KR20220100634A

KR20220100634A - 안정한 수성 항-tfpi 항체 제제

Info

Publication number: KR20220100634A
Application number: KR1020227019650A
Authority: KR
Inventors: 토마스 조셉 크롤리; 로버트 리 듀필드; 제니퍼 쥬노
Original assignee: 화이자 인코포레이티드
Priority date: 2019-11-13
Filing date: 2020-11-10
Publication date: 2022-07-15
Also published as: MX2022005836A; JP2021088548A; AU2020385048A1; IL292493A; CN114786717A; US20230035617A1; WO2021094917A1; EP4058061A1; BR112022007635A2; CA3160806A1

Abstract

본 발명은 항체의 약학 제제 분야에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 안정한 액체 항체 제제, 및 이의 약학 제조 및 용도에 관한 것이다. 본 발명은 항-조직 인자 경로 억제제(TFPI) 항체의 수성 제제로 예시된다.

Description

안정한 수성 항-TFPI 항체 제제

관련 출원의 교차-참조

본원은 2019년 11월 13일자로 출원된 미국 가출원 제62/934,781호 및 2020년 9월 22일자로 출원된 미국 가출원 제63/081,409호를 우선권 주장하고, 이 출원들은 전체로서 본원에 참고로 포함된다.

서열목록의 참조

본원은 EFS-웹을 통해 전자 출원되고 .txt 포맷으로 전자 제출된 서열목록을 포함한다. .txt 파일은 2020년 10월 13일자로 생성되었고 42,550 바이트의 크기를 가진 명칭 "PC72541A_Seq_Listing_ST25.txt"의 서열목록을 함유한다. 이 .txt 파일에 함유된 서열목록은 본 명세서의 일부이고 전체로서 본원에 참고로 포함된다.

발명의 분야

본 발명은 항체의 약학 제제 분야에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 안정한 액체 항체 제제 및 이의 약학 제조와 용도에 관한 것이다.

치료 또는 예방 용도를 위한 항체 제제는 사용 전 저장 및 수송 동안 일정 기간에 걸쳐 변성, 탈아미드화, 산화 또는 응집의 영향으로 인한 단백질의 활성 또는 구조적 완전성의 손실을 방지하기 위해 안정화제를 요구한다. 이 문제점들은 치료 투여에 종종 요구되는 고농도의 항체에서 악화된다. 많은 수의 제제 옵션이 이용될 수 있으나, 하나의 접근법 또는 시스템이 모든 단백질에 적합하지는 않다(예를 들어, 문헌[Wang et al., J. Pharm Sci. 96:1-26(2007)] 참조).

항체 제제의 개발에 있어서 주요 목표는 항체, 용해도, 안정성 및 그의 항원 결합의 효능을 유지하는 것이다. 항체가 생물학적 활성을 유지하기 위해, 제제는 항체의 항원 결합 아미노산의 적어도 코어의 입체구조적 완전성을 보존해야 한다. 또한, 정맥내 또는 피하 주사에 사용하기 전에 멸균 여과를 필요로 하고 투여 경로를 제한하는 용액 중의 응집체 및 미립자를 피하는 것이 특히 바람직하다. 염, 계면활성제, pH 및 당과 같은 등장화제는 응집 또는 변성 문제점을 극복하는 데 사용될 수 있다. 항체 제제의 제제화는 단백질의 변성 및 항원 결합 활성의 손실을 피하기 위해 무엇보다도 이 인자들의 신중한 선택을 요구한다. 따라서, 용액에서 고농도의 생체활성 항체를 안정적으로 지지하고 정맥내, 안구내, 유리체내, 동맥내, 척추강내, 뇌실내, 요도내, 흉골내, 두개내, 근육내, 골내, 복강내, 피내 또는 피하 주사를 포함하는 비경구 투여에 적합한 안정한 수성 항체 제제가 필요하다.

조직 인자 경로 억제제(TFPI) 항체는 혈액 응고 결핍 또는 출혈 장애, 예컨대, 혈우병 A 및 B의 치료 및 예방에 유용한 것으로 확인되었다(예를 들어, 미국 특허출원 공개 제2017/0073428호 참조). 액체 항체 제제는 당분야에서 공지되어 있지만(예를 들어, 국제 특허출원 공개 제WO2006/096491호, 제WO 2010/032220호 및 제WO2013/186719호, 미국 특허출원 공개 제2009/0110681호, 제2017/0360929호 및 제2018/0000933호 참조), 혈액 응고 결핍 또는 출혈 장애를 앓고 있는 환자의 의학적 요구를 충족시키기 위해 TFPI 항체의 안정한 수성 제제를 제공할 필요가 있다.

본원에서 인용된 모든 간행물, 특허 및 특허출원은 각각의 개별 간행물, 특허 및 특허출원이 참고로 포함되는 것으로 구체적 및 개별적으로 표시된 것처럼 동일한 정도로 모든 목적을 위해 전체로서 본원에 참고로 포함된다. 정의된 용어, 용어 사용, 기재된 기법 등을 포함하나 이들로 제한되지 않는, 포함된 문헌 및 유사한 자료 중 하나 이상이 본원과 상이하거나 모순되는 경우, 본원이 우선한다.

조직 인자 경로 억제제(TFPI) 항체(항-TFPI 항체로서도 공지되어 있음)를 포함하는, 연장된 저장 수명을 가진 안정한 수성 약학 제제를 제공한다. 높은 TFPI 항체 농도를 가진 본 발명의 제제는 안정하므로(예를 들어, 낮은 수준의 % HMMS(고분자량 종), % LMMS(저분자량 종), % 단편 및 산화를 가짐), 비경구 투여에 적합한 것으로 입증된다.

조직 인자 경로 억제제(TFPI)에 결합하는 항체(이의 항원 결합 단편을 포함함)에 대한 제제가 본원에 개시되고 예시된다. 당분야에서 숙련된 자는 관용적인 실험만을 이용하여 본원에 기재된 본 발명의 특정 실시양태의 많은 등가물을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 하기 실시양태(E)에 의해 포괄된다.

E1. 조직 인자 경로 억제제(TFPI)에 특이적으로 결합하는 항체 약 15 ㎎/㎖ 내지 약 250 ㎎/㎖, 완충제, 폴리올, 계면활성제 및 킬레이팅제를 포함하는 제제로서, 약 5.0 내지 약 6.0의 pH를 가진 제제.

E2. 약 15 ㎎/㎖ 내지 약 250 ㎎/㎖의, 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인(Kunitz Domain) 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체, 완충제, 폴리올, 계면활성제 및 킬레이팅제를 포함하고 약 5.0 내지 약 6.0의 pH를 가진 제제로서, 상기 에피토프가 서열번호 2의 넘버링에 따라 잔기 Ile105, Arg107 및 Leu131을 포함하는 것인 제제.

E3. E1 및 E2 중 어느 하나에 있어서, 완충제가 아세테이트, 석시네이트, 글루코네이트, 시트레이트, 히스티딘, 아세트산, 포스페이트, 인산, 아스코르베이트, 타르타르산, 말레산, 글리신, 락테이트, 젖산, 아스코르브산, 이미다졸, 비카보네이트 및 탄산, 석신산, 벤조산나트륨, 벤조산, 글루코네이트, 에데테이트, 말레이트, 이미다졸, 트리스, 포스페이트 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 제제.

E4. E3에 있어서, 완충제가 히스티딘인 제제.

E5. E3에 있어서, 완충제가 석시네이트인 제제.

E6. E1 내지 E5 중 어느 하나에 있어서, 완충제의 농도가 약 0.1 mM 내지 약 100 mM인 수성 제제.

E7. E6에 있어서, 완충제의 농도가 약 1 mM 내지 약 40 mM, 또는 약 10 mM 내지 약 40 mM인 제제.

E8. E7에 있어서, 완충제의 농도가 약 10 mM, 약 20 mM 또는 약 40 mM인 제제.

E9. E8에 있어서, 완충제의 농도가 약 20 mM인 제제.

E10. E1 내지 E9 중 어느 하나에 있어서, 폴리올이 만니톨, 트레할로스, 소르비톨, 에리쓰리톨, 이소말트, 락티톨, 말티톨, 자일리톨, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 이노시톨, 프럭토스, 글루코스, 만노스, 수크로스, 소르보스, 자일로스, 락토스, 말토스, 덱스트란, 풀루란, 덱스트린, 사이클로덱스트린, 가용성 전분, 하이드록시에틸 전분, 수용성 글루칸 또는 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 제제.

E11. E10에 있어서, 폴리올이 수크로스 또는 트레할로스인 제제.

E12. E1 내지 E11 중 어느 하나에 있어서, 폴리올의 농도가 약 1 ㎎/㎖ 내지 약 300 ㎎/㎖인 제제.

E13. E12에 있어서, 폴리올의 농도가 약 1 ㎎/㎖ 내지 약 120 ㎎/㎖, 약 50 ㎎/㎖ 내지 약 120 ㎎/㎖, 또는 약 60 ㎎/㎖ 내지 약 110 ㎎/㎖인 제제.

E14. E13에 있어서, 폴리올의 농도가 약 64 ㎎/㎖, 약 85 ㎎/㎖ 또는 약 106 ㎎/㎖인 제제.

E15. E1 내지 E14에 있어서, 폴리올의 농도가 약 85 ㎎/㎖인 제제.

E16. E1 내지 E15 중 어느 하나에 있어서, 계면활성제가 폴리소르베이트, 폴록사머, 트리톤, 나트륨 도데실 설페이트, 나트륨 라우렐 설페이트, 나트륨 옥틸 글리코사이드, 라우릴-설포베타인, 미리스틸-설포베타인, 리놀레일-설포베타인, 스테아릴-설포베타인, 라우릴-사르코신, 미리스틸-사르코신, 리놀레일-사르코신, 스테아릴-사르코신, 리놀레일-베타인, 미리스틸-베타인, 세틸-베타인, 라우로아미도프로필-베타인, 코카미도프로필-베타인, 리놀레아미도프로필-베타인, 미리스타미도프로필-베타인, 팔미도프로필-베타인, 이소스테아라미도프로필-베타인, 미리스타미도프로필-디메틸아민, 팔미도프로필-디메틸아민, 이소스테아라미도프로필-디메틸아민, 나트륨 메틸 코코일-타우레이트, 이나트륨 메틸 올레일-타우레이트, 디히드록시프로필 PEG 5 리놀레암모늄 클로라이드, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 21, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 61, 폴리소르베이트 65, 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 81, 폴리소르베이트 85, PEG3350 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 제제.

E17. E16에 있어서, 계면활성제가 폴리소르베이트 80인 제제.

E18. E1 내지 E17 중 어느 하나에 있어서, 계면활성제의 농도가 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 10 ㎎/㎖, 약 0.05 ㎎/㎖ 내지 약 5 ㎎/㎖, 약 0.1 ㎎/㎖ 내지 약 1 ㎎/㎖, 또는 약 0.1 ㎎/㎖ 내지 약 0.5 ㎎/㎖인 제제.

E19. E18에 있어서, 계면활성제의 농도가 약 0.1 ㎎/㎖, 약 0.2 ㎎/㎖ 또는 약 0.3 ㎎/㎖인 제제.

E20. E19에 있어서, 계면활성제의 농도가 약 0.2 ㎎/㎖인 제제.

E21. E1 내지 E20 중 어느 하나에 있어서, 임의의 계면활성제(예를 들어, 폴리소르베이트 80)를 함유하지 않는 제제.

E22. E1 내지 E21 중 어느 하나에 있어서, 킬레이팅제가 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA), 디에틸렌트리아민 펜타아세트산 5(DTPA), 니트릴로트리아세트산(NTA), N-2-아세트아미도-2-이미노디아세트산(ADA), 비스(아미노에틸)글리콜에테르, N,N,N',N'-테트라아세트산(EGTA), 트랜스-디아미노사이클로헥산 테트라아세트산(DCTA), 글루탐산 및 아스파르트산, N-하이드록시에틸이미노디아세트산(HIMDA), N,N-비스-하이드록시에틸글리신(비신) 및 N-(트리스하이드록시메틸메틸) 10 글리신(트리신), 글리실글리신, 나트륨 데속시콜레이트, 에틸렌디아민, 프로필렌디아민, 디에틸렌트리아민, 트리에틸렌테트라아민(트리엔), 에데트산이나트륨 이수화물(또는 이나트륨 EDTA 이수화물 또는 EDTA 이나트륨 염), 칼슘 EDTA 옥살산, 말레이트, 시트르산, 시트르산 일수화물, 및 시트르산삼나트륨 이수화물, 8-하이드록시퀴놀레이트, 아미노산, 히스티딘, 시스테인, 메티오닌, 펩타이드, 폴리펩타이드 및 단백질, 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 제제.

E23. E22에 있어서, 킬레이팅제가 에데트산이나트륨 이수화물인 제제.

E24. E1 내지 E23 중 어느 하나에 있어서, 킬레이팅제의 농도가 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 50 ㎎/㎖, 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 10 ㎎/㎖, 약 0.01 내지 약 1 ㎎/㎖, 또는 약 0.02 ㎎/㎖ 내지 약 0.08 ㎎/㎖인 제제.

E25. E24에 있어서, 킬레이팅제의 농도가 약 0.038 ㎎/㎖, 약 0.05 ㎎/㎖ 또는 약 0.063 ㎎/㎖인 제제.

E26. E25에 있어서, 킬레이팅제의 농도가 약 0.05 ㎎/㎖인 제제.

E27. E1 내지 E26 중 어느 하나에 있어서, 약 5.0 내지 6.6, 또는 약 5.2 내지 6.4의 pH를 가진 제제.

E28. E27에 있어서, 약 5.2, 5.8 또는 6.4의 pH를 가진 제제.

E29. E27에 있어서, 약 5.5 또는 5.8의 pH를 가진 제제.

E30. E1 내지 E29 중 어느 하나에 있어서, 항체가 TFPI의 쿠니츠 도메인 1(K1)에 결합하지 않는 것인 제제.

E31. E2 내지 E30 중 어느 하나에 있어서, 에피토프가 서열번호 2의 넘버링에 따라 잔기 Cys106, Gly108, Cys130, Leu131 및 Gly132를 추가로 포함하는 것인 제제.

E32. E2 내지 E31 중 어느 하나에 있어서, 에피토프가 서열번호 2의 넘버링에 따라 Asp102, Arg112, Tyr127, Gly129, Met134 및 Glu138을 추가로 포함하는 것인 제제.

E33. E2 내지 E32 중 어느 하나에 있어서, 에피토프가 서열번호 2의 넘버링에 따라 E100, E101, P103, Y109, T111, Y113, F114, N116, Q118, Q121, C122, E123, R124, F125, K126 및 L140을 포함하지 않는 것인 제제.

E34. E2 내지 E32 중 어느 하나에 있어서, 에피토프가 서열번호 2의 넘버링에 따라 D31, D32, P34, C35, K36, E100, E101, P103, Y109, K126 및 G128을 포함하지 않는 것인 제제.

E35. E1 내지 E34 중 어느 하나에 있어서, 항체가

(a) 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 1(CDR-H1);

(b) 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및

(c) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)

을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하는 것인 제제.

E36. E1 내지 E35 중 어느 하나에 있어서, 항체가 서열번호 16, 18 및 20으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는 것인 제제.

E37. E1 내지 E36 중 어느 하나에 있어서, 항체가 서열번호 16, 18 및 20으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는 것인 제제.

E38. E1 내지 E37 중 어느 하나에 있어서, 항체가 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는 것인 제제.

E39. E1 내지 E37 중 어느 하나에 있어서, 항체가 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는 것인 제제.

E40. E1 내지 E37 중 어느 하나에 있어서, 항체가 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는 것인 제제.

E41. E1 내지 E40 중 어느 하나에 있어서, 항체가

(a) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 1(CDR-L1);

(b) 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및

(c) 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)

을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 것인 제제.

E42. E1 내지 E41 중 어느 하나에 있어서, 항체가 서열번호 11과 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 것인 제제.

E43. E1 내지 E42 중 어느 하나에 있어서, 항체가 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 것인 제제.

E44. E1 내지 E43 중 어느 하나에 있어서, 항체가 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 것인 제제.

E45. E1 내지 E43 중 어느 하나에 있어서, 항체가 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 것인 제제.

E46. E1 내지 E43 중 어느 하나에 있어서, 항체가 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 것인 제제.

E47. E1 내지 E46 중 어느 하나에 있어서, 항체가 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 제제.

E48. E1 내지 E47 중 어느 하나에 있어서, 항체가 (i) (a) 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); (b) 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH), 및 (ii) (a) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 것인 제제.

E49. E48에 있어서, 항체가 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 것인 제제.

E50. E1 내지 E49 중 어느 하나에 있어서, 항체가 ATCC 수탁번호 PTA-122329 하에 기탁된 플라스미드에 존재하는 삽입체에 의해 코딩된 VH 서열을 포함하는 것인 제제.

E51. E1 내지 E50 중 어느 하나에 있어서, 항체가 ATCC 수탁번호 PTA-122328 하에 기탁된 플라스미드에 존재하는 삽입체에 의해 코딩된 VL 서열을 포함하는 것인 제제.

E52. E1 내지 E51 중 어느 하나에 있어서, 항체가 ATCC 수탁번호 PTA-122329 하에 기탁된 플라스미드에 존재하는 삽입체에 의해 코딩된 서열 및 ATCC 수탁번호 PTA-122328 하에 기탁된 플라스미드에 존재하는 삽입체에 의해 코딩된 서열을 포함하는 것인 제제.

E53. E1 내지 E52 중 어느 하나에 있어서, 항체가 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 제제.

E54. E48에 있어서, 항체가 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 것인 제제.

E55. E54에 있어서, 항체가 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 제제.

E56. E48에 있어서, 항체가 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 것인 제제.

E57. E56에 있어서, 항체가 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 제제.

E58. E1, 및 E3 내지 E29 중 어느 하나에 있어서, 항체가 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 제제.

E59. E1, 및 E3 내지 E29 중 어느 하나에 있어서, 항체가 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 제제.

E60. E1 내지 E59 중 어느 하나에 있어서, 항체가 적어도 25시간, 적어도 29시간, 적어도 30시간, 적어도 35시간, 적어도 40시간, 적어도 50시간, 적어도 55시간, 적어도 60시간, 적어도 65시간, 적어도 70시간, 적어도 75시간, 적어도 80시간, 적어도 85시간, 적어도 90시간, 적어도 95시간, 적어도 100시간, 적어도 105시간, 적어도 110시간, 적어도 115시간, 적어도 120시간 또는 적어도 125시간의 혈청 반감기를 가진 것인 제제.

E61. E1 내지 E60 중 어느 하나에 있어서, 항체가 약 5x10^-7M 내지 약 5x10^-11 M의 결합 친화성(K_D)을 가진 것인 제제.

E62. E1 내지 E61 중 어느 하나에 있어서, 항체가 정맥내 생체이용률에 비해 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%의 피하(SC) 생체이용률을 가진 것인 제제.

E63. E1 내지 E62 중 어느 하나에 있어서, 항체의 농도가 약 20 ㎎/㎖, 25 ㎎/㎖, 50 ㎎/㎖, 75 ㎎/㎖, 100 ㎎/㎖, 125 ㎎/㎖, 150 ㎎/㎖, 175 ㎎/㎖, 200 ㎎/㎖, 225 ㎎/㎖ 또는 250 ㎎/㎖인 제제.

E64. 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 약 150 ㎎/㎖; 약 20 mM 석시네이트 또는 히스티딘 완충제; 약 85 ㎎/㎖의 수크로스 또는 트레할로스; 약 0.2 ㎎/㎖의 폴리소르베이트 80 또는 폴리소르베이트 20; 및 약 0.05 ㎎/㎖의 에데트산이나트륨 이수화물 또는 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)을 포함하고 약 5.5 또는 5.8의 pH를 가진 수성 제제로서, 상기 항체가 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 수성 제제.

E65. 150 ㎎/㎖의, 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체, 20 mM의 히스티딘 완충제, 85 ㎎/㎖의 수크로스, 0.2 ㎎/㎖의 폴리소르베이트 80 및 0.05 ㎎/㎖의 에데트산이나트륨 이수화물을 포함하고 5.8의 pH를 가진 약학 제제로서, 상기 항체가 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 약학 제제.

E66. 150 ㎎/㎖의, 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체, 20 mM의 히스티딘 완충제, 85 ㎎/㎖의 수크로스, 0.2 ㎎/㎖의 폴리소르베이트 80, 0.05 ㎎/㎖의 에데트산이나트륨 이수화물을 포함하고 5.8의 pH를 가진 약학 제제로서, 상기 항체가 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 약학 제제.

E67. 약 50 ㎎/㎖ 내지 약 250 ㎎/㎖의, 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체, 20 mM의 히스티딘 완충제, 85 ㎎/㎖의 수크로스, 0.2 ㎎/㎖의 폴리소르베이트 80, 0.05 ㎎/㎖의 에데트산이나트륨 이수화물을 포함하고 5.8의 pH를 가진 약학 제제로서, 상기 항체가 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 약학 제제.

E68. 약 50 ㎎/㎖ 내지 약 250 ㎎/㎖의, 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체, 20 mM의 히스티딘 완충제, 85 ㎎/㎖의 수크로스, 0.2 ㎎/㎖의 폴리소르베이트 80, 0.05 ㎎/㎖의 에데트산이나트륨 이수화물을 포함하고 5.8의 pH를 가진 약학 제제로서, 상기 항체가 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 약학 제제.

E69. 150 ㎎/㎖의, 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체, 10 mM 히스티딘 완충제, 64 ㎎/㎖ 수크로스, 0.1 ㎎/㎖ 폴리소르베이트 80, 0.038 ㎎/㎖ 에데트산이나트륨 이수화물을 포함하고 6.4의 pH를 가진 약학 제제로서, 상기 항체가 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 약학 제제.

E70. 150 ㎎/㎖의, 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체, 40 mM 히스티딘 완충제, 106 ㎎/㎖ 수크로스, 0.3 ㎎/㎖ 폴리소르베이트 80, 0.063 ㎎/㎖ 에데트산이나트륨 이수화물을 포함하고 5.2의 pH를 가진 약학 제제로서, 상기 항체가 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 약학 제제.

E71. 150 ㎎/㎖의, 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체, 10 mM 히스티딘 완충제, 64 ㎎/㎖ 수크로스, 0.1 ㎎/㎖ 폴리소르베이트 80, 0.038 ㎎/㎖ 에데트산이나트륨 이수화물을 포함하고 5.2의 pH를 가진 약학 제제로서, 상기 항체가 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 약학 제제.

E72. 150 ㎎/㎖의, 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체, 20 mM의 히스티딘 완충제, 85 ㎎/㎖의 수크로스, 0.05 ㎎/㎖의 에데트산이나트륨 이수화물을 포함하고 5.8의 pH를 가진 약학 제제로서, 상기 항체가 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 약학 제제.

E73. E72에 있어서, 계면활성제(예를 들어, 폴리소르베이트 80)를 포함하지 않는 약학 제제.

E74. E1 내지 E73 중 어느 하나에 있어서, (예를 들어, 약 -20℃, 약 5℃, 약 25℃, 또는 약 40℃에서) 적어도 약 1개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 6개월, 약 12개월, 약 24개월, 약 36개월, 약 48개월 또는 약 60개월의 저장 수명을 가진 제제.

E75. E1 내지 E74 중 어느 하나에 있어서, 수성 제제인 제제.

E76. E1 내지 E75 중 어느 하나에 있어서, 약학 제제인 제제.

E77. 출혈 시간을 단축시키는 방법으로서, E1 내지 E76 중 어느 하나에 기재된 제제를, 이러한 단축을 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는 방법.

E78. 혈액 응고의 결핍 또는 출혈 장애를 치료하거나 예방하는 방법으로서, E1 내지 E76 중 어느 하나에 기재된 제제를, 이러한 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는 방법.

E79. 혈우병 A, B 또는 C를 치료하거나 예방하는 방법으로서, E1 내지 E76 중 어느 하나에 기재된 제제를, 이러한 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는 방법.

E80. 폰 빌레브란트병(vWD)을 치료하거나 예방하는 방법으로서, E1 내지 E76 중 어느 하나에 기재된 제제를, 이러한 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는 방법.

E81. TFPI의 활성을 감소시키는 방법으로서, E1 내지 E76 중 어느 하나에 기재된 제제를, 이러한 감소를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는 방법.

E82. E77 내지 E81 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 혈액 응고의 결핍 또는 출혈 장애를 앓고 있거나 이러한 결핍 또는 장애에 취약한 것인 방법.

E83. E77 내지 E82 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 혈우병 A, B 또는 C를 앓고 있거나 이러한 혈우병에 취약한 것인 방법.

E84. E77 내지 E83 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 혈우병 A 또는 B를 앓고 있거나 이러한 혈우병에 취약한 것인 방법.

E85. E77 내지 E82 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 폰 빌레브란트병(vWD)을 앓고 있거나 이러한 병에 취약한 것인 방법.

E86. E77 내지 E82 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 혈소판 장애를 앓고 있거나 이러한 장애에 취약한 것인 방법.

E87. E77 내지 E82 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 인자 VII 결핍을 앓고 있거나 이러한 결핍에 취약한 것인 방법.

E88. E77 내지 E82 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 인자 XI 결핍을 앓고 있거나 이러한 결핍에 취약한 것인 방법.

E89. E77 내지 E88 중 어느 하나에 있어서, 응고제를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.

E90. E89에 있어서, 응고제가 인자 VIIa, 인자 VIII, 인자 IX, 트라넥삼산 및 우회제(예를 들어, FEIBA)로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 방법.

E91. E77 내지 E90 중 어느 하나에 기재된 방법에 있어서 E1 내지 E76 중 어느 하나의 제제의 용도.

E92. E77 내지 E90 중 어느 하나에 기재된 방법에 사용하기 위한, E1 내지 E76 중 어느 하나에 기재된 제제.

E93. E77 내지 E90 중 어느 하나에 기재된 방법에 사용하기 위한, 150 ㎎/㎖의, 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체, 20 mM의 히스티딘 완충제, 85 ㎎/㎖의 수크로스, 0.2 ㎎/㎖의 폴리소르베이트 80, 0.05 ㎎/㎖의 에데트산이나트륨 이수화물을 포함하고 5.8의 pH를 가진 제제로서, 상기 항체가 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 제제.

E94. 150 ㎎/㎖의, 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체, 20 mM의 히스티딘 완충제, 85 ㎎/㎖의 수크로스, 0.2 ㎎/㎖의 폴리소르베이트 80, 0.05 ㎎/㎖의 에데트산이나트륨 이수화물로 구성되고 5.8의 pH를 가진 약학 제제로서, 상기 항체가 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 약학 제제.

본원은 조직 인자 경로 억제제(TFPI) 항체를 포함하는, 연장된 저장 수명을 가진 안정한 수성 약학 제제를 개시한다. 본원은 히스티딘 완충제를 포함하고 pH 5.8을 가진 제제가 고농도의 TFPI 항체를 안정적으로 지지한다는 발견에 기반한다.

구체적으로, pH 5.8을 가진 히스티딘 완충된 수성 제제에 저장된 항-TFPI 항체는 크기 배제-고성능 액체 크로마토그래피(SE-HPLC)를 이용하여 % 고분자량 종(% HMMS)으로 측정하였을 때 낮은 수준의 분해를 가졌음을 입증하였다(표 1 참조). 예를 들어, 항-TFPI 항체는 의도한 저장 조건인 5±3℃에서 분해가 거의 또는 전혀 관찰되지 않으면서 최대 24개월 동안 안정하였다(% HMMS 범위는 0.5 내지 0.9이었음). 열 응력 저장 조건인 40℃/75% RH에서 일부 분해가 관찰되었지만(% HMMS는 1개월(즉, 4주)에서 0.9 내지 1.2이었고 3개월(즉, 12주)에서 1.5 내지 2.4이었음), 이 분해는 항-VEGF 항체와 같은 다른 IgG1 항체의 경우 관찰된 분해보다 더 적었다(표 9 참조; 미국 특허출원 공개 제2018/0000933호의 표 11로부터 수득된 항-VEGF 항체에 대한 데이터). 특히, 40℃에서 1개월(즉, 4주) 동안 pH 5.8을 가진 히스티딘 완충된 제제에 저장된 항-VEGF 항체에 대한 고분자량 종의 양(% HMMS)은 (항-TFPI 항체의 경우 0.9 내지 1.2에 비해) 3.1이었고, 3개월(즉, 12주) 동안 저장된 경우에는 (항-TFPI 항체의 경우 1.5 내지 2.4에 비해) 5.6이었다. 따라서, pH 5.8에서 히스티딘 완충된 제제는 항-VEGF 항체에 비해 항-TFPI 항체의 분해를 지연시키고 응집체 형성을 감소시키고 안정성을 개선한다. 이 결과는 놀랍고 예상치 못한 것이었다.

따라서, 한 측면에서, 약 15 ㎎/㎖ 내지 약 250 ㎎/㎖의 조직 인자 경로 억제제(TFPI) 항체, 완충제, 폴리올, 계면활성제, 킬레이팅제를 포함하고 약 5.0 내지 약 6.0의 pH를 가진 제제를 제공한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 약 15 ㎎/㎖ 내지 약 250 ㎎/㎖의 TFPI 항체(예를 들어, 항-TFPI 항체), 약 1 mM 내지 약 40 mM의 완충제(예를 들어, 히스티딘 완충제), 약 1 ㎎/㎖ 내지 약 300 ㎎/㎖의 폴리올(예를 들어, 수크로스), 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 10 ㎎/㎖의 계면활성제(예를 들어, 폴리소르베이트 80), 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 50.0 ㎎/㎖의 킬레이팅제(예를 들어, 에데트산이나트륨 이수화물)을 포함하고 약 5.0 내지 약 6.0의 pH를 가진 제제를 제공한다. 일부 실시양태에서, 항체 농도는 약 15 ㎎/㎖ 내지 약 250 ㎎/㎖이다. 다른 실시양태에서, 항체 농도는 약 100 ㎎/㎖, 약 115 ㎎/㎖, 약 150 ㎎/㎖ 또는 158 ㎎/㎖이다.

일반적인 기법

달리 표시되어 있지 않은 한, 본 발명의 실시는 당분야의 기술 내에 있는, 분자생물학(재조합 기법을 포함함), 미생물학, 세포생물학, 생화학 및 면역학의 통상적인 기법들을 이용할 것이다. 이러한 기법들은 문헌, 예컨대, 문헌[Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook et al., 1989) Cold Spring Harbor Press]; 문헌[Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984)]; 문헌[Methods in Molecular Biology, Humana Press]; 문헌[Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press]; 문헌[Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed., 1987)]; 문헌[Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press]; 문헌[Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-1998) J. Wiley and Sons]; 문헌[Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.)]; 문헌[Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.)]; 문헌[Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987)]; 문헌[Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel et al., eds., 1987)]; 문헌[PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994)]; 문헌[Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991)]; 문헌[Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999)]; 문헌[Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997)]; 문헌[Antibodies (P. Finch, 1997)]; 문헌[Antibodies: a practical approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989)]; 문헌[Monoclonal antibodies: a practical approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000)]; 문헌[Using antibodies: a laboratory manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999)]; 문헌[The Antibodies (M. Zanetti and J.D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995)]에 전체적으로 설명되어 있다.

정의

달리 표시되어 있지 않은 한, 하기 용어는 하기 의미를 가진 것으로 이해될 것이다: 용어 "단리된 분자" 또는 "정제된 분자"(이때, 분자는 예를 들어, 폴리펩타이드, 폴리뉴클레오타이드 또는 항체임)는 그의 기원 또는 유래의 근원으로 인해: (1) 그의 천연 상태에서 그를 수반하는 천연적으로 회합된 성분과 회합되어 있지 않거나, (2) 동일한 종의 다른 분자를 실질적으로 갖지 않거나, (3) 상이한 종의 세포에 의해 발현되거나, (4) 자연에서 발생하지 않는 분자이다. 따라서, 화학적으로 합성되거나 천연 기원인 세포와 상이한 세포 시스템에서 발현되는 분자는 그의 천연적으로 회합된 성분으로부터 "단리"될 것이다. 분자는 또한 당분야에서 잘 공지되어 있는 정제 기법을 이용하는 단리에 의해 천연적으로 회합된 성분을 실질적으로 갖게 되지 않을 수도 있다. 분자 순도 또는 균질도는 당분야에서 잘 공지되어 있는 다수의 수단에 의해 어세이될 수 있다. 예를 들어, 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 및 겔 염색을 이용하여 폴리펩티드 샘플의 순도를 어세이함으로써, 당분야에서 잘 공지되어 있는 기법을 이용하여 폴리펩타이드를 시각화할 수 있다. 특정 목적을 위해, HPLC 또는 당분야에서 잘 공지되어 있는 다른 정제 수단을 이용함으로써 더 높은 해상도를 제공할 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 항체와 관련된 용어 "제제"는 항체의 생물학적 활성이 효과적일 수 있게 하는 형태의 항체 제제를 기술하기 위한 것이다.

용어 "약학 조성물" 또는 "약학 제제"는 약학적으로 허용되는 담체/부형제와 조합된 항체의 제제를 지칭한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "수성 제제"는 성분으로서 물을 함유하는 제제를 지칭한다.

"약학적으로 허용되는 담체/부형제"(비히클, 첨가제)는 사용된 활성 성분의 유효량을 제공하기 위해 대상체에게 안전하게 투여될 수 있는 담체/부형제이다. 본원에서 사용된 용어 "부형제" 또는 "담체"는 약물을 위한 희석제, 비히클, 보존제, 결합제 또는 안정화제로서 통상적으로 사용되는 불활성 물질을 지칭한다. 이러한 담체를 포함하는 조성물은 잘 공지되어 있는 통상적인 방법에 의해 제제화된다(예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A. Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990]; 및 문헌[Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing, 2000)] 참조). 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "희석제"는 약학적으로 허용되는(인간에게 투여하기에 안전하고 무독성인) 용매를 지칭하고, 본원에 기재된 제제의 제조에 유용하다. 예시적인 희석제는 멸균수 및 주사용 정균수(BWFI)를 포함하나, 이들로 제한되지 않는다.

"항체"는 면역글로불린 분자의 가변 영역에 위치된 적어도 하나의 항원 인식 부위를 통해 표적, 예컨대, 탄수화물, 폴리뉴클레오타이드, 지질, 폴리펩타이드 등에 특이적으로 결합할 수 있는 면역글로불린 분자이다. 본원에서 사용된 바와 같이, 상기 용어는 온전한 다중클론 또는 단일클론 항체뿐만 아니라, 달리 특정되어 있지 않은 한, 특이적 결합에 대해 온전한 항체와 경쟁하는 이의 임의의 항원 결합 단편/부분, 항원 결합 부분을 포함하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위를 포함하는 면역글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 입체구조도 포괄한다. 항원 결합 부분은 예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, 도메인 항체(dAb, 예를 들어, 상어 및 낙타과 항체), 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 단편, 단일 쇄 가변 단편 항체(scFv), 맥시바디, 미니바디, 인트라바디, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, v-NAR 및 비스-scFv, 및 폴리펩타이드에 특이적 항원 결합을 부여하기에 충분한 면역글로불린의 적어도 일부를 함유하는 폴리펩타이드를 포함한다. 항체는 IgG, IgA, 또는 IgM(또는 이들의 하위부류)과 같은 임의의 부류의 항체를 포함하고, 항체는 임의의 특정 부류일 필요는 없다. 면역글로불린은 그의 중쇄의 불변 영역의 항체 아미노산 서열에 따라 상이한 부류로 배정될 수 있다. 면역글로불린의 주요 5개 부류, 즉 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 있고, 이들 중 몇몇은 하위부류(이소타입), 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 더 나뉠 수 있다. 면역글로불린의 상이한 부류에 상응하는 중쇄 불변 영역은 각각 알파, 델타, 엡실론, 감마 및 뮤로서 지칭된다. 상이한 부류의 면역글로불린의 서브유닛 구조 및 3차원 입체구조는 잘 공지되어 있다.

항체의 "가변 영역"은 단독으로 또는 조합으로 항체 경쇄의 가변 영역 또는 항체 중쇄의 가변 영역을 지칭한다. 당분야에서 공지되어 있는 바와 같이, 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 각각 초가변 영역으로서도 공지되어 있는 3개의 상보성 결정 영역(CDR)에 의해 연결된 4개의 프레임워크 영역(FR)으로 구성되고, 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여한다. 특히 CDR 외부(즉, 프레임워크 영역 내부)에 아미노산 잔기의 치환을 가진 대상체 가변 영역의 변이체가 요구되는 경우, 적절한 아미노산 치환, 바람직하게는 보존적 아미노산 치환은 대상체 가변 영역을, 대상체 가변 영역과 동일한 표준 부류의 CDR1 및 CDR2 서열을 함유하는 다른 항체의 가변 영역과 비교함으로써 확인될 수 있다(Chothia and Lesk, J Mol Biol 196(4): 901-917, 1987).

특정 실시양태에서, CDR의 명확한 묘사 및 항체의 결합 부위를 포함하는 잔기의 확인은 항체의 구조를 알아내고/내거나 항체-리간드 복합체의 구조를 알아냄으로써 달성된다. 특정 실시양태에서, 이것은 당분야에서 숙련된 자에게 공지되어 있는 다양한 기법들 중 임의의 기법, 예컨대, X-선 결정학에 의해 달성될 수 있다. 특정 실시양태에서, 다양한 분석 방법을 이용하여 CDR 영역을 확인할 수 있거나 대략적으로 파악할 수 있다. 특정 실시양태에서, 다양한 분석 방법을 이용하여 CDR 영역을 확인할 수 있거나 대략적으로 파악할 수 있다. 이러한 방법의 예는 카바트(Kabat) 정의, 초티아(Chothia) 정의, AbM 정의, 접촉 정의 및 입체구조 정의를 포함하나, 이들로 제한되지 않는다.

카바트 정의는 항체에서 잔기를 넘버링하는 표준이고 전형적으로 CDR 영역을 확인하는 데 사용된다. 예를 들어, 문헌[Johnson & Wu, 2000, Nucleic Acids Res., 28: 214-8]을 참조한다. 초티아 정의는 카바트 정의와 유사하나, 초티아 정의는 특정 구조적 루프 영역의 위치를 고려한다. 예를 들어, 문헌[Chothia et al., 1986, J. Mol. Biol., 196: 901-17]; 및 문헌[Chothia et al., 1989, Nature, 342: 877-83]을 참조한다. AbM 정의는 항체 구조를 모델링하는 옥스퍼드 몰레큘라 그룹(Oxford Molecular Group)에 의해 생산된 통합된 묶음의 컴퓨터 프로그램을 사용한다. 예를 들어, 문헌[Martin et al., 1989, Proc Natl Acad Sci (USA), 86:9268-9272; "AbM™, A Computer Program for Modeling Variable Regions of Antibodies," Oxford, UK; Oxford Molecular, Ltd]을 참조한다. AbM 정의는 지식 데이터베이스와 초기 방법, 예컨대, 문헌[Samudrala et al., 1999, "Ab Initio Protein Structure Prediction Using a Combined Hierarchical Approach," in PROTEINS, Structure, Function and Genetics Suppl., 3:194-198]에 기재된 방법의 조합을 이용하여 1차 서열로부터 항체의 3차 구조를 모델링한다. 접촉 정의는 사용 가능한 복잡한 결정 구조의 분석에 기반한다. 예를 들어, 문헌[MacCallum et al., 1996, J. Mol. Biol., 5:732-45]을 참조한다. 본원에서 CDR의 "입체구조 정의"로서도 지칭되는 또 다른 접근법에서, CDR의 위치는 항원 결합에 대한 엔탈피 기여를 만드는 잔기로서 확인될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Makabe et al., 2008, Journal of Biological Chemistry, 283:1156-1166]을 참조한다. 다른 CDR 경계 정의는 상기 접근법들 중 하나를 엄격하게 따르지 않을 수 있으나, 그럼에도 불구하고 카바트 CDR의 적어도 일부와 중첩될 것이지만, 특정 잔기 또는 잔기 군이 항원 결합에 유의미하게 영향을 미치지 않는다는 예측 또는 실험적 발견에 비추어 볼 때 단축될 수 있거나 연장될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, CDR은 접근법의 조합을 포함하는, 당분야에서 공지되어 있는 임의의 접근법에 의해 정의된 CDR을 지칭할 수 있다. 본원에서 이용된 방법은 이 접근법들 중 임의의 접근법에 따라 정의된 CDR을 사용할 수 있다. 하나 초과의 CDR을 함유하는 임의의 주어진 실시양태에 대해, CDR은 카바트, 초티아, 연장, AbM, 접촉 및/또는 입체구조 정의 중 임의의 정의에 따라 정의될 수 있다.

당분야에서 공지되어 있는 바와 같이, 항체의 "불변 영역"은 단독으로 또는 조합으로 항체 경쇄의 불변 영역 또는 항체 중쇄의 불변 영역을 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "단일클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체의 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하고, 즉 상기 집단을 구성하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연 생성 돌연변이를 제외하고 동일하다. 단일클론 항체는 단일 항원성 부위에 대해 유도되는 매우 특이적인 항체이다. 나아가, 전형적으로 상이한 결정인자(에피토프)에 대해 유도된 상이한 항체를 포함하는 다중클론 항체 제제와 대조적으로, 각각의 단일클론 항체는 항원 상의 단일 결정인자에 대해 유도된다. 수식어 "단일클론"은 항체의 실질적으로 균질한 집단으로부터 수득되는 항체의 특성을 표시하고 임의의 특정 방법에 의한 항체의 제조를 요구하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 단일클론 항체는 문헌[Kohler and Milstein, 1975, Nature 256:495]에 처음 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 미국 특허 제4,816,567호에 기재된 방법과 같은 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다. 단일클론 항체는 예를 들어, 문헌[McCafferty et al., 1990, Nature 348:552-554]에 기재된 기법을 이용함으로써 생성된 파지 라이브러리로부터 단리될 수도 있다.

"인간 항체"는 인간에 의해 생성되고/되거나 본원에 개시된 인간 항체 제조 기법들 중 임의의 기법을 이용함으로써 제조된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 가진 항체이다. 인간 항체의 이 정의는 비인간 항원 결합 잔기를 포함하는 인간화된 항체를 구체적으로 배제한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "인간 항체"는 인간 생식세포주 면역글로불린 서열로부터 유래한 가변 및 불변 영역을 가진 항체를 포함하기 위한 것이다. 인간 항체의 이 정의는 적어도 하나의 인간 중쇄 폴리펩타이드 또는 적어도 하나의 인간 경쇄 폴리펩타이드를 포함하는 항체를 포함한다. 본 발명의 인간 항체는 예를 들어, CDR, 특히 CDR3 내에 인간 생식세포주 면역글로불린 서열에 의해 코딩되지 않은 아미노산 잔기(예를 들어, 시험관내에서 무작위 또는 부위 특이적 돌연변이유발에 의해, 또는 생체내에서 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "인간 항체"는 마우스와 같은 또 다른 포유동물 종의 생식세포주로부터 유래한 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열 상에 이식되어 있는 항체를 포함하기 위한 것이 아니다.

용어 "키메라 항체"는 가변 영역 서열이 한 종으로부터 유래하고 불변 영역 서열이 또 다른 종으로부터 유래한 항체, 예컨대, 가변 영역 서열이 마우스 항체로부터 유래하고 불변 영역 서열이 인간 항체로부터 유래한 항체를 지칭하기 위한 것이다.

본원에서 사용된 바와 같이, "인간화된" 항체는 비인간 면역글로불린으로부터 유래한 최소 서열을 함유하는 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 쇄 또는 이들의 단편(예컨대, Fv, Fab, Fab', F(ab')2 또는 항체의 다른 항원 결합 하위서열)인 비인간(예를 들어, 뮤린) 항체의 형태를 지칭한다. 바람직하게는, 인간화된 항체는 수용자의 상보성 결정 영역(CDR)의 잔기가 원하는 특이성, 친화성 및 능력을 가진 비인간 종, 예컨대, 마우스, 래트 또는 토끼(공여자 항체)의 CDR의 잔기로 대체되어 있는 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다. 일부 경우, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 영역(FR) 잔기는 상응하는 비인간 잔기로 대체된다. 더욱이, 인간화된 항체는 수용자 항체에서 발견되지 않고 이입된 CDR 또는 프레임워크 서열에서도 발견되지 않으나 항체 성능을 더 개량하고 최적화하기 위해 포함된 잔기를 포함할 수 있다. 일반적으로, 인간화된 항체는 실질적으로 모든 적어도 1개, 전형적으로 2개의 가변 도메인을 포함할 것이고, 이때 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역은 비인간 면역글로불린의 CDR 영역에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 면역글로불린 컨센서스 서열의 FR 영역이다. 인간화된 항체는 최적으로 면역글로불린, 전형적으로 인간 면역글로불린 불변 영역 또는 도메인(Fc)의 적어도 일부도 포함할 것이다. 국제 특허출원 공개 제WO 99/58572호에 기재된 바와 같이 변형된 Fc 영역을 가진 항체가 바람직하다. 인간화된 항체의 다른 형태는 원래 항체의 하나 이상의 CDR"로부터 유래한" 하나 이상의 CDR로서도 지칭되는, 원래 항체에 비해 변경된 하나 이상의 CDR(CDR L1, CDR L2, CDR L3, CDR H1, CDR H2, 또는 CDR H3)을 가진다.

단일클론 항체를 인간화하는 4가지 일반적인 단계가 있다. 이들은 (1) 시작 항체 경쇄 및 중쇄 가변 도메인의 뉴클레오타이드 및 예측된 아미노산 서열의 확인; (2) 인간화된 항체의 디자인, 즉 인간화 과정 동안 사용할 항체 프레임워크 영역의 결정; (3) 실제 인간화 방법론/기법 및 (4) 인간화된 항체의 형질감염 및 발현이다. 예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호; 제5,807,715호; 제5,866,692호; 제6,331,415호; 제5,530,101호; 제5,693,761호; 제5,693,762호; 제5,585,089호; 및 제6,180,370호를 참조한다.

인간 불변 도메인에 융합된 설치류 또는 변형된 설치류 V 영역 및 이의 관련 상보성 결정 영역(CDR)을 가진 키메라 항체를 비롯한, 비인간 면역글로불린으로부터 유래한 항원 결합 부위를 포함하는 다수의 "인간화된" 항체 분자들이 기재되어 있다. 예를 들어, 문헌[Winter et al. Nature 349: 293-299 (1991)], 문헌[Lobuglio et al. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 86: 4220-4224 (1989)], 문헌[Shaw et al. J Immunol. 138: 4534-4538 (1987)] 및 문헌[Brown et al. Cancer Res. 47: 3577-3583 (1987)]을 참조한다. 다른 참고문헌은 적절한 인간 항체 불변 도메인과 융합되기 전에 인간 지지 프레임워크 영역(FR)에 이식된 설치류 CDR을 기술한다. 예를 들어, 문헌[Riechmann et al. Nature 332: 323-327 (1988)], 문헌[Verhoeyen et al. Science 239: 1534-1536 (1988)] 및 문헌[Jones et al. Nature 321: 522-525 (1986)]을 참조한다. 또 다른 참고자료는 재조합적으로 조작된 설치류 프레임워크 영역에 의해 지지된 설치류 CDR을 기술한다. 예를 들어, 유럽 특허 공개 제0519596호를 참조한다. 이 "인간화된" 분자는 인간 수용자에서 이 모이어티의 치료적 적용의 지속기간 및 효과를 제한하는, 설치류 항-인간 항체 분자에 대한 원치 않는 면역학적 반응을 최소화하도록 디자인된다. 예를 들어, 항체 불변 영역은 면역학적으로 불활성이도록 조작될 수 있다(예를 들어, 보체 용해를 유발하지 않는다). 예를 들어, PCT 공개 제WO99/58572호; 영국 특허출원 제9809951.8.호를 참조한다. 또한 이용될 수 있는 다른 항체 인간화 방법은 문헌[Daugherty et al., Nucl. Acids Res. 19: 2471-2476 (1991)]; 미국 특허 제6,180,377호, 제6,054,297호, 제5,997,867호, 제5,866,692호, 제6,210,671호 및 제6,350,861호; 및 PCT 공개 제WO 01/27160호에 개시되어 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "재조합 항체"는 재조합 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나 단리된 모든 항체들, 예를 들어, 숙주 세포 내로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용함으로써 발현된 항체, 재조합 조합적 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 인간 면역글로불린 유전자에 대해 형질전환된 동물(예를 들어, 마우스)로부터 단리된 항체 또는 제조된 항체를 포함하기 위한 것이고, 이러한 재조합 인간 항체에 대해 시험관내 돌연변이유발을 수행할 수 있다.

용어 "에피토프"는 항체의 항원 결합 영역 중 하나 이상의 항원 결합 영역에서 항체에 의해 인식되고 결합될 수 있는 분자의 부분을 지칭한다. 에피토프는 종종 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자의 표면 기로 구성되고 특정 3차원 구조적 특성뿐만 아니라 특정 전하 특성도 가진다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 단백질 에피토프일 수 있다. 단백질 에피토프는 선형 또는 입체구조적 에피토프일 수 있다. 선형 에피토프에서, 단백질과 상호작용하는 분자(예컨대, 항체) 사이의 모든 상호작용 점은 단백질의 1차 아미노산 서열을 따라 선형으로 발생한다. "비선형 에피토프" 또는 "입체구조적 에피토프"는 에피토프에 특이적인 항체가 결합하는 항원성 단백질 내의 비인접 폴리펩타이드(또는 아미노산)를 포함한다. 본원에서 사용된 용어 "항원성 에피토프"는 당분야에서 잘 공지되어 있는 임의의 방법, 예를 들어, 통상적인 면역어세이에 의해 확인될 때 항체가 특이적으로 결합할 수 있는 항원의 부분으로서 정의된다. 항원에서 원하는 에피토프가 확인되면, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 기법을 이용하여 그 에피토프에 대한 항체를 생성할 수 있다. 대안적으로, 발견 과정 동안 항체의 생성 및 특징규명은 바람직한 에피토프에 대한 정보를 설명할 수 있다. 그 후, 이 정보로부터, 동일한 에피토프에의 결합에 대해 항체를 경쟁적으로 스크리닝할 수 있다. 이를 달성하기 위한 접근법은 TFPI에의 결합에 대해 서로 경쟁하거나 교차경쟁하는 항체, 예를 들어, 항원에의 결합에 대해 경쟁하는 항체를 찾기 위해 경쟁 및 교차경쟁 연구를 수행하는 것이다.

용어 "길항제 항체"는 표적에 결합하고 그 표적의 생물학적 효과를 방해하거나 감소시키는 항체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 상기 용어는 항체에 결합되는 표적, 예를 들어, TFPI가 생물학적 기능을 수행하는 것을 감소시키는 항체를 의미할 수 있다.

에피토프에 "우선적으로 결합하는" 또는 "특이적으로 결합하는"(본원에서 교환 가능하게 사용됨) 항체는 당분야에서 잘 이해되는 용어이고, 이러한 특이적 또는 우선적 결합을 측정하는 방법도 당분야에서 잘 공지되어 있다. 분자가 대체 세포 또는 물질보다 특정 세포 또는 물질과 더 자주, 더 빠르게, 더 긴 지속시간 및/또는 더 큰 친화성으로 반응하거나 회합하는 경우, 이 분자는 "특이적 결합" 또는 "우선적 결합"을 나타낸다고 언급된다. 항체가 다른 물질에 결합하는 것보다 더 큰 친화성, 결합력, 더 쉽게 및/또는 더 긴 지속시간으로 결합하는 경우, 이 항체는 표적에 "특이적으로 결합"하거나 "우선적으로 결합"한다. 예를 들어, TFPI 에피토프에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 항체는 다른 서열에 결합하는 것보다 더 큰 친화성, 결합력, 더 용이하게 및/또는 더 긴 지속기간으로 이 에피토프 서열에 결합하는 항체이다. 예를 들어, 제1 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 항체(또는 모이어티 또는 에피토프)는 제2 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합할 수거나 결합하지 않을 수 있다는 것도 이 정의를 읽음으로써 이해된다. 따라서, "특이적 결합" 또는 "우선적 결합"은 반드시 배타적 결합을 (포함할 수는 있지만) 요구하지는 않는다. 일반적으로, 결합의 언급은 우선적 결합을 의미하나, 반드시 그러한 것은 아니다.

다양한 어세이 형식을 이용하여 관심 있는 분자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 펩타이드를 선택할 수 있다. 예를 들어, 고체상 ELISA 면역어세이, 면역침전, Biacore™(GE Healthcare, 뉴저지주 피스카타웨이 소재), KinExA, 형광 활성화 세포 분류(FACS), Octet™(ForteBio, Inc., 캘리포니아주 멘로 파크 소재) 및 웨스턴 블롯 분석은 동족 리간드 또는 결합 파트너에 특이적으로 결합하는 항원 또는 수용체, 또는 이의 리간드 결합 부분과 특이적으로 반응하는 항체를 확인하는 데 이용될 수 있는 많은 어세이들 중 하나이다. 전형적으로, 특이적 또는 선택적 반응은 배경 신호 또는 노이즈의 적어도 2배, 더 전형적으로 배경의 10배 이상, 훨씬 더 전형적으로 배경의 50배 이상, 더 전형적으로 배경의 100배 이상, 더 전형적으로 배경의 500배 이상, 훨씬 더 전형적으로 배경의 1000배 이상, 훨씬 더 전형적으로 배경의 10,000배 이상일 것이다. 또한, 평형 해리 상수(K_D)가 ≤ 7 nM일 때 항체는 항원에 "특이적으로 결합"한다고 언급된다.

용어 "결합 친화성"은 2개의 분자, 예를 들어, 항체 또는 이의 단편과 항원 사이의 비공유 상호작용의 강도의 척도로서 본원에서 사용된다. 용어 "결합 친화성"은 1가 상호작용(고유 활성)을 기술하는 데 사용된다.

1가 상호작용을 통한 2개의 분자, 예를 들어, 항체 또는 이의 단편과 항원 사이의 결합 친화성은 해리 상수(K_D)의 측정에 의해 정량될 수 있다. 이어서, K_D는 예를 들어, 표면 플라즈몬 공명(SPR) 방법(Biacore)을 이용하여 복합체 형성 및 해리의 동역학을 측정함으로써 확인될 수 있다. 1가 복합체의 결합 및 해리에 상응하는 속도 상수는 각각 결합 속도 상수 k_a(또는 k_on) 및 해리 속도 상수 k_d(또는 k_off)로서 지칭된다. K_D는 방정식 K_D = k_d/k_a를 통해 k_a 및 k_d와 관련된다. 해리 상수의 값은 잘 공지되어 있는 방법에 의해 직접 측정될 수 있고, 심지어 복잡한 혼합물에 대해서도, 예를 들어, 문헌[Caceci et al. (1984, Byte 9: 340-362)]에 기재된 방법과 같은 방법에 의해 계산될 수 있다. 예를 들어, K_D는 문헌[Wong & Lohman (1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5428-5432)]에 의해 개시된 어세이와 같은 이중 필터 니트로셀룰로스 필터 결합 어세이를 이용함으로써 확립될 수 있다. 예를 들어, ELISA, 웨스턴 블롯, RIA 및 유세포 분석, 및 본원의 다른 곳에 예시된 다른 어세이를 포함하는, 표적 항원에 대한 리간드, 예컨대, 항체의 결합 능력을 평가하는 다른 표준 어세이는 당분야에서 공지되어 있다. 당분야에서 공지되어 있는 표준 어세이, 예컨대, 표면 플라스몬 공명(SPR)으로, 예를 들어, Biacore™ 시스템 또는 KinExA를 이용함으로써 항체의 결합 동역학 및 결합 친화성을 평가할 수도 있다.

그의 표적에 특이적으로 결합하는 항체는 높은 친화성으로 그의 표적에 결합할 수 있고, 즉 앞서 논의된 바와 같이 낮은 K_D를 나타낼 수 있고, 더 낮은 친화성으로 다른 비표적 분자에 결합할 수 있다. 예를 들어, 항체는 1 x 10^-6 M 이상, 보다 바람직하게는 1 x 10^-5 M 이상, 보다 바람직하게는 1 x 10^-4 M 이상, 보다 바람직하게는 1 x 10^-3 M 이상, 훨씬 더 바람직하게는 1 x 10^-2 M 이상의 K_D로 비표적 분자에 결합할 수 있다. 본 발명의 항체는 바람직하게는 또 다른 비-TFPI 분자에의 결합에 대한 그의 친화성보다 적어도 2배, 10배, 50배, 100배, 200배, 500배, 1,000배 또는 10,000배 이상 더 큰 친화성으로 그의 표적에 결합할 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 항체의 "면역특이적" 결합은 항체의 항원 결합 부위와 그 항체에 의해 인식되는 특정 항원 사이에 발생하는 항원 특이적 결합 상호작용을 지칭한다(즉, 항체는 ELISA 또는 다른 면역어세이에서 단백질과 반응하고, 관련 없는 단백질과 검출 가능하게 반응하지 않는다).

항체와 관련하여 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "경쟁한다"는 제1 항체 또는 이의 항원 결합 부분이 제2 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 충분히 유사한 방식으로 에피토프에 결합함으로써, 제1 항체와 그의 동족 에피토프의 결합 결과가 제2 항체의 부재 하에서의 제1 항체의 결합에 비해 제2 항체의 존재 하에서 검출 가능하게 감소됨을 의미한다. 제2 항체와 그의 에피토프의 결합도 제1 항체의 존재 하에서 검출 가능하게 감소되는 대안적 경우도 있을 수 있으나, 반드시 그러한 것은 아니다. 즉, 제1 항체는 제2 항체와 그의 에피토프의 결합을 억제할 수 있는 반면, 제2 항체는 제1 항체와 그의 각각의 에피토프의 결합을 억제하지 않는다. 그러나, 각각의 항체가 다른 항체와 그의 동족 에피토프 또는 리간드의 결합을 검출 가능하게 억제하는 경우, 그 정도가 동일하든, 더 크든 아니면 더 작든 관계없이, 항체는 그들 각각의 에피토프(들)의 결합에 대해 서로 "교차경쟁"한다고 언급된다. 경쟁 항체 및 교차경쟁 항체 둘 다가 본 발명에 포함된다. 이러한 경쟁 또는 교차경쟁이 일어나는 기작(예를 들어, 입체 장애, 입체구조적 변화, 또는 공통 에피토프 또는 이의 일부에의 결합)과 관계없이, 숙련된 당업자는 본원에서 제공된 교시를 기반으로, 이러한 경쟁 및/또는 교차경쟁 항체가 포함되고 본원에 개시된 방법에 유용할 수 있음을 인식할 것이다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "조직 인자 경로 억제제 또는 TFPI"는 TFPI 활성의 적어도 일부를 보유하는 임의의 형태의 TFPI 및 이의 변이체를 지칭한다. TFPI는 프로테아제 억제제를 함유하는 다가 쿠니츠 도메인이다. 인간, 마우스, 사이노몰구스 원숭이, 토끼 및 래트 TFPI의 예시적인 서열은 표 20에 제공되어 있다. 인간 TFPI는 두 가지 주요 형태, TFPI-알파 및 TFPI-베타를 가진 세포외 당단백질이다. 276 아미노산 글리코실화된 단백질(MW 43 kD)인 TFPI 알파는 TFPI의 가장 큰 형태이고 3개의 쿠니츠 유사 도메인 및 염기성 카르복시 말단 영역으로 구성된다. 대안적 스플라이싱은 쿠니츠 도메인 1(K1) 및 쿠니츠 도메인 2(K2)를 함유하되, 쿠니츠 도메인 3(K3) 및 기본 영역을 결여하는 대안적 C-말단 부분을 함유하는 TFPI-베타를 생성한다. TFPI-베타는 글리코실포스파티딜이노시톨(GPI) 고착제를 사용한 번역 후 변형을 통해 세포막에 고착된다.

TFPI의 1차 표적은 응고 캐스케이드의 시작 단계에서 핵심 인자인 프로테아제 인자 Xa(FXa) 및 인자 VIIa(FVIIa)이다. 생화학적 분석은 K2가 FXa의 억제제인 반면, K1이 FVIIa-조직 인자 복합체를 억제함을 보여주었다. K3의 역할은 직접적인 프로테아제 억제 활성을 갖는 것으로 보이지 않기 때문에 불분명하나, 보조인자 단백질 S에 대한 인식 부위로서 작용할 수 있다. TFPI-알파에 고유한 C-말단 도메인은 혈소판 표면 상의 프로트롬비나제(prothrombinase)의 인식에 관여할 수 있다.

쿠니츠 도메인 1(K1)은 서열번호 2의 아미노산 잔기 26 내지 76에 상응하고, 쿠니츠 도메인 2(K2)는 서열번호 2의 잔기 91 내지 147에 상응한다. 다른 TFPI 상동체, 동형체, 변이체 또는 단편으로부터의 K1 및 K2 도메인은 서열번호 2에 대한 서열 정렬 또는 구조적 정렬에 의해 확인될 수 있다.

본 개시내용의 TFPI는 임의의 적합한 유기체로부터 유래할 수 있는 임의의 천연 생성 형태의 TFPI를 포함한다. 예를 들어, TFPI는 포유동물 TFPI, 예컨대, 인간, 마우스, 래트, 비인간 영장류, 소, 양, 개, 고양이 또는 돼지 TFPI일 수 있다. 특정 실시양태에서, TFPI는 인간 TFPI이다. TFPI는 성숙 형태의 TFPI(즉, 적절한 세포 내에서 번역 후 처리를 거친 TFPI 단백질)일 수 있다. 이러한 성숙 TFPI 단백질은 예를 들어, 글리코실화될 수 있다.

본 개시내용의 TFPI는 천연 생성 TFPI로부터 유래한 임의의 기능적 단편 또는 변이체를 포함한다. TFPI의 기능적 단편은 TFPI의 활성, 예컨대, 인자 Xa(FXa)를 억제하고/하거나, FVIIa-조직 인자 복합체의 활성을 억제하고/하거나 응고 또는 지혈의 음성 조절제로서 작용하는 능력을 보유하는 TFPI의 임의의 일부 또는 부분일 수 있다. 예를 들어, 기능적 단편은 TFPI의 쿠니츠 도메인, 예컨대, K1 도메인, K2 도메인, 또는 K1 및 K2 도메인 둘 다를 포함할 수 있다.

기능적 변이체는 천연 생성 TFPI에 비해 하나 이상의 돌연변이를 포함할 수 있고, 천연 생성 TFPI의 활성, 예컨대, 인자 Xa(FXa)를 억제하는 능력 또는 FVIIa-조직 인자 복합체의 활성을 억제하는 능력을 여전히 보유할 수 있다. 예를 들어, 변이체는 서열번호 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7에 대한 다양한 정도의 서열 동일성, 예컨대, 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6 또는 서열번호 7로 언급된 서열에 대한 적어도 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 가질 수 있다.

본 발명의 TPFI 단편, 변이체, 동형체 및 상동체는 본원에 기재된 바와 같이 중요한 에피토프 잔기(예컨대, TFPI-23 및 TFPI-106 항체가 사용되는 경우 Ile105, Arg107 및 Leu131)를 유지해야 한다. 또한, TFPI는 TFPI의 K2 도메인의 5개 이상, 8개 이상, 10개 이상, 12개 이상 또는 15개 이상의 표면 접근 가능한 잔기를 포함할 수 있다. 표면 접근 가능한 잔기는 40% 이상의 상대적 접근성을 가진 잔기이다.

예를 들어, TFPI의 K2 도메인(예를 들어, 서열번호 2 참조)의 경우, 하기 아미노산 잔기는 40% 초과의 상대적 접근성을 가진다: 94 및 95, 98, 100 내지 110, 118 내지 121, 123 및 124, 131, 134, 138 내지 142, 144 및 145. TFPI는 5개 이상, 8개 이상, 10개 이상, 12개 이상 또는 15개 이상의 잔기를 포함할 수 있고, 예컨대, 5개 이상, 8개 이상, 10개 이상, 12개 이상 또는 15개 이상의 이들 잔기를 포함하는 TFPI의 단편을 포함할 수 있다.

TFPI의 구체적인 아미노산 잔기 위치는 서열번호 2(인간 TFPIα K1K2K3)에 따라 넘버링된다. 그러나, 본 발명은 서열번호 2로 제한되지 않는다. 다른 TFPI 상동체, 동형체, 변이체 또는 단편으로부터의 상응하는 잔기는 당분야에서 공지되어 있는 서열 정렬 또는 구조적 정렬에 따라 확인될 수 있다. 예를 들어, 정렬은 수동으로 수행될 수 있거나, 디폴트 파라미터를 사용하는 잘 공지되어 있는 서열 정렬 프로그램, 예컨대, ClustalW2 또는 "BLAST 2 서열"을 이용함으로써 수행될 수 있다. 예를 들어, 서열번호 2의 Arg107은 마우스 TFPI K1K2(서열번호 4)의 Arg104에 상응한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "TFPI 길항제 항체"("TFPI 항체" 또는 "항-TFPI 항체"로서 교환 가능하게 지칭됨)는 TFPI에 결합할 수 있고 TFPI 신호전달에 의해 매개된 TFPI 생물학적 활성 및/또는 다운스트림 경로(들)를 억제할 수 있는 항체를 지칭한다. TFPI 길항제 항체는 TFPI 신호전달에 의해 매개된 다운스트림 경로, 예컨대, 리간드 결합 및/또는 TFPI에 대한 세포 반응의 유발을 포함하는 TFPI 생물학적 활성을 차단하거나, 길항하거나, 억제하거나 감소시키는(유의미한 정도를 포함함) 항체를 포괄한다. 본 발명의 목적을 위해, 용어 "TFPI 길항제 항체"는 이전에 확인된 모든 용어, 제목, 및 기능적 상태와 특성을 포괄하는 것이므로, TFPI 그 자체, TFPI 생물학적 활성(혈액 응고의 임의의 측면을 매개하는 그의 능력을 포함하나 이것으로 제한되지 않음) 또는 생물학적 활성의 결과가 임의의 유의미한 정도로 실질적으로 무효화되거나, 감소되거나 중화됨을 명확히 이해할 것이다. 일부 실시양태에서, TFPI 길항제 항체는 TFPI에 결합하고 조직 인자(TF)/인자 VIIa 복합체에의 TFPI 결합 및/또는 이러한 복합체의 억제를 방해한다. 다른 실시양태에서, TFPI 항체는 TFPI에 결합하고 인자 Xa에의 TFPI 결합 및/또는 이러한 인자의 억제를 방해한다. TFPI 길항제 항체의 예는 본원에서 제공된다.

약물, 제제, 화합물 또는 약학 조성물의 "유효량"은 표적화된 병리학적 상태의 완화 또는 감소와 같은 임상 결과를 포함하는 유리한 또는 원하는 결과를 달성하기에 충분한 양이다. 유효량은 하나 이상의 투여로 투여될 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 약물, 화합물 또는 약학 조성물의 유효량은 표적화된 병리학적 상태의 강도를 치료하거나, 완화하거나 감소시키기에 충분한 양이다. 임상 맥락에서 이해되는 바와 같이, 약물, 화합물 또는 약학 조성물의 유효량은 또 다른 약물, 화합물 또는 약학 조성물과 함께 달성될 수 있거나 달성되지 않을 수 있다. 따라서, "유효량"은 하나 이상의 치료제를 투여하는 맥락에서 고려될 수 있고, 단일 작용제는 하나 이상의 다른 작용제와 함께 원하는 결과를 달성할 수 있거나 달성하는 경우 유효량으로 제공된 것으로 간주될 수 있다.

"치료 유효량"은 항-TFPI 항체의 맥락에서 표적화된 병리학적 상태, 예를 들어, 출혈 장애, 예컨대, 혈우병 A, B 또는 C의 치료 또는 예방적 방지를 포함하는 원하는 치료 결과를 달성하기 위해 필요한 용량으로 필요한 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다. 용량 값은 완화될 상태의 중증도에 따라 달라질 수 있다는 것을 인지해야 한다. 임의의 특정 대상체의 경우, 개체 요구 및 조성물을 투여하거나 투여를 감독하는 사람의 전문적인 판단에 따라 특정 용법을 시간에 따라 조절해야 하고, 본원에 기재된 용량 범위가 단지 예시적하기 위한 것이고 청구된 조성물의 범위 또는 실시를 제한하기 위한 것이 아니라는 것도 이해해야 한다. 마찬가지로, 항체 또는 항체 부분의 치료 유효량은 질환 상태, 개체의 연령, 성별 및 체중, 개체에서 원하는 반응을 이끌어내는 항체 또는 항체 부분의 능력, 및 항체 제제의 원하는 투여 경로와 같은 요인에 따라 달라질 수 있다. 치료 유효량은 치료적으로 유리한 효과가 항체 또는 항체 부분의 임의의 독성 또는 유해 효과를 능가하는 양이기도 하다.

항-TFPI 항체에 대한 치료 유효량은 예를 들어, 전체로서 본원에 포함되는, 2019년 10월 9일자로 출원된 PCT 출원 제PCT/IB2019/058597호(미국 특허 제62/802,401호 및 제62/744,481호의 우선권을 주장함)에 기재되어 있다. 일부 실시양태에서, 치료 유효량은 약 300 mg의 초기 용량에 이은 약 150 mg의 후속 매주(즉, 주당 1회) 용량을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료 유효량은 약 150 mg의 초기 용량 및 약 150 mg의 후속 매주(즉, 주당 1회) 용량을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료 유효량은 약 300 mg의 초기 용량 및 약 300 mg의 후속 매주(즉, 주당 1회) 용량을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료 유효량은 약 450 mg의 초기 용량 및 약 450 mg의 후속 매주(즉, 주당 1회) 용량을 포함한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료"는 치료적 치료 및 예방적 또는 방지적 조치 둘 다를 지칭하고, 이때 목적은 표적화된 병리학적 상태(예를 들어, 항체를 사용한 치료로부터 이익을 얻을 임의의 상태)를 예방하거나 늦추는(경감시키는) 것이다. 이것은 포유동물을 해당 장애에 취약하게 만드는 병리학적 상태를 비롯한 만성 및 급성 장애 또는 질환을 포함한다. 치료를 필요로 하는 대상체는 이미 이러한 상태를 가진 대상체뿐만 아니라 이러한 상태를 갖기 쉬운 대상체 또는 이러한 상태가 예방되어야 하는 대상체도 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "치료"는 중증도의 경감, 및 병리학적 상태와 관련된 하나 이상의 증상의 완화 중 하나 이상을 포함하나 이들로 제한되지 않는 유리한 또는 원하는 임상 결과를 수득하는 접근법이다.

본원에서 사용된 바와 같이, 치료 목적을 위한 "대상체" 또는 "개체"라는 용어는 임의의 대상체를 포함하고, 바람직하게는 표적화된 병리학적 상태(예를 들어, 혈우병)의 치료를 필요로 하는 대상체이다. 예방 목적을 위한 대상체는 임의의 대상체이고, 바람직하게는 표적화된 병리학적 상태를 발생시킬 위험에 있거나 이러한 상태에 취약한 대상체이다. 용어 "대상체"는 살아있는 유기체, 예를 들어, 원핵생물 및 진핵생물을 포함하기 위한 것이다. 대상체의 예는 포유동물, 예를 들어, 인간, 개, 소, 말, 돼지, 양, 염소, 고양이, 마우스, 토끼, 래트 및 형질전환 비인간 동물을 포함한다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 대상체는 인간이다.

본원에서 사용된 바와 같이, 본원에서 교환 가능하게 사용된 용어 "폴리뉴클레오타이드" 또는 "핵산"은 리보뉴클레오타이드 또는 데옥시뉴클레오타이드 중 어느 한 뉴클레오타이드의 중합체 형태, 또는 어느 한 유형의 뉴클레오타이드의 변형된 형태를 의미하고, 단일 가닥 형태 및 이중 가닥 형태일 수 있다. 달리 특정되어 있지 않은 한, "폴리뉴클레오타이드" 또는 "핵산" 서열은 이의 상보체를 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "단리된 폴리뉴클레오타이드" 또는 "단리된 핵산"은 게놈, cDNA 또는 합성 기원의 폴리뉴클레오타이드 또는 이들의 일부 조합을 의미하고, 단리된 폴리뉴클레오타이드는 이의 기원 또는 유래 공급원으로 인해 하기 특징들 중 1개 내지 3개의 특징을 가진다: (1) 자연에서 "단리된 폴리뉴클레오타이드"와 함께 발견되는 폴리뉴클레오타이드의 전체 또는 일부와 회합되어 있지 않음, (2) 자연에서 그에 연결되어 있지 않은 폴리뉴클레오타이드에 작동 가능하게 연결됨, 또는 (3) 더 큰 서열의 일부로서 자연에서 발생하지 않음.

본원에서 값 또는 파라미터의 앞에 "약"을 언급하는 것은 그 값 또는 파라미터 그 자체에 관한 실시양태를 포함한다(그리고 기술한다). 예를 들어, "약 X"를 언급하는 설명은 "X"의 설명을 포함한다. 수치 범위는 범위를 한정하는 숫자를 포함한다. 일반적으로 말해서, 용어 "약"은 변수의 표시된 값, 및 표시된 값의 실험적 오차 이내(예를 들어, 평균에 대한 95% 신뢰 구간 이내) 또는 표시된 값의 10% 이내(이들 중 더 큰 범위)에 있는 변수의 모든 값들을 지칭한다.

본 발명의 측면 또는 실시양태가 마쿠쉬 군 또는 대안의 다른 군의 관점에서 기재되어 있는 경우, 본 발명은 전체로서 나열된 전체 군뿐만 아니라, 개별적으로 군의 각각의 구성원 및 주요 군의 모든 가능한 하위군, 및 하나 이상의 군 구성원을 결여하는 주요 군도 포괄한다. 본 발명은 청구된 발명에서 군 구성원들 중 하나 이상의 임의의 구성원을 명시적으로 배제하는 것도 예상한다.

본 발명 또는 이의 바람직한 실시양태(들)의 요소를 도입할 때, 단수형은 하나 이상의 요소가 있음을 의미하기 위한 것이다. 용어 "포함하는", "포함한다", "포함하고", "비롯한" 및 "가진"은 포괄하기 위한 것이고 나열된 요소 이외의 추가 요소가 있을 수 있음을 의미한다. 실시양태가 용어 "포함하는"으로 본원에 기재되어 있을 때마다, "로 구성된" 및/또는 "로 본질적으로 구성된"의 관점에서 기재된 다른 방식으로 유사한 실시양태도 제공됨을 이해한다.

달리 정의되어 있지 않은 한, 본원에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어들은 본 발명이 속하는 분야에서 통상의 기술을 가진 자에 의해 통상적으로 이해되는 의미와 동일한 의미를 가진다. 모순이 있는 경우, 정의를 포함하는 본 명세서가 우선할 것이다. 문맥에 의해 달리 요구되어 있지 않은 한, 단수 용어는 복수를 포함하고 복수 용어는 단수를 포함한다.

예시적인 방법 및 재료가 본원에 기재되어 있지만, 본원에 기재된 방법 및 재료와 유사하거나 동등한 방법 및 재료도 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있다. 재료, 방법 및 예는 예시하기 위한 것일 뿐이고 제한하기 위한 것이 아니다.

항-TFPI 항체 제제

본원은 히스티딘 완충제를 포함하고 pH 5.8을 가진 제제가 항-VEGF 항체와 같은 다른 IgG1 항체에 비해 항-TFPI 항체의 분해를 지연시키고 응집체 형성을 감소시키고 안정성을 개선한다는 놀라운 예상외의 관찰결과에 기반한다.

따라서, 한 측면에서, 본원은 약 15 ㎎/㎖ 내지 약 250 ㎎/㎖의 조직 인자 경로 억제제(TFPI) 항체, 완충제, 폴리올, 계면활성제, 킬레이팅제를 포함하고 약 5.0 내지 약 6.0의 pH를 가진 제제를 제공한다. 일부 실시양태에서, 제제는 약 15 ㎎/㎖ 내지 약 250 ㎎/㎖의, 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체, 완충제, 폴리올, 계면활성제, 킬레이팅제를 포함하고, 이때 상기 제제는 약 5.0 내지 약 6.0의 pH를 갖고, 상기 에피토프는 서열번호 2의 넘버링에 따라 잔기 Ile105, Arg107 및 Leu131을 포함한다. 본원에 기재된 제제는 (예를 들어, 약 -70℃, 약 -20℃, 약 5℃, 약 25℃ 또는 약 40℃에서) 연장된 저장 수명, 바람직하게는 적어도 약 1개월, 약 4개월, 약 6개월, 약 12개월, 약 24개월, 약 36개월, 약 48개월 또는 약 60개월의 저장 수명을 가진다.

일부 실시양태에서, 제제는 적어도 하나의 TFPI 길항제 항체(즉, 항-TFPI 항체)를 포함한다. 예시적인 TFPI 길항제 항체는 국제 특허출원 공개 제WO 2017/029583호, 제WO 2010/017196호, 제WO 2011/109452호, 제WO 2014/144577호, 제WO 2010/072687호, 제WO 2012/001087호, 제WO 2014/140240호 및 제WO 2015/007880호에 기재된 항체들을 포함하나 이들로 제한되지 않고, 이때 이 출원들 각각은 전체로서 본원에 참고로 포함된다.

일부 실시양태에서, TFPI 길항제 항체는 TFPI 106(PF-06741086으로서도 공지되어 있음), TFPI-23, TFPI-107, 콘시주맙(concizumab)(mAb-2021, hz4F36으로서도 공지되어 있음), 2A8 및 2A8-200(예를 들어, 미국 특허출원 공개 제20170073428호 참조)로 구성된 군으로부터 선택된다.

일부 실시양태에서, 하나 이상의 항체가 존재할 수 있다. 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 또는 더 많은 상이한 항체가 존재할 수 있다. 일반적으로, 2개 이상의 상이한 항체는 서로 부정적인 영향을 미치지 않는 상보적 활성을 가진다. 항체 또는 항체들은 항체의 효과를 향상시키고/시키거나 보완하는 역할을 하는 다른 작용제와 함께 사용될 수도 있다.

일부 실시양태에서, 항체는 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하고, 이때 상기 에피토프는 서열번호 2의 넘버링에 따라 잔기 Ile105, Arg107 및 Leu131을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-TFPI 항체는 TFPI의 쿠니츠 도메인 1(K1)에 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, 상기 에피토프는 서열번호 2의 넘버링에 따라 잔기 Cys106, Gly108, Cys130, Leu131 및 Gly132를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 에피토프는 서열번호 2의 넘버링에 따라 Asp102, Arg112, Tyr127, Gly129, Met134 및 Glu138을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 에피토프는 서열번호 2의 넘버링에 따라 E100, E101, P103, Y109, T111, Y113, F114, N116, Q118, Q121, C122, E123, R124, F125, K126 및 L140을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 상기 에피토프는 서열번호 2의 넘버링에 따라 D31, D32, P34, C35, K36, E100, E101, P103, Y109, K126 및 G128을 포함하지 않는다.

일부 실시양태에서, 항체는

(a) 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 1(CDR-H1),

을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함한다.

일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 16, 18 및 20으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 16, 18 및 20으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다.

일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), (b) 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 2(CDR-L2): 및 (c) 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.

일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 11과 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.

일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.

일부 실시양태에서, 항체는

(i) (a) 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, (b) 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2 및 (c) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH), 및

(ii) (a) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, (b) 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 (c) 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)

을 포함한다.

일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.

본 발명의 예시적인 항체는 2015년 7월 22일자로 어메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection)(미국 버지니아주 20110-2209 매나사스 유니버시티 불러바드 10801 소재)에 기탁되었다. ATCC 수탁번호 PTA-122329를 가진 플라스미드 벡터 mAb-TFPI-106 VH는 항체 TFPI-106의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 DNA 삽입체를 포함하고, ATCC 수탁번호 PTA-122328을 가진 플라스미드 벡터 mAb-TFPI-106 VL은 항체 TFPI-106의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 DNA 삽입체를 포함한다.

일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.

일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.

일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고, 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.

일부 실시양태에서, 항체는 적어도 25시간, 적어도 29시간, 적어도 30시간, 적어도 35시간, 적어도 40시간, 적어도 50시간, 적어도 55시간, 적어도 60시간, 적어도 65시간, 적어도 70시간, 적어도 75시간, 적어도 80시간, 적어도 85시간, 적어도 90시간, 적어도 95시간, 적어도 100시간, 적어도 105시간, 적어도 110시간, 적어도 115시간, 적어도 120시간 또는 적어도 125시간의 혈청 반감기를 가진다. 일부 실시양태에서, 항체는 적어도 25시간, 적어도 29시간 또는 적어도 30시간의 혈청 반감기를 가진다. 일부 실시양태에서, 항체는 적어도 29시간의 혈청 반감기를 가진다. 일부 실시양태에서, 항체는 적어도 30시간의 혈청 반감기를 가진다. 일부 실시양태에서, 항체는 적어도 115시간, 적어도 120시간 또는 적어도 125시간의 혈청 반감기를 가진다.

일부 실시양태에서, 항체는 약 5x10^-7 M 내지 약 5x10^-11 M의 결합 친화성(K_D)을 가진다. 일부 실시양태에서, 항체는 약 1x10^-8 M 내지 약 1x10^-10 M(0.1 내지 10 nm)의 K_D를 가진다. 일부 실시양태에서, 항체는 ≤1 nM, ≤500 pM, ≤250 pM, ≤200 pM, ≤100 pM, ≤50 pM, ≤20 pM 또는 ≤10 pM의 K_D를 가진다. 일부 실시양태에서, 항체는 낮은 pM 범위(즉, ≤100 pM) 내의 K_D를 갖지 않는다. 일부 측면에서, K_D는 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정된다. 일부 측면에서, 표면 플라즈몬 공명은 Biacore를 이용함으로써 측정될 수 있다. 일부 측면에서, SPR은 포획된 항체 및 용액상 인간 TFPI를 사용하는 Biacore를 이용함으로써 측정될 수 있다.

일부 측면에서, 항체의 피하 생체이용률은 정맥내 생체이용률에 비해 적어도 10%일 수 있다. 일부 측면에서, 항체의 피하 생체이용률은 정맥내 생체이용률에 비해 적어도 15%일 수 있다. 일부 측면에서, 항체의 피하 생체이용률은 정맥내 생체이용률에 비해 적어도 20%일 수 있다. 일부 측면에서, 항체의 피하 생체이용률은 정맥내 생체이용률에 비해 적어도 25%일 수 있다. 일부 측면에서, 항체의 피하 생체이용률은 정맥내 생체이용률에 비해 적어도 27%일 수 있다. 일부 측면에서, 항체의 피하 생체이용률은 정맥내 생체이용률에 비해 적어도 30%일 수 있다. 일부 측면에서, 항체의 피하 생체이용률은 정맥내 생체이용률에 비해 적어도 35%일 수 있다. 일부 측면에서, 항체의 피하 생체이용률은 정맥내 생체이용률에 비해 적어도 40%일 수 있다. 일부 측면에서, 항체의 피하 생체이용률은 정맥내 생체이용률에 비해 적어도 50%일 수 있다. 일부 측면에서, 항체의 피하 생체이용률은 정맥내 생체이용률에 비해 적어도 60%일 수 있다. 일부 측면에서, 항체의 피하 생체이용률은 정맥내 생체이용률에 비해 적어도 70%일 수 있다. 일부 측면에서, 항체의 피하 생체이용률은 정맥내 생체이용률에 비해 적어도 80%일 수 있다. 일부 측면에서, 항체의 피하 생체이용률은 정맥내 생체이용률에 비해 적어도 90%일 수 있다. 일부 측면에서, 항체의 피하 생체이용률은 정맥내 생체이용률에 비해 적어도 99%일 수 있다.

항체는 약 0.1 ㎎/㎖ 내지 약 250 ㎎/㎖, 약 15 ㎎/㎖ 내지 250 ㎎/㎖, 약 20 ㎎/㎖ 내지 약 175 ㎎/㎖, 또는 약 25 ㎎/㎖ 내지 약 160 ㎎/㎖의 농도로 제제에 존재할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 항체의 농도는 약 0.5 ㎎/㎖, 약 1 ㎎/㎖, 약 2 ㎎/㎖, 약 2.5 ㎎/㎖, 약 3 ㎎/㎖, 약 3.5 ㎎/㎖, 약 4 ㎎/㎖, 약 4.5 ㎎/㎖, 약 5 ㎎/㎖, 약 5.5 ㎎/㎖, 약 6 ㎎/㎖, 약 6.5 ㎎/㎖, 약 7 ㎎/㎖, 약 7.5 ㎎/㎖, 약 8 ㎎/㎖, 약 8.5 ㎎/㎖, 약 9 ㎎/㎖, 약 9.5 ㎎/㎖, 약 10 ㎎/㎖, 약 11 ㎎/㎖, 약 12 ㎎/㎖, 약 13 ㎎/㎖, 약 14 ㎎/㎖, 약 15 ㎎/㎖, 약 16 ㎎/㎖, 약 17 ㎎/㎖, 약 18 ㎎/㎖, 약 19 ㎎/㎖, 약 20 ㎎/㎖, 약 21 ㎎/㎖, 약 22 ㎎/㎖, 약 23 ㎎/㎖, 약 24 ㎎/㎖, 약 25 ㎎/㎖, 약 26 ㎎/㎖, 약 27 ㎎/㎖, 약 28 ㎎/㎖, 약 29 ㎎/㎖, 약 30 ㎎/㎖, 약 31 ㎎/㎖, 약 32 ㎎/㎖, 약 33 ㎎/㎖, 약 34 ㎎/㎖, 약 35 ㎎/㎖, 약 36 ㎎/㎖, 약 37 ㎎/㎖, 약 38 ㎎/㎖, 약 39 ㎎/㎖, 약 40 ㎎/㎖, 약 41 ㎎/㎖, 약 42 ㎎/㎖, 약 43 ㎎/㎖, 약 44 ㎎/㎖, 약 45 ㎎/㎖, 약 46 ㎎/㎖, 약 47 ㎎/㎖, 약 48 ㎎/㎖, 약 49 ㎎/㎖, 약 50 ㎎/㎖, 약 51 ㎎/㎖, 약 52 ㎎/㎖, 약 53 ㎎/㎖, 약 54 ㎎/㎖, 약 55 ㎎/㎖, 약 56 ㎎/㎖, 약 57 ㎎/㎖, 약 58 ㎎/㎖, 약 59 ㎎/㎖, 약 60 ㎎/㎖, 약 70 ㎎/㎖, 약 80 ㎎/㎖, 약 90 ㎎/㎖, 약 100 ㎎/㎖, 약 101 ㎎/㎖, 약 102 ㎎/㎖, 약 102.5 ㎎/㎖, 약 103 ㎎/㎖, 약 103.5 ㎎/㎖, 약 104 ㎎/㎖, 약 104.5 ㎎/㎖, 약 105 ㎎/㎖, 약 105.5 ㎎/㎖, 약 106 ㎎/㎖, 약 106.5 ㎎/㎖, 약 107 ㎎/㎖, 약 107.5 ㎎/㎖, 약 108 ㎎/㎖, 약 108.5 ㎎/㎖, 약 109 ㎎/㎖, 약 109.5 ㎎/㎖, 약 110 ㎎/㎖, 약 111 ㎎/㎖, 약 112 ㎎/㎖, 약 113 ㎎/㎖, 약 114 ㎎/㎖, 약 115 ㎎/㎖, 약 116 ㎎/㎖, 약 117 ㎎/㎖, 약 118 ㎎/㎖, 약 119 ㎎/㎖, 약 120 ㎎/㎖, 약 121 ㎎/㎖, 약 122 ㎎/㎖, 약 123 ㎎/㎖, 약 124 ㎎/㎖, 약 125 ㎎/㎖, 약 126 ㎎/㎖, 약 127 ㎎/㎖, 약 128 ㎎/㎖, 약 129 ㎎/㎖, 약 130 ㎎/㎖, 약 131 ㎎/㎖, 약 132 ㎎/㎖, 약 133 ㎎/㎖, 약 134 ㎎/㎖, 약 135 ㎎/㎖, 약 136 ㎎/㎖, 약 137 ㎎/㎖, 약 138 ㎎/㎖, 약 139 ㎎/㎖, 약 140 ㎎/㎖, 약 141 ㎎/㎖, 약 142 ㎎/㎖, 약 143 ㎎/㎖, 약 144 ㎎/㎖, 약 145 ㎎/㎖, 약 146 ㎎/㎖, 약 147 ㎎/㎖, 약 148 ㎎/㎖, 약 149 ㎎/㎖, 약 150 ㎎/㎖, 약 151 ㎎/㎖, 약 152 ㎎/㎖, 약 153 ㎎/㎖, 약 154 ㎎/㎖, 약 155 ㎎/㎖, 약 156 ㎎/㎖, 약 157 ㎎/㎖, 약 158 ㎎/㎖, 약 159 ㎎/㎖, 약 160 ㎎/㎖, 약 170 ㎎/㎖, 약 180 ㎎/㎖, 약 190 ㎎/㎖, 약 200 ㎎/㎖, 약 210 ㎎/㎖, 약 220 ㎎/㎖, 약 230 ㎎/㎖, 약 240 ㎎/㎖ 또는 약 250 ㎎/㎖이다. 일부 실시양태에서, 제제 중의 항체의 농도는 약 100 ㎎/㎖, 약 115 ㎎/㎖, 약 150 ㎎/㎖ 또는 약 158 ㎎/㎖이다. 일부 실시양태에서, 제제 중의 항체의 농도는 150 ㎎/㎖이다. 일부 실시양태에서, 제제 중의 항체의 농도는 155 ㎎/㎖이다. 일부 실시양태에서, 제제 중의 항체의 농도는 158 ㎎/㎖이다.

본 발명에 따르면, 완충제(예를 들어, 히스티딘 또는 석시네이트 완충제)는 주사 시 통증 또는 아나필락시스성 부작용의 위험을 감소시키기 위해 생리학적 pH에 가까운 pH를 가진 제제를 제공하고 향상된 항체 안정성, 및 응집, 산화 및 단편화에 대한 내성을 제공한다.

완충제는 예를 들어, 제한 없이, 아세테이트, 석시네이트(예를 들어, 석신산이나트륨 육수화물), 글루코네이트, 시트레이트, 히스티딘, 아세트산, 포스페이트, 인산, 아스코르베이트, 타르타르산, 말레산, 글리신, 락테이트, 젖산, 아스코르브산, 이미다졸, 비카보네이트 및 탄산, 석신산, 벤조산나트륨, 벤조산, 글루코네이트, 에데테이트, 아세테이트, 말레이트, 이미다졸, 트리스, 포스페이트, 및 이들의 혼합물일 수 있다. 일부 실시양태에서, 완충제는 히스티딘 또는 석시네이트이다. 일부 실시양태에서, 석시네이트 완충제는 석신산이나트륨 육수화물(염기성 형태) 및/또는 석신산 또는 이들의 혼합물을 포함한다. 바람직하게는, 완충제는 히스티딘이고, 이때 히스티딘 완충제는 L-히스티딘, L-히스티딘 일염산염(L-히스티딘 일염산염 일수화물 및/또는 L-히스티딘 염산염 일수화물로서도 지칭됨) 또는 이들의 혼합물을 포함한다.

완충제의 농도는 약 0.1 밀리몰(mM) 내지 약 100 mM의 범위일 수 있다. 바람직하게는, 완충제의 농도는 약 0.5 mM 내지 약 50 mM, 보다 바람직하게는 약 1 mM 내지 약 30 mM, 보다 바람직하게는 약 1 mM 내지 약 25 mM이다. 바람직하게는, 완충제의 농도는 약 1 mM, 약 2 mM, 약 3 mM, 약 4 mM, 약 5 mM, 약 6 mM, 약 7 mM, 약 8 mM, 약 9 mM, 약 10 mM, 약 11 mM, 약 12 mM, 약 13 mM, 약 14 mM, 약 15 mM, 약 16 mM, 약 17 mM, 약 18 mM, 약 19 mM, 약 20 mM, 약 21 mM, 약 22 mM, 약 23 mM, 약 24 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 약 50 mM, 약 55 mM, 약 60 mM, 약 65 mM, 약 70 mM, 약 75 mM, 약 80 mM, 약 85 mM, 약 90 mM, 약 95 mM, 또는 약 100 mM이다. 일부 실시양태에서, 완충제는 약 20 mM 농도의 히스티딘이다. 일부 실시양태에서, 완충제는 약 20 mM 농도의 석시네이트이다.

완충제의 농도는 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 30 ㎎/㎖, 약 0.1 ㎎/㎖ 내지 약 5 ㎎/㎖, 또는 약 0.5 ㎎/㎖ 내지 약 4 ㎎/㎖일 수도 있다. 예를 들어, 완충제의 농도는 약 0.01 ㎎/㎖, 0.02 ㎎/㎖, 0.03 ㎎/㎖, 약 0.04 ㎎/㎖, 약 0.05 ㎎/㎖, 약 0.06 ㎎/㎖, 약 0.07 ㎎/㎖, 0.08 ㎎/㎖, 0.09 ㎎/㎖, 약 0.10 ㎎/㎖, 0.11 ㎎/㎖, 0.12 ㎎/㎖, 0.13 ㎎/㎖, 약 0.14 ㎎/㎖, 약 0.15 ㎎/㎖, 약 0.16 ㎎/㎖, 약 0.17 ㎎/㎖, 0.18 ㎎/㎖, 0.19 ㎎/㎖, 약 0.20 ㎎/㎖, 약 0.25 ㎎/㎖, 약 0.3 ㎎/㎖, 약 0.4 ㎎/㎖, 약 0.5 ㎎/㎖, 약 0.6 ㎎/㎖, 약 0.7 ㎎/㎖, 약 0.8 ㎎/㎖, 약 0.9 ㎎/㎖, 약 1.0 ㎎/㎖, 약 2.0 ㎎/㎖, 약 3.0 ㎎/㎖, 약 4.0 ㎎/㎖, 약 5.0 ㎎/㎖, 약 6.0 ㎎/㎖, 약 7.0 ㎎/㎖, 약 8.0 ㎎/㎖, 약 9.0 ㎎/㎖, 약 10.0 ㎎/㎖, 약 11.0 ㎎/㎖, 약 12.0 ㎎/㎖, 약 13.0 ㎎/㎖, 약 14.0 ㎎/㎖, 약 15.0 ㎎/㎖, 약 16.0 ㎎/㎖, 약 17.0 ㎎/㎖, 약 18.0 ㎎/㎖, 약 19.0 ㎎/㎖, 약 20 ㎎/㎖, 약 21.0 ㎎/㎖, 약 22.0 ㎎/㎖, 약 23.0 ㎎/㎖, 약 24.0 ㎎/㎖, 약 25.0 ㎎/㎖, 약 26.0 ㎎/㎖, 약 27.0 ㎎/㎖, 약 28.0 ㎎/㎖, 약 29.0 ㎎/㎖ 또는 약 30 ㎎/㎖이다. 일부 실시양태에서, 제제는 약 0.5 내지 5.0 ㎎/㎖의 히스티딘 완충제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 완충제는 약 0.1 내지 1.5 ㎎/㎖의 L-히스티딘 및 약 1 내지 3 ㎎/㎖의 L-히스티딘 일염산염을 포함하는 히스티딘 완충제이다. 일부 실시양태에서, 완충제는 1.12 ㎎/㎖의 L-히스티딘 및 2.67 ㎎/㎖의 L-히스티딘 일염산염을 포함하는 히스티딘 완충제이다. 일부 실시양태에서, 완충제는 약 0.5 내지 5.0 ㎎/㎖의 석신산이나트륨 육수화물 및 약 0.1 내지 1.0 ㎎/㎖의 석신산을 포함하는 석시네이트 완충제이다. 일부 실시양태에서, 완충제는 약 4.08 ㎎/㎖의 석신산이나트륨 육수화물 및 약 0.58 ㎎/㎖의 석신산을 포함하는 석시네이트 완충제이다. 일부 실시양태에서, 완충제는 약 2.362 ㎎/㎖의 석신산을 포함하는 석시네이트 완충제이다.

일부 실시양태에서, 폴리올은 예를 들어, 제한 없이, 약 600 kD 미만(예를 들어, 약 120 내지 약 400 kD의 범위 내)의 분자량을 가질 수 있고, 당(예를 들어, 환원 당 및 비환원 당 또는 이들의 혼합물, 당류, 또는 탄수화물), 당 알코올, 당산, 또는 이들의 염 또는 혼합물을 비롯한 다수의 하이드록실 기를 포함한다. 비환원 당의 예는 수크로스, 트레할로스 및 이들의 혼합물을 포함하나, 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 폴리올은 만니톨, 트레할로스, 소르비톨, 에리쓰리톨, 이소말트, 락티톨, 말티톨, 자일리톨, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 이노시톨, 또는 이들의 혼합물이다. 다른 실시양태에서, 폴리올은 예를 들어, 제한 없이, 단당류, 이당류 또는 다당류, 또는 이들 중 임의의 당류의 혼합물일 수 있다. 당류 또는 탄수화물은 예를 들어, 제한 없이, 프럭토스, 글루코스, 만노스, 수크로스, 소르보스, 자일로스, 락토스, 말토스, 덱스트란, 풀루란, 덱스트린, 사이클로덱스트린, 가용성 전분, 하이드록시에틸 전분, 수용성 글루칸, 또는 이들의 혼합물일 수 있다.

일부 실시양태에서, 폴리올은 만니톨, 트레할로스, 소르비톨, 에리쓰리톨, 이소말트, 락티톨, 말티톨, 자일리톨, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 이노시톨, 프럭토스, 글루코스, 만노스, 수크로스, 소르보스, 자일로스, 락토스, 말토스, 덱스트란, 풀루란, 덱스트린, 사이클로덱스트린, 가용성 전분, 하이드록시에틸 전분, 수용성 글루칸 또는 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 폴리올은 수크로스 또는 트레할로스이다. 일부 실시양태에서, 폴리올은 수크로스이다.

제제 중의 폴리올의 농도는 약 1 ㎎/㎖ 내지 약 300 ㎎/㎖, 약 1 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖, 또는 약 1 ㎎/㎖ 내지 약 120 ㎎/㎖이다. 바람직하게는, 제제 중의 폴리올의 농도는 약 50 ㎎/㎖ 내지 약 120 ㎎/㎖, 약 60 ㎎/㎖ 내지 약 110 ㎎/㎖, 또는 약 80 ㎎/㎖ 내지 약 90 ㎎/㎖이다. 예를 들어, 제제 중의 폴리올의 농도는 약 0.5 ㎎/㎖, 약 1 ㎎/㎖, 약 2 ㎎/㎖, 약 2.5 ㎎/㎖, 약 3 ㎎/㎖, 약 3.5 ㎎/㎖, 약 4 ㎎/㎖, 약 4.5 ㎎/㎖, 약 5 ㎎/㎖, 약 5.5 ㎎/㎖, 약 6 ㎎/㎖, 약 6.5 ㎎/㎖, 약 7 ㎎/㎖, 약 7.5 ㎎/㎖, 약 8 ㎎/㎖, 약 8.5 ㎎/㎖, 약 9 ㎎/㎖, 약 9.5 ㎎/㎖, 약 10 ㎎/㎖, 약 11 ㎎/㎖, 약 12 ㎎/㎖, 약 13 ㎎/㎖, 약 14 ㎎/㎖, 약 15 ㎎/㎖, 약 16 ㎎/㎖, 약 17 ㎎/㎖, 약 18 ㎎/㎖, 약 19 ㎎/㎖, 약 20 ㎎/㎖, 약 21 ㎎/㎖, 약 22 ㎎/㎖, 약 23 ㎎/㎖, 약 24 ㎎/㎖, 약 25 ㎎/㎖, 약 26 ㎎/㎖, 약 27 ㎎/㎖, 약 28 ㎎/㎖, 약 29 ㎎/㎖, 약 30 ㎎/㎖, 약 31 ㎎/㎖, 약 32 ㎎/㎖, 약 33 ㎎/㎖, 약 34 ㎎/㎖, 약 35 ㎎/㎖, 약 36 ㎎/㎖, 약 37 ㎎/㎖, 약 38 ㎎/㎖, 약 39 ㎎/㎖, 약 40 ㎎/㎖, 약 41 ㎎/㎖, 약 42 ㎎/㎖, 약 43 ㎎/㎖, 약 44 ㎎/㎖, 약 45 ㎎/㎖, 약 46 ㎎/㎖, 약 47 ㎎/㎖, 약 48 ㎎/㎖, 약 49 ㎎/㎖, 약 50 ㎎/㎖, 약 51 ㎎/㎖, 약 52 ㎎/㎖, 약 53 ㎎/㎖, 약 54 ㎎/㎖, 약 55 ㎎/㎖, 약 56 ㎎/㎖, 약 57 ㎎/㎖, 약 58 ㎎/㎖, 약 59 ㎎/㎖, 약 60 ㎎/㎖, 약 65 ㎎/㎖, 약 70 ㎎/㎖, 약 75 ㎎/㎖, 약 80 ㎎/㎖, 약 81 ㎎/㎖, 약 82 ㎎/㎖, 약 83 ㎎/㎖, 약 84 ㎎/㎖, 약 85 ㎎/㎖, 약 86 ㎎/㎖, 약 87 ㎎/㎖, 약 88 ㎎/㎖, 약 89 ㎎/㎖, 약 90 ㎎/㎖, 약 91 ㎎/㎖, 약 92 ㎎/㎖, 약 93 ㎎/㎖, 약 94 ㎎/㎖, 약 95 ㎎/㎖, 약 96 ㎎/㎖, 약 97 ㎎/㎖, 약 98 ㎎/㎖, 약 99 ㎎/㎖, 약 100 ㎎/㎖, 약 101 ㎎/㎖, 약 102 ㎎/㎖, 약 103 ㎎/㎖, 약 104 ㎎/㎖, 약 105 ㎎/㎖, 약 106 ㎎/㎖, 약 107 ㎎/㎖, 약 108 ㎎/㎖, 약 109 ㎎/㎖, 약 110 ㎎/㎖, 약 111 ㎎/㎖, 약 112 ㎎/㎖, 약 113 ㎎/㎖, 약 114 ㎎/㎖, 약 115 ㎎/㎖, 약 116 ㎎/㎖, 약 117 ㎎/㎖, 약 118 ㎎/㎖, 약 119 ㎎/㎖, 약 120 ㎎/㎖, 약 121 ㎎/㎖, 약 122 ㎎/㎖, 약 123 ㎎/㎖, 약 124 ㎎/㎖, 약 125 ㎎/㎖, 약 126 ㎎/㎖, 약 127 ㎎/㎖, 약 128 ㎎/㎖, 약 129 ㎎/㎖, 약 130 ㎎/㎖, 약 131 ㎎/㎖, 약 132 ㎎/㎖, 약 133 ㎎/㎖, 약 134 ㎎/㎖, 약 135 ㎎/㎖, 약 136 ㎎/㎖, 약 137 ㎎/㎖, 약 138 ㎎/㎖, 약 139 ㎎/㎖, 약 140 ㎎/㎖, 약 141 ㎎/㎖, 약 142 ㎎/㎖, 약 143 ㎎/㎖, 약 144 ㎎/㎖, 약 145 ㎎/㎖, 약 146 ㎎/㎖, 약 147 ㎎/㎖, 약 148 ㎎/㎖, 약 149 ㎎/㎖ 또는 약 150 ㎎/㎖이다.

일부 실시양태에서, 폴리올은 약 1 ㎎/㎖ 내지 약 300 ㎎/㎖, 약 1 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖, 또는 약 1 ㎎/㎖ 내지 약 120 ㎎/㎖ 농도의 수크로스이다. 바람직하게는, 제제 중의 수크로스의 농도는 약 50 ㎎/㎖ 내지 약 120 ㎎/㎖, 약 60 ㎎/㎖ 내지 약 110 ㎎/㎖, 또는 약 80 ㎎/㎖ 내지 약 90 ㎎/㎖이다. 일부 실시양태에서, 제제 중의 수크로스의 농도는 약 85 ㎎/㎖이다. 일부 실시양태에서, 제제 중의 수크로스의 농도는 약 84 ㎎/㎖이다. 일부 실시양태에서, 제제 중의 수크로스의 농도는 약 90 ㎎/㎖이다. 일부 실시양태에서, 폴리올은 약 84 ㎎/㎖ 또는 약 85 ㎎/㎖ 또는 약 90 ㎎/㎖ 농도의 트레할로스이다.

본 발명에서 사용되는 계면활성제는 액체 항체 제제의 표면 장력을 변경시킬 수 있다. 특정 실시양태에서, 계면활성제는 액체 항체 제제의 표면 장력을 감소시킨다. 다른 실시양태에서, 계면활성제는 제제에서 임의의 항체의 안정성 개선에 기여할 수 있다. 또한, 계면활성제는 (예를 들어, 운반 및 저장 동안) 제제화된 항체의 응집을 감소시킬 수 있고/있거나, 제제에서 미립자의 형성을 최소화할 수 있고/있거나, 흡착(예를 들어, 용기에의 흡착)을 감소시킬 수 있다. 예를 들어, 계면활성제는 냉동/해동 주기 동안 및 후에 항체의 안정성도 개선할 수 있다. 계면활성제는 예를 들어, 제한 없이, 폴리소르베이트, 폴록사머, 트리톤, 나트륨 도데실 설페이트, 나트륨 라우렐 설페이트, 나트륨 옥틸 글리코사이드, 라우릴-설포베타인, 미리스틸-설포베타인, 리놀레일-설포베타인, 스테아릴-설포베타인, 라우릴-사르코신, 미리스틸-사르코신, 리놀레일-사르코신, 스테아릴-사르코신, 리놀레일-베타인, 미리스틸-베타인, 세틸-베타인, 라우로아미도프로필-베타인, 코카미도프로필-베타인, 리놀레아미도프로필-베타인, 미리스타미도프로필-베타인, 팔미도프로필-베타인, 이소스테아라미도프로필-베타인, 미리스타미도프로필-디메틸아민, 팔미도프로필-디메틸아민, 이소스테아라미도프로필-디메틸아민, 나트륨 메틸 코코일-타우레이트, 이나트륨 메틸 올레일-타우레이트, 디하이드록시프로필 PEG 5 리놀레암모늄 클로라이드, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 및 이들의 혼합물일 수 있다. 계면활성제는 예를 들어, 제한 없이, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 21, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 61, 폴리소르베이트 65, 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 81, 폴리소르베이트 85, PEG3350 및 이들의 혼합물일 수 있다.

계면활성제의 농도는 일반적으로 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 10 ㎎/㎖, 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 5.0 ㎎/㎖, 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 2.0 ㎎/㎖, 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 1.5 ㎎/㎖, 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 1.0 ㎎/㎖, 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 0.5 ㎎/㎖, 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 0.4 ㎎/㎖, 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 0.3 ㎎/㎖, 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 0.2 ㎎/㎖, 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 0.15 ㎎/㎖, 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 0.1 ㎎/㎖, 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 0.05 ㎎/㎖, 약 0.1 ㎎/㎖ 내지 약 1 ㎎/㎖, 약 0.1 ㎎/㎖ 내지 약 0.5 ㎎/㎖, 또는 약 0.1 ㎎/㎖ 내지 약 0.3 ㎎/㎖이다. 보다 바람직하게는, 계면활성제의 농도는 약 0.05 ㎎/㎖, 약 0.06 ㎎/㎖, 약 0.07 ㎎/㎖, 약 0.08 ㎎/㎖, 약 0.09 ㎎/㎖, 약 0.1 ㎎/㎖, 약 0.15 ㎎/㎖, 약 0.2 ㎎/㎖, 약 0.3 ㎎/㎖, 약 0.4 ㎎/㎖, 약 0.5 ㎎/㎖, 약 0.6 ㎎/㎖, 약 0.7 ㎎/㎖, 약 0.8 ㎎/㎖, 약 0.9 ㎎/㎖, 또는 약 1 ㎎/㎖이다.

일부 실시양태에서, 폴리소르베이트는 약 0.1 ㎎/㎖ 내지 약 0.3 ㎎/㎖, 예를 들어, 0.2 ㎎/㎖ 농도의 폴리소르베이트 80이다.

본 발명에서 사용된 킬레이팅제는 본 발명의 제제에서 환원된 산소 종의 형성을 낮추고/낮추거나, 산성 종(예를 들어, 탈아미드화) 형성을 감소시키고/시키거나, 항체 응집을 감소시키고/시키거나, 항체 단편화를 감소시키고/시키거나 항체 산화를 감소시킨다. 예를 들어, 킬레이팅제는 금속 이온과 적어도 하나의 결합(예를 들어, 공유, 이온 또는 다른 결합)을 형성하고 불안정성을 촉진할 종과 착물화하는 안정화제로서 작용하는 멀티덴테이트(multidentate) 리간드일 수 있다.

일부 실시양태에서, 킬레이팅제는 아미노폴리카복실산, 하드록시아미노카복실산, N-치환된 글리신, 2-(2-아미노-2-옥소옥틸) 아미노에탄 설폰산(BES), 데페록사민(DEF), 시트르산, 니아신아미드, 및 데속시콜레이트 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 킬레이팅제는 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA), 디에틸렌트리아민 펜타아세트산 5(DTPA), 니트릴로트리아세트산(NTA), N-2-아세트아미도-2-이미노디아세트산(ADA), 비스(아미노에틸)글리콜에테르, N,N,N',N'-테트라아세트산(EGTA), 트랜스-디아미노사이클로헥산 테트라아세트산(DCTA), 글루탐산 및 아스파르트산, N-하이드록시에틸이미노디아세트산(HIMDA), N,N-비스-하이드록시에틸글리신(비신) 및 N-(트리스하이드록시메틸메틸) 10 글리신(트리신), 글리실글리신, 나트륨 데옥시콜레이트, 에틸렌디아민, 프로필렌디아민, 디에틸렌트리아민, 트리에틸렌테트라아민(트리엔), 에데트산이나트륨 이수화물(또는 이나트륨 EDTA 이수화물 또는 EDTA 이나트륨 염), 칼슘 EDTA 옥살산, 말레이트, 시트르산, 시트르산 일수화물, 및 시트르산삼나트륨 이수화물, 8-하이드록시퀴놀레이트, 아미노산, 히스티딘, 시스테인, 메티오닌, 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 킬레이팅제는 에데트산이칼륨, 에데트산이나트륨, 에데트산칼슘 이나트륨, 에데트산나트륨, 에데트산삼나트륨 및 에데트산칼륨을 포함하나 이들로 제한되지 않는 EDTA의 염으로 구성된 군으로부터 선택되고; 데페록사민(DEF)의 적합한 염은 데페록사민 메실레이트(DFM) 또는 이의 혼합물이다. 본 발명에 사용되는 킬레이팅제는 가능한 경우, 화합물의 유리 산 또는 유리 염기 형태 또는 염 형태로서 존재할 수 있고, 화합물 또는 상응하는 염의 무수, 용매화된 또는 수화된 형태로서도 존재할 수 있다.

일부 실시양태에서, 킬레이팅제는 EDTA이다. 일부 실시양태에서, 킬레이팅제는 EDTA의 염이다. 일부 실시양태에서, 킬레이팅제는 에데트산이나트륨 이수화물이다.

킬레이팅제의 농도는 일반적으로 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 50 ㎎/㎖, 약 0.1 ㎎/㎖ 내지 약 10.0 ㎎/㎖, 약 5 ㎎/㎖ 내지 약 15.0 ㎎/㎖, 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 1.0 ㎎/㎖, 약 0.02 ㎎/㎖ 내지 약 0.5 ㎎/㎖, 약 0.025 ㎎/㎖ 내지 약 0.075 ㎎/㎖이다. 보다 바람직하게는, 킬레이팅제의 농도는 일반적으로 약 0.01 mM 내지 약 2.0 mM, 약 0.01 mM 내지 약 1.5 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.5 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.4 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.3 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.2 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.15 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.1 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.09 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.08 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.07 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.06 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.05 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.04 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.03 mM, 약 0.01 mM 내지 약 0.02 mM, 약 0.02, 또는 약 0.05 mM 내지 약 0.01 mM이다. 바람직하게는, 킬레이팅제의 농도는 약 0.01 ㎎/㎖, 약 0.02 ㎎/㎖, 약 0.025 ㎎/㎖, 약 0.03 ㎎/㎖, 약 0.04 ㎎/㎖, 약 0.05 ㎎/㎖, 약 0.06 ㎎/㎖, 약 0.07 ㎎/㎖, 약 0.075 ㎎/㎖, 약 0.08 ㎎/㎖, 약 0.09 ㎎/㎖, 약 0.10 ㎎/㎖ 또는 약 0.20 ㎎/㎖일 수 있다. 보다 바람직하게는, 킬레이팅제의 농도는 약 0.025 ㎎/㎖, 약 0.03 ㎎/㎖, 약 0.035 ㎎/㎖, 약 0.04 ㎎/㎖, 약 0.045 ㎎/㎖, 약 0.05 ㎎/㎖, 약 0.055 ㎎/㎖, 약 0.06 ㎎/㎖, 약 0.065 ㎎/㎖, 약 0.07 ㎎/㎖ 또는 약 0.075 ㎎/㎖이다. 가장 바람직하게는, 킬레이팅제의 농도는 약 0.05 ㎎/㎖이다.

일부 실시양태에서, 킬레이팅제는 약 0.05 ㎎/㎖ 농도의 에데트산이나트륨 이수화물이다. 일부 실시양태에서, 킬레이팅제는 약 0.05 ㎎/㎖ 농도의 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)이다.

일부 실시양태에서, pH는 약 pH 5.0 내지 약 6.6, 바람직하게는 약 pH 5.0 내지 6.5, 또는 약 5.0 내지 6.0, 가장 바람직하게는 pH 5.2 내지 5.8의 범위 내에 있을 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 제제를 위한 pH는 약 pH 5.2, 5.3, 5.4, 5.5 또는 5.6 중 어느 한 pH 내지 약 pH 6.5, 6.4, 6.3, 6.2, 6.1, 6.0, 5.9, 5.8 또는 5.7 중 어느 한 pH로부터 선택된 범위 내에 있을 수 있다. 일부 실시양태에서, pH는 약 pH 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4 또는 7.5 중 임의의 pH 값으로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, pH는 pH 5.8 +/- 0.5이고, 일부 실시양태에서, pH는 pH 5.8 +/- 0.3이다.

일부 실시양태에서, 제제는 보존제를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 보존제는 페놀, m-크레졸, 벤질 알코올, 염화벤즈알코늄, 염화벤즈알토늄, 페녹시에탄올 및 메틸 파라벤으로부터 선택된다.

보존제의 농도는 일반적으로 약 0.001 ㎎/㎖ 내지 약 50 ㎎/㎖, 약 0.005 ㎎/㎖ 내지 약 15.0 ㎎/㎖, 약 0.008 ㎎/㎖ 내지 약 12.0 ㎎/㎖, 또는 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 10.0 ㎎/㎖이다. 바람직하게는, 보존제의 농도는 약 0.1 ㎎/㎖, 0.2 ㎎/㎖, 0.3 ㎎/㎖, 약 0.4 ㎎/㎖, 약 0.5 ㎎/㎖, 약 0.6 ㎎/㎖, 약 0.7 ㎎/㎖, 0.8 ㎎/㎖, 0.9 ㎎/㎖, 약 1.0 ㎎/㎖, 2.0 ㎎/㎖, 3.0 ㎎/㎖, 약 4.0 ㎎/㎖, 약 5.0 ㎎/㎖, 약 6.0 ㎎/㎖, 약 7.0 ㎎/㎖, 8.0 ㎎/㎖, 9.0 ㎎/㎖, 약 9.1 ㎎/㎖, 약 9.2 ㎎/㎖, 9.3 ㎎/㎖, 9.4 ㎎/㎖, 9.5 ㎎/㎖, 9.6 ㎎/㎖, 9.7 ㎎/㎖, 9.8 ㎎/㎖, 9.9 ㎎/㎖, 10.0 ㎎/㎖일 수 있다. 가장 바람직하게는, 보존제의 농도는 약 0.1 ㎎/㎖ 또는 9.0 ㎎/㎖이다.

일부 실시양태에서, 제제는 보존제를 함유하지 않는다.

일부 실시양태에서, 항체는 단일클론 항체, 다중클론 항체, 항체 단편(예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, Fc, ScFv 등), 키메라 항체, 이중특이적 항체, 이종접합체 항체, 단일 쇄(ScFv), 이들의 돌연변이체, 항체 부분을 포함하는 융합 단백질(예를 들어, 도메인 항체), 인간화된 항체, 인간 항체, 및 항체의 글리코실화 변이체, 항체의 아미노산 서열 변이체 및 공유적으로 변형된 항체를 포함하는, 요구된 특이성의 항원 인식 부위를 포함하는 임의의 다른 변형된 입체구조의 면역글로불린 분자로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 항체는 뮤린, 래트, 인간 또는 임의의 다른 유래의 항체(키메라 또는 인간화된 항체를 포함함)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간 항체이다. 바람직하게는, 항체는 단리되고, 보다 바람직하게는 실질적으로 순수하다. 항체가 항체 단편인 경우, 이것은 바람직하게는 원래 항체의 기능적 특성, 즉 리간드 결합 및/또는 길항제 또는 아고니스트 활성을 보유한다.

일부 실시양태에서, 항체 중쇄 불변 영역은 임의의 유형의 불변 영역, 예컨대, IgG, IgM, IgD, IgA 및 IgE; 및 임의의 이소타입, 예컨대, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로부터 유래할 수 있다. 바람직하게는, 항체는 IgG1 항체이다.

본 발명의 추가 측면에 따라, 약 15 ㎎/㎖ 내지 약 250 ㎎/㎖의 조직 인자 경로 억제제(TFPI) 항체; 약 1 mM 내지 약 100 mM의 완충제; 약 1 ㎎/㎖ 내지 약 300 ㎎/㎖의 폴리올; 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 10 ㎎/㎖의 계면활성제; 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 50.0 ㎎/㎖의 킬레이팅제를 포함하거나 이들로 구성된 제제로서; 약 5.0 내지 약 6.0의 pH를 가진 제제를 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 항체는 (i) (a) 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); (b) 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH), 및 (ii) (a) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-TFPI 항체는 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역, 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-TFPI 항체는 TFPI-106(PF-06741086 또는 마르스타시맙(marstacimab)으로서도 지칭됨)이다. 일부 실시양태에서, 완충제는 히스티딘 완충제이고/이거나, 폴리올은 수크로스 또는 트레할로스이고/이거나, 계면활성제는 폴리소르베이트(예를 들어, 폴리소르베이트 80)이고/이거나, 킬레이팅제는 EDTA 또는 에데트산이나트륨 이수화물이다. 일부 실시양태에서, 완충제는 히스티딘 완충제이고, 폴리올은 수크로스이고, 계면활성제는 폴리소르베이트 80이고, 킬레이팅제는 에데트산이나트륨 이수화물이다.

일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항-TFPI 항체 약물 물질의 제제는 에틸렌 비닐 아세테이트 단일물질(EVAM) 생성물 접촉 표면을 가진 멸균된 에틸렌 비닐 아세테이트(EVA) 백에 저장될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항-TFPI 항체 약물 물질의 제제는 멸균된 고밀도 폴리에틸렌 병(HDPE)에 저장될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항-TFPI 항체 약물 물질의 제제는 스테인리스강 용기에 저장될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항-TFPI 항체 약품의 제제는 멸균된 바이알 또는 사전 충전된 주사기(PFS)에 저장될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항-TFPI 항체 약품의 제제는 사전 충전된 펜(PFP)에 저장될 수 있다.

본 발명의 추가 측면에 따라, 약 100 ㎎/㎖, 약 110 ㎎/㎖, 약 115 ㎎/㎖, 약 120 ㎎/㎖, 약 130 ㎎/㎖, 약 140 ㎎/㎖, 약 150 ㎎/㎖, 약 158 ㎎/㎖, 약 160 ㎎/㎖ 또는 약 200 ㎎/㎖의 조직 인자 경로 억제제 항체(예를 들어, 인간 항-TFPI 항체); 약 1 mM 내지 약 100 mM의 완충제; 약 1 ㎎/㎖ 내지 약 300 ㎎/㎖의 폴리올; 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 10 ㎎/㎖의 계면활성제; 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 1.0 ㎎/㎖의 킬레이팅제를 포함하거나 이들로 구성된 제제로서; 약 5.0 내지 약 6.0의 pH를 가진 제제를 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 항체는 (i) (a) 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); (b) 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하는 중쇄 가변(VH), 및 (ii) (a) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-TFPI 항체는 TFPI-106(PF-06741086 또는 마르스타시맙으로서도 공지되어 있음)이다.

본 발명의 추가 측면에 따라, 약 50 ㎎/㎖ 내지 약 160 ㎎/㎖의 조직 인자 경로 억제제 항체(예를 들어, 인간 항-TFPI 항체); 약 20 mM의 완충제; 약 1 ㎎/㎖ 내지 약 120 ㎎/㎖의 폴리올; 약 0.1 ㎎/㎖ 내지 약 0.3 ㎎/㎖의 계면활성제; 약 0.025 ㎎/㎖ 내지 약 0.075 ㎎/㎖의 킬레이팅제를 포함하거나 이들로 구성된 제제로서; 약 5.0 내지 약 6.0의 pH를 가진 제제를 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 항체는 (i) (a) 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); (b) 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH), 및 (ii) (a) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-TFPI 항체는 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역, 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-TFPI 항체는 TFPI-106(PF-06741086 또는 마르스타시맙으로서도 공지되어 있음)이다. 일부 실시양태에서, 완충제는 히스티딘 완충제이고/이거나, 폴리올은 수크로스이고/이거나, 킬레이팅제는 에데트산이나트륨 이수화물이고/이거나, 계면활성제는 폴리소르베이트 80이다. 일부 실시양태에서, 항체의 농도는 100 ㎎/㎖, 115 ㎎/㎖, 150 ㎎/㎖ 또는 158 ㎎/㎖이다.

일부 실시양태에서, 약 150 ㎎/㎖의 조직 인자 경로 억제제 항체(예를 들어, 인간 항-TFPI 항체); 약 20 mM의 히스티딘 완충제; 약 85 ㎎/㎖의 수크로스; 약 0.2 ㎎/㎖의 폴리소르베이트 80; 약 0.05 ㎎/㎖의 에데트산이나트륨 이수화물을 포함하거나 이들로 구성된 수성 제제로서; 약 5.8의 pH를 가진 수성 제제를 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 항체는 (i) (a) 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); (b) 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH), 및 (ii) (a) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-TFPI 항체는 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역, 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-TFPI 항체는 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-TFPI 항체는 TFPI-106(PF-06741086 또는 마르스타시맙으로서도 공지되어 있음)이다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 제제는 (예를 들어, -20℃, 5℃, 25℃ 또는 40℃에서) 적어도 약 1개월, 약 3개월, 약 6개월, 약 12개월, 약 18개월, 약 24개월, 약 30개월, 약 36개월, 약 42개월, 약 48개월 또는 약 60개월 이상의 저장 수명을 가진다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 본 발명의 제제는 (예를 들어, -20℃, 5℃, 25℃ 또는 40℃에서) 적어도 약 1개월, 약 3개월, 약 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 13개월, 14개월, 15개월, 16개월, 17개월, 18개월, 19개월, 20개월, 21개월, 22개월, 23개월, 24개월, 25개월, 26개월, 27개월, 28개월, 29개월, 30개월, 31개월, 32개월, 33개월, 34개월, 35개월, 36개월, 37개월, 38개월, 39개월, 40개월, 41개월, 42개월, 43개월, 44개월, 45개월, 46개월, 47개월, 48개월, 49개월, 50개월, 51개월, 52개월, 53개월, 54개월, 55개월, 56개월, 57개월, 58개월, 59개월 또는 60개월의 저장 수명을 가진다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 제제는 5±3℃에서 적어도 약 24개월의 저장 수명을 가진다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 제제는 (예를 들어, 크기 배제 HPLC에 의해 측정될 때) 최대 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월 또는 6개월 동안 40℃/75% RH에서 약 7% 미만의 HMMS를 가진다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 제제는 (예를 들어, 크기 배제 HPLC에 의해 측정될 때) 최대 1개월, 2개월 또는 3개월 동안 40℃에서 약 3% 미만의 HMMS를 가진다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 제제는 (예를 들어, 크기 배제 HPLC에 의해 측정될 때) 최대 1개월 동안 40℃에서 약 2% 미만의 HMMS를 가진다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 제제는 (예를 들어, 크기 배제 HPLC에 의해 측정될 때) 최대 24개월 동안 5±3℃에서 약 2% 미만의 HMMS를 가진다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 제제는 (예를 들어, 크기 배제 HPLC에 의해 측정될 때) 최대 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 12개월, 18개월 또는 24개월 동안 5±3℃에서 약 1% 미만의 HMMS를 가진다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 제제는 (예를 들어, 환원 모세관 겔 전기영동에 의해 측정될 때) 최대 24개월 동안 5±3℃에서 약 2% 미만의 단편을 가진다.

달리 언급되어 있지 않은 한, 본원에 나열된 농도는 주위 조건, 즉 25℃ 및 대기압에서의 농도이다.

항-TFPI 항체 제제를 사용하는 방법

본원에 기재된 제제는 치료적 치료 방법을 포함하나 이로 제한되지 않는 다양한 적용에 유용하다. 치료 방법은 본 발명의 제제를, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명의 제제의 예시적인 치료 용도는 이를 필요로 하는 대상체에서 출혈 시간을 단축시키는 것, 혈액 응고의 결핍 또는 혈액 장애(예를 들어, 혈우병 A, 혈우병 B, 혈우병 C, 폰 빌레브란트병(vWD), 인자 VII 결핍, 인자 VIII, 인자 IX 또는 인자 XI 결핍)를 치료하거나 예방하는 것, 혈소판감소증을 치료하거나 예방하는 것, 및 혈소판 장애(혈소판 기능 또는 수의 장애)를 치료하거나 예방하는 것을 포함한다. 본원에 기재된 제제는 조절되지 않는 출혈(예를 들어, 외상 및 출혈성 졸중과 같은 징후에서 조절되지 않는 출혈)을 치료하는 데 사용될 수도 있다. 본원에 기재된 제제는 예방적 치료(예를 들어, 수술 전 출혈의 치료 또는 예방)에 사용될 수도 있다.

특히, 본원에 기재된 제제는 응고의 결핍 또는 결함, 또는 응고 장애를 치료하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 제제는 TFPI와 FXa의 상호작용을 감소시키거나 억제하는 데 사용될 수 있거나, TF/FVIIa/FXa 활성의 TFPI 의존적 억제를 감소시키는 데 사용될 수 있다.

따라서, 일부 실시양태에서, 대상체는 다음과 같이 혈액 응고의 결핍 또는 혈액 장애를 앓고 있거나 이에 취약하다: 일부 실시양태에서, 대상체는 혈우병 A, B 또는 C를 앓고 있거나 이에 취약하다. 일부 실시양태에서, 대상체는 혈우병 A 또는 B를 앓고 있거나 이에 취약하다. 일부 실시양태에서, 대상체는 혈우병 A를 앓고 있거나 이에 취약하고, 응고 인자 VIII에 대한 중화 항체(즉, 억제제)를 가진다. 일부 실시양태에서, 대상체는 혈우병 B를 앓고 있거나 이에 취약하고, 응고 인자 IX에 대한 중화 항체(즉, 억제제)를 가진다. 일부 실시양태에서, 대상체는 혈우병 C를 앓고 있거나 이에 취약하고, 응고 인자 XI에 대한 중화 항체(즉, 억제제)를 가진다. 일부 실시양태에서, 대상체는 폰 빌레브란트병(vWD)을 앓고 있거나 이에 취약하다. 일부 실시양태에서, 대상체는 혈소판 장애를 앓고 있거나 이에 취약하다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인자 VII 결핍을 앓고 있거나 이에 취약하다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인자 XI 결핍을 앓고 있거나 이에 취약하다.

본원에 기재된 TFPI 길항제 항체 또는 항원 결합 부분을 포함하는 제제는 응고제와 조합되어 사용될 수 있다. 본 발명은 응고제와 함께 본 발명의 제제의 개별, 동시적 또는 순차적 투여를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 제제는 응고제를 추가로 포함한다. 응고제의 예는 인자 VIIa, 인자 VIII, 인자 IX, 트라넥삼산 및 우회제(예를 들어, 항-억제제 응고제 복합체 또는 FEIBA)를 포함하나, 이들로 제한되지 않는다.

일부 실시양태에서, 출혈 시간 단축용 의약의 제조를 위한 본 발명의 제제의 용도를 제공한다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 제제는 대상체의 혈류, 근육, 조직, 지방 또는 내부 장기 내로 직접 투여될 수 있다. 비경구 투여에 적합한 수단은 정맥내, 안구내, 유리체내, 동맥내, 복강내, 척추강내, 뇌실내, 요도내, 흉골내, 두개내, 근육내, 골내, 피내 및 피하를 포함한다. 비경구 투여에 적합한 장치는 바늘(미세바늘, 미세돌출부, 가용성 바늘 및 다른 미세공극 형성 기법을 포함함) 주입기, 무바늘 주입기 및 주입 기법을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 제제는 정맥내로 또는 피하로 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 제제는 피하로 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 제제는 정맥내로 대상체에게 투여된다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 제제의 투여 패턴은 제제의 용량을 매주 1회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 4주마다 1회, 5주마다 1회, 6주마다 1회, 7주마다 1회, 8주마다 1회, 9주마다 1회, 10주마다 1회, 15주마다 1회, 20주마다 1회, 25주마다 1회, 또는 26주마다 1회 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 제제는 매월 1회, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회, 4개월마다 1회, 5개월마다 1회, 또는 6개월마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 제제는 매일 또는 매주(즉, 주마다 1회) 투여된다. 이 요법의 진행은 통상의 기법 및 어세이에 의해 용이하게 모니터링된다. 투약법은 시간에 따라 달라질 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 제제는 약 300 mg의 초기 항체 용량으로 투여된 후, 약 150 mg의 후속 매주(즉, 주마다 1회) 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 제제는 약 150 mg의 항체 용량으로 매주(즉, 주마다 1회) 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 제제는 약 300 mg의 항체 용량으로 매주(즉, 주마다 1회) 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 제제는 약 450 mg의 항체 용량으로 매주(즉, 주마다 1회) 투여된다.

본 발명의 목적을 위해, 의약의 적절한 용량은 사용되는 항체, 치료될 장애의 유형과 중증도, 작용제가 예방 목적으로 투여되는지 아니면 치료 목적으로 투여되는지 여부, 선행 요법, 환자의 임상 병력과 작용제에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 의해 좌우될 것이다. 전형적으로, 임상의는 원하는 결과를 달성하는 용량에 도달할 때까지 의약을 투여할 것이다. 용량은 경험적으로 결정될 수 있다.

하기 실시예는 예시 목적으로만 제공되고, 어떤 방식으로든 본 발명의 범위를 제한하기 위한 것이 아니다. 실제로, 본원에 제시되고 기재된 것 이외의 본 발명의 다양한 변형은 상기 설명으로부터 당분야에서 숙련된 자에게 자명해질 것이고, 첨부된 청구범위 내에 속할 것이다.

실시예

실시예 1. 항-TFPI 항체의 안정성 연구

이 실시예는 고밀도 폴리에틸렌(HDPE) 병, 바이알 및 사전충전된 주사기 내에 항-TFPI 항체를 함유하는 제제의 안정성을 예증한다.

100 ㎎/㎖, 115 ㎎/㎖ 및 150 ㎎/㎖의 항-TFPI 항체를 pH 5.8에서 20 mM 히스티딘, 85 ㎎/㎖의 수크로스, 0.05 ㎎/㎖의 에데트산이나트륨 이수화물, 0.2 ㎎/㎖의 폴리소르베이트 80으로 제조하였다. 이 실시예에서, 사용된 항-TFPI 항체는 서열번호 18의 아미노산 서열을 가진 중쇄 가변 영역 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 가진 경쇄 가변 영역을 가진다.

115 ㎎/㎖의 항-TFPI 항체를 HDPE 병에 채우고 적어도 3개월(즉, 12주)의 지속시간 동안 -20±5℃ 및 5±3℃에서 저장하였다.

100 ㎎/㎖ 및 150 ㎎/㎖의 항-TFPI 항체를 I형 유리 바이알에 채우고 코팅된 마개로 밀봉하고 알루미늄 밀봉재로 캡핑하고 적어도 3개월(즉, 12주)의 지속시간 동안 5±3℃, 25℃/60% 상대 습도(RH) 및 40℃/75% 상대 습도(RH)에서 역 방향으로 저장하였다. 또한, 150 ㎎/㎖의 항-TFPI 항체도 사전충전된 2.25 ㎖ 및 1 ㎖ I형 유리 주사기(PFS)에 채우고 코팅된 플런저 마개로 마개를 막고 적어도 3개월(즉, 12주)의 지속시간 동안 5±3℃, 25℃/60% RH 및 40℃/75% RH에서 수평 방향으로 저장하였다.

이어서, 단백질 분해를 모니터링하는 데 통상적으로 사용되는 품질 속성에 대해 샘플을 분석하였다. 예를 들어, 분석은 고분자량 종(HMMS)을 평가하기 위한 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피(SE-HPLC), 순도 및 단편화를 평가하기 위한 환원 및 비환원 모세관 겔 전기영동(CGE), 및 산성 종, 염기성 종 및 주요 종과 같은 전하 불균질성을 평가하기 위한 영상화된 모세관 등전점 집속(iCE)으로 구성되었다. 분석은 억제 어세이를 이용하여 항-TFPI 항체의 상대적 효능을 평가하는 단계도 포함하였다.

개론적 방법 및 비개론적 방법을 비롯한 특정 분석 절차를 이용하여 항-TFPI 항체의 특성, 순도 및 상대적 효능을 평가하였다. 분석 절차의 설명은 아래에 제공된다. 결과는 표 1 내지 8에 요약되어 있다.

외관(투명도 및 색상): 각각 현재 유럽 약전 절차 Ph. Eur. 2.2.1 및 Ph. Eur. 2.2.2에 따라 투명도 및 색상에 대해 약물 물질을 평가한다.

pH: 현재 USP 절차 <791>에 따라 pH에 대해 약물 물질을 분석한다.

UV에 의한 단백질 농도: 분광광도계를 이용하여, 280 nm에서의 흡광도를 사용하여 시험 샘플의 농도를 측정한다. PF-06741086(이하에 제공됨)에 대한 특정 흡수 계수 또는 흡수성(a280)을 농도 계산에 이용한다. a280 = 1.45 ㎖ mg-1 cm-1

영상화된 모세관 등전점 집속(iCE): 영상화된 모세관 등전점 집속(iCE) 방법을 이용하여 전하 불균질성을 평가한다. iCE는 전기장의 영향 하에서 양쪽성전해질에 의해 생성된 pH 구배에서 단백질 종의 전하 차이를 기반으로 단백질 종을 분리하고 생성물 전하 불균질성을 모니터링하는 데 이용된다. 단백질 전하 종은 DC 전압 하에서 모세관 내에서 집속되고 전체 모세관 영상화에 의해 280 nm에서 검출된다.

크기 배제 HPLC(SE-HPLC): SE-HPLC 방법을 이용하여 생성물 순도를 측정한다. 시험 샘플을 희석하고 크기 배제 컬럼에 주입한다. 고분자량 종(HMMS) 및 단량체의 함량은 모든 단백질 관련 피크에 대한 총 면적의 퍼센트로서 보고된다.

모세관 겔 전기영동(CGE) 환원: 이 방법을 이용하여 환원된 단백질의 순도를 측정한다. 샘플을 SDS로 변성시키고 환원제의 존재 하에서 가열한다. 단백질을 중쇄와 경쇄로 환원시키고, 시빙(sieving) 매질을 함유하는 모세관에서 상기 중쇄와 경쇄를 전기영동으로 분리하고 UV 분광법을 이용하여 검출한다. 이 분리는 분리된 중쇄 및 경쇄뿐만 아니라 크기 관련 불순물도 정량할 수 있게 한다. 순도는 중쇄 및 경쇄의 총 퍼센트로서 보고된다.

모세관 겔 전기영동(CGE) 비환원: 이 방법을 이용하여 온전한 단백질의 순도를 측정한다. 샘플을 SDS로 변성시키고 알킬화제의 존재 하에서 가열한다. 시빙 매질을 함유하는 모세관에서 단백질을 전기영동으로 분리하고 UV 분광법을 이용하여 검출한다. 분리는 분리된 온전한 IgG뿐만 아니라 크기 관련 불순물도 정량할 수 있게 한다. 순도는 IgG의 퍼센트로서 보고된다.

라이실 엔도프로테이나제(Lys-C) 맵핑: 이 방법을 이용하여 메티오닌 잔기를 함유하는 Fc-펩타이드에 국한된 항-TFPI 항체의 퍼센트 산화를 측정한다. 라이실 엔도프로테이나제(Lys-C)를 사용하여 항-TFPI 항체의 샘플을 펩타이드 단편으로 분해한다. 생성된 펩타이드 단편을 역상 HPLC로 분리한다. Fc-펩타이드 및 산화된 Fc-펩타이드의 분리는 퍼센트 산화가 측정될 수 있게 하고 항-TFPI 항체에 대해 모니터링될 수 있게 한다.

억제 어세이에 의한 생물학적 활성: 억제 어세이 방법을 이용하여 PF-06741086의 시험관내 생물학적 활성을 평가한다. 억제 어세이는 PF-06741086이 TFPI:FXa 복합체 형성을 억제함으로써, 유리 인간 응고 인자 Xa(FXa)의 증가를 야기할 수 있고, 이 증가는 결국 유리 FXa가 응고 활성에 사용될 수 있게 한다.

TFPI를 마이크로타이터 플레이트에 첨가한다. PF-06741086 기준 물질의 희석액 및 시험 샘플을 마이크로타이터 플레이트에 첨가하여, 항체가 그의 표적에 결합할 수 있게 한다. 그 다음, FXa는 마이크로타이터 플레이트에 첨가되고, PF-06741086에 의해 결합되지 않는 사용 가능한 TFPI에 결합하여 TFPI:FXa 복합체를 형성한다. 발색 기질 스펙트로자임(Spectrozyme) FXa를 사용하여 유리 FXa를 검출한다. 기질을 첨가한 후, 비색 반응을 분광광도법으로 측정한다.

데이터 분석 방법은 비선형 곡선 피팅, 및 표준 곡선과 샘플 곡선 사이의 평행도의 평가를 포함한다. 샘플 효능을 평행 곡선 사이의 IC50 변동으로부터 측정한다. 상대적 효능 값을 1 밀리그램(mg)의 기준 물질에 할당된 유닛의 수와 곱함으로써, PF-06741086에 따른 유닛으로 표현된 샘플의 비활성을 계산한다.

이 연구로부터의 데이터는 고농도(100 ㎎/㎖ 내지 150 ㎎/㎖)의 항-TFPI 항체가 pH 5.8 제제에서 20 mM 히스티딘, 85 ㎎/㎖의 수크로스, 0.05 ㎎/㎖의 에데트산이나트륨 이수화물, 0.2 ㎎/㎖의 폴리소르베이트 80에서 안정하다는 것을 입증한다. 결과는 상이한 용기/폐쇄 시스템(HDPE 병, 바이알, PFS)이 항-TFPI 항체의 안정성에 영향을 미치지 않는다는 것도 표시한다.

의도된 저장 조건인 5±3℃, 가속화된 저장 조건인 25℃/60% RH, 및 열 응력 저장 조건인 40℃/75% RH를 연구에서 평가하였다. 장기간 저장 조건인 5±3℃에서, 항-TFPI 항체는 임의의 생성물 품질 속성에 대해 관찰된 유의미한 차이 없이 최대 24개월 동안 안정한 것으로 확인된다.

약간의 % HMMS 증가는 25℃/60% RH에서 3개월 후에 관찰되고 40℃/75% RH에서 1개월 후에 관찰된다. 분해는 3개월에서 40℃/75% RH에서 관찰되었으나, 그 정도는 항-VEGF 항체와 같은 다른 IgG1 항체의 사용 시 관찰된 것보다 더 적다. 표 9는 항-TFPI 항체 및 항-VEGF 항체에 대한 40℃/75% RH 데이터에서 % HMMS를 비교한다. 적격 생성물 특이적 SE-HPLC 방법을 이용하여 각각의 항체에 대해 % HMMS를 정량하였다.

분해가 관찰되지만, 항-TFPI 항체는 pH 5.8 제제에서 20 mM 히스티딘, 85 ㎎/㎖의 수크로스, 0.05 ㎎/㎖의 에데트산이나트륨 이수화물, 0.2 ㎎/㎖의 폴리소르베이트 80에서 25℃/60% RH에서 최대 24개월 동안 활성을 유지하고 40℃/75% RH에서 최대 12개월 동안 활성을 유지한다.

실시예 2. 항-TFPI 항체의 제제 강인성 안정성 연구

이 실시예는 목표 제제(대조군 제제), 및 높거나 낮은 부형제 수준 및 pH를 가진 항-TFPI 항체 제제에서 150 ㎎/㎖ 항-TFPI 항체의 안정성을 예증한다. 평가된 제제는 표 10에 표시되어 있다. 각각의 성분의 농도를 분석 시험으로 확인하였다. 이 실시예에서, 사용된 항-TFPI 항체(TFPI-106)는 서열번호 18의 아미노산 서열을 가진 중쇄 가변 영역 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 가진 경쇄 가변 영역을 가진다.

제제를 의도된 저장 조건인 5±3℃, 가속화된 저장 조건인 25℃/60% RH, 및 열 응력 저장 조건인 40℃/75% RH에서 6개월 동안 저장하였다. 그 후, 본원에 기재된 방법을 이용하여 단백질 분해를 모니터링하는 데 통상적으로 사용되는 품질 속성에 대해 샘플을 분석하였다. 예를 들어, 분석은 고분자량 종(HMMS)을 평가하기 위한 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피(SE-HPLC), 순도 및 단편화를 평가하기 위한 환원 및 비환원 모세관 겔 전기영동(CGE), 및 산성 종, 염기성 종 및 주요 종과 같은 전하 불균질성을 평가하기 위한 영상화된 모세관 등전점 집속(iCE)으로 구성되었다. 분석은 억제 어세이를 이용하여 항-TFPI 항체의 상대적 효능을 평가하는 단계도 포함하였다. 개론적 방법 및 비개론적 방법을 비롯한 특정 분석 절차를 이용하여 항-TFPI 항체의 특성, 순도 및 상대적 효능을 평가하였다. 결과는 표 11 내지 19에 요약되어 있다.

표 11 내지 19에 제시되고 이하에 기재된 데이터는 높은 부형제 또는 낮은 부형제 또는 pH 수준을 함유하는 항-TFPI 항체 제제가 두 가지 실시간 안정성 조건 하에서 6개월 후에 안정함을 입증한다.

외관

2℃ 내지 8℃ 및 25℃에서 6개월 동안 저장한 후(표 18), 대부분의 제제(A 내지 E)에서 색상, 투명도 및 눈에 보이는 입자의 유의미한 변화가 관찰되지 않았다. 2℃ 내지 8℃ 및 25℃에서 6개월 동안 저장한 후, PS80 무함유 제제 F에서 눈에 보이는 미립자의 유의미한 증가가 관찰되었다.

40℃에서 6개월 동안 저장한 후, 모든 제제(A 내지 F)에 걸쳐 용액 색상의 유의미한 변화가 관찰되었다. 선행 안정성 연구에 근거하여, 가속화된 응력 조건에서 저장할 때 이 결과가 예상된다. 이 효과는 목적 제제에 비해 더 높은 부형제 농도를 함유하는 제제 C 및 E의 경우 가장 두드러졌다. 용액 투명도의 주요 변화는 관찰되지 않았다. 제제 A 내지 E의 경우, 때때로 눈에 보이는 입자가 관찰되었으나, 이 입자는 샘플 취급으로 인한 것일 수 있다. 40℃에서 6개월 후, PS80 무함유 제제 F에서 눈에 보이는 입자의 유의미한 증가가 관찰되었지만, 이 증가가 2℃ 내지 8℃ 및 25℃ 저장 조건보다 덜 현저함을 인지하였다. 이 발견은 PS80을 약품 제제에 포함시키는 것의 중요성을 강조한다.

pH

2℃ 내지 8℃, 25℃ 및 40℃에서 6개월 동안 저장한 후(표 11), 모든 제제(A 내지 F)에 걸쳐 pH의 유의미한 변화가 관찰되지 않았다.

UV에 의한 단백질 농도

2℃ 내지 8℃, 25℃ 및 40℃에서 6개월 동안 저장한 후(표 12), 단백질 농도는 150 ㎎/㎖ ± 15 ㎎/㎖ 규격 내에서 유지되었다. 대부분의 제제 및 저장 조건의 경우, 어세이 가변성에 기인할 수 있는 미미한 단백질 농도의 증가가 관찰되었다.

크기 배제 크로마토그래피(SE-HPLC)

2℃ 내지 8℃에서 6개월 동안 저장한 후(표 13), 모든 제제(A 내지 F)에서 % HMMS 및 % 단량체의 유의미한 변화가 관찰되지 않았다. 저분자량 종에 상응하는 피크가 모든 제제에 걸쳐 2℃ 내지 8℃에서 저장하는 동안 일관되지 않게 관찰됨을 인지하였다.

25℃에서 6개월 동안 저장한 후, % HMMS 및 % LMMS 둘 다의 1% 내지 2%의 미미한 증가 및 % 단량체의 상응하는 감소가 모든 제제(A 내지 F)에서 관찰되었다. 모든 % HMMS 결과는 5%의 허용 기준 미만으로 유지되었다.

40℃에서 6개월 동안 저장한 후, 모든 제제(A 내지 F)에서 % HMMS 및 % LMMS의 유의미한 증가 및 % 단량체의 상응하는 감소가 관찰되었다. 제제 B(낮은 부형제/높은 pH) 및 C(높은 부형제/낮은 pH)는 가장 큰 % 단량체 감소인 약 20%를 나타내었다. 선행 안정성 연구에 근거하여, 가속화된 응력 조건에서 이 결과가 예상된다.

비환원 모세관 겔 전기영동(nrCGE)

2℃ 내지 8℃에서 6개월 동안 저장한 후(표 14), 모든 제제(A 내지 F)에서 % IgG, % 단편 및 % 다른 물질의 유의미한 변화가 관찰되지 않았다.

25℃에서 6개월 동안 저장한 후, 2% 내지 3%의 미미한 단편 증가 및 상응하는 % IgG 감소가 모든 제제(A 내지 F)에서 관찰되었다. % 다른 물질의 유의미한 변화는 관찰되지 않았다.

40℃에서 6개월 동안 저장한 후, 모든 제제(A 내지 F)에서 >25%의 유의미한 단편 증가 및 상응하는 % IgG 감소가 관찰되었다. 가장 큰 % 단편 증가인 >30%는 제제 B(낮은 부형제/높은 pH) 및 C(높은 부형제/낮은 pH)에서 관찰되었다. 이 결과는 SE-HPLC 결과와 일치한다. 모든 제제에 걸쳐 % 다른 물질의 미미한 증가가 관찰되었다.

환원 모세관 겔 전기영동(rCGE)

2℃ 내지 8℃에서 6개월 동안 저장한 후(표 15), 모든 제제(A 내지 F)에서 % 중쇄+경쇄(HC+LC), % 단편 및 % 다른 물질의 유의미한 변화가 관찰되지 않았다.

25℃에서 6개월 동안 저장한 후, 모든 제제(A 내지 F)에서 1% 내지 2%의 미미한 단편 증가 및 상응하는 % HC+LC 감소가 관찰되었다. 1%의 미미한 다른 물질 증가는 제제 B 및 E에서만 관찰되었다.

40℃에서 6개월 동안 저장한 후, 모든 제제(A 내지 F)에서 약 10%의 유의미한 단편 증가 및 상응하는 % HC+LC 감소가 관찰되었다. 가장 큰 % 단편 증가는 제제 C(높은 부형제/낮은 pH)에서 관찰되었다. 대부분의 제제(A, C, D 및 F)는 2% 내지 3%의 미미한 다른 물질 증가를 보였다. 대조적으로, 7% 내지 8%의 유의미한 % 다른 물질 증가가 제제 B 및 E에서 관찰되었다.

등전점 집속 모세관 전기영동(iCE)

2℃ 내지 8℃에서 6개월 동안 저장한 후(표 16), 모든 제제(A 내지 F)에 걸쳐 % 산성 종의 미미한 증가 및 상응하는 % 주요 종의 감소가 관찰된 반면, % 염기성 종의 유의미한 변화는 관찰되지 않았다.

25℃에서 6개월 동안 저장한 후, 모든 제제에 걸쳐 10% 내지 20%의 유의미한 산성 종 증가 및 상응하는 % 주요 종 감소가 관찰되었다. 대부분의 제제에 걸쳐 2% 내지 3%의 미미한 염기성 종 증가가 관찰되었다. 높은 pH 제제 B 및 E는 가장 큰 % 산성 종 증가인 약 18%를 나타내었다. 이 발견은 다른 곳⁹에 상세히 기재된, 아스파라긴 탈아미드화의 pH 의존성에 의해 설명될 수 있다.

40℃에서 6개월 동안 저장한 후, 모든 제제에 걸쳐 약 60%의 유의미한 산성 종 증가 및 상응하는 % 주요 종 감소가 관찰되었다. % 산성 종의 가장 큰 증가가 제제 E에서 관찰되었고, 이것은 아스파라긴 탈아미드화의 pH 의존성에 의해 설명될 수 있다. T=0개월 샘플과 T=6개월 샘플을 비교하는 모든 제제에 걸쳐 % 염기성 종의 순 감소가 관찰되었다.

메티오닌 산화

2℃ 내지 8℃에서 6개월 동안 저장한 후(표 17), 모든 제제(A 내지 F)에 걸쳐 % MetOx의 유의미한 변화가 관찰되지 않았다. 25℃에서 6개월 동안 저장한 후, 모든 제제(A 내지 F)에 걸쳐 1% 내지 2%의 미미한 MetOx 증가가 관찰되었다. 40℃에서 6개월 동안 저장한 후, 모든 제제에 걸쳐 약 10% MetOX의 유의미한 증가가 관찰되었다. % MetOX의 가장 큰 증가인 약 20%가 제제 C(높은 부형제/낮은 pH)에서 관찰되었다.

억제 바이오어세이

2℃ 내지 8℃ 및 25℃에서 6개월 동안 저장한 후(표 19), 모든 제제에 걸쳐 % 상대적 효능의 유의미한 변화가 관찰되지 않았다. 40℃에서 6개월 동안 저장한 후, 제제 A, C, D 및 E에서 상대적 효능의 감소 경향이 관찰되었으나, 모든 결과는 허용 기준 내에서 유지되었다.

따라서, 분해가 관찰되지만, 항-TFPI 항체는 모든 제제에서 6개월 동안 가속화된 저장 조건인 25℃/60% RH 및 열 응력 저장 조건인 40℃/75% RH에서 활성을 유지한다(표 19).

교반 연구

1 ㎖의 제제 A 내지 F를, 스테이크 바늘을 가진 1 ㎖ 길이 주사기에 채움으로써 교반 연구를 수행하였다. 그 다음, 상기 주사기에 48시간의 교반 응력을 가하였다. 주사기를 수평 방향으로 놓고 300 rpm으로 설정된 궤도 진탕기를 이용하여 교반함으로써 주변 실온(약 22℃)에서 교반 연구를 수행하였다. 시간 제로(T0) 대조군은 진탕 응력에 노출되지 않았다.

300 rpm으로 48시간 동안 교반한 후, SE-HPLC, nrCGE, rCGE, iCE 및 메티오닌 산화에 의해 모든 제제(A 내지 F)에 걸쳐 유의미한 변화가 관찰되지 않았다. PS80 무함유 제제 F의 경우 눈에 보이는 입자의 유의미한 증가가 관찰되었고, 이는 DP 제제에서의 PS80의 중요성을 확인시켜준다. 대부분의 제제(A 내지 E)에서 외관의 변화는 관찰되지 않았다.

결론

이 연구의 목표는 디자인 공간을 확립하고 생성물 품질이 제제 구성 및 교반의 변화에 잘 견딘다는 것을 입증하는 것이었다. 6개월의 저장 후, 대부분의 제제(A 내지 E)에서 제제의 변화는 의도된 저장 온도인 2℃ 내지 8℃에서 DP 안정성에 최소한으로 영향을 미쳤다. PS80 무함유 제제(F)의 경우 눈에 보이는 입자 및 눈에 보이지 않는 입자의 유의미한 증가가 관찰되었고, 이는 DP 제제에서의 PS80의 중요성을 확인시켜준다. 25℃ 및 40℃에서, 생성물 품질의 변화는 25℃의 경우 3개월에서 시작되고 40℃의 경우 1개월에서 시작되는 것으로 관찰되었고, 이것은 선행 안정성 연구에 근거하여 가속화된 응력 조건 하에서 예상된다. 40℃ 저장의 결과는 단백질 응집이 디자인 공간의 모서리(B 및 C)에서 최대에 도달하고 탈아미드화가 높은 pH(B 및 E)에서 최대에 도달함을 암시한다. 모든 제제는 PS80 무함유 제제 F를 제외하고 교반 응력에 대한 강인성을 보여주었다. 이 결과는 과정에서 예상되는 범위를 벗어난 부형제 수준의 변화에 대한 DP의 강인성을 입증한다. 평가된 제제는 목표 부형제 수준을 함유하는 제제(대조군 제제 A)에 필적할만하므로, 제제 강인성을 입증한다.

상기 개별 단락에서 언급된 본 발명의 다양한 특징 및 실시양태는 적절한 경우 약간만 수정되어 다른 단락에 적용된다. 결과적으로, 한 단락에서 특정된 특징은 적절한 경우 다른 단락에서 특정된 특징과 조합될 수 있다. 특허, 특허출원, 논문, 교과서 및 인용된 서열 수탁번호, 및 이들에서 인용된 참고자료를 포함하는, 본원에서 인용된 모든 참고자료는 전체로서 본원에 참고로 포함된다. 정의된 용어, 용어 사용, 기재된 기법 등을 포함하나 이들로 제한되지 않는, 포함된 문헌 및 유사 자료 중 하나 이상이 본원과 상이하거나 모순되는 경우, 본원이 우선한다.

아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(ATCC)

PTA-122328

20150722

아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(ATCC)

PTA-122329

20150722

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Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Val Val Ile Phe 35 40 45 Tyr Asp Val Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Trp Trp Asp Gly Val Pro Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn 115 120 125 Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val 130 135 140 Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu 145 150 155 160 Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser 165 170 175 Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser 180 185 190 Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro 195 200 205 Thr Glu Cys Ser 210 <210> 23 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 23 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 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Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His 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Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 25 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 25 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Arg Ser Gly Ser Tyr Ser Tyr Phe Pro Asp Ser Val 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Gly Gly Tyr Asp Glu Gly Asp Ala Met Asp Ser Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 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Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445

Claims

약 15 ㎎/㎖ 내지 약 250 ㎎/㎖의, 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인(Kunitz Domain) 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체,
완충제,
폴리올,
계면활성제, 및
킬레이팅제
를 포함하고 약 5.0 내지 약 6.0의 pH를 가진 제제로서, 상기 에피토프가 서열번호 2의 넘버링에 따라 잔기 Ile105, Arg107 및 Leu131을 포함하는, 제제.
제1항에 있어서,
완충제가 히스티딘 또는 석시네이트 완충제인, 제제.
제1항 또는 제2항에 있어서,
완충제의 농도가 약 0.1 mM 내지 약 100 mM인, 제제.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
폴리올이 수크로스인, 제제.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
폴리올의 농도가 약 1 ㎎/㎖ 내지 약 300 ㎎/㎖인, 제제.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
계면활성제가 폴리소르베이트인, 제제.
제6항에 있어서,
폴리소르베이트가 폴리소르베이트 80(PS80)인, 제제.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
계면활성제의 농도가 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 10 ㎎/㎖인, 제제.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
킬레이팅제가 에데트산이나트륨 이수화물 또는 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)인, 제제.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
킬레이팅제의 농도가 약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 1.0 ㎎/㎖인, 제제.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
항체가
(i) (a) 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); (b) 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH), 및
(ii) (a) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)
을 포함하는, 제제.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
항체가 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는, 제제.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
항체가 ATCC 수탁번호 PTA-122329 하에 기탁된 플라스미드에 존재하는 삽입체에 의해 코딩된 VH 서열, 및 ATCC 수탁번호 PTA-122328 하에 기탁된 플라스미드에 존재하는 삽입체에 의해 코딩된 VL 서열을 포함하는, 제제.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
항체가 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 제제.
약 15 ㎎/㎖ 내지 약 250 ㎎/㎖의, 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체;
약 1 mM 내지 약 40 mM의 완충제;
약 1 ㎎/㎖ 내지 약 120 ㎎/㎖의 폴리올;
약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 1 ㎎/㎖의 계면활성제; 및
약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 1.0 ㎎/㎖의 킬레이팅제
를 포함하고 약 5.0 내지 약 6.0의 pH를 가진 제제로서, 상기 에피토프가 서열번호 2의 넘버링에 따라 잔기 Ile105, Arg107 및 Leu131을 포함하는, 제제.
약 15 ㎎/㎖ 내지 약 250 ㎎/㎖의, 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체;
약 1 mM 내지 약 40 mM의 완충제;
약 1 ㎎/㎖ 내지 약 120 ㎎/㎖의 폴리올;
약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 1 ㎎/㎖의 계면활성제; 및
약 0.01 ㎎/㎖ 내지 약 1.0 ㎎/㎖의 킬레이팅제
를 포함하고 약 5.0 내지 약 6.0의 pH를 가진 제제로서, 상기 항체가 (i) (a) 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); (b) 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH), 및 (ii) (a) 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 VL 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 제제.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
항체의 농도가 약 100 ㎎/㎖, 약 115 ㎎/㎖, 약 150 ㎎/㎖ 또는 약 158 ㎎/㎖인, 제제.
150 ㎎/㎖의, 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체,
20 mM의 히스티딘 완충제,
85 ㎎/㎖의 수크로스,
0.2 ㎎/㎖의 폴리소르베이트 80, 및
0.05 ㎎/㎖의 에데트산이나트륨 이수화물
을 포함하고 5.8의 pH를 가진 약학 제제로서, 상기 항체가 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 약학 제제.
150 ㎎/㎖의, 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체,
20 mM의 히스티딘 완충제,
85 ㎎/㎖의 수크로스,
0.2 ㎎/㎖의 폴리소르베이트 80, 및
0.05 ㎎/㎖의 에데트산이나트륨 이수화물
을 포함하고 5.8의 pH를 가진 약학 제제로서, 상기 항체가 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 약학 제제.
150 ㎎/㎖의, 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체,
20 mM의 히스티딘 완충제,
85 ㎎/㎖의 수크로스,
0.2 ㎎/㎖의 폴리소르베이트 80, 및
0.05 ㎎/㎖의 에데트산이나트륨 이수화물
을 포함하고 5.8의 pH를 가진 약학 제제로서, 상기 항체가 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 약학 제제.
150 ㎎/㎖의, 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체,
20 mM의 히스티딘 완충제,
85 ㎎/㎖의 수크로스,
0.2 ㎎/㎖의 폴리소르베이트 80, 및
0.05 ㎎/㎖의 에데트산이나트륨 이수화물
을 포함하고 5.8의 pH를 가진 약학 제제로서, 상기 항체가 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 약학 제제.
약 50 ㎎/㎖ 내지 약 250 ㎎/㎖의, 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체,
20 mM의 히스티딘 완충제,
85 ㎎/㎖의 수크로스,
0.2 ㎎/㎖의 폴리소르베이트 80, 및
0.05 ㎎/㎖의 에데트산이나트륨 이수화물
을 포함하고 5.8의 pH를 가진 약학 제제로서, 상기 항체가 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 약학 제제.
약 50 ㎎/㎖ 내지 약 250 ㎎/㎖의, 조직 인자 경로 억제제(TFPI)의 쿠니츠 도메인 2(K2)의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체,
20 mM의 히스티딘 완충제,
85 ㎎/㎖의 수크로스,
0.2 ㎎/㎖의 폴리소르베이트 80, 및
0.05 ㎎/㎖의 에데트산이나트륨 이수화물
을 포함하고 5.8의 pH를 가진 약학 제제로서, 상기 항체가 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 약학 제제.
제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
5±3℃에서 약 24개월 이상의 저장 수명을 가진 제제.
제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
(예를 들어, 크기 배제 HPLC에 의해 측정될 때) 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월 또는 6개월 이하 동안 40℃/75% RH에서 약 7% 미만의 HMMS를 가진 제제.
제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
(예를 들어, 크기 배제 HPLC에 의해 측정될 때) 1개월, 2개월 또는 3개월 이하 동안 40℃에서 약 3% 미만의 HMMS를 가진 제제.
제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
(예를 들어, 크기 배제 HPLC에 의해 측정될 때) 1개월 이하 동안 40℃에서 약 2% 미만의 HMMS를 가진 제제.
출혈 시간을 단축시키는 방법으로서, 치료 유효량의 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 따른 제제를, 이러한 단축을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
혈액 응고의 결핍 또는 출혈 장애를 치료하거나 예방하는 방법으로서, 치료 유효량의 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 따른 제제를, 이러한 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
혈우병 A, B 또는 C를 치료하거나 예방하는 방법으로서, 치료 유효량의 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 따른 제제를, 이러한 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
폰 빌레브란트병(vWD)을 치료하거나 예방하는 방법으로서, 치료 유효량의 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 따른 제제를, 이러한 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
TFPI의 활성을 감소시키는 방법으로서, 치료 유효량의 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 따른 제제를, 이러한 감소를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제28항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
제제가 피하 또는 정맥내로 대상체에게 투여되는, 방법.
제28항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서,
대상체가 인간인, 방법.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 따른 제제의, 대상체에서 출혈 장애를 치료하기 위한 의약의 제조를 위한 용도.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 따른 제제의, 대상체에서 혈우병 A, B 또는 C를 치료하기 위한 의약의 제조를 위한 용도.