CN114786717A - 稳定的水性抗-tfpi抗体制剂 - Google Patents

稳定的水性抗-tfpi抗体制剂 Download PDF

Info

Publication number
CN114786717A
CN114786717A CN202080079050.7A CN202080079050A CN114786717A CN 114786717 A CN114786717 A CN 114786717A CN 202080079050 A CN202080079050 A CN 202080079050A CN 114786717 A CN114786717 A CN 114786717A
Authority
CN
China
Prior art keywords
formulation
antibody
seq
amino acid
acid sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202080079050.7A
Other languages
English (en)
Inventor
T·J·克劳利
R·L·杜菲尔德
J·朱诺
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Pfizer Inc
Original Assignee
Pfizer Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pfizer Inc filed Critical Pfizer Inc
Publication of CN114786717A publication Critical patent/CN114786717A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/38—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against protease inhibitors of peptide structure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/32—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency specific for a neo-epitope on a complex, e.g. antibody-antigen or ligand-receptor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及抗体的药物制剂的领域。具体地，本发明涉及稳定的液体抗体制剂及其药物制剂和用途。本发明通过抗组织因子途径抑制剂(TFPI)抗体的水性制剂来例示。

Description

稳定的水性抗-TFPI抗体制剂
相关申请的交叉引用
本申请要求2019年11月13日提交的美国临时申请号62/934,781和2020年9月22日提交的美国临时申请号63/081,409 (其在此以其整体通过引用并入)的权益。
对序列表的引用
本申请经由EFS-Web电子申请且包括以.txt格式电子提交的序列表。该.txt文件含有标题为“PC72541A_Seq_Listing_ST25.txt”的序列表，其在2020年10月13日创建且具有42,550字节的大小。该.txt文件中含有的序列表是本说明书的一部分，并且在此以其整体通过引用并入。
发明领域
本发明涉及抗体的药物制剂的领域。具体地，本发明涉及稳定的液体抗体制剂及其药物制剂和用途。
背景
意欲用于治疗或预防用途的抗体制剂需要稳定剂以防止由于在使用之前储存和运输期间的一段时间内变性、脱酰胺、氧化或聚集的影响而丧失蛋白的活性或结构完整性。这些问题在对于治疗施用通常期望的高浓度抗体下加剧。大量的制剂选项可用，但没有一种方法或系统适用于所有蛋白(参见，例如，Wang等人, J.Pharm Sci. 96:1-26(2007))。
抗体制剂开发中的主要目标是维持抗体、溶解性、稳定性及其抗原结合的功效。为了使抗体保持生物活性，制剂必须保持至少抗体的抗原结合氨基酸的核心的构象完整性。避免溶液中的聚集体和颗粒也是特别期望的，其会需要在用于静脉内或皮下注射之前无菌过滤并限制施用途径。盐、表面活性剂、pH和张力剂(诸如糖)可用于克服聚集或变性问题。抗体制剂的配制需要仔细选择这些因素等以避免蛋白的变性和丧失抗原结合活性。因此，需要稳定的水性抗体制剂，其稳定地支持溶液中的高浓度的生物活性抗体，并且适合于肠胃外施用，包括静脉内、眼内、玻璃体内、动脉内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌肉内、骨内(intra-ossial)、腹腔内、皮内或皮下注射。
已经显示，组织因子途径抑制剂(TFPI)抗体可用于治疗和预防凝血缺陷或出血病症，诸如血友病A和B(参见例如，US 2017/0073428)。尽管液体抗体制剂是本领域已知的(参见，例如，WO2006/096491、WO 2010/032220、WO2013/186719、US 2009/0110681、US 2017/0360929和US 2018/0000933)，但需要提供TFPI抗体的稳定水性制剂以满足患有凝血缺陷或出血病症的患者的医疗需求。
为了所有目的，本文引用的所有出版物、专利和专利申请在此以其整体通过引用并入本文，其程度如同具体并单独地表明每个单独的出版物、专利或专利申请通过引用如此并入一样。在并入的文献和相似材料与本申请(包括但不限于定义的术语、术语应用、所述技术等)不同或相冲突的情况下，以本申请为准。
发明概述
提供了具有延长保质期的稳定的水性药物制剂，其包含组织因子途径抑制剂(TFPI)抗体(也称为抗-TFPI抗体)。证明了具有高TFPI抗体浓度的本发明的制剂是稳定的(例如，具有低水平的% HMMS(高分子质量物质)、% LMMS(低分子质量物质)、%片段和氧化)，并且因此适合于肠胃外施用。
本文公开和例举了结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的抗体(包括其抗原结合片段)的制剂。仅使用常规实验，本领域技术人员将认识到或能够确定本文所述的本发明的具体实施方案的许多等同方案。此类等同方案预期由以下实施方案(E)涵盖。
E1. 制剂，其包含：约15 mg/mL至约250 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的抗体、缓冲液、多元醇、表面活性剂和螯合剂，其中所述制剂具有约5.0至约6.0的pH。
E2. 制剂，其包含：约15 mg/mL至约250 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位的抗体、缓冲液、多元醇、表面活性剂和螯合剂，其中所述制剂具有约5.0至约6.0的pH，且其中根据SEQ ID NO:2的编号，所述表位包含残基Ile105、Arg107和Leu131。
E3. 如E1-E2中任一项中所述的制剂，其中所述缓冲剂选自：乙酸盐、琥珀酸盐、葡糖酸盐、柠檬酸盐、组氨酸、乙酸、磷酸盐、磷酸、抗坏血酸盐、酒石酸、马来酸、甘氨酸、乳酸盐、乳酸、抗坏血酸、咪唑、碳酸氢盐和碳酸、琥珀酸、苯甲酸钠、苯甲酸、葡糖酸盐、依地酸盐、乙酸盐、苹果酸盐、咪唑、tris、磷酸盐及其混合物。
E4. 如E3中所述的制剂，其中所述缓冲剂是组氨酸。
E5. 如E3中所述的制剂，其中所述缓冲剂是琥珀酸盐。
E6. 如E1-E5中任一项中所述的水性制剂，其中所述缓冲剂的浓度是约0.1 mM至约100 mM。
E7. 如E6中所述的制剂，其中所述缓冲剂的浓度是约1 mM至约40 mM或约10 mM至约40 mM。
E8. 如E7中所述的制剂，其中所述缓冲剂的浓度是约10 mM、约20 mM或约40 mM。
E9. 如E8中所述的制剂，其中所述缓冲剂的浓度是约20 mM。
E10. 如E1-E9中任一项中所述的制剂，其中所述多元醇选自甘露醇、海藻糖、山梨醇、赤藓醇、异麦芽糖、乳糖醇、麦芽糖醇、木糖醇、甘油、乳糖醇、丙二醇、聚乙二醇、肌醇、果糖、葡萄糖、甘露糖、蔗糖、山梨糖、木糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、右旋糖酐、支链淀粉、糊精、环糊精、可溶性淀粉、羟乙基淀粉、水溶性葡聚糖或其混合物。
E11. 如E10中所述的制剂，其中所述多元醇是蔗糖或海藻糖。
E12. 如E1-E11中任一项中所述的制剂，其中所述多元醇的浓度是约1 mg/mL至约300 mg/mL。
E13. 如E12中所述的制剂，其中所述多元醇的浓度是约1 mg/mL至约120 mg/mL、约50 mg/mL至约120 mg/mL或约60 mg/mL至约110 mg/mL。
E14. 如E13中所述的制剂，其中所述多元醇的浓度是约64 mg/mL、约85 mg/mL或约106 mg/mL。
E15. 如E1-E14中所述的制剂，其中所述多元醇的浓度是约85 mg/mL。
E16. 如E1-E15中任一项中所述的制剂，其中所述表面活性剂选自聚山梨醇酯、泊洛沙姆、triton、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate)、月桂基硫酸钠(sodiumlaurel sulfate)、辛基糖苷钠、月桂基-磺基甜菜碱、肉豆蔻基-磺基甜菜碱、亚油基-磺基甜菜碱、硬脂酰基-磺基甜菜碱、月桂基-肌氨酸、肉豆蔻基-肌氨酸、亚油基-肌氨酸、硬脂酰基-肌氨酸、亚油基-甜菜碱、肉豆蔻基-甜菜碱、鲸蜡基-甜菜碱、月桂酰胺丙基(lauroamidopropyl)-甜菜碱、椰油酰胺丙基-甜菜碱、亚油酰胺丙基(linoleamidopropyl)-甜菜碱、肉豆蔻酰胺丙基(myristamidopropyl)-甜菜碱、棕榈酰胺丙基(palmidopropyl)-甜菜碱、异硬脂酰胺丙基(isostearamidopropyl)-甜菜碱、肉豆蔻酰胺丙基-二甲胺、棕榈酰胺丙基-二甲胺、异硬脂酰胺丙基-二甲胺、甲基椰油酰基牛磺酸钠、甲基油基-牛磺酸二钠、二羟基丙基PEG 5亚油基氯化铵、聚乙二醇、聚丙二醇、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯21、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯61、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯81、聚山梨醇酯85、PEG3350及其混合物。
E17. 如E16中所述的制剂，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯80。
E18. 如E1-E17中任一项中所述的制剂，其中所述表面活性剂的浓度是约0.01mg/mL至约10 mg/ mL、约0.05 mg/mL至约5 mg/mL、约0.1 mg/mL至约1 mg/mL或约0.1 mg/ml至约0.5 mg/mL。
E19. 如E18中所述的制剂，其中所述表面活性剂的浓度是约0.1 mg/ml、约0.2mg/ mL或约0.3 mg/mL。
E20. 如E19中所述的制剂，其中所述表面活性剂的浓度是约0.2 mg/mL。
E21. 如E1-E20中任一项中所述的制剂，其中所述制剂不含任何表面活性剂(例如，聚山梨醇酯80)。
E22. 如E1-E21中任一项中所述的制剂，其中所述螯合剂选自乙二胺四乙酸(EDTA)、二乙三胺五乙酸5(DTPA)、次氮基三乙酸(NTA)、N-2-乙酰氨基-2-亚氨基二乙酸(ADA)、双(氨基乙基)乙二醇醚、N,N,N',N'-四乙酸(EGTA)、反式-二氨基环己烷四乙酸(DCTA)、谷氨酸、和天冬氨酸、N-羟基乙基亚氨基二乙酸(HIMDA)、N,N-双-羟基乙基甘氨酸(bicine)和N-(三羟基甲基甲基)10甘氨酸(tricine)、甘氨酰甘氨酸、去氧胆酸钠、乙二胺、丙二胺、二亚乙基三胺、三亚乙基四胺(trien)、依地酸二钠二水合物(或EDTA二钠二水合物或EDTA二钠盐)、EDTA草酸钙、苹果酸盐、柠檬酸、柠檬酸一水合物、和柠檬酸三钠-二水合物、8-羟基喹啉(hydroxyquinolate)、氨基酸、组氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、肽、多肽和蛋白及其混合物。
E23. 如E22中所述的制剂，其中所述螯合剂是依地酸二钠二水合物。
E24. 如E1-E23中任一项中所述的制剂，其中所述螯合剂的浓度是约0.01 mg/mL至约50 mg/mL、约0.01 mg/mL至约10 mg/mL、约0.01 mg/mL至约1 mg/mL或约0.02 mg/mL至约0.08 mg/mL。
E25. 如E24中所述的制剂，其中所述螯合剂的浓度是约0.038 mg/mL、约0.05 mg/mL或约0.063 mg/mL。
E26. 如E25中所述的制剂，其中所述螯合剂的浓度是约0.05 mg/mL。
E27. 如E1-E26中任一项中所述的制剂，其中所述制剂具有约5.0至6.6或约5.2至6.4的pH。
E28. 如E27中所述的制剂，其中所述制剂具有约5.2、5.8或6.4的pH。
E29. 如E27中所述的制剂，其中所述制剂具有约5.5或5.8的pH。
E30. 如E1-E29中任一项中所述的制剂，其中所述抗体不结合TFPI的Kunitz结构域1 (K1)。
E31. 如E2-E30中任一项中所述的制剂，其中根据SEQ ID NO:2的编号，所述表位进一步包含残基Cys106、Gly108、Cys130、Leu131和Gly132。
E32. 如E2-E31中任一项中所述的制剂，其中根据SEQ ID NO:2的编号，所述表位进一步包含Asp102、Arg112、Tyr127、Gly129、Met134和Glu138。
E33. 如E2-E32中任一项中所述的制剂，其中根据SEQ ID NO:2的编号，所述表位不包含：E100、E101、P103、Y109、T111、Y113、F114、N116、Q118、Q121、C122、E123、R124、F125、K126和L140。
E34. 如E2-E32中任一项中所述的制剂，其中根据SEQ ID NO:2的编号，所述表位不包含：D31、D32、P34、C35、K36、E100、E101、P103、Y109、K126和G128。
E35. 如E1-E34中任一项中所述的制剂，其中所述抗体包含重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)包含：
(a) VH互补决定区1 (CDR-H1)，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；
(b) VH互补决定区2 (CDR-H2)，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；和
(c) VH互补决定区3 (CDR-H3)，其包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列。
E36. 如E1-E35中任一项中所述的制剂，其中所述抗体包含VH，所述VH包含与选自SEQ ID NO:16、18和20的氨基酸序列具有至少90%、至少95%或至少99%同一性的氨基酸序列。
E37. 如E1-E36中任一项中所述的制剂，其中所述抗体包含VH，所述VH包含选自SEQ ID NO:16、18和20的氨基酸序列。
E38. 如E1-E37中任一项中所述的制剂，其中所述抗体包含VH，所述VH包含SEQ IDNO:16的氨基酸序列。
E39. 如E1-E37中任一项中所述的制剂，其中所述抗体包含VH，所述VH包含SEQ IDNO:18的氨基酸序列。
E40. 如E1-E37中任一项中所述的制剂，其中所述抗体包含VH，所述VH包含SEQ IDNO:20的氨基酸序列。
E41. 如E1-E40中任一项中所述的制剂，其中所述抗体包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区(VL)包含：
(a) VL互补决定区1 (CDR-L1)，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；
(b) VL互补决定区2 (CDR-L2)，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；和
(c) VL互补决定区3 (CDR-L3)，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。
E42. 如E1-E41中任一项中所述的制剂，其中所述抗体包含VL，所述VL包含与SEQID NO:11具有至少90%、至少95%或至少99%同一性的氨基酸序列。
E43. 如E1-E42中任一项中所述的制剂，其中所述抗体包含VL，所述VL包含SEQ IDNO:11的氨基酸序列。
E44. 如E1-E43中任一项中所述的制剂，其中所述抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。
E45. 如E1-E43中任一项中所述的制剂，其中所述抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列。
E46. 如E1-E43中任一项中所述的制剂，其中所述抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
E47. 如E1-E46中任一项中所述的制剂，其中所述抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。
E48. 如E1-E47中任一项中所述的制剂，其中所述抗体包含：
(i)重链可变区(VH)，其包含：(a) VH互补决定区1 (CDR-H1)，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；(b) VH互补决定区2 (CDR-H2)，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；和(c) VH互补决定区3 (CDR-H3)，其包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，和(ii)轻链可变区(VL)，其包含：(a) VL互补决定区1 (CDR-L1)，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；(b) VL互补决定区2 (CDR-L2)，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；和(c) VL互补决定区3 (CDR-L3)，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。
E49. 如E48中所述的制剂，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VL。
E50. 如E1-E49中任一项中所述的制剂，其中所述抗体包含由以ATCC登录号PTA-122329保藏的质粒中存在的插入物编码的VH序列。
E51. 如E1-E50中任一项中所述的制剂，其中所述抗体包含由以ATCC登录号PTA-122328保藏的质粒中存在的插入物编码的VL序列。
E52. 如E1-E51中任一项中所述的制剂，其中所述抗体包含由以ATCC登录号PTA-122329保藏的质粒中存在的插入物编码的序列和由以ATCC登录号PTA-122328保藏的质粒中存在的插入物编码的序列。
E53. 如E1-E52中任一项中所述的制剂，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链，且包含：包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链。
E54. 如E48中所述的制剂，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VL。
E55. 如E54中所述的制剂，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链，且包含：包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链。
E56. 如E48中所述的制剂，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VL。
E57. 如E56中所述的制剂，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的重链，且包含：包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链。
E58. 如E1、E3-E29中任一项中所述的制剂，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链，且包含：包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的轻链。
E59. 如E1、E3-E29中任一项中所述的制剂，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链，且包含：包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链。
E60. 如E1-E59中任一项中所述的制剂，其中所述抗体具有至少25小时、至少29小时、至少30小时、至少35小时、至少40小时、至少50小时、至少55小时、至少60小时、至少65小时、至少70小时、至少75小时、至少80小时、至少85小时、至少90小时、至少95小时、至少100小时、至少105小时、至少110小时、至少115小时、至少120小时或至少125小时的血清半衰期。
E61. 如E1-E60中任一项中所述的制剂，其中所述抗体具有约5x10-7 M至约5x10-11M的结合亲和力(KD)。
E62. 如E1-E61中任一项中所述的制剂，其中所述抗体具有相对于静脉内生物利用度的至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%的皮下(SC)生物利用度。
E63. 如E1-E62中任一项中所述的制剂，其中所述抗体的浓度是约20 mg/mL、25mg/mL、50 mg/mL、75 mg/mL、100 mg/ml、125 mg/ml、150 mg/mL、175 mg/mL、200 mg/ml、225mg/ml或250 mg/mL。
E64. 水性制剂，其包含：约150 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位的抗体、约20 mM琥珀酸盐或组氨酸缓冲液；约85 mg/mL蔗糖或海藻糖；约0.2 mg/mL聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯20；约0.05 mg/mL依地酸二钠二水合物或乙二胺四乙酸(EDTA)；其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链可变区；且其中所述制剂具有约5.5或5.8的pH。
E65. 药物制剂，其包含：150 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位的抗体、20 mM组氨酸缓冲液、85 mg/mL蔗糖、0.2 mg/mL聚山梨醇酯80、0.05 mg/mL依地酸二钠二水合物，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链可变区；且其中所述制剂具有5.8的pH。
E66. 药物制剂，其包含：150 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位的抗体、20 mM组氨酸缓冲液、85 mg/mL蔗糖、0.2 mg/mL聚山梨醇酯80、0.05 mg/mL依地酸二钠二水合物，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链，且包含：包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链；且其中所述制剂具有5.8的pH。
E67. 药物制剂，其包含：约50 mg/mL至约250 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位的抗体、20 mM组氨酸缓冲液、85 mg/mL蔗糖、0.2 mg/mL聚山梨醇酯80、0.05 mg/mL依地酸二钠二水合物，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链，且包含：包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的轻链；且其中所述制剂具有5.8的pH。
E68. 药物制剂，其包含：约50 mg/mL至约250 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位的抗体、20 mM组氨酸缓冲液、85 mg/mL蔗糖、0.2 mg/mL聚山梨醇酯80、0.05 mg/mL依地酸二钠二水合物，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链，且包含：包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链；且其中所述制剂具有5.8的pH。
E69. 药物制剂，其包含：150 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位的抗体、10 mM组氨酸缓冲液、64 mg/mL蔗糖、0.1 mg/mL聚山梨醇酯80、0.038 mg/mL依地酸二钠二水合物，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链可变区；且其中所述制剂具有6.4的pH。
E70. 药物制剂，其包含：150 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位的抗体、40 mM组氨酸缓冲液、106 mg/mL蔗糖、0.3 mg/mL聚山梨醇酯80、0.063 mg/mL依地酸二钠二水合物，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链可变区；且其中所述制剂具有5.2的pH。
E71. 药物制剂，其包含：150 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位的抗体、10 mM组氨酸缓冲液、64 mg/mL蔗糖、0.1 mg/mL聚山梨醇酯80、0.038 mg/mL依地酸二钠二水合物，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链可变区；且其中所述制剂具有5.2的pH。
E72. 药物制剂，其包含：150 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位的抗体、20 mM组氨酸缓冲液、85 mg/mL蔗糖、0.05 mg/mL依地酸二钠二水合物，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链可变区；且其中所述制剂具有5.8的pH。
E73. 如E72中所述的药物制剂，其中所述制剂不含表面活性剂(例如，聚山梨醇酯80)。
E74. 如E1-E73中任一项中所述的制剂，其中所述制剂具有至少约1个月、约3个月、约4个月、约6个月、约12个月、约24个月、约36个月、约48个月或约60个月(例如，在约-20℃下，在约5℃下，在约25℃下，或在约40℃下)的保质期。
E75. 如E1-E74中任一项中所述的制剂，其中所述制剂是水性制剂。
E76. 如E1-E75中任一项中所述的制剂，其中所述制剂是药物制剂。
E77. 缩短出血时间的方法，其包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的如E1-E76中任一项中所述的制剂。
E78. 治疗或预防凝血缺陷或出血病症的方法，其包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的如E1-E76中任一项中所述的制剂。
E79. 治疗或预防血友病A、B或C的方法，其包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的如E1-E76中任一项中所述的制剂。
E80. 治疗或预防冯维勒布兰德氏病(vWD)的方法，其包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的如E1-E76中任一项中所述的制剂。
E81. 用于降低TFPI的活性的方法，其包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的如E1-E76中任一项中所述的制剂。
E82. 如E77-E81中任一项中所述的方法，其中所述受试者患有或易患凝血缺陷或出血病症。
E83. 如E77-E82中任一项中所述的方法，其中所述受试者患有或易患血友病A、B或C。
E84. 如E77-E83中任一项中所述的方法，其中所述受试者患有或易患血友病A或B。
E85. 如E77-E82中任一项中所述的方法，其中所述受试者患有或易患冯维勒布兰德氏病(vWD)。
E86. 如E77-E82中任一项中所述的方法，其中所述受试者患有或易患血小板病症。
E87. 如E77-82中任一项中所述的方法，其中所述受试者患有或易患因子VII缺乏症。
E88. 如E77-E82中任一项中所述的方法，其中所述受试者患有或易患因子XI缺乏症。
E89. 如E77-E88中任一项中所述的方法，其进一步包括向所述受试者施用凝血剂。
E90. 如E89中所述的方法，其中所述凝血剂选自因子VIIa、因子VIII、因子IX、氨甲环酸和旁路剂(例如，FEIBA)。
E91. E1-E76中任一项的制剂在如E77-E90中任一项中所述的方法中的用途。
E92. 如E1-E76中任一项中所述的制剂，其用于如E77-E90中任一项中所述的方法中。
E93. 用于如E77-E90中任一项中所述的方法中的制剂，其包含：150 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位的抗体、20 mM组氨酸缓冲液、85 mg/mL蔗糖、0.2 mg/mL聚山梨醇酯80、0.05 mg/mL依地酸二钠二水合物，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链，且包含：包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链，且其中所述制剂具有5.8的pH。
E94. 药物制剂，其由以下组成：150 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位的抗体、20 mM组氨酸缓冲液、85 mg/mL蔗糖、0.2mg/mL聚山梨醇酯80、0.05 mg/mL依地酸二钠二水合物，其中所述抗体包含：包含SEQ IDNO:19的氨基酸序列的重链，且包含：包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链；且其中所述制剂具有5.8的pH。
详述
本文公开了具有延长保质期的稳定的水性药物制剂，其包含组织因子途径抑制剂(TFPI)抗体。本申请基于以下发现：包含组氨酸缓冲液且具有pH 5.8的制剂稳定地支持高浓度的TFPI抗体。
具体而言，证明储存在pH 5.8的组氨酸缓冲水性制剂中的抗TFPI抗体具有低降解水平，如使用大小排阻高效液相色谱(SE-HPLC)通过%高分子量物质所测量(参见表1)。例如，在5±3℃的预期储存条件下，抗TFPI抗体稳定长达24个月，其中观察到几乎没有降解至没有降解(%HMMS范围为0.5至0.9)。尽管在40℃/75% RH的热应激储存条件下观察到一些降解(在1个月(即，4周)的%HMMS范围为0.9至1.2，且在3个月(即，12周)的%HMMS 范围为1.5至2.4)，这种降解小于对于其他IgG1抗体、诸如抗VEGF抗体所观察到的降解(参见表9；获得自US 2018/0000933的表11的抗VEGF抗体的数据。具体而言，在40℃下在具有pH 5.8的组氨酸缓冲制剂中储存1个月(即，4周)的抗VEGF抗体的高分子质量物质(%HMMS)的量为3.1(与抗TFPI抗体的0.9-1.2相比)，并且在40℃下在具有pH 5.8的组氨酸缓冲制剂中储存3个月(即，12周)的抗VEGF抗体的高分子质量物质(%HMMS)的量为5.6(与抗TFPI抗体的1.5-2.4相比)。因此，与抗VEGF抗体相比，pH 5.8的组氨酸缓冲制剂延迟降解，降低聚集体形成，并改进抗TFPI抗体的稳定性。该结果是令人惊讶和出乎意料的。
因此，在一个方面，提供了制剂，其包含：约15 mg/mL至约250 mg/mL的组织因子途径抑制剂(TFPI)抗体、缓冲液、多元醇、表面活性剂、螯合剂，且其中所述制剂具有约5.0至约6.0的pH。例如，在一些实施方案中，提供了制剂，其包含：约15 mg/ml至约250 mg/ml的TFPI抗体(例如，抗TFPI抗体)、约1 mM至约40 mM的缓冲液(例如，组氨酸缓冲液)、约1 mg/ml至约300 mg/ml的多元醇(例如，蔗糖)、约0.01 mg/ml至约10 mg/ml的表面活性剂(例如，聚山梨醇酯80)、约0.01 mg/ml至约50.0 mg/ml螯合剂(例如，二乙酸二钠二水合物)，其中所述制剂具有约5.0至约6.0的pH。在一些实施方案中，抗体浓度为约15 g/ml至约250 g/ml。在其他实施方案中，抗体浓度为约100 mg/mL、约15 mg/mL、约150 mg/mL或158 mg/mL。
一般技术
除非另有说明，否则本发明的实施会采用本领域技术内的分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术。此类技术在文献中充分解释，诸如，Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 第二版 (Sambrook等人, 1989)Cold Spring Harbor Press; Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, 编, 1984);Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A LaboratoryNotebook (J.E. Cellis, 编, 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I.Freshney, 编, 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather和P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: LaboratoryProcedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, 和D.G. Newell, 编, 1993-1998) J. Wileyand Sons; Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Handbook ofExperimental Immunology (D.M. Weir和C.C. Blackwell, 编); Gene TransferVectors for Mammalian Cells (J.M. Miller和M.P. Calos, 编, 1987); CurrentProtocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel等人, 编, 1987); PCR: ThePolymerase Chain Reaction, (Mullis等人, 编, 1994); Current Protocols inImmunology (J.E. Coligan等人, 编, 1991); Short Protocols in Molecular Biology(Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway和P. Travers, 1997);Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: a practical approach (D. Catty., 编,IRL Press, 1988-1989); Monoclonal antibodies: a practical approach (P.Shepherd和C. Dean, 编, Oxford University Press, 2000); Using antibodies: alaboratory manual (E. Harlow和D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press,1999); The Antibodies (M. Zanetti和J.D. Capra, 编, Harwood AcademicPublishers, 1995)。
定义
除非另有说明，否则以下术语应当理解为具有以下含义：术语“分离的分子”或“纯化的分子”(其中所述分子是例如多肽、多核苷酸或抗体)是这样的分子，凭借其起源或衍生的来源：(1)与在其天然状态中伴随它的天然相关的组分无关，(2)基本上不含来自相同物种的其他分子，(3)由来自不同物种的细胞表达，或(4)在自然界中不存在。因此，化学合成的或在不同于其天然起源细胞的细胞系统中表达的分子将与其天然相关的组分“分离”。还可以使用本领域众所周知的纯化技术，通过分离使分子基本上不含天然相关的组分。分子纯度或同质性可以通过本领域众所周知的许多方式测定。例如，可以使用聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶染色以使用本领域众所周知的技术使多肽可视化来测定多肽样品的纯度。为了某些目的，可以通过使用HPLC或纯化领域众所周知的其他方式来提供更高分辨率。
如本文所用，当其涉及抗体时，术语“制剂”意在描述其形式使得允许抗体的生物活性有效的抗体制剂。
术语“药物组合物”或“药物制剂”是指与药学上可接受的载体/赋形剂组合的抗体的制剂。如本文所用，“水性制剂”是指含有水作为组分的制剂。
“药学上可接受的载体/赋形剂”(媒介物、添加剂)是可以安全地施用于受试者以提供有效剂量的所用活性成分的那些。如本文所用的术语“赋形剂”或“载体”是指惰性物质，其通常用作药物的稀释剂、媒介物、防腐剂、粘合剂或稳定剂。包含此类载体的组合物通过众所周知的常规方法配制(参见，例如，Remington's Pharmaceutical Sciences, 第18版, A. Gennaro, 编, Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990; 和Remington, TheScience and Practice of Pharmacy 第20版. Mack Publishing, 2000)。如本文所用，术语“稀释剂”是指药学上可接受(对于施用于人安全和无毒)的溶剂，并且可用于制备本文所述的水性制剂。示例性稀释剂包括但不限于无菌水和抑菌的注射用水(BWFI)。
“抗体”是免疫球蛋白分子，其能够通过位于免疫球蛋白分子的可变区中的至少一个抗原识别位点，特异性结合靶标、诸如碳水化合物、多核苷酸、脂质、多肽等。如本文所用，除非另有说明，该术语不仅涵盖完整的多克隆或单克隆抗体，而且还涵盖与完整抗体竞争特异性结合的其任何抗原结合片段/部分、包含抗原结合部分的融合蛋白以及包含抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其他修饰的构型。抗原结合部分包括例如Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、结构域抗体(dAb，例如，鲨鱼和骆驼抗体)、包括互补决定区(CDR)的片段、单链可变片段抗体(scFv)、大抗体(maxibodies)、微抗体(minibodies)、胞内抗体、双抗体、三抗体、四抗体(tetrabodies)、v-NAR和双-scFv、以及含有足以赋予多肽特异性抗原结合的至少一部分免疫球蛋白的多肽。抗体包括任何类别的抗体，诸如IgG、IgA或IgM(或其亚类)，并且该抗体无需是任何特定类别。取决于其重链恒定区的抗体氨基酸序列，免疫球蛋白可以指定为不同类别。存在免疫球蛋白的五个主要类别：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且其中几种可以进一步分为亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定区分别称为α、δ、ε、γ和μ。不同类别的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是众所周知的。
抗体的“可变区”是指单独或组合的抗体轻链的可变区或抗体重链的可变区。如本领域中已知的，重链和轻链的可变区各自由通过三个互补决定区(CDR)(也称为高变区)连接的四个构架区(FR)组成，并参与形成抗体的抗原结合位点。如果期望主题可变区的变体(特别是在CDR以外(即在框架区中)的氨基酸残基中具有取代)，则可以通过比较主题可变区与其他抗体的可变区(其含有与主题可变区相同的规范类别中的CDR1和CDR2序列)来鉴定适当的氨基酸取代，优选保守氨基酸取代(Chothia和Lesk,J Mol Biol 196(4):901-917,1987)。
在某些实施方案中，CDR的明确描绘和包含抗体的结合位点的残基的鉴定通过解析抗体的结构和/或解析抗体-配体复合物的结构来完成。在某些实施方案中，这可以通过本领域技术人员已知的各种技术中的任一种(诸如X-射线晶体学)完成。在某些实施方案中，各种分析方法可以用来鉴定或估算CDR区。在某些实施方案中，各种分析方法可以用来鉴定或估算CDR区。此类方法的实例包括但不限于Kabat定义、Chothia定义、AbM定义、接触定义和构象定义。
Kabat定义是编号抗体中的残基的标准，并且通常用来鉴定CDR区。参见，例如，Johnson & Wu, 2000, Nucleic Acids Res., 28: 214-8。Chothia定义与Kabat定义相似，但是Chothia定义考虑某些结构环区的位置。参见，例如，Chothia等人, 1986, J. Mol.Biol., 196: 901-17; Chothia等人, 1989, Nature, 342: 877-83。AbM定义使用建模抗体结构的由牛津分子组(Oxford Molecular Group)制作的一套集成的计算机程序。参见，例如，Martin等人, 1989, Proc Natl Acad Sci (USA), 86:9268-9272; “AbM™, AComputer Program for Modeling Variable Regions of Antibodies,” Oxford, UK;Oxford Molecular, Ltd。AbM定义使用知识数据库和从头计算方法的组合从一级序列建模抗体的三级结构，诸如由Samudrala等人, 1999, “Ab Initio Protein StructurePrediction Using a Combined Hierarchical Approach,” 于PROTEINS, Structure,Function and Genetics Suppl., 3:194-198中描述的那些。接触定义是基于可用的复合物晶体结构的分析。参见，例如，MacCallum等人, 1996, J. Mol. Biol., 5:732-45。在本文中称为CDR的“构象定义”的另一种方法中，CDR的位置可以鉴定为对抗原结合做出焓贡献的残基。参见例如，Makabe等人, 2008, Journal of Biological Chemistry, 283:1156-1166。另外其他CDR边界定义可能并不严格遵循上述方法之一，但仍将与Kabat CDR的至少一部分重叠，尽管根据特定的残基或残基组不显著影响抗原结合的预测或实验发现，它们可以缩短或延长。如本文所用，CDR可以是指通过本领域已知的任何方法，包括方法的组合定义的CDR。本文使用的方法可以利用根据这些方法中的任一种定义的CDR。对于含有超过一个CDR的任何给定实施方案，可以根据Kabat、Chothia、延伸、AbM、接触和/或构象定义中的任一种来定义CDR。
如本领域中已知，抗体的“恒定区”是指单独或组合的抗体轻链的恒定区或抗体重链的恒定区。
如本文所用，“单克隆抗体”是指获得自基本上同质的抗体群体的抗体，即构成该群体的各抗体是相同的，除了可能少量存在的可能自然发生的突变。单克隆抗体是高度特异性的，针对单个抗原位点。此外，与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。修饰语“单克隆”表示抗体的特征为获得自基本上同质的抗体群体，并且不应当理解为要求通过任何特定方法产生抗体。例如，待根据本发明使用的单克隆抗体可以通过由Kohler和Milstein, 1975, Nature256: 495首先描述的杂交瘤方法制备，或者可以通过诸如美国专利号4,816,567中描述的重组DNA方法制备。单克隆抗体还可以分离自使用例如McCafferty等人, 1990, Nature348:552-554中描述的技术生成的噬菌体文库。
“人抗体”是这样的抗体，其具有对应于人产生的抗体的氨基酸序列和/或已使用如本文公开的制备人抗体的任何技术制备。人抗体的这个定义特别排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。如本文所用，术语“人抗体”意图包括具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。人抗体的该定义包括这样的抗体，其包含至少一个人重链多肽或至少一个人轻链多肽。本发明的人抗体可以包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或者通过体内体细胞突变引入的突变)，例如在CDR和特别是CDR3中。然而，如本文所用的术语“人抗体”不意图包括这样的抗体，其中已将源自另一哺乳动物物种、诸如小鼠的种系的CDR序列移植至人框架序列上。
术语“嵌合抗体”意指其中可变区序列源自一个物种且恒定区序列源自另一物种的抗体，诸如其中可变区序列源自小鼠抗体且恒定区序列源自人抗体的抗体。
如本文所用，“人源化”抗体是指非人(例如鼠)抗体的形式，其是嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(诸如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或抗体的其他抗原结合序列)，其含有源自非人免疫球蛋白的最小序列。优选地，人源化抗体是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体的互补决定区(CDR)的残基被替换为具有期望的特异性、亲和力和能力的来自非人物种(供体抗体)、诸如小鼠、大鼠或兔的CDR的残基。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv构架区(FR)残基被相应的非人残基代替。此外，人源化抗体可以包含这样的残基，其在受体抗体或引入的CDR或框架序列中均未发现，但是包括所述残基以进一步精制和优化抗体性能。一般而言，人源化抗体包含至少一个且通常两个可变结构域中的基本上所有，其中所有或基本上所有CDR区对应于非人免疫球蛋白的那些，并且所有或基本上所有FR区是人免疫球蛋白共有序列的那些。人源化抗体最佳地还包含至少一部分免疫球蛋白恒定区或结构域(Fc)，通常为人免疫球蛋白的恒定区或结构域(Fc)。优选具有如WO 99/58572中所述修饰的Fc区的抗体。其他形式的人源化抗体具有相对于原始抗体改变的一个或多个CDR(CDR L1、CDRL2、CDR L3、CDR H1、CDR H2或CDR H3)，其也称作“源自”来自原始抗体的一个或多个CDR的一个或多个CDR。
存在4个一般步骤来人源化单克隆抗体。这些是：(1)确定起始抗体轻链和重链可变结构域的核苷酸和预测的氨基酸序列，(2)设计人源化抗体，即决定在人源化过程期间使用哪个抗体框架区，(3)实际的人源化方法/技术，以及(4)人源化抗体的转染和表达。参见，例如，美国专利号4,816,567；5,807,715；5,866,692；6,331,415；5,530,101；5,693,761；5,693,762；5,585,089；和6,180,370。
已描述了许多包含源自非人免疫球蛋白的抗原结合位点的“人源化”抗体分子，包括具有融合至人恒定结构域的啮齿动物或修饰的啮齿动物V区以及它们相关的互补决定区(CDR)的嵌合抗体。参见，例如，Winter等人 Nature 349: 293-299 (1991), Lobuglio等人Proc. Nat. Acad. Sci. USA 86: 4220-4224 (1989), Shaw等人 J Immunol. 138:4534-4538 (1987), 和Brown等人 Cancer Res. 47: 3577-3583 (1987)。其他参考文献描述了在与适当的人抗体恒定结构域融合之前移植入人支持框架区(FR)的啮齿动物CDR。参见，例如，Riechmann等人 Nature 332: 323-327 (1988), Verhoeyen等人 Science 239:1534-1536 (1988), 和Jones等人 Nature 321: 522-525 (1986)。另一参考文献描述了由重组镶饰的啮齿动物框架区支持的啮齿动物CDR。参见，例如，欧洲专利公开号0519596。设计这些“人源化”分子以最小化不希望的对啮齿动物抗人抗体分子的免疫应答，这限制那些部分在人受体中的治疗应用的持续时间和有效性。例如，可以将抗体恒定区工程改造，使得其是免疫惰性的(例如，不触发补体裂解)。参见，例如PCT公开号WO99/58572；UK专利申请号9809951.8。还可以利用的人源化抗体的其他方法由Daugherty等人, Nucl. Acids Res.19: 2471-2476 (1991)公开以及在美国专利号6,180,377；6,054,297；5,997,867；5,866,692；6,210,671；和6,350,861中；以及在PCT公开号WO 01/27160中公开。
如本文所用，术语“重组抗体”意图包括通过重组方式制备、表达、产生或分离的所有抗体，例如使用转染入宿主细胞的重组表达载体表达的抗体，分离自重组、组合人抗体文库的抗体，分离自对人免疫球蛋白基因是转基因的动物(例如，小鼠)的抗体或制备的抗体，此类重组人抗体可以进行体外诱变。
术语“表位”是指能够在一个或多个抗体抗原结合区被抗体识别和结合的分子的部分。表位经常由分子的表面分组诸如氨基酸或糖侧链组成，并且具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。在一些实施方案中，所述表位可以是蛋白表位。蛋白表位可以是线性或构象的。在线性表位中，蛋白和相互作用分子(诸如抗体)之间的所有相互作用的点沿着蛋白的一级氨基酸序列线性存在。“非线性表位”或“构象表位”包含抗原性蛋白内的非邻接多肽(或氨基酸)，对该表位特异性的抗体与其结合。如本文所用的术语“抗原表位”被定义为通过本领域中众所周知的任何方法(例如通过常规免疫测定)测定的抗体可以特异性结合的抗原的一部分。一旦确定抗原上的期望表位，可以生成该表位的抗体，例如，使用本说明书中描述的技术。或者，在发现过程期间，抗体的生成和表征可阐明关于期望表位的信息。根据此信息，则可针对与相同表位的结合竞争性地筛选抗体。实现此目的的方法是进行竞争和交叉竞争研究以寻找彼此竞争或交叉竞争结合TFPI的抗体，例如，抗体竞争结合抗原。
术语“拮抗剂抗体”是指结合靶标并防止或减少该靶标的生物效应的抗体。在一些实施方案中，该术语可以表示减少其结合的靶标例如TFPI发挥生物学功能的抗体。
“优先结合”或“特异性结合”(本文中可互换使用)表位的抗体是本领域中充分理解的术语，并且测定这种特异性或优先结合的方法也是本领域中众所周知的。相比于与替代的细胞或物质反应或缔合，如果分子以更长的持续时间和/或以更大的亲和力更频繁、更迅速地与特定的细胞或物质反应或缔合，则该分子被称为表现出“特异性结合”或“优先结合”。相比于与其他物质的结合，如果抗体以更大的亲和力(affinity)、亲合力(avidity)、更容易和/或以更长的持续时间与靶标结合，则该抗体“特异性结合”或“优先结合”靶标。例如，特异性结合或优先结合TFPI表位的抗体是以比其结合其他序列而言以更大的亲和力、亲合力、更容易和/或以更长的持续时间结合该表位序列的抗体。通过阅读此定义也可理解，例如特异性或优先结合第一靶标的抗体(或部分或表位)可或不可特异性或优先结合第二靶标。因此，“特异性结合”或“优先结合”不一定需要尽管其可包括)专一结合。
各种测定形式可用于选择特异性结合目标分子的抗体或肽。例如，固相ELISA免疫测定、免疫沉淀、BiacoreTM (GE Healthcare, Piscataway, NJ)、KinExA、荧光活化的细胞分选(FACS)、Octet™ (FortéBio, Inc., Menlo Park, CA)和Western印迹分析是可用于鉴定与抗原或受体或其配体结合部分(其与同源配体或结合配偶体特异性结合)特异性反应的抗体的许多测定。通常，特异性或选择性反应将至少是背景信号或噪声的二倍，更通常是背景的超过10倍，更通常是背景的超过50倍，更通常是背景的超过100倍，又更通常是背景的超过500倍，甚至更通常是背景的超过1000倍，且甚至更通常是背景的超过10000倍。此外，当平衡解离常数(KD)≤7nM时，该抗体被称为“特异性结合”抗原。
术语“结合亲和力”在本文中被用作两个分子(例如抗体或其片段和抗原)之间非共价相互作用强度的量度。术语“结合亲和力”用于描述单价相互作用(内在活性)。
通过单价相互作用的两个分子(例如抗体或其片段和抗原)之间的结合亲和力可通过测定解离常数(KD)来定量。进而，可使用例如表面等离振子共振(SPR)方法(Biacore)通过测量复合物形成和解离的动力学来测定KD。对应于单价复合物的结合和解离的速率常数分别被称为缔合速率常数ka(或kon)和解离速率常数kd(或koff)。KD通过等式KD＝kd/ka而与ka和kd相关。解离常数的值可通过众所周知的方法直接测定，且甚至可通过诸如Caceci等人(1984, Byte 9:340-362)中所示的那些的方法来针对复合物混合物进行计算。例如，KD可使用双过滤器硝酸纤维素过滤器结合测定、诸如由Wong & Lohman (1993, Proc. Natl.Acad. Sci. USA 90: 5428-5432)公开的测定来建立。其他用于评估配体(诸如针对靶标抗原的抗体)的结合能力的标准测定是本领域中已知的，包括，例如ELISA、Western印记、RIA和流式细胞术分析，以及本文中其他地方例举的其他测定。抗体的结合动力学和结合亲和力也可通过本领域中已知的标准测定进行评价，诸如表面等离振子共振(SPR)(例如通过使用BiacoreTM系统或KinExA)。
特异性结合其靶标的抗体可以高亲和力(即，表现出如上文所讨论的低KD)结合其靶标，并且可以较低的亲和力结合其他非靶标分子。例如，抗体可以1×10-6M或更高(优选1×10-5M或更高，更优选1×10-4M或更高，更优选1×10-3M或更高，甚至更优选1×10-2M或更高)的KD结合非靶标分子。优选地，本发明的抗体能够以其与另一非TFPI分子的结合亲和力的至少2倍、10倍、50倍、100倍、200倍、500倍、1,000倍或10,000倍或更高倍的亲和力结合其靶标。
如本文所用，抗体的“免疫特异性”结合是指发生在抗体的抗原结合位点和该抗体识别的特异性抗原之间的抗原特异性结合相互作用(即，抗体在ELISA或其他免疫测定中与蛋白反应，并且不与无关蛋白可检测地反应)。
如本文关于抗体所用，术语“竞争”意指第一抗体或其抗原结合部分以与第二抗体或其抗原结合部分的结合非常相似的方式结合表位，使得与第一抗体在第二抗体不存在的情况下的结合相比，第一抗体与其同源表位结合的结果在第二抗体存在的情况下可检测地减少。其中第二抗体与其表位的结合在第一抗体存在的情况下也可检测地减少的替代情况是可以的，但不必如此。即，第一抗体可以抑制第二抗体结合其表位而第二抗体不抑制第一抗体结合其相应的表位。然而，当每个抗体可检测地抑制另一抗体与其同源表位或配体结合时，无论程度相同、更大或更小，认为抗体与彼此“交叉竞争”结合它们各自的表位。本发明涵盖竞争和交叉竞争抗体。无论这种竞争或交叉竞争发生的机制(例如，位阻、构象改变或与共同表位或其部分的结合)，基于本文提供的教导，技术人员会理解涵盖此类竞争和/或交叉竞争抗体，并且可以用于本文公开的方法。
如本文所用，术语“组织因子途径抑制剂或TFPI”是指保留TFPI的活性的至少一部分的任何形式的TFPI及其变体。TFPI是含有蛋白酶抑制剂的多价Kunitz结构域。表20中提供了人、小鼠、食蟹猴、兔和大鼠TFPI的示例性序列。人TFPI是细胞外糖蛋白，其具有两种主要形式，TFPI-α和TFPI-β。TFPIα(其为276个氨基酸的糖基化蛋白(MW 43kD))是最大的TFPI形式且由三个Kunitz样结构域和碱性羧基末端区域组成。可变剪切产生TFPI-β，其含有Kunitz结构域1(K1)和Kunitz结构域2(K2)，但含有缺乏Kunitz结构域3(K3)和碱性区域的替代的C-末端部分。TFPI-β以糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚通过翻译后修饰锚定至细胞膜。
TFPI的主要靶标是蛋白酶因子Xa (FXa)和因子VIIa (FVIIa)，其为凝血级联的起始阶段中的关键因子。生物化学分析已揭露K2是FXa的抑制剂，而K1抑制FVIIa-组织因子复合物。K3的作用不清楚，因为其似乎不具有直接的蛋白酶抑制活性，但可充当辅因子蛋白S的识别位点。TFPI-α所特有的C-末端结构域可能参与血小板表面上的凝血酶原酶的识别。
Kunitz结构域1 (K1)对应于SEQ ID NO:2的氨基酸残基26-76，且Kunitz结构域2(K2)对应于SEQ ID NO:2的残基91至147。来自其他TFPI同源物、同种型、变体或片段的K1和K2结构域可以通过针对SEQ ID NO:2的序列比对或结构比对来鉴定。
本公开的TFPI包括TFPI的任何天然存在的形式，其可以衍生自任何合适的生物体。例如，TFPI可以是哺乳动物TFPI，诸如人、小鼠、大鼠、非人类灵长类、牛、绵羊、犬、猫或猪TFPI。在某些实施方案中，TFPI是人TFPI。TFPI可以是成熟形式的TFPI(即，已在合适的细胞中经历翻译后加工的TFPI蛋白)。例如，这种成熟TFPI蛋白可以是糖基化的。
本公开的TFPI包括衍生自天然存在的TFPI的任何功能性片段或变体。TFPI的功能性片段可以是保留TFPI的活性(诸如抑制因子Xa (FXa)、抑制FVIIa-组织因子复合物的活性和/或作为凝血或止血的负调控剂发挥功能的能力)的TFPI的任何构成部分或部分。例如，功能性片段可包含Kunitz结构域，诸如TFPI的K1结构域、K2结构域、或K1和K2结构域二者。
与天然存在的TFPI相比，功能性变体可包含一个或多个突变且仍然保留天然存在的TFPI的活性，诸如抑制因子Xa (FXa)的能力或抑制FVIIa-组织因子复合物的活性的能力。例如，变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6或7可以具有各种程度的序列同一性，诸如与SEQID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQ IDNO:7中所述的序列具有至少60%、70%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性。
本发明的TPFI片段、变体、同种型和同源物应当维持重要的表位残基(诸如如果使用TFPI-23和TFPI-24抗体，则为Ile105、Arg107和Leu131)。此外，TFPI可包含5个或更多个、8个或更多个、10个或更多个、12个或更多个、或15个或更多个TFPI的K2结构域的表面可及的残基。表面可及的残基是具有高于40%的相对可及性的残基。
例如，对于TFPI的K2结构域(参见，例如SEQ ID NO:2)，以下氨基酸残基具有大于40%的相对可及性：94-95、98、100-110、118-121、123-124、131、134、138-142及144-145。TFPI可包含这些残基中的5个或更多个、8个或更多个、10个或更多个、12个或更多个、或15个或更多个，诸如包括这些残基中的5个或更多个、8个或更多个、10个或更多个、12个或更多个、或15个或更多个的TFPI片段。
TFPI中的特定氨基酸残基位置根据SEQ ID NO:2(人TFPIα K1K2K3)编号。然而，本发明并不限于SEQ ID NO:2。来自其他TFPI同源物、同种型、变体或片段的对应残基可根据本领域中已知的序列比对或结构比对来鉴定。例如，比对可通过手工或使用众所周知的序列比对程序，诸如ClustalW2或“BLAST 2序列”，使用默认参数完成。例如，SEQ ID NO:2的Arg107对应于小鼠TFPI K1K2(SEQ ID NO:4)的Arg104。
如本文所用，“TFPI拮抗剂抗体”(可互换地称为“TFPI抗体”或“抗TFPI抗体”)是指能够结合TFPI并抑制TFPI生物学活性和/或由TFPI信号传导介导的下游途径的抗体。TFPI拮抗剂抗体涵盖这样的抗体，其阻断、拮抗、抑制或降低(包括显著)TFPI生物活性，包括由TFPI信号传导介导的下游途径，诸如配体结合和/或引发对TFPI的细胞应答。为了本发明的目的，将明确地理解，术语“TFPI拮抗剂抗体”涵盖所有先前鉴定的术语、标题以及功能状态和特征，由此TFPI本身，TFPI生物学活性(包括但不限于其介导血液凝固的任何方面的能力)或生物活性的后果，在任何有意义的程度都基本上无效、降低或中和。在一些实施方案中，TFPI拮抗剂抗体结合TFPI并阻止TFPI结合和/或抑制组织因子(TF)/因子VIIa复合物。在其他实施方案中，TFPI抗体结合TFPI并防止TFPI结合至因子Xa和/或抑制因子Xa。本文提供了TFPI拮抗剂抗体的实例。
药物、制剂、化合物或药物组合物的“有效量”是足以实现有益或期望结果(包括临床结果，诸如目标病理状况的减轻或减少)的量。有效量可以在一次或多次施用中进行施用。对于本发明的目的，药物、化合物或药物组合物的有效量是足以治疗、改善或降低目标病理状况的强度的量。如在临床背景中所理解，药物、化合物或药物组合物的有效量可以或可以不与另一种药物、化合物或药物组合物结合实现。因此，在施用一种或多种治疗剂的背景下，可以考虑“有效量”，并且如果与一种或多种其他药剂结合，期望的结果可以实现或得到实现，则可以考虑以有效量给予单一药剂。
“治疗有效量”是指在必需的剂量和时间段下对达到期望的治疗结果有效的量，其在抗TFPI抗体的上下文中包括治疗或预防性预防靶标病理状况例如出血病症诸如血友病A、B或C。应当注意剂量值可以随待缓解的病况的严重程度而变化。应进一步理解，对于任何特定受试者，具体剂量方案应当根据个体需要以及施用组合物或监督组合物的施用的人的专业判断随时间调整，并且本文所示的剂量仅为示例性的，并不是为了限制请求保护的组合物的范围或实践。同样地，抗体或抗体部分的治疗有效量可以根据以下因素变化，诸如疾病状态、年龄、性别和个体的体重、抗体或抗体部分在个体中引发期望应答的能力、以及期望的抗体制剂的施用途径。治疗有效量还是其中治疗有益效果远远大于抗体或抗体部分的任何有毒或有害效果的量。
抗TFPI抗体的治疗有效量描述于例如2019年10月9日提交的PCT/IB2019/058597(其要求US 62/802,401和US 62/744,481的优先权)，其以其整体并入本文。在一些实施方案中，所述治疗有效量包括约300 mg的初始剂量，随后为约150 mg的后续每周(即，每周一次)剂量。在一些实施方案中，所述治疗有效量包括约150 mg的初始剂量和约150 mg的后续每周(即，每周一次)剂量。在一些实施方案中，所述治疗有效量包括约300 mg的初始剂量和约300 mg的后续每周(即，每周一次)剂量。在一些实施方案中，所述治疗有效量包括约450mg的初始剂量和约450 mg的后续每周(即，每周一次)剂量。
如本文所用，术语“治疗”是指治疗处理以及预防或防范措施，其中目标是预防或减慢(减轻)靶向的病理状况(例如，会受益于用抗体治疗的任何病况。这包括慢性和急性病症或疾病，包括使哺乳动物易于患有考虑的病症的那些病理状况。需要治疗的那些包括已经具有病况的那些以及倾向于具有病况的那些或者其中待预防病况的那些。如本文所用，“治疗”是获得有益或期望的临床结果的方法，所述临床结果包括但不限于以下中的一种或多种：包括减轻严重程度，缓解与病理状况相关的一种或多种症状。
如本文所用，为了治疗的目的，术语“受试者”或“个体”包括任何受试者，并且优选是需要治疗靶向的病理状况(例如，血友病)的受试者。为了预防的目的，所述受试者是任何受试者，并且优选是有风险或倾向于发展靶向的病理状况的受试者。术语“受试者”意图包括活生物体，例如，原核生物和真核生物。受试者的实例包括哺乳动物，例如人、狗、牛、马、猪、绵羊、山羊、猫、小鼠、兔、大鼠以及转基因非人动物。在本发明的具体实施方案中，所述受试者是人。
如本文所用，在本文中可互换使用的术语“多核苷酸”或“核酸”意指核苷酸核糖核苷酸或脱氧核苷酸或任一类型核苷酸的修饰形式的聚合物形式，并且可以是单链或双链形式。除非另有说明，否则“多核苷酸”或“核酸”序列涵盖其互补物。如本文所用，术语“分离的多核苷酸”或“分离的核酸”意指基因组、cDNA或合成起源或者它们的一些组合的多核苷酸，凭借其起源或衍生来源，分离的多核苷酸具有以下中的一种至三种：(1)与在自然界中发现“分离的多核苷酸”的多核苷酸的全部或一部分无关，(2)可操作地连接至其在自然界中不连接的多核苷酸，或(3)在自然界中不作为较大序列的部分出现。
本文中对“约”值或参数的提及包括(并描述)针对该值或参数本身的实施方案。例如，提及“约X”的描述包括对“X”的描述。数字范围包括定义范围的数字。一般而言，术语“约”是指变量的指示值以及在指示值的实验误差内(例如，平均值的95%置信区间内)或指示值的10%内(以较大者为准)的变量的所有值。
当本发明的方面或实施方案在马库什组或其他替代分组的方面进行描述时，本发明不仅涵盖作为整体列出的整个组，而且涵盖个别地该组的每个成员和主要组的所有可能的亚组，以及不存在一个或多个组成员的主要组。本发明还设想在请求保护的发明中的任何一个或多个组成员的明确排除。
当介绍本发明的要素或其优选实施方案时，冠词“一个/种(a)”、“一个/种(an)”、“该”和“所述”意指所述要素中的一个/种或多个/种。术语“包含(comprising)”、“包含(comprise)”、“包含(comprises)”、“包括”和“具有”意指包括，并且意指可以存在除了所列要素以外的额外要素。应理解，在本文中使用语言“包含”来描述实施方案的任何地方，还提供了在“由...组成”和/或“基本上由...组成”的方面描述的另外类似的实施方案。
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的具有相同含义。在冲突的情况下，将以本说明书(包括定义)为准。除非上下文另有要求，单数术语应当包括复数术语，并且复数术语应当包括单数术语。
本文描述了示例性方法和材料，尽管与本文所述的方法和材料类似或等效的那些也可以用于实施或测试本发明。所述材料、方法和实例仅仅是说明性的，且并不意欲是限制性的。
抗TFPI抗体制剂
本申请基于以下令人惊讶和出乎意料的观察结果：与其他IgG1抗体、诸如抗VEGF抗体相比，包含组氨酸缓冲液且具有pH 5.8的制剂延迟降解、减少聚集体形成并改进抗TFPI抗体的稳定性。
因此，在一个方面，本文提供了制剂，其包含：约15 mg/mL至约250 mg/mL的组织因子途径抑制剂(TFPI)抗体、缓冲剂、多元醇、表面活性剂、螯合剂，且其中所述制剂具有约5.0至约6.0的pH。在一些实施方案中，所述制剂包含：约15 mg/mL至约250 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位的抗体、缓冲剂、多元醇、表面活性剂、螯合剂，其中所述制剂具有约5.0至约6.0的pH，且其中根据SEQ ID NO:2的编号，所述表位包含残基Ile105、Arg107和Leu131。本文所述的制剂具有延长保质期，优选地至少约1个月、约4个月、约6个月、约12个月、约24个月、约36个月、约48个月或约60个月(例如，在约-70℃下，在约-20℃下，在约5℃下，在约25℃下或在约40℃下)。
在一些实施方案中，所述制剂包含至少一种TFPI拮抗剂抗体(即，抗TFPI抗体)。示例性TFPI拮抗剂抗体包括但不限于WO 2017/029583、WO 2010/017196、WO 2011/109452、WO2014/144577、WO 2010/072687、WO 2012/001087、WO 2014/140240和WO 2015/007880 (其各自均通过引用以其整体并入本文)中描述的那些。
在一些实施方案中，所述TFPI拮抗剂抗体选自TFPI 106 (也称为PF-06741086)，TFPI-23，TFPI-107，康赛珠单抗(concizumab，也称为mAb-2021，hz4F36)，2A8和2A8-200(参见，例如，US20170073428)。
在一些实施方案中，可以存在多于一种抗体。可以存在至少1种、至少2种、至少3种、至少4种、至少5种或更多种不同抗体。通常，两种或更多种不同抗体具有互相不负面影响的互补活性。一种或多种抗体还可以与用来增强和/或补充抗体的有效性的其他物质结合使用。
在一些实施方案中，所述抗体特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位，其中所述表位包含残基Ile105、Arg107和Leu131(根据SEQ ID NO:2的编号)。在一些实施方案中，所述抗TFPI抗体不结合TFPI的Kunitz结构域1 (K1)。在一些实施方案中，所述表位进一步包含残基Cys106、Gly108、Cys130、Leu131和Gly132 (根据SEQID NO:2的编号)。在一些实施方案中，所述表位进一步包含Asp102、Arg112、Tyr127、Gly129、Met134和Glu138 (根据SEQ ID NO:2的编号)。在一些实施方案中，所述表位不包含：E100、E101、P103、Y109、T111、Y113、F114、N116、Q118、Q121、C122、E123、R124、F125、K126和L140 (根据SEQ ID NO:2的编号)。在一些实施方案中，所述表位不包含：D31、D32、P34、C35、K36、E100、E101、P103、Y109、K126和G128 (根据SEQ ID NO:2的编号)。
在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区(VH)，其包含：
(a) VH互补决定区1 (CDR-H1)，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；
(b) VH互补决定区2 (CDR-H2)，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；和
(c) VH互补决定区3 (CDR-H3)，其包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗体包含VH，所述VH包含与选自SEQ ID NO:16、18和20的氨基酸序列具有至少90%、至少95%或至少99%同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含VH，所述VH包含选自SEQ ID NO:16、18和20的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗体包含轻链可变区(VL)，其包含：
(a) VL互补决定区1 (CDR-L1)，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；(b) VL互补决定区2 (CDR-L2)，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；和(c) VL互补决定区3 (CDR-L3)，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗体包含VL，所述VL包含与SEQ ID NO:11具有至少90%、至少95%或至少99%同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含VL，所述VL包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗体包含：
(i)重链可变区(VH)，其包含：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列，(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列，和(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，和
(ii)轻链可变区(VL)，其包含：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，和(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗体包含：包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述抗体包含：包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链，并且包含：包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链。
本发明的示例性抗体在2015年7月22日保藏于美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, Va.20110-2209, USA)。具有ATCC登录号PTA-122329的质粒载体mAb-TFPI-106VH包含编码抗体TFPI-106的重链可变区的DNA插入物，且具有ATCC登录号PTA-122328的质粒载体mAb-TFPI-106VL包含编码抗体TFPI-106的轻链可变区的DNA插入物。
在一些实施方案中，所述抗体包含：包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述抗体包含：包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链，并且包含：包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述抗体包含：包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的重链，并且包含：包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链。
在一些实施方案中，所述抗体包含：包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链，并且包含：包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，所述抗体包含：包含SEQID NO:25的氨基酸序列的重链，并且包含：包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链。
在一些实施方案中，所述抗体具有至少25小时、至少29小时、至少30小时、至少35小时、至少40小时、至少50小时、至少55小时、至少60小时、至少65小时、至少70小时、至少75小时、至少80小时、至少85小时、至少90小时、至少95小时、至少100小时、至少105小时、至少110小时、至少115小时、至少120小时或至少125小时的血清半衰期。在一些实施方案中，所述抗体具有至少25小时、至少29小时或至少30小时的血清半衰期。在一些实施方案中，所述抗体具有至少29小时的血清半衰期。在一些实施方案中，所述抗体具有至少30小时的血清半衰期。在一些实施方案中，所述抗体具有至少115小时、至少120小时或至少125小时的血清半衰期。
在一些实施方案中，所述抗体具有约5x10-7 M至约5x10-11 M的结合亲和力(KD)。在一些实施方案中，所述抗体具有约1x10 -8 M至约1x10-10 M (0.1至10 nm)的KD。在一些实施方案中，所述抗体具有KD ≤1nM、≤500 pM、≤250 pM、≤200 pM、≤100 pM、≤50 pM、≤20pM或≤10 pM。在一些实施方案中，所述抗体不具有低pM范围(即≤100pM)内的KD。在一些方面，KD通过表面等离振子共振测量。在一些方面，表面等离振子共振可以使用Biacore测量。在一些方面，SPR可以使用Biacore用捕获的抗体和溶液相人TFPI来测量。
在一些方面，相对于静脉内生物利用度，所述抗体的皮下生物利用度可以为至少10%。在一些方面，相对于静脉内生物利用度，所述抗体的皮下生物利用度可以为至少15%。在一些方面，相对于静脉内生物利用度，所述抗体的皮下生物利用度可以为至少20%。在一些方面，相对于静脉内生物利用度，所述抗体的皮下生物利用度可以为至少25%。在一些方面，相对于静脉内生物利用度，所述抗体的皮下生物利用度可以为至少27%。在一些方面，相对于静脉内生物利用度，所述抗体的皮下生物利用度可以为至少30%。在一些方面，相对于静脉内生物利用度，所述抗体的皮下生物利用度可以为至少35%。在一些方面，相对于静脉内生物利用度，所述抗体的皮下生物利用度可以为至少40%。在一些方面，相对于静脉内生物利用度，所述抗体的皮下生物利用度可以为至少50%。在一些方面，相对于静脉内生物利用度，所述抗体的皮下生物利用度可以为至少60%。在一些方面，相对于静脉内生物利用度，所述抗体的皮下生物利用度可以为至少70%。在一些方面，相对于静脉内生物利用度，所述抗体的皮下生物利用度可以为至少80%。在一些方面，相对于静脉内生物利用度，所述抗体的皮下生物利用度可以为至少90%。在一些方面，相对于静脉内生物利用度，所述抗体的皮下生物利用度可以为至少99%。
所述抗体可以以范围如下的浓度存在于所述制剂中：约0.1 mg/mL至约250 mg/mL，约15 mg/mL至250 mg/mL，约20 mg/mL至约175 mg/mL，或约25 mg/mL至约160 mg/mL。例如，在一些实施方案中，抗体的浓度为约0.5 mg/mL、约1 mg/mL、约2 mg/mL、约2.5 mg/mL、约3 mg/mL、约3.5 mg/mL、约4 mg/mL、约4.5 mg/mL、约5 mg/mL、约5.5 mg/mL、约6 mg/mL、约6.5 mg/mL、约7 mg/mL、约7.5 mg/mL、约8 mg/mL、约8.5 mg/mL、约9 mg/mL、约9.5 mg/mL、约10 mg/mL、约11 mg/mL、约12 mg/mL、约13 mg/mL、约14 mg/mL、约15 mg/mL、约16 mg/mL、约17 mg/mL、约18 mg/mL、约19 mg/mL、约20 mg/mL、约21 mg/mL、约22 mg/mL、约23 mg/mL、约24 mg/mL、约25 mg/mL、约26 mg/mL、约27 mg/mL、约28 mg/mL、约29 mg/mL、约30 mg/mL、约31 mg/mL、约32 mg/mL、约33 mg/mL、约34 mg/mL、约35 mg/mL、约36 mg/mL、约37 mg/mL、约38 mg/mL、约39 mg/mL、约40 mg/mL、约41 mg/mL、约42 mg/mL、约43 mg/mL、约44 mg/mL、约45 mg/mL、约46 mg/mL、约47 mg/mL、约48 mg/mL、约49 mg/mL、约50 mg/mL、约51 mg/mL、约52 mg/mL、约53 mg/mL、约54 mg/mL、约55 mg/mL、约56 mg/mL、约57 mg/mL、约58 mg/mL、约59 mg/mL、约60 mg/mL、约70 mg/mL、约80 mg/mL、约90 mg/mL、约100 mg/mL、约101mg/mL、约102 mg/mL、约102.5 mg/mL、约103 mg/mL、约103.5 mg/mL、约104 mg/mL、约104.5mg/mL、约105 mg/mL、约105.5 mg/mL、约106 mg/mL、约106.5 mg/mL、约107 mg/mL、约107.5mg/mL、约108 mg/mL、约108.5 mg/mL、约109 mg/mL、约109.5 mg/mL、约110 mg/mL、约111mg/mL、约112 mg/mL、约113 mg/mL、约114 mg/mL、约115 mg/mL、约116 mg/mL、约117 mg/mL、约118 mg/mL、约119 mg/mL、约120 mg/mL、约121 mg/mL、约122 mg/mL、约123 mg/mL、约124 mg/mL、约125 mg/mL、约126 mg/mL、约127 mg/mL、约128 mg/mL、约129 mg/mL、约130mg/mL、约131 mg/mL、约132 mg/mL、约133 mg/mL、约134 mg/mL、约135 mg/mL、约136 mg/mL、约137 mg/mL、约138 mg/mL、约139 mg/mL、约140 mg/mL、约141 mg/mL、约142 mg/mL、约143 mg/mL、约144 mg/mL、约145 mg/mL、约146 mg/mL、约147 mg/mL、约148 mg/mL、约149mg/mL、约150 mg/mL、约151 mg/mL、约152 mg/mL、约153 mg/mL、约154 mg/mL、约155 mg/mL、约156 mg/mL、约157 mg/mL、约158 mg/mL、约159 mg/mL、约160 mg/mL、约170 mg/mL、约180 mg/mL、约190 mg/mL、约200 mg/mL、约210 mg/mL、约220 mg/mL、约230 mg/mL、约240mg/mL或约250 mg/mL。在一些实施方案中，所述制剂中的抗体的浓度是约100 mg/mL、约115mg/mL、约150 mg/mL或约158 mg/mL。在一些实施方案中，所述制剂中的抗体的浓度是约150mg/mL。在一些实施方案中，所述制剂中的抗体的浓度是约155 mg/mL。在一些实施方案中，所述制剂中的抗体的浓度是约158 mg/mL。
根据本发明，缓冲液(例如，组氨酸或琥珀酸盐缓冲液)提供具有接近生理pH的pH的制剂用于减少对注射的疼痛或过敏性副作用的风险，并且提供增强的抗体稳定性以及对聚集、氧化和片段化的抗性。
缓冲液可以是例如但不限于乙酸盐、琥珀酸盐(丁二酸二钠六水合物)、葡糖酸盐、柠檬酸盐、组氨酸、乙酸、磷酸盐、磷酸、抗坏血酸盐、酒石酸、马来酸、甘氨酸、乳酸盐、乳酸、抗坏血酸、咪唑、碳酸氢盐和碳酸、琥珀酸、苯甲酸钠、苯甲酸、葡糖酸盐、依地酸盐、乙酸盐、苹果酸盐、咪唑、tris、磷酸盐及其混合物。在一些实施方案中，所述缓冲液是组氨酸或琥珀酸盐。在一些实施方案中，所述琥珀酸盐缓冲液包含琥珀酸二钠六水合物(碱性形式)和/或琥珀酸或其混合物。优选地，所述缓冲液是组氨酸，其中所述组氨酸缓冲液包含L-组氨酸、L-组氨酸一盐酸盐(也称为L-组氨酸一盐酸盐一水合物和/或L-组氨酸盐酸盐一水合物)或其混合物。
缓冲液的浓度可以范围为约0.1毫摩尔(mM)至约100mM。优选地，缓冲液的浓度为约0.5 mM至约50 mM，进一步优选约1 mM至约30 mM，更优选约1mM-约25 mM。优选地，缓冲液的浓度为约1mM、约2mM、约3mM、约4mM、约5mM、约6mM、约7mM、约8mM、约9mM、约10mM、约11mM、约12mM、约13mM、约14mM、约15mM、约16mM、约17mM、约18mM、约19mM、约20mM、约21mM、约22mM、约23mM、约24mM、约25mM、约30mM、约35mM、约40mM、约45mM、约50mM、约55mM、约60mM、约65mM、约70mM、约75mM、约80mM、约85mM、约90mM、约95mM或约100mM。在一些实施方案中，所述缓冲液是浓度为约20mM的组氨酸。在一些实施方案中，所述缓冲液是浓度约20mM的琥珀酸盐。
缓冲液的浓度还可以范围为约0.01mg/mL-约30mg/mL、约0.1mg/mL-约5mg/mL或约0.5mg/mL-约4mg/mL。例如，缓冲液的浓度为约0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.03mg/mL、约0.04mg/mL、约0.05mg/mL、约0.06mg/mL、约0.07mg/mL、0.08mg/mL、0.09mg/mL、约0.10mg/mL、0.11mg/mL、0.12mg/mL、0.13mg/mL、约0.14mg/mL、约0.15mg/mL、约0.16mg/mL、约0.17mg/mL、0.18mg/mL、0.19mg/mL、约0.20mg/mL、约0.25mg/mL、约0.3mg/mL、约0.4mg/mL、约0.5mg/mL、约0.6mg/mL、约0.7mg/mL、约0.8mg/mL、约0.9mg/mL、约1.0mg/mL、约2.0mg/mL、约3.0mg/mL、约4.0mg/mL、约5.0mg/mL、约6.0mg/mL、约7.0mg/mL、约8.0mg/mL、约9.0mg/mL、约10.0mg/mL、约11.0mg/mL、约12.0mg/mL、约13.0mg/mL、约14.0mg/mL、约15.0mg/mL、约16.0mg/mL、约17.0mg/mL、约18.0mg/mL、约19.0mg/mL、约20mg/mL、约21.0mg/mL、约22.0mg/mL、约23.0mg/mL、约24.0mg/mL、约25.0mg/mL、约26.0mg/mL、约27.0mg/mL、约28.0mg/mL、约29.0mg/mL或约30mg/mL。在一些实施方案中，所述制剂包含约0.5-5.0 mg/mL组氨酸缓冲液。在一些实施方案中，所述缓冲液是包含约0.1-1.5 mg/mL L-组氨酸和约1-3 mg/mL L-组氨酸一盐酸盐的组氨酸缓冲液。在一些实施方案中，所述缓冲液是包含1.12 mg/mL L-组氨酸和2.67 mg/mL L-组氨酸一盐酸盐的组氨酸缓冲液。在一些实施方案中，所述缓冲液是包含约0.5-5.0mg/mL琥珀酸二钠六水合物和约0.1-1.0mg/mL琥珀酸的琥珀酸盐缓冲液。在一些实施方案中，所述缓冲液是包含约4.08mg/mL琥珀酸二钠六水合物和约0.58mg/mL琥珀酸的琥珀酸盐缓冲液。在一些实施方案中，所述缓冲液是包含约2.362mg/mL琥珀酸的琥珀酸盐缓冲液。
在一些实施方案中，例如但不限制，所述多元醇可以具有少于约600kD(例如，在约120-约400kD的范围内)的分子量，并且包含多个羟基，包括糖(例如，还原和非还原糖或其混合物、糖或碳水化合物)、糖醇、糖酸或其盐或混合物。非还原糖的实例包括但不限于蔗糖、海藻糖及其混合物。在一些实施方案中，所述多元醇是甘露醇、海藻糖、山梨醇、赤藓醇、异麦芽糖、乳糖醇、麦芽糖醇、木糖醇、甘油、乳糖醇、丙二醇、聚乙二醇、肌醇或其混合物。在其他实施方案中，例如但不限制，所述多元醇可以是单糖、二糖或多糖，或任何前述的混合物。例如但不限制，所述糖或碳水化合物可以是果糖、葡萄糖、甘露糖、蔗糖、山梨糖、木糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、右旋糖酐、支链淀粉、糊精、环糊精、可溶性淀粉、羟乙基淀粉、水溶性葡聚糖或其混合物。
在一些实施方案中，所述多元醇选自甘露醇、海藻糖、山梨醇、赤藓醇、异麦芽糖、乳糖醇、麦芽糖醇、木糖醇、甘油、乳糖醇、丙二醇、聚乙二醇、肌醇、果糖、葡萄糖、甘露糖、蔗糖、山梨糖、木糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、右旋糖酐、支链淀粉、糊精、环糊精、可溶性淀粉、羟乙基淀粉、水溶性葡聚糖或其混合物。在一些实施方案中，所述多元醇是蔗糖或海藻糖。在一些实施方案中，所述多元醇是蔗糖。
所述制剂中多元醇的浓度范围为约1mg/mL至约300mg/mL、约1mg/mL至约200mg/mL或约1mg/mL至约120mg/mL。优选地，所述制剂中多元醇的浓度为约50mg/mL至约120mg/mL、约60mg/mL至约110mg/mL或约80mg/mL至约90mg/mL)。例如，所述制剂中多元醇的浓度为约0.5 mg/mL、约1 mg/mL、约2 mg/mL、约2.5 mg/mL、约3 mg/mL、约3.5 mg/mL、约4 mg/mL、约4.5 mg/mL、约5 mg/mL、约5.5 mg/mL、约6 mg/mL、约6.5 mg/mL、约7 mg/mL、约7.5 mg/mL、约8 mg/mL、约8.5 mg/mL、约9 mg/mL、约9.5 mg/mL、约10 mg/mL、约11 mg/mL、约12 mg/mL、约13 mg/mL、约14 mg/mL、约15 mg/mL、约16 mg/mL、约17 mg/mL、约18 mg/mL、约19 mg/mL、约20 mg/mL、约21 mg/mL、约22 mg/mL、约23 mg/mL、约24 mg/mL、约25 mg/mL、约26 mg/mL、约27 mg/mL、约28 mg/mL、约29 mg/mL、约30 mg/mL、约31 mg/mL、约32 mg/mL、约33 mg/mL、约34 mg/mL、约35 mg/mL、约36 mg/mL、约37 mg/mL、约38 mg/mL、约39 mg/mL、约40 mg/mL、约41 mg/mL、约42 mg/mL、约43 mg/mL、约44 mg/mL、约45 mg/mL、约46 mg/mL、约47 mg/mL、约48 mg/mL、约49 mg/mL、约50 mg/mL、约51 mg/mL、约52 mg/mL、约53 mg/mL、约54 mg/mL、约55 mg/mL、约56 mg/mL、约57 mg/mL、约58 mg/mL、约59 mg/mL、约60 mg/mL、约65 mg/mL、约70 mg/mL、约75 mg/mL、约80 mg/mL、约81 mg/mL、约82 mg/mL、约83 mg/mL、约84 mg/mL、约85 mg/mL、约86 mg/mL、约87 mg/mL、约88 mg/mL、约89 mg/mL、约90 mg/mL、约91 mg/mL、约92 mg/mL、约93 mg/mL、约94 mg/mL、约95 mg/mL、约96 mg/mL、约97 mg/mL、约98 mg/mL、约99 mg/mL、约100 mg/mL、约101 mg/mL、约102 mg/mL、约103 mg/mL、约104 mg/mL、约105mg/mL、约106 mg/mL、约107 mg/mL、约108 mg/mL、约109 mg/mL、约110 mg/mL、约111 mg/mL、约112 mg/mL、约113 mg/mL、约114 mg/mL、约115 mg/mL、约116 mg/mL、约117 mg/mL、约118 mg/mL、约119 mg/mL、约120 mg/mL、约121 mg/mL、约122 mg/mL、约123 mg/mL、约124mg/mL、约125 mg/mL、约126 mg/mL、约127 mg/mL、约128 mg/mL、约129 mg/mL、约130 mg/mL、约131 mg/mL、约132 mg/mL、约133 mg/mL、约134 mg/mL、约135 mg/mL、约136 mg/mL、约137 mg/mL、约138 mg/mL、约139 mg/mL、约140 mg/mL、约141 mg/mL、约142 mg/mL、约143mg/mL、约144 mg/mL、约145 mg/mL、约146 mg/mL、约147 mg/mL、约148 mg/mL、约149 mg/mL或约150 mg/mL。
在一些实施方案中，所述多元醇是浓度为约1mg/mL至约300mg/mL、约1mg/mL至约200mg/mL或约1mg/mL至约120mg/mL的蔗糖。优选地，所述制剂中蔗糖的浓度为约50mg/mL至约120mg/mL、约60mg/mL至约110mg/mL或约80mg/mL至约90mg/mL。在一些实施方案中，所述制剂中蔗糖的浓度为约85mg/mL。在一些实施方案中，所述制剂中蔗糖的浓度为约84mg/mL。在一些实施方案中，所述制剂中蔗糖的浓度为约90mg/mL。在一些实施方案中，所述多元醇是浓度为约84 mg/mL或约85 mg/mL或约90 mg/mL的海藻糖。
如本发明中所用，表面活性剂可以改变液体抗体制剂的表面张力。在某些实施方案中，所述表面活性降低液体抗体制剂的表面张力。在还有其他实施方案中，所述表面活性剂可以有助于改进所述制剂中任何抗体的稳定性。所述表面活性剂还可以减少配制抗体的聚集(例如，在运输和储存期间)和/或最小化所述制剂中的微粒形成和/或减少吸附(例如，吸附至容器)。例如，所述表面活性剂还可以在冷冻/解冻循环期间和之后改进抗体的稳定性。例如但不限制，所述表面活性剂可以是聚山梨醇酯、泊洛沙姆、triton、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate)、十二烷基硫酸钠(sodium laurel sulfate)、辛基糖苷钠、月桂基-磺基甜菜碱、肉豆蔻基-磺基甜菜碱、亚油基-磺基甜菜碱、硬脂酰基-磺基甜菜碱、月桂基-肌氨酸、肉豆蔻基-肌氨酸、亚油基-肌氨酸、硬脂酰基-肌氨酸、亚油基-甜菜碱、肉豆蔻基-甜菜碱、鲸蜡基-甜菜碱、月桂酰胺丙基(lauroamidopropyl)-甜菜碱、椰油酰胺丙基-甜菜碱、亚油酰胺丙基(linoleamidopropyl)-甜菜碱、肉豆蔻酰胺丙基(myristamidopropyl)-甜菜碱、棕榈酰胺丙基(palmidopropyl)-甜菜碱、异硬脂酰胺丙基(isostearamidopropyl)-甜菜碱、肉豆蔻酰胺丙基-二甲胺、棕榈酰胺丙基-二甲胺、异硬脂酰胺丙基-二甲胺、甲基椰油酰基牛磺酸钠、甲基油基-牛磺酸二钠、二羟基丙基PEG 5亚油基氯化铵、聚乙二醇、聚丙二醇及其混合物。例如但不限制，所述表面活性剂可以是聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯21、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯61、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯81、聚山梨醇酯85、PEG3350及其混合物。
所述表面活性剂的浓度通常范围为约0.01mg/mL至约10mg/mL、约0.01mg/mL至约5.0mg/mL、约0.01mg/mL至约2.0mg/mL、约0.01mg/mL至约1.5mg/mL、约0.01mg/mL至约1.0mg/mL、约0.01mg/mL至约0.5mg/mL、约0.01mg/mL至约0.4mg/mL、约0.01mg/mL至约0.3mg/mL、约0.01mg/mL至约0.2mg/mL、约0.01mg/mL至约0.15mg/mL、约0.01mg/mL至约0.1mg/mL、约0.01mg/mL至约0.05mg/mL、约0.1mg/mL至约1mg/mL、约0.1mg/mL至约0.5mg/mL或约0.1mg/mL至约0.3mg/mL。进一步优选地，所述表面活性剂的浓度为约0.05mg/mL、约0.06mg/mL、约0.07mg/mL、约0.08mg/mL、约0.09mg/mL、约0.1mg/mL、约0.15mg/mL、约0.2mg/mL、约0.3mg/mL、约0.4mg/mL、约0.5mg/mL、约0.6mg/mL、约0.7mg/mL、约0.8mg/mL、约0.9mg/mL或约1mg/mL。
在一些实施方案中，聚山梨醇酯是浓度范围为约0.1mg/mL-约0.3mg/mL (例如，0.2mg/mL)的聚山梨醇酯80。
如本发明中所用的螯合剂降低还原氧物质的形成，减少酸性物质(例如，脱酰胺作用)形成，减少抗体聚集，和/或减少抗体片段化，和/或减少本发明的制剂中的抗体氧化。例如，所述螯合剂可以是与金属离子形成至少一个键(例如，共价、离子或其他)的多齿配体，并且充当稳定剂与否则可能促进不稳定性的物质络合。
在一些实施方案中，所述螯合剂可以选自氨基多羧酸、羟基氨基羧酸、N-取代的甘氨酸、2-(2-氨基-2-氧乙基)氨基乙烷磺酸(BES)、去铁胺(DEF)、柠檬酸、烟酰胺和去氧胆酸盐及其混合物。在一些实施方案中，所述螯合剂选自乙二胺四乙酸(EDTA)、二乙三胺五乙酸5 (DTPA)、次氮基三乙酸(NTA)、N-2-乙酰氨基-2-亚氨基二乙酸(ADA)、双(氨基乙基)乙二醇醚、N,N,N',N'-四乙酸(EGTA)、反式-二氨基环己烷四乙酸(DCTA)、谷氨酸、和天冬氨酸、N-羟基乙基亚氨基二乙酸(HIMDA)、N,N-双-羟基乙基甘氨酸(bicine)和N-(三羟基甲基甲基)10甘氨酸(tricine)、甘氨酰甘氨酸、去氧胆酸钠、乙二胺、丙二胺、二亚乙基三胺、三亚乙基四胺(trien)、依地酸二钠二水合物(或EDTA二钠二水合物或EDTA二钠盐)、EDTA草酸钙、苹果酸盐、柠檬酸、柠檬酸一水合物、和柠檬酸三钠-二水合物、8-羟基喹啉(hydroxyquinolate)、氨基酸、组氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、肽、多肽和蛋白及其混合物。在一些实施方案中，所述螯合剂选自EDTA的盐，包括但不限于依地酸二钾、依地酸二钠、依地酸钙二钠、依地酸钠、依地酸三钠和依地酸钾；并且去铁胺(DEF)的合适的盐是甲磺酸去铁胺(DFM)，或其混合物。在可能的情况下，本发明中使用的螯合剂可以作为游离酸或游离碱形式或者化合物的盐形式存在，还可以作为化合物或相应的盐的无水、溶剂化或水合形式存在。
在一些实施方案中，所述螯合剂是EDTA。在一些实施方案中，所述螯合剂是EDTA的盐。在一些实施方案中，所述螯合剂是依地酸二钠二水合物。
所述螯合剂的浓度通常范围为约0.01mg/mL至约50mg/mL、约0.1mg/mL至约10.0mg/mL、约5mg/mL至约15.0mg/mL、约0.01mg/mL至约1.0mg/mL、约0.02mg/mL至约0.5mg/mL、约0.025mg/mL至约0.075mg/mL。进一步优选地，所述螯合剂的浓度通常范围为约0.01mM至约2.0mM、约0.01mM至约1.5mM、约0.01mM至约0.5mM、约0.01mM至约0.4mM、约0.01mM至约0.3mM、约0.01mM至约0.2mM、约0.01mM至约0.15mM、约0.01mM至约0.1mM、约0.01mM至约0.09mM、约0.01mM至约0.08mM、约0.01mM至约0.07mM、约0.01mM至约0.06mM、约0.01mM至约0.05mM、约0.01mM至约0.04mM、约0.01mM至约0.03mM、约0.01mM至约0.02mM、约0.02或约0.05mM至约0.01mM。优选地，所述螯合剂的浓度可以是约0.01mg/mL、约0.02mg/mL、约0.025mg/mL、约0.03mg/mL、约0.04mg/mL、约0.05mg/mL、约0.06mg/mL、约0.07mg/mL、约0.075mg/mL、约0.08mg/mL、约0.09mg/mL、约0.10mg/mL或约0.20mg/mL。进一步优选地，螯合剂的浓度是约0.025mg/mL、约0.03mg/mL、约0.035mg/mL、约0.04mg/mL、约0.045mg/mL、约0.05mg/mL、约0.055mg/mL、约0.06mg/mL、约0.065mg/mL、约0.07mg/mL或约0.075mg/mL。最优选地，所述螯合剂的浓度是约0.05mg/mL。
在一些实施方案中，所述螯合剂是浓度为约0.05 mg/mL的依地酸二钠二水合物。在一些实施方案中，所述螯合剂是浓度为约0.05 mg/mL的乙二胺四乙酸(EDTA)。
在一些实施方案中，所述pH可以在约pH 5.0至约6.6的范围内，优选地约pH 5.0至6.5或约5.0至6.0之间，且最优选地pH 5.2至5.8之间。在一些实施方案中，本发明的制剂的pH可以在选自约pH 5.2、5.3、5.4、5.5或5.6中的任一者和约pH 6.5、6.4、6.3、6.2、6.1、6.0、5.9、5.8或5.7中的任一者之间的范围内。在一些实施方案中，所述pH可以选自约pH5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4或7.5中的任一者的pH值。在一些实施方案中，所述pH是pH 5.8+/-0.5，并且在一些实施方案中，所述pH是pH 5.8+/-0.3。
在一些实施方案中，所述制剂可以包含防腐剂。优选地，所述防腐剂选自苯酚、间甲酚、苄醇、苯扎氯铵、苄索氯铵、苯氧基乙醇和对羟基苯甲酸甲酯。
所述防腐剂的浓度通常范围为约0.001mg/mL至约50mg/mL、约0.005mg/mL至约15.0mg/mL、约0.008mg/mL至约12.0mg/mL或约0.01mg/mL至约10.0mg/mL。优选地，所述防腐剂的浓度可以为约0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、约0.4mg/mL、约0.5mg/mL、约0.6mg/mL、约0.7mg/mL、0.8mg/mL、0.9mg/mL约1.0mg/mL、2.0mg/mL、3.0mg/mL、约4.0mg/mL、约5.0mg/mL、约6.0mg/mL、约7.0mg/mL、8.0mg/mL、9.0mg/mL、约9.1mg/mL、约9.2mg/mL、9.3mg/mL、9.4mg/mL、9.5mg/mL、9.6mg/mL、9.7mg/mL、9.8mg/mL、9.9mg/mL、10.0mg/mL。最优选地，所述防腐剂的浓度为约0.1mg/mL或9.0mg/mL。
在一些实施方案中，所述制剂不含防腐剂。
在一些实施方案中，所述抗体可以选自单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段(例如，Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、Fc、ScFv等)、嵌合抗体、双特异性抗体、异源缀合抗体、单链(ScFv)、其突变体、包含抗体部分的融合蛋白(例如，结构域抗体)、人源化抗体、人抗体以及包含所需特异性的抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其他修饰构型，包括抗体的糖基化变体、抗体的氨基酸序列变体和共价修饰的抗体。所述抗体可以是小鼠、大鼠、人或任何其他来源的(包括嵌合或人源化抗体)。在一些实施方案中，所述抗体是人抗体。优选地，所述抗体是分离的，进一步优选其是基本上纯的。当所述抗体是抗体片段时，这优选保留原始抗体的功能特征，即配体结合和/或拮抗剂或激动剂活性。
在一些实施方案中，抗体重链恒定区可以来自任何类型的恒定区，诸如IgG、IgM、IgD、IgA和IgE；以及任何同种型，诸如IgG1、lgG2、IgG3和IgG4。优选地，所述抗体是IgG1抗体。
根据本发明的一个进一步方面，提供了制剂，其包含以下或由以下组成：约15 mg/ml至约250 mg/ml的组织因子途径抑制剂(TFPI)抗体；约1 mM至约100 mM的缓冲液；约1mg/ml至约300 mg/ml的多元醇；约0.01 mg/ml至约10 mg/ml的表面活性剂；约0.01 mg/ml至约50.0 mg/ml的螯合剂；且其中所述制剂具有约5.0至约6.0的pH。在一些实施方案中，所述抗体包含：(i)重链可变区(VH)，其包含：(a) VH互补决定区1 (CDR-H1)，其包含SEQ IDNO:13的氨基酸序列；(b) VH互补决定区2 (CDR-H2)，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；和(c) VH互补决定区3 (CDR-H3)，其包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，和(ii)轻链可变区(VL)，其包含：(a) VL互补决定区1 (CDR-L1)，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；(b) VL互补决定区2 (CDR-L2)，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；和(c) VL互补决定区3 (CDR-L3)，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TFPI抗体包含：包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VH区和包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VL区。在一些实施方案中，所述抗TFPI抗体是TFPI-106 (也称为PF-06741086或马塔西单抗(marstacimab))。在一些实施方案中，所述缓冲液是组氨酸缓冲液，所述多元醇是蔗糖或海藻糖，所述表面活性剂是聚山梨醇酯(例如，聚山梨醇酯80)，和/或所述螯合剂是EDTA或依地酸二钠二水合物。在一些实施方案中，所述缓冲液是组氨酸缓冲液，所述多元醇是蔗糖，所述表面活性剂是聚山梨醇酯80，且所述螯合剂是依地酸二钠二水合物。
在一些实施方案中，本文公开的抗TFPI抗体药物物质的制剂可以储存在灭菌的具有乙烯乙酸乙烯酯单材料(EVAM)产物接触表面的乙烯乙酸乙烯酯(EVA)袋中。在一些实施方案中，本文公开的抗TFPI抗体药物物质的制剂可以储存在灭菌的高密度聚乙烯瓶(HDPE)中。在一些实施方案中，本文公开的抗TFPI抗体药物物质的制剂可以储存在不锈钢容器中。在一些实施方案中，本文公开的抗TFPI抗体药物产品的制剂可以储存在灭菌的小瓶或预填充的注射器(PFS)中。在一些实施方案中，本文公开的抗TFPI抗体药物产品的制剂可以储存在预填充的笔(PFP)中。
根据本发明的一个进一步方面，提供了制剂，其包含以下或由以下组成：约100mg/mL、约110 mg/mL、约115 mg/mL、约120 mg/mL、约130 mg/mL、约140 mg/mL、约150 mg/mL、约158 mg/mL、约160 mg/mL或约200 mg/mL的组织因子途径抑制剂抗体(例如，人抗TFPI抗体)；约1 mM至约100 mM的缓冲液；约1 mg/mL至约300 mg/mL的多元醇；约0.01 mg/mL至约10 mg/mL的表面活性剂；约0.01 mg/mL至约1.0 mg/mL的螯合剂；且其中所述制剂具有约5.0至约6.0的pH。在一些实施方案中，所述抗体包含：(i)重链可变区(VH)，其包含：(a) VH互补决定区1 (CDR-H1)，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；(b) VH互补决定区2 (CDR-H2)，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；和(c) VH互补决定区3 (CDR-H3)，其包含SEQ IDNO:15的氨基酸序列，和(ii)轻链可变区(VL)，其包含：(a) VL互补决定区1 (CDR-L1)，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；(b) VL互补决定区2 (CDR-L2)，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；和(c) VL互补决定区3 (CDR-L3)，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TFPI抗体是TFPI-106 (也称为PF-06741086或马塔西单抗)。
根据本发明的一个进一步方面，提供了制剂，其包含以下或由以下组成：约50 mg/mL至约160 mg/mL的组织因子途径抑制剂抗体(例如，人抗TFPI抗体)；约20 mM的缓冲液；约1 mg/ml至约120 mg/mL的多元醇；约0.1 mg/mL至约0.3 mg/mL的表面活性剂；约0.025 mg/mL至约0.075 mg/mL的螯合剂；且其中所述制剂具有约5.0至约6.0的pH。在一些实施方案中，所述抗体包含：(i)重链可变区(VH)，其包含：(a) VH互补决定区1 (CDR-H1)，其包含SEQID NO:13的氨基酸序列；(b) VH互补决定区2 (CDR-H2)，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；和(c) VH互补决定区3 (CDR-H3)，其包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，和(ii)轻链可变区(VL)，其包含：(a) VL互补决定区1 (CDR-L1)，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；(b) VL互补决定区2 (CDR-L2)，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；和(c) VL互补决定区3 (CDR-L3)，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TFPI抗体包含：包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VH区和包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VL区。在一些实施方案中，所述抗TFPI抗体是TFPI-106 (也称为PF-06741086或马塔西单抗)。在一些实施方案中，所述缓冲液是组氨酸缓冲液，所述多元醇是蔗糖，所述螯合剂是依地酸二钠二水合物，和/或所述表面活性剂是聚山梨醇酯80。在一些实施方案中，所述抗体的浓度是100 mg/mL、115 mg/mL、150 mg/mL或158 mg/mL。
在一些实施方案中，提供了水性制剂，其包含以下或由以下组成：约150 mg/mL的组织因子途径抑制剂抗体(例如，人抗TFPI抗体)；约20 mM的组氨酸缓冲液；约85 mg/mL的蔗糖；约0.2 mg/mL的聚山梨醇酯80；约0.05 mg/mL的依地酸二钠二水合物；且其中所述制剂具有约5.8的pH。在一些实施方案中，所述抗体包含：(i)重链可变区(VH)，其包含：(a) VH互补决定区1 (CDR-H1)，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；(b) VH互补决定区2 (CDR-H2)，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；和(c) VH互补决定区3 (CDR-H3)，其包含SEQ IDNO:15的氨基酸序列，和(ii)轻链可变区(VL)，其包含：(a) VL互补决定区1 (CDR-L1)，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；(b) VL互补决定区2 (CDR-L2)，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；和(c) VL互补决定区3 (CDR-L3)，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TFPI抗体包含：包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VH区和包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VL区。在一些实施方案中，所述抗TFPI抗体包含：包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，所述抗TFPI抗体是TFPI-106 (也称为PF-06741086或马塔西单抗)。
在一些实施方案中，如本文所述的制剂具有至少或多于约1个月、约3个月、约6个月、约12个月、约18个月、约24个月、约30个月、约36个月、约42个月、约48个月或约60个月(例如，在-20℃，在5℃、25℃或40℃下)的保质期。例如，在一些实施方案中，本发明的制剂具有至少约1个月、约3个月、约6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、13个月、14个月、15个月、16个月、17个月、18个月、19个月、20个月、21个月、22个月、23个月、24个月、25个月、26个月、27个月、28个月、29个月、30个月、31个月、32个月、33个月、34个月、35个月、36个月、37个月、38个月、39个月、40个月、41个月、42个月、43个月、44个月、45个月、46个月、47个月、48个月、49个月、50个月、51个月、52个月、53个月、54个月、55个月、56个月、57个月、58个月、59个月或60个月(例如，在-20℃，在5℃、25℃或40℃下)的保质期。在一些实施方案中，本文所述的制剂在5±3℃下具有至少约24个月的保质期。
在一些实施方案中，如本文所述的制剂在40℃/75% RH下持续长达1个月、2个月、3个月、4个月、5个月或6个月具有小于约7% HMMS (例如，如通过大小排阻HPLC所测量)。在一些实施方案中，如本文所述的制剂持续长达1个月、2个月或3个月具有小于约3% HMMS (例如，如通过大小排阻HPLC所测量)。在一些实施方案中，如本文所述的制剂持续长达1个月具有小于约2% HMMS (例如，如通过大小排阻HPLC所测量)。
在一些实施方案中，如本文所述的制剂在5±3℃下持续长达24个月具有小于约2% HMMS (例如，如通过大小排阻HPLC所测量)。在一些实施方案中，如本文所述的制剂在5±3℃下持续长达1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、12个月、18个月或24个月具有小于约1% HMMS (例如，如通过大小排阻HPLC所测量)。在一些实施方案中，如本文所述的制剂在5±3℃下持续长达24个月具有小于约2%片段(例如，如通过还原毛细管凝胶电泳所测量)。
除非另有说明，本文列出的浓度是在环境条件下，即在25℃和大气压下的浓度。
使用抗TFPI抗体制剂的方法
本文所述的制剂可用于各种应用，包括但不限于治疗性治疗方法。治疗方法包括将本发明的制剂施用于有此需要的受试者。
本发明的制剂的示例性治疗用途包括缩短有此需要的受试者中的出血时间，治疗或预防凝血缺陷或血液病症(例如，血友病A，血友病B，血友病C，冯维勒布兰德氏病(vonWillebrand Disease, vWD)，因子VII缺陷、因子VIII、因子IX或因子XI缺陷)，治疗或预防血小板减少症以及治疗或预防血小板病症(血小板功能或数量异常)。本文所述的制剂也可用于治疗不受控制的出血(适应症、诸如创伤和出血性中风中的不受控制的出血)。本文所述的制剂也可用于预防性治疗(例如在外科手术之前治疗或预防出血)。
具体而言，本文所述的制剂可用于治疗凝血缺乏或凝血缺陷或凝血的病症。例如，本文所述的制剂可用于减少或抑制TFPI与FXa的相互作用，或减少TF/FVIIa/FXa活性的TFPI-依赖性抑制。
因此，在一些实施方案中，所述受试者患有或易患凝血缺陷或血液病症，诸如以下：在一些实施方案中，所述受试者患有或易患血友病A、B或C。在一些实施方案中，所述受试者患有或易患血友病A或B。在一些实施方案中，所述受试者患有或易患血友病A，并且具有针对凝血因子VIII的中和抗体(即，抑制剂)。在一些实施方案中，所述受试者患有或易患血友病B，并且具有针对凝血因子IX的中和抗体(即抑制剂)。在一些实施方案中，所述受试者患有或易患血友病C，并且具有针对凝血因子XI的中和抗体(即抑制剂)。在一些实施方案中，所述受试者患有或易患冯维勒布兰德氏病(vWD)。在一些实施方案中，所述受试者患有或易患血小板病症。在一些实施方案中，所述受试者患有或易患凝血因子VII缺乏症。在一些实施方案中，所述受试者患有或易患凝血因子XI缺乏症。
包含本文所述的TFPI拮抗剂抗体或抗原结合部分的制剂可以与凝血剂组合使用。本发明提供了本发明的抗体与凝血剂的分开、同时或依次施用。在一些实施方案中，本文所述的制剂进一步包含凝血剂。凝血剂的实例包括但不限于因子VIIa、因子VIII、因子IX、氨甲环酸和旁路剂(例如，抗抑制剂凝血复合物或FEIBA)。
在一些实施方案中，提供了本发明的制剂用于制备用于缩短出血时间的药物的用途。
在一些实施方案中，本发明的制剂可以直接施用入血流、肌肉、组织、脂肪或受试者的内部器官。肠胃外施用的合适方式包括静脉内、眼内、玻璃体内、动脉内、腹腔内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌肉内、骨内(intra-ossial)、皮内和皮下。用于肠胃外施用的合适装置包括针(包括显微针、显微注射(microprojection)、可溶性针和其他微孔形成技术)注射器、不含针的注射器和输注技术。在一些实施方案中，向所述受试者静脉内或皮下施用本发明的制剂。在一些实施方案中，向所述受试者皮下施用本发明的制剂。在一些实施方案中，向所述受试者静脉内施用本发明的制剂。
在一些实施方案中，本发明的制剂的施用模式包括每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每七周一次、每八周一次、每九周一次、每十周一次、每十五周一次、每二十周一次、每二十五周一次或每二十六周一次施用一定剂量的制剂。在一些实施方案中，本文所述的制剂每个月一次、每两个月一次、每三个月一次、每四个月一次、每五个月一次或每六个月一次施用。在一些实施方案中，本文所述的制剂每天或每周(即，每周一次)施用。这种疗法的进展通过常规技术和测定容易监测。剂量施用方案可以随时间变化。
在一些实施方案中，本文所述的制剂以约300 mg的初始抗体剂量施用，随后以约150 mg的后续每周(即，每周一次)剂量施用。在一些实施方案中，本文所述的制剂以约150mg的抗体剂量每周(即，每周一次)施用。在一些实施方案中，本文所述的制剂以约300 mg的抗体剂量每周(即，每周一次)施用。在一些实施方案中，本文所述的制剂以约450 mg的抗体剂量每周(即，每周一次)施用。
为了本发明的目的，药物的适当剂量将取决于采用的抗体、待治疗的病症的类型和严重程度、施用药剂用于预防或治疗目的、先前的疗法、患者的临床历史和对药剂的应答以及主治医师的自行决定权。通常，临床医生将施用药物，直至达到实现期望结果的剂量。剂量可以凭经验确定。
提供以下实施例仅用于说明目的，并且不是为了以任何方式限制本发明的范围。实际上，根据前面的描述，除了本文显示和描述的修改之外的本发明的各种修改对本领域技术人员会变得显而易见，并且落入所附权利要求的范围内。
实施例
实施例1. 抗TFPI抗体的稳定性研究
本实施例举例说明了含有抗TFPI抗体的制剂在高密度聚乙烯(HDPE)瓶、小瓶和预填充注射器中的稳定性。
在20 mM组氨酸、85 mg/mL蔗糖、0.05 mg/mL依地酸二钠二水合物、0.2 mg/mL聚山梨醇酯80 (pH5.8)中制备100 mg/mL、115 mg/mL和150 mg/mL的抗TFPI抗体。在本实施例中，使用的抗TFPI抗体具有重链可变区(其具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列)和轻链可变区(其具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列)。
将115 mg/mL的抗TFPI抗体填充入HDPE瓶中，并在-20±5℃和5±3℃下储存至少3个月(即12周)的持续时间。
将100 g/mL和150 g/mL的抗TFPI抗体填充入I型玻璃小瓶中，用带涂层的塞子密封，用铝密封物盖住，并在5±3℃、25℃/60%相对湿度(RH)和40℃/75%相对湿度(RH)下以倒置方向储存至少3个月(即，12周)的持续时间。此外，还将150 mg/mL的抗TFPI抗体填充入2.25 mL和1 mL I型玻璃预填充的注射器(PFS)中，用带涂层的柱塞塞住，并在5±3℃、25℃/60% RH和40℃/75% RH下以水平方向储存至少3个月(即，12周)的持续时间。
然后分析样品的质量属性，所述质量属性通常用于监测蛋白降解。例如，分析由以下组成：用于评价高分子量物质(HMMS)的大小排阻高效液相色谱(SE-HPLC)、用于评价纯度和片段化的还原和非还原毛细管凝胶电泳(CGE)和用于评价电荷异质性、诸如酸性、碱性和主要物质的成像毛细管等电聚焦(iCE)。分析还包括使用抑制测定评估抗TFPI抗体的相对功效。
特定分析程序，包括药典和非药典方法，用于评价抗TFPI抗体的特征、纯度和相对功效。下面提供了分析程序的描述。结果总结在表1-8中。
外观(澄清度和颜色)：分别根据当前的欧洲药典程序，Ph. Eur. 2.2.1和Ph.Eur. 2.2.2，评价药物物质的澄清度和颜色。
pH：根据当前的USP程序<791>分析药物物质的pH。
通过UV的蛋白浓度：使用分光光度计，280 nm处的吸光度用于测定测试样品的浓度。PF-06741086的特定吸收系数或吸收率(a280) (下面给出)用于浓度计算。
Figure 214033DEST_PATH_IMAGE001
成像毛细管等电聚焦(iCE)：成像毛细管等电聚焦(iCE)方法用于评估电荷异质性。iCE基于蛋白种类在pH梯度(通过两性电解质在电场的影响下生成)中的电荷差异来分离所述蛋白种类，并用于监测产物电荷异质性。蛋白电荷种类在DC电压下聚焦在毛细管内，并用全毛细管成像在280 nm处进行检测。
大小排阻HPLC (SE-HPLC)：SE-HPLC方法用于测定产品纯度。将测试样品稀释并注入大小排阻柱。高分子量物质(HMMS)和单体的含量报告为所有蛋白相关峰的总面积百分比。
还原的毛细管凝胶电泳(CGE)：该方法用于测定还原蛋白的纯度。样品用SDS变性并在还原剂存在的情况下加热。蛋白被还原成重链和轻链，其在含有筛分介质的毛细管中进行电泳分离，并使用UV光谱学进行检测。该分离允许定量解析的重链和轻链以及大小相关的杂质。纯度报告为重链和轻链的总百分比。
非还原毛细管凝胶电泳(CGE)：该方法用于测定完整蛋白的纯度。样品用SDS变性并在烷化剂存在的情况下加热。蛋白在含有筛分介质的毛细管中进行电泳分离，并使用UV光谱学进行检测。该分离允许定量解析的完整IgG以及大小相关的杂质。纯度报告为IgG的百分比。
赖氨酰内切蛋白酶(Lys-C)作图：该方法用于确定抗TFPI抗体中位于含有甲硫氨酸残基的Fc-肽处的氧化百分比。使用赖氨酰内切蛋白酶(Lys-C)将抗TFPI抗体样品消化成肽片段。所得肽片段通过反相HPLC分离。Fc-肽和氧化的Fc-肽的分离允许测定和监测抗TFPI抗体的氧化百分比。
通过抑制测定的生物活性：抑制测定方法用于评估PF-06741086的体外生物活性。抑制测定表明PF-06741086能够抑制TFPI:FXa复合物形成，导致游离人凝血因子Xa (FXa)的增加，其进而导致游离FXa可用于凝血活性。
将TFPI添加至微量滴定板中。将PF-06741086参考材料和测试样品的稀释液添加至微量滴定板中，以允许抗体与其靶标的结合。然后将FXa添加至微量滴定板中并结合不被PF-06741086结合的可用TFPI，并形成TFPI:FXa复合物。使用显色底物Spectrozyme FXa检测游离FXa。在添加底物后，分光光度地测量比色应答。
数据分析的方法包括非线性曲线拟合以及标准曲线和样品曲线之间的平行度的评价。由平行曲线之间的IC50的偏移确定样品功效。通过将相对功效值乘以分配给一毫克(mg)参考材料的单位数来计算样品的比活性(以每PF-06741086的单位数表示)。
表1
Figure 500658DEST_PATH_IMAGE002
NMT = 不超过
NS = 未安排。
表2
Figure 77002DEST_PATH_IMAGE003
NS = 未安排。
表3
Figure 892511DEST_PATH_IMAGE004
NMT = 不超过
NS = 未安排。
表4
Figure 632934DEST_PATH_IMAGE005
NS = 未安排。
表5
Figure 942824DEST_PATH_IMAGE006
NS = 未安排。
表6
Figure 858827DEST_PATH_IMAGE007
NS = 未安排。
表7
Figure 579658DEST_PATH_IMAGE008
NS = 未安排。
表8
Figure 276219DEST_PATH_IMAGE009
NS = 未安排。
来自该研究的数据表明，高浓度(100 mg/mL至150 mg/mL)的抗TFPI抗体在20 mM组氨酸、85 mg/mL蔗糖、0.05 mg/mL依地酸二钠二水合物、0.2 mg/mL聚山梨醇酯80 (pH5.8)制剂中是稳定的。结果还表明，不同的容器/封闭系统(HDPE瓶，小瓶，PFS)不影响抗TFPI抗体的稳定性。
在研究中评估了5±3℃的预期储存条件、25℃/60% RH的加速储存条件和40℃/75% RH的热应激储存条件。在5±3℃的长期储存条件下，显示抗TFPI抗体稳定长达24个月，其中对于任何产品质量属性均未观察到显著差异。
在25℃/60% RH下3个月和在40℃/75% RH下1个月后观察到% HMMS的轻微增加。在40℃/75% RH下3个月时观察到降解，但幅度小于用其他IgG1抗体(诸如抗VEGF抗体)所见的降解。表9比较了抗TFPI抗体和抗VEGF抗体在40℃/75% RH下的% HMMS数据。使用合格的产品特异性SE-HPLC方法来定量每种抗体的%HMMS。
表9
Figure 576750DEST_PATH_IMAGE010
* 获得自US2018/0000933的表11的抗VEGF抗体的数据。
尽管观察到降解，但在20 mM组氨酸、85 mg/mL蔗糖、0.05 mg/mL依地酸二钠二水合物、0.2 mg/mL聚山梨醇酯80 (pH 5.8)制剂中，抗TFPI抗体在25℃/60% RH下维持活性长达24个月且在40℃/75% RH下维持活性12个月。
实施例2. 抗TFPI抗体的制剂稳健性稳定性研究
本实施例举例说明了目标制剂(对照制剂)中150 mg/mL抗TFPI抗体和用高或低赋形剂水平和pH配制的抗TFPI抗体的稳定性。评估的制剂显示于表10中。每种组分的浓度通过分析测试进行证实。在本实施例中，使用的抗TFPI抗体(TFPI-106)具有重链可变区(其具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列)和轻链可变区(其具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列)。
表10：制剂稳健性研究中评估的赋形剂和pH范围
Figure 409577DEST_PATH_IMAGE011
1 每种制剂含有150 mg/ml抗TFPI抗体。
将制剂在5±3℃的预期储存条件、25℃/60% RH的加速储存条件和40℃/75% RH的热应激储存条件下储存6个月。然后使用本文所述的方法分析样品的质量属性，所述质量属性通常用于监测蛋白降解。例如，分析由以下组成：用于评价高分子量物质(HMMS)的大小排阻高效液相色谱(SE-HPLC)、用于评价纯度和片段化的还原和非还原毛细管凝胶电泳(CGE)和用于评价电荷异质性、诸如酸性、碱性和主要物质的成像毛细管等电聚焦(iCE)。分析还包括使用抑制测定评估抗TFPI抗体的相对功效。特定分析程序，包括药典和非药典方法，用于评价抗TFPI抗体的特征、纯度和相对功效。结果总结在表11-19中。
表11. 在5℃、25℃和40℃下长达6个月数据的pH结果
Figure 881403DEST_PATH_IMAGE012
表12. 在5℃、25℃和40℃下长达6个月数据的通过UV的蛋白浓度结果
Figure 799681DEST_PATH_IMAGE013
表13. 在5℃、25℃和40℃下长达6个月数据的SE-HPLC结果
Figure 451373DEST_PATH_IMAGE014
表14. 在5℃、25℃和40℃下长达6个月数据的非还原CGE结果
Figure 76389DEST_PATH_IMAGE015
表15. 在5℃、25℃和40℃下长达6个月数据的还原CGE结果
Figure 404602DEST_PATH_IMAGE016
表16. 在5℃、25℃和40℃下长达6个月数据的iCE结果
Figure 544597DEST_PATH_IMAGE017
表17. 在5℃、25℃和40℃下长达6个月数据的甲硫氨酸氧化结果
Figure 514827DEST_PATH_IMAGE018
表18. 在5℃、25℃和40℃下长达6个月数据的外观结果**
Figure 259929DEST_PATH_IMAGE019
* EFVP：基本上不含可见颗粒
** 分别根据当前的欧洲药典程序Ph. Eur. 2.2.1和Ph. Eur. 2.2.2评价的澄清度和颜色
† Ref. II、Ref. III和Ref. IV分别等于6 NTU、18 NTU和30 NTU。
表19. 在5℃、25℃和40℃下长达6个月数据的抑制测定结果
Figure 8311DEST_PATH_IMAGE020
表11-19中显示和下文描述的数据表明，在两种实时稳定性条件下，含有高赋形剂或低赋形剂或pH水平的抗TFPI抗体制剂在6个月后都是稳定的。
外观
在2-8℃和25℃下储存6个月后(表18)，对于大多数制剂(A-E)，没有观察到颜色、澄清度和可见颗粒的显著变化。在2-8℃和25℃下储存6个月后，对于不含PS80的制剂F观察到可见颗粒的显著增加。
在40℃下储存6个月后，在所有制剂(A-F)中都观察到溶液颜色的显著变化。基于先前的稳定性研究，预期到在加速应激条件下储存后的这种结果。这些效果对于相对于目标制剂含有更高的赋形剂浓度的制剂C和E最显著。没有观察到溶液澄清度的重大变化。对于制剂A-E，偶尔观察到可见颗粒，然而，这些可能归因于样品处理。在40℃下6个月后，对于不含PS80的制剂F，观察到可见颗粒的显著增加，尽管注意到该增加不如2-8℃和25℃储存条件那么剧烈。该发现突出了在药品制剂中包括PS80的重要性。
pH
在2-8℃、25℃和40℃下储存6个月后(表11)，在所有制剂(A-F)中都没有观察到pH的显著变化。
通过UV的蛋白浓度
在2-8℃、25℃和40℃下储存6个月后(表12)，蛋白浓度保持在150 mg/mL ± 15mg/mL规格内。对于大多数制剂和储存条件，观察到蛋白浓度的轻微增加，这可能归因于测定可变性。
大小排阻色谱(SE-HPLC)
在2-8℃下储存6个月后(表13)，对于所有制剂(A-F)都没有观察到%HMMS和%单体的显著变化。注意到，在2-8℃下储存期间，在所有制剂中不一致地观察到对应于低分子量物质的峰。
在25℃下储存6个月后，对于所有制剂(A-F)都观察到%HMMS和%LMMS两者的1-2%的轻微增加以及%单体的相应减少。所有%HMMS结果均低于5%的可接受标准。
在40℃下储存6个月后，对于所有制剂(A-F)都观察到%HMMS和%LMMS的显著增加以及%单体的相应减少。制剂B(低赋形剂/高pH)和C(高赋形剂/低pH)表现出单体%的最大减少，约20%。基于先前的稳定性研究，预期到在加速应激条件下的这些结果。
非还原毛细管凝胶电泳(nrCGE)
在2-8℃下储存6个月后(表14)，对于所有制剂(A-F)都没有观察到%IgG、%片段和%其他的显著变化。
在25℃下储存6个月后，对于所有制剂(A-F)都观察到2-3%片段的轻微增加以及%IgG的相应减少。未观察到%其他的显著变化。
在40℃下储存6个月后，对于所有制剂(A-F)都观察到>25%片段的显著增加以及%IgG的相应减少。对于制剂B(低赋形剂/高pH)和C(高赋形剂/低pH)观察到%片段的最大增加，>30%。该结果与SE-HPLC结果一致。在所有制剂中观察到%其他的轻微增加。
还原毛细管凝胶电泳(rCGE)
在2-8℃下储存6个月后(表15)，对于所有制剂(A-F)都没有观察到%重链+轻链(HC+LC)、%片段和%其他的显著变化。
在25℃下储存6个月后，对于所有制剂(A-F)都观察到1-2%片段的轻微增加以及%HC+LC的相应减少。仅对于制剂B和E观察到1%其他的轻微增加。
在40℃下储存6个月后，对于所有制剂(A-F)都观察到近似10%片段的显著增加以及%HC+LC的相应减少。对于制剂C(高赋形剂/低pH)观察到%片段的最大增加。大多数制剂(A、C、D和F)显示2-3%其他的轻微增加。相比之下，对于制剂B和E观察到%其他的7-8%的显著增加。
等电聚焦毛细管电泳(iCE)
在2-8℃下储存6个月后(表16)，在所有制剂(A-F)中都观察到%酸性物质的轻微增加以及%主要物质的相应减少，而没有观察到%碱性物质的显著变化。
在25℃下储存6个月后，在所有制剂中都观察到10-20%酸性物质的显著增加以及%主要物质的相应减少。在大多数制剂中观察到2-3%碱性物质的轻微增加。高pH制剂B和E表现出%酸性物质的最大增加，约18%。该发现可以通过在别处9详细描述的天冬酰胺脱酰胺的pH-依赖性来解释。
在40℃下储存6个月后，在所有制剂中都观察到约60%酸性物质的显著增加和%主要物质的相应减少。对于制剂E观察到%酸性物质的最大增加，这可以通过天冬酰胺脱酰胺的pH-依赖性来解释。比较T=0和T=6个月的样品，在所有制剂中观察到%碱性物质的净减少。
甲硫氨酸氧化
在2-8℃下储存6个月后(表17)，在所有制剂(A-F)中都没有观察到%MetOx的显著变化。在25℃下储存6个月后，在所有制剂(A-F)中都观察到1-2% MetOx的轻微增加。在40℃下储存6个月后，在所有制剂中都观察到约10% MetOX的显著增加。对于制剂C(高赋形剂/低pH)观察到% MetOX的最大增加，约20%。
抑制生物测定
在2-8℃和25℃下储存6个月后(表19)，在所有制剂中都没有观察到%相对功效的显著变化。在40℃下储存6个月后，对于制剂A、C、D和E观察到相对功效的下降趋势，然而，所有结果都保持在可接受标准内。
因此，尽管观察到降解，但在所有制剂中，抗TFPI抗体在25℃/60% RH的加速储存条件和40℃/75% RH的热应激储存条件下维持活性6个月(表19)。
搅动研究
通过将1 mL的制剂A-F填充入具有固定针头(staked needles)的1 mL长注射器中进行搅动研究。然后使注射器经受48小时的搅动应激。搅动研究在环境室温(~22℃)下进行，其中注射器以水平方向放置并使用设置为300 rpm的轨道摇床进行搅动。时间零(T0)对照没有暴露于震荡应激。
在以300 rpm搅动48小时后，通过SE-HPLC、nrCGE、rCGE、iCE和甲硫氨酸氧化，在所有制剂(A-F)中都没有观察到显著变化。对于不含PS80的制剂F，观察到可见颗粒的显著增加，证实PS80在DP制剂中的重要性。对于大多数制剂(A-E)没有观察到外观的变化。
结论
本研究的目标是建立设计空间，并表明产品质量对制剂组成和搅动的变化是稳健的。在储存6个月后，对于大多数制剂(A-E)，制剂的变化对2-8℃的预期储存温度下的DP稳定性影响极小。对于不含PS80的制剂(F)，观察到可见和亚可见颗粒的显著增加，证实PS80在DP制剂中的重要性。在25℃和40℃下，在25℃的3个月和40℃的1个月开始观察到产品质量的变化，这是基于先前稳定性研究在加速应激条件下预期的。来自40℃储存的结果表明，蛋白聚集在设计空间的拐角处(B和C)达到最大值，并且脱酰胺在高pH (B和E)处达到最大值。除了不含PS80的制剂F以外，所有制剂都显示对搅动应激的稳健性。这些结果表明DP对工艺中预期之外的赋形剂水平的变化的稳健性。评估的制剂与含有目标赋形剂水平的制剂(对照制剂A)相当，因此表明制剂的稳健性。
表20：序列
Figure 901181DEST_PATH_IMAGE021
Figure 143943DEST_PATH_IMAGE022
Figure 743552DEST_PATH_IMAGE023
Figure 413567DEST_PATH_IMAGE024
上文的各个部分中所提及的本发明的各种特征和实施方案在适当时加上必要的变更适用于其他部分。因此，在一个部分中指明的特征在适当时可以与其他部分中指明的特征组合。本文引用的所有参考文献，包括专利、专利申请、论文、教科书和引用的序列登记号，以及其中引用的参考文献在此以其整体通过引用并入。在并入的文献及类似材料中的一个或多个与本申请(包括，但不限于定义的术语、术语用途、所描述的技术等)不同或矛盾时，以本申请为准。
我们要求保护：
Figure 544466DEST_PATH_IMAGE025
Figure 325340DEST_PATH_IMAGE026
Figure 45034DEST_PATH_IMAGE027
Figure 151530DEST_PATH_IMAGE028
Figure 753413DEST_PATH_IMAGE029
Figure 541240DEST_PATH_IMAGE030
Figure IDA0003643505060000011
Figure IDA0003643505060000021
Figure IDA0003643505060000031
Figure IDA0003643505060000041
Figure IDA0003643505060000051
Figure IDA0003643505060000061
Figure IDA0003643505060000071
Figure IDA0003643505060000081
Figure IDA0003643505060000091
Figure IDA0003643505060000101
Figure IDA0003643505060000111
Figure IDA0003643505060000121
Figure IDA0003643505060000131
Figure IDA0003643505060000141
Figure IDA0003643505060000151
Figure IDA0003643505060000161
Figure IDA0003643505060000171
Figure IDA0003643505060000181
Figure IDA0003643505060000191
Figure IDA0003643505060000201
Figure IDA0003643505060000211
Figure IDA0003643505060000221
Figure IDA0003643505060000231
Figure IDA0003643505060000241
Figure IDA0003643505060000251
Figure IDA0003643505060000261
Figure IDA0003643505060000271
Figure IDA0003643505060000281
Figure IDA0003643505060000291
Figure IDA0003643505060000301

Claims (36)

1.一种制剂，其包含：约15 mg/mL至约250 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位的抗体、缓冲液、多元醇、表面活性剂和螯合剂，其中所述制剂具有约5.0至约6.0的pH，且其中根据SEQ ID NO:2的编号，所述表位包含残基Ile105、Arg107和Leu131。
2.权利要求1的制剂，其中所述缓冲液是组氨酸或琥珀酸盐缓冲液。
3.权利要求1或2的制剂，其中所述缓冲剂的浓度是约0.1 mM至约100 mM。
4.权利要求1至3中任一项的制剂，其中所述多元醇是蔗糖。
5.权利要求1至4中任一项的制剂，其中所述多元醇的浓度是约1 mg/mL至约300 mg/mL。
6.权利要求1至5中任一项的制剂，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯。
7.权利要求6的制剂，其中所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯80 (PS80)。
8.权利要求1至7中任一项的制剂，其中所述表面活性剂的浓度是约0.01 mg/mL至约10mg/mL。
9.权利要求1至8中任一项的制剂，其中所述螯合剂是依地酸二钠二水合物或乙二胺四乙酸(EDTA)。
10.权利要求1至9中任一项的制剂，其中所述螯合剂的浓度是约0.01 mg/mL至约1.0mg/mL。
11.权利要求1至10中任一项的制剂，其中所述抗体包含：
(i)重链可变区(VH)，其包含：(a) VH互补决定区1 (CDR-H1)，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；(b) VH互补决定区2 (CDR-H2)，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；和(c) VH互补决定区3 (CDR-H3)，其包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，和
(ii)轻链可变区(VL)，其包含：(a) VL互补决定区1 (CDR-L1)，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；(b) VL互补决定区2 (CDR-L2)，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；和(c) VL互补决定区3 (CDR-L3)，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。
12.权利要求1-11中任一项的制剂，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VL。
13.权利要求1-12中任一项的制剂，其中所述抗体包含由以ATCC登录号PTA-122329保藏的质粒中存在的插入物编码的VH序列和由以ATCC登录号PTA-122328保藏的质粒中存在的插入物编码的VL序列。
14.权利要求1-13中任一项的制剂，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链，且包含：包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链。
15.一种制剂，其包含：
约15 mg/mL至约250 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位的抗体，
约1 mM至约40 mM的缓冲液；
约1 mg/mL至约120 mg/mL的多元醇；
约0.01 mg/mL至约1 mg/mL的表面活性剂；
约0.01 mg/mL至约1.0 mg/mL的螯合剂；和
其中所述制剂具有约5.0至约6.0的pH，
其中根据SEQ ID NO:2的编号，所述表位包含残基Ile105、Arg107和Leu131。
16.一种制剂，其包含：
约15 mg/mL至约250 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位的抗体，
约1 mM至约40 mM的缓冲液；
约1 mg/mL至约120 mg/mL的多元醇；
约0.01 mg/mL至约1 mg/mL的表面活性剂；
约0.01 mg/mL至约1.0 mg/mL的螯合剂；和
其中所述制剂具有约5.0至约6.0的pH，
其中所述抗体包含：(i)重链可变区(VH)，其包含：(a) VH互补决定区1 (CDR-H1)，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；(b) VH互补决定区2 (CDR-H2)，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；和(c) VH互补决定区3 (CDR-H3)，其包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，和
(ii)轻链可变区(VL)，其包含：(a) VL互补决定区1 (CDR-L1)，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；(b) VL互补决定区2 (CDR-L2)，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；和(c) VL互补决定区3 (CDR-L3)，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。
17.权利要求1至16中任一项的制剂，其中所述抗体的浓度是约100 mg/mL、约115 mg/mL、约150 mg/mL或约158 mg/mL。
18.一种药物制剂，其包含：150 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位的抗体、20 mM组氨酸缓冲液、85 mg/mL蔗糖、0.2 mg/mL聚山梨醇酯80、0.05 mg/mL依地酸二钠二水合物，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链可变区；且其中所述制剂具有5.8的pH。
19.一种药物制剂，其包含：150 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位的抗体、20 mM组氨酸缓冲液、85 mg/mL蔗糖、0.2 mg/mL聚山梨醇酯80、0.05 mg/mL依地酸二钠二水合物，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链，且包含：包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链；且其中所述制剂具有5.8的pH。
20.一种药物制剂，其包含：150 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位的抗体、20 mM组氨酸缓冲液、85 mg/mL蔗糖、0.2 mg/mL聚山梨醇酯80、0.05 mg/mL依地酸二钠二水合物，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链，且包含：包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链；且其中所述制剂具有5.8的pH。
21.一种药物制剂，其包含：150 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位的抗体、20 mM组氨酸缓冲液、85 mg/mL蔗糖、0.2 mg/mL聚山梨醇酯80、0.05 mg/mL依地酸二钠二水合物，其中所述抗体包含：包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的重链，且包含：包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链；且其中所述制剂具有5.8的pH。
22.一种药物制剂，其包含：约50 mg/mL至约250 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位的抗体、20 mM组氨酸缓冲液、85 mg/mL蔗糖、0.2 mg/mL聚山梨醇酯80、0.05 mg/mL依地酸二钠二水合物，其中所述抗体包含：包含SEQID NO:23的氨基酸序列的重链，且包含：包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的轻链；且其中所述制剂具有5.8的pH。
23.一种药物制剂，其包含：约50 mg/mL至约250 mg/mL的特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域2 (K2)中的表位的抗体、20 mM组氨酸缓冲液、85 mg/mL蔗糖、0.2 mg/mL聚山梨醇酯80、0.05 mg/mL依地酸二钠二水合物，其中所述抗体包含：包含SEQID NO:25的氨基酸序列的重链，且包含：包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链；且其中所述制剂具有5.8的pH。
24.权利要求1至23中任一项的制剂，其中所述制剂在5±3℃下具有至少约24个月的保质期。
25.权利要求1至23中任一项的制剂，其中所述制剂在40℃/75% RH下持续长达1个月、2个月、3个月、4个月、5个月或6个月具有小于约7% HMMS (例如，如通过大小排阻HPLC所测量)。
26.权利要求1至23中任一项的制剂，其中所述制剂持续长达1个月、2个月或3个月具有小于约3% HMMS (例如，如通过大小排阻HPLC所测量)。
27.权利要求1至23中任一项的制剂，其中所述制剂持续长达1个月具有小于约2% HMMS(例如，如通过大小排阻HPLC所测量)。
28.缩短出血时间的方法，其包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的权利要求1-27中任一项的制剂。
29.治疗或预防凝血缺陷或出血病症的方法，其包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的权利要求1-27中任一项的制剂。
30.治疗或预防血友病A、B或C的方法，其包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的权利要求1-27中任一项的制剂。
31.治疗或预防冯维勒布兰德氏病(vWD)的方法，其包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的权利要求1-27中任一项的制剂。
32.用于降低TFPI的活性的方法，其包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的权利要求1-27中任一项的制剂。
33.权利要求28-32中任一项的方法，其中所述制剂皮下或静脉内施用于所述受试者。
34.权利要求28-33中任一项的方法，其中所述受试者是人。
35.根据权利要求1至27中任一项所述的制剂用于制备用于治疗受试者中的出血病症的药物的用途。
36.根据权利要求1至27中任一项所述的制剂用于制备用于治疗受试者中的血友病A、B或C的药物的用途。
CN202080079050.7A 2019-11-13 2020-11-10 稳定的水性抗-tfpi抗体制剂 Pending CN114786717A (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962934781P 2019-11-13 2019-11-13
US62/934781 2019-11-13
US202063081409P 2020-09-22 2020-09-22
US63/081409 2020-09-22
PCT/IB2020/060571 WO2021094917A1 (en) 2019-11-13 2020-11-10 Stable aqueous anti-tfpi antibody formulation

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114786717A true CN114786717A (zh) 2022-07-22

Family

ID=73790141

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202080079050.7A Pending CN114786717A (zh) 2019-11-13 2020-11-10 稳定的水性抗-tfpi抗体制剂

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20230035617A1 (zh)
EP (1) EP4058061A1 (zh)
JP (1) JP2021088548A (zh)
KR (1) KR20220100634A (zh)
CN (1) CN114786717A (zh)
AU (1) AU2020385048A1 (zh)
BR (1) BR112022007635A2 (zh)
CA (1) CA3160806A1 (zh)
IL (1) IL292493A (zh)
MX (1) MX2022005836A (zh)
WO (1) WO2021094917A1 (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140065159A1 (en) * 2012-08-31 2014-03-06 Bayer Healthcare Llc Antibody and protein formulations
US20170073428A1 (en) * 2015-08-19 2017-03-16 Pfizer Inc. Tissue factor pathway inhibitor antibodies and uses thereof
US20180000933A1 (en) * 2015-01-28 2018-01-04 Pfizer Inc. Stable aqueous anti-vascular endothelial growth factor (vegf) antibody formulation

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2745317C (en) * 2008-12-22 2019-03-05 Ida Hilden Antibodies against tissue factor pathway inhibitor
KR20120130757A (ko) * 2010-02-26 2012-12-03 노보 노르디스크 에이/에스 안정한 항체 함유 조성물
CA2800188A1 (en) * 2010-05-28 2011-12-01 Novo Nordisk A/S Stable multi-dose compositions comprising an antibody and a preservative
WO2017055966A1 (en) * 2015-10-01 2017-04-06 Pfizer Inc. Low viscosity antibody compositions
EP3761954A1 (en) * 2018-03-07 2021-01-13 Pfizer Inc Anti-pd-1 antibody compositions

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140065159A1 (en) * 2012-08-31 2014-03-06 Bayer Healthcare Llc Antibody and protein formulations
US20180000933A1 (en) * 2015-01-28 2018-01-04 Pfizer Inc. Stable aqueous anti-vascular endothelial growth factor (vegf) antibody formulation
US20170073428A1 (en) * 2015-08-19 2017-03-16 Pfizer Inc. Tissue factor pathway inhibitor antibodies and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
WO2021094917A1 (en) 2021-05-20
JP2021088548A (ja) 2021-06-10
KR20220100634A (ko) 2022-07-15
US20230035617A1 (en) 2023-02-02
BR112022007635A2 (pt) 2022-07-12
MX2022005836A (es) 2022-06-09
IL292493A (en) 2022-06-01
CA3160806A1 (en) 2021-05-20
AU2020385048A1 (en) 2022-06-02
EP4058061A1 (en) 2022-09-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220175663A1 (en) Stable liquid antibody formulation
AU2007338791B2 (en) Stable buffered formulations containing polypeptides
KR102594028B1 (ko) 항-pd-1 항체 조성물
US20180282430A1 (en) Anti-tfpi antibody variants with differential binding across ph range for improved pharmacokinetics
EP3256160A1 (en) Stable liquid formulation for monoclonal antibodies
MX2014013434A (es) Formulaciones liofilizadas y acuosas de anticuerpo anti-cd40.
CN107206080B (zh) 稳定的水性抗血管内皮细胞生长因子(vegf)抗体制剂
US20170247460A1 (en) Anti-il-7r antibody compositions
CA2949212A1 (en) Antibody formulation
JP2024038308A (ja) 抗血液樹状細胞抗原２抗体の臨床使用のための医薬組成物及び投与レジメン
EP4157339A1 (en) Methods of treating iga nephropathy with an april binding antibody
CN114786717A (zh) 稳定的水性抗-tfpi抗体制剂
WO2020063668A1 (zh) 包含抗ox40抗体的制剂、其制备方法及其用途
RU2772781C2 (ru) Композиции анти-pd-1 антител
US20240025978A1 (en) Methods for treating complement-mediated diseases
AU2014201388B2 (en) Stable Buffered Formulations Containing Polypeptides
EA034583B1 (ru) ПРИМЕНЕНИЯ АНТИ-α4β7 АНТИТЕЛА
AU2014206175A1 (en) Stable liquid antibody formulation

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40075201

Country of ref document: HK