KR102582225B1

KR102582225B1 - 환상 펩타이드 화합물을 포함하는 제제 및 그의 제조 방법

Info

Publication number: KR102582225B1
Application number: KR1020237001877A
Authority: KR
Inventors: 다카미쓰 우에토; 유카리 구보키
Original assignee: 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤
Priority date: 2021-05-07
Filing date: 2022-05-06
Publication date: 2023-09-22
Also published as: JPWO2022234850A1; WO2022234850A1; JP7181442B1; BR112023019622A2; KR20230020548A; TW202308679A; CN117241817A; AU2022270498A1; JP2023015334A; CA3219090A1; MX2023013099A; IL306018A; EP4299069A1; KR20230169093A

Abstract

본 발명은, 하기 식(1):

로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물과, 액체 첨가제, 및 임의로 유성 성분을 함유하는, 조성물에 관한 것이다.

Description

환상 펩타이드 화합물을 포함하는 제제 및 그의 제조 방법

본 발명은, KRAS 저해 활성을 갖는 환상 펩타이드 화합물을 포함하는 제제 및 그의 제조 방법에 관한 것이다.

종래 경구약으로서 이용되어 온 화합물은, 리핀스키의 법칙으로서 알려져 있는 바와 같이, 분자량이 500g/mol 이하인 것이 바람직하다고 여겨져 왔다(비특허문헌 1). 근년, 분자량이 500g/mol을 초과하는 화합물이, 종래의 저분자 화합물에서는 상호작용하는 것이 곤란하여, 터프 타겟으로 불리고 있는 표적 단백의 표면에서의 상호작용, 즉 단백-단백 상호작용 저해 등에 기여할 수 있는 것이 알려져 왔다. 이들 분자는, 경구약으로서 이용되어 온 분자량이 500g/mol 이하인 저분자도 아니고, 항체 의약품과 같이 분자량이 100000g/mol을 초과하는 고분자도 아닌, 중분자 화합물(분자량 500-2000g/mol)로 불리며, 터프 타겟에 대한 창약을 실현할 수 있는, 새로운 모달리티로서 주목받고 있다(비특허문헌 2).

고혈당증의 치료에 이용되고 있는 인슐린과 같이, 천연 아미노산으로 이루어지는 펩타이드는, 대사 안정성이 부족하여, 종래에는 펩타이드를 경구약으로서 개발하는 것은 곤란하다고 여겨져 왔다. 그러나, 펩타이드의 환화나, 펩타이드 중에 N-메틸 아미노산으로 예시되는 비천연 아미노산을 이용하는 것에 의해, 펩타이드의 대사 안정성이나 막 투과성이 향상되는 것이 발견되어 왔다(비특허문헌 3, 4).

비천연 아미노산을 포함하는 환상 펩타이드 중에서도, 특히 N-치환 아미노산을 포함하는 환상 펩타이드가 대사 안정성이나 막 투과성을 가질 수 있는 것, 즉 드러그 라이크니스를 가질 수 있는 것이 알려져 왔다(특허문헌 1).

비천연형 아미노산을 포함하는 환상 펩타이드의 라이브러리 화합물이, 단백-단백 상호작용의 저해제의 창생에 유용하다는 것이 시사되어 있다(비특허문헌 5).

비천연형 아미노산을 포함하는 환상 펩타이드가 의약품으로서 이용될 수 있을 정도의 막 투과성과 대사 안정성을 갖는 드러그 라이크 분자이기 위한 조건에 대해서도 밝혀져, 의약품 모달리티로서의 환상 펩타이드의 주목도는 더 높아지고 있다(특허문헌 2, 3).

특허문헌 6에는 약리 작용을 나타내는 환상 펩타이드가 개시되어 있다. 또한, 특허문헌 6에는, 사이클로스포린의 제제화 기술에 대하여 개시되어 있다. 소마토스타틴의 경구 제제화에 대한 연구도 행해지고 있다(비특허문헌 6).

국제 공개 제2013/100132호 국제 공개 제2018/225864호 국제 공개 제2020/122182호 국제 공개 제2012/122059호 국제 공개 제2017/181061호 국제 공개 제2018/031730호 국제 공개 제2016/071515호

Adv. Drug Del. Rev. 1997, 23, 3-25. Future Med. Chem., 2009, 1, 1289-1310. Acc. Chem. Res., 2008, 41, 1331-1342. Angew. Chem. Int. Ed., 2013, 52, 254-269. Chem. Rev., 2019, 119, 10360-10391. Ther. Deliv. (2017) 8(10), 867-878.

본 발명은, 비천연 아미노산을 포함하는 환상 화합물의 제제를 제공하는 것을 과제로 한다. 본 발명은, 효율적인 RAS 저해 작용을 가지는 환상 화합물의 제제를 제조하는 방법을 제공하는 것을 과제로 한다.

특허문헌 4에서는, RAS와 SOS의 결합 저해가 기재되어 있고, 또한 특허문헌 5에서는, RAS와 결합하는 화합물과 경합하는 펩타이드가 기재되어 있지만, 이들 문헌에는, 약리 작용, 특히 종양 세포에 대한 작용은 나타나 있지 않다. 또한, 이들 문헌에는, 드러그 라이크 펩타이드는 기재되어 있지 않다.

특허문헌 6, 7에서는 환상 펩타이드의 제제화에 관한 기재가 있지만, 모두 특정 화합물의 제제화에 대하여 기재되어 있는 것에 지나지 않는다.

비특허문헌 2에는, 의약으로서 이용되고 있는 펩타이드가 기재되어 있지만, 드러그 라이크 펩타이드에 관한 기재나, RAS 변이 암에 유용한 펩타이드는 기재되어 있지 않다.

비특허문헌 3, 4에는, N-메틸 아미노산을 포함하는 펩타이드가 의약으로서 적응될 수 있는 것이 기재되어 있지만, RAS 변이 암에 유용한 펩타이드는 기재되어 있지 않다.

비특허문헌 5에는, 환상 펩타이드가 의약으로서 적응될 수 있는 것이 기재되어 있지만, RAS 변이 암에 유용한 펩타이드는 기재되어 있지 않다.

비특허문헌 6에서는, 소마토스타틴이 예시되고, 경구 제제화에 필요한 요소에 대하여 기술되어 있지만, 단지 소마토스타틴에 대하여 기술되어 있는 것에 지나지 않는다.

따라서, 비천연 아미노산을 포함하는 환상 화합물에 대해서, 의약으로서 우수한 제제를 제공하는 것이 필요하다.

본 발명자들은, 상기 과제를 해결하기 위해서 예의 검토한 결과, 유효 성분에 특정 첨가제를 가하는 것에 의해, 의약으로서 이용할 수 있는 제제화를 행할 수 있는 것을 발견했다. 특정 첨가제로서, 계면활성제가 유효하고, 바람직하게는 소수성 계면활성제 및 친수성 계면활성제를 조합하여 이용하는 것이 유효한 것을 발견했다. 또, 유성 성분을 첨가하는 것에 의해, 제제로서 보다 유효한 것으로 할 수 있는 것을 발견했다. 유효 성분과 이들 첨가제를 혼합한 것을, 제제화하여 특정 제형을 가지는 제제에 이용할 수 있는 것을 발견했다.

본 발명에 따른 제제는, 제제 중에서의 유효 성분의 안정성이나 제제로부터의 용출성이 우수한 것을 발견했다.

즉, 본 발명은, 이하에 관한 것이다.

〔1〕 하기 식(1):

로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물과, 액체 첨가제, 및 임의로 유성 성분을 함유하는, 조성물.

〔2〕 상기 액체 첨가제가, 계면활성제인, 〔1〕에 기재된 조성물.

〔3〕 상기 계면활성제가, 소수성 계면활성제, 및 친수성 계면활성제의 조합인, 〔2〕에 기재된 조성물.

〔4〕 상기 소수성 계면활성제의 HLB값이 0 이상 10 미만이고, 상기 친수성 계면활성제의 HLB값이 10 이상 30 이하인, 〔3〕에 기재된 조성물.

〔5〕 상기 소수성 계면활성제가, 프로필렌 글라이콜 지방산 에스터, 글리세린 지방산 에스터, 폴리글리세린 지방산 에스터, 소비탄 지방산 에스터, 및 소수성 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 〔3〕 또는 〔4〕에 기재된 조성물.

〔6〕 상기 소수성 계면활성제가, 프로필렌 글라이콜 지방산 에스터 및 소비탄 지방산 에스터로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 〔3〕∼〔5〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔7〕 상기 소수성 계면활성제가, 프로필렌 글라이콜 지방산 에스터를 포함하는, 〔3〕∼〔6〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔8〕 상기 프로필렌 글라이콜 지방산 에스터가, 모노카프로산 프로필렌 글라이콜, 모노카프릴산 프로필렌 글라이콜, 모노카프르산 프로필렌 글라이콜, 모노라우르산 프로필렌 글라이콜, 모노미리스트산 프로필렌 글라이콜, 모노팔미트산 프로필렌 글라이콜, 모노스테아르산 프로필렌 글라이콜, 및 모노올레산 프로필렌 글라이콜로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 〔5〕에 기재된 조성물.

〔9〕 상기 글리세린 지방산 에스터가, 모노카프로산 글리세릴, 모노카프릴산 글리세릴, 모노카프르산 글리세릴, 모노라우르산 글리세릴, 모노미리스트산 글리세릴, 모노팔미트산 글리세릴, 모노스테아르산 글리세릴, 모노올레산 글리세릴, 및 모노리놀레산 글리세릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 〔5〕에 기재된 조성물.

〔10〕 상기 폴리글리세린 지방산 에스터가, 모노올레산 다이글리세릴인, 〔5〕에 기재된 조성물.

〔11〕 상기 소비탄 지방산 에스터가, 모노카프릴산 소비탄, 모노카프르산 소비탄, 모노라우르산 소비탄, 모노미리스트산 소비탄, 모노팔미트산 소비탄, 모노스테아르산 소비탄, 모노올레산 소비탄, 세스퀴올레산 소비탄, 및 트라이올레산 소비탄으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 〔5〕에 기재된 조성물.

〔12〕 상기 소수성 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유가, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 5 및 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 10으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 〔5〕에 기재된 조성물.

〔13〕 상기 소수성 계면활성제가, 모노카프릴산 프로필렌 글라이콜인, 〔3〕∼〔7〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔14〕 상기 친수성 계면활성제가, 폴리에틸렌 글라이콜 지방산 에스터, 폴리옥시에틸렌 피마자유, 친수성 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유, 폴리옥시에틸렌 소비탄 지방산 에스터, D-α-토코페릴 폴리에틸렌 글라이콜 1000 석신산염, 카프릴로카프로일 폴리옥실-8 글리세라이드, 및 이들의 어느 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 〔3〕∼〔13〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔15〕 상기 친수성 계면활성제가, 폴리옥시에틸렌 피마자유, 폴리옥시에틸렌 소비탄 지방산 에스터, D-α-토코페릴 폴리에틸렌 글라이콜 1000 석신산염, 카프릴로카프로일 폴리옥실-8 글리세라이드, 및 이들의 어느 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 〔3〕∼〔14〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔16〕 상기 친수성 계면활성제가, 폴리옥시에틸렌 피마자유를 포함하는, 〔3〕∼〔15〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔17〕 상기 폴리에틸렌 글라이콜 지방산 에스터가, 폴리옥시에틸렌 하이드록시스테아레이트, 모노라우르산 폴리에틸렌 글라이콜, 모노스테아르산 폴리에틸렌 글라이콜, 및 스테아르산 폴리옥실 40으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 〔14〕에 기재된 조성물.

〔18〕 상기 폴리옥시에틸렌 피마자유가, 폴리옥실 30 피마자유, 폴리옥실 35 피마자유, 및 폴리옥실 40 피마자유로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 〔14〕에 기재된 조성물.

〔19〕 상기 폴리옥시에틸렌 피마자유가, 폴리옥실 35 피마자유인, 〔14〕에 기재된 조성물.

〔20〕 상기 친수성 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유가, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 20, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 40, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 50, 및 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 60으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 〔14〕에 기재된 조성물.

〔21〕 상기 폴리옥시에틸렌 소비탄 지방산 에스터가, 폴리소베이트 20, 폴리소베이트 40, 폴리소베이트 60, 및 폴리소베이트 80으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 〔14〕에 기재된 조성물.

〔22〕 상기 친수성 계면활성제가, 폴리옥실 35 피마자유, D-α-토코페릴 폴리에틸렌 글라이콜 1000 석신산염, 카프릴로카프로일 폴리옥실-8 글리세라이드, 폴리소베이트 80, 및 이들의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 〔3〕∼〔15〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔23〕 상기 친수성 계면활성제가, 폴리옥실 35 피마자유를 포함하는, 〔3〕∼〔15〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔24〕 상기 소수성 계면활성제가 프로필렌 글라이콜 지방산 에스터이고, 상기 친수성 계면활성제가 폴리옥시에틸렌 피마자유를 포함하는, 〔3〕에 기재된 조성물.

〔25〕 상기 소수성 계면활성제가 모노카프릴산 프로필렌 글라이콜이고, 상기 친수성 계면활성제가 폴리옥실 35 피마자유, D-α-토코페릴 폴리에틸렌 글라이콜 1000 석신산염, 카프릴로카프로일 폴리옥실-8 글리세라이드, 폴리소베이트 80, 및 이들의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 〔3〕에 기재된 조성물.

〔26〕 상기 소수성 계면활성제가 모노카프릴산 프로필렌 글라이콜이고, 상기 친수성 계면활성제가 폴리옥실 35 피마자유를 포함하는, 〔3〕에 기재된 조성물.

〔27〕 조성물이 유성 성분을 포함하는, 〔1〕∼〔26〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔28〕 상기 유성 성분이, 지방산, 아실글리세롤, 식물유 및 이들의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 〔1〕∼〔27〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔29〕 상기 유성 성분이, 지방산, 아실글리세롤, 및 이들의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 〔1〕∼〔28〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔30〕 상기 유성 성분이 지방산을 포함하는, 〔1〕∼〔29〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔31〕 상기 지방산이, 카프로산, 카프릴산, 카프르산, 라우르산, 미리스트산, 미리스톨레산, 팔미트산, 팔미톨레산, 스테아르산, 올레산, 리놀레산, 및 리놀렌산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 〔28〕에 기재된 조성물.

〔32〕 상기 지방산이, 올레산, 리놀레산, 및 리놀렌산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 〔28〕에 기재된 조성물.

〔33〕 상기 아실글리세롤이, 트라이아세틴, 트라이뷰티린, 트라이카프로인, 트라이카프릴린, 트라이카프린, 트라이팔미틴, 트라이팔미톨레인, 트라이스테아르산 글리세린, 트라이올레인, 트라이리놀레인, 트라이리놀레닌, 및 중쇄 지방산 트라이글리세라이드로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 〔28〕에 기재된 조성물.

〔34〕 상기 아실글리세롤이 트라이아세틴인, 〔28〕에 기재된 조성물.

〔35〕 상기 식물유가, 올리브유, 아몬드유, 야자유, 카카오지, 마카다미아 너트유, 아보카도유, 새플라워유, 대두유, 아마인유, 유채유, 피마자유, 콘유, 및 팜유로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 〔28〕에 기재된 조성물.

〔36〕 상기 유성 성분이, 올레산 또는 트라이아세틴인, 〔1〕∼〔35〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔37〕 상기 유성 성분이, 올레산인, 〔1〕∼〔36〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔38〕 소수성 계면활성제로서 프로필렌 글라이콜 지방산 에스터를 포함하고, 친수성 계면활성제로서 폴리옥시에틸렌 피마자유를 포함하며, 유성 성분으로서 지방산을 포함하는, 〔3〕에 기재된 조성물.

〔39〕 소수성 계면활성제로서 모노카프릴산 프로필렌 글라이콜을 포함하고, 친수성 계면활성제로서 폴리옥실 35 피마자유를 포함하며, 유성 성분으로서 올레산을 포함하는, 〔3〕에 기재된 조성물.

〔40〕 추가로 항산화제를 포함하는, 〔1〕∼〔39〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔41〕 상기 항산화제가, dl-α-토코페롤, 뷰틸레이트화 하이드록시톨루엔, 뷰틸레이트화 하이드록시아니솔, 프로필 갈레이트, 몰식자산 프로필, 의약으로서 허용될 수 있는 퀴논, 아스타잔틴, 및 D-α-토코페릴 폴리에틸렌 글라이콜 1000 석신산염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 〔40〕에 기재된 조성물.

〔42〕 추가로 가용화제를 포함하는, 〔1〕∼〔41〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔43〕 상기 가용화제가, 에탄올, 프로필렌 글라이콜, 폴리에틸렌 글라이콜 300, 폴리에틸렌 글라이콜 400, 다이에틸렌 글라이콜 모노에틸 에터, 및 이들의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 〔42〕에 기재된 조성물.

〔44〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물이, 식(1)로 표시되는 화합물 또는 그의 수화물인, 〔1〕∼〔43〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔45〕 상기 수화물이, 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물인, 〔44〕에 기재된 조성물.

〔46〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물이, 식(1)로 표시되는 화합물인, 〔44〕에 기재된 조성물.

〔47〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물의 조성물 전체에 대한 함유율이, 10중량% 이하인, 〔1〕∼〔46〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔48〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물의 조성물 전체에 대한 함유율이, 8중량% 이하인, 〔1〕∼〔47〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔49〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물의 조성물 전체에 대한 함유율이, 7중량% 이하인, 〔1〕∼〔48〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔50〕 상기 액체 첨가제의 조성물 전체에 대한 함유율이, 50중량% 이상 97중량% 이하인, 〔1〕∼〔49〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔51〕 상기 액체 첨가제의 조성물 전체에 대한 함유율이, 55중량% 이상 96중량% 이하인, 〔1〕∼〔50〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔52〕 상기 액체 첨가제의 조성물 전체에 대한 함유율이, 70중량% 이상 90중량% 이하인, 〔1〕∼〔51〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔53〕 상기 소수성 계면활성제의 조성물 전체에 대한 함유율이, 20중량% 이상 70중량% 이하인, 〔3〕∼〔52〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔54〕 상기 소수성 계면활성제의 조성물 전체에 대한 함유율이, 25중량% 이상 65중량% 이하인, 〔3〕∼〔53〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔55〕 상기 소수성 계면활성제의 조성물 전체에 대한 함유율이, 30중량% 이상 55중량% 이하인, 〔3〕∼〔54〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔56〕 상기 친수성 계면활성제의 조성물 전체에 대한 함유율이, 20중량% 이상 40중량% 이하인, 〔3〕∼〔55〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔57〕 상기 친수성 계면활성제의 조성물 전체에 대한 함유율이, 25중량% 이상 35중량% 이하인, 〔3〕∼〔56〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔58〕 상기 친수성 계면활성제의 조성물 전체에 대한 함유율이, 28중량% 이상 33중량% 이하인, 〔3〕∼〔57〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔59〕 상기 유성 성분의 조성물 전체에 대한 함유율이, 0중량% 이상 50중량% 이하인, 〔1〕∼〔58〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔60〕 상기 유성 성분의 조성물 전체에 대한 함유율이, 1중량% 이상 40중량% 이하인, 〔1〕∼〔59〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔61〕 상기 유성 성분의 조성물 전체에 대한 함유율이, 10중량% 이상 20중량% 이하인, 〔1〕∼〔60〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔62〕 상기 유성 성분이, 지방산을 포함하는, 〔1〕∼〔61〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔63〕 상기 소수성 계면활성제의 상기 친수성 계면활성제에 대한 중량비가, 0.5∼3.0인, 〔3〕∼〔62〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔64〕 상기 소수성 계면활성제의 상기 친수성 계면활성제에 대한 중량비가, 1.0∼2.5인, 〔3〕∼〔63〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔65〕 상기 소수성 계면활성제의 상기 친수성 계면활성제에 대한 중량비가, 1.5∼2.0인, 〔3〕∼〔64〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔66〕 상기 액체 첨가제의, 상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물에 대한 중량비가, 5 이상인, 〔1〕∼〔65〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔67〕 상기 액체 첨가제의, 상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물에 대한 중량비가, 10 이상인, 〔1〕∼〔66〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔68〕 상기 액체 첨가제의, 상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물에 대한 중량비가, 5∼2000인, 〔1〕∼〔66〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔69〕 상기 액체 첨가제 및 상기 유성 성분의 합계의, 상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물에 대한 중량비가, 10 이상인, 〔1〕∼〔68〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔70〕 상기 액체 첨가제 및 상기 유성 성분의 합계의, 상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물에 대한 중량비가, 10∼2000인, 〔1〕∼〔69〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔71〕 상기 액체 첨가제 및 상기 유성 성분의 합계의, 상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물에 대한 중량비가, 10∼1000인, 〔1〕∼〔70〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔72〕 상기 조성물이 액체인, 〔1〕∼〔71〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔73〕 상기 조성물을 물에 분산시켰을 때에 형성되는 액적의 평균 입자경이, 200nm 미만인, 〔1〕∼〔72〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물.

〔74〕 상기 액적의 평균 입자경이, 10nm 이상 200nm 미만인, 〔73〕에 기재된 조성물.

〔75〕 상기 액적의 평균 입자경이, 50nm 이상 200nm 이하인, 〔74〕에 기재된 조성물.

〔76〕〔1〕∼〔75〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물을 함유하는, 의약 제제.

〔77〕 상기 제제의 제형이 캡슐제인, 〔76〕에 기재된 의약 제제.

〔78〕 하기의 공정을 포함하는, 〔1〕∼〔75〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물의 제조 방법;

(1) 하기 식(1):

로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물, 액체 첨가제, 및 임의로 유성 성분을 제공하는 공정;

(2) 해당 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물, 액체 첨가제, 및 임의로 유성 성분을 혼합하는 공정; 및

(3) 해당 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물이 용해된 조성물을 얻는 공정.

〔79〕 상기 공정(1)에 있어서 제공되는 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물이, 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물인, 〔78〕에 기재된 방법.

〔80〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°) 중의, 적어도 1개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔80-1〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°) 중의, 적어도 2개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔80-2〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°) 중의, 적어도 3개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔80-3〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°) 중의, 적어도 4개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔80-4〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°) 중의, 적어도 5개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔80-5〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°) 중의, 적어도 6개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔80-6〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°) 중의, 적어도 7개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔80-7〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°) 중의, 적어도 8개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔80-8〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°) 중의, 적어도 9개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔80-9〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°) 중의, 적어도 10개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔80-10〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°) 중의, 적어도 11개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔80-11〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°) 중의, 적어도 12개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔80-12〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔81〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 7.921°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 15.895°, 및 16.643°(±0.2°) 중의, 적어도 1개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔81-1〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 7.921°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 15.895°, 및 16.643°(±0.2°) 중의, 적어도 2개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔81-2〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 7.921°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 15.895°, 및 16.643°(±0.2°) 중의, 적어도 3개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔81-3〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 7.921°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 15.895°, 및 16.643°(±0.2°) 중의, 적어도 4개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔81-4〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 7.921°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 15.895°, 및 16.643°(±0.2°) 중의, 적어도 5개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔81-5〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 7.921°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 15.895°, 및 16.643°(±0.2°) 중의, 적어도 6개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔81-6〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 7.921°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 15.895°, 및 16.643°(±0.2°)의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔81-7〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 14.752°, 14.968°, 15.895°, 16.190°, 16.643°, 17.813°, 및 19.424°(±0.2°) 중의, 적어도 7개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔81-8〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 14.752°, 14.968°, 15.895°, 16.190°, 16.643°, 17.813°, 및 19.424°(±0.2°) 중의, 적어도 10개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔81-9〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 14.752°, 14.968°, 15.895°, 16.190°, 16.643°, 17.813°, 및 19.424°(±0.2°) 중의, 적어도 13개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔81-10〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 14.752°, 14.968°, 15.895°, 16.190°, 16.643°, 17.813°, 및 19.424°(±0.2°) 중의, 적어도 15개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔81-10〕 상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 14.752°, 14.968°, 15.895°, 16.190°, 16.643°, 17.813°, 및 19.424°(±0.2°)의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 〔79〕에 기재된 방법.

〔82〕〔1〕∼〔75〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물을 제공하는 공정, 및 해당 조성물을 제제화하여, 의약 제제를 제공하는 공정을 포함하는, 의약 제제의 제조 방법.

〔83〕〔1〕∼〔75〕 중 어느 한 항에 기재된 조성물을 제공하는 공정, 및 해당 조성물을 캡슐에 충전하여, 캡슐 제제를 제공하는 공정을 포함하는, 캡슐 제제의 제조 방법.

본 발명에 따른 조성물은, 제제로서 필요한 여러 가지 특성이 우수하다. 예를 들면, 본 발명에 따른 조성물은, 액체상의 조성물이 유화되어 액적을 형성한 경우에 바람직한 입자 특성을 가져, 안정성이나 분산성이 극히 우수함과 함께, 체내로의 흡수성도 우수하다.

도 1은 조제예 3에서 얻어진 화합물 1의 수화물 결정(Form C)의 분말 X선 회절 측정의 결과를 나타내는 그래프이다. 세로축은 회절 강도이고, 가로축은 회절각 2θ(°)이다.
도 2는 화합물 1의 수화물 결정(Form C)의 열중량·시차열 분석의 결과를 나타낸다. 가로축은 온도(℃) 및 측정 시간(분)이고, 오른쪽 세로축은 열중량 분석에 있어서의 샘플의 중량 변화(mg)이다. 왼쪽 세로축은 시차열 분석에 있어서 관측된 열류(mW)를 표시한다.
도 3은 화합물 1의 수화물 결정(Form C)의 단결정 X선 구조 해석에 의한 결정 구조를 나타낸다.
도 4는 화합물 1의 수화물 결정(Form C)의 동적 수증기 흡착 측정의 결과를 나타낸다. 세로축은 중량 변화(%)이고, 가로축은 상대 습도(%)이다. 도 4에 있어서, 「Cycle 1 Sorp」(검은 다이아몬드표)는 사이클 1에서의 흡착을 나타내고, 「Cycle 1 Desorp」(검은 네모표)는 사이클 1에서의 탈리를 나타내고, 「Cycle 2 Sorp」(검은 세모표)는 사이클 2에서의 흡착을 나타내며, 「Cycle 2 Desorp」(검은 사각표)는 사이클 2에서의 탈리를 나타낸다.
도 5는 본 발명에 따른 제제(제제 C, 제제 F) 및 비교예(제제 AJ)의 공복시 인공 장액(FaSSIF)에 대한 분산도의 시간적 변화를 나타내는 그래프이다.

본 발명의 조성물은, 하기 식(1):

로 표시되는 화합물(「(5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-뷰틸)-18-사이클로펜틸-29-(3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)페네틸)-36-에틸-11-아이소뷰틸-N,N,5,6,12,16,19,33-옥타메틸-35-(4-메틸벤질)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-운데카옥소테트라트라이아콘타하이드로-2H,4H-스파이로[아제토[2,1-u]피롤로[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]운데카아자사이클로테트라트라이아콘틴-21,1'-사이클로펜테인]-15-카복사마이드」, 이하 「화합물 1」이라고 하는 경우가 있다.), 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물과, 액체 첨가제를 함유한다.

또, 본 발명에 따른 조성물은, 임의로 유성 성분을 함유하고, 바람직하게는 유성 성분을 함유한다.

화합물(유효 성분)

본 발명에서 이용할 수 있는 화합물은, 상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물이다. 화합물 1의 염은, 바람직하게는 그의 화학적 혹은 약학적으로 허용되는 염일 수 있다. 또한 본 발명에서 이용할 수 있는 화합물 1 또는 그의 염은, 그들의 용매화물, 바람직하게는 그의 화학적 혹은 약학적으로 허용되는 용매화물일 수 있다. 본 발명에서 이용되는 화합물은, 조성물 중에 있어서는, 바람직하게는 오로지 프리체의 태양일 수 있지만, 조성물의 태양에 따라서는, 염 또는 용매화물의 태양을 포함하는 경우가 있다.

본 발명에 있어서, 화합물 1의 염에는, 예를 들면, 염산염; 브로민화 수소산염; 아이오딘화 수소산염; 인산염; 포스폰산염; 황산염; 메테인설폰산염, p-톨루엔설폰산염 등의 설폰산염; 아세트산염, 시트르산염, 말산염, 타타르산염, 석신산염, 살리실산염 등의 카복실산염; 또는 나트륨염, 칼륨염 등의 알칼리 금속염; 마그네슘염, 칼슘염 등의 알칼리 토류 금속염; 암모늄염, 알킬암모늄염, 다이알킬암모늄염, 트라이알킬암모늄염, 테트라알킬암모늄염 등의 암모늄염 등이 포함된다. 이들 염은, 예를 들어, 당해 화합물 1과, 의약품의 제조에 사용 가능한 산 또는 염기를 접촉시키는 것에 의해 제조된다.

본 발명에 있어서, 용매화물이란, 화합물이 용매와 함께, 하나의 분자 집단을 형성한 것을 가리키며, 의약의 투여에 부수하여 섭취가 허용되는 용매에 의해 형성된 용매화물이면 특별히 한정되지 않는다. 그 예로서는, 수화물, 알코올화물(에탄올화물, 메탄올화물, 1-프로판올화물, 2-프로판올화물 등), 다이메틸설폭사이드 등의 단독의 용매와의 용매화물뿐만 아니라, 화합물 1분자에 대해서 복수 개의 용매와 용매화물을 형성한 것, 또는 화합물 1분자에 대해서 복수 종류의 용매와 용매화물을 형성한 것 등을 들 수 있다. 용매가 물이면 수화물이라고 말한다. 본 발명의 화합물의 용매화물로서는, 수화물이 바람직하고, 그와 같은 수화물로서 구체적으로는 1∼10수화물, 바람직하게는 1∼5수화물, 더 바람직하게는 1∼3수화물을 들 수 있다. 본 발명에서 사용되는 화합물 1의 수화물은, 온도나 습도 등의 주위 환경에 따라 화합물 1에 결합하는 물분자가 탈착하는 것에 의해, 물분자의 수가 변화할 수 있다.

본 발명에 있어서 사용할 수 있는, 화합물 1 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물은, 결정, 비정질 또는 그의 혼합물의 형태로 제공될 수 있고, 바람직하게는, 화합물 1 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물은, 결정 형태로 제공될 수 있다. 본 발명에 있어서 사용할 수 있는, 화합물 1 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물의 결정으로서는, 바람직하게는 화합물 1의 수화물의 결정(Form C라고도 부른다)을 들 수 있다.

화합물 1 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물의 결정은, 당해 기술분야에서 공지된 기술, 예를 들면 분말 X선 회절(XRPD), 수분 측정법(예를 들면 칼 피셔법), 주사형 전자 현미경(SEM) 분석, 고체 NMR, 또는 시차 주사 열량 측정(DSC)과 같은 열 기술, 또는 어느 기타의 표준적 정량 측정법에 의해 특징지을 수 있다.

분말 X선 회절에 있어서의 회절각 2θ는, 바람직하게는 CuKα 방사선을 이용하여 측정한 회절 피크이다.

예를 들면, 본 발명에 있어서 사용할 수 있는, 화합물 1의 수화물의 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 하기 중의 적어도 1개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는다.

4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 17.813°(±0.2°)

회절각 2θ의 표기에 있어서, 열기된 회절각 2θ의 마지막에 「(±0.2°)」라고 기재되어 있는 경우는, 열기된 모든 회절각 2θ에 있어서, 기재된 각 값에 대해서 ±0.2°의 범위가 허용되는 것을 의미한다.

본 발명에서 이용하는 화합물 1에는, 화합물 1의 모든 동위체를 포함한다. 화합물 1의 동위체는, 적어도 1개의 원자가, 원자 번호(양자수)가 동일하고, 질량수(양자와 중성자의 수의 합)가 상이한 원자에 의해, 천연의 존재비와는 상이한 존재비로 치환된 것이다. 화합물 1에 포함되는 동위체의 예로서는, 수소 원자, 탄소 원자, 질소 원자, 산소 원자, 불소 원자가 있고, 각각, ²H, ³H, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁷O, ¹⁸O, ¹⁸F 등이 포함된다. 특히, ³H나 ¹⁴C와 같은, 방사능을 발하며 붕괴되는 방사성 동위체는, 의약품 혹은 화합물의 체내 조직 분포 시험 등 시에 유용하다. 안정 동위체는, 붕괴를 일으키지 않고, 시간의 경과에 따라 존재량이 거의 변하지 않으며, 방사능도 없기 때문에, 안전하게 사용할 수 있다. 화합물 1의 동위체는, 합성에서 이용하고 있는 시약을, 대응하는 동위체를 포함하는 시약으로 치환하는 것에 의해, 통상적 방법에 따라 변환할 수 있다. 화합물 1의 염의 형성에 이용되는 산, 또는 염기, 및 화합물 1의 용매화물의 형성에 이용되는 용매도 모든 동위체를 포함할 수 있다.

액체 첨가제

본 발명에 따른 조성물에 이용할 수 있는 「액체 첨가제」는, 의약적으로 허용되는 것이고, 본 발명에서 이용하는 화합물을 용해시킬 수 있는 첨가제이다. 본 발명에 있어서는, 「액체 첨가제」란, 첨가제가 조성물 중에 있어서 용해된 상태에 있는 것을 의미하고, 조성물의 제조의 원료로서 제공되는 단계에 있어서 용해되어 있지 않은 것은, 다른 성분과의 혼합이나 가열 등에 의해 제조 과정에서 용해시켜, 본 발명에 따른 조성물의 일 성분으로 할 수 있다. 액체 첨가제로서는, 실온에 있어서 액체인 첨가제를 바람직하게 사용할 수 있다.

본 명세서에 있어서, 「실온」은, 본 기술분야에 있어서의 통상적인 의미로 이용되고 특별히 한정되지 않지만, 특단의 기재가 없는 한, 예를 들면, 바람직하게는 1∼30℃, 보다 바람직하게는 15∼28℃ 정도이다.

본 발명에서 이용할 수 있는 액체 첨가제로서는, 바람직하게는 계면활성제를 들 수 있고, 계면활성제로서는, 바람직하게는 소수성 계면활성제와 친수성 계면활성제를 들 수 있다. 본 발명에 있어서는, 소수성 계면활성제와 친수성 계면활성제를 조합하여 이용하는 것이 바람직하다.

본 발명에서 이용할 수 있는 소수성 계면활성제 및 친수성 계면활성제에 있어서는, 바람직하게는, 소수성 계면활성제의 HLB값(Hydrophilic-Lipophilic Balance값)은, 바람직하게는 10 미만이고, 보다 바람직하게는 0 이상 10 미만이며, 친수성 계면활성제의 HLB값은, 바람직하게는 10 이상이고, 보다 바람직하게는 10 이상 30 이하, 더 바람직하게는 10 이상 20 이하인 것을 이용하는 것이 바람직하다. HLB값은, 계면활성제의 물과 오일(물에 불용성인 유기 화합물)에 대한 친화성의 정도를 나타내는 값이고, 당업자에 있어서 공지되어 있으며, 예를 들면, 그리핀법, 아틀라스법, 데이비스법 등으로 알려진 방법에 기초하는 값을 채용할 수 있다.

소수성 계면활성제로서는, 바람직하게는, 프로필렌 글라이콜 지방산 에스터, 글리세린 지방산 에스터, 폴리글리세린 지방산 에스터, 소비탄 지방산 에스터, 및 소수성 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 등을 들 수 있고, 이들을 조합하여 이용할 수도 있다. 소수성 계면활성제로서는, 보다 바람직하게는 프로필렌 글라이콜 지방산 에스터, 또는 소비탄 지방산 에스터를 이용할 수 있고, 더 바람직하게는 프로필렌 글라이콜 지방산 에스터를 이용할 수 있다.

프로필렌 글라이콜 지방산 에스터로서는, 바람직하게는, 모노카프로산 프로필렌 글라이콜, 모노카프릴산 프로필렌 글라이콜, 모노카프르산 프로필렌 글라이콜, 모노라우르산 프로필렌 글라이콜, 모노미리스트산 프로필렌 글라이콜, 모노팔미트산 프로필렌 글라이콜, 모노스테아르산 프로필렌 글라이콜, 및 모노올레산 프로필렌 글라이콜을 들 수 있다. 이들 중, 보다 바람직하게는 모노카프릴산 프로필렌 글라이콜을 이용할 수 있다.

글리세린 지방산 에스터로서는, 바람직하게는, 모노카프로산 글리세릴, 모노카프릴산 글리세릴, 모노카프르산 글리세릴, 모노라우르산 글리세릴, 모노미리스트산 글리세릴, 모노팔미트산 글리세릴, 모노스테아르산 글리세릴, 모노올레산 글리세릴, 및 모노리놀레산 글리세릴 등을 들 수 있다.

폴리글리세린 지방산 에스터로서는, 바람직하게는, 모노올레산 다이글리세릴을 들 수 있다.

소비탄 지방산 에스터로서는, 바람직하게는, 모노카프릴산 소비탄, 모노카프르산 소비탄, 모노라우르산 소비탄, 모노미리스트산 소비탄, 모노팔미트산 소비탄, 모노스테아르산 소비탄, 모노올레산 소비탄, 세스퀴올레산 소비탄, 및 트라이올레산 소비탄 등을 들 수 있다.

본 명세서에 있어서, 소수성 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유란, 소수성의 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유이고, 예를 들면 HLB값이 바람직하게는 10 미만, 보다 바람직하게는 0 이상 10 미만인 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유를 들 수 있다. 소수성 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유로서는, 바람직하게는, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 5 및 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 10 등을 들 수 있다.

친수성 계면활성제로서는, 바람직하게는, 폴리에틸렌 글라이콜 지방산 에스터, 폴리옥시에틸렌 피마자유, 친수성 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유, 폴리옥시에틸렌 소비탄 지방산 에스터, D-α-토코페릴 폴리에틸렌 글라이콜 1000 석신산염, 카프릴로카프로일 폴리옥실-8 글리세라이드 등을 들 수 있고, 이들을 조합하여 이용할 수도 있다. 친수성 계면활성제로서는, 보다 바람직하게는 폴리옥시에틸렌 피마자유, 폴리옥시에틸렌 소비탄 지방산 에스터, D-α-토코페릴 폴리에틸렌 글라이콜 1000 석신산염, 카프릴로카프로일 폴리옥실-8 글리세라이드, 또는 이들의 조합을 이용할 수 있고, 더 바람직하게는 폴리옥시에틸렌 피마자유를 이용할 수 있다.

폴리에틸렌 글라이콜 지방산 에스터로서는, 바람직하게는, 폴리옥시에틸렌 하이드록시스테아레이트, 모노라우르산 폴리에틸렌 글라이콜, 모노스테아르산 폴리에틸렌 글라이콜, 및 스테아르산 폴리옥실 40 등을 들 수 있다.

폴리옥시에틸렌 피마자유로서는, 바람직하게는 폴리옥실 30 피마자유, 폴리옥실 35 피마자유, 폴리옥실 40 피마자유 등을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 폴리옥실 35 피마자유를 들 수 있다.

본 명세서에 있어서, 친수성 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유란, 친수성의 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유이고, 예를 들면 HLB값이 바람직하게는 10 이상, 보다 바람직하게는 10 이상 30 이하, 더 바람직하게는 10 이상 20 이하인 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유이다. 친수성 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유로서는, 바람직하게는, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 20, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 40, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 50, 및 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 60 등을 들 수 있다.

폴리옥시에틸렌 소비탄 지방산 에스터로서는, 바람직하게는, 폴리소베이트 20, 폴리소베이트 40, 폴리소베이트 60, 및 폴리소베이트 80 등을 들 수 있다.

친수성 계면활성제로서는, 더 바람직하게는 폴리옥실 35 피마자유, D-α-토코페릴 폴리에틸렌 글라이콜 1000 석신산염, 카프릴로카프로일 폴리옥실-8 글리세라이드, 폴리소베이트 80, 또는 이들의 조합을 바람직하게 이용할 수 있다.

계면활성제는, 소수성 계면활성제로서, 바람직하게는 모노카프릴산 프로필렌 글라이콜을 이용하고, 친수성 계면활성제로서, 바람직하게는 폴리옥실 35 피마자유, D-α-토코페릴 폴리에틸렌 글라이콜 1000 석신산염, 카프릴로카프로일 폴리옥실-8 글리세라이드, 폴리소베이트 80, 또는 이들의 조합을 이용할 수 있다.

계면활성제는, 바람직하게는, 소수성 계면활성제로서 프로필렌 글라이콜 지방산 에스터를 이용하고, 친수성 계면활성제로서 적어도 폴리옥시에틸렌 피마자유를 함유시키는 것이 바람직하며, 특히 바람직하게는, 계면활성제는, 소수성 계면활성제로서 모노카프릴산 프로필렌 글라이콜을 이용하고, 친수성 계면활성제로서 적어도 폴리옥실 35 피마자유를 함유시키는 것이 바람직하다.

유성 성분

본 발명에 따른 조성물에 있어서는, 유성 성분을 함유시킬 수 있다. 유성 성분으로서는, 바람직하게는, 지방산, 아실글리세롤, 식물유 및 이들의 조합을 들 수 있다. 유성 성분으로서는, 더 바람직하게는 지방산 또는 아실글리세롤을 이용할 수 있고, 보다 바람직하게는 지방산을 이용할 수 있다.

지방산으로서는, 바람직하게는, 카프로산, 카프릴산, 카프르산, 라우르산, 미리스트산, 미리스톨레산, 팔미트산, 팔미톨레산, 스테아르산, 올레산, 리놀레산, 및 리놀렌산 등을 들 수 있다. 이들 중, 보다 바람직하게는 올레산, 리놀레산, 및 리놀렌산을 들 수 있고, 더 바람직하게는 올레산을 들 수 있다.

아실글리세롤로서는, 바람직하게는, 트라이아세틴, 트라이뷰티린, 트라이카프로인, 트라이카프릴린, 트라이카프린, 트라이팔미틴, 트라이팔미톨레인, 트라이스테아르산 글리세린, 트라이올레인, 트라이리놀레인, 트라이리놀레닌, 및 중쇄 지방산 트라이글리세라이드 등을 들 수 있다. 이들 중, 보다 바람직하게는 트라이아세틴을 들 수 있다.

식물유로서는, 올리브유, 아몬드유, 야자유, 카카오지, 마카다미아 너트유, 아보카도유, 새플라워유, 대두유, 아마인유, 유채유, 피마자유, 콘유, 및 팜유 등을 들 수 있다.

이와 같은 유성 성분으로서는, 바람직하게는 올레산, 트라이아세틴, 또는 이들의 조합을 이용할 수 있고, 더 바람직하게는 올레산을 이용하는 것이 바람직하다.

본 발명의 조성물에 있어서는, 계면활성제로서는, 바람직하게는, 소수성 계면활성제로서 프로필렌 글라이콜 지방산 에스터를 이용하고, 친수성 계면활성제로서 적어도 폴리옥시에틸렌 피마자유를 함유시키고, 유성 성분으로서 지방산을 이용하는 것이 바람직하며, 특히 바람직하게는, 계면활성제는, 소수성 계면활성제로서 모노카프릴산 프로필렌 글라이콜을 이용하고, 친수성 계면활성제로서 적어도 폴리옥실 35 피마자유를 함유시키고, 유성 성분으로서 올레산을 이용하는 것이 바람직하다.

본 발명에 따른 조성물은, 추가로 항산화제를 포함할 수 있다. 항산화제로서는, 바람직하게는, dl-α-토코페롤, 뷰틸레이트화 하이드록시톨루엔, 뷰틸레이트화 하이드록시아니솔, 프로필 갈레이트, 몰식자산 프로필, 의약으로서 허용될 수 있는 퀴논, 아스타잔틴, 및 D-α-토코페릴 폴리에틸렌 글라이콜 1000 석신산염 등, 및 이들의 조합을 들 수 있다. 항산화제로서는, 보다 바람직하게는, dl-α-토코페롤을 들 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은, 추가로 가용화제를 포함할 수 있다. 가용화제로서는, 바람직하게는, 에탄올, 프로필렌 글라이콜, 폴리에틸렌 글라이콜 300, 폴리에틸렌 글라이콜 400, 다이에틸렌 글라이콜 모노에틸 에터, 및 이들의 조합 등을 들 수 있다. 가용화제로서는, 보다 바람직하게는 에탄올 또는 프로필렌 글라이콜이고, 더 바람직하게는 프로필렌 글라이콜이다.

본 발명에 따른 조성물에 있어서는, 화합물 1, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물의 함유량은, 액체 첨가제 및 임의로 이용하는 유성 성분 중에 용해되어, 일정한 유효성을 발휘할 수 있는 농도이면 되고, 그 함유율은 특별히 한정되지 않지만, 화합물 1, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물의 조성물 전체에 대한 함유율은, 상한치는, 바람직하게는, 10중량% 이하, 9중량% 이하, 8중량% 이하, 7중량% 이하, 6중량% 이하, 5중량% 이하, 4중량% 이하, 3중량% 이하, 또는 2중량% 이하, 보다 바람직하게는 10중량% 이하, 8중량% 이하, 7중량% 이하로 할 수 있다. 함유율의 하한치는, 특별히 한정되지 않지만, 바람직하게는, 제로%를 초과하는 양, 0.1중량% 이상, 0.2중량% 이상, 0.3중량% 이상, 0.4중량% 이상, 0.5중량% 이상, 0.6중량% 이상, 0.7중량% 이상, 0.8중량% 이상, 0.9중량% 이상, 또는 1중량% 이상으로 할 수 있고, 보다 바람직하게는, 0.1중량% 이상, 0.2중량% 이상, 0.3중량% 이상, 0.4중량% 이상, 또는 0.5중량% 이상으로 할 수 있다. 또 함유율은, 상기 하한치 및 상한치의 임의의 조합의 범위로 할 수 있다. 예를 들면, 함유율의 범위는, 바람직하게는, 0.1중량% 이상 10중량% 이하, 0.2중량% 이상 10중량% 이하, 0.3중량% 이상 10중량% 이하, 0.4중량% 이상 10중량% 이하, 0.5중량% 이상 10중량% 이하 등으로 할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물에 있어서는, 액체 첨가제, 바람직하게는 계면활성제가, 화합물 1 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물이 용해될 수 있도록 함유되면 되고, 그 함유율은 특별히 한정되지 않지만, 액체 첨가제의 조성물 전체에 대한 함유율은, 바람직하게는 50중량% 이상 97중량% 이하, 보다 바람직하게는 55중량% 이상 96중량% 이하, 더 바람직하게는 70중량% 이상 90중량% 이하로 할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물에 있어서는, 소수성 계면활성제의 조성물 전체에 대한 함유율은, 바람직하게는 20중량% 이상 70중량% 이하, 보다 바람직하게는 25중량% 이상 65중량% 이하, 더 바람직하게는 30중량% 이상 55중량% 이하로 할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물에 있어서는, 친수성 계면활성제의 조성물 전체에 대한 함유율은, 바람직하게는 20중량% 이상 40중량% 이하, 보다 바람직하게는 25중량% 이상 35중량% 이하, 더 바람직하게는 28중량% 이상 33중량% 이하로 할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물에 있어서는, 소수성 계면활성제의 친수성 계면활성제에 대한 중량비(소수성 계면활성제/친수성 계면활성제)는, 바람직하게는 0.5∼3.0, 보다 바람직하게는 1.0∼2.5, 더 바람직하게는 1.5∼2.0이다.

본 발명에 따른 조성물에 있어서는, 유성 성분의 조성물 전체에 대한 함유율은, 바람직하게는 0중량% 이상 50중량% 이하, 보다 바람직하게는 1중량% 이상 40중량% 이하, 더 바람직하게는 10중량% 이상 20중량% 이하이다.

본 발명에 따른 조성물에 있어서 항산화제를 함유시키는 경우, 항산화제의 조성물 전체에 대한 함유율은, 제제의 의약 특성에 악영향을 주지 않는 범위이고 특별히 한정되지 않지만, 바람직하게는 0.01중량% 이상, 보다 바람직하게는 0.01중량% 이상 5중량% 이하, 더 바람직하게는 0.1중량% 이상 5중량% 이하, 더 바람직하게는 0.1중량% 이상 2중량% 이하 정도이다.

본 발명에 따른 조성물에 있어서 가용화제를 함유시키는 경우, 가용화제의 조성물 전체에 대한 함유율은, 제제의 의약 특성에 악영향을 주지 않는 범위이고 특별히 한정되지 않지만, 바람직하게는 1중량% 이상 20중량% 이하, 보다 바람직하게는 2중량% 이상 15중량% 이하 정도이다.

본 발명에 따른 조성물에 있어서는, 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물에 대한, 액체 첨가제의 중량비(액체 첨가제/화합물 1 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물)는, 화합물 1 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물이 용해될 수 있으면 되고, 특별히 한정되지 않지만, 바람직하게는 5 이상, 보다 바람직하게는 10 이상이다. 당해 중량비의 상한치는 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면, 바람직하게는 2000 이하, 더 바람직하게는 1000 이하로 할 수 있다. 당해 중량비는, 하한치 및 상한치의 임의의 조합의 범위로 할 수 있고, 예를 들면 중량비는, 바람직하게는 5∼2000, 보다 바람직하게는 10∼2000, 더 바람직하게는 10∼1000으로 할 수 있다. 액체 첨가제는 바람직하게는 계면활성제이다.

본 발명에 따른 조성물에 있어서는, 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물에 대한, 액체 첨가제 및 상기 유성 성분의 합계의 중량비(액체 첨가제 및 상기 유성 성분의 합계/화합물 1 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물)는, 화합물 1 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물이 용해될 수 있으면 되고, 특별히 한정되지 않지만, 바람직하게는 10 이상이다. 당해 중량비의 상한치는 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면, 바람직하게는 2000 이하, 더 바람직하게는 1000 이하로 할 수 있다. 당해 중량비는, 하한치 및 상한치의 임의의 조합의 범위로 할 수 있고, 예를 들면 중량비는, 바람직하게는 10∼2000, 보다 바람직하게는 10∼2000으로 할 수 있다. 액체 첨가제는 바람직하게는 계면활성제이다.

본 발명의 조성물의 형태는, 액체, 겔상, 혹은 반고체일 수 있고, 바람직하게는 액체이다.

본 발명에 따른 조성물은, 조성물을 물 등의 액체 중에 분산시켰을 때에 형성되는 액적의 평균 입자경이 작고, 입자경 분포의 폭이 좁다는 특징을 갖는다.

예를 들면, 본 발명의 조성물 및 물을 혼합한 혼합 용액에 관해서, 일정한 희석 배율(예를 들면, 조성물이 혼합 용액 전체에 대해서 0.01∼1체적%)하, 조성물의 교반이나 혼합 등의 취급에 적절한 온도, 및/또는 조성물 중에 포함되는 물질의 안정성에 영향이 없는 온도, 예를 들어 실온 부근(약 25℃)에서 혼합 용액을 교반하여, 본 발명의 조성물을 용액 중에 분산시켰을 때에 형성되는 액적의 평균 입자경이, 바람직하게는 200nm 미만, 보다 바람직하게는 10nm 이상 200nm 미만, 더 바람직하게는 50nm 이상 200nm 미만이다. 또한, 본 발명의 조성물은, 입자경 분포를 표시하는 지표인 다분산성 지수(polydispersity index, PDI)가, 바람직하게는 0.5 미만, 보다 바람직하게는 0.4 이하, 더 바람직하게는 0.3 이하이다. 조성물 중의 화합물의 평균 입자경 및 다분산성 지수는, 동적 광산란법(DLS: Dynamic Light Scattering) 등의 공지된 방법을 이용하여 구할 수 있다.

또한, 예를 들면, 체내의 모의 환경(예를 들면, 장용성 제제의 붕괴 시험에 이용되는, 일본 약국방 용출 시험 제1액, pH 1.2, 체내 모의 온도(예를 들면 36∼37℃))의 용액을 사용한 경우의 혼합 용액에 관해서도, 일정한 희석 배율하(예를 들면, 조성물이 혼합 용액 전체에 대해서 0.01∼1체적%)에서 교반하여 본 발명의 조성물을 용액에 분산시켰을 때에 형성되는 액적의 입자경 분포는, 마찬가지로, 액적의 평균 입자경이 작고, 입자경 분포의 폭이 좁다는 특징을 나타낼 수 있다. 즉, 소화관 내에서도 평균 입자경이 작고, 입자경 분포의 폭이 좁은 액적을 형성할 수 있다.

이와 같은, 본 발명의 조성물은, 액체 중에 있어서 우수한 분산성을 가질 수 있음과 함께, 우수한 체내 흡수성을 가질 수 있다.

<의약 제제>

본 발명에 따른 의약 제제는, 본 발명의 화합물 1 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물과, 액체 첨가제, 및 임의로 유성 성분을 함유하는 조성물을 포함하는, 의약 제제이다.

본 발명에 따른 의약 제제는, 본 발명의 화합물 1 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물과, 액체 첨가제, 및 임의로 유성 성분, 나아가 임의로 항산화제, 가용화제 등에 더하여, 의약적으로 허용할 수 있는 담체를 도입함으로써 제조할 수 있다. 제제화에는 통상 이용되는 부형제, 결합제, 활택제, 착색제, 교미교취제나, 필요에 따라 안정화제, 유화제, 흡수 촉진제, pH 조정제, 방부제 등을 사용할 수 있고, 일반적으로 의약품 제제의 원료로서 이용되는 성분을 배합하여 통상적 방법에 의해 제제화할 수 있다.

본 발명에 따른 제제의 투여는, 경구 투여, 또는 비경구 투여의 어느 쪽이어도 된다. 바람직하게는 경구 투여이지만, 투여 방법은 경구 투여에 구애되지 않는다.

예를 들면, 경구 제제를 제조하기 위해서는, 본 발명의 화합물 1 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물, 액체 첨가제, 임의의 유성 성분 등에, 필요에 따라 결합제, 붕괴제, 활택제, 착색제, 교미교취제 등을 추가로 가한 후, 통상적 방법에 의해 약액, 캡슐제 등으로 한다. 본 발명의 조성물은, 바람직하게는 액체이므로, 액체 제제에 있어서는, 주사제 또는 캡슐제로 할 수 있다.

본 발명의 조성물을 캡슐제로 하는 경우, 캡슐은, 캡슐 제제에 있어서 통상 이용되고 있는 것을 이용할 수 있다.

캡슐의 종류는 특별히 한정되지 않고, 본 기술분야에 있어서 통상 사용되는 것을 이용할 수 있다. 예를 들면, 캡슐로서는, 경캡슐(하드 캡슐), 연캡슐(소프트 캡슐) 등을 들 수 있다. 하드 캡슐은, 통상, 캡과 보디로 이루어지고, 제제를 충전한 보디에 캡을 씌워 제조할 수 있다. 하드 캡슐의 원료로서는, 예를 들면, 젤라틴, 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 풀루란, 혹은 이들의 혼합물 등을 포함하는 것을 바람직하게 이용할 수 있고, 그 크기는, 9호, 5호, 4호, 3호, 2호, 1호, 0호, 00호, 000호 등의 규격에 의해 규정할 수 있다. 소프트 캡슐은, 예를 들면 제제를 젤라틴 등의 기제로 감싸서 제조할 수 있다. 소프트 캡슐의 원료로서는, 예를 들면, 젤라틴, 전분, 카라기난, 한천, 글리세린, 소비톨, 혹은 이들의 혼합물 등을 포함하는 것을 바람직하게 이용할 수 있다.

부형제로서는, 예를 들면 유당, 콘스타치, 백당, 포도당, 만니톨, 소비트, 결정 셀룰로스, 이산화 규소 등을 들 수 있다.

결합제로서는, 예를 들면 폴리바이닐 알코올, 폴리바이닐 에터, 메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스, 아라비아 고무, 트래거캔스, 젤라틴, 셸락, 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 하이드록시프로필셀룰로스, 폴리바이닐피롤리돈, 폴리프로필렌 글라이콜·폴리옥시에틸렌·블록 폴리머, 메글루민 등을 들 수 있다.

붕괴제로서는, 예를 들면 전분, 한천, 젤라틴말, 결정 셀룰로스, 탄산 칼슘, 탄산수소 나트륨, 시트르산 칼슘, 덱스트린, 펙틴, 카복시메틸셀룰로스·칼슘 등을 들 수 있다.

활택제로서는, 예를 들면 스테아르산 마그네슘, 탤크, 폴리에틸렌 글라이콜, 실리카, 경화 식물유 등을 들 수 있다.

착색제로서는 의약품에 첨가하는 것이 허가되고 있는 것이, 교미교취제로서는, 코코아말, 박하뇌, 방향산, 박하유, 용뇌, 계피말 등이 이용된다.

시럽제나 주사용 제제 등의 액제를 제조할 때에는, 본 발명에서 이용하는 화합물 1 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물에 pH 조정제, 용해제, 등장화제 등과, 필요에 따라 용해 보조제, 안정화제 등을 가하여, 통상적 방법에 의해 제제화한다.

예를 들면, 비경구 투여로서는, 구체적으로는, 주사 제형, 경비 투여 제형, 경폐 투여 제형, 경피 투여형 등을 들 수 있다. 주사 제형의 예로서는, 예를 들면, 정맥내 주사, 근육내 주사, 복강내 주사, 피하 주사 등에 의해 전신 또는 국부적으로 투여할 수 있다. 경비 투여 제형의 예로서는, 예를 들면 제제 중의 유효 성분을 비강 점막으로부터 흡수시키는 것 또는 비강을 통해서 제제를 투여하는 것 등에 의해, 전신 또는 국부적으로 투여할 수 있다. 경폐 투여 제형의 예로서는, 예를 들면 기관을 통해서 제제를 폐에 투여하는 것 등에 의해, 전신 또는 국부적으로 투여할 수 있다. 경피 투여형의 예로서는, 예를 들면 피부에 제제를 첩부하는 것 등에 의해, 전신 또는 국부적으로 투여할 수 있다.

또한, 환자의 연령, 증상에 따라 적절히 투여 방법을 선택할 수 있다. 본 발명에서 이용하는 화합물 1 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물을 함유하는 의약 제제의 투여량으로서는, 예를 들면, 1회에 대해 체중 1kg당 0.001mg 내지 100mg의 범위에서 선택하는 것이 가능하다. 혹은, 예를 들면, 환자당 0.1 내지 1000mg/body의 범위에서 투여량을 선택할 수 있지만, 이들 수치에 반드시 제한되는 것은 아니다. 투여량, 투여 방법은, 환자의 체중이나 연령, 증상 등에 따라 변동하지만, 당업자라면 적절히 선택하는 것이 가능하다.

<조성물 및 의약 제제의 제조 방법>

본 발명에 따른 조성물의 제조 방법은,

(1) 하기 식(1):

로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물, 액체 첨가제, 및 임의로 유성 성분을 제공하는 공정(공정 1);

(2) 해당 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물, 액체 첨가제, 및 임의로 유성 성분을 혼합하는 공정(공정 2); 및

(3) 해당 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물이 용해된 조성물을 얻는 공정(공정 3)을 포함한다.

본 발명의 조성물의 제조 방법에 있어서, 공정(1)에서 공급되는 화합물 1 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물은, 바람직하게는, 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이고, 보다 바람직하게는 식(1)로 표시되는 화합물의 1 이상의 물분자가 포함되는 것이 바람직하다. 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물 중에 포함되는 물분자의 수는, 온도나 습도 등의 주위의 환경에 따라 탈착할 수 있다.

또, 본 발명의 조성물의 제조 방법에 있어서, 공정(1)에서 공급되는 화합물 1 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물은, 바람직하게는 화합물 1 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물 1의 결정이고, 보다 바람직하게는 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물의 결정이다. 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물의 결정 중의 물분자는, 1 이상의 물분자가 포함되는 것이 바람직하지만, 물분자의 수는, 온도나 습도 등의 주위의 환경에 따라 탈착할 수 있는 것은 전술한 바와 같다.

식(1)로 표시되는 화합물의 수화물의 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 14.752°, 14.968°, 15.895°, 16.190°, 16.643°, 17.813°, 및 19.424°(±0.2°) 중의, 적어도 1개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 가질 수 있다.

식(1)로 표시되는 화합물의 수화물의 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°) 중의, 적어도 1개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 가질 수 있다.

식(1)로 표시되는 화합물의 수화물의 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 7.921°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 15.895°, 및 16.643°(±0.2°) 중의, 적어도 1개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 가질 수 있다.

식(1)로 표시되는 화합물의 수화물의 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 7.921°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 15.895°, 및 16.643°(±0.2°) 중의, 적어도 2개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 가질 수 있다.

식(1)로 표시되는 화합물의 수화물의 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 7.921°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 15.895°, 및 16.643°(±0.2°) 중의, 적어도 3개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 가질 수 있다.

식(1)로 표시되는 화합물의 수화물의 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 7.921°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 15.895°, 및 16.643°(±0.2°) 중의, 적어도 4개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 가질 수 있다.

식(1)로 표시되는 화합물의 수화물의 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 7.921°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 15.895°, 및 16.643°(±0.2°) 중의, 적어도 5개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 가질 수 있다.

식(1)로 표시되는 화합물의 수화물의 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 7.921°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 15.895°, 및 16.643°(±0.2°) 중의, 적어도 6개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 가질 수 있다.

식(1)로 표시되는 화합물의 수화물의 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 7.921°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 15.895°, 및 16.643°(±0.2°)의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는 것이 바람직하다.

식(1)로 표시되는 화합물의 수화물의 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는 것이 보다 바람직하다.

식(1)로 표시되는 화합물의 수화물의 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 14.752°, 14.968°, 15.895°, 16.190°, 16.643°, 17.813°, 및 19.424°(±0.2°)의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는 것이 더 바람직하다.

본 발명의, 분말 X선 회절에 의한 분석은, 예를 들면, 일본 약국방(제15개정)에 기재되어 있는 「분말 X선 회절 측정법」 등의 통상적 방법에 따라 행할 수 있다. 또한, 일본 약국방에 의하면, 동일 결정형에서는 통례, 회절각 2θ는 ±0.2°의 범위 내에서 일치한다고 설명되어 있다. 따라서, 분말 X선 회절에 있어서의 피크의 회절각이 완전히 일치하는 결정뿐만 아니라, 피크의 회절각이 ±0.2° 정도의 오차로 일치하는 결정도 본 발명에 포함된다.

화합물 1 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물, 액체 첨가제, 및 유성 성분 등의 각 성분의 사용 비율은, 전술한 바와 같다.

각 성분을 혼합하는 공정에 있어서는, 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물, 액체 첨가제, 및 임의로 유성 성분의 각 성분, 추가로, 필요에 따라 의약품의 부형제 등으로서 통상 이용되는 성분을, 공지된 교반 혼합 장치 등에 투입하여 혼합한다.

각 성분의 혼합 온도 및 혼합 시간은 성분에 악영향을 주지 않는 범위이면 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 혼합 온도는, 바람직하게는 0∼50℃, 보다 바람직하게는 10∼30℃이고, 혼합 시간은, 바람직하게는 5분∼60분 정도이다.

본 발명에 따른 의약 제제의 제조 방법은, 본 발명의 조성물을 제공하는 공정, 및 해당 조성물을 제제화하여, 의약 제제를 제공하는 공정을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 의약 제제의 제조 방법은, 본 발명의 조성물을 제공하는 공정, 및 해당 조성물을 캡슐에 충전하여, 캡슐 제제를 제조하는 공정을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 의약 제제의 제조 방법은, 상기 조성물의 제조 방법으로 얻어진 조성물을 캡슐에 충전하여, 캡슐 제제를 제공하는 공정을 포함할 수 있다. 즉, 상기 조성물의 제조 방법에 있어서의 공정(1)∼(3)에 의해 얻어진 조성물을 캡슐에 충전하여, 캡슐 제제를 제공하는 공정을 포함할 수 있다.

본 발명에 있어서, 「및/또는」이라는 용어의 의의는, 「및」과 「또는」이 적절히 조합된 모든 조합을 포함한다. 구체적으로는, 예를 들면, 「A, B, 및/또는 C」에는, 이하의 7가지 베리에이션이 포함된다; (i) A, (ii) B, (iii) C, (iv) A 및 B, (v) A 및 C, (vi) B 및 C, (vii) A, B, 및 C.

본 명세서에 있어서, 「약」이라는 용어는, 수치와 조합하여 사용되는 경우, 그 수치의 +10% 및 -10%의 값의 범위를 의미한다.

본 명세서에 있어서, 범위를 나타내는 「∼」란 그 양단의 값을 포함하며, 예를 들면, 「A∼B」는, A 이상이고, 또한 B 이하인 범위를 의미한다.

본 명세서에 있어서의 분자량의 단위는 「g/mol」이다. 본 명세서에 있어서는 분자량의 단위를 생략하는 경우가 있다.

본 명세서 및 특허청구범위의 양쪽에 있어서의 관사 「하나의(a)」, 「하나의(an)」, 및 「그(the)」의 사용은, 본 명세서에 있어서 특별히 나타나거나 또는 문맥에 의해 명확하게 부정되지 않는 한, 단수형 및 복수형의 양쪽을 포함하도록 해석되는 것으로 한다.

본 명세서에 있어서 인용된 모든 선행기술문헌은, 참조로서 본 명세서에 원용된다.

실시예

본 발명의 내용을 이하의 실시예 및 참고예로 더 설명하지만, 본 발명은 그 내용에 한정되는 것은 아니다. 모든 출발 물질 및 시약은 상업적 공급업자로부터 입수, 혹은 공지된 방법을 이용하여 합성했다. LC/MS의 분석 조건은 표 1에 기재했다.

본 명세서 중에서 달리 나타나는 경우를 제외하고, 본 명세서 중의 영어 표기 및 약어의 의미는 하기와 같다.

Triacetin: 트라이아세틴

Oleic acid: 올레산

Propylene glycol(PG) monocaprylate: 모노카프릴산 프로필렌 글라이콜

Glycerol monooleate: 모노올레산 글리세롤

Sorbitan trioleate: 트라이올레산 소비탄

Polyoxyl 35 castor oil: 폴리옥실 35 피마자유

Polyoxyethylene (15) hydroxystearate: 폴리옥시에틸렌 하이드록시스테아레이트

PEG-8 Caprylic/Capric Glycerides: 카프릴로카프로일 폴리옥실-8 글리세라이드

Polysorbate 80: 폴리소베이트 80

Propylene glycol(PG): 프로필렌 글라이콜

EtOH: 에탄올

PEG400: 폴리에틸렌 글라이콜 400

D-α-Tocopherol polyethylene glycol 1000 succinate: D-α-토코페릴 폴리에틸렌 글라이콜 1000 석신산염

dl-α-tocopherol: dl-α-토코페롤

Boc: tert-뷰톡시카보닐

t-Bu: tert-뷰틸

CSA: (+)-10-캄퍼설폰산

DBU: 1,8-다이아자바이사이클로[5.4.0]-7-운데센

DCM: 다이클로로메테인

DCE: 1,2-다이클로로에테인

DMA: 다이메틸아세트아마이드

DMF: N,N-다이메틸폼아마이드

DIC: N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드

DIPEA: N,N-다이아이소프로필에틸아민

DMAP: N,N-다이메틸-4-아미노피리딘

DMSO: 다이메틸설폭사이드

EDTA: 에틸렌다이아민 사아세트산

Fmoc: 9-플루오렌일메틸옥시카보닐

Fmoc-OSu: 탄산 N-석신이미딜 9-플루오렌일메틸

HOAt: 1-하이드록시-7-아자벤조트라이아졸

HOBt: 1-하이드록시벤조트라이아졸

HOOBt: 3,4-다이하이드로-3-하이드록시-4-옥소-1,2,3-벤조트라이아진

MTBE: 메틸 tert-뷰틸 에터

NMP: N-메틸-2-피롤리돈

oxyma: 사이아노(하이드록시이미노)아세트산 에틸

TES: 트라이에틸실레인

TFA: 트라이플루오로아세트산

TFE: 2,2,2-트라이플루오로에탄올

THF: 테트라하이드로퓨란

TfOH: 트라이플루오로메테인설폰산

TsOH: p-톨루엔설폰산

WSCI·HCl: 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드 염산염

본 발명의 실시에 이용한 액체 첨가제, 계면활성제, 유성 성분, 가용화제, 항산화제, 또는 용매 등의 시약류는, 특별히 기재한 것 이외에, 상업적 공급업자품을 정제하지 않고 이용했다.

첨가제의 혼합, 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물과 첨가제나 제제의 혼합은, 통상의 실험 기기를 이용하여, 혼합물이 균일하게 되도록 진탕, 또는 교반 등의 당업자에게 주지된 방법으로 행했다.

식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물의 용해도의 측정은, 해당 화합물에 첨가제, 또는 제제를 가한 후에 진탕, 또는 교반 등의 조작을 행하고, 육안으로 용해를 확인하여, 가한 액체량으로부터 산출했다. 고속 액체 크로마토그래피 등의 장치로 측정하는 것도 가능하다.

시험법 1: 동적 산란(DLS)에 의한 입자경 분포 측정

ZETASIZER Nano-ZS(Malvern)를 이용하여 동적 산란(DLS)에 의한 입자경 분포를 구한다. 샘플을 디스포저블 셀(소용량 큐벳)에 넣고, ZETASIZER Nano-ZS(Malvern)에 세팅하여 동적 산란(DLS)에 의한 입자경 분포를 구한다. 입자경 분포를 표시하는 지표로서, 평균 입자경(Z-average 사이즈)과 다분산성 지수(polydispersity index, PDI)를 이용한다. Z-average는 큐뮬런트법을 이용한 산란 강도 기준의 평균 입자경이다. 또한, PDI는 입자경 분포의 폭을 표시하는 지표이고, 0 내지 1의 범위로 나타난다. PDI=0은 입자경의 분포가 없는 현탁액을 표시하고, 0.1 이하의 PDI를 나타내는 분산체는 단분산이며, PDI가 0.1 내지 0.5 사이의 값을 나타내는 분산체는 좁은 분포를 갖는다고 생각된다. 한편, PDI가 0.5를 초과하는 분산체는 다분산이라고 생각된다.

시험법 2: 분산성 평가

제제의 공복시 인공 장액(FaSSIF)에 대한 분산 성능을 추정하기 위해서 μDISS Profiler(Pion Inc.)를 이용하여 분산 프로파일을 해석한다. 각 제제 100μL를 37℃로 보온된 10mL의 FaSSIF 표면에 가하고, 200rpm의 속도로 교반했다. 5, 10, 15, 20, 25, 30 및 60분의 시점에서 가이드 플라스틱 튜브를 통해 용액 50μL를 용기의 중앙으로부터 분취하여, UPLC에 의해 대상 화합물의 농도를 결정한다. 다음의 식에 의해, 분산도(%)를 구한다.

분산도(%)=(분취한 용액 중의 화합물의 농도/제제 전량이 균일하게 분산되었을 때의 화합물의 농도) X 100

시험법 3: 약물동태 파라미터의 산출

채취한 혈액은 원심분리에 의해 혈장을 분리하고, 아세토나이트릴에 의한 제(除)단백 처리 후, LC-MS/MS 장치를 이용하여 혈장 중 농도를 측정한다. 얻어진 혈장 중 농도 추이로부터, 약물동태 해석 소프트웨어 Phoenix WinNonlin 8.2(Certara L. P.)를 이용하여 논컴파트먼트 해석에 의해 혈장 중 약물 농도 대 시간 곡선 아래 면적(AUC) 및 최고 혈장 중 농도(Cmax)를 산출한다.

조제예 1:

화합물 1의 제조

하기의 구조를 갖는 화합물 1(「(5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-뷰틸)-18-사이클로펜틸-29-(3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)페네틸)-36-에틸-11-아이소뷰틸-N,N,5,6,12,16,19,33-옥타메틸-35-(4-메틸벤질)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-운데카옥소테트라트라이아콘타하이드로-2H,4H-스파이로[아제토[2,1-u]피롤로[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]운데카아자사이클로테트라트라이아콘틴-21,1'-사이클로펜테인]-15-카복사마이드」)은 하기의 스킴 1에 따라 합성했다.

화합물 1

스킴 1

화합물 aa033-b((2S)-2-[9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐(메틸)아미노]-4-옥소-4-프로프-2-엔옥시뷰탄산)의 합성

Fmoc-Asp(OAl)-OH((2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐아미노)-4-옥소-4-프로프-2-엔옥시뷰탄산, CAS 번호 146982-24-3)(200g, 506mmol), p-톨루엔설폰산(5.7g, 0.05당량), 파라폼알데하이드(45.6g, 3당량)를 톨루엔에 혼합하고, 110℃에서 16시간 교반했다. 반응액을 감압하 용매 증류 제거하고, 잔사를 아세트산 에틸에 용해하고, 탄산수소 나트륨 수용액으로 2회 세정했다. 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조 후, 감압하 용매 증류 제거했다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산 에틸/석유 에터, 0/100∼30/70)로 정제하여, 화합물 aa033-a(9H-플루오렌-9-일메틸 (4S)-5-옥소-4-(2-옥소-2-프로프-2-엔옥시에틸)-1,3-옥사졸리딘-3-카복실레이트)(175g, 85%)를 얻었다. 마찬가지로 합성한 별도의 배치를 혼합하여, 다음의 반응에 이용했다.

LCMS(ESI) m/z=408(M+H)⁺

유지 시간: 1.407분(분석 조건 SMDmethod_20)

화합물 aa033-a(100g, 245mmol), 브로민화 아연(ZnBr₂)(110g, 496mmol), 트라이에틸실레인(TES)(56g, 481.6mmol)의 다이클로로메테인(DCM)(1L) 혼합 용액을, 질소 분위기하, 실온에서 48시간 교반했다. 동일 스케일의 4배치의 반응액을 혼합하여, 감압하 용매 증류 제거했다. 잔사를 MTBE에 용해하고, 0.5M 인산 버퍼(pH=약 7.5)로 10회 추출했다. 수층을 혼합하고 5M 염산수로 pH를 2로 조정하고, 아세트산 아이소프로필(IPAC)로 2회 추출했다. 유기층을 혼합하고 무수 황산 나트륨으로 건조 후, 감압하 용매 증류 제거했다. IPAC를 제거하기 위해, 얻어진 잔사에 MTBE를 첨가하고 감압하 용매 증류 제거하는 것을 6회 반복하여, 화합물 aa033-b((2S)-2-[9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐(메틸)아미노]-4-옥소-4-프로프-2-엔옥시뷰탄산)를 얻었다. (270g, 54%)

LCMS(ESI) m/z=410(M+H)⁺

유지 시간: 1.956분(분석 조건 SMDmethod_05)

화합물 aa011-a의 합성

질소 분위기하, 빙랭하에서 WSCI·HCl(27.4g, 143mmol)의 DMF(217mL) 용액에 HOBt(17.72g, 131mmol)를 가하고, 추가로 화합물 aa033b(48.8g, 119mmol)를 DCM(90mL)과 DMF(90mL)의 혼합 용액으로서 가하고, 0℃에서 30분 교반했다. 거기에 다이메틸아민의 THF 용액(2mol/l, 65.6mL, 131mmol)을 적하로 가하고, 0℃에서 30분 교반했다. 반응액을 아세트산 에틸(488mL)로 희석하고, 유기상을 염산(1mol/L, 390mL)으로 2회 세정하고, 계속해서 물로 세정하고, 추가로 포화 탄산수소 나트륨 수용액과 물의 혼합 용액(1:1, 488mL)으로 2회 세정하고, 추가로 포화 식염수와 물의 혼합 용액(1:1, 488mL)으로 1회 세정 후, 얻어진 유기상을 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 감압하 용매 증류 제거하여 화합물 aa011-a를 얻었다. (51.16g, 수율 98%).

LCMS(ESI) m/z=437.0(M+H)⁺

유지 시간: 1.262분(분석 조건 SMDFA05)

화합물 aa079, (2S)-2-사이클로펜틸-2-[9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐(메틸)아미노]아세트산(Fmoc-MeGly(cPent)-OH)의 합성

화합물 aa079-a((2S)-2-사이클로펜틸-2-[9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐아미노]아세트산, Fmoc-Gly(cPent)-OH)(CAS 번호: 220497-61-0)(30.0g, 82mmol), 파라폼알데하이드(7.39g, 246mmol) 및 CSA(0.954g, 4.10mmol)의 톨루엔(160mL) 혼합액에, 트라이플루오로아세트산(TFA)(9.0mL)을 가한 후, 60℃에서 4시간 교반했다. 반응액을 실온까지 냉각 후, 고체를 여과에 의해 제거했다. 여액을 감압하 농축하고, 아세트산 에틸(220mL)로 희석 후, 포화 탄산수소 나트륨 수용액 및 포화 식염수로 차례로 세정했다. 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조, 여과 후에 감압 농축하여, 화합물 aa079-b를 조생성물로서 얻었다. 그 이상의 정제는 실시하지 않고 다음의 반응을 행했다.

LCMS(ESI) m/z=378(M+H)⁺

유지 시간: 1.01분(분석 조건 SQDFA05)

상기에서 얻어진 화합물 aa079-b의 전량을 이용하여, 트라이에틸실레인(TES)(65.5mL, 410mmol)과 aa079-b의 다이클로로에테인(DCE)(90mL)의 혼합액에 트라이플루오로아세트산(TFA)(76mL, 984mmol)을 가하고 60℃에서 16시간 교반했다. 반응액을 실온까지 냉각 후에 감압 농축하고, 얻어진 고체를 n-헥세인/아세트산 에틸(95/5)로 세정하고, 감압 건조함으로써 화합물 2279((2S)-2-사이클로펜틸-2-[9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐(메틸)아미노]아세트산, Fmoc-MeGly(cPent)-OH)를 얻었다(29.1g, 2공정 93%).

LCMS(ESI) m/z=380(M+H)⁺

유지 시간: 0.92분(분석 조건 SQDFA05)

화합물 1217-a의 합성

화합물 aa079(42.2g, 111mmol)와 Oxyma(19.99g, 141mmol)의 DMF(391mL) 용액에, WSCI·HCl(31.5g, 164mmol)을 실온에서 가하고, 30분 교반하여 용액 A를 얻었다.

질소 분위기하, 화합물 aa011-a(51.16g, 117mmol)의 DMF(391mL) 용액에 DBU(17.49mL, 117mmol)를 실온에서 적하로 가하고, 5분 교반했다. 거기에 피리딘 염산염(14.9g, 129mmol)을 가하고, 10분 교반했다. 얻어진 반응액에 용액 A와 DIPEA(22.46mL, 129mmol)를 가하고, 질소 분위기하, 실온에서 7시간 교반했다. 반응액을 아세트산 에틸(422mL)로 희석하고, 염산(1mol/L, 422mL)으로 2회 세정했다. 얻어진 수상을 아세트산 에틸(422mL)로 2회 추출했다. 모든 유기상을 혼합하고, 물(422mL), 포화 탄산수소 나트륨 수용액과 물의 혼합 용액(1:1, 422mL), 포화 식염수와 물의 혼합 용액(1:1, 422mL)으로 차례로 세정 후, 얻어진 유기상을 황산 나트륨으로 건조하고, 감압하 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사에 DCM(512mL)을 가하고 0.5시간 교반했다. 거기에 황산마그네슘(30g)을 가하고, 30분 교반한 후에, 여과로 고형물을 제거했다. 얻어진 용액을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥세인/아세트산 에틸)로 정제하여, 화합물 1217-a를 얻었다. (55.55g, 수율 87%)

LCMS(ESI) m/z=598.2(M+Na)⁺

유지 시간: 1.320분(분석 조건 SMDAM05)

화합물 1217-b의 합성

질소 분위기하, 실온에서 화합물 1217-a(55.55g, 96mmol)의 DCM(193mL) 용액에, 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0)(1.115g, 0.965mmol)을 가하고, 추가로 페닐실레인(8.31mL, 67.5mmol)을 적하로 가하고, 30분 교반했다. 반응액을 MTBE(556ml)로 희석하고, 포화 탄산수소 나트륨 수용액과 물의 혼합 용액(1:1, 556ml)으로 추출했다. 얻어진 유기상을 물(278ml)로 추출했다. 수상을 혼합하고, DCM(556ml)을 가했다. 거기에 인산(56.7g, 579mmol)을 적하로 가하여 pH를 2∼3으로 조정하고, 유기상을 분리 후, 수상을 DCM(556ml)으로 추출했다. 얻어진 유기상을 혼합하고, 포화 식염수와 물의 혼합 용액(1:1, 556ml)으로 세정 후, 황산 나트륨으로 건조하고, 감압하 용매 증류 제거하여 화합물 1217-b를 얻었다. (48.87g, 수율 95%)

LCMS(ESI) m/z=536(M+H)⁺

유지 시간: 1.138분(분석 조건 SMDAM05)

화합물 1217-b-resin의 합성

필터 부착된 반응 용기에 2-클로로트라이틸 클로라이드 레진(SUNRESIN사로부터 구입, 1.36mmol/g, 114g, 155mmol)을 세팅하고, DCM(1140mL)을 가하고, 25℃에서 45분 교반 후, 필터로부터 용매를 배출했다. 반응 용기에 화합물 1217-b(48.87g, 91mmol)와 메탄올(29.6mL, 730mmol)과 DIPEA(76mL, 438mmol)의 DCM(798mL) 용액을 가하고, 25℃에서 60분 교반하고, 필터로부터 용액을 배출했다. 계속해서, 반응 용기에 메탄올(111mL, 2737mmol)과 DIPEA(76mL, 438mmol)의 DCM(684mL) 용액을 가하고, 25℃에서 90분 교반하고, 필터로부터 용액을 배출했다. 반응 용기에 DCM(570mL)을 가하여 5분 교반하고, 필터로부터 용액을 배출했다. 이 레진의 세정 조작을 4회 더 반복하고, 얻어진 레진을 감압하 건조하여 화합물 1217-b-resin을 얻었다(140.5g). 본 실시예에 기재된 레진의 정량법에 의해, 담지량을 0.482mmol/g으로 산출했다.

화합물 1217-c-resin의 합성

상기에서 얻어진 레진(0.482mmol/g, 60g, 28.92mmol)을 플라스틱제 고상 반응 용기에 세팅했다. 실온에서, 이 고상 반응 용기에 DCM(600mL)을 가하고, 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 고상 반응 용기에 DMF(420mL)를 가하고, 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 레진의 세정 공정을 1회 더 반복했다. 이 고상 반응 용기에 다이아자바이사이클로운데센(DBU)의 DMF 용액(2v/v％, 420mL)을 첨가하여 Fmoc기의 탈보호를 행했다. 10분 진탕 후에 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 고상 반응 용기에 DMF(420mL)를 가하고, 5분 진탕한 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 고상 반응 용기에 트라이에틸아민 염산염(7.96g, 57.8mmol)의 DCM(420mL) 용액을 가하고, 5분 진탕한 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 고상 반응 용기에 DCM(420mL)을 가하고, 5분 진탕한 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 고상 반응 용기에 DMF(420mL)를 가하고, 5분 진탕한 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 1회 더 반복했다.

Fmoc-cLeu-OH(40.7g, 116mmol)(CAS 번호: 117322-30-2)와 Oxyma(10.3g, 72.3mmol)의 DMF(180mL) 용액과, N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(DIC)의 DMF 용액(10%, 216mL)을 혼합하고, 2분 후, 상기에 의해 얻어진 고상 반응 용기에 가했다. 이 고상 반응 용기를 50℃에서 24시간 진탕 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 고상 반응 용기에 DMF(420mL)를 가하고, 실온에서 5분 진탕한 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 4회 더 반복했다. 이 고상 반응 용기에 DCM(420mL)을 가하고, 실온에서 5분 진탕한 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 DCM에 의한 레진의 세정 공정을 5회 더 반복했다. 얻어진 레진을 감압하에서 건조하여, 화합물 1217-c-resin(62.5g)을 얻었다.

화합물 aa134의 합성

화합물 aa134, (2S)-4-[3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)페닐]-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐아미노)뷰탄산, Fmoc-Hph(4-CF3-35-F2)-OH의 합성

화합물 aa132-a, (1-O-벤질 5-O-(1,3-다이옥소아이소인돌-2-일) (2S)-2-[(2-메틸프로판-2-일)옥시카보닐아미노]펜테인다이오에이트)의 합성

(4S)-4-[(2-메틸프로판-2-일)옥시카보닐아미노]-5-옥소-5-페닐메톡시펜탄산(Boc-Glu-OBn, CAS 번호 30924-93-7)(200g, 592.82mmol), N-하이드록시프탈이미드(106g, 649.78mmol, 1.10당량), DMAP(3.6g, 29.47mmol, 0.05당량)의 THF(2L) 용액에, 질소 분위기하, 0℃에서 DIC(138mL, 1.54당량)를 적하로 가했다. 반응액을 225℃에서 16시간 교반하고, 고형물을 여과로 제거하고, 여액을 감압하 용매 증류 제거했다. 잔사를 톨루엔으로 희석하고, 생긴 고체를 여과로 제거하고, 여액을 감압하 용매 증류 제거했다. 잔사를 재결정(아세톤/헵테인)으로 정제하여, 화합물 aa132-a(1-O-벤질 5-O-(1,3-다이옥소아이소인돌-2-일) (2S)-2-[(2-메틸프로판-2-일)옥시카보닐아미노]펜테인다이오에이트)를 얻었다. (230g, 80%)

LCMS(ESI) m/z=505.2(M+Na)⁺

유지 시간: 0.992분(분석 조건 SMDmethod_16)

브로민화 니켈 삼수화물(NiBr₂·3H₂O)(13.5g, 49.7mmol, 0.3당량) 및 4,4'-다이-tert-뷰틸-2,2'-바이피리딜(dtbbpy, CAS 번호 72914-19-3)(13.3g, 49.7mmol, 0.3당량)을 DMA(400mL)에 가하고, 질소 분위기하, 50℃에서 3시간 교반하여 Ni 용액을 조제했다.

화합물 aa132-a(1-O-벤질 5-O-(1,3-다이옥소아이소인돌-2-일) (2S)-2-[(2-메틸프로판-2-일)옥시카보닐아미노]펜테인다이오에이트)(80g, 166mmol), 아연 분말(54.2g, 829mmol, 5당량) 및 4-브로모-1,3-다이플루오로-2-(트라이플루오로메틸)벤젠(CAS 번호 156243-64-0, 86.6g, 332mmol, 2당량)의 DMA(400mL) 혼합액을 질소 분위기하, 실온에서 1시간 교반하고, 앞서 조제한 Ni 용액을 첨가하고, 실온에서 16시간 교반했다. 반응액에 EDTA·2Na 수용액(800mL, 10%)을 가하고, 고체를 여과로 제거했다. 여액을 아세트산 에틸로 추출하고, 합친 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 감압하 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산 에틸/석유 에터)로 정제하여, 화합물 aa134-a를 얻었다. (57.2g, 69%).

LCMS(ESI) m/z=496(M+Na)⁺

유지 시간: 1.544분(분석 조건 SMDmethod_15)

화합물 aa134-a(57.2g, 121mmol)의 톨루엔 혼합액(690mL)을 0℃로 냉각하고, 트라이플루오로메테인설폰산(TfOH)(54.4g, 362mmol, 3당량)을 적하로 가했다. 실온에서 1시간 교반 후, 물(58mL)을 가했다. 이 혼합액을 물로 추출하고, 합친 수층을 아세트산 에틸로 추출했다. 합친 유기층을 물로 세정하고, 무수 황산 나트륨으로 건조 후, 감압하 용매 증류 제거하여, 60g의 잔사를 얻었다. 잔사에 아세토나이트릴/물(400/400mL)을 가하고, 수산화 나트륨 수용액(48%)으로 pH를 7로 조정했다. 이 용액에 Fmoc-OSu(36.6g, 108.6mmol, 0.9당량)를 가하고, 수산화 나트륨 수용액(48%)으로 pH를 8.0으로 조정 후, 실온에서 16시간 교반했다. 아세토나이트릴/물(1/1)로 씻어 넣으면서 반응액을 여과하여 고체 성분을 제거하고, 여액을 아세토나이트릴로 희석하고, 6mol/L 염산수로 산성으로 조정함으로써 석출된 고체를 여과로 모음으로써, 화합물 aa134((2S)-4-[3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)페닐]-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐아미노)뷰탄산, Fmoc-Hph(4-CF3-35-F2)-OH)를 얻었다. (52g, 83%)

LCMS(ESI) m/z=528.45(M+Na)⁺

유지 시간: 3.538분(분석 조건 SMDmethod_14)

1H-NMR(300MHz, DMSO-d6) δ 12.69(s, 1H), 7.90(d, J=7.5Hz, 2H), 7.78-7.54(m, 3H), 7.48-7.20(m, 6H), 4.33(d, J=6.3Hz, 2H), 4.24(t, J=6.9Hz, 1H), 3.97-3.84(m, 1H), 2.79-2.65(m, 2H), 2.15-2.00(m, 1H), 2.00-1.83(m, 1H)

화합물 aa113, (2S)-2-[에틸(9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐)아미노]-3-(4-메틸페닐)프로판산(Fmoc-EtPhe(4-Me)-OH)의 합성

질소 분위기하, 화합물 aa113-a((2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐아미노)-3-(4-메틸페닐)프로판산, Fmoc-Phe(4-Me)-OH)(5.62g, 14.0mmol, CAS 번호 199006-54-7)를 다이클로로에테인(DCE)(17.5mL)에 현탁시키고, 파라알데하이드(5.61mL, 42.0mmol), 트라이플루오로아세트산(TFA)(9.65mL, 126mmol)을 가하고, 60도에서 6시간 교반했다. 얻어진 화합물 aa113-b를 포함하는 반응액을 그대로 다음의 공정에 이용했다.

LCMS(ESI) m/z=428(M+H)⁺

유지 시간: 1.03분(분석 조건 SQDFA05)

얻어진 화합물 aa113-b의 반응액에, 다이클로로에테인(DCE)(17.5mL), 트라이플루오로아세트산(TFA)(19.3mL, 252mmol), 트라이에틸실레인(TES)(20.1mL, 126mmol)을 가하고, 60도에서 17시간 교반했다. 실온으로 냉각하고, 감압 농축한 후, 얻어진 잔사를 아세트산 에틸(40mL)에 용해시켰다. 유기층을 포화 탄산수소 나트륨 수용액(40mL), 포화 식염수(40mL)로 세정하고, 무수 황산 나트륨으로 건조 후, 감압하 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사를 아세토나이트릴(30mL)에 용해시키고, 헥세인(15mL)으로 2회 세정하고, 감압하 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사를 역상 칼럼 크로마토그래피(0.1%-폼산 함유 아세토나이트릴/0.1%-폼산 함유 증류수)로 정제하여, 화합물 aa113((2S)-2-[에틸(9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐)아미노]-3-(4-메틸페닐)프로판산, Fmoc-EtPhe(4-Me)-OH)을 얻었다. (4.4g, 2공정 73%)

LCMS(ESI) m/z=430(M+H)⁺

유지 시간: 0.95분(분석 조건 SQDFA05)

이후의 Fmoc-Pro-OH(CAS 번호: 71989-31-6), Fmoc-Hph(4-CF3-35-F2)-OH(화합물 aa134), Fmoc-MeGly-OH(CAS 번호: 77128-70-2), Fmoc-EtPhe(4-Me)-OH(화합물 aa113), Fmoc-Aze(2)-OH(CAS 번호: 136552-06-2), Fmoc-MeAla-OH(CAS 번호: 84000-07-7) 및 Fmoc-Ile-OH(CAS 번호: 71989-23-6)의 신장은 Intavis사제 펩타이드 합성기(Multipep RSi)를 이용하여, Fmoc 고상 합성법에 의해 합성했다. 조작의 상세한 수순에 대해서는 합성기에 부속된 매뉴얼에 따랐다.

상기에 의해 얻어진 화합물 1217-c-resin(고상 반응 용기 1본에 대해서 200mg)을 30본의 고상 반응 용기에 가하고, 펩타이드 합성기에 세팅했다. 이 30본 모두의 고상 반응 용기에 다이클로로메테인(DCM)을 가하고 1시간 정치함으로써 레진의 팽윤을 행했다. 그 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다.

Fmoc-Pro-OH의 신장

30본 모두의 고상 반응 용기에 다이아자바이사이클로운데센(DBU)의 DMF 용액(2v/v％, 고상 반응 용기 1본에 대해서 1.4mL)을 첨가하고, 30℃로 가온하고 10분 후에 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 30본 모두의 고상 반응 용기에 DMF(고상 반응 용기 1본에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 3회 더 반복했다. 계속해서, Fmoc-Pro-OH(CAS 번호 71989-31-6)(0.6mol/L)와 HOAt(0.375mol/L)의 NMP 용액(고상 반응 용기 1본에 대해서 0.6mL)과, N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(DIC)의 DMF 용액(10v/v％, 고상 반응 용기 1본에 대해서 0.72mL)을 합성기의 mixing vial로 혼합한 후에 30본 모두의 고상 반응 용기에 대해서 첨가하고, 40℃에서 4시간 정치했다. 그 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 30본 모두의 고상 반응 용기에 대해서 DMF(고상 반응 용기 1본에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 레진의 세정 공정을 2회 더 반복했다.

Fmoc-Hph(4-CF3-35-F2)-OH(화합물 aa134)의 신장

상기에서 얻어진 레진을 포함하는 30본 모두의 고상 반응 용기에 다이아자바이사이클로운데센(DBU)의 DMF 용액(2v/v％, 고상 반응 용기 1본에 대해서 1.4mL)을 첨가하고, 35℃로 가온하고 10분 후에 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 30본 모두의 고상 반응 용기에 DMF(고상 반응 용기 1본에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 3회 더 반복했다. 계속해서, Fmoc-Hph(4-CF3-35-F2)-OH(화합물 aa134)(0.45mol/L)와 HOAt(0.375mol/L)의 NMP 용액(고상 반응 용기 1본에 대해서 0.6mL)과, N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(DIC)의 DMF 용액(10v/v％, 고상 반응 용기 1본에 대해서 0.72mL)을 합성기의 mixing vial로 혼합한 후에 30본 모두의 고상 반응 용기에 대해서 첨가하고, 40℃에서 2.5시간 정치했다. 그 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 30본 모두의 고상 반응 용기에 대해서 DMF(고상 반응 용기 1본에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 레진의 세정 공정을 2회 더 반복했다.

Fmoc-MeGly-OH의 신장

상기에서 얻어진 레진을 포함하는 30본 모두의 고상 반응 용기에 다이아자바이사이클로운데센(DBU)의 DMF 용액(2v/v％, 고상 반응 용기 1본에 대해서 1.4mL)을 첨가하고, 35℃로 가온하고 10분 후에 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 30본 모두의 고상 반응 용기에 DMF(고상 반응 용기 1본에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 3회 더 반복했다. 계속해서, Fmoc-MeGly-OH(0.6mol/L)와 HOAt(0.375mol/L)의 NMP 용액(고상 반응 용기 1본에 대해서 0.6mL)과, N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(DIC)의 DMF 용액(10v/v％, 고상 반응 용기 1본에 대해서 0.72mL)을 합성기의 mixing vial로 혼합한 후에 30본 모두의 고상 반응 용기에 대해서 첨가하고, 40℃에서 2.5시간 정치했다. 그 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 30본 모두의 고상 반응 용기에 대해서 DMF(고상 반응 용기 1본에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 레진의 세정 공정을 2회 더 반복했다.

Fmoc-EtPhe(4-Me)-OH(화합물 aa113)의 신장

상기에서 얻어진 레진을 포함하는 30본 모두의 고상 반응 용기에 다이아자바이사이클로운데센(DBU)의 DMF 용액(2v/v％, 고상 반응 용기 1본에 대해서 1.4mL)을 첨가하고, 35℃로 가온하고 10분 후에 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 30본 모두의 고상 반응 용기에 DMF(고상 반응 용기 1본에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 3회 더 반복했다. 계속해서, 전술한 바와 같이 제조한 Fmoc-EtPhe(4-Me)-OH(0.6mol/L)와 HOAt(0.375mol/L)의 NMP 용액(고상 반응 용기 1본에 대해서 0.6mL)과, N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(DIC)의 DMF 용액(10v/v％, 고상 반응 용기 1본에 대해서 0.72mL)을 합성기의 mixing vial로 혼합한 후에 30본 모두의 고상 반응 용기에 대해서 첨가하고, 40℃에서 2.5시간 정치했다. 그 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 30본 모두의 고상 반응 용기에 대해서 DMF(고상 반응 용기 1본에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 레진의 세정 공정을 2회 더 반복했다.

Fmoc-Aze(2)-OH의 신장

상기에서 얻어진 레진을 포함하는 30본 모두의 고상 반응 용기에 다이아자바이사이클로운데센(DBU)의 DMF 용액(2v/v％, 고상 반응 용기 1본에 대해서 1.4mL)을 첨가하고, 35℃로 가온하고 10분 후에 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 30본 모두의 고상 반응 용기에 DMF(고상 반응 용기 1본에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 3회 더 반복했다. 계속해서, Fmoc-Aze(2)-OH(0.6mol/L)와 HOOBt(0.375mol/L)의 NMP와 DMSO의 혼합 용액(7:3)(고상 반응 용기 1본에 대해서 0.6mL)과, N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(DIC)의 DMF 용액(10v/v％, 고상 반응 용기 1본에 대해서 0.72mL)을 합성기의 mixing vial로 혼합한 후에 30본 모두의 고상 반응 용기에 대해서 첨가하고, 60℃에서 5시간 정치했다. 그 후, N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(DIC)의 DMF 용액(10v/v％, 고상 반응 용기 1본에 대해서 0.72mL)을 30본 모두의 고상 반응 용기에 대해서 첨가하고, 60℃에서 5시간 정치했다. 그 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 30본 모두의 고상 반응 용기에 대해서 DMF(고상 반응 용기 1본에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 레진의 세정 공정을 2회 더 반복했다.

Fmoc-MeAla-OH의 신장

상기에서 얻어진 레진을 포함하는 30본 모두의 고상 반응 용기에 다이아자바이사이클로운데센(DBU)의 DMF 용액(2v/v％, 고상 반응 용기 1본에 대해서 1.4mL)을 첨가하고, 35℃로 가온하고 10분 후에 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 30본 모두의 고상 반응 용기에 DMF(고상 반응 용기 1본에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 3회 더 반복했다. 계속해서, Fmoc-MeAla-OH(0.6mol/L)와 HOAt(0.375mol/L)의 NMP 용액(고상 반응 용기 1본에 대해서 0.6mL)과, N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(DIC)의 DMF 용액(10v/v％, 고상 반응 용기 1본에 대해서 0.72mL)을 합성기의 mixing vial로 혼합한 후에 30본 모두의 고상 반응 용기에 대해서 첨가하고, 40℃에서 2.5시간 정치했다. 그 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 30본 모두의 고상 반응 용기에 대해서 DMF(고상 반응 용기 1본에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 레진의 세정 공정을 2회 더 반복했다.

Fmoc-Ile-OH의 신장

상기에서 얻어진 레진을 포함하는 30본 모두의 고상 반응 용기에 다이아자바이사이클로운데센(DBU)의 DMF 용액(2v/v％, 고상 반응 용기 1본에 대해서 1.4mL)을 첨가하고, 35℃로 가온하고 10분 후에 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 30본 모두의 고상 반응 용기에 DMF(고상 반응 용기 1본에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 3회 더 반복했다. 계속해서, Fmoc-Ile-OH(0.6mol/L)와 HOAt(0.375mol/L)의 NMP 용액(고상 반응 용기 1본에 대해서 0.6mL)과, N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(DIC)의 DMF 용액(10v/v％, 고상 반응 용기 1본에 대해서 0.72mL)을 합성기의 mixing vial로 혼합한 후에 30본 모두의 고상 반응 용기에 대해서 첨가하고, 40℃에서 10시간 정치했다. 그 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 30본 모두의 고상 반응 용기에 대해서 DMF(고상 반응 용기 1본에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 레진의 세정 공정을 2회 더 반복했다. 계속해서, 30본 모두의 고상 반응 용기에 대해서 DCM(고상 반응 용기 1본에 대해서 1.6mL)을 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 레진의 세정 공정을 5회 더 반복했다. 30본 모두의 고상 반응 용기로부터 레진을 회수하고, 혼합하여, 계속되는 조작을 행했다.

Fmoc-MeLeu-OH(CAS 번호: 103478-62-2)의 신장

상기에서 얻어진 레진을 200mL의 플라스틱제 고상 반응 용기에 가하고, 여기에 DCM(60mL)을 가하고, 30℃에서 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 고상 반응 용기에 톨루엔(50mL)을 가하고, 30℃에서 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 톨루엔에 의한 레진의 세정 공정을 1회 더 반복했다. 이 고상 반응 용기에 다이아자바이사이클로운데센(DBU)의 톨루엔 용액(2v/v％, 45mL)을 첨가하고, 30℃에서 5분 진탕 후에 용액을 프릿으로부터 배출했다.

이 고상 반응 용기에 톨루엔(50mL)을 가하고, 30℃에서 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 톨루엔에 의한 레진의 세정 공정을 1회 더 반복했다. 이 고상 반응 용기에 DCM(50mL)을 가하고, 30℃에서 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DCM에 의한 레진의 세정 공정을 1회 더 반복했다. 이 고상 반응 용기에, Fmoc-MeLeu-OH(4.25g, 11.57mmol), [에틸사이아노(하이드록시이미노)아세테이토-O2]트라이-1-피롤리딘일포스포늄 헥사플루오로인산(PyOxym)(6.10g, 11.57mmol), DIPEA(3.03mL, 17.35mmol)의 DCM(45mL) 용액을 가하고, 30℃에서 3시간 진탕했다. 그 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 고상 반응 용기에 DMF(50mL)를 가하고, 30℃에서 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 4회 더 반복했다. 이 고상 반응 용기에 DCM(50mL)을 가하고, 30℃에서 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DCM에 의한 레진의 세정 공정을 3회 더 반복했다. 그 후, 얻어진 레진은 감압하 건조했다.

상기의 고상 반응 용기에 DCM(60mL)을 가하고, 30℃에서 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 고상 반응 용기에 DMF(50mL)를 가하고, 30℃에서 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 1회 더 반복했다. 이 고상 반응 용기에 다이아자바이사이클로운데센(DBU)의 DMF 용액(2v/v％, 45mL)을 첨가하고, 30℃에서 15분 진탕 후에 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 고상 반응 용기에 DMF(50mL)를 가하고, 30℃에서 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 4회 더 반복했다. 이 고상 반응 용기에 DCM(50mL)을 가하고, 30℃에서 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DCM에 의한 레진의 세정 공정을 4회 더 반복하여, 화합물 1217-d가 담지된 레진을 얻었다.

화합물 1217-d의 합성(펩타이드의 레진으로부터의 절출(切出)

상기에 의해 얻어진 레진을 포함하는 고상 반응 용기에, 2,2,2-트라이플루오로에탄올(TFE)(60mL)과 DCM(60mL)과 DIPEA(0.909mL)의 혼합 용액을 가하고, 실온에서 2시간 진탕했다. 그 후, 용액을 프릿으로부터 회수했다. 이 고상 반응 용기에 2,2,2-트라이플루오로에탄올(TFE)(30mL)과 DCM(30mL)의 혼합 용액을 가하고, 실온에서 5분간 진탕 후, 용액을 프릿으로부터 회수했다. 추가로 이 고상 반응 용기에, 2,2,2-트라이플루오로에탄올(TFE)(30mL)과 DCM(30mL)의 혼합 용액을 가하고, 실온에서 5분간 진탕 후, 용액을 프릿으로부터 회수했다. 회수한 모든 용액을 혼합하고, 감압하에서 용매 증류 제거하여 화합물 1217-d를 조생성물로서 얻었다. (3.85g)

LCMS(ESI) m/z=1453.9(M-H)-

유지 시간: 0.67분(분석 조건 SQDAA50)

화합물 1의 합성(펩타이드의 환화와 정제)

상기에 의해 얻어진 화합물 1217-d(3.85g)를 아세트산 아이소프로필(529mL)과 DIPEA(0.915mL, 5.24mmol)의 혼합액에 용해하고, HCTU(O-(1H-6-클로로벤조트라이아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸유로늄 헥사플루오로인산, CAS 번호 330645-87-9)(1.805g, 4.36mmol)를 가하고, 실온에서 21시간 교반했다. 그 후, 용액량이 약 반분이 될 때까지 감압하 용매 증류 제거했다. 얻어진 용액에, 포화 염화 암모늄 수용액(40mL)과 물(40mL)의 혼합 용액을 가하고, 아세트산 아이소프로필(350mL)로 추출했다. 얻어진 유기상을 포화 탄산수소 나트륨 수용액(40mL)과 물(40mL)의 혼합 용액, 포화 식염수(40mL)와 물(40mL)의 혼합 용액으로 차례로 세정 후, 황산 나트륨으로 건조하고, 감압하 용매 증류 제거하여 3.36g의 잔사를 얻었다. 얻어진 잔사를 역상 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(Daisogel SP-120-40/60-ODS-RPS, 용출액으로서 아세토나이트릴(0.1%의 폼산을 포함한다)/물(0.1%의 폼산을 포함한다)을 사용)로 정제하고, 목적물을 포함하는 용출액을 동결 건조함으로써 어모퍼스 상태의 화합물 1(1.36g, 수율 34%)을 얻었다. 얻어진 화합물 1의 매스 스펙트럼의 값과 액체 크로마토그래피의 유지 시간은 하기와 같았다.

LCMS(ESI) m/z=1437.7(M+H)⁺

유지 시간: 7.496분(분석 조건 SSC-A-AF-01)

조제예 2:

조제예 3에서 사용한 종결정의 조제

조제예 1에 있어서 얻어진 어모퍼스 상태의 화합물 1(122.3mg)을 DMSO(0.612mL)에 용해시키고, 이 용해액(0.015mL)을 -20℃에서 2일간 동결 건조했다. 얻어진 동결 건조물에 물-아세토나이트릴 혼합액(3:1, 0.015mL)을 가하고, 실온에서 7일간 진탕 교반함으로써 화합물 1의 수화물 결정(Form C)을 얻었다.

조제예 3:

화합물 1의 결정화: ((5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-뷰틸)-18-사이클로펜틸-29-(3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)페네틸)-36-에틸-11-아이소뷰틸-N,N,5,6,12,16,19,33-옥타메틸-35-(4-메틸벤질)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-운데카옥소테트라트라이아콘타하이드로-2H,4H-스파이로[아제토[2,1-u]피롤로[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]운데카아자사이클로테트라트라이아콘틴-21,1'-사이클로펜테인]-15-카복사마이드)의 수화물 결정 Form C의 합성

질소로 치환한 화합물 1을 포함하는 용액이 들어간 반응 솥에 넣고, 반응 솥의 외온을 40℃로 설정하고, 필터(CCF-G100-D1N)를 이용하여 여과한 정제수(10.9kg)를 가했다. 아세톤(59.2g)/물(61.2g)의 혼합액에, 조제예 2와 마찬가지의 조작에 의해 얻어진, 화합물 1의 분쇄 결정(10.2g)을 가하여 얻은 현탁액을 반응 솥에 가했다. 현탁액이 들어간 용기를 아세톤(59.2g)/물(61.2g)의 혼합액으로 씻어 넣으면서 반응 솥에 가한 후, 2시간 1분간 교반했다. 필터(CCF-G100-D1N)를 이용하여 여과한 정제수(2.7kg)를 가하고, 7시간 10분간 교반했다. 아세톤(59.2g)/물(61.2g)의 혼합액에, 조제예 2와 마찬가지의 조작에 의해 얻어진, 화합물 1의 분쇄 결정(10.2g)을 가하여 얻은 현탁액을 반응 솥에 추가로 가했다. 현탁액이 들어간 용기를 아세톤(59.2g)/물(61.2g)의 혼합액으로 씻어 넣으면서, 반응 솥에 가하고, 12시간 40분간 교반했다. 필터(CCF-G100-D1N)를 이용하여 여과한 정제수(2.7kg)를 가하고, 2시간 교반했다. 반응 솥의 외온을 40℃로부터 25℃로 1시간에 걸쳐 강온 후, 반응 혼합물을 18시간 44분간 교반했다. 반응 혼합물을, 여포(PF-020)를 이용하여 가압 여과하고, 반응 솥 내와 여과기를, 필터(CCF-G100-E1N)를 이용하여 여과한 아세톤(7.5kg)과 정제수(7.5kg)의 혼합액으로 세정하면서 얻어진 결정을 세정했다. 얻어진 결정을, 필터(CCF-G100-E1N)를 이용하여 여과한 정제수(17.0kg x 2)로 세정하고, 결정을 회수한 여과 장치를 감압하고, 여과 장치의 외온을 70℃로 설정하여 결정을 17시간 건조했다. 외온을 실온∼30℃로 하여 결정을 27시간 더 건조했다. 건조 분말을 여과기로부터 회수하여, 백색의 분말(2.6kg)을 얻었다.

얻어진 백색의 분말은, 조제예 1의 「화합물 1의 합성(펩타이드의 환화와 정제)」에서 얻어진 화합물과 동일한 구조인 것을 확인했다.

이하에 나타내는 HPLC 분석법에 의해, 유지 시간을 확인했다.

HPLC 분석 조건

장치: Waters ACQUITY UPLC H-Class

칼럼: ACQUITY UPLC CSH C18(Waters), 2.1mm ID×150mm, 1.7μm

이동상: 0.05% TFA/water(A), 0.05% TFA/MeCN(B)

용출법: B) 20%(0min)→100%(24min)→100%(29min)→20%(29.1min)→20%(34min)

유속: 0.3mL/min

칼럼 온도: 50℃

검출 파장: 220nm(PDA)

HPLC 분석에 의한 유지 시간: 18.199분

이하에 나타내는 XRPD 장치를 이용한 분말 X선 해석을 행했다.

XRPD 측정 조건

측정 장치: X'pert-pro MPD(PANalytical사제)

선원: CuKα

관 전압: 45kV

관 전류: 40mA

주사 범위: 3∼40°

주사 속도: 4.2°/분

샘플링 폭: 0.017°

측정의 결과, 2θ값은, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)가 주요한 피크로서 관측되었다. 분석 결과를 도 1에 나타낸다.

상기 조제예 3과 마찬가지의 방법으로 얻어진 화합물 1의 수화물 결정(Form C)의 열중량·시차열 분석을 이하의 조건에서 측정했다. 결과를 도 2에 나타낸다.

측정 장치: TGA/DSC 3+(Mettler Toledo제)

측정 범위: 25∼350℃

승온 속도: 10℃/분

분위기: 건조 질소

상기 조제예 3과 마찬가지의 방법으로 얻어진 화합물 1의 수화물 결정(Form C)의 수분량을, 칼 피셔 적정법으로 측정했다. 측정은, 시료를 실험실 환경하에서 순화시킨 후에 CA-310(닛토 세이코 애널리테크제)을 이용하여 행했다. 측정의 결과, 화합물 1의 수화물 결정(Form C)의 수분량은 6.50wt%였다.

상기 조제예 3과 마찬가지의 방법으로 얻어진 화합물 1의 수화물 결정(Form C)의 단결정 X선 구조 해석을 이하의 조건에서 행했다.

측정 장치: Rigaku R-AXIS RAPID-II with a VariMax Cu diffractometer(리가쿠사제)

대(對)음극: Cu

관 전압: 40kV

관 전류: 30mA

온도: -180℃

측정: 구조 해석에 충분한 회절 반점이 얻어진다고 생각되는 스트래터지, 노광 시간으로 측정을 행했다.

구조 해석: 초기 구조 결정은 직접법(SIR2004, Crystal Structure, Rigaku)으로 행하고, 구조 정밀화는 full-matrix least-squares법(SHELXL-2017/1, APEX3, Bruker)으로 행했다. 모든 비수소 원자는 이방성 온도 인자로 정밀화했다. 물분자의 수소 원자는 리스트레인을 이용하여 적절한 위치에 두고, 결합되어 있는 산소 원자의 1.5배의 크기의 등방성 온도 인자로 정밀화했다. 그 외의 수소 원자는 라이딩 모델을 이용하여 적절한 위치에 두고, 결합되어 있는 비수소 원자의 1.2배의 크기의 등방성 온도 인자로 했다.

결과를 도 3에 나타낸다.

열중량·시차열 분석, 칼 피셔 적정, 단결정 X선 구조 해석의 결과로부터, 화합물 1의 수화물 결정(Form C)은, 확실히 결정 구조 중에 물분자를 갖는 수화물 결정인 것이 확인되었다.

조제예 3과 마찬가지의 방법으로 얻어진 화합물 1의 수화물 결정(Form C)의 동적 수증기 흡착 측정을 실시했다. 결과를 도 4에 나타낸다.

측정 장치: DVS Intrinsic(Surface Measurement Systems제)

온도: 25℃

상대 습도(%) 측정점:

사이클 1: 0, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 0(%);

사이클 2: 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 0(%)

역치: 0.001dm/dt(%/분)

최소 수착 시간: 10분

최대 수착 시간: 1440분

측정의 결과, 화합물 1의 수화물 결정(Form C)은, 상대 습도 0∼95%의 범위에서, 수화 수(數) 변화에 수반하여 3.3% 중량 변화하는 수화물 결정인 것이 확인되었다.

조제예 3에서 얻어진 화합물 1의 수화물의 결정(Form C)(이하, 「화합물 I」이라고 하는 경우가 있다)을 이하의 조성물 또는 제제의 조제, 평가에 이용했다. 이하, 실시예에서 이용한 유효 성분이 되는 화합물을 「화합물 I」로서 기재하지만, 액체 첨가제 등에 용해된 화합물 I은, 프리체의 화합물 1을 의미한다.

화합물 I을 포함하는 조성물의 탐색

시험예 1(각종 첨가제에 대한 화합물 I의 용해도 평가)

각종 첨가제에 대한 화합물 I의 용해도를 구했다. 화합물 I에 액체상의 각종 첨가제를 첨가하여 교반하고, 화합물 I이 녹지 않는 경우는 첨가제를 더 첨가하여 교반했다. 이 조작을 화합물 I이 녹을 때까지 반복하고, 화합물 I을 녹이기 위해서 필요한 첨가제량으로부터 대략적인 용해도를 구했다. 한편, Polyoxyethylene (15) hydroxystearate(Solutol HS15)는 실온(R.T.)에서 고체이기 때문에 37℃로 가열하여 액체로 하여 용해도를 구했다. 그 외의 첨가제는 실온에서 용해도를 구했다. 결과를 표 2에 나타낸다. 그 결과, PG monocaprylate는 화합물 I에 대해서 높은 용해성을 나타내는 것이 판명되었다.

시험예 2(각 제제에 대한 화합물 I의 용해도 평가)

높은 용해성을 나타낸 PG monocaprylate를 이용한 첨가제 혼합액을 표 3의 처방에 기초하여 조제했다. 다음으로, 각 첨가제 혼합액 1∼4에 대한 화합물 I의 용해도를 측정했다. 캡슐제로서 제제화했을 때의 캡슐제 껍질로부터의 수분 이행을 상정하여, 물을 3% 첨가한 첨가제 혼합액에 대해서도 용해도를 측정했다. 그 결과, 표 4에 나타내는 바와 같이, 첨가제 혼합액 1∼4는 화합물 I을 100mg/mL 이상의 높은 농도로 녹일 수 있는 것이 판명되었다. 또한, 물을 각 첨가제 혼합액에 첨가하면, 화합물 I의 용해도가 60∼70mg/mL로 저하되었으므로, 이후의 화합물 I의 각 첨가제 혼합액에 대한 용해도 평가에는 물을 첨가하여 평가하는 것으로 했다.

추가로, 최적인 처방을 탐색하기 위해, 표 5∼10의 처방에 기초하여 첨가제 혼합액 5∼45를 조제했다.

다음으로, 물을 첨가한 각 제제 5∼45에 대한 화합물 I의 용해도를 측정했다. 결과를 표 11에 나타낸다.

실시예 1∼22

표 12의 처방에 기초하여, 이하의 방법에 의해 본 발명 조성물인 제제 A∼V를 조제했다.

실시예 1(제제 A의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 1을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 A를 얻었다.

실시예 2(제제 B의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 2를 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 B를 얻었다.

실시예 3(제제 C의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 3을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 C를 얻었다.

실시예 4(제제 D의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 4를 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 D를 얻었다.

실시예 5(제제 E의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 7을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 E를 얻었다.

실시예 6(제제 F의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 19를 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 F를 얻었다.

실시예 7(제제 G의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 20을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 G를 얻었다.

실시예 8(제제 H의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 21을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 H를 얻었다.

실시예 9(제제 I의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 25를 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 I를 얻었다.

실시예 10(제제 J의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 26을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 J를 얻었다.

실시예 11(제제 K의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 28을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 K를 얻었다.

실시예 12(제제 L의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 29를 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 L을 얻었다.

실시예 13(제제 M의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 30을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 M을 얻었다.

실시예 14(제제 N의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 32를 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 N을 얻었다.

실시예 15(제제 O의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 33을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 O를 얻었다.

실시예 16(제제 P의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 34를 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 P를 얻었다.

실시예 17(제제 Q의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 35를 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 Q를 얻었다.

실시예 18(제제 R의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 40을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 R을 얻었다.

실시예 19(제제 S의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 41을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 S를 얻었다.

실시예 20(제제 T의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 42를 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 T를 얻었다.

실시예 21(제제 U의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 44를 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 U를 얻었다.

실시예 22(제제 V의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 45를 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 V를 얻었다.

실시예 1∼실시예 22의 제제 중에 포함되는 각 성분의 제제 전체에 대한 중량%를 아래 표에 정리했다.

비교예 1∼19

표 14의 처방에 기초하여, 이하의 방법에 의해 본 발명 조성물인 제제 W∼AO를 조제했다.

비교예 1(제제 W의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 8을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 W를 얻었다.

비교예 2(제제 X의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 9를 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 X를 얻었다.

비교예 3(제제 Y의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 10을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 Y를 얻었다.

비교예 4(제제 Z의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 13을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 Z를 얻었다.

비교예 5(제제 AA의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 14를 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 AA를 얻었다.

비교예 6(제제 AB의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 15를 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 AB를 얻었다.

비교예 7(제제 AC의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 16을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 AC를 얻었다.

비교예 8(제제 AD의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 17을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 AD를 얻었다.

비교예 9(제제 AE의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 18을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 AE를 얻었다.

비교예 10(제제 AF의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 22를 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 AF를 얻었다.

비교예 11(제제 AG의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 23을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 AG를 얻었다.

비교예 12(제제 AH의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 24를 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 AH를 얻었다.

비교예 13(제제 AI의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 27을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 AI를 얻었다.

비교예 14(제제 AJ의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 31을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 AJ를 얻었다.

비교예 15(제제 AK의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 36을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 AK를 얻었다.

비교예 16(제제 AL의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 37을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 AL을 얻었다.

비교예 17(제제 AM의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 38을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 AM을 얻었다.

비교예 18(제제 AN의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 39를 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 AN을 얻었다.

비교예 19(제제 AO의 조제)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 43을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인하여 제제 AO를 얻었다.

비교예 1∼비교예 19의 제제 중에 포함되는 각 성분의 제제 전체에 대한 중량%를 아래 표에 정리했다.

시험예 3(DLS에 의한 입자경 분포 측정)

다음으로, 실시예 1 내지 22에서 조제한 제제 A 내지 제제 V 및 비교예 1 내지 19에서 조제한 제제 W 내지 제제 AO에 물을 가하여, 분산체를 생성시켰다. 분산체 중에 생긴 액적의 입자경을 측정하여, 실온(약 25℃)에 있어서의 입자경 분포를 평가했다. 바이알에 각 제제 4μL를 넣고, 추가로 물을 396μL 가한 후, 교반한 샘플에 대하여 시험법 1에 나타낸 방법으로 동적 산란(DLS)에 의한 입자경 분포를 구했다. 입자경 분포를 표시하는 지표로서, 평균 입자경(Z-average 사이즈)과 다분산성 지수(polydispersity index, PDI)를 이용했다. DLS에 있어서, PDI는 입자경 분포의 폭을 표시하는 지표이고, 0 내지 1의 범위로 나타난다. PDI=0은 입자경의 분포가 없는 현탁액을 표시하고, 0.1 이하의 PDI를 나타내는 분산체는 단분산이며, PDI가 0.1 내지 0.5 사이의 값을 나타내는 분산체는 좁은 분포를 갖는다고 생각된다. 한편, PDI가 0.5를 초과하는 분산체는 다분산이라고 생각된다. 표 16에 나타낸 바와 같이, 제제 A 내지 V는 모두 평균 입자경도 작고(200nm 미만) 또한 PDI가 0.5 미만인 좁은 분포를 나타내는 양호한 분산체였다. 한편, 제제 W 내지 제제 AO의 평균 입자경은 크고(200nm 이상), PDI가 0.5를 초과하여 다분산이었다.

시험예 4(80℃ 안정성 시험)

의약품의 장기 안정성을 추정하기 위해 안정성 시험을 행했다. 우선 실시예 1, 3, 6, 8, 10에서 조제한 제제 A, C, F, H, J 각각 10mg을 유리 바이알에 취하여, 실리카 겔 및 탈산소제를 넣은 갈색 병에 넣고 밀폐했다. 각 갈색 병을 80℃의 항온조에 넣어, 2주간 보존했다. 보존 전후의 화합물 I의 농도를 UPLC로 정량하고, 다음의 식에 의해 잔존율을 구했다.

잔존율(%)=(보존 후의 화합물 I의 농도/보존 전의 화합물 I의 농도) X 100

표 17에 나타내는 바와 같이, 어느 제제에서도 화합물 I은 95% 이상의 높은 잔존율을 나타내어, 의약품으로서 개발할 수 있는 제제인 것이 판명되었다.

시험예 5(40℃ 안정성 시험)

자기 유화 제제는 액체이기 때문에, 의약품으로서 개발하기 위해서는 주로 캡슐제에 충전된다. 그래서 실시예 1, 3, 6에서 조제한 제제 A, C, F 각각 10mg을 경캡슐에 취하여, 실리카 겔 및 탈산소제를 넣은 갈색 병에 넣고 밀폐했다. 각 갈색 병을 40℃의 항온조에 넣어, 6개월간 보존했다. 보존 전후의 화합물 I의 농도를 UPLC로 정량하고, 다음의 식에 의해 잔존율을 구했다.

표 18에 나타내는 바와 같이, 어느 제제에서도 화합물 I은 95% 이상의 높은 잔존율을 나타내어, 의약품으로서 개발할 수 있는 제제인 것이 판명되었다.

시험예 6(분산성 평가)

시험법 2에서 나타낸 분산성 평가 방법에 따라, 제제 C, F 및 비교로서 제제 AJ의 공복시 인공 장액(FaSSIF)에 대한 분산 성능을 추정하기 위해서, 제어된 온도와 교반 속도(37℃, 200rpm)를 제공하는 μDISS 장치를 이용하여 분산 프로파일을 해석했다. 각 제제 100μL를 37℃로 보온된 10mL의 FaSSIF 표면에 가하고, 200rpm의 속도로 교반했다. 5, 10, 15, 20, 25, 30 및 60분의 시점에서 가이드 플라스틱 튜브를 통해 용액 50μL를 용기의 중앙으로부터 분취하여, UPLC에 의해 화합물 I의 농도를 결정했다. 다음의 식에 의해, 분산도(%)를 구했다.

분산도(%)=(분취한 용액 중의 화합물 I의 농도/제제 전량이 균일하게 분산되었을 때의 화합물 I의 농도) X 100

도 5에 나타내는 바와 같이, 제제 C는 시험 개시 직후부터 전량이 분산되는 것이 판명되었다. 또한, 제제 F도 60분 경과 시점에서 80%를 초과하는 분산도를 나타내어, 제제 AJ와 비교해도 양호한 제제인 것이 판명되었다.

다음으로, 래트에서의 흡수성 평가를 행하기 위해, 제제 AP∼AS를 제작했다.

실시예 23(래트 투여용 캡슐 제제 AP의 제작)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 60mg당 1mL의 첨가제 혼합액 3을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인했다. 화합물이 용해된 용액을 9호 젤라틴 캡슐에 충전하여 제제 AP를 제작했다.

실시예 24(래트 투여용 캡슐 제제 AQ의 제작)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 60mg당 1mL의 첨가제 혼합액 19를 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인했다. 화합물이 용해된 용액을 9호 젤라틴 캡슐에 충전하여 제제 AQ를 제작했다.

비교예 20(래트 투여용 캡슐 제제 AR의 제작)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 60mg당 1mL의 첨가제 혼합액 31을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인했다. 화합물이 용해된 용액을 9호 젤라틴 캡슐에 충전하여 제제 AR을 제작했다.

비교예 21(래트 투여용 용액 제제 AS의 제작)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 10mg당 1mL의 다이메틸설폭사이드(DMSO)를 가하여 용해시켰다. 추가로 폴리옥실 35 피마자유를 0.5mL, 물을 8.5mL 가하고 잘 교반, 혼합하여 용액 제제 AS를 제작했다.

실시예 23, 24, 비교예 20의 제제 중에 포함되는 각 성분의 제제 전체에 대한 중량%를 아래 표에 정리했다.

시험예 7(래트 흡수성 평가)

실시예 23, 24의 캡슐 제제 AP, AQ 및 비교예 20, 21의 캡슐 제제 AR 및 용액 제제 AS를 래트(Wister Hannover, male)에게 10mg/kg의 용량으로 각 제제 4예씩 경구 투여했다. 제제 AP, AQ 및 AR은 캡슐제를 그대로 강제 경구 투여하고, 추가로 물을 5mL/kg의 용량으로 강제 경구 투여했다. 용액 제제 AS는 그대로 강제 경구 투여했다. 투여 후, 약 0.5, 1, 2, 4, 7, 24 및 48시간 후에 채혈을 행하여, 시험법 3에 나타낸 방법으로 혈장 중에 포함되는 화합물 I의 농도를 LC-MS/MS에 의해 정량하고, 혈장 중 약물 농도 대 시간 곡선 아래 면적(AUC) 및 최고 혈장 중 농도(Cmax)를 산출했다.

각 제제 투여 후의 AUC 및 Cmax를 표 20에 나타낸다. 실시예 23, 24의 캡슐 제제 AP 및 캡슐 제제 AQ는 비교예 20의 캡슐 제제 AR보다도 높은 AUC 및 Cmax를 나타내는 것이 판명되었다. 또한, 실시예 23의 캡슐 제제 AP는, 비교예 21의 용액 제제 AS와 비교해도 동일한 정도의 AUC 및 Cmax를 나타내는 것이 판명되었다.

다음으로, 원숭이에서의 흡수성 평가를 행하기 위해, 캡슐 제제 AT 및 용액 제제 AU를 제작했다.

실시예 25(원숭이 투여용 캡슐 제제 AT의 제작)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 50mg당 1mL의 첨가제 혼합액 3을 가했다. 교반자를 이용하여 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되는 것을 확인했다. 화합물이 용해된 용액을 1호 젤라틴 캡슐에 충전하여 제제 AT를 제작했다.

비교예 22(원숭이 투여용 용액 제제 AU의 제작)

화합물 I을 바이알에 칭량하여 취하고, 화합물 I 15mg당 1mL의 다이메틸설폭사이드(DMSO)를 가하여 용해시켰다. 추가로 폴리옥실 35 피마자유를 0.25mL, 물을 8.75mL 가하고 잘 교반, 혼합하여 용액 제제 AU를 제작했다.

시험예 8(원숭이 흡수성 평가)

실시예 25의 캡슐 제제 AT 및 비교예 22의 용액 제제 AU를 필리핀원숭이(cynomolgus monkey)에게 3mg/kg의 용량으로 각 제제 4예씩 경구 투여했다. 캡슐 제제 AT는 그대로 강제 경구 투여하고, 추가로 물을 4mL/kg의 용량으로 강제 경구 투여했다. 용액 제제 AU는 그대로 강제 경구 투여했다. 투여 후, 약 0.5, 1, 2, 4, 7, 24 및 48시간 후에 채혈을 행하여, 시험법 3에 나타낸 방법으로 혈장 중에 포함되는 화합물 I의 농도를 LC-MS/MS에 의해 정량하고, 혈장 중 약물 농도 대 시간 곡선 아래 면적(AUC) 및 최고 혈장 중 농도(Cmax)를 산출했다.

각 제제 투여 후의 AUC 및 Cmax를 표 21에 나타낸다. 실시예 25의 캡슐 제제 AT는, 비교예 22의 용액 제제 AU와 비교해도 동일한 정도의 AUC 및 Cmax를 나타내는 것이 판명되었다.

실시예 26(캡슐제(하드 캡슐)의 제조 1)

화합물 I을 스테인리스 용기에 칭량하여 취하고, 화합물 I 0.5mg당 51.5mg의 Propylene glycol monocaprylate, 13.3mg의 Oleic acid, 31.1mg의 Polyoxyl 35 castor oil 및 0.2mg의 dl-α-tocopherol을 가하고, 호모지나이저를 이용하여 교반, 혼합했다. 화합물이 용해된 용액을 3호 젤라틴 캡슐에 충전하고, 밴드 실링하여 제제 AV를 제작했다.

실시예 27(캡슐제(하드 캡슐)의 제조 2)

화합물 I을 스테인리스 용기에 칭량하여 취하고, 화합물 I 12mg당 123.6mg의 Propylene glycol monocaprylate, 31.9mg의 Oleic acid, 74.6mg의 Polyoxyl 35 castor oil 및 0.5mg의 dl-α-tocopherol을 가하고, 호모지나이저를 이용하여 교반, 혼합했다. 화합물이 용해된 용액을 3호 젤라틴 캡슐에 충전하고, 밴드 실링하여 제제 AW를 제작했다.

실시예 28(캡슐제(소프트 캡슐)의 제조 3)

화합물 I을 스테인리스 용기에 칭량하여 취하고, 화합물 I 19.1mg당 206.4mg의 Propylene glycol monocaprylate, 53.3mg의 Oleic acid 및 124.6mg의 Polyoxyl 35 castor oil 및 0.8mg의 dl-α-tocopherol을 가하고, 교반 날개를 이용하여 교반, 혼합했다. 화합물이 용해된 용액을 소프트 젤라틴 캡슐에 충전하여, 제제 AX를 제작했다.

실시예 29(캡슐제(소프트 캡슐)의 제조 4)

화합물 I을 스테인리스 용기에 칭량하여 취하고, 화합물 I 4.5mg당 46.4mg의 Propylene glycol monocaprylate, 12.0mg의 Oleic acid 및 28.0mg의 Polyoxyl 35 castor oil을 가하고, 교반 날개를 이용하여 교반, 혼합했다. 화합물이 용해된 용액을 소프트 젤라틴 캡슐에 충전하여, 제제 AY를 제작했다.

실시예 30(캡슐제(소프트 캡슐)의 제조 5)

화합물 I을 스테인리스 용기에 칭량하여 취하고, 화합물 I 6.0mg당 61.8mg의 Propylene glycol monocaprylate, 16.0mg의 Oleic acid 및 37.3mg의 Polyoxyl 35 castor oil을 가하고, 교반 날개를 이용하여 교반, 혼합했다. 화합물이 용해된 용액을 소프트 젤라틴 캡슐에 충전하여, 제제 AZ를 제작했다.

실시예 25∼30의 제제 중에 포함되는 각 성분의 제제 전체에 대한 중량%를 아래 표에 정리했다.

시험예 9(DLS에 의한 입자경 분포 측정)

다음으로, 실시예 26∼30에서 조제한 제제 AV, 제제 AW, 제제 AX, 제제 AY, 및 제제 AZ를 물에 분산시켰을 때의 입자경 분포를 평가했다. 바이알에 일본 약국방 용출 시험 제1액, pH 1.2를 9.9mL 넣고, 추가로 각 제제 100μL를 가한 후 교반한 샘플을 100μL 분취하여, 일본 약국방 용출 시험 제1액, pH 1.2를 0.9mL 넣은 바이알에 가한 후 교반했다. 이들 샘플에 대하여, 시험법 1에 나타낸 방법으로 동적 산란(DLS)에 의한 입자경 분포를 구했다. 입자경 분포를 표시하는 지표로서, 시험예 3과 마찬가지로, 평균 입자경(Z-average 사이즈)과 다분산성 지수(polydispersity index, PDI)를 이용했다. 표 23에 나타낸 바와 같이, 제제 AV, 제제 AW, 제제 AX, 제제 AY, 및 제제 AZ는 모두 평균 입자경도 작고(200nm 미만) 또한 PDI가 0.5 미만인 좁은 분포를 나타내는 양호한 분산체였다.

시험예 10(약리학적 시험예)

AlphaScreen을 이용한 Kras와 SOS1의 단백 단백 상호작용 저해 활성(KrasG12D-SOS PPI)

Kras와 SOS1의 단백-단백 상호작용 저해 활성(protein-protein interaction inhibition; PPI)은, 상업적 공급업자로부터 입수 가능한 장치, 시약 등을 이용하여, 당업자라면 공지된 방법에 의해 실시 가능하다. 구체적으로는, 대장균에서 발현하고, 정제 후에 GDP를 로딩한 비오틴 태그 부착 인간 Kras와 His 태그 부착 인간 SOS1 엔자임을 이용하여, 니켈을 결합시킨 도너 비즈로부터 스트렙트아비딘을 결합시킨 억셉터 비즈로의 에너지 전달에 의해 측정했다. 도너 비즈에 680nm의 광을 조사함으로써, 일중항 산소를 개재시킨 억셉터 비즈로의 에너지 전달이 일어나, 억셉터 비즈로부터 520∼620nm의 광이 검출되는 것을 본 측정은 이용하고 있다. 화합물 1을 포함하지 않는 대조군에 대한 저해율로부터 50% 저해 농도(IC₅₀값)를 산출했다.

화합물 1의 IC₅₀값은 0.0010μM이었다. 화합물 1은, Kras와 SOS1의 단백-단백 상호작용을 저해하는 것이 나타났다. K-ras와 SOS1의 결합 저해에 의해, Kras의 하류의 시그널 전달을 저해하는 것이 알려져 있다. 따라서 화합물 1은, 세포 증식 저해 활성도 가지는 것이 시사되었다.

AsPC-1 세포 생육 저해 활성의 측정(AsPC-1 CGI)

AsPC-1 세포 생육 저해 활성은, 상업적 공급업자로부터 입수 가능한 장치, 시약, 세포주 등을 이용하여, 당업자라면 공지된 방법에 의해 실시 가능하다. 구체적으로는, 화합물 1을 다이메틸설폭사이드로 계열 희석 후, Labcyte Echo를 이용하여 200nL를 U 바닥 96웰 플레이트에 분주했다. 인간 췌장암주 AsPC-1은, RPMI-1640 배지에 15% 소 태아 혈청을 첨가한 배지로, 1000세포/100μL가 되도록 세포 현탁액을 조제했다. 이 세포 현탁액을, 화합물 1을 첨가 완료한 플레이트에 1웰당 100μL 분주하고, 37℃, 5% 탄산 가스 인큐베이터에서 배양했다. 96시간 후, 80μL의 CellTiter-Glo(프로메가)를 각 웰에 첨가하고, 형광을 측정했다. 화합물 1 무첨가의 대조에 대한 화합물 1 첨가 시의 증식 저해율로부터, 피험 화합물의 세포 생육 저해 활성(cell growth inhibition, CGI)을 50% 증식 저해 농도(IC₅₀값)로서 산출했다. 화합물 1의 IC₅₀값(μM)은, 0.02μM 이하로, 항종양 효과를 가지는 것이 나타났다.

본 발명에 따른 조성물은, 특정 화합물에 대해서, 특정 성분을 함유하는 것에 의해, 본 발명의 조성물은 제제로서 필요한 여러 가지 특성이 우수한 것으로 할 수 있다. 예를 들면, 이와 같은 특정 성분을 함유하는 조성물은, 바람직한 입자 특성을 가져, 유효 성분의 안정성이나 분산성이 우수하고, 또한 체내로의 흡수성도 우수하다. 따라서, 본 발명에 따른 조성물은, 의약 제제로서의 이용에 적합하다.

Claims

하기 식(1):

로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물과, 액체 첨가제를 함유하고,
상기 액체 첨가제가, 소수성 계면활성제 및 친수성 계면활성제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종이고,
상기 소수성 계면활성제가, 프로필렌 글라이콜 지방산 에스터, 글리세린 지방산 에스터, 폴리글리세린 지방산 에스터, 소비탄 지방산 에스터, 및 소수성 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종이며,
상기 친수성 계면활성제가, 폴리에틸렌 글라이콜 지방산 에스터, 폴리옥시에틸렌 피마자유, 친수성 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유, 폴리옥시에틸렌 소비탄 지방산 에스터, D-α-토코페릴 폴리에틸렌 글라이콜 1000 석신산염, 및 카프릴로카프로일 폴리옥실-8 글리세라이드로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 액체 첨가제가, 상기 소수성 계면활성제, 및 상기 친수성 계면활성제의 조합인, 조성물.
제 2 항에 있어서,
상기 소수성 계면활성제의 HLB값이 0 이상 10 미만이고, 상기 친수성 계면활성제의 HLB값이 10 이상 30 이하인, 조성물.
제 2 항에 있어서,
상기 소수성 계면활성제가, 프로필렌 글라이콜 지방산 에스터인, 조성물.
제 4 항에 있어서,
상기 프로필렌 글라이콜 지방산 에스터가, 모노카프로산 프로필렌 글라이콜, 모노카프릴산 프로필렌 글라이콜, 모노카프르산 프로필렌 글라이콜, 모노라우르산 프로필렌 글라이콜, 모노미리스트산 프로필렌 글라이콜, 모노팔미트산 프로필렌 글라이콜, 모노스테아르산 프로필렌 글라이콜, 및 모노올레산 프로필렌 글라이콜로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 조성물.
제 5 항에 있어서,
상기 프로필렌 글라이콜 지방산 에스터가, 모노카프릴산 프로필렌 글라이콜인, 조성물.
제 2 항에 있어서,
상기 친수성 계면활성제가, 폴리옥시에틸렌 피마자유인, 조성물.
제 7 항에 있어서,
상기 폴리옥시에틸렌 피마자유가, 폴리옥실 30 피마자유, 폴리옥실 35 피마자유, 및 폴리옥실 40 피마자유로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 조성물.
제 8 항에 있어서,
상기 폴리옥시에틸렌 피마자유가, 폴리옥실 35 피마자유인, 조성물.
제 4 항에 있어서,
상기 친수성 계면활성제가, 폴리옥시에틸렌 피마자유인, 조성물.
제 6 항에 있어서,
상기 친수성 계면활성제가, 폴리옥실 35 피마자유인, 조성물.
제 2 항에 있어서,
조성물이 유성 성분을 포함하는, 조성물.
제 12 항에 있어서,
상기 유성 성분이, 지방산, 아실글리세롤, 식물유 및 이들의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 조성물.
제 13 항에 있어서,
상기 유성 성분이, 지방산인, 조성물.
제 14 항에 있어서,
상기 지방산이, 카프로산, 카프릴산, 카프르산, 라우르산, 미리스트산, 미리스톨레산, 팔미트산, 팔미톨레산, 스테아르산, 올레산, 리놀레산, 및 리놀렌산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 조성물.
제 15 항에 있어서,
상기 지방산이, 올레산, 리놀레산, 및 리놀렌산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 조성물.
제 16 항에 있어서,
상기 지방산이, 올레산인, 조성물.
제 4 항에 있어서,
조성물이, 지방산을 추가로 포함하는, 조성물.
제 10 항에 있어서,
조성물이, 지방산을 추가로 포함하는, 조성물.
제 6 항에 있어서,
조성물이, 올레산을 추가로 포함하는, 조성물.
제 11 항에 있어서,
조성물이, 올레산을 추가로 포함하는, 조성물.
제 17 항에 있어서,
조성물이, 항산화제를 추가로 포함하는, 조성물.
삭제
제 19 항에 있어서,
조성물이, 항산화제를 추가로 포함하는, 조성물.
제 21 항에 있어서,
조성물이, 항산화제를 추가로 포함하는, 조성물.
제 25 항에 있어서,
상기 항산화제가, dl-α-토코페롤인, 조성물.
제 22 항에 있어서,
상기 항산화제가, dl-α-토코페롤, 뷰틸레이트화 하이드록시톨루엔, 뷰틸레이트화 하이드록시아니솔, 프로필 갈레이트, 몰식자산 프로필, 의약으로서 허용될 수 있는 퀴논, 아스타잔틴, 및 D-α-토코페릴 폴리에틸렌 글라이콜 1000 석신산염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 조성물.
제 27 항에 있어서,
상기 항산화제가, dl-α-토코페롤인, 조성물.
제 2 항에 있어서,
상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물의 조성물 전체에 대한 함유율이, 10중량% 이하인, 조성물.
제 2 항에 있어서,
상기 액체 첨가제의 조성물 전체에 대한 함유율이, 50중량% 이상 97중량% 이하인, 조성물.
제 2 항에 있어서,
상기 액체 첨가제의, 상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물에 대한 중량비가, 5 이상인, 조성물.
제 13 항에 있어서,
상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물의 조성물 전체에 대한 함유율이, 10중량% 이하이고, 상기 액체 첨가제의 조성물 전체에 대한 함유율이, 50중량% 이상 97중량% 이하인, 조성물.
제 19 항에 있어서,
상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물의 조성물 전체에 대한 함유율이, 10중량% 이하이고, 상기 액체 첨가제의 조성물 전체에 대한 함유율이, 50중량% 이상 97중량% 이하인, 조성물.
제 21 항에 있어서,
상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물의 조성물 전체에 대한 함유율이, 10중량% 이하이고, 상기 액체 첨가제의 조성물 전체에 대한 함유율이, 50중량% 이상 97중량% 이하인, 조성물.
삭제
제 24 항에 있어서,
상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물의 조성물 전체에 대한 함유율이, 10중량% 이하이고, 상기 액체 첨가제의 조성물 전체에 대한 함유율이, 50중량% 이상 97중량% 이하인, 조성물.
제 25 항에 있어서,
상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물의 조성물 전체에 대한 함유율이, 10중량% 이하이고, 상기 액체 첨가제의 조성물 전체에 대한 함유율이, 50중량% 이상 97중량% 이하인, 조성물.
제 26 항에 있어서,
상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물의 조성물 전체에 대한 함유율이, 10중량% 이하이고, 상기 액체 첨가제의 조성물 전체에 대한 함유율이, 50중량% 이상 97중량% 이하인, 조성물.
제 12 항에 있어서,
상기 유성 성분의 조성물 전체에 대한 함유율이, 1중량% 이상 40중량% 이하인, 조성물.
제 13 항에 있어서,
상기 지방산의 조성물 전체에 대한 함유율이, 1중량% 이상 40중량% 이하인, 조성물.
제 19 항에 있어서,
상기 지방산의 조성물 전체에 대한 함유율이, 1중량% 이상 40중량% 이하인, 조성물.
제 21 항에 있어서,
상기 올레산의 조성물 전체에 대한 함유율이, 1중량% 이상 40중량% 이하인, 조성물.
삭제
제 24 항에 있어서,
상기 지방산의 조성물 전체에 대한 함유율이, 1중량% 이상 40중량% 이하인, 조성물.
제 25 항에 있어서,
상기 올레산의 조성물 전체에 대한 함유율이, 1중량% 이상 40중량% 이하인, 조성물.
제 26 항에 있어서,
상기 올레산의 조성물 전체에 대한 함유율이, 1중량% 이상 40중량% 이하인, 조성물.
제 1 항 내지 제 22 항, 제 24 항 내지 제 34 항, 제 36 항 내지 제 42 항 및 제 44 항 내지 제 46 항 중 어느 한 항에 기재된 조성물을 함유하는, 의약 제제.
제 47 항에 있어서,
상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물이, 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물인, 의약 제제.
제 47 항에 있어서,
상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물이, 식(1)로 표시되는 화합물인, 의약 제제.
제 47 항에 있어서,
상기 제제의 제형이 캡슐제인, 의약 제제.
제 48 항에 있어서,
상기 제제의 제형이 캡슐제인, 의약 제제.
제 49 항에 있어서,
상기 제제의 제형이 캡슐제인, 의약 제제.
하기의 공정을 포함하는, 제 1 항 내지 제 22 항 및 제 24 항 내지 제 31 항 중 어느 한 항에 기재된 조성물의 제조 방법;
(1) 하기 식(1):

로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물, 및 액체 첨가제를 제공하는 공정,
여기에서, 상기 액체 첨가제는, 소수성 계면활성제 및 친수성 계면활성제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종이고,
상기 소수성 계면활성제가, 프로필렌 글라이콜 지방산 에스터, 글리세린 지방산 에스터, 폴리글리세린 지방산 에스터, 소비탄 지방산 에스터, 및 소수성 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종이며,
상기 친수성 계면활성제가, 폴리에틸렌 글라이콜 지방산 에스터, 폴리옥시에틸렌 피마자유, 친수성 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유, 폴리옥시에틸렌 소비탄 지방산 에스터, D-α-토코페릴 폴리에틸렌 글라이콜 1000 석신산염, 및 카프릴로카프로일 폴리옥실-8 글리세라이드로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종이다;
(2) 해당 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물, 및 액체 첨가제를 혼합하는 공정; 및
(3) 해당 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물이 용해된 조성물을 얻는 공정.
제 53 항에 있어서,
상기 공정(1)에 있어서 제공되는 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염, 또는 그들의 용매화물이, 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물인, 방법.
제 54 항에 기재된 방법에 의해 상기 조성물을 제공하는 공정, 및 해당 조성물을 제제화하여, 의약 제제를 제공하는 공정을 포함하는, 의약 제제의 제조 방법.
제 54 항에 기재된 방법에 의해 상기 조성물을 제공하는 공정, 및 해당 조성물을 캡슐에 충전하여, 캡슐 제제를 제공하는 공정을 포함하는, 캡슐 제제의 제조 방법.
제 54 항에 있어서,
상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°) 중의, 적어도 7개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 방법.
제 54 항에 있어서,
상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°) 중의, 적어도 10개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 방법.
제 54 항에 있어서,
상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 방법.
제 54 항에 있어서,
상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 14.752°, 14.968°, 15.895°, 16.190°, 16.643°, 17.813°, 및 19.424°(±0.2°) 중의, 적어도 7개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 방법.
제 54 항에 있어서,
상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 14.752°, 14.968°, 15.895°, 16.190°, 16.643°, 17.813°, 및 19.424°(±0.2°) 중의, 적어도 10개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 방법.
제 54 항에 있어서,
상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 14.752°, 14.968°, 15.895°, 16.190°, 16.643°, 17.813°, 및 19.424°(±0.2°) 중의, 적어도 13개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 방법.
제 54 항에 있어서,
상기 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물이 결정이고, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 14.752°, 14.968°, 15.895°, 16.190°, 16.643°, 17.813°, 및 19.424°(±0.2°)의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는, 방법.