중 임의의 것에 따라 정의될 수 있다.

관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 항체의 "불변 영역"은 항체 경쇄의 불변 영역 또는 항체 중쇄의 불변 영역의 단독 또는 조합을 지칭한다.

본원에 사용된 "모노클로날 항체"는 실질적으로 동종인 항체들의 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하고, 즉 집단을 구성하는 개별 항체들은 미량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 모노클로날 항체는 고도로 특이적이고, 단일 항원 부위에 대해 지시된다. 추가로, 전형적으로 상이한 결정기 (에피토프)에 대해 지시된 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와 대조적으로, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정기에 대해 지시된다. 수식어 "모노클로날"은 실질적으로 동종인 항체들의 집단으로부터 수득됨에 따른 항체의 특징을 나타내고, 임의의 특정한 방법에 의한 항체의 생산이 요구되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용될 모노클로날 항체는 문헌 [Kohler and Milstein, 1975, Nature 256:495]에 최초로 기재되었던 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 또는 미국 특허 번호 4,816,567에 기재된 것과 같은 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다. 모노클로날 항체는 또한, 예를 들어 문헌 [McCafferty et al., 1990, Nature 348:552-554]에 기재된 기술을 사용하여 생성된 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 본원에 사용된 "인간화" 항체는 비-인간 이뮤노글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 이뮤노글로불린, 이뮤노글로불린 쇄 또는 그의 단편 (예컨대 Fv, Fab, Fab', F(ab')2 또는 항체의 다른 항원-결합 하위서열)인 비-인간 (예를 들어, 뮤린) 항체 형태를 지칭한다. 바람직하게는, 인간화 항체는 인간 이뮤노글로불린 (수용자 항체)이며, 여기서 수용자의 CDR로부터의 잔기를 목적하는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 비-인간 종 (공여자 항체), 예컨대 마우스, 래트 또는 토끼의 CDR로부터의 잔기에 의해 대체한 것이다. 인간화 항체는, 수용자 항체 또는 유입된 CDR 또는 프레임워크 서열 모두에서 발견되지 않지만 항체 성능을 추가로 정밀화하고 최적화시키기 위해 포함되는 잔기를 포함할 수 있다.

"인간 항체"는 인간에 의해 생산된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 보유하고/거나 본원에 개시된 바와 같은 인간 항체를 제조하는 임의의 기술을 사용하여 제조된 것이다. 인간 항체의 이러한 정의는 구체적으로 비-인간 항원 결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 배제한다.

본원에 사용된 용어 "인간 항체"는 인간 배선 이뮤노글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 인간 항체의 정의는 적어도 1개의 인간 중쇄 폴리펩티드 또는 적어도 1개의 인간 경쇄 폴리펩티드를 포함하는 항체를 포함한다. 본 발명의 인간 항체는, 예를 들어 CDR, 특히 CDR3에서 인간 배선 이뮤노글로불린 서열 (예를 들어, 시험관내 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이유발에 의해 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)에 의해 코딩되지 않는 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 그러나, 본원에 사용된 용어 "인간 항체"는 또 다른 포유동물 종, 예컨대 마우스의 배선으로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열 상에 그라프팅된 항체를 포함하는 것으로 의도되지 않는다.

용어 "키메라 항체"는 가변 영역 서열이 하나의 종으로부터 유래되고 불변 영역 서열이 또 다른 종으로부터 유래된 것인 항체, 예컨대 가변 영역 서열이 마우스 항체로부터 유래되고 불변 영역 서열이 인간 항체로부터 유래된 것인 항체를 지칭하는 것으로 의도된다.

본원에 사용된 "인간화" 항체는 비-인간 이뮤노글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 이뮤노글로불린, 이뮤노글로불린 쇄 또는 그의 단편 (예컨대 Fv, Fab, Fab', F(ab')₂ 또는 항체의 다른 항원-결합 하위서열)인 비-인간 (예를 들어, 뮤린) 항체 형태를 지칭한다. 바람직하게는, 인간화 항체는 인간 이뮤노글로불린 (수용자 항체)이며, 여기서 수용자의 상보성 결정 영역 (CDR)으로부터의 잔기를 목적하는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 비-인간 종 (공여자 항체), 예컨대 마우스, 래트 또는 토끼의 CDR로부터의 잔기에 의해 대체한 것이다. 일부 경우에, 인간 이뮤노글로불린의 Fv 프레임워크 영역 (FR) 잔기는 상응하는 비-인간 잔기에 의해 대체된다. 추가로, 인간화 항체는, 수용자 항체 또는 유입된 CDR 또는 프레임워크 서열 모두에서 발견되지 않지만 항체 성능을 추가로 정밀화하고 최적화시키기 위해 포함되는 잔기를 포함할 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 1개 및 전형적으로는 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역은 비-인간 이뮤노글로불린의 것에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 이뮤노글로불린 컨센서스 서열의 것이다. 인간화 항체는 최적으로는 또한, 전형적으로 인간 이뮤노글로불린의 것인 이뮤노글로불린 불변 영역 또는 도메인 (Fc)의 적어도 한 부분을 포함할 것이다. 다른 형태의 인간화 항체는 원래 항체에 비해 변경된 1개 이상의 CDR (CDR L1, CDR L2, CDR L3, CDR H1, CDR H2 또는 CDR H3)을 가지며, 이는 또한 원래 항체로부터의 1개 이상의 CDR"로부터 유래된" 1개 이상의 CDR로 지칭된다.

본원에 사용된 용어 "mAb7"은 각각 서열식별번호: 2 및 서열식별번호: 3에 제시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-1 항체를 지칭하는 것으로 사용된다.

mAb7 중쇄 가변 영역 아미노산 서열:

mAb7 경쇄 가변 영역 아미노산 서열:

mAb7의 생성과 특징화는 WO2016/092419의 실시예에 기재되어 있으며, 이의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다. 일부 실시양태에서, 용어 "mAb7"은 (a) ATCC 번호 PTA-121182의 기탁 번호를 갖는 mAb7 경쇄 가변 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드; 및 (b) ATCC 번호 PTA-121183의 기탁 번호를 갖는 mAb7 중쇄 가변 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 이뮤노글로불린을 지칭한다.

용어 "에피토프"는 1개 이상의 항체의 항원-결합 영역에서 항체에 의해 인식되고 결합될 수 있는 분자의 부분을 지칭한다. 에피토프는 종종 분자, 예컨대 아미노산 또는 당 측쇄의 표면 그룹핑으로 이루어지고, 특정 3차원 구조적 특징뿐만 아니라 특정 전하 특징을 갖는다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 단백질 에피토프일 수 있다. 단백질 에피토프는 선형 또는 입체형태적일 수 있다. 선형 에피토프에서, 단백질과 상호작용 분자 (예컨대 항체) 사이의 모든 상호작용 지점은 단백질의 1차 아미노산 서열을 따라 선형으로 발생한다. "비선형 에피토프" 또는 "입체형태적 에피토프"는 에피토프에 특이적인 항체가 결합하는 항원성 단백질 내의 비인접 폴리펩티드 (또는 아미노산)를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "항원 에피토프"는 관련 기술분야에 널리 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어 통상적인 면역검정에 의해 결정되는 바와 같은, 항체가 특이적으로 결합할 수 있는 항원의 한 부분으로서 정의된다. 항원 상의 목적 에피토프가 결정되면, 예를 들어 본 명세서에 기재된 기술을 사용하여 그 에피토프에 대한 항체를 생성하는 것이 가능하다. 대안적으로, 발견 과정 동안, 항체의 생성 및 특징화는 바람직한 에피토프에 대한 정보를 규명할 수 있다. 이어서 이러한 정보로부터, 동일한 에피토프에의 결합에 대해 항체를 경쟁적으로 스크리닝하는 것이 가능하다. 이를 달성하기 위한 접근법은 PD-1에의 결합에 대해 서로 경쟁하거나 교차-경쟁하는 항체, 예를 들어 항원에의 결합에 대해 경쟁하는 항체를 찾아내기 위해 경쟁 및 교차-경쟁 연구를 수행하는 것이다.

본원에 사용된 용어 "단리된 항체" 또는 "정제된 항체"는 그의 유래 기원 또는 공급원에 의해 하기 중 1개 내지 4개를 갖는 항체를 지칭한다: (1) 그의 천연 상태에서 동반되는 자연적으로 회합되는 성분과 회합되지 않거나, (2) 동일한 종으로부터의 다른 단백질이 실질적으로 없거나, (3) 상이한 종으로부터의 세포에 의해 발현되거나, 또는 (4) 자연에서 발생하지 않는 분자이다.

항체는 샘플의 적어도 약 60 내지 75%가 단일 종의 항체를 나타낼 때 "실질적으로 순수한", "실질적으로 균질한" 또는 "실질적으로 정제된" 것이다. 실질적으로 순수한 항체는 전형적으로 항체 샘플의 약 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% w/w, 보다 통상적으로는 약 95%를 차지할 수 있고, 바람직하게는 99% 초과의 순도를 보일 것이다. 항체의 순도 또는 균질성은 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 또는 HPLC와 같은 관련 기술분야에 널리 공지된 다수의 수단에 의해 시험될 수 있다.

용어 "항체"는 표적에 결합하고 그 표적의 생물학적 효과를 방지하거나 감소시키는 항체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 상기 용어는 결합되는 표적, 예를 들어 PD-1이 생물학적 기능을 수행하지 못하게 하는 항체를 의미할 수 있다.

에피토프에 "우선적으로 결합" 또는 "특이적으로 결합" (본원에서 상호교환가능하게 사용됨)하는 항체는 관련 기술분야에서 널리 이해되는 용어이고, 이러한 특이적 또는 우선적 결합을 결정하는 방법도 또한 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 분자가 대안적 세포 또는 물질보다 특정한 세포 또는 물질과 더 빈번하게, 더 신속하게, 더 긴 지속기간으로 및/또는 더 큰 친화도로 반응 또는 회합하는 경우에, 분자는 "특이적 결합" 또는 "우선적 결합"을 나타내는 것으로 언급된다. 항체가 다른 물질에 결합하는 것보다 더 큰 친화도, 결합력으로, 더 용이하게 및/또는 더 긴 지속기간으로 결합하는 경우에, 항체는 표적에 "특이적으로 결합" 또는 "우선적으로 결합"한다. 예를 들어, PD-1 에피토프에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 항체는 다른 서열에 결합하는 것보다 더 큰 친화도, 결합력으로, 더 용이하게 및/또는 더 긴 지속기간으로 상기 에피토프 서열에 결합하는 항체이다. 또한, 상기 정의는, 예를 들어 제1 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 항체 (또는 모이어티 또는 에피토프)는 제2 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합할 수 있거나 그렇지 않을 수도 있다는 것으로 해석되는 것으로 이해된다. 따라서, "특이적 결합" 또는 "우선적 결합"은 배타적 결합을 (포함할 수 있지만) 반드시 필요로 하지 않는다. 일반적으로, 반드시는 아니지만, 결합에 대한 언급은 우선적 결합을 의미한다.

본원에 사용된 바와 같이, 항체의 "면역특이적" 결합은 항체의 항원-결합 부위와 그 항체에 의해 인식되는 특이적인 항원 사이에서 발생하는 항원 특이적 결합 상호작용을 지칭한다 (즉, 항체는 ELISA 또는 다른 면역검정에서 단백질과 반응하며, 비관련 단백질과는 검출가능하게 반응하지 않는다).

항체와 관련하여 본원에 사용된 용어 "경쟁하다"는 제1 항체 또는 그의 항원-결합 부분이 제2 항체 또는 그의 항원-결합 부분의 결합과 충분히 유사한 방식으로 에피토프에 결합하여, 제1 항체와 그의 동족 에피토프의 결합의 결과가 제2 항체의 부재 하의 제1 항체의 결합과 비교하여 제2 항체의 존재 하에 검출가능하게 감소되는 것을 의미한다. 또한 제2 항체의 그의 에피토프에 대한 결합이 제1 항체의 존재 하에 검출가능하게 감소되는 대안적 경우도 해당될 수 있지만 그럴 필요는 없다. 즉, 제1 항체의 그의 각각의 에피토프에 대한 결합을 제2 항체가 억제하지 않으면서 제2 항체의 그의 에피토프에 대한 결합을 제1 항체가 억제할 수 있다. 그러나, 각각의 항체가 동일한 정도, 더 큰 정도 또는 더 적은 정도와 관계없이 다른 항체와 그의 동족 에피토프 또는 리간드와의 결합을 검출가능하게 억제하는 경우에, 항체는 그의 각각의 에피토프(들)의 결합에 대해 서로 "교차-경쟁"하는 것으로 언급된다. 경쟁 및 교차-경쟁 항체 둘 다가 본 발명에 포괄된다. 이러한 경쟁 또는 교차-경쟁이 발생하는 메카니즘 (예를 들어, 입체 장애, 입체형태적 변화, 또는 공통 에피토프 또는 그의 부분에 대한 결합)과 관계없이, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본원에 제공된 교시에 기초하여, 이러한 경쟁 및/또는 교차-경쟁 항체가 포괄되고 본원에 개시된 방법에 유용할 수 있다는 것을 인지할 것이다.

본원에 사용된 용어 "PD-1"은 PD-1의 임의의 형태 및 PD-1의 활성의 적어도 일부를 보유하는 그의 변이체를 지칭한다. 인간 PD-1에 대한 구체적 언급과 같이 상이하게 나타내지 않는 한, PD-1은 천연 서열 PD-1의 모든 포유동물 종, 예를 들어 인간, 개, 고양이, 말 및 소를 포함한다. 하나의 예시적인 인간 PD-1은 유니프롯(Uniprot) 수탁 번호 Q15116 (서열식별번호: 1)으로서 발견된다.

본원에 사용된 "항-PD-1 항체"는 PD-1 생물학적 활성 및/또는 PD-1에 의해 매개된 하류 사건(들)을 억제할 수 있는 항체를 지칭한다. 항-PD-1 항체는 PD-1 생물학적 활성, 예를 들어 PD-1에 의해 매개된 하류 사건, 예컨대 PD-L1 결합 및 하류 신호전달, PD-L2 결합 및 하류 신호전달, T 세포 증식의 억제, T 세포 활성화의 억제, IFN 분비의 억제, IL-2 분비의 억제, TNF 분비의 억제, IL-10의 유도, 및 항종양 면역 반응의 억제를 (임의의 정도로, 예를 들어 유의하게) 차단, 길항, 억제 또는 감소시키는 항체를 포괄한다. 본 발명의 목적상, 용어 "항-PD-1 항체" ("PD-1 항체"로 상호교환가능하게 지칭됨)는 이전에 확인된 용어, 표제 및 기능적 상태 및 특징 모두를 포괄함으로써, PD-1 자체, PD-1 생물학적 활성 또는 이러한 생물학적 활성에 따른 결과를 임의의 의미있는 정도로 실질적으로 무효화시키거나, 감소시키거나 또는 중화시킨다는 것이 명백하게 이해될 것이다. 일부 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 PD-1에 결합하고 항종양 면역 반응을 상향 조절한다. 항-PD-1 항체의 예는 본원에 제공된다.

용어 "동일성"은 2개의 아미노산 서열 또는 2개의 핵산 서열의 퍼센트 "동일성"을 지칭한다. 퍼센트 동일성은 일반적으로 최적의 비교 목적을 위해 서열을 정렬하고 (예를 들어, 제2 서열과의 최적 정렬을 위해 제1 서열에 갭을 도입할 수 있음), 상응하는 위치에서 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드를 비교함으로써 결정된다. "최상의 정렬"은 가장 높은 퍼센트 동일성을 생성하는 2개의 서열의 정렬이다. 퍼센트 동일성은 서열 내의 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드의 수를 비교함으로써 결정된다 (즉, % 동일성 = 동일한 위치의 수/위치의 총수 x 100).

2개의 서열 사이의 퍼센트 동일성의 결정은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다. 2개의 서열을 비교하기 위한 수학적 알고리즘의 예는 문헌 [Karlin and Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877]에서와 같이 변형된 문헌 [Karlin and Altschul (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268]의 알고리즘이다. 문헌 [Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410]의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램이 이러한 알고리즘을 포함하였다. BLAST 뉴클레오티드 검색을 NBLAST 프로그램, 점수 = 100, 워드길이 = 12로 수행하여 본 발명의 핵산 분자에 대해 상동인 뉴클레오티드 서열을 수득할 수 있다. BLAST 단백질 검색을 XBLAST 프로그램, 점수 = 50, 워드길이 = 3으로 수행하여 본 발명의 단백질 분자에 대해 상동인 아미노산 서열을 수득할 수 있다. 비교 목적으로 갭이 있는 정렬을 수득하기 위해, 갭드(Gapped) BLAST가 문헌 [Altschul et al. (1997) Nucliec Acids Res. 25:3389-3402]에 기재된 바와 같이 이용될 수 있다. 대안적으로, PSI-Blast를 사용하여 분자 사이의 먼 관계를 검출하는 반복된 검색을 수행할 수 있다 (상기 문헌). BLAST, 갭드 BLAST 및 PSI-Blast 프로그램을 이용하는 경우에, 각각의 프로그램 (예를 들어, XBLAST 및 NBLAST)의 디폴트 파라미터를 사용할 수 있다. http://www.ncbi.nlm.nih.gov를 참조한다. 서열 비교에 이용되는 수학적 알고리즘의 또 다른 예는 문헌 [Myers and Miller, CABIOS (1989)]의 알고리즘이다. GCG 서열 정렬 소프트웨어 패키지의 일부인 ALIGN 프로그램 (버전 2.0)은 이러한 알고리즘을 포함하였다. 관련 기술분야에 공지된 서열 분석을 위한 다른 알고리즘은 문헌 [Torellis and Robotti (1994) Comput. Appl. Biosci., 10: 3-5]에 기재된 바와 같은 ADVANCE 및 ADAM; 및 문헌 [Pearson and Lipman (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. 85:2444-8]에 기재된 FASTA를 포함한다. FASTA 내에서, ktup는 검색의 민감도 및 속도를 설정하는 제어 옵션이다.

본원에 사용된 "치료"는 유익하거나 목적하는 임상 결과를 수득하기 위한 접근법이다. 본 발명의 목적상, 유익하거나 목적하는 임상 결과는 하기 중 1개 이상을 포함하나 이에 제한되지는 않는다: 신생물성 또는 암성 세포의 증식의 감소 (또는 파괴), 신생물성 세포의 전이의 억제, 종양의 크기의 수축 또는 감소, 암의 완화, 암으로부터 비롯되는 증상의 감소, 암을 앓고 있는 자의 삶의 질의 증가, 암을 치료하는데 요구되는 다른 의약의 용량의 감소, 암의 진행의 지연, 및/또는 암을 갖는 환자의 생존의 연장.

본원에 사용된, 약물, 화합물 또는 제약 조성물의 "유효 투여량" 또는 "유효량"은 임의의 하나 이상의 유익하거나 목적하는 결과를 발생시키기에 충분한 양이다. 보다 구체적인 측면에서, 유효량은 질환의 증상을 예방, 완화 또는 호전시키고/거나 치료될 대상체의 생존을 연장시킨다. 예방적 용도의 경우, 유익하거나 목적하는 결과는 질환의 생화학적, 조직학적 및/또는 행동 증상, 그의 합병증 및 질환의 발생 동안 존재하는 중간의 병리학적 표현형을 포함한 질환의 위험을 제거 또는 감소시키거나, 질환의 중증도를 경감시키거나, 질환의 발병을 지연시키는 것을 포함한다. 치료적 용도의 경우, 유익하거나 목적하는 결과는 질환, 예컨대, 예를 들어 암, 예를 들어 비제한적으로 위암, 육종, 림프종, 호지킨 림프종, 백혈병, 두경부암, 편평 세포 두경부암, 흉선암, 상피암, 타액선암, 간암, 위암, 갑상선암, 폐암, 난소암, 유방암, 전립선암, 식도암, 췌장암, 신경교종, 백혈병, 다발성 골수종, 신세포 암종, 방광암, 자궁경부암, 융모막암종, 결장암, 구강암, 피부암 및 흑색종의 1종 이상의 증상을 감소시키고/거나, 질환을 치료하기 위해 요구되는 다른 의약의 용량을 감소시키고/거나, 또 다른 의약의 효과를 증진시키고/거나, 환자에서 암의 진행을 지연시키는 것과 같은 임상 결과를 포함한다. 유효 투여량은 1회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 본 발명의 목적상, 약물, 화합물 또는 제약 조성물의 유효 투여량은 예방적 또는 치유적 치료를 직접적으로 또는 간접적으로 달성하기에 충분한 양이다. 임상 상황에서 이해되는 바와 같이, 약물, 화합물 또는 제약 조성물의 유효 투여량은 또 다른 약물, 화합물 또는 제약 조성물과 함께 달성될 수 있거나 그렇지 않을 수 있다. 따라서, "유효 투여량"은 1종 이상의 치료제의 투여와 관련하여 고려될 수 있고, 단일 작용제는 1종 이상의 다른 작용제와 함께 목적하는 결과가 달성될 수 있거나 달성되는 경우 유효량으로 주어진 것으로 간주될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "대상체"는 치료 목적의 경우 임의의 대상체를 포함하고, 바람직하게는 표적 병리학적 상태, 예를 들어 자가면역 질환의 치료가 필요한 대상체이다. 예방 목적의 경우 대상체는 임의의 대상체이고, 바람직하게는 표적 병리학적 상태의 위험이 있거나 이에 걸리기 쉽거나 이를 발병하는 대상체이다. 용어 "대상체"는 살아있는 유기체, 예를 들어 원핵생물 및 진핵생물을 포함하는 것으로 의도된다. 대상체의 예는 포유동물, 예를 들어 인간, 개, 소, 말, 돼지, 양, 염소, 고양이, 마우스, 토끼, 래트 및 트랜스제닉 비-인간 동물을 포함한다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 대상체는 인간이다.

본원에 사용된, 본원에서 상호교환가능하게 사용되는 용어 "폴리뉴클레오티드" 또는 "핵산"은 리보뉴클레오티드 또는 데옥시뉴클레오티드의 뉴클레오티드 중합체 형태 또는 어느 한 유형의 뉴클레오티드의 변형된 형태를 의미하고, 단일 및 이중 가닥 형태일 수 있다. "폴리뉴클레오티드" 또는 "핵산" 서열은 달리 명시되지 않는 한 그의 상보체를 포괄한다. 본원에 사용된 용어 "단리된 폴리뉴클레오티드" 또는 "단리된 핵산"은 게놈, cDNA 또는 합성 기원의 폴리뉴클레오티드 또는 그의 일부 조합을 의미하며, 그의 유래 기원 또는 공급원에 의해, 단리된 폴리뉴클레오티드는 하기 중 1개 내지 3개를 갖는다: (1) 자연에서 "단리된 폴리뉴클레오티드"와 함께 발견되는 폴리뉴클레오티드의 모든 또는 한 부분과 회합되지 않거나, (2) 자연에서는 연결되지 않는 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결되거나, 또는 (3) 더 큰 서열의 일부로서 자연에서 발생하지 않는다.

본원에 사용된 용어 "킬레이트화제"는 금속 이온에 적어도 1종의 결합 (예를 들어, 공유 결합, 이온 결합 또는 다른 것)을 형성할 수 있는 부형제이다. 킬레이트화제는 전형적으로, 복합체화되지 않으면 불안정성을 촉진할 수 있는 종과 복합체화되는 안정화제로서 조성물에 사용될 수 있는 다중자리 리간드이다.

본원에 사용된 용어 "완충제"는 액체 항체 제제가 전형적으로 그의 산-염기 접합체 성분의 작용에 의해 pH의 변화에 저항할 수 있도록 하는 첨가된 조성물을 지칭한다. 완충제의 농도를 언급할 때, 언급된 농도는 완충제의 유리 산 또는 유리 염기 형태의 몰 농도를 나타내는 것으로 의도된다.

본원에 사용된 "점도"는 "절대 점도" 또는 "동점도"일 수 있다. "절대 점도" (때때로 동적 또는 단순 점도로 불림)는 유동시키기 위한 유체의 저항을 기재하는 양이다. "동점도"는 절대 점도 및 유체 밀도의 지수이다. 동점도는 모세관 점도계를 사용하여 유체의 저항적 유동을 특징화하는 경우에 빈번하게 보고된다. 동일 부피의 2가지 유체가 동일한 모세관 점도계에 위치하고 중력에 의해 유동하도록 허용되는 경우에, 점성 유체는 모세관을 통해 유동하는데 덜 점성인 유체보다 더 오래 걸린다. 하나의 유체가 그의 유동을 완료하는데 200초가 걸리고 또 다른 유체가 400초가 걸린다면, 제2 유체는 동점도 스케일 상에서 제1 유체보다 점성이 2배이다. 두 유체가 동일한 밀도를 갖는다면, 제2 유체는 절대 점도 스케일 상에서 제1 유체보다 점성이 2배이다. 동점도의 치수는 L²/T이며, 여기서 L은 길이를 나타내고, T는 시간을 나타낸다. 동점도의 SI 단위는 m²/s이다. 통상적으로, 동점도는 센티스토크 (cSt)로 표현되며, 이는 mm²/s와 동일하다. 절대 점도의 치수는 M/L/T이며, 여기서 M은 질량을 나타내고, L 및 T는 각각 길이 및 시간을 나타낸다. 절대 점도의 SI 단위는 Pa·s이며, 이는 kg/m/s와 동일하다. 절대 점도는 통상적으로 센티포아즈 (cP) 단위로 표현되며, 이는 밀리파스칼-초 (mPa·s)와 동일하다.

본원에 사용된 용어 "장성 작용제" 또는 "장성개질제"는 액체 항체 제제의 삼투압을 조정할 수 있는 부형제를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 장성 작용제는 항체 제제가 대상체의 신체 조직의 세포에 생리학상 적합하도록 액체 항체 제제의 삼투압을 등장성으로 조정할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, "장성 작용제"는 본원에 기재된 항체의 안정성의 개선에 기여할 수 있다. "등장성" 제제는 인간 혈액과 본질적으로 동일한 삼투압을 갖는 것이다. 등장성 제제는 일반적으로 약 250 내지 350 mOsm의 삼투압을 갖는다. 용어 "저장성"은 인간 혈액의 삼투압 미만의 삼투압을 갖는 제제를 기재한다. 상응하게, 용어 "고장성"은 인간 혈액의 삼투압 초과의 삼투압을 갖는 제제를 기재하는 것으로 사용된다. 등장성은, 예를 들어 증기압 또는 결빙형 삼투압계를 사용하여 측정될 수 있다. 장성 작용제는 거울상이성질체 (예를 들어, L- 또는 D-거울상이성질체) 또는 라세미 형태; 이성질체, 예컨대 알파 또는 베타, 예를 들어 알파, 알파; 또는 베타, 베타; 또는 알파, 베타; 또는 베타, 알파; 유리 산 또는 유리 염기 형태; 수화된 형태 (예를 들어, 1수화물) 또는 무수 형태일 수 있다.

본원에 사용된 용어 "폴리올"은 다수의 히드록실기를 갖는 부형제를 지칭하고, 당 (환원당 및 비환원당), 당 알콜 및 당산을 포함한다.

본원에 사용된 용어 "계면활성제"는 액체 항체 제제의 표면 장력을 변경시킬 수 있는 부형제를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 계면활성제는 액체 항체 제제의 표면 장력을 감소시킨다. 또 다른 실시양태에서, "계면활성제"는 제제 중 임의의 항체의 안정성의 개선에 기여할 수 있다. 계면활성제는 제제화된 항체의 응집을 감소시키고/거나 제제 내 미립자의 형성을 최소화하고/거나 흡착을 감소시킬 수 있다. 계면활성제는 또한 동결/해동 사이클 동안 및 그 후에 항체의 안정성을 개선시킬 수 있다.

본원에 사용된 용어 "사카라이드"는 다가 알콜의 유도체인 분자의 부류를 지칭한다. 사카라이드는 통상적으로 탄수화물로 지칭되고, 상이한 양의 당 (사카라이드) 단위, 예를 들어 모노사카라이드, 디사카라이드 및 폴리사카라이드를 함유할 수 있다.

본원에 사용된 용어 "환원당"은 금속 이온을 환원시키거나 단백질의 리신 및 다른 아미노기와 공유 반응할 수 있는 헤미아세탈기를 함유하는 것이고, "비환원당"은 이들 환원당 특성을 갖지 않는 것이다.

"동결건조보호제"는 관심 단백질과 조합되는 경우에 동결건조 및 후속 저장시 단백질의 물리화학적 불안정성을 유의하게 방지하거나 감소시키는 분자이다. 예시적인 동결건조보호제는 당 및 그의 상응하는 당 알콜; 아미노산, 예컨대 일나트륨 글루타메이트 또는 히스티딘; 메틸아민, 예컨대 베타인; 액방성 염, 예컨대 황산마그네슘; 폴리올, 예컨대 3가 또는 보다 고분자량 당 알콜, 예를 들어 글리세린, 덱스트란, 에리트리톨, 글리세롤, 아라비톨, 크실리톨, 소르비톨 및 만니톨; 프로필렌 글리콜; 폴리에틸렌 글리콜; 플루로닉스(Pluronics)®; 및 그의 조합을 포함한다. 추가의 예시적인 동결건조보호제는 글리세린 및 젤라틴, 및 당 멜리비오스, 멜레지토스, 라피노스, 만노트리오스 및 스타키오스를 포함한다. 환원당의 예는 글루코스, 말토스, 락토스, 말툴로스, 이소-말툴로스 및 락툴로스를 포함한다. 비-환원당의 예는 당 알콜 및 다른 직쇄 폴리알콜로부터 선택된 폴리히드록시 화합물의 비-환원 글리코시드를 포함한다. 바람직한 당 알콜은 모노글리코시드, 특히 디사카라이드, 예컨대 락토스, 말토스, 락툴로스 및 말툴로스의 환원에 의해 얻어지는 화합물이다. 글리코시드 측기는 글루코시드 또는 갈락토시드일 수 있다. 당 알콜의 추가의 예는 글루시톨, 말티톨, 락티톨 및 이소-말툴로스이다. 바람직한 동결건조보호제는 비-환원당인 트레할로스 또는 수크로스이다.

동결건조보호제는 사전-동결건조된 제제에 "동결건조보호량"으로 첨가되며, 이는 동결건조보호량의 동결건조보호제의 존재 하의 단백질의 동결건조를 따를 경우 단백질이 동결건조 및 저장시 그의 물리화학적 안정성을 본질적으로 유지한다는 것을 의미한다.

본원에 사용된 "제약상 허용되는 담체"는 활성 성분과 조합되는 경우에 성분이 생물학적 활성을 유지할 수 있게 하고 대상체의 면역계와 비-반응성인 임의의 물질을 포함한다. 예는 표준 제약 담체, 예컨대 포스페이트 완충 염수 용액, 물, 에멀젼, 예컨대 오일/물 에멀젼, 및 다양한 유형의 습윤제 중 임의의 것을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 에어로졸 또는 비경구 투여를 위한 바람직한 희석제는 포스페이트 완충 염수, 정상 (0.9%) 염수 또는 5% 덱스트로스이다. 이러한 담체를 포함하는 조성물은 널리 공지된 통상적인 방법에 의해 제제화된다 (예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A. Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990; 및 Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing, 2000] 참조).

"발생률 감소"는 임의의 중증도 감소 (이러한 상태에 일반적으로 사용되는 다른 약물 및/또는 요법에 대한 필요성 및/또는 그의 양 (예를 들어, 그에 대한 노출)의 감소를 포함할 수 있음)를 의미한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자가 이해하는 바와 같이, 개체는 치료에 대한 반응과 관련하여 다양할 수 있고, 따라서 예를 들어 "발생률을 감소시키는 방법"은 항-PD-1 항체의 투여가 특정한 개체에서의 이러한 발생률 감소를 유발할 가능성이 있다는 합리적인 예상에 기초하여 이를 투여하는 것을 반영한다.

"호전시키는 것"은 항-PD-1 항체를 투여하지 않은 것과 비교하여 1종 이상의 증상을 경감 또는 개선시키는 것을 의미한다. "호전"은 또한 증상 지속기간의 단축 또는 감소를 포함한다.

본원에서 "약" 값 또는 파라미터에 대한 언급은 해당 값 또는 파라미터 그 자체에 대한 실시양태를 포함 (및 기재)한다. 예를 들어, "약 X"를 언급하는 기재는 "X"의 기재를 포함한다. 수치 범위는 범위를 정의하는 수를 포함한다.

본 발명의 측면 또는 실시양태가 마쿠쉬 군 또는 다른 대안 군의 측면에서 기재되는 경우에, 본 발명은 총괄적으로 열거된 전체 군, 뿐만 아니라 상기 군의 개별 각각의 구성원 및 주요 군의 모든 가능한 하위군, 뿐만 아니라 군 구성원 중 하나 이상이 부재하는 주요 군을 포괄한다. 본 발명은 또한 청구된 발명에서 임의의 군 구성원 중 하나 이상의 명확한 배제를 고려한다.

본 발명의 요소 또는 그의 바람직한 실시양태(들)를 소개하는 경우에, 단수 형태 및 "상기"라는 용어는 하나 이상의 요소가 있음을 의미하는 것으로 의도된다. 용어 "포함하는", "포함하다", "포함한다", "포함한" 및 "갖는"은 포괄적이고, 열거된 요소 이외의 추가의 요소가 있을 수 있음을 의미하는 것으로 의도된다. 표현 "포함하는"을 사용하여 본원에 기재된 어떠한 실시양태든지, "이루어진" 및/또는 "본질적으로 이루어진"의 용어로 기재된 것 이외에 다른 것은 유사한 실시양태가 또한 제공되는 것으로 이해된다.

달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 상충하는 경우에, 정의를 포함한 본 명세서가 우선할 것이다. 본 명세서 및 청구범위 전반에 걸쳐, 용어 "포함하다" 또는 변형어, 예컨대 "포함한다" 또는 "포함하는"은 언급된 정수 또는 정수 군을 포함하지만 임의의 다른 정수 또는 정수 군을 배제하지는 않는다는 것을 의미하는 것으로 이해될 것이다. 문맥에서 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수형을 포함할 것이고, 복수 용어는 단수형을 포함할 것이다.

예시적인 방법 및 물질이 본원에 기재되어 있지만, 본원에 기재된 것과 유사하거나 동일한 방법 및 물질도 또한 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있다. 물질, 방법 및 예는 단지 설명을 위한 것이고, 제한적인 것으로 의도되지 않는다.

항-PD-1 항체 조성물

한 측면에서, 본 발명은 항-PD-1 항체를 포함하며 약 1 cP 내지 약 25 cP의 점도를 갖는 제제를 제공한다. 또 다른 측면에서, 항-PD-1 항체-함유 제제의 점도를 감소시키기 위한 방법이 제공되며, 여기서 방법은 제제에 상기 항-PD-1 항체를 포함하는 수성 제제의 점도를 감소시킬 수 있는 점도 감소 양의 화합물을 첨가하는 단계를 포함한다. 제제는 각각 수성 또는 동결건조 형태일 수 있다. 수성 형태의 제제는 약 150 cP 이하, 바람직하게는 약 120 cP 이하, 바람직하게는 약 100 cP 이하, 바람직하게는 약 90 cP 이하, 바람직하게는 약 80 cP 이하, 바람직하게는 약 70 cP 이하, 바람직하게는 약 60 cP 이하, 바람직하게는 약 50 cP 이하, 바람직하게는 약 40 cP 이하, 바람직하게는 약 30 cP 이하, 바람직하게는 약 20 cP 이하, 바람직하게는 약 10 cP 이하, 바람직하게는 약 5 cP 이하의 점도를 가질 수 있다. 일부 실시양태에서 항체를 포함하는 조성물은 20℃에서 약 1 cP 내지 약 500 cP, 약 1 cP 내지 200 cP, 약 1 cP 내지 약 150 cP, 약 1 cP 내지 약 100 cP, 약 1 cP 내지 약 90 cP, 약 1 cP 내지 약 80 cP, 약 1 cP 내지 약 70 cP, 약 1 cP 내지 약 60 cP, 약 1 cP 내지 약 50 cP, 약 1 cP 내지 약 40 cP, 약 1 cP 내지 약 30 cP, 약 1 cP 내지 약 20 cP, 또는 약 1 cP 내지 약 10 cP의 점도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 제제는 약 120 cP, 약 115 cP, 110 cP, 약 105 cP, 약 100 cP, 약 95 cP, 약 90 cP, 약 85 cP, 약 80 cP, 약 75 cP, 약 70 cP, 약 65 cP, 약 60 cP, 약 55 cP, 50 cP, 약 45 cP, 약 40 cP, 약 35 cP, 약 30 cP, 약 25 cP, 약 20 cP, 약 15 cP, 또는 약 10 cP, 또는 약 5 cP의 점도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 제제는 약 10 cP 내지 50 cP, 약 10 cP 내지 100 cP, 약 20 cP 내지 60 cP, 약 30 cP 내지 60 cP, 약 40 cP 내지 60 cP, 또는 약 50 cP 내지 60 cP의 점도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 수성 형태의 제제는 약 1 cP 내지 10 cP의 점도를 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 수성 형태의 제제는 약 1 cP 내지 15 cP의 점도를 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 수성 형태의 제제는 약 1 cP 내지 20 cP의 점도를 가질 수 있다.

본 발명의 또 다른 측면은 임의의 본원에 기재된 제제를 보유하는 용기를 포함하는 제조 물품에 관한 것이다.

일부 실시양태에서, 제제는 적어도 1종의 항-PD-1 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 1종 초과의 항체가 존재할 수 있다. 적어도 1종, 적어도 2종, 적어도 3종, 적어도 4종, 적어도 5종 또는 그 초과의 상이한 항체가 존재할 수 있다. 일반적으로, 2종 이상의 상이한 항체는 서로에 대해 불리한 영향을 미치지 않는 보완적 활성을 갖는다. 또는 각각의 항체가 항체의 유효성을 증진 및/또는 보완하는 역할을 하는 다른 작용제와 함께 사용될 수 있다. 항체는 약 0.1 내지 약 300 mg/ml의 범위의 농도로 제제 중에 존재할 수 있다. 일부 실시양태에서 항체의 농도는 약 0.5 mg/ml, 약 1 mg/ml, 약 2 mg/ml, 약 2.5 mg/ml, 약 3 mg/ml, 약 3.5 mg/ml, 약 4 mg/ml, 약 4.5 mg/ml, 약 5 mg/ml, 약 5.5 mg/ml, 약 6 mg/ml, 약 6.5 mg/ml, 약 7 mg/ml, 약 7.5 mg/ml, 약 8 mg/ml, 약 8.5 mg/ml, 약 9 mg/ml, 약 9.5 mg/ml, 약 10 mg/ml, 약 11 mg/ml, 약 12 mg/ml, 약 13 mg/ml, 약 14 mg/ml, 약 15 mg/ml, 약 16 mg/ml, 약 17 mg/ml, 약 18 mg/ml, 약 19 mg/ml, 약 20 mg/ml, 약 21 mg/ml, 약 22 mg/ml, 약 23 mg/ml, 약 24 mg/ml, 약 25 mg/ml, 약 26 mg/ml, 약 27 mg/ml, 약 28 mg/ml, 약 29 mg/ml, 약 30 mg/ml, 약 31 mg/ml, 약 32 mg/ml, 약 33 mg/ml, 약 34 mg/ml, 약 35 mg/ml, 약 36 mg/ml, 약 37 mg/ml, 약 38 mg/ml, 약 39 mg/ml, 약 40 mg/ml, 약 41 mg/ml, 약 42 mg/ml, 약 43 mg/ml, 약 44 mg/ml, 약 45 mg/ml, 약 46 mg/ml, 약 47 mg/ml, 약 48 mg/ml, 약 49 mg/ml, 약 50 mg/ml, 약 51 mg/ml, 약 52 mg/ml, 약 53 mg/ml, 약 54 mg/ml, 약 55 mg/ml, 약 56 mg/ml, 약 57 mg/ml, 약 58 mg/ml, 약 59 mg/ml, 약 60 mg/ml, 약 70 mg/ml, 약 80 mg/ml, 약 90 mg/ml, 약 100 mg/ml, 약 101 mg/ml, 약 102 mg/ml, 약 102.5 mg/ml, 약 103 mg/ml, 약 103.5 mg/ml, 약 104 mg/ml, 약 104.5 mg/ml, 약 105 mg/ml, 약 105.5 mg/ml, 약 106 mg/ml, 약 106.5 mg/ml, 약 107 mg/ml, 약 107.5 mg/ml, 약 108 mg/ml, 약 108.5 mg/ml, 약 109 mg/ml, 약 109.5 mg/ml, 약 110 mg/ml, 약 111 mg/ml, 약 112 mg/ml, 약 113 mg/ml, 약 114 mg/ml, 약 115 mg/ml, 약 116 mg/ml, 약 117 mg/ml, 약 118 mg/ml, 약 119 mg/ml, 약 120 mg/ml, 약 121 mg/ml, 약 122 mg/ml, 약 123 mg/ml, 약 124 mg/ml, 약 125 mg/ml, 약 126 mg/ml, 약 127 mg/ml, 약 128 mg/ml, 약 129 mg/ml, 약 130 mg/ml, 약 131 mg/ml, 약 132 mg/ml, 약 133 mg/ml, 약 134 mg/ml, 약 135 mg/ml, 약 136 mg/ml, 약 137 mg/ml, 약 138 mg/ml, 약 139 mg/ml, 약 140 mg/ml, 약 141 mg/ml, 약 142 mg/ml, 약 143 mg/ml, 약 144 mg/ml, 약 145 mg/ml, 약 146 mg/ml, 약 147 mg/ml, 약 148 mg/ml, 약 149 mg/ml, 약 150 mg/ml, 약 151 mg/ml, 약 152 mg/ml, 약 153 mg/ml, 약 154 mg/ml, 약 155 mg/ml, 약 156 mg/ml, 약 157 mg/ml, 약 158 mg/ml, 약 159 mg/ml, 약 160 mg/ml, 약 170 mg/ml, 약 180 mg/ml, 약 190 mg/ml, 약 200 mg/ml, 약 201 mg/ml, 약 202 mg/ml, 약 202.5 mg/ml, 약 203 mg/ml, 약 203.5 mg/ml, 약 204 mg/ml, 약 204.5 mg/ml, 약 205 mg/ml, 약 205.5 mg/ml, 약 206 mg/ml, 약 206.5 mg/ml, 약 207 mg/ml, 약 207.5 mg/ml, 약 208 mg/ml, 약 208.5 mg/ml, 약 209 mg/ml, 약 209.5 mg/ml, 약 210 mg/ml, 약 211 mg/ml, 약 212 mg/ml, 약 213 mg/ml, 약 214 mg/ml, 약 215 mg/ml, 약 216 mg/ml, 약 217 mg/ml, 약 218 mg/ml, 약 219 mg/ml, 약 220 mg/ml, 약 221 mg/ml, 약 222 mg/ml, 약 223 mg/ml, 약 224 mg/ml, 약 225 mg/ml, 약 226 mg/ml, 약 227 mg/ml, 약 228 mg/ml, 약 229 mg/ml, 약 230 mg/ml, 약 231 mg/ml, 약 232 mg/ml, 약 233 mg/ml, 약 234 mg/ml, 약 235 mg/ml, 약 236 mg/ml, 약 237 mg/ml, 약 238 mg/ml, 약 239 mg/ml, 약 240 mg/ml, 약 241 mg/ml, 약 242 mg/ml, 약 243 mg/ml, 약 244 mg/ml, 약 245 mg/ml, 약 246 mg/ml, 약 247 mg/ml, 약 248 mg/ml, 약 249 mg/ml, 약 250 mg/ml, 약 251 mg/ml, 약 252 mg/ml, 약 253 mg/ml, 약 254 mg/ml, 약 255 mg/ml, 약 256 mg/ml, 약 257 mg/ml, 약 258 mg/ml, 약 259 mg/ml, 약 260 mg/ml, 약 270 mg/ml, 약 280 mg/ml, 약 290 mg/ml, 또는 약 300 mg/ml이다.

본 발명의 일부 실시양태에 따르면 pH는 약 pH 4.0 내지 6.0, 바람직하게는 약 pH 5.0 내지 약 pH 4.5, 약 4.6, 약 4.7, 약 4.8, 약 4.9, 약 5.0, 약 5.1, 약 5.2, 약 5.3, 약 5.4 또는 약 5.5 중 임의의 것 범위일 수 있다. 더 바람직하게는 pH는 약 pH 4.9, 5.0 또는 5.1 중 어느 하나로부터 선택된 범위의 것이다. 일부 실시양태에서 pH는 pH 5.0 +/- 0.5이다. 이들 범위의 pH 값은 더 낮은 점도를 갖는 조성물을 제공한다.

일부 실시양태에서, 제제는 아르기닌을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 아르기닌은 아르기닌 히드로클로라이드 또는 아르기닌 HCl이다. [브라이언(Bryan): 제제 7이 아르기닌을 함유하지 않지만, 본 발명자들은 대안을 위해 이를 포함한다. 제제 7에 존재하지 않지만 본 설명에 포함되는 다른 부형제 등에 동일한 코멘트가 적용된다.] 아르기닌의 농도는 약 0.1 밀리몰 (mM) 내지 약 200 mM의 범위일 수 있다. 일부 실시양태에서, 아르기닌의 농도는 약 10 mM 내지 약 150 mM, 약 50 mM 내지 약 130 mM, 약 80 mM 내지 약 120 mM, 또는 약 90 mM 내지 약 110 mM이다. 일부 실시양태에서, 아르기닌의 농도는 약 1 mM, 약 2 mM, 약 3 mM, 약 4 mM, 약 5 mM, 약 6 mM, 약 7 mM, 약 8 mM, 약 9 mM, 약 10 mM, 약 11 mM, 약 12 mM, 약 13 mM, 약 14 mM, 약 15 mM, 약 16 mM, 약 17 mM, 약 18 mM, 약 19 mM, 약 20 mM, 약 21 mM, 약 22 mM, 약 23 mM, 약 24 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 약 50 mM, 약 55 mM, 약 60 mM, 약 65 mM, 약 70 mM, 약 75 mM, 약 80 mM, 약 85 mM, 약 90 mM, 약 95 mM, 약 100 mM, 약 105 mM, 약 110 mM, 약 115 mM, 약 120 mM, 약 125 mM, 약 130 mM, 약 135 mM, 약 140 mM, 약 145 mM, 약 150 mM, 약 155 mM, 약 160 mM, 약 165 mM, 약 170 mM, 약 175 mM, 약 180 mM, 약 185 mM, 약 190 mM, 약 195 mM, 또는 약 200 mM이다. 일부 실시양태에서, 아르기닌의 농도는 100 mM이다.

일부 실시양태에서, 장성 작용제는 폴리올, 사카라이드, 탄수화물, 염, 예컨대 염화나트륨 또는 그의 혼합물을 포함할 수 있다. 폴리올은, 예를 들어 비제한적으로 약 600 kD 미만 (예를 들어, 약 120 내지 약 400 kD의 범위)의 분자량을 가질 수 있고, 예를 들어 비제한적으로 만니톨, 트레할로스, 소르비톨, 에리트리톨, 이소말트, 락티톨, 말티톨, 크실리톨, 글리세롤, 락티톨, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 이노시톨 또는 그의 혼합물일 수 있다. 사카라이드 또는 탄수화물은, 예를 들어 비제한적으로 모노사카라이드, 디사카라이드 또는 폴리사카라이드, 또는 이들 중 임의의 것의 혼합물일 수 있다. 사카라이드 또는 탄수화물은, 예를 들어 비제한적으로 프룩토스, 글루코스, 만노스, 수크로스, 소르보스, 크실로스, 락토스, 말토스, 수크로스, 덱스트란, 풀루란, 덱스트린, 시클로덱스트린, 가용성 전분, 히드록시에틸 전분, 수용성 글루칸 또는 그의 혼합물일 수 있다. 장성 작용제는, 예를 들어 비제한적으로 환원당 또는 비-환원당 또는 그의 혼합물과 같은 사카라이드를 포함할 수 있다. 장성 작용제는, 예를 들어 비제한적으로 수크로스, 트레할로스 및 그의 혼합물과 같은 비-환원당인 사카라이드를 포함할 수 있다.

조성물 중 장성 작용제의 농도는 약 1 mg/ml 내지 약 300 mg/ml, 약 1 mg/ml 내지 약 200 mg/ml, 또는 약 1 mg/ml 내지 약 100 mg/ml의 범위이다. 바람직하게는 조성물 중 장성 작용제의 농도는 약 0.5 mg/ml, 약 1 mg/ml, 약 2 mg/ml, 약 2.5 mg/ml, 약 3 mg/ml, 약 3.5 mg/ml, 약 4 mg/ml, 약 4.5 mg/ml, 약 5 mg/ml, 약 5.5 mg/ml, 약 6 mg/ml, 약 6.5 mg/ml, 약 7 mg/ml, 약 7.5 mg/ml, 약 8 mg/ml, 약 8.5 mg/ml, 약 9 mg/ml, 약 9.5 mg/ml, 약 10 mg/ml, 약 11 mg/ml, 약 12 mg/ml, 약 13 mg/ml, 약 14 mg/ml, 약 15 mg/ml, 약 16 mg/ml, 약 17 mg/ml, 약 18 mg/ml, 약 19 mg/ml, 약 20 mg/ml, 약 21 mg/ml, 약 22 mg/ml, 약 23 mg/ml, 약 24 mg/ml, 약 25 mg/ml, 약 26 mg/ml, 약 27 mg/ml, 약 28 mg/ml, 약 29 mg/ml, 약 30 mg/ml, 약 31 mg/ml, 약 32 mg/ml, 약 33 mg/ml, 약 34 mg/ml, 약 35 mg/ml, 약 36 mg/ml, 약 37 mg/ml, 약 38 mg/ml, 약 39 mg/ml, 약 40 mg/ml, 약 41 mg/ml, 약 42 mg/ml, 약 43 mg/ml, 약 44 mg/ml, 약 45 mg/ml, 약 46 mg/ml, 약 47 mg/ml, 약 48 mg/ml, 약 49 mg/ml, 약 50 mg/ml, 약 51 mg/ml, 약 52 mg/ml, 약 53 mg/ml, 약 54 mg/ml, 약 55 mg/ml, 약 56 mg/ml, 약 57 mg/ml, 약 58 mg/ml, 약 59 mg/ml, 약 60 mg/ml, 약 65 mg/ml, 약 70 mg/ml, 약 75 mg/ml, 약 80 mg/ml, 약 81 mg/ml, 약 82 mg/ml, 약 83 mg/ml, 약 84 mg/ml, 약 85 mg/ml, 약 86 mg/ml, 약 87 mg/ml, 약 88 mg/ml, 약 89 mg/ml, 약 90 mg/ml, 약 91 mg/ml, 약 92 mg/ml, 약 93 mg/ml, 약 94 mg/ml, 약 95 mg/ml, 약 96 mg/ml, 약 97 mg/ml, 약 98 mg/ml, 약 99 mg/ml, 약 100 mg/ml, 약 101 mg/ml, 약 102 mg/ml, 약 103 mg/ml, 약 104 mg/ml, 약 105 mg/ml, 약 106 mg/ml, 약 107 mg/ml, 약 108 mg/ml, 약 109 mg/ml, 약 110 mg/ml, 약 111 mg/ml, 약 112 mg/ml, 약 113 mg/ml, 약 114 mg/ml, 약 115 mg/ml, 약 116 mg/ml, 약 117 mg/ml, 약 118 mg/ml, 약 119 mg/ml, 약 120 mg/ml, 약 121 mg/ml, 약 122 mg/ml, 약 123 mg/ml, 약 124 mg/ml, 약 125 mg/ml, 약 126 mg/ml, 약 127 mg/ml, 약 128 mg/ml, 약 129 mg/ml, 약 130 mg/ml, 약 131 mg/ml, 약 132 mg/ml, 약 133 mg/ml, 약 134 mg/ml, 약 135 mg/ml, 약 136 mg/ml, 약 137 mg/ml, 약 138 mg/ml, 약 139 mg/ml, 약 140 mg/ml, 약 141 mg/ml, 약 142 mg/ml, 약 143 mg/ml, 약 144 mg/ml, 약 145 mg/ml, 약 146 mg/ml, 약 147 mg/ml, 약 148 mg/ml, 약 149 mg/ml, 또는 약 150 mg/ml이다.

계면활성제는, 예를 들어 비제한적으로 폴리소르베이트, 폴록사머, 트리톤, 소듐 도데실 술페이트, 소듐 라우렐 술페이트, 소듐 옥틸 글리코시드, 라우릴-술포베타인, 미리스틸-술포베타인, 리놀레일-술포베타인, 스테아릴-술포베타인, 라우릴-사르코신, 미리스틸-사르코신, 리놀레일-사르코신, 스테아릴-사르코신, 리놀레일-베타인, 미리스틸-베타인, 세틸-베타인, 라우로아미도프로필-베타인, 코카미도프로필-베타인, 리놀레아미도프로필-베타인, 미리스트아미도프로필-베타인, 팔미도프로필-베타인, 이소스테아르아미도프로필-베타인, 미리스트아미도프로필-디메틸아민, 팔미도프로필-디메틸아민, 이소스테아르아미도프로필-디메틸아민, 소듐 메틸 코코일-타우레이트, 디소듐 메틸 올레일-타우레이트, 디히드록시프로필 PEG 5 리놀레암모늄 클로라이드, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜 및 그의 혼합물일 수 있다. 계면활성제는, 예를 들어 비제한적으로 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 21, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 61, 폴리소르베이트 65, 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 81, 폴리소르베이트 85, PEG3350 및 그의 혼합물일 수 있다. 일부 실시양태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트 80 (PS80)이다.

계면활성제의 농도는 일반적으로 약 0.01 mg/ml 내지 약 10 mg/ml, 약 0.01 mg/ml 내지 약 5.0 mg/ml, 약 0.01 mg/ml 내지 약 2.0 mg/ml, 약 0.01 mg/ml 내지 약 1.5 mg/ml, 약 0.01 mg/ml 내지 약 1.0 mg/ml, 약 0.01 mg/ml 내지 약 0.5 mg/ml, 약 0.01 mg/ml 내지 약 0.4 mg/ml, 약 0.01 mg/ml 내지 약 0.3 mg/ml, 약 0.01 mg/ml 내지 약 0.2 mg/ml, 약 0.01 mg/ml 내지 약 0.15 mg/ml, 약 0.01 mg/ml 내지 약 0.1 mg/ml, 또는 약 0.01 mg/ml, 내지 약 0.05 mg/ml의 범위이다. 더 바람직하게는 계면활성제의 농도는 약 0.5 mg/ml, 약 0.05 mg/ml 약 0.06 mg/ml 약 0.07 mg/ml 약 0.08 mg/ml, 약 0.09 mg/ml 약 0.1 mg/ml 약 0.11 mg/ml 약 0.12 mg/ml 약 0.13 mg/ml 약 0.14 mg/ml 약 0.15 mg/ml 약 0.16 mg/ml 약 0.17 mg/ml 약 0.18 mg/ml 약 0.19 mg/ml, 약 0.2 mg/ml이다. 일부 실시양태에서, 계면활성제의 농도는 0.2 mg/ml이다.

완충제는, 예를 들어 비제한적으로 아세테이트, 히스티딘, 숙시네이트, 글루코네이트, 시트레이트, 아세트산, 포스페이트, 인산, 아스코르베이트, 타르타르산, 말레산, 글리신, 락테이트, 락트산, 아스코르브산, 이미다졸, 비카르보네이트 및 탄산, 숙신산, 벤조산나트륨, 벤조산, 글루코네이트, 에데테이트, 아세테이트, 말레이트, 이미다졸, 트리스, 포스페이트 및 그의 혼합물일 수 있다. 일부 실시양태에서, 완충제는 히스티딘 완충제이며, 여기서 히스티딘은 L-히스티딘 또는 D-히스티딘, 히스티딘의 용매화 형태, 히스티딘의 수화 형태 (예를 들어, 1수화물), 히스티딘의 염 (예를 들어, 히스티딘 히드로클로라이드) 또는 히스티딘의 무수 형태 또는 그의 혼합물을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 완충제는 아세테이트 완충제이며, 여기서 아세테이트는 아세트산나트륨, 아세트산 또는 그의 혼합물을 포함할 수 있다.

완충제의 농도는 약 0.1 밀리몰 (mM) 내지 약 100 mM의 범위일 수 있다. 바람직하게는, 완충제의 농도는 약 0.5 mM 내지 약 50 mM, 더 바람직하게는 약 1 mM 내지 약 30 mM, 보다 바람직하게는 약 1 mM 내지 약 18 mM, 보다 더 바람직하게는 약 1 mM 내지 약 15 mM이다. 바람직하게는, 완충제의 농도는 약 1 mM, 약 2 mM, 약 3 mM, 약 4 mM, 약 5 mM, 약 6 mM, 약 7 mM, 약 8 mM, 약 9 mM, 약 10 mM, 약 11 mM, 약 12 mM, 약 13 mM, 약 14 mM, 약 15 mM, 약 16 mM, 약 17 mM, 약 18 mM, 약 19 mM, 약 20 mM, 약 21 mM, 약 22 mM, 약 23 mM, 약 24 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM 또는 약 50 mM이다. 일부 실시양태에서, 완충제의 농도는 약 190 mM, 약 200 mM, 약 210 mM, 약 220 mM, 약 230 mM, 약 240 mM, 약 250 mM, 약 260 mM, 약 270 mM, 약 280 mM, 약 290, 약 300 mM, 약 310 mM, 또는 약 320 mM이다.

일부 실시양태에서, 킬레이트화제는 아미노폴리카르복실산, 히드록시아미노카르복실산, N-치환 글리신, 2-(2-아미노-2-옥소에틸) 아미노에탄 술폰산 (BES), 데페록사민 (DEF), 시트르산, 니아신아미드 및 데속시콜레이트 및 그의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 킬레이트화제는 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA), 디에틸렌트리아민 펜타아세트산 5 (DTPA), 니트릴로트리아세트산 (NTA), N-2-아세트아미도-2-이미노디아세트산 (ADA), 비스(아미노에틸)글리콜에테르, N,N,N',N'-테트라아세트산 (EGTA), 트랜스-디아미노시클로헥산 테트라아세트산 (DCTA), 글루탐산, 및 아스파르트산, N-히드록시에틸이미노디아세트산 (HIMDA), N,N-비스-히드록시에틸글리신 (비신) 및 N-(트리스히드록시메틸메틸) 10 글리신 (트리신), 글리실글리신, 소듐 데속시콜레이트, 에틸렌디아민; 프로필렌디아민; 디에틸렌트리아민; 트리에틸렌테트라아민 (트리엔), 에틸렌디아민테트라아세토 EDTA; 디소듐 EDTA, EDTA, 칼슘 EDTA 옥살산, 말레이트, 시트르산, 시트르산 1수화물, 및 시트르산삼나트륨-2수화물, 8-히드록시퀴놀레이트, 아미노산, 히스티딘, 시스테인, 메티오닌, 펩티드, 폴리펩티드 및 단백질 및 그의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 킬레이트화제는 EDTA의 염, 예를 들어 에데트산이칼륨, 에데트산이나트륨, 에데테이트 칼슘 디소듐, 에데트산나트륨, 에데트산삼나트륨 및 에데트산칼륨으로 이루어진 군으로부터 선택되고; 데페록사민 (DEF)의 적합한 염은 데페록사민 메실레이트 (DFM) 또는 그의 혼합물이다. 본 발명에 사용된 킬레이트화제는 가능할 경우, 화합물의 유리 산 또는 유리 염기 형태 또는 염 형태로 존재할 수 있고, 또한 화합물 또는 상응하는 염의 무수, 용매화 또는 수화 형태로서 존재할 수 있다. 주어진 pH 및 동일한 농도의 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA)의 용액 중으로 용해시킨 후에, 다양한 염, 유리 산, 나트륨 함유 EDTA의 수화 또는 무수 형태 및 물은 동등한 킬레이트화제로 간주된다. 예를 들어, 0.0500 g/L의 EDTA 디소듐 2수화물 (FW: 372.3), 0.0393 g/L의 EDTA (FW: 292.3), 0.0452 g/L의 EDTA 디소듐 (FW: 336.2), 0.0481 g/L의 EDTA 트리소듐 (FW: 358.2), 0.0511 g/L의 EDTA 테트라소듐 (FW: 380.2), 0.0422 g/L의 EDTA 소듐 (FW: 314.2) 및 0.0446 g/L의 EDTA 소듐 수화물 (FW: 332.3)은 모두 134.4 μM EDTA를 함유하며, 동등한 킬레이트화제로 간주된다.

가장 바람직하게는 킬레이트화제는 EDTA, 예컨대, 예를 들어 비제한적으로 디소듐 EDTA, 칼슘 EDTA 또는 디소듐 EDTA 2수화물이다.

디소듐 EDTA는 증진된 항체 안정성 및/또는 응집에 대한 저항성을 갖는 조성물을 제공하므로 특히 바람직하다.

킬레이트화제의 농도는 일반적으로 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 약 1 mg/ml 내지 약 10.0 mg/ml, 약 5 mg/ml 내지 약 15.0 mg/ml, 약 0.01 mg/ml 내지 약 1.0 mg/ml, 또는 약 0.03 mg/ml 내지 약 0.5 mg/ml의 범위이다. 더 바람직하게는 킬레이트화제의 농도는 일반적으로 약 0.01 mM 내지 약 2.0 mM, 약 0.01 mM 내지 약 1.5 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.5 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.4 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.3 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.2 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.15 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.1 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.09 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.08 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.07 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.06 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.05 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.04 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.03 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.02 mM 또는 약 0.05 mM 내지 약 0.01 mM의 범위이다. 바람직하게는 킬레이트화제의 농도는 약 0.01 mg/ml, 0.02 mg/ml, 0.03 mg/ml, 약 0.04 mg/ml, 약 0.05 mg/ml, 약 0.06 mg/ml, 약 0.07 mg/ml, 약 0.10 mg/ml, 약 0.20 mg/ml일 수 있다. 더 바람직하게는 킬레이트화제의 농도는 약 0.04 mg/ml, 약 0.041 mg/ml, 약 0.042 mg/ml, 약 0.043 mg/ml, 약 0.044 mg/ml, 약 0.045 mg/ml, 약 0.046 mg/ml, 약 0.047 mg/ml, 약 0.048 mg/ml, 약 0.049 mg/ml, 약 0.05 mg/ml, 약 0.051 mg/ml, 약 0.052 mg/ml, 약 0.053 mg/ml, 약 0.054 mg/ml, 약 0.055 mg/ml, 또는 약 0.056 mg/ml이다. 가장 바람직하게는, 킬레이트화제의 농도는 약 0.05 mg/ml이다.

킬레이트화제는 본 발명의 조성물에서 환원된 산소 종의 형성을 낮추고/거나, 산성 종 (예를 들어, 탈아미드화) 형성을 감소시키고/거나, 항체 응집을 감소시키고/거나, 항체 단편화를 감소시키고/거나, 항체 산화를 감소시킬 수 있다. 이러한 킬레이트화제는 킬레이트화제의 보호가 없는 항체와 비교하여 제제화된 항체의 분해를 감소시키거나 방지할 수 있다.

달리 언급되지 않는 한, 본원에 열거된 농도는 주위 조건, 즉 25℃ 및 대기압에서의 농도이다.

바람직한 실시양태에서, 제제는 항산화제를 포함하지 않는다. 예를 들어, 본원에 제공된 조성물의 바람직한 실시양태는 메티오닌, 티오황산나트륨, 카탈라제 또는 백금을 포함하지 않는다.

일부 실시양태에서, 제제는 항산화제 작용제를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서 항산화제는 메티오닌, 티오황산나트륨, 카탈라제 및 백금을 포함하는 군으로부터 선택된다.

항산화제의 농도는 일반적으로 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 약 0.01 mg/ml 내지 약 10.0 mg/ml, 약 0.01 mg/ml 내지 약 5.0 mg/ml, 약 0.01 mg/ml 내지 약 1.0 mg/ml, 또는 약 0.01 mg/ml 내지 약 0.02 mg/ml의 범위이다. 바람직하게는 항산화제의 농도는 약 0.01 mg/ml, 0.02 mg/ml, 0.03 mg/ml, 약 0.04 mg/ml, 약 0.05 mg/ml, 약 0.06 mg/ml, 약 0.07 mg/ml, 0.08 mg/ml, 0.09 mg/ml, 약 0.10 mg/ml, 0.11 mg/ml, 0.12 mg/ml, 0.13 mg/ml, 약 0.14 mg/ml, 약 0.15 mg/ml, 약 0.16 mg/ml, 약 0.17 mg/ml, 0.18 mg/ml, 0.19 mg/ml 약 0.20 mg/ml, 약 0.25 mg/ml, 0.3 mg/ml, 0.4 mg/ml, 0.5 mg/ml, 0.6 mg/ml, 0.7 mg/ml, 0.8 mg/ml, 0.9 mg/ml, 1.0 mg/ml일 수 있다. 가장 바람직하게는, 항산화제의 농도는 약 0.01 mg/ml이다.

일부 실시양태에서, 제제는 보존제를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 보존제는 페놀, m-크레졸, 벤질 알콜, 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈알토늄 클로라이드, 페녹시에탄올 및 메틸 파라벤으로부터 선택된다.

보존제의 농도는 일반적으로 약 0.001 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 약 0.005 mg/ml 내지 약 15.0 mg/ml, 약 0.008 mg/ml 내지 약 12.0 mg/ml 또는 약 0.01 mg/ml 내지 약 10.0 mg/ml의 범위이다. 바람직하게는, 보존제의 농도는 약 0.1 mg/ml, 0.2 mg/ml, 0.3 mg/ml, 약 0.4 mg/ml, 약 0.5 mg/ml, 약 0.6 mg/ml, 약 0.7 mg/ml, 0.8 mg/ml, 0.9 mg/ml, 약 1.0 mg/ml, 2.0 mg/ml, 3.0 mg/ml, 약 4.0 mg/ml, 약 5.0 mg/ml, 약 6.0 mg/ml, 약 7.0 mg/ml, 8.0 mg/ml, 9.0 mg/ml 약 9.1 mg/ml, 약 9.2 mg/ml, 9.3 mg/ml, 9.4 mg/ml, 9.5 mg/ml, 9.6 mg/ml, 9.7 mg/ml, 9.8 mg/ml, 9.9 mg/ml, 10.0 mg/ml일 수 있다. 가장 바람직하게는, 보존제의 농도는 약 0.1 mg/ml 또는 9.0 mg/ml이다.

일부 실시양태에서, 조성물은 항산화제를 함유하지 않는다.

일부 실시양태에서, 조성물은 보존제를 함유하지 않는다.

일부 실시양태에서, 항체는 중쇄 불변 영역, 예컨대, 예를 들어 IgG, IgM, IgD, IgA 및 IgE; 및 임의의 이소형, 예컨대 IgG1, lgG2, IgG3 및 IgG4를 포함한다. 바람직하게는, 항체는 IgG2 또는 IgG4 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 하기 돌연변이를 포함하는 IgG4의 불변 영역을 포함한다 (Armour et al., 2003, Molecular Immunology 40 585-593): E233F234L235에서 P233V234A235로의 돌연변이 (IgG4Δc) (여기서 넘버링은 야생형 IgG4 기준임). 또 다른 실시양태에서, Fc는 결실 G236을 갖는 E233F234L235에서 P233V234A235로의 인간 IgG4 (IgG4Δb)이다. 일부 실시양태에서 Fc는 S228에서 P228로의 힌지 안정화 돌연변이를 함유하는 임의의 인간 IgG4 Fc (IgG4, IgG4Δb 또는 IgG4Δc)이다 (Aalberse et al., 2002, Immunology 105, 9-19).

일부 실시양태에서, 항체는 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 항체 단편 (예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, Fc, ScFv 등), 키메라 항체, 이중특이적 항체, 이종접합체 항체, 단일 쇄 (ScFv), 그의 돌연변이체, 항체 부분을 포함하는 융합 단백질 (예를 들어, 도메인 항체), 인간화 항체, 인간 항체, 및 항체의 글리코실화 변이체, 항체의 아미노산 서열 변이체 및 공유 변형된 항체를 포함한, 요구되는 특이성의 항원 인식 부위를 포함하는 이뮤노글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 형상으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 항체는 뮤린, 래트, 인간 또는 임의의 다른 기원 (키메라 또는 인간화 항체 포함)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간 항체일 수 있지만, 보다 바람직하게는 인간화 항체이다. 바람직하게는, 항체는 단리된 항체이고, 더 바람직하게는 실질적으로 순수한 것이다. 항체가 항체 단편인 경우, 이는 바람직하게는 원래 항체의 기능적 특징, 즉 리간드 결합 및/또는 길항제 또는 효능제 활성을 보유한다.

예시적 항-PD-1 항체는, 예를 들어 다음을 포함하나 이에 제한되지는 않는다: 니볼루맙 (옵디보(OPDIVO)®, ONO-4538, BMS-936558, MDX1106, 브리스톨-마이어스 스큅 캄파니(Bristol-Myers Squibb Company)), 펨브롤리주맙 (키트루다(KEYTRUDA)®, MK-3475, 람브롤리주맙, 머크 앤 캄파니., 인크.(Merck & Co., Inc.)), BCD100 (바이오캐드 바이오파마슈티칼 캄파니(BIOCAD Biopharmaceutical Company)), BGB-A317 (베이진 리미티드(BeiGene Ltd.)/셀진 코포레이션(Celgene Corporation)), CBT-501 (씨비티 파마슈티칼스(CBT Pharmaceuticals)), GLS-010 (하얼빈 글로리아 파마슈티칼스 캄파니, 리미티드(Harbin Gloria Pharmaceuticals Co., Ltd.)), IBI308 (이노벤트 바이올로직스, 인크.(Innovent Biologics, Inc.)), AMP-224 (글락소스미스클라인 피엘씨(GlaxoSmithKline plc)), BI 754091 (베링거 잉겔하임 게엠베하(Boehringer Ingelheim GmbH)), PDR001 (노파르티스 아게(Novartis AG)), MEDI0680 (아스트라제네카 피엘씨(AstraZeneca PLC)), PDR001 (노파르티스 아게), PF-06801591 (일명 RN888) (화이자 인크.(Pfizer Inc.)) (국제 특허 공개 번호 WO2016/092419 (이의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 mAb7로서 기재됨), REGN2810 (레게네론 파마슈티칼스, 인크.(Regeneron Pharmaceuticals, Inc.)), SHR-1210 (인사이트 코포레이션(Incyte Corporation)), TSR-042 (테사로, 인크.(Tesaro, Inc.)), AGEN2034 (아제누스 인크.(Agenus Inc.)), JNJ-63723283 (존슨 앤 존슨(Johnson & Johnson)), MGD013 (마크로제닉스, 인크.(MacroGenics, Inc.)), ANA011 (아납티스바이오, 인크.(AnaptysBio, Inc.)), ANB011 (아납티스바이오, 인크.), AUNP-12 (피에르 파브르 메디카먼트 에스.에이.(Pierre Fabre Medicament S.A.)), ENUM 244C8 (에뉴메랄 바이오메디칼 홀딩스, 인크.(Enumeral Biomedical Holdings, Inc.)), hAb21 (스테인웨이 바이오테크, 인크.(Stainwei Biotech, Inc.)), J43 (트랜스진 에스.에이.(Transgene S.A.)), JTX-4014 (자운스 테라퓨틱스, 인크.(Jounce Therapeutics, Inc.)), MCLA-134 (메루스 비.브이.(Merus B.V.)), PRS-332 (피에리스 아게(Pieris AG)), SHR-1316 (아트리디아 프로프라이어터리 리미티드(Atridia Pty Ltd.)), STI-A1010 (소렌토 테라퓨틱스, 인크.(Sorrento Therapeutics, Inc.)), STI-A1110 (레스 래보러토리즈 세르비에(Les Laboratoires Servier)), 및 XmAb20717 (젠코르, 인크.(Xencor, Inc.)).

베이진 리미티드에 의한 개발 하의 BGB-A317 (티슬렐리주맙)은 인간화 IgG4이며, 조작된 Fc 영역 (즉 Fc 감마 수용체 I에 결합하는 능력이 특이적으로 제거됨)을 갖는 모노클로날 항체이다. BGB-A317은 PD-1에 결합하고, PD-L1 및 PD-L2에 대한 PD-1의 결합을 억제한다.

하나 이상의 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 PF-06801591, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 스파르탈리주맙 및 BGB-A317로부터 선택된다.

구체적 측면에서, 항-PD-1 항체는 PF-06801591 (화이자 인크., CAS 등록 번호 2029210-61-3)이다. 또 다른 구체적 측면에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙 (옵디보®, MDX-1106, CAS 등록 번호 946414-94-4)이다. 또 다른 구체적 측면에서, 항-PD-1 항체는 세미플리맙 (리브타요(LIBTAYO)®, 또한 REGN2810으로 공지됨, 레게네론 파마슈티칼스, 인크. 및 사노피-아벤티스 유.에스. 엘엘씨(sanofi-aventis U.S. LLC), CAS 등록 번호 1801342-60-8)이다. 또 다른 구체적 측면에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙 (옵디보®, MDX-1106, CAS 등록 번호 946414-94-4)이다. 또 다른 구체적 측면에서, 항-PD-1 항체는 스파르탈리주맙 (PDR001, 노파르티스, CAS 등록 번호 1935694-88-4)이다. 또 다른 구체적 측면에서, PD-1 결합 길항제는 본원에 기재된 바와 같은 mAb7 또는 mAb15 (리나트 뉴로사이언스(Rinat Neuroscience), 화이자 인크.)로도 공지된, ATCC 수탁 번호 PTA-121 183을 갖는 발현 벡터에 의해 생산된 VH 영역을 포함하고 ATCC 수탁 번호 PTA-1 21 182를 갖는 발현 벡터에 의해 생산된 VL 영역을 갖는 항체이다.

구체적 측면에서, 항-PD-1 항체는 하기를 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다:

(a) 서열식별번호: 4 (GYTFTSYWIN)에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1;

(b) 서열식별번호: 5 (NIYPGSSLTNYNEKFKN)에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2; 및

(c) 서열식별번호: 6 (LSTGTFAY)에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3.

일부 실시양태에서, 항체는 하기를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-PD-1 항체일 수 있다:

(a) 서열식별번호: 7 (KSSQSLWDSGNQKNFLT)에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR1;

(b) 서열식별번호: 8 (WTSYRES)에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR2; 및

(c) 서열식별번호: 9 (QNDYFYPHT)에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR3.

일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역으로부터의 3개의 CDR을 포함하는 항-PD-1 항체일 수 있다.

일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역으로부터의 3개의 CDR을 포함하는 항-PD-1 항체일 수 있다.

일부 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열에 대해 적어도 약 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열에 대해 적어도 약 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있으며, 여기서 항체는 인간 PD-1에 특이적으로 결합한다.

일부 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있고/거나 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 서열식별번호: 2 및 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체일 수 있다.

일부 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 서열식별번호: 10에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열에 대해 적어도 약 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 영역 및/또는 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열에 대해 적어도 약 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 영역을 포함할 수 있으며, 여기서 항체는 인간 PD-1에 특이적으로 결합한다.

중쇄 서열

경쇄 서열

일부 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 서열식별번호: 10에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 영역을 포함할 수 있고/거나 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 영역을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 10에 제시된 중쇄 서열의 C-말단 리신은 절단될 수 있고; 즉, 중쇄 서열은 C-말단 리신이 결여될 수 있다.

일부 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 서열식별번호: 10 및 11에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체일 수 있다.

일부 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 본원에 정의된 바와 같은 항-PD-1 항체와 PD-1 결합에 대해 경쟁할 수 있다. 항-PD-1 항체는 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 PD-1 결합에 대해 경쟁할 수 있다.

일부 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체인 mAb7일 수 있다. 항체 mAb7은 WO2016/092419에 기재되어 있고, 이의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. mAb7의 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 각각 서열식별번호: 2 및 3에 제시된다. 항체 mAb7의 CDR 부분 (코티아 및 카바트 CDR 포함)은 WO2016/092419의 표 1에 다이어그램으로 도시되어 있다. 항체 mAb7은 PD-1 생물학적 활성을 차단하는데 고도로 강력하다.

일부 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 또한 항체 mAb7의 단편 또는 영역을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 단편은 본원의 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체 mAb7의 경쇄이다. 또 다른 실시양태에서, 단편은 본원의 서열식별번호: 10에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체 mAb7의 중쇄이다. 또 다른 실시양태에서, 단편은 항체 mAb7의 경쇄 및/또는 중쇄로부터의 1개 이상의 가변 영역을 함유한다. 또 다른 실시양태에서, 단편은 본원에서 각각 서열식별번호: 11 및 10에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 항체 mAb7의 경쇄 및/또는 중쇄로부터의 1개 이상의 CDR을 함유한다.

일부 실시양태에서, 항체는 항체 mAb7로부터 유래된 1개 이상 (1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개)의 CDR(들)을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, CDR은 카바트 CDR, 코티아 CDR 또는 카바트 및 코티아 CDR의 조합 (본원에서 "연장된" 또는 "조합된" CDR로 지칭됨)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 본원에 기재된 임의의 CDR 구성 (조합, 변이체 등 포함)을 포함한다.

본 발명의 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 항-PD-1 항체의 중쇄의 C-말단 리신은 결실된다. 다양한 경우에, 본원에 기재된 항-PD-1 항체의 중쇄 및/또는 경쇄는 임의로 신호 서열을 포함할 수 있다.

다른 실시양태에서, 항체는 관련 기술분야에 공지된 항-PD-1 항체, 예컨대, 예를 들어 비제한적으로 하기 중 임의의 것에 기재된 항체로부터 선택될 수 있다: 미국 특허 번호 8354509, 9084776, 9492540, 9492539, 9387247, 8779105, 8952136 및 8709416. 항체는 관련 기술분야에 공지된 항-PD-1 항체와 동일한 에피토프에 결합할 수 있고/거나 이러한 항체와 PD-1에의 결합에 대해 경쟁할 수 있다.

본 발명의 추가 측면에 따르면,

약 140 mg/ml 내지 약 160 mg/ml의 항체,

약 10.0 mM 내지 약 30.0 mM 히스티딘 완충제,

약 40 mg/ml 내지 약 100 mg/ml 트레할로스,

약 0.01 내지 약 0.3 mg/ml 폴리소르베이트 80 (PS80), 및

약 0.01 내지 약 0.1 mg/ml의 디소듐 EDTA

를 포함하거나 또는 이로 본질적으로 이루어진 조성물이 제공되며, 여기서 상기 조성물은 약 pH 4.5 내지 약 pH 5.5의 범위, 또는 대안적으로 약 pH 4.5 내지 약 pH 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9 중 임의의 것의 범위로부터 선택된 pH를 갖는다.

바람직한 실시양태에 따르면, 조성물은

약 90 mg/ml, 약 100 mg/ml, 약 110 mg/ml, 약 120 mg/ml, 약 130 mg/ml, 약 140 mg/ml 또는 약 150 mg/ml 중 임의의 것의 항체,

약 20 mM 히스티딘 완충제,

약 84 mg/ml 트레할로스,

약 0.2 mg/ml PS80, 및

약 0.05 mg/ml의 디소듐 EDTA

를 포함하거나 또는 이로 본질적으로 이루어지며, 여기서 상기 조성물은 약 pH 5.0 내지 약 pH 5.0, 5.2, 5.5 또는 5.8 중 임의의 것의 범위, 또는 대안적으로 약 pH 4.5 또는 약 pH 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4 또는 5.5 중 임의의 것의 범위로부터 선택된 pH를 갖고, 여기서 상기 항체는 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열 및 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 포함한다.

바람직한 실시양태에 따르면, 조성물은

약 120 mg/ml, 약 130 mg/ml, 약 140 mg/ml, 약 150 mg/ml, 약 160 mg/ml, 약 170 mg/ml 또는 약 180 mg/ml 중 임의의 것의 항체,

약 20 mM 히스티딘 완충제,

약 84 mg/ml 트레할로스,

약 0.2 mg/ml PS80, 및

약 0.05 mg/ml의 디소듐 EDTA

를 포함하거나 또는 이로 본질적으로 이루어지며, 여기서 상기 조성물의 pH는 약 pH 5.0 +/- 0.5이고, 여기서 상기 항체는 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열 및 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 사용되는 용량 부피는 약 0.5 ml, 약 1 ml, 약 2 ml, 약 3 ml, 약 4 ml, 약 5 ml, 약 6 ml, 약 7 ml, 약 8 ml, 약 9 ml, 약 10 ml, 약 11 ml, 약 12 ml, 약 13 ml, 약 14 ml, 약 15 ml, 약 16 ml, 약 17 ml, 약 18 ml, 약 19 ml, 약 20 ml, 약 21 ml, 약 22 ml, 약 23 ml, 약 24 ml, 약 25 ml, 약 26 ml, 약 27 ml, 약 28 ml, 약 29 ml, 약 30 ml, 약 31 ml, 약 32 ml, 약 33 ml, 약 34 ml, 약 35 ml, 약 36 ml, 약 37 ml, 약 38 ml, 약 39 ml, 약 40 ml, 약 41 ml, 약 42 ml, 약 43 ml, 약 44 ml, 약 45 ml, 약 46 ml, 약 47 ml, 약 48 ml, 약 49 ml, 또는 약 50 ml이다.

일부 실시양태에서, 동결건조되고/거나 동결건조에 적용된 조성물이 제공된다. 일부 실시양태에서, 동결건조되지 않고 동결건조에 적용되지 않은 조성물이 제공된다.

일부 실시양태에서, 항체의 농도는 약 100 mg/ml, 약 105 mg/ml, 약 110 mg/ml, 약 115 mg/ml, 약 120 mg/ml, 약 125 mg/ml, 약 130 mg/ml, 약 135 mg/ml, 약 140 mg/ml, 약 145 mg/ml, 약 150 mg/ml, 약 155 mg/ml, 또는 약 160 mg/ml 중 임의의 것이다.

본 발명의 추가의 바람직한 측면에 따르면, 대상체에서 과다증식성 장애, 예컨대, 예를 들어 암을 치료하기 위한 의약을 제조하기 위한 임의의 상기 측면 또는 실시양태의 조성물이 제공된다.

일부 실시양태에서, 암은 위암, 육종, 림프종, 호지킨 림프종, 백혈병, 두경부암, 편평 세포 두경부암, 흉선암, 상피암, 타액선암, 간암, 위암, 갑상선암, 폐암, 난소암, 유방암, 전립선암, 식도암, 췌장암, 신경교종, 백혈병, 다발성 골수종, 신세포 암종, 방광암, 자궁경부암, 융모막암종, 결장암, 구강암, 피부암 및 흑색종 중 하나 이상으로부터 선택된다.

본 발명의 추가 실시양태에 따르면, 대상체에서 과다증식성 장애, 예컨대, 예를 들어 암을 치료하기 위한 의약을 제조하기 위한 임의의 상기 측면 또는 실시양태의 조성물이 제공된다.

바람직한 실시양태에 따르면, 조성물은 혈류, 근육, 조직, 지방 또는 내부 기관 내로 직접 투여될 수 있다. 비경구 투여에 적합한 수단은 피하, 정맥내, 동맥내, 복강내, 척수강내, 뇌실내, 요도내, 흉골내, 두개내, 근육내, 골내 및 피내를 포함한다. 비경구 투여에 적합한 장치는 바늘 (미세바늘, 미세투사물, 가용성 바늘 및 다른 미세세공 형성 기술 포함) 주사기, 무바늘 주사기 및 주입 기술을 포함한다.

일부 실시양태에서, 의약의 투여 패턴은 매주마다 1회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 4주마다 1회, 5주마다 1회, 6주마다 1회, 7주마다 1회, 8주마다 1회, 9주마다 1회, 10주마다 1회, 15주마다 1회, 20주마다 1회, 25주마다 1회, 또는 26주마다 1회의 의약의 용량의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 매월 1회, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회, 4개월마다 1회, 5개월마다 1회, 또는 6개월마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 의약의 투여 패턴은 4주마다 또는 8주마다 1회의 의약의 용량의 투여를 포함한다.

일부 실시양태에서, 용량의 부피는 약 3 ml, 약 2.5 ml, 약 2 ml, 약 1.5 ml, 약 1 ml, 약 0.75 ml, 약 0.5 ml, 약 0.25 ml 또는 약 0.1 ml 이하이다.

일부 실시양태에서, 용량의 부피는 약 20 ml, 약 19 ml, 약 18 ml, 약 17 ml, 약 16 ml, 약 15 ml, 약 14 ml, 약 13 ml, 약 12 ml, 약 11 ml, 약 10 ml, 약 9 ml, 약 8 ml, 약 7 ml, 약 6 ml, 약 5 ml, 약 4 ml, 약 3 ml, 약 2 ml 또는 약 1 ml이다. 대안적으로, 용량의 부피는 약 20.5 ml, 약 19.5 ml, 약 18.5 ml, 약 17.5 ml, 약 16.5 ml, 약 15.5 ml, 약 14.5 ml, 약 13.5 ml, 약 12.5 ml, 약 11.5 ml, 약 10.5 ml, 약 9.5 ml, 약 8.5 ml, 약 7.5 ml, 약 6.5 ml, 약 5.5 ml, 약 4.5 ml, 약 3.5 ml, 약 2.5 ml, 약 1.5 ml, 또는 약 0.5 ml이다. 대안적으로, 용량의 부피는 약 900 마이크로리터, 약 800 마이크로리터, 약 700 마이크로리터, 약 600 마이크로리터, 약 500 마이크로리터, 약 400 마이크로리터, 약 300 마이크로리터, 약 200 마이크로리터, 또는 약 100 마이크로리터, 대안적으로 약 950 마이크로리터, 약 850 마이크로리터, 약 750 마이크로리터, 약 650 마이크로리터, 약 550 마이크로리터, 약 450 마이크로리터, 약 350 마이크로리터, 약 250 마이크로리터, 약 150 마이크로리터, 또는 약 50 마이크로리터이다. 일부 실시양태에서 용량의 부피는 약 2.0 ml 이하이다.

바람직한 실시양태에 따르면 항체의 농도는 약 0.1 내지 약 200 mg/ml의 범위일 수 있다. 바람직하게는 항체의 농도는 약 100 mg/ml, 약 101 mg/ml, 약 102 mg/ml, 약 103 mg/ml, 약 104 mg/ml, 약 105 mg/ml, 약 106 mg/ml, 약 107 mg/ml, 약 108 mg/ml, 약 109 mg/ml, 또는 약 110mg/ml, 약 111 mg/ml, 약 112 mg/ml, 약 113 mg/ml, 약 114 mg/ml, 약 115 mg/ml, 약 116 mg/ml, 약 117 mg/ml, 약 118 mg/ml, 약 119 mg/ml, 약 120 mg/ml, 약 121 mg/ml, 약 122 mg/ml, 약 123 mg/ml, 약 124 mg/ml, 약 125 mg/ml, 약 126 mg/ml, 약 127 mg/ml, 약 128 mg/ml, 약 129 mg/ml, 약 130 mg/ml, 약 131 mg/ml, 약 132 mg/ml, 약 133 mg/ml, 약 134 mg/ml, 약 135 mg/ml, 약 136 mg/ml, 약 137 mg/ml, 약 138 mg/ml, 약 139 mg/ml, 약 140 mg/ml, 약 141 mg/ml, 약 142 mg/ml, 약 143 mg/ml, 약 144 mg/ml, 약 145 mg/ml, 약 146 mg/ml, 약 147 mg/ml, 약 148 mg/ml, 약 149 mg/ml, 또는 약 150 mg/ml이다. 가장 바람직하게는 항체의 농도는 약 100 mg/ml 내지 약 180 mg/ml이고, 약 100 mg/ml, 약 105 mg/ml, 약 110 mg/ml, 약 115 mg/ml, 약 120 mg/ml, 약 125 mg/ml, 약 130 mg/ml, 약 135 mg/ml, 약 140 mg/ml, 약 145 mg/ml, 약 150 mg/ml, 약 155 mg/ml, 약 160 mg/ml, 약 165 mg/ml, 약 170 mg/ml, 약 175 mg/ml, 또는 약 180 mg/ml를 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다.

바람직한 실시양태에 따르면 용량은 약 50 mg, 약 51 mg, 약 52 mg, 약 53 mg, 약 54 mg, 약 55 mg, 약 56 mg, 약 57 mg, 약 58 mg, 약 59 mg, 약 60 mg, 약 70 mg, 약 80 mg, 약 90 mg, 약 100 mg, 약 110 mg, 약 120 mg, 약 130 mg, 약 140 mg, 약 150 mg, 약 160 mg, 약 170 mg, 약 180 mg, 약 190 mg, 약 200 mg, 약 210 mg, 약 220 mg, 약 230 mg, 약 240 mg, 약 250 mg, 약 260 mg, 약 270 mg, 약 280 mg, 약 290 mg, 약 300 mg, 약 310 mg, 약 320 mg, 약 330 mg, 약 340 mg, 약 350 mg, 약 360 mg, 약 370 mg, 약 380 mg, 약 390 mg, 약 400 mg, 약 410 mg, 약 420 mg, 약 430 mg, 약 440 mg, 약 450 mg, 약 460 mg, 약 470 mg, 약 480 mg, 약 490 mg, 약 500 mg, 약 510 mg, 약 520 mg, 약 530 mg, 약 540 mg, 약 550 mg, 약 560 mg, 약 570 mg, 약 580 mg, 약 590 mg, 약 600 mg, 약 610 mg, 약 620 mg, 약 630 mg, 약 640 mg, 약 650 mg, 약 660 mg, 약 670 mg, 약 680 mg, 약 690 mg, 약 700 mg, 약 710 mg, 약 720 mg, 약 730 mg, 약 740 mg, 약 750 mg, 약 760 mg, 약 770 mg, 약 780 mg, 약 790 mg, 약 800 mg, 약 810 mg, 약 820 mg, 약 830 mg, 약 850 mg, 약 850 mg, 약 860 mg, 약 870 mg, 약 880 mg, 약 890 mg, 약 900 mg, 약 910 mg, 약 920 mg, 약 930 mg, 약 940 mg, 약 950 mg, 약 960 mg, 약 970 mg, 약 980 mg, 약 990 mg, 또는 약 1000 mg 이하의 항체를 함유한다.

일부 실시양태에 따르면 용량은 약 1 μg/kg, 약 10 μg/kg, 약 20 μg/kg, 약 25 μg/kg, 약 50 μg/kg, 약 100 μg/kg, 약 200 μg/kg, 약 250 μg/kg, 약 500 μg/kg, 약 1 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 9 mg/kg, 약 10 mg/kg, 또는 약 11 mg/kg (용량이 투여되는 대상체의 질량)인 항체의 양을 함유한다. 일부 실시양태에서, 용량은 약 20 μg/kg, 약 25 μg/kg, 약 50 μg/kg, 약 100 μg/kg, 약 200 μg/kg, 약 250 μg/kg, 1 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 9 mg/kg, 또는 약 10 mg/kg을 함유한다.

투여 요법은 진료의가 달성하고자 하는 약동학적 감쇠 패턴에 좌우될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 1주 1-4회 투여하는 것이 고려된다. 훨씬 더 적은 빈도의 투여가 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 용량은 1주마다, 2주마다, 3주마다, 4주마다, 5주마다, 6주마다, 7주마다, 8주마다, 9주마다, 10주마다, 15주마다, 20주마다, 25주마다 또는 그 초과의 기간마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 용량은 1개월마다, 2개월마다, 3개월마다, 4개월마다, 5개월마다, 6개월마다 또는 그 초과의 기간마다 1회 투여된다. 이러한 요법의 진행은 통상적인 기술 및 검정에 의해 용이하게 모니터링된다. 투여 요법은 시간 경과에 따라 달라질 수 있다.

본 발명의 목적을 위해, 의약의 적절한 투여량은 사용되는 항체, 치료될 장애의 유형 및 중증도, 작용제가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지의 여부, 이전의 요법, 환자의 임상 병력 및 작용제에 대한 반응, 및 담당 의사의 판단에 좌우될 것이다. 전형적으로 임상의는 목적하는 결과를 달성하는 투여량에 도달할 때까지 의약을 투여할 것이다. 투여량은 실험적으로 결정될 수 있다. 예를 들어 개체는 의약의 효능을 평가하기 위해 증분 투여량이 주어진다.

용량 및/또는 빈도는 치료 과정에 따라 달라질 수 있다. 항체 반감기와 같은 실험적 고려 사항은 일반적으로 투여량의 결정에 기여할 것이다. 투여 빈도는 요법 과정에 걸쳐 결정 및 조정될 수 있고, 필수적이지는 않지만 일반적으로, 과다증식성 질환의 1종 이상의 증상의 치료 및/또는 억제 및/또는 호전 및/또는 지연에 기초한다. 일부 개체에서는 1회 초과의 용량이 필요할 수 있다. 투여 빈도는 요법 과정에 걸쳐 결정 및 조정될 수 있다. 예를 들어 비제한적으로, 질환 및 그의 중증도에 따라 수일 또는 더 긴 기간에 걸친 반복 투여를 위해, 치료는 증상의 목적하는 억제가 발생할 때까지 또는 충분한 치료 수준이 달성되어 암을 치료할 때까지 지속된다.

조성물을 포함하는 의약의 투여는, 예를 들어 수용자의 생리학적 조건, 투여 목적이 치료적인지 예방적인지의 여부 및 숙련된 진료의에게 공지된 다른 인자에 따라 연속적이거나 간헐적일 수 있다. 조성물을 포함하는 의약의 투여는 본질적으로 미리 선택된 기간에 걸쳐 연속적인 투여일 수 있거나 또는 일련의 간격을 둔 용량의 투여일 수 있다.

바람직하게는 용량의 투여는 바람직하게는 정맥내, 동맥내, 복강내, 척수강내, 뇌실내, 요도내, 흉골내, 두개내, 근육내, 골내, 피내 및 피하로부터 선택된 비경구 투여이다. 바람직하게는 의약은 비경구 투여를 위한 단위 투여 멸균 형태이다.

하기 실시예는 단지 예시적 목적으로 제공되고, 어떤 방식으로든 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 실제로, 본원에 제시되고 기재된 것들에 더하여 본 발명의 다양한 변형이 상기 설명으로부터 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 분명해질 것이며, 첨부된 청구범위의 범주 내에 속할 것이다. WO2016/092419의 실시예는 본 발명에 사용하기 위한 항체를 예시하기 위해 언급된다. WO2016/092419의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.

실시예

방법

이 방법 섹션은 하기 실시예 1-6에서 사용된 방법의 요약을 제공한다.

압력차가 용액 동적 점도와 상관관계가 있는 칩-기반 m-VROC 기기 상에서 항체 제제의 점도를 측정하였다. 상이한 유량 및 전단 속도에서 측정을 시험하였다. 샘플 크기는 대략 70-100 μL였다. 분취물을 100 μL 해밀턴 시린지 내에 로딩하고, m-VROC 칩에 연결하였다. 20℃에서 삼중 측정을 실시하였다.

동결 해동 안정성을 결정하기 위해, 100-150 mg/mL의 항-PD-1 항체를 5 사이클 동안 -20℃에서 2-8℃로 사이클링하였다. pH, 농도 및 SEC를 통해 항체 안정성을 평가하였다.

교반 안정성을 결정하기 위해, 고농도의 항-PD-1 항체를 300 rpm에서 24시간의 교반 후, 주위 온도 및 광 하에 수직 배향으로 평가하였다. pH, 농도 및 SEC를 통해 안정성을 평가하였다.

수소-이온 활성에 민감한 인디케이터 전극, 유리 전극 및 적합한 참조 전극 (써모 사이언티픽 오리온(Thermo Scientific Orion)™ PerpHecT™ ROSS™ 조합 pH 마이크로 전극)을 사용하여 0.02 pH 단위로 pH 값을 재현할 수 있는 적합한, 적절하게 표준화된 전위차계 기기 (써모 사이언티픽 오리온 스타 A111 pH 미터)를 사용하여 USP 공정서 방법 <791> 및 EP 공정서 방법 2.2.3에 따라 고농도 항체 제제의 pH 안정성을 측정하였다. 22.5-25.4℃에서의 2- 또는 3-점 보정을 사용 당일 수행하여 pH 미터의 표준화를 확인하고, 샘플을 주위 온도에서 적어도 30분 동안 평형화시키고, 적어도 60초 동안 안정화된 pH 판독 후에 0.01 pH 단위로의 값을 기록하였다.

가변 경로 길이 및 비어-램버트 법칙 (A = clε, 여기서 A = 흡광도, c = 농도, l = 경로 길이, 및 ε = 흡광 계수/몰 흡광도 계수 (mg ml^-1 cm^-1))에 기초하여 SoloVPE (씨 테크놀로지스 인크.(C Technologies Inc.)) 기기를 사용하여 분광학적으로 총 단백질 농도를 측정하였다. 항-PD-1 항체 mAb7에 대해, 사용된 ε는 1.62 mg mg ml^-1 cm^-1이다. 니볼루맙에 대해, 사용된 ε는 1.68 mg mg ml^-1 cm^-1이다. 펨브롤리주맙에 대해, 사용된 ε는 1.42 mg mg ml^-1 cm^-1이다. 샘플을 주위 온도로 평형화시키고, 샘플 용기 (씨 테크 인크. #OC0009-1-P50)에 첨가하고, 검출 윈도우 플랫폼 내 용기 홀더 내에 로딩하였다. 샘플당, 깨끗한 피브렛 (#OC0002-P50)을 피브렛 커플러 내에 설치하고, 280 nm에서의 기울기를 판독하였다 (320 mm에서의 산란 보정).

애질런트 HPLC 시스템 상에서 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 보다 고분자량 종 (HMMS)의 형성을 분석하였다. 0.75 mL/분으로 등용매 구배 (20 mM 인산나트륨, 400 mM 염화나트륨, pH 7.2)를 사용하여 30 ± 2℃에서 유지시킨 YMC-팩 디올-200 칼럼 (워터스(Waters), 카탈로그 번호 DL20S053008WT) 상에서 유체역학적 부피를 기초로 50 μg의 단백질을 분리하였다. 분자량 종을 용리시키고, 280 nm에서의 UV 흡수에 의해 검출하였다.

pH 구배에서 전하 차이 (pI 값)를 기초로 단백질 종을 분리하는 영상화 모세관 등전 포커싱 (iCE)을 사용하여 고농도의 항체의 탈아미드화 및 단편화에 대한 전하 이종성 및 안정성을 정량화하였다. 최종 농도 0.3 mg/ml 단백질, 0.01 mg/mL pI 마커 6.14 (프로테인 심플(Protein Simple), 품목 번호 102220), 0.01 mg/mL pI 마커 9.50 (프로테인 심플, 품목 번호 101996), 4% 파마라이트 pH 3-10 (GE 품목 번호 17-0456-01), 0.25% 메틸 셀룰로스 (프로테인 심플, 품목 번호 101876) 및 2 M 우레아 (시그마-알드리치(Sigma-Aldrich), 품목 번호 U4883)의 혼합물 중에 샘플을 희석하였다. 샘플을 프로테인 심플 iCE3 기기에 설치된 플루오로카본 코팅된 cIEF 카트리지 칼럼 (프로테인 심플, 품목 번호 101701) 내에 주입하고, 고 전압 (≤3000 V) 하에 모세관 칼럼에 집중시키고, 실제 칼럼 영상화 검출 (WCID) 시스템에서 280 nm의 고정 파장에서 모니터링하였다. 생성된 전기영동도를 적절한 소프트웨어로 분석하여 각각의 종에 대한 pI 값 및 피크 면적을 결정하였다.

마이크로-유동 영상화 (MFI)를 사용하여 육안으로 보이지 않는 입자를 분석하였다. 임의의 샘플 분석 전에, 시스템 적합성 점검으로서 15 μm 듀크 라텍스 카운트 표준을 실행시켰다. 각각의 분석 사이에 물 플러시를 사용하였다. 추가로, 물 블랭크를 분석한 후에 배경 카운트가 시험에 적절한지 확인하였다. ml당 평균 누적 카운트를 보고하였다. 추가로, 다수의 크기 채널을 모니터링하여 크기 범위당 입자 카운트에 대한 정보를 제공하였다.

실시예 1. 점도에 대한 완충제 및 pH의 영향

본 실시예는 고농도 항-PD-1 항체 제제에서 점도에 대한 pH의 영향을 예시한다.

항체 제제를 제조하기 위해, 항-PD-1 항체 mAb7을 20 mM 히스티딘 pH 5.5, 20 mM 히스티딘 pH 6.0, 20 mM 히스티딘 pH 6.5, 20 mM 히스티딘 pH 7.0, 20 mM 아세테이트 pH 5.0 및 20 mM 아세테이트 pH 6.0으로, 이러한 완충제로 반복적으로 희석하고 이어서 완충제 교환이 완료될 때까지 대략 160 mg/mL로 농축함으로써, 완충제 교환하였다. 모든 샘플의 최종 농도가 160 mg/mL이 되는 것을 표적으로 하였다.

모든 샘플에 대해 단백질 농도, 점도 및 pH를 측정하였다. 결과가 표 1 및 도 1에 요약되어 있다. 결과는 더 낮은 pH를 갖는 제제가 훨씬 더 낮은 점도를 갖는다는 것을 입증한다. 추가적으로, 동일한 pH에서, 히스티딘 및 아세테이트 기재 제제는 둘 다 유사한 점도를 갖는다.

표 1

실시예 2. 아르기닌의 평가

본 실시예는 항-PD-1 항체의 점도에 대한 다양한 농도의 아르기닌의 영향을 예시한다.

점도에 대한 아르기닌의 영향을 평가하기 위해, 항-PD-1 항체 mAb7을 20 mM 아세테이트 pH 5.0, 50 g/L 수크로스, 0.05 g/L Na₂EDTA 2수화물 및 0.2 g/L PS80 중으로, 20 kDa MWCO 투석 카세트를 사용하여 (PS80 없이) 투석하고, 50 kDa 아미콘 원심분리 필터를 사용하여 대략 200 mg/mL 항-PD-1 항체로 농축시키고, 고농도 PS80에 스파이킹함으로써 제제화하였다. 고농도의 아르기닌 히드로클로라이드 (HCl) 용액을 첨가하여 다양한 농도의 아르기닌을 갖는 제제를 제조하였다.

모든 샘플에 대해 단백질 농도 및 pH를 측정하였다. 결과가 표 2 및 도 2에 요약되어 있다. 항-PD-1 항체 농도의 소정 범위에서의 0, 50, 100, 150, 200 및 250 mM 아르기닌을 갖는 항-PD-1 항체 제제의 점도가 제시된다 (표 2, 도 2). 결과는 50 mM 아르기닌의 첨가가 고농도 항-PD-1 항체 제제의 점도를 감소시킨다는 것을 입증한다. 추가적으로, 250 mM까지 아르기닌의 농도를 증분적으로 증가시키는 것은 점도를 추가로 낮춘다.

표 2

실시예 3. 아르기닌 함유 제제의 평가

본 실시예는 항-PD-1 항체의 점도 및 안정성에 대한 추가의 부형제의 영향을 예시한다.

아르기닌-함유 항체 제제를 제조하기 위해, mAb7을 20 kDa MWCO 투석 카세트를 사용하여 (PS80 없이) 각각의 제제로 투석하고, 50 kDa 아미콘 원심분리 필터를 사용하여 150-200 mg/mL 항-PD-1 항체로 농축시키고, 고농도 PS80에 스파이킹함으로써, 항-PD-1 항체 mAb7을 각각의 제제 1-6 (표 3)으로 제제화하였다.

표 3

제제 1, 2 및 3은 아르기닌-함유 제제에서의 pH의 영향을 평가한다. 표 4 및 도 3은 항-PD-1 농도의 소정 범위에서의 제제 1, 2 및 3의 점도를 요약한다. 결과는 150 mM 아르기닌을 함유하는 제제에서, pH를 5.5에서 4.5로 낮추는 것이 점도를 유의하게 낮춘다는 것을 입증한다.

표 4

제제 4, 5 및 6은 pH 5.0에서 100 mM 아르기닌을 함유하는 제제에 대한 프롤린 첨가의 영향을 평가하였다. 표 5 및 도 4는 항-PD-1 항체 농도의 소정 범위에서의 제제 4, 5 및 6의 점도를 요약한다. 결과는 0, 100 또는 200 mM 프롤린을 함유하는 고농도 항-PD-1 항체 제제의 점도에 유의한 차이가 없다는 것을 입증한다.

표 5

150 mg/mL 항-PD-1 항체에서의 제제 1, 2, 3, 4 및 5의 안정성은 샘플을 5℃, 25℃ 및 40℃에서의 안정성에 배치함으로써 결정하였다. 응집 (SEC), 전하 이소형 (iCE), 농도 및 pH와 관련하여 단백질 안정성을 평가하였다. 표 6, 7, 8, 9 및 10은 각각 제제 1, 2, 3, 4 및 5의 열 안정성을 요약한다.

표 6

표 7

표 8

표 9

표 10

모든 제제 1-5에 대해, 10주 후 (제제 4 및 5의 경우 4주 후) 5℃ 및 25℃에서 전하 종 및 응집체 (HMMS)에 대해 유의한 변화는 없었다. 40℃에서, 제제 1 (pH 4.5)은 염기성 종의 유의한 증가를 가진 반면, 제제 2, 3, 4 및 5 (pH > 4.5)는 산성 종의 증가를 가졌다. 응집체 (HMMS)는 40℃에서의 저장 후 모든 제제에 대해 유사한 양으로 증가되었지만, 증가는 5℃로 의도된 저장 조건 하의 액체 제제에 대해 허용되는 것으로 간주되었다.

실시예 4. 트레할로스-함유 제제의 평가

본 실시예는 항-PD-1 항체 제제의 안정성 및 점도에 대한 트레할로스의 효과를 예시한다.

트레할로스 2수화물을 아르기닌-무함유 및 아르기닌-함유 제제 중 안정화제로서 평가하였다 (표 11).

표 11

트레할로스-함유 항체 제제를 제조하기 위해, 항-PD-1 항체 mAb7을 50 kDa 한외여과 카트리지가 구비된 접선 유동 여과를 사용하여 20 mM 히스티딘 및 50 g/L 트레할로스 2수화물로 완충제 교환하였다. 항-PD-1 항체 mAb7 농도를 한외여과를 사용하여 증가시키고, 이어서 고농도 용액을 사용하여 부형제를 첨가하고, 필요에 따라 희석하였다. 항-PD-1 항체 mAb7을 제제 7 중에 하기 농도로 제제화하였다: 104 mg/ml, 154 mg/ml, 174 mg/ml 및 200 mg/ml. 항-PD-1 항체 mAb7을 제제 8 중에 하기 농도로 제제화하였다: 150 mg/ml, 170 mg/ml 및 200 mg/ml. 점도를 상기 기재된 바와 같이 측정하였다. 결과가 표 12 및 도 5에 요약되어 있다.

표 12

104 mg/ml, 154 mg/ml, 174 mg/ml 및 200 mg/ml mAb7을 함유하는 제제 7의 점도는 20℃에서 각각 5.3, 16.9, 32.5 및 67.6 cP이었다. 150 mg/ml, 170 mg/ml 및 200 mg/ml mAb7을 함유하는 제제 8의 점도는 20℃에서 각각 14.1, 25.0 및 54.4 cP이었다.

결과는 제제 8 (아르기닌 함유)이 ≥ 175 g/L의 항-PD-1 항체 농도에서 제제 7보다 더 낮은 점도를 갖는다는 것을 입증한다. 약 150 mg/ml에서의 제제 7 및 8의 점도는 유사하였다 (도 5).

항-PD-1 항체 제제 7 및 8의 안정성을 5℃, 25℃ 및 40℃에서 평가하였다. 제제 7을 100 mg/mL 및 150 mg/mL 항-PD-1 항체를 사용하여 시험하고, 제제 8을 150 mg/mL 항-PD-1 항체를 사용하여 시험하였다. 샘플을 5℃, 25℃ 및 40℃에서 배치하고, 안정성을 상기 기재된 바와 같이 응집 (SEC), 전하 이소형 (iCE), 농도, pH 및 육안으로 보이지 않는 미립자 (MFI)를 측정함으로써 평가하였다. 결과는 표 13-21 (NT = 시험되지 않음)에 요약되어 있다.

표 13, 14 및 15는 각각 5℃, 25℃ 및 40℃에서 150 mg/mL 항-PD-1에서의 제제 7에 대한 열 안정성을 요약한다.

표 13

표 14

표 15

표 16, 17 및 18은 각각 5℃, 25℃ 및 40℃에서 10 mg/mL 항-PD-1에서의 제제 7에 대한 열 안정성을 요약한다.

표 16

표 17

표 18

표 19, 20 및 21은 각각 5℃, 25℃ 및 40℃에서 150 mg/mL 항-PD-1에서의 제제 8에 대한 열 안정성을 요약한다.

표 19

표 20

표 21

모든 연구된 조건에서 모든 제제에 대해 단백질 농도, pH 또는 육안으로 보이지 않는 미립자에서의 유의한 변화는 관찰되지 않았다 (표 13-21). 추가적으로, 5℃ 또는 25℃에서 응집 또는 전하 종에서의 유의한 변화도 관찰되지 않았다. 응집체 (HMMS) 및 산성 종은 40℃에서 저장 후 모든 제제에 대해 증가되었지만, 증가는 모든 제제에서 동일하고, 상대 증가는 5℃로 의도된 저장 조건 하의 액체 제제에 대해 허용되는 것으로 간주되었다.

이들 결과는 150 mg/ml 항-PD-1 항체 mAb7, 20 mM 히스티딘, 84 mg/ml 트레할로스 2수화물, 0.05 mg/ml 디소듐 EDTA 2수화물 및 0.2 mg/ml PS80을 함유하는 pH 5.0-5.1의 제제 7이 5℃ 또는 25℃에서의 14주 저장 후 안정하다는 것을 입증한다 (표 13 및 14). 이들 결과는 또한 100 mg/ml 항-PD-1 항체 mAb7, 20 mM 히스티딘, 84 mg/ml 트레할로스 2수화물, 0.05 mg/ml 디소듐 EDTA 2수화물 및 0.2 mg/ml PS80을 함유하는 pH 5.0-5.1의 제제 7이 5℃ 또는 25℃에서의 14주 저장 후 안정하다는 것을 입증한다 (표 16 및 17). 이들 결과는 또한 150 mg/ml 항-PD-1 항체 mAb7, 20 mM 히스티딘, 100 mM 아르기닌, 50 mg/ml 트레할로스 2수화물, 0.05 mg/ml 디소듐 EDTA 2수화물 및 0.2 mg/ml PS80을 함유하는 pH 5.0의 제제 8이 5℃ 또는 25℃에서의 6주 저장 후 안정하다는 것을 입증한다 (표 19 및 20).

100 및 150 mg/mL 항-PD-1에서의 제제 7 및 150 mg/mL 항-PD-1에서의 제제 8의 동결-해동 및 교반 안정성은 제제를 5회의 동결/해동 (FT) 사이클 또는 24시간의 교반 (AG)으로 스트레싱함으로써 결정하였다. 결과가 표 22에 요약되어 있다.

표 22

유사하게, 제제 7 및 제제 8에 대해, 동결/해동 또는 교반에 의한 스트레싱 후에 낮은 수준, 즉 0.6%의 응집체 형성이 관찰되었다 (표 22).

이들 결과는 100 또는 150 mg/ml 항-PD-1 항체 mAb7, 20 mM 히스티딘, 84 mg/ml 트레할로스 2수화물, 0.05 mg/ml 디소듐 EDTA 2수화물 및 0.2 mg/ml PS80을 함유하는 pH 5.0-5.1의 제제 7이 5회의 동결/해동 사이클 또는 24시간의 교반 후에 안정하다는 것을 입증한다. 150 mg/ml 항-PD-1 항체 mAb7, 20 mM 히스티딘, 100 mM 아르기닌 HCl, 50 mg/ml 트레할로스 2수화물, 0.05 mg/ml 디소듐 EDTA 2수화물, 0.2 mg/ml PS80을 함유하는 pH 5.0의 제제 8도 또한 5회의 동결/해동 사이클 또는 24시간의 교반 후에 안정하다.

실시예 5. 항-PD-1 항체 mAb7의 글리코실화 패턴

본 실시예는 항-PD-1 항체 mAb7의 글리코실화 패턴을 예시한다.

LC/MS에 의한 펩티드 맵핑으로 N²⁹⁴ST 컨센서스 서열을 함유하는 중쇄 펩티드 상에 위치한 1개의 N-글리코실화 부위를 확인하였다. N²⁹⁴ST 컨센서스 서열은 본질적으로 완전히 점유된다. mAb7에 대해 관찰된 N-연결된 올리고사카라이드 프로파일은 2개의 주요 N-글리칸인 G0F 및 G1F를 디스플레이하고, 이들 둘 다는 코어-푸코실화 복합체형 이중안테나 구조이다. 추가로, 말단절단 및/또는 비-푸코실화 복합체형 이중안테나 구조, 고 만노스형 Man5 구조 및 시알릴화 코어-푸코실화 복합체형 이중안테나 올리고사카라이드에 상응하는 덜 풍부한 N-글리칸이 또한 검출되고 확인된다.

mAb7의 N-연결된 올리고사카라이드 프로파일링은 펩티드-N-글리코시다제 F (PNGaseF)에 의해 방출된 N-연결된 올리고사카라이드의 2-아미노벤즈아미드 (2-AB) 표지를 포함하였다. 2-AB 표지된 N-연결된 올리고사카라이드를 친수성 상호작용 액체 크로마토그래피 (HILIC)에 의해 분리하고, 형광 검출 및 질량 분광측정법에 의해 구조를 규명하였다. mAb7에서의 글리칸 이종성이 도 6의 그래프에 제시되어 있다.

실시예 6. 제제 7에서의 항-PD-1 항체의 평가

본 실시예는 키트루다® (펨브롤리주맙) 및 옵디보® (니볼루맙)를 사용한 제제 7의 용도의 실행가능성을 평가한다.

펨브롤리주맙 및 니볼루맙을 각각 20 mM 히스티딘 완충제, 84 mg/ml 트레할로스 2수화물, pH 5.0 중에 제제화하였다. 20 mM 히스티딘, 84 mg/ml 트레할로스 2수화물, 0.05 mg/ml 디소듐 EDTA 2수화물 및 0.2 mg/ml PS80, pH 5.0의 최종 제제 (제제 7)를 위해 샘플 내에 고농도 폴리소르베이트 80 및 디소듐 EDTA 2수화물을 스파이킹하였다. 이어서 모든 제제를 0.22 um PES 필터를 사용하여 여과하고, 단백질 무함유 제제 7 용액을 사용하여 필요한 농도로 희석하였다.

펨브롤리주맙을 제제 7 중에 129, 150, 175 및 193 mg/mL로 제제화하였다. 니볼루맙을 제제 7 중에 125, 148 및 179 mg/mL로 제제화하였다. 20℃에서의 점도를 상기 기재된 바와 같이 측정하였다. 결과가 표 23에 요약되어 있다.

표 23

결과는 제제 7 중 펨브롤리주맙 및 니볼루맙의 단백질 농도의 함수로서의 점도가 제제 7 중 항-PD-1 항체 mAb7의 점도와 대등하다는 것을 입증한다 (표 12).

제제 7에서의 펨브롤리주맙, 니볼루맙 및 항-PD-1 항체 mAb7의 열 안정성을 시차 주사 열량측정법에 의해 용융 온도를 측정함으로써 평가하였다. 분석 전 단백질 무함유 제제 7 용액을 사용하여 모든 3종의 항체를 1 mg/mL로 희석하였다. 10℃에서 110℃로 100℃/시간의 경사 속도로 열 스캔을 수행하였다. 온도기록도가 도 7에 제시되고, 열 언폴딩의 개시 (T_개시) 및 용융 온도 (T_m1,m2)가 표 24에 제시된다.

표 24

열 안정성 결과는 제제 7에서의 펨브롤리주맙, 니볼루맙 및 항-PD-1 항체 mAb7이 대등한 열 프로파일, 용융 개시 온도 및 용융 온도를 갖는다는 것을 입증한다.

제제 7에서 150 mg/mL의 펨브롤리주맙 및 니볼루맙의 안정성을 40℃에서 2주 동안 응집 (SEC), 전하 이소형 (iCE), 농도, 환원 모세관 겔 전기영동 (rCGE)에 의한 순도 및 pH의 측정에 의해 평가하였다. 결과가 표 25 및 26에 요약되어 있다.

표 25

표 26

이들 결과는 150 mg/ml 펨브롤리주맙, 20 mM 히스티딘, 84 mg/ml 트레할로스 2수화물, 0.05 mg/ml 디소듐 EDTA 2수화물 및 0.2 mg/ml PS80을 함유하는 pH 5.0-5.1의 제제 7이 40℃에서의 2주 저장 후 안정하다는 것을 입증한다. 이들 결과는 또한 150 mg/ml 니볼루맙, 20 mM 히스티딘, 84 mg/ml 트레할로스 2수화물, 0.05 mg/ml 디소듐 EDTA 2수화물 및 0.2 mg/ml PS80을 함유하는 pH 5.1-5.2의 제제 7이 40℃에서의 2주 저장 후 안정하다는 것을 입증한다.

특허, 특허 출원, 논문, 교재 등을 포함한 본원에 인용된 모든 참고문헌 및 그 안에 인용된 참고문헌은 이들이 이미 포함되어 있지는 않은 정도로 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 포함된 문헌 및 유사한 자료 중 하나 이상이 비제한적으로 정의된 용어, 용어 용법, 기재된 기술 등에 있어서 본 출원과 상이하거나 모순되는 경우에, 본 출원이 우선한다.

상기 기재 및 실시예는 본 발명의 특정의 구체적 실시양태를 상술하고, 본 발명자들에 의해 고려된 최적 방식을 기재한다. 그러나, 상기의 것이 문서에서 상세하게 나타날 수 있더라도, 본 발명이 많은 방식으로 실시될 수 있고 본 발명이 첨부된 청구범위 및 그의 임의의 등가물에 따라 해석되어야 함을 인지할 것이다.

SEQUENCE LISTING <110> Pfizer Inc. <120> ANTI-PD-1 ANTIBODY COMPOSITIONS <130> PC72395A <150> 62/807,912 <151> 2019-02-20 <150> 62/639,587 <151> 2018-03-07 <160> 11 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 288 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln 1 5 10 15 Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp 20 25 30 Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp 35 40 45 Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val 50 55 60 Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala 65 70 75 80 Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg 85 90 95 Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg 100 105 110 Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu 115 120 125 Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val 130 135 140 Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro 145 150 155 160 Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly 165 170 175 Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys 180 185 190 Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro 195 200 205 Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly 210 215 220 Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro 225 230 235 240 Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly 245 250 255 Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg 260 265 270 Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu 275 280 285 <210> 2 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody sequence <400> 2 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Ser Ser Leu Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Ser Thr Gly Thr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 3 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody sequence <400> 3 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Trp Asp Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Tyr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Phe Tyr Pro His Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> affinity matured mouse CDR sequence <400> 4 Gly Tyr Thr Phe 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Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 225 230 235 240 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 245 250 255 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe 260 265 270 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 275 280 285 Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 290 295 300 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 305 310 315 320 Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 325 330 335 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln 340 345 350 Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 355 360 365 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 370 375 380 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 385 390 395 400 Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu 405 410 415 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 420 425 430 Tyr 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Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp 180 185 190 Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu 195 200 205 Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220

Claims

150 mg/ml 항-PD-1 항체;
20 mM 히스티딘 완충제;
84 mg/ml 트레할로스;
0.2 mg/ml PS80; 및
0.045 또는 0.05 mg/ml EDTA
를 포함하거나 또는 이로 이루어지며, pH 5.0 +/- 0.1인 제약 조성물.

제1항에 있어서, 점도가 20℃에서 10 cP 내지 18 cP인 제약 조성물.

제2항에 있어서, 점도가 20℃에서 15 cP인 제약 조성물.

제1항에 있어서,
0.045 mg/mL EDTA는 디소듐 EDTA(Na₂EDTA) 2수화물의 분자량을 기준으로 계산되고, 0.050 mg/mL EDTA는 디소듐 EDTA(Na₂EDTA)의 분자량을 기준으로 계산되며, 각각은 0.13 nM의 EDTA에 상응하는 것인 제약 조성물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, EDTA가 디소듐 EDTA, 디소듐 EDTA 2수화물, 또는 디소듐 EDTA와 디소듐 EDTA 2수화물의 조합을 포함하는 것인 제약 조성물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 인간 또는 인간화 모노클로날 항체인 제약 조성물.

제6항에 있어서, 항체가 IgG4 항체인 제약 조성물.

제7항에 있어서, 항체가 IgG4 S228P 항체인 제약 조성물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하고, 여기서 VH 상보성 결정 영역 1 (CDR1)이 서열식별번호: 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VH CDR2가 서열식별번호: 5에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VH CDR3이 서열식별번호: 6에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; VL CDR1이 서열식별번호: 7에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL CDR2가 서열식별번호: 8에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL CDR3이 서열식별번호: 9에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인 제약 조성물.

제9항에 있어서, VH는 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인 제약 조성물.

제9항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 2에 제시된 중쇄 가변 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열 및 서열식별번호: 3에 제시된 경쇄 가변 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 제약 조성물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 다음 중 하나 이상을 포함하는 것인 제약 조성물:
서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH), 또는 CDR 내에 존재하지 않는 잔기에 1개 또는 여러개의 보존적 아미노산 치환을 갖는 변이체 및 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL), 또는 CDR 내에 존재하지 않는 아미노산에 1개 또는 여러개의 아미노산 치환을 갖는 그의 변이체.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 10의 C-말단 리신을 갖거나 갖지 않는, 서열식별번호: 10에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 제약 조성물.

제13항에 있어서, 항체가 주요 글리칸 종으로서 G0F 및 G1F를 포함하는 Asn²⁹⁴에서의 글리코실화를 디스플레이하는 것인 제약 조성물.

제14항에 있어서, 글리코실화가 부차적 글리칸 종으로서, 말단절단 복합체형 이중안테나 구조, 비-푸코실화 복합체형 이중안테나 구조, 말단절단 비-푸코실화 복합체형 이중안테나 구조, 고 만노스형 Man5 구조 및 시알릴화 코어-푸코실화 복합체형 이중안테나 올리고사카라이드를 추가로 포함하는 것인 제약 조성물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 동결건조되거나 또는 동결건조되지 않은 제약 조성물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 20℃에서 10 내지 18 cP의 점도를 갖는 제약 조성물.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 PF-06801591, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 세미플리맙 또는 스파르탈리주맙, 또는 이들 중 임의의 것의 항원 결합 부분인 제약 조성물.

서열식별번호: 10의 C-말단 리신을 갖거나 갖지 않는, 서열식별번호: 10에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 150 mg/ml 항-PD-1 항체;
20 mM 히스티딘 완충제;
84 mg/ml 트레할로스;
0.2 mg/ml PS80; 및
0.045 또는 0.05 mg/ml EDTA
를 포함하며, pH 5.0 +/- 0.1이고, 20℃에서 10 내지 18 cP의 점도를 갖는 제약 조성물.

제19항에 있어서,
0.045 mg/mL EDTA는 디소듐 EDTA(Na₂EDTA) 2수화물의 분자량을 기준으로 계산되고, 0.050 mg/mL EDTA는 디소듐 EDTA(Na₂EDTA)의 분자량을 기준으로 계산되며, 각각은 0.13 nM의 EDTA에 상응하는 것인 제약 조성물.

제19항 또는 제20항에 있어서, EDTA가 디소듐 EDTA, 디소듐 EDTA 2수화물, 또는 디소듐 EDTA와 디소듐 EDTA 2수화물의 조합을 포함하는 것인 제약 조성물.

제19항 또는 제20항에 있어서, 트레할로스가 트레할로스 2수화물인 제약 조성물.

제1항 내지 제4항, 제19항 및 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 항산화제를 포함하지 않는 제약 조성물.

제23항에 있어서, 항산화제가 L-메티오닌 또는 그의 제약상 허용되는 염인 제약 조성물.

제1항 내지 제4항, 제19항 및 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 메티오닌을 포함하지 않는 제약 조성물.

제1항 내지 제4항, 제19항 및 제20항중 어느 한 항에 있어서, 아르기닌을 포함하지 않는 제약 조성물.

제1항 내지 제4항, 제19항 및 제20항중 어느 한 항에 있어서, 암을 갖는 대상체에게 투여되는, 암을 치료하기 위한 제약 조성물.

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