KR102580400B1 - 염에 의한 삼투압 및 분자 압축 탈수 공정을 이용하는 오크라의 추출 방법 및 이에 의해 제조된 항노화용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

삼투압 탈수 및 분자 압축 탈수를 이용하는 오크라를 추출하는 방법에 관한 것으로서, 일 양상에 따른 방법에 의하면, 기존의 식물 탈수 추출 방법의 문제점을 해소하여 현저히 우수한 추출 수율을 나타낼 수 있고, 우수한 품질의 오크라 추출물을 수득할 수 있다. 또한, 상기 방법에 의하여 제조된 오크라 추출물을 포함하는 화장료 조성물의 경우, 현저히 우수한 피부 주름 개선 효과, 피부 탄력 개선 효과, 피부 가려움증 개선 효과, 또는 피부 보습 효과를 나타낼 수 있다.

Description

염에 의한 삼투압 및 분자 압축 탈수 공정을 이용하는 오크라의 추출 방법 및 이에 의해 제조된 항노화용 화장료 조성물{Method for extracting okra using process of osmotic pressure dehydration by salt and molecular compression dehydration, and cosmetic composition for anti-aging prepared thereby}

삼투압 탈수 및 분자 압축 탈수를 이용하는 오크라를 추출하는 방법 및 이에 의해 제조된 오크라 추출물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

일반적으로 사용되는 식물의 추출 방법은 고온의 정제수를 이용한 열수 추출 방법, 에탄올 또는 부틸렌글라이콜과 같은 용매를 이용한 용매 추출 방법 등이 있다.

열수 추출 방법은 추출 방법이 편리하고, 수율이 높다는 장점이 있지만, 열에 의해 원물이 가지고 있는 고유의 영양소를 파괴될 수 있다는 단점이 있다. 또한, 용매 추출 방법은 추출 후 폐기되는 원물과 용매가 환경에 좋지 않은 영향을 끼칠 수 있다는 단점이 있다.

일반적으로 삼투압 탈수는 고농도의 액상에 원료를 침지하였을 때 세포막 경계에서 삼투압의 차이에 의해 고농도에서 저농도로 또는 저농도에서 고농도로 물이 이동하는 방식으로 원료가 탈수되는 방식을 의미한다. 삼투압 탈수의 경우, 원료의 세포막 내외의 농도가 평형이 되었을 때 탈수 현상이 중단된다. 이는 초기 탈수 속도가 빠르다는 장점이 있지만, 세포 내 공간으로 고장액 유래의 염류 또는 당류가 유입되어 세포 내에 잔류하게 되고, 최종 탈수량이 적다는 단점이 있다. 또한, 삼투압 탈수는 절임류 등의 저장식품에는 적합하나, 탈수 조직을 복원할 때 탈수 조직의 세포막이 파괴되고, 탈수 조직의 유용성 성분이 감소되어 품질을 저하시킬 뿐 아니라 탈수 조직의 조직감이 생물의 것과 다르다는 단점이 있다.

이런 배경 하에서, 본 발명자들은 기존 공정의 단점들을 보완하고, 추출 수율을 증가시키면서, 원물 고유의 영양소의 파괴 없이, 친환경적으로 오크라를 추출하는 방법을 개발하였고, 상기 방법으로 추출한 오크라 추출물 또는 이를 포함하는 화장료 조성물의 현저히 우수한 피부 주름 개선 효과, 피부 탄력 개선 효과, 피부 가려움증 개선 효과, 또는 피부 보습 효과를 확인함으로써, 본 출원을 완성하였다.

대한민국 등록특허 제 2155897 호

일 양상은 오크라 및 염을 혼합하여 오크라를 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계; 및 오크라 및 고분자 물질을 혼합하여 오크라를 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계를 포함하는 오크라를 추출하는 방법을 제공하는 것이다.

다른 양상은 상기 방법에 의하여 제조된 오크라 추출물을 제공하는 것이다.

또 다른 양상은 상기 오크라 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 출원의 다른 목적 및 이점은 첨부한 청구범위 및 도면과 함께 하기의 상세한 설명에 의해 보다 명확해질 것이다. 본 명세서에 기재되지 않은 내용은 본 출원의 기술 분야 또는 유사한 기술 분야 내 숙련된 자이면 충분히 인식하고 유추할 수 있는 것이므로 그 설명을 생략한다.

본 출원에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 출원에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 출원의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 출원의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.

일 양상은 오크라 및 염을 혼합하여 오크라를 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계; 및 오크라 및 고분자 물질을 혼합하여 오크라를 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계를 포함하는 오크라를 추출하는 방법을 제공한다.

용어, "오크라 (okra)"란, 쌍떡잎식물 이판화군 아욱목 아욱과의 다년생초를 의미한다. 상기 오크라의 학명은 Hibiscus esculentus일 수 있다. 상기 오크라는, 잎이 어긋나고 자루가 길며 심장형이고 약 3 내지 약 10 개로 갈라지며 갈래조각에 톱니가 있는 모습을 나타낼 수 있다.

상기 오크라는 가공되지 않은 원물을 의미할 수 있고, 냉동 또는 냉장 형태의 오크라일 수 있다. 또한, 상기 오크라는 오크라의 열매, 꽃, 잎, 뿌리, 또는 이의 조합일 수 있으며, 식물의 전체를 의미하는 것일 수 있다. 일 실시예에 있어서, 상기 오크라는 세절된 것일 수 있다. 상기 오크라는 세절됨으로써, 상기 염 또는 고분자 물질이 포함된 탈수 용액과 접촉할 수 있는 표면적을 높일 수 있어 효과적으로 추출이 진행되는 것일 수 있다.

용어, "염"은 산의 음이온과 염기의 양이온이 정전기적 인력으로 결합하고 있는 이온성 물질인 화합물을 의미한다. 상기 염은 그 종류에 있어서 특별히 제한되지 않는다. 구체적으로, 상기 염은 나트륨염, 칼륨염, 칼슘염, 또는 이의 조합일 수 있다. 바람직하게는 상기 염은 염화나트륨, 락트산나트륨, 아세트산나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘, 또는 이의 조합일 수 있다. 상기 염화나트륨은 암염, 정제염, 천일염, 자염, 제제염, 또는 이의 조합일 수 있다.

용어, "탈수 추출"이란, 원물인 식물 조직의 수분 및 유용성 성분을 원물 외부로 배출하는 것을 의미한다. 상기 탈수 추출은 삼투압 탈수 추출 또는 분자 압축 탈수 추출일 수 있다.

상기 삼투압 탈수 추출이란, 세포 내 외의 농도 구배에 의한 힘인 삼투압을 이용하여 세포 내의 수분 또는 유용성 성분을 세포 외부로 배출하게 하는 것을 의미할 수 있다. 상기 삼투압 탈수 추출은 세포막 경계에서 삼투압의 차이에 의해 고농도에서 저농도로, 또는 저농도에서 고농도로의 상평형이 이뤄지며, 세포막 내외의 농도가 평형이 되었을 때 탈수 현상이 중단되는 것일 수 있다.

상기 오크라 및 염을 혼합하여 오크라를 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서, 상기 염 및 상기 오크라는 5 내지 100 : 100의 중량비로 혼합되는 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서, 상기 염 및 상기 오크라는 5 내지 90, 5 내지 80, 5 내지 70, 5 내지 60, 5 내지 50, 5 내지 40, 5 내지 30, 5 내지 20, 5 내지 10, 10 내지 100, 10 내지 90, 10 내지 80, 10 내지 70, 10 내지 60, 10 내지 50, 10 내지 40, 10 내지 30, 10 내지 20, 20 내지 100, 20 내지 90, 20 내지 80, 20 내지 70, 20 내지 60, 20 내지 50, 20 내지 40, 20 내지 30, 30 내지 100, 30 내지 90, 30 내지 80, 30 내지 70, 30 내지 60, 30 내지 50, 30 내지 40, 40 내지 100, 50 내지 90, 또는 60 내지 80 : 100의 중량비로 혼합되는 것일 수 있고, 바람직하게는 20 내지 40 : 100의 중량비로 혼합되는 것일 수 있다.

일 구체예에 따르면, 상기 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서, 상기 염 및 상기 오크라가 10 미만 : 100의 중량비로 혼합되는 경우, 탈수량이 감소하여 추출 수율이 감소하거나, 추출물에 포함된 유용성 성분의 양이 감소할 수 있다. 또한, 상기 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서, 상기 염 및 상기 오크라가 100 초과 : 100의 중량비로 혼합되는 경우, 상기 염의 용해도가 감소하여, 용해되지 않은 염에 의하여 추출 수율이 감소하거나, 상기 오크라의 세포 조직이 손상되어, 상기 세포 내의 효소와 같은 고분자 성분이 세포 외로 유출될 수 있다. 따라서, 최종적으로 얻어진 추출물이 불순물을 포함하거나 효소에 의해 갈변되는 등 품질 저하를 나타낼 수 있다. 또한, 용해되지 않은 염에 의하여 최종 추출물의 수득 및 이용이 어려울 수 있다.

상기 오크라 및 염을 혼합하여 오크라를 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서, 상기 오크라 및 상기 염의 혼합 시간은 약 15 시간 내지 약 32 시간인 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 혼합 시간은 약 15 시간 내지 약 31 시간, 약 15 시간 내지 약 30 시간, 약 16 시간 내지 약 32 시간, 약 16 시간 내지 약 31 시간, 약 16 시간 내지 약 30 시간, 약 17 시간 내지 약 32 시간, 약 17 시간 내지 약 31 시간, 약 17 시간 내지 약 30 시간, 약 18 시간 내지 약 32 시간, 약 18 시간 내지 약 31 시간, 또는 약 18 시간 내지 약 30 시간일 수 있다. 바람직하게는 상기 혼합 시간은 약 18 시간 내지 약 30 시간일 수 있다.

일 구체예에 따르면, 상기 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서, 상기 오크라 및 상기 염의 혼합 시간이 약 15 시간 미만인 경우, 탈수량이 감소하여 추출 수율이 감소하거나, 추출물에 포함된 유용성 성분의 양이 감소할 수 있다. 또한, 상기 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서, 상기 오크라 및 상기 염의 혼합 시간이 약 32 시간을 초과하는 경우, 탈수가 진행됨에 따라 발생하는 농도 평형에 의하여 탈수가 정지되어 더 이상 추출 수율이 증가하지 않을 수 있다. 또한, 상기 오크라가 상기 염에 장시간 노출됨으로써, 상기 오크라의 세포 조직이 손상되어, 상기 세포 내의 효소와 같은 고분자 성분이 세포 외로 유출될 수 있다. 따라서, 최종적으로 얻어진 추출물이 불순물을 포함하거나 효소에 의해 갈변되는 등 품질 저하를 나타낼 수 있다.

또한, 상기 오크라 및 염을 혼합하여 오크라를 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계는, 얻어진 탈수 추출물로부터 상기 염을 제거하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.

상기 오크라를 추출하는 방법은 오크라 및 고분자 물질을 혼합하여 오크라를 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계를 포함할 수 있다.

상기 분자 압축 탈수 추출이란, 고분자의 사이토리시스 작용을 이용하여 세포 내의 수분 또는 유용성 성분을 세포 외부로 배출하게 하는 것을 의미할 수 있다.

용어, "사이토리시스 (Cytorrhysis)"란, 세포의 내부 양압의 손실로 인해, 식물 세포벽의 영구적인 손상이 가해지는 것을 의미한다. 상기 사이토리시스는 식물 세포벽의 기공보다 큰 크기의 고분자 물질이 세포벽 내로는 침투하지 못하고 세포 외부에서 확산 압력을 가함으로써, 세포가 수축되어 찌그러지면서 탈수가 일어나는 것일 수 있다.

상기 사이토리시스를 이용하는 상기 분자 압축 탈수 추출의 경우, 세포 외부의 용질을 이용하여 탈수시킨다는 점에서는 기존의 삼투압 탈수와 비슷하나 기존의 삼투압 탈수는 용질이 세포벽의 세공을 통해 이동할 수 있는 반면, 사이토리시스에서 사용하는 고분자 물질은 세포벽의 세공보다 크므로 세포 외 조직에만 머무른다는 차이가 있다. 따라서 기존의 삼투압 탈수에서는 세포 내외의 용질 농도가 같아져 농도 구배가 사라지면 탈수가 정지되는 반면, 사이토리시스를 이용한 상기 분자 압축 탈수 추출의 경우, 세포 내외의 농도 구배가 지속적으로 유지되기 때문에 기존의 삼투압 탈수보다 다량의 수분을 탈수시킬 수 있고, 이로 인해 수득된 추출물의 추출 수율 또는 유용성 성분의 함유량이 현저히 증가할 수 있다.

상기 고분자 물질은 식물 세포의 세포벽 기공 또는 세공보다 더 큰 크기를 지니고, 물에 대한 용해도가 커서 고농도 수용액을 만들 수 있으며, 수용액으로 만들어졌을 때 점도가 낮아 분자의 확산이 용이하게 일어날 수 있는 것이 바람직하다.

상기 고분자 물질은 PEG (Polyethylene glycol), 아라비아검 (arabic gum), 덱스트린, 및 아라비노갈락탄으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 바람직하게는, 상기 고분자 물질은 말토덱스트린일 수 있다.

상기 고분자 물질의 분자량은 약 500 이상 내지 약 10000 이하일 수 있다. 구체적으로, 상기 고분자 물질의 분자량은 약 500 이상 내지 약 8000 이하, 약 500 이상 내지 약 6000 이하, 약 500 이상 내지 약 4000 이하, 약 500 이상 내지 약 2000 이하, 약 500 이상 내지 약 1000 이하, 약 1000 이상 내지 약 10000 이하, 약 1000 이상 내지 약 8000 이하, 약 1000 이상 내지 약 6000 이하, 약 1000 이상 내지 약 4000 이하, 약 1000 이상 내지 약 2000 이하, 약 2000 이상 내지 약 10000 이하, 약 2000 이상 내지 약 8000 이하, 약 2000 이상 내지 약 6000 이하, 약 2000 이상 내지 약 4000 이하, 약 4000 이상 내지 약 10000 이하, 약 4000 이상 내지 약 8000 이하, 약 4000 이상 내지 약 6000 이하, 약 6000 이상 내지 약 10000 이하, 약 6000 이상 내지 약 8000 이하, 또는 약 8000 이상 내지 약 10000 이하일 수 있다. 바람직하게는, 상기 고분자 물질의 분자량은 약 2000 이상 내지 약 6000 이하일 수 있다.

일 구체예에 따르면, 상기 고분자 물질의 분자량이 약 500 미만인 경우, 고분자 물질이 상기 오크라 세포의 세포벽 기공 또는 세공보다 크기가 더 작아 세포 내로 침투할 수 있고, 이 경우, 단 시간 내에 세포 내외의 농도 구배가 상실되어 탈수가 정지됨으로써, 탈수량이 감소할 수 있다. 이로 인해, 수득된 추출물의 추출 수율 및 유용성 성분의 함유량이 감소할 수 있다. 또한, 상기 고분자 물질의 분자량이 약 10000을 초과하는 경우, 고분자 물질이 상기 오크라 세포의 세포벽 기공 또는 세공보다 크기가 지나치게 커서 사이토리시스를 잘 유발하지 못하여, 탈수량이 감소할 수 있다. 이로 인해, 수득된 추출물의 추출 수율 및 유용성 성분의 함유량이 감소할 수 있다.

상기 오크라 및 고분자 물질을 혼합하여 오크라를 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서, 상기 고분자 물질은 사이토리시스 작용에 의하여 상기 오크라의 조직 표면에 부착되거나 도포되는 것일 수 있다. 따라서, 상기 오크라로부터 빠져나온 물이 증가하여 오크라 조직 밖의 탈수액이 희석되더라도, 상기 오크라 조직 표면에 부착 또는 도포된 상기 고분자 물질에 의하여 오크라 조직 표면과 조직 내부 사이에서의 농도 구배가 유지될 수 있다. 이로 인해, 지속적으로 탈수가 일어날 수 있고, 탈수량 또는 추출 수율이 증가할 수 있으며, 수득된 추출물에 포함된 유용성 성분의 함유량이 증가할 수 있다. 또한, 상기 고분자 물질이 사이토리시스 작용에 의하여 상기 오크라의 조직 표면에 부착되거나 도포되는 것에 의하여, 오크라 조직이 공기에 직접 노출되는 것을 방지하여 산화에 의한 갈변 현상을 줄일 수 있다. 이로 인해, 기존 탈수 추출법의 문제점, 즉 식물 조직으로부터 탈수가 계속됨에 따라, 식물 조직 내외에서 농도 평형이 유발되어 탈수가 정지되면, 탈수량 및 추출 수율이 감소할 수 밖에 없어, 추출 수율을 증가시키기 위하여 대량의 고분자 물질이 요구될 수 밖에 없었던 문제점을 해소할 수 있다.

상기 오크라 및 고분자 물질을 혼합하여 오크라를 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서, 상기 고분자 물질 및 상기 오크라는 10 내지 300 : 100의 중량비로 혼합되는 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서, 상기 고분자 물질 및 상기 오크라는 10 내지 250, 10 내지 200, 10 내지 150, 10 내지 100, 10 내지 50, 50 내지 300, 50 내지 250, 50 내지 200, 50 내지 150, 50 내지 100, 100 내지 300, 100 내지 250, 100 내지 200, 100 내지 150, 150 내지 300, 150 내지 250, 150 내지 200, 200 내지 300, 200 내지 250, 또는 250 내지 300 : 100의 중량비로 혼합되는 것일 수 있고, 바람직하게는 50 내지 150 : 100의 중량비로 혼합되는 것일 수 있다.

일 구체예에 따르면, 상기 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서, 상기 고분자 물질 및 상기 오크라가 10 미만 : 100의 중량비로 혼합되는 경우, 탈수량이 감소하여 추출 수율이 감소하거나, 추출물에 포함된 유용성 성분의 양이 감소할 수 있다. 또한, 상기 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서, 상기 고분자 물질 및 상기 오크라가 300 초과 : 100의 중량비로 혼합되는 경우, 상기 고분자 물질의 용해도가 감소하여, 용해되지 않은 고분자 물질에 의하여 추출 수율이 감소하거나, 상기 오크라의 세포 조직이 손상되어, 상기 세포 내의 효소와 같은 고분자 성분이 세포 외로 유출될 수 있다. 따라서, 최종적으로 얻어진 추출물이 불순물을 포함하거나 효소에 의해 갈변되는 등 품질 저하를 나타낼 수 있다. 또한, 용해되지 않은 고분자 물질에 의하여 최종 추출물의 수득 및 이용이 어려울 수 있다.

상기 오크라 및 고분자 물질을 혼합하여 오크라를 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서, 상기 오크라 및 상기 고분자 물질의 혼합 시간은 약 15 시간 내지 약 32 시간인 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 혼합 시간은 약 15 시간 내지 약 31 시간, 약 15 시간 내지 약 30 시간, 약 16 시간 내지 약 32 시간, 약 16 시간 내지 약 31 시간, 약 16 시간 내지 약 30 시간, 약 17 시간 내지 약 32 시간, 약 17 시간 내지 약 31 시간, 약 17 시간 내지 약 30 시간, 약 18 시간 내지 약 32 시간, 약 18 시간 내지 약 31 시간, 또는 약 18 시간 내지 약 30 시간일 수 있다. 바람직하게는 상기 혼합 시간은 약 18 시간 내지 약 30 시간일 수 있다.

일 구체예에 따르면, 상기 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서, 상기 오크라 및 상기 고분자 물질의 혼합 시간이 약 15 시간 미만인 경우, 탈수량이 감소하여 추출 수율이 감소하거나, 추출물에 포함된 유용성 성분의 양이 감소할 수 있다. 또한, 상기 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서, 상기 오크라 및 상기 고분자 물질의 혼합 시간이 약 32 시간을 초과하는 경우, 탈수가 진행됨에 따라 발생하는 농도 평형에 의하여 탈수가 정지되어 더 이상 추출 수율이 증가하지 않을 수 있다. 또한, 상기 오크라가 상기 고분자 물질에 장시간 노출됨으로써, 상기 오크라의 세포 조직이 손상되어, 상기 세포 내의 효소와 같은 고분자 성분이 세포 외로 유출될 수 있다. 따라서, 최종적으로 얻어진 추출물이 불순물을 포함하거나 효소에 의해 갈변되는 등 품질 저하를 나타낼 수 있다.

또한, 상기 오크라 및 고분자 물질을 혼합하여 오크라를 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계는, 얻어진 탈수 추출물로부터 상기 고분자 물질을 제거하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.

상기 오크라를 추출하는 방법은, 1차 탈수 단계 및 2차 탈수 단계를 포함하는 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 1차 탈수 단계가 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계인 경우, 상기 2차 탈수 단계가 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계일 수 있다. 또한, 상기 1차 탈수 단계가 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계인 경우, 상기 2차 탈수 단계가 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계일 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 오크라를 추출하는 방법은 오크라 및 염을 혼합하여 삼투압 탈수 추출을 진행하는 1차 탈수 단계; 및 1차 탈수된 오크라 및 고분자 물질을 혼합하여 분자 압축 탈수 추출을 진행하는 2차 탈수 단계를 포함하는 것일 수 있다. 또한, 상기 방법은 오크라 및 고분자 물질을 혼합하여 분자 압축 탈수 추출하는 1차 탈수 단계; 및 상기 1차 탈수된 오크라 및 염을 혼합하여 삼투압 탈수 추출하는 2차 탈수 단계를 포함하는 것일 수 있다.

일 구체예에 따르면, 상기 삼투압 탈수 추출 또는 상기 분자 압축 탈수 추출만을 단독으로 진행하는 단일 추출 방법을 통해 얻어진 오크라 추출물과 비교하여, 상기 1차 탈수 단계 후 상기 2차 탈수 단계를 진행하는 복합 추출 방법, 즉, 상기 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계 및 상기 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계를 조합하여 진행하는 복합 추출 방법을 통해 얻어진 오크라 추출물의 경우, 추출 수율 또는 유용성 성분의 함유량이 현저히 증가할 수 있다. 또한, 상기 단일 추출 방법을 통해 얻어진 오크라 추출물과 비교하여, 상기 복합 추출 방법을 통해 얻어진 오크라 추출물의 경우, 품질, 보존력, 피부 주름 개선 효과, 피부 탄력 개선 효과, 피부 가려움증 개선 효과, 또는 피부 보습 효과가 현저히 증가할 수 있다.

상기 단일 추출 방법과 비교하여, 상기 복합 추출 방법을 수행하는 경우, 상기 오크라 및 고분자 물질을 혼합하여 오크라를 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서, 상기 고분자 물질이 상기 오크라의 조직 표면에 더욱 높은 효율로 부착되거나 도포되는 것일 수 있다. 이는, 오크라 조직 표면과 조직 내부 사이에서의 농도 구배를 더 오래 유지시킬 수 있고, 사이토리시스 현상이 더욱 효율적으로 일어나게 할 수 있다. 이로 인해, 탈수 시간이 증가할 수 있고, 탈수량 또는 추출 수율이 더욱 증가할 수 있으며, 수득된 추출물에 포함된 유용성 성분의 함유량이 더욱 증가할 수 있다. 따라서, 상기 복합 추출 방법을 통해 기존 탈수 추출법의 문제점, 즉 식물 조직으로부터 탈수가 계속됨에 따라, 식물 조직 내외에서 농도 평형이 유발되어 탈수가 정지되면, 탈수량 및 추출 수율이 감소할 수 밖에 없어, 추출 수율을 증가시키기 위하여 대량의 고분자 물질이 요구될 수 밖에 없었던 문제점을 해소할 수 있다.

또한, 상기 단일 추출 방법과 비교하여, 상기 복합 추출 방법을 수행하는 경우, 상기 고분자 물질이 상기 오크라의 조직 표면에 더욱 높은 효율로 부착되거나 도포되는 것에 의하여, 상기 오크라 조직의 손상을 더욱 강하게 억제하여 탈수되는 조직에서 세포 내의 효소와 같은 고분자 성분의 유출을 더욱 강하게 방지하거나, 상기 오크라 조직의 공기 노출을 더욱 강하게 방지하여, 고분자 성분 또는 산화에 의한 갈변 현상이 더욱 감소할 수 있다. 이로 인해, 상기 복합 추출 방법을 통해 얻어진 오크라 추출물의 경우 더욱 우수한 품질을 나타내는 것일 수 있다.

상기 오크라를 추출하는 방법은 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계 이후 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계; 또는 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계 이후 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계 순서로 진행되는 것일 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 오크라를 추출하는 방법이 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계 이후 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계 순서로 진행되는 경우, 그와 반대 순서로 진행하는 경우 대비 추출 수율이 더욱 증가할 수 있다. 상기 삼투압 탈수 추출을 선처리하는 경우, 삼투압 탈수 추출을 거치면서 연화된 세포벽에 상기 고분자 물질이 더욱 효율적으로 부착 또는 도포될 수 있고, 이로 인해, 후처리된 상기 분자 압축 탈수 추출에서 사이토리시스 현상이 더욱 효율적으로 일어나 추출 수율이 더욱 증가하는 것일 수 있다.

또한, 일 실시예에 있어서, 상기 오크라를 추출하는 방법이 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계 이후 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계 순서로 진행되는 경우에, 초기 탈수 속도가 빠르다는 장점이 있을 수 있다.

상기 오크라를 추출하는 방법의 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계 또는 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서, 상기 염 또는 상기 고분자 물질은 고체 또는 용액 상태로 상기 오크라와 혼합되는 것일 수 있다.

상기 고체 상태란 고분자 물질이 포화상태 이상으로 물과 혼합되어 있어 일부는 결정이나 분말의 고체상태로 분산되어 있는 현탁액이나 또는 결정 상태, 또는 분말 상태를 의미하는 것일 수 있다.

상기 오크라를 추출하는 방법의 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계 또는 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서, 상기 염 또는 상기 고분자 물질을 고체 상태로 상기 오크라와 혼합하는 경우, 먼저 상기 염 또는 상기 고분자 물질이 상기 오크라 조직 표면의 수분에 의해 용해되어 탈수를 일으킬 수 있다. 탈수가 진행되면서 오크라 조직 밖으로 빠져나온 물에 의해 염 또는 고분자 물질이 계속하여 용해되므로, 탈수 과정 내내 오크라 조직은 포화된 용액 내에 놓이게 되어 탈수가 효과적으로 지속될 수 있다. 이로 인해, 최소량의 염 또는 고분자 물질을 사용하여 효율적으로 오크라를 탈수시킬 수 있어, 탈수량 또는 추출 수율이 증가할 수 있으며, 수득된 추출물에 포함된 유용성 성분의 함유량이 증가할 수 있다.

또한, 상기 각 단계에서, 상기 염 또는 상기 고분자 물질을 고체 상태로 상기 오크라와 혼합하는 경우, 상기 오크라 조직으로부터 추출된 유용성 성분이 희석되지 않고, 효소나 산화에 의한 변화를 거의 받지 않기 때문에, 상기 유용성 성분의 고유의 특성을 그대로 간직한 채 추출될 수 있다. 이로 인해, 수득된 추출물은 고 품질의 유용성 성분을 포함할 수 있고, 더욱 우수한 효능을 나타낼 수 있다.

또한, 상기 각 단계에서, 상기 염 또는 상기 고분자 물질을 고체 상태로 상기 오크라와 혼합하는 경우, 상기 염 또는 상기 고분자 물질의 농도가 거의 포화 상태로 유지되어 수분활성도가 낮아지기 때문에, 미생물의 번식으로 인한 탈수 추출물의 부패가 방지되어, 보존료 첨가 또는 살균 처리 등 별도의 공정 없이도 변질되지 않는 우수한 품질의 추출물을 수득할 수 있고, 수득된 추출물을 신선한 상태로 장기 보존할 수 있다.

상기 오크라를 추출하는 방법의 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계 또는 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서, 상기 염 또는 상기 고분자 물질과 상기 오크라를 상온에서 혼합하는 것일 수 있다. 상기 상온은 추가 온도 처리를 하지 않은 실내 또는 실외의 온도를 의미하는 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 상온은 약 10℃ 내지 약 40℃를 의미하는 것일 수 있다. 상기 상온은 약 10℃ 내지 약 35℃, 약 10℃ 내지 약 30℃, 약 10℃ 내지 약 25℃, 약 10℃ 내지 약 20℃, 약 10℃ 내지 약 15℃, 약 15℃ 내지 약 40℃, 약 15℃ 내지 약 35℃, 약 15℃ 내지 약 30℃, 약 15℃ 내지 약 25℃, 약 15℃ 내지 약 20℃, 약 20℃ 내지 약 40℃, 약 20℃ 내지 약 35℃, 또는 약 20℃ 내지 약 30℃를 의미하는 것일 수 있다.

상기 오크라를 추출하는 방법은 상기 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계 또는 상기 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서 얻어진 추출물을 여과 또는 원심 분리하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있다. 상기 여과 또는 원심 분리하는 단계에서는 상기 얻어진 추출물로부터 탈수된 조직을 분리하는 것일 수 있다. 예컨대, 상기 1차 탈수 단계에서 얻어진 추출물에 포함된 탈수된 조직은 상기 여과 또는 원심 분리하는 단계에서 따로 분리되어, 상기 2차 탈수 단계에 사용될 수 있다. 또한, 상기 여과 또는 원심 분리하는 단계에서는 상기 추출하는 단계에서 얻어진 추출물로부터 탈수된 조직, 용해되지 않은 염 또는 고분자 물질, 또는 불순물 등을 분리하여 제거하는 것일 수 있다.

상기 오크라를 추출하는 방법의 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계 또는 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계는 상기 염 또는 상기 고분자 물질과 상기 오크라의 혼합물에 탈수 보조제, 첨가제, 또는 pH 조절제를 추가적으로 첨가하여 방치함으로서, 탈수 효율을 높이는 것일 수 있다. 상기 탈수 보조제는 저분자 탈수 보조제일 수 있으며, 상기 첨가제는 염류, 당류, 다당류, 당알콜류, 또는 식이섬유일 수 있다. 또한, 상기 pH 조절제는 염산, 황산, 가성소다 등의 무기산, 알칼리와 초산, 구연산, 사과산 주석산 등의 유기산, 또는 이들의 염류일 수 있다. 일 실시예에 있어서, 상기 각 단계는 pH 조절제를 추가적으로 혼합하여, 염 또는 고분자 물질의 첨가에 따른 pH 변화와 같이 탈수 중 일어날 수 있는 pH의 변화로 인한 품질 변화를 줄일 수 있다.

다른 양상은 상기 오크라를 추출하는 방법으로 제조된 오크라 추출물을 제공한다.

일 실시예에 있어서, 상기 오크라 추출물의 유효 농도는 약 1 내지 300 μg/mL인 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 오크라 추출물의 유효 농도는 약 1 내지 250, 약 1 내지 200, 약 1 내지 150, 약 1 내지 100, 약 10 내지 300, 약 10 내지 250, 약 10 내지 200, 약 10 내지 150, 또는 약 10 내지 100 μg/mL일 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 오크라 추출물은 콜라겐 경화 효소 또는 콜라겐 분해 효소인 콜라게나아제 (MMP-1)를 억제하는 것일 수 있다. 상기 오크라 추출물은 상기 효소를 억제함으로써, 피부 주름 개선, 피부 탄력 개선, 또는 항노화 효과를 나타내는 것일 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 오크라 추출물은 type 1 collagen 유전자인 COL1A1 유전자의 발현을 증가시키는 것일 수 있다. 상기 오크라 추출물은 상기 유전자의 발현을 증가시킴으로써, 피부 주름 개선, 피부 탄력 개선, 또는 항노화 효과를 나타내는 것일 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 오크라 추출물은 히알루론산 합성 효소 (Hyaluronan synthase 3, HAS3)의 발현을 증가시키는 것일 수 있다. 상기 오크라 추출물은 상기 효소의 발현을 증가시킴으로써, 피부 보습 효과를 나타내는 것일 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 오크라 추출물은 가려움증 유발 유전자인 Thymic stromal lymphopoietin (TSLP) 유전자의 발현을 억제하는 것일 수 있다. 상기 오크라 추출물은 상기 유전자의 발현을 억제함으로써, 피부 가려움증 개선 효과를 나타내는 것일 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 오크라 추출물의 pH는 약 3 이상 내지 약 7 이하, 바람직하게는, 상기 오크라 추출물의 pH는 약 5일 수 있다. 상기 오크라 추출물의 pH가 약 3 미만이면 화장료 조성물 사용에 제한이 있고, pH가 약 7 초과이면 효소 활성을 저해시키는 문제점이 있을 수 있다.

상기 추출물에서 언급된 용어 또는 요소 중 상기 방법에 대한 설명에서 언급된 것과 같은 것은, 앞에서 상기 방법에 대한 설명에서 언급된 바와 같은 것으로 이해된다.

또 다른 양상은 상기 오크라를 추출하는 방법으로 제조된 오크라 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

상기 화장료 조성물은 피부 주름 개선 효과, 피부 탄력 개선 효과, 피부 가려움증 개선 효과, 또는 피부 보습 개선 효과를 나타내는 것일 수 있다.

따라서, 상기 화장료 조성물은 항노화용 화장료 조성물일 수 있다.

용어, "주름"은 피부가 쇠하여 생긴 잔줄을 의미한다. 상기 주름은 유전자에 의한 원인, 피부 진피에 존재하는 콜라겐의 감소, 외부 환경, 노화 등에 의해 유발되는 것을 통칭한다.

용어, "주름 개선"이란 피부에 주름이 생기는 것을 억제 또는 저해하거나 이미 생성된 주름을 완화시키는 것을 의미한다. 피부 탄력 개선 또는 증가에 의해 피부 주름이 완화시키는 것을 포함하며, 모공면적을 감소시킴으로써 피부 주름을 개선시키는 것을 포함할 수 있다.

용어, "피부 보습"이란 피부 수분을 유지하거나, 수분 손실을 방지하는 모든 작용을 의미한다.

상기 화장료 조성물은 화장품 제조에 사용되는 화장품 원료용 조성물일 수 있다. 또한, 상기 화장료 조성물은 최종 화장품 제형을 가지는 화장품 조성물일 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 산화방지제, 방부제, 점증제, 또는 보습제를 추가적으로 포함할 수 있다.

상기 산화방지제는 화장료 조성물 등에 생기기 쉬운 산소의 작용에 의한 자동 산화를 방지하기 위해 첨가하는 물질로서, 예를 들어, 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 사용할 수 있다.

상기 방부제는 유상에 녹아 방부활성을 나타내는 모든 원료를 칭하며, 천연 원료로는 항균, 항염효과가 있는 스팀증류법으로 추출된 에센셜 오일을 포함할 수 있다. 예를 들어, 페녹시에탄올, 에탄올 및 다가 알코올 류에 속하는 펜틸렌글라이콜, 헥산디올, 에칠헥실글리세린, 카프릴릴글라이콜, 글리세린, 부틸렌글라이콜, 프로필렌글라이콜 등, 방부 역할을 하는 유기산 [아세트산 (acetic acid), 부티르산 (butyric acid), 시트르산 (citric acid), 팔미트산 (palmitic acid), 옥살산 (oxalic acid), 타타르산 (tartaric acid), 글리콜산 (glycolic acid), 락트산 (lactic acid), 말레산 (maleic acid) 등], 또는 디포타슘글리시리제이트를 사용할 수 있다.

상기 보습제는 피부의 건조를 막아 피부의 유연성 및 탄력성을 유지할 수 있는 물질로서, 폴리올류, 아미노산류, 또는 당류 등이 있다. 상기 폴리올류는 글리세린, 프로필렌, 부틸렌글리콜 등의 알코올, 판테놀과 같은 알코올 유도체 등을 포함할 수 있다. 상기 아미노산류 및 당류는 포도당, 트레할로스, 자일리톨, 에리스리톨 같은 단당류와 키토산, 히아루론산과 같은 다당류, 폴리쿼터늄-51과 같은 암모늄염 등을 사용할 수 있다.

상기 점증제는 화장료 조성물의 점도, 질감 등을 개선시키는 물질로서, 예를 들어, 셀룰로오스검, 잔탄검, 젠란검, 아가, 타마린드검, 구아검, 아라비아검, 세틸알코올, 스테아릴알코올, 세테아릴알코올, 소듐클로라이드, 폴리쿼터늄-7 등을 사용할 수 있다.

상기 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 구체적으로, 상기 화장료 조성물은 그 제형이 용액, 유탁액, 현탁액, 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 팩, 젤, 피부 점착 타입의 화장료, 립스틱, 파우더, 메이컵 베이스, 파운데이션, 샴푸, 린스, 두피용 세정제, 두피용 화장수, 두피용 크림, 두피용 팩, 두피용 젤, 두피용 연고, 두피용 겔, 바디클렌저, 비누, 치약, 구강청정제, 페이스트, 로션, 연고, 겔, 크림, 패취, 스프레이, 또는 분무제인 것일 수 있고, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 화장료 조성물에 포함되는 담체는 화장품의 제형에 따라 선택적으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 연고, 페이스트, 크림, 또는 젤 형태의 화장품을 제조할 경우에는, 담체 성분으로서 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화 아연 등을 단독으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 파우더 또는 스프레이 형태의 화장품을 제조할 경우에는, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더, 클로로플루오로하이드로카본, 프로판/부탄, 디메틸 에테르 등을 단독으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 용액 또는 유탁액 형태의 화장품을 제조할 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일, 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등을 단독으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 현탁액 형태의 화장품을 제조할 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타하이드록시드, 벤토나이트, 아가, 트라칸트 등을 단독으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 비누 형태의 화장품을 제조할 경우에는, 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등을 단독으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.

상기 조성물에서 언급된 용어 또는 요소 중 상기 방법 및 추출물에 대한 설명에서 언급된 것과 같은 것은, 앞에서 상기 방법 및 추출물에 대한 설명에서 언급된 바와 같은 것으로 이해된다.

일 양상에 따른 오크라를 추출하는 방법에 의하면, 기존의 식물 탈수 추출 방법의 문제점을 해소하여 현저히 우수한 추출 수율을 나타낼 수 있다. 구체적으로, 일 양상에 따른 오크라를 추출하는 방법에 의하면, 최소량의 염 또는 고분자 물질을 사용하면서도 최대의 탈수 효과를 얻을 수 있어, 추출 수율이 현저히 증가될 수 있을 뿐만 아니라, 추출물에 포함된 유용성 성분의 양이 현저히 증가할 수 있고, 유용성 성분의 고유의 특성이 파괴되지 않은 우수한 품질의 추출물을 제조할 수 있다.

또한, 일 양상의 오크라를 추출하는 방법에 의해 제조된 오크라 추출물 또는 이를 포함하는 화장료 조성물의 경우, 현저히 우수한 피부 주름 개선 효과, 피부 탄력 개선 효과, 피부 가려움증 개선 효과, 또는 피부 보습 효과를 나타낼 수 있다.

도 1은 일 양상의 오크라를 추출하는 방법의 단계를 나타내는 모식도이다.
도 2는 섬유아세포에 일 양상의 오크라 추출물을 처리한 경우, 콜라겐 경화 효소 활성도를 나타낸 그래프이다.
도 3은 섬유아세포에 일 양상의 오크라 추출물을 처리한 경우, 콜라게나아제 (MMP-1) 발현 수준을 나타내는 그래프이다.
도 4는 인간 섬유아세포에 일 양상의 오크라 추출물 처리한 경우, type 1 collagen 유전자의 발현 수준을 나타내는 그래프이다.
도 5는 인간 표피세포에 일 양상의 오크라 추출물을 처리한 경우, HAS3 유전자 발현 수준을 나타낸 그래프이다.
도 6은 인간 표피세포에 일 양상의 오크라 추출물을 처리한 경우, 세포의 가려움증 수준을 나타낸 그래프이다.

이하 본 발명을 실험예 및 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실험예 및 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실험예 및 실시예에 한정되는 것은 아니다.

또한, 본 명세서에서 특별한 정의가 없으면, 본 명세서에 사용된 모든 과학적 및 기술적인 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 당업자에 의하여 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가질 수 있다.

실시예 1. 삼투압 탈수 추출 및 분자 압축 탈수 추출을 이용한 오크라 추출물 수득

1.1 오크라의 준비

삼투압 탈수 추출 방법, 분자 압축 탈수 추출 방법, 또는 이들의 조합을 이용한 오크라 추출물을 수득하기 위하여 오크라를 준비하였다.

구체적으로, 오크라 원물의 크기는 약 1.0 내지 200.0 mm 사이즈를 이용하였으며, 바람직하게는 약 1.0 내지 5.0 mm 크기의 오크라를 사용하였다. 상기 오크라의 세포막의 손상이 일어나지 않도록 주의하면서, 고분자 물질이 오크라의 표면적에 최대한 이동할 수 있도록 용이한 방향으로 약 2 mm 이내 사이즈로 절단하였다.

도 1은 일 양상의 오크라를 추출하는 방법의 단계를 나타내는 모식도이다.

도 1에 나타낸 단계를 이용하여 염을 이용한 삼투압 탈수 추출 방법, 고분자 물질을 이용한 분자 압축 탈수 추출 방법, 및 이를 조합한 추출 방법을 비교하였다.

1.2 염을 이용한 삼투압 탈수 추출 방법

염을 이용한 삼투압 탈수 추출 방법에서는, 염으로서 염화나트륨을 사용하였다.

	삼투압 탈수 추출 방법 (염 : 원물 W/W, %)
처리공정	제조예 1	제조예 2	제조예 3	제조예 4	제조예 5	제조예 6
중량비	10 : 100	30 : 100	50 : 100	100 : 100	150 : 100	200 : 100

표 1은 삼투압 탈수 추출 방법에 의한 각 제조예에서 사용한 염 및 오크라 절편의 중량비를 나타낸 것이다.

상기 표 1에 나타낸 것과 같은 중량비로 염 및 오크라 절편을 혼합하여 약 48 시간 동안 상온에서 방치함으로써, 제조예 1 내지 6을 수득하였다.

1.3 고분자 물질을 이용한 분자 압축 탈수 추출 방법

분자 압축 탈수 추출에서는, 분자량이 약 3,000 내지 ４,500인 수용성 고체 고분자 물질을 이용하였으며, 구체적으로 아라비아검 (arabic gum), PEG, 또는 말토덱스트린을 1차적으로 선정하였다. 이 중에서, 삼투압 탈수 추출 방법과의 조합에 가장 적합한 말토덱스트린을 사용하였다.

	분자 압축 탈수 추출 방법 (말토덱스트린 : 원물 W/W, %)
처리공정	제조예 7	제조예 8	제조예 9	제조예 10	제조예 11	제조예 12
중량비	50 : 100	100 : 100	200 : 100	300 : 100	400 : 100	500 : 100

표 2는 분자 압축 탈수 추출 방법에 의한 각 제조예에서 사용한 말토덱스트린 및 오크라 절편의 중량비를 나타낸 것이다.

표 2에 나타낸 것과 같은 중량비로 말토덱스트린 및 오크라 절편을 혼합하여 약 48 시간 동안 상온에서 방치함으로써, 제조예 7 내지 12를 수득하였다.

1.4 삼투압 탈수 추출 및 분자 압축 탈수 추출을 이용한 추출 방법

삼투압 탈수 추출 방법과 분자 압축 탈수 추출 방법을 조합하여 추출하는 방법은 삼투압 탈수 추출 단계를 선행하고, 이후 분자 압축 탈수 추출 단계를 실시하는 방식과, 분자 압축 탈수 추출 단계를 선행하고, 이후 삼투압 탈수 추출 단계를 실시하는 방식으로 구분하였다. 각 실험 조건은 최대 약 48 시간까지 약 6 시간 간격으로 비교 분석하였고, 상온 조건에서 추출하였다.

		처리시간 (hr)
추출공정		제조예 13	제조예 14	제조예 15	제조예 16	제조예 17	제조예 18	제조예 19
삼투압 선처리 추출 (30 : 100 W/W, %)	삼투압	6	12	18	24	30	36	42
	분자압축	42	36	30	24	18	12	6

		처리시간 (hr)
추출공정		제조예 20	제조예 21	제조예 22	제조예 23	제조예 24	제조예 25	제조예 26
분자압축 선처리 추출 (100 : 100 W/W, %)	분자압축	6	12	18	24	30	36	42
	삼투압	42	36	30	24	18	12	6

표 3은 삼투압 탈수 추출 단계를 선행하고, 이후 분자 압축 탈수 추출 단계를 실시하는 복합 공정에서의 처리 시간별 조건을 나타낸 표이다. 표 3의 중량비는 염 대 원물의 중량비를 나타낸다.

표 4는 분자 압축 탈수 추출 단계를 선행하고, 이후 삼투압 탈수 추출 단계를 실시하는 복합 공정에서의 처리 시간별 조건을 나타낸 표이다. 표 4의 중량비는 말토덱스트린 대 원물의 중량비를 나타낸다.

상기 표 3 및 4에 나타낸 것과 같이, 복합 공정에서의 처리 시간을 다르게 하여 삼투압 탈수 추출 단계를 선행하는 제조예 13 내지 19 및 분자 압축 탈수 추출 단계를 선행하는 제조예 20 내지 26을 제조하였다.

실시예 2. 각 추출 방법에 따른 오크라의 추출 수율 평가

2.1 삼투압 탈수 추출 방법의 추출 수율 및 용해도

표 5는 중량비에 따른 삼투압 탈수 추출의 수율을 나타낸 표이다. 하기 표 5에서, 추출 수율은 용해된 염의 무게를 포함한 수율을, 원료 제외 추출 수율은 용해된 염의 무게를 제외한 수율을, 혹은 불용해되어 수득이 불가능한 경우 원물의 무게 차이를 비교한 수율을 나타낸 것이고, 용해도에서 -는 수득불가, O는 완전 용해, △는 불완전 용해, X 는 불용해를 의미한다.

	중량비 (염 : 원물 W/W, %)에 따른 수율 (%)
처리공정	제조예 1	제조예 2	제조예 3	제조예 4	제조예 5	제조예 6
삼투압	10 : 100	30 : 100	50 : 100	100 : 100	150 : 100	200 : 100
추출 수율	36.34	51.38	54.81	22.91	-	-
원료 제외 추출 수율	29.97	38.89	42.21	31.73	32.52	30.8
용해도	O	O	△	X	X	X

그 결과, 표 5에 나타낸 것과 같이, 염과 원물의 혼합 중량비가 50 : 100 (W/W, %)인 경우가 최적의 추출 수율을 가졌으나, 염이 불완전 용해되는 문제가 있었다. 또한, 상기 중량비가 100 : 100을 넘어가는 경우 염이 완전히 용해되지 않는 결과를 나타내었다. 추출물에서 용해된 염의 무게를 제외한 추출 수율 역시 염과 원물의 혼합 중량비가 50 : 100인 경우 가장 높은 수율을 나타내었으나, 상술한 바와 같이 상기 중량비가 50 : 100인 경우부터 불완전 용해가 일어나 상기 중량비가 100 : 100인 경우부터는 대부분의 염이 용해되지 못하고 남아있는 결과를 나타내었다. 염이 용해되지 못하고 남아있는 경우, 남아있는 염으로 인해 추출물을 수거하지 못하는 문제점이 있었다. 따라서, 염과 원물의 혼합 중량비에 있어서, 제조예 2의 30 : 100 (W/W, %) 비율이 최적의 비율로 판단되었다.

2.2 분자 압축 탈수 추출 방법의 추출 수율 및 용해도

표 6은 중량비에 따른 분자 압축 탈수 추출의 수율을 나타낸 표이다. 하기 표 6에서, 추출 수율은 용해된 덱스트린의 무게를 포함한 수율을, 원료 제외 추출 수율은 용해된 덱스트린의 무게를 제외한 수율을, 혹은 불용해되어 수득이 불가능한 경우, 원물의 무게 차이를 비교한 수율을 나타낸 것이고, 용해도에서 -는 수득불가, O는 완전 용해, △는 불완전 용해, X 는 불용해를 의미한다.

	중량비 (말토덱스트린 : 원물 W/W, %)에 따른 수율 (%)
처리공정	제조예 7	제조예 8	제조예 9	제조예 10	제조예 11	제조예 12
분자압축	50 : 100	100 : 100	200 : 100	300 : 100	400 : 100	500 : 100
추출 수율	61.86	75.66	56.81	-	-	-
원료 제외 추출 수율	42.79	51.32	60.44	53.48	48.25	48.99
용해도	O	O	△	X	X	X

그 결과, 표 6에 나타낸 것과 같이, 덱스트린을 사용한 분자 압축 탈수 추출의 경우 덱스트린과 원물의 혼합 중량비가 100 : 100 (W/W, %)인 경우까지, 덱스트린이 완전 용해되어 추출물을 효과적으로 수득할 수 있었으나, 상기 중량비가 200 : 100을 초과하는 경우, 덱스트린이 용해되지 못하고 뭉치는 현상이 나타났으며, 상기 중량비가 300 : 100인 경우부터는 추출물을 수거하기 어려운 문제점이 있었다.

추출 수율을 비교하였을 때 덱스트린과 원물의 혼합 중량비가 100 : 100 (W/W, %)인 경우, 최대 75.66%까지 추출됨을 확인하였으나, 상기 중량비가 200 : 100인 경우, 덱스트린의 뭉침 현상에 의해 용해되지 못한 덱스트린이 남아 추출 수율이 감소하였고, 상기 중량비가 300 : 100인 경우부터는 추출물의 수득이 불가능한 문제점이 있었다.

원료 제외 추출 수율은 상기 중량비가 100 : 100인 경우 51.32%, 상기 중량비가 200 : 100인 경우 60.44%인 것으로 확인되었다. 따라서, 상기 중량비가 200 : 100인 경우, 추출 수율이 가장 높을 수는 있으나, 덱스트린의 뭉침 현상에 의해 용해되지 못한 덱스트린을 제거하기 어렵고, 점성이 높은 진액 형태가 되어 추출물 회수의 어려움이 발생할 수 있음을 알 수 있었다. 따라서, 덱스트린을 사용한 오크라의 분자 압축 탈수 추출 공정에 있어서, 덱스트린과 원물의 혼합 중량비는 제조예 8의 100 : 100 (W/W, %) 비율이 최적의 비율임을 알 수 있었다.

2.3 삼투압 탈수 추출 및 분자 압축 탈수 추출 조합 추출 방법의 추출 수율

삼투압 탈수 추출 및 분자 압축 탈수 추출 방법을 조합하여 추출하였을 경우의 수율 및 용해도를 분석하기 위하여, 삼투압 탈수 추출을 선처리한 경우, 또는 분자 압축 탈수 추출을 선처리한 경우의 처리 시간별 추출 수율을 분석하였다.

표 7은 삼투압 탈수 추출 선처리 복합 공정의 처리 시간별 추출 수율을 나타낸 것이다. 추출 수율은 용해된 염 및 고분자 물질의 무게를 포함한 수율을, 원료 제외 추출 수율은 용해된 염 및 고분자 물질의 무게를 제외한 수율을, 혹은 불용해되어 수득이 불가능한 경우 원물의 무게 차이를 비교한 수율을 나타낸 것이다.

오크라
		처리시간 (hr) / 수율 (%)
추출공정		제조예 13	제조예 14	제조예 15	제조예 16	제조예 17	제조예 18	제조예 19
삼투압 선처리	삼투압 (30 : 100 W/W, %)	6	12	18	24	30	36	42
	분자압축 (100 : 100 W/W, %)	42	36	30	24	18	12	6
추출 수율		69.1	70.9	78.2	82.2	86.7	58.6	43.9
원료 제외 추출 수율		53.92	54.17	60.93	65.1	69.6	44.76	41.11

표 8은 분자 압축 탈수 추출 선처리 복합 공정의 처리 시간별 추출 수율을 나타낸 것이다.

오크라
		처리시간 (hr) / 수율 (%)
추출공정		제조예 20	제조예 21	제조예 22	제조예 23	제조예 24	제조예 25	제조예 26
분자압축 선처리	분자압축 (100 : 100 W/W, %)	6	12	18	24	30	36	42
	삼투압 (30 : 100 W/W, %)	42	36	30	24	18	12	6
추출 수율		36.5	55.8	83.7	81.3	77.8	71.3	69.4
원료 제외 추출 수율		40.93	46.32	62.58	60.03	55.83	49.01	50.66

그 결과, 표 7에 나타낸 것과 같이, 삼투압 탈수 추출 공정 선처리의 경우, 삼투압 탈수 추출 약 30 시간 후 분자 압축 탈수 추출 약 18 시간을 처리하는 것이 가장 높은 추출 수율을 보였다. 또한, 표 8에 나타낸 것과 같이, 분자 압축 탈수 추출 선처리의 경우, 분자 압축 탈수 추출 약 18 시간 후 삼투압 탈수 추출 약 30 시간 처리하는 것이 가장 높은 추출 수율을 보였다. 또한, 추출 시 삼투압 탈수 추출 공정의 염이 충분히 녹지 않는 것 보다 분자 압축 탈수 추출 공정의 덱스트린이 충분히 녹지 않았을 때 효율이 더 떨어지는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 동일한 원물과 원료를 처리한 두 복합 공정에서 삼투압 탈수 추출을 선처리 하는 방식이 분자 압축 탈수 추출을 선처리 하는 방식에 비해 상대적으로 높은 추출 수율을 나타내었고, 두 복합 공정 모두 단일 공정으로 진행한 추출 수율보다 높은 수율을 나타냄을 확인할 수 있었다.

이러한 결과는 삼투압 탈수 추출을 거치면서 연화된 세포벽에 고분자 물질인 덱스트린이 효율적으로 달라붙어 사이토리시스 현상이 더욱 효율적으로 일어났기 때문으로 사료되며, 두 단일 공정이 각각 가지고 있는 단점인 탈수가 진행됨에 따라 발생하는 농도 평형을 억제하여, 탈수액에 의해 희석되어 많은 양의 원료를 필요로 하는 기존 공정의 단점을 개선하였음을 의미한다.

다음으로, 상기 실시예 1에 의한 오크라 추출물, 구체적으로 염에 의한 삼투압 탈수 추출물 중 최대 수율 조건에서의 오크라 추출물 (제조예 2), 분자 압축 탈수 추출물 중 최대 수율 조건에서의 오크라 추출물 (제조예 8), 및 삼투압 탈수 추출 및 분자 압축 탈수 추출의 복합 공정에 의한 추출물 중 최대 수율 조건에서의 오크라 추출물 (제조예 17)의 피부 세포에서의 효능을 비교하기 위하여 주름 개선, 탄력 개선, 보습, 및 가려움증 개선 효능 평가를 진행하였다.

실시예 3. 오크라 추출물의 효능 평가

3.1 콜라겐 경화 효소 (Lysyl oxidase) 억제 효능 평가

일 양상의 오크라 추출물의 주름 억제, 탄력 개선, 또는 항노화 효과를 확인하기 위하여, 일 양상의 오크라 추출물의 콜라겐 경화 효소 (Lysyl oxidase) 억제 효능을 평가하였다.

단일 방법으로 추출한 제조예 2 및 8과 삼투압 탈수 추출 및 분자 압축 탈수 추출 방법을 조합하여 추출한 제조예 17의 콜라겐 경화 효소 억제 효과를 비교하기 위해 실험군을 준비하였다. 구체적으로, i) 오크라 추출물을 포함하지 않은 포도당 약 25 mM 배지, ii) 오크라 추출물을 포함하지 않은 포도당 약 50 mM 배지, iii) 제조예 2의 오크라 추출물 약 10 μg/mL 및 포도당 약 50 mM을 포함하는 배지, iv) 제조예 8의 오크라 추출물 약 10 μg/mL 및 포도당 약 50 mM을 포함하는 배지, v) 제조예 17의 오크라 추출물 약 10 μg/mL 및 포도당 약 50 mM을 포함하는 배지, vi) 제조예 2의 오크라 추출물 약 100 μg/mL 및 포도당 약 50 mM을 포함하는 배지, vii) 제조예 8의 오크라 추출물 약 100 μg/mL 및 포도당 약 50 mM을 포함하는 배지, viii) 제조예 17의 오크라 추출물 약 100 μg/mL 및 포도당 약 50 mM을 포함하는 배지, 및 ix) 아미노프로피오나이트릴 (Beta-Aminopropionitrile, BAPN) 및 포도당 약 50 mM을 포함하는 배지를 준비하였다.

Hs68 섬유아세포를 6 well plate에 각 well 당 약 3.5x10⁵의 수만큼 분주한 후, 약 37°C 및 약 5% CO₂ 조건의 배양기에서 약 24 시간 동안 배양하였다. 다음으로, 상기 배양된 섬유아세포의 배지를 상기 여섯 개의 실험군 배지로 교체하고, 약 24 시간 동안 추가로 배양하였다. 약 24 시간 후 각 well에서 배지를 약 1 ml씩 수거한 후, 약 13000 rpm의 속도로 약 4℃에서 약 5 분간 원심분리하여 상층액만 회수하였다. 다음으로, 상층액 약 50 ul와 Lysyl oxidase activity assay kit (ab112139, abcam)의 preparation buffer 약 50 ul을 96 well black well에 넣어 약 37°C에서 약 30 분 동안 반응시켰다. 이후 Victor 3 plate reader를 이용하여 Ex/Em = 540/590 nm에서의 흡광도를 측정하였다. 포도당 약 25 mM 배지만 처리한 경우를 음성 대조군으로 하여 백분율을 산출함으로써, 각 실험군에서 세포의 콜라겐 경화 효소 활성도를 나타내었다.

도 2는 섬유아세포에 일 양상의 오크라 추출물을 처리한 경우, 콜라겐 경화 효소 활성도를 나타낸 그래프이다.

그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 제조예 17의 오크라 추출물 약 100 ug/ml을 처리한 경우가 콜라겐 경화 효소의 억제 효과가 가장 높았다. 이러한 결과는, 삼투압 탈수 추출 및 분자 압축 탈수 추출 방법을 조합하여 추출한 오크라 추출물이 단일 방법에 의한 오크라 추출물 보다 콜라겐 경화 효소 억제 효과가 더욱 우수하여, 콜라겐 생성을 더욱 증가시킬 수 있고, 이로 인해, 더욱 우수한 주름 억제, 탄력 개선, 또는 항노화 효과를 나타낼 수 있음을 의미하는 것이다.

3.2 MMP-1 저해능 평가

일 양상의 오크라 추출물의 주름 억제, 탄력 개선, 또는 항노화 효과를 확인하기 위하여, 일 양상의 오크라 추출물의 콜라겐을 분해하는 효소인 콜라게나아제 (MMP-1)에 대한 저해능을 평가하였다.

단일 방법으로 추출한 제조예 2 및 8과 삼투압 탈수 추출 및 분자 압축 탈수 추출 방법을 조합하여 추출한 제조예 17의 MMP-1 유전자 발현 저해능을 비교하기 위해 실험군을 준비하였다. 구체적으로, i) UV를 조사하지 않은 UV 비조사군, ii) 오크라 추출물을 포함하지 않은 UV 조사군, iii) 에피갈로카테킨 갈레이트 (Epigallocatechin Gallate,EGCG)를 포함하여 배양시킨 UV 조사군, iv) 제조예 2의 오크라 추출물 약 10 μg/mL을 포함하여 배양시킨 UV 조사군, v) 제조예 8의 오크라 추출물 약 10 μg/mL을 포함하여 배양시킨 UV 조사군, vi) 제조예 17의 오크라 추출물 약 10 μg/mL을 포함하여 배양시킨 UV 조사군, vii) 제조예 2의 오크라 추출물 약 100 μg/mL을 포함하여 배양시킨 UV 조사군, viii) 제조예 8의 오크라 추출물 약 100 μg/mL을 포함하여 배양시킨 UV 조사군, 및 ix) 제조예 17의 오크라 추출물 약 100 μg/mL을 포함하여 배양시킨 UV 조사군을 준비하였다.

구체적으로, 상기 실험군들은 섬유아세포주 Hs68을 6 well plate에 각 well 당 약 3x10⁵의 수만큼 분주한 후, 약 37°C 및 약 5% CO₂ 조건의 배양기에서 약 24 시간 동안 배양하였다. 다음으로, 배지를 제거하고 DPBS를 넣어준 후 UVB 비조사군을 제외한 나머지 세포군에 약 20 mJ/cm²의 UVB를 조사하였다. 다음으로, 상기 EGCG 또는 오크라 추출물을 첨가하여 약 24 시간 동안 추가로 배양하였다.

상기 추가 배양 후, 각 실험군에서 섬유아세포를 수득하였다. 상기 세포에서, 트리졸 (RNA iso, DAKARA, 일본)을 이용하여 RNA를 분리한 뒤 nanodrop을 이용하여 260 nm에서 RNA를 정량한 후, 각각 약 2 ㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다 (C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국). 합성된 cDNA에 타겟 단백질인 MMP-1 primer와 시아닌 염료인 사이버그린 (SYBR Green supermix, Applied Biosystems, 미국)을 첨가한 혼합물을 이용하여 real-time PCR 기계에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 실시함으로써 최종적으로 MMP-1 유전자의 발현 수준을 평가하였다. 상기 실시간 중합효소 연쇄반응은, 약 94℃에서 약 5 분 동안 중합 효소 활성화 후, 약 95℃에서 약 30 초 동안 반응, 약 60℃에서 약 30 초 동안 반응, 및 약 72℃에서 약 30 초 동안 반응하는 조건으로 약 40 사이클로 진행되었다. 또한, 상기 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였다.

표 9는 MMP-1 유전자의 발현 수준을 평가하기 위하여 실시간 중합효소 연쇄반응에 사용된 프라이머 서열을 나타낸 것이다.

Primer		서열
MMP-1	F	5'-CGAATTGCCGACAGAGATGA-3' (서열번호 1)
	R	5'-GTCCCTGAACAGCCCAGTACTT-3' (서열번호 2)
COL1A1	F	5'-GAGGGCCAAGACGAAGACATC-3' (서열번호 3)
	R	5'-CAGATCACGTCATCGCACAAC-3' (서열번호 4)
HAS3	F	5'-CTTAAGGGTTGCTTGCTTGC-3' (서열번호 5)
	R	5'-GTTCGTGGGAGATGAAGGAA-3' (서열번호 6)
TSLP	F	5'- GCTATCTGGTGCCCAGGCTAT-3' (서열번호 7)
	R	5'- CGACGCCACAATCCTTGTAAT-3' (서열번호 8)
β-actin	F	5'-GGCCATCTCTTGCTCGAAGT-3' (서열번호 9)
	R	5'-GAGACCTTCAACACCCCAGC-3' (서열번호 10)

도 3은 섬유아세포에 일 양상의 오크라 추출물을 처리한 경우, 콜라게나아제 (MMP-1) 발현 수준을 나타내는 그래프이다.

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, UV 조사군에서 MMP-1 발현량이 급격히 증가한 것에 반해, 제조예 17의 오크라 추출물을 포함하여 배양시킨 처리군에서는 발현량이 현저히 감소하는 모습을 확인할 수 있었다. 이러한 결과는, 삼투압 탈수 추출 및 분자 압축 탈수 추출 방법을 조합하여 추출한 오크라 추출물이 단일 방법에 의한 오크라 추출물 보다 콜라게나아제 (MMP-1) 저해 효과가 더욱 우수하여, 콜라겐 생성을 더욱 증가시킬 수 있고, 이로 인해, 더욱 우수한 주름 억제, 탄력 개선, 또는 항노화 효과를 나타낼 수 있음을 의미하는 것이다.

3.3 주름 억제 효과 - COL1A1 발현 확인

일 양상의 오크라 추출물의 주름 억제, 탄력 개선, 또는 항노화 효과를 확인하기 위하여, 일 양상의 오크라 추출물이 주름 생성 및 노화와 밀접하게 관련된 콜라겐의 생성을 증가시키는지 여부를, COL1A1의 발현 수준을 측정함으로써 확인하였다.

단일 방법으로 추출한 제조예 2 및 8과 삼투압 탈수 추출 및 분자 압축 탈수 추출 방법을 조합하여 추출한 제조예 17의 콜라겐 생성 효과를 비교하기 위해 실험군을 준비하였다. 구체적으로, i) 오크라 추출물을 포함하지 않은 섬유아세포, ii) 에피갈로카테킨 갈레이트 (Epigallocatechin Gallate, EGCG)를 포함하는 섬유아세포 실험군, iii) 제조예 2의 오크라 추출물 약 10 μg/mL을 포함하는 섬유아세포 실험군, iv) 제조예 8의 오크라 추출물 약 10 μg/mL을 포함하는 섬유아세포 실험군, v) 제조예 17의 오크라 추출물 약 10 μg/mL을 포함하는 섬유아세포 실험군, vi) 제조예 2의 오크라 추출물 약 100 μg/mL을 포함하는 섬유아세포 실험군, vii) 제조예 8의 오크라 추출물 약 100 μg/mL을 포함하는 섬유아세포 실험군, 및 ix) 제조예 17의 오크라 추출물 약 100 μg/mL을 포함하는 섬유아세포 실험군을 준비하였다.

구체적으로, 인간 섬유아세포를 6 well 세포 배양 접시에 각 well 당 약 4X10⁵의 수로 접종한 후 약 37°C 및 약 5% CO₂ 조건의 배양기에서 약 24 시간 동안 배양하였다. 이후 인산 완충 식염수 용액 (PBS)으로 세척한 다음, 각 well에 FBS를 넣지 않은 DMEM 배지에 상기 제조예 2, 8, 또는 17의 오크라 추출물을 처리하고 약 24 시간 동안 추가 배양하였다. 다음으로, 각 실험군의 세포에서 트리졸 (RNA iso, DAKARA, 일본)을 이용하여 RNA를 분리한 뒤 nanodrop을 이용하여 260 nm에서 RNA를 정량하였다. 각 실험군별로 추출한 RNA를 약 2 ㎍ 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다 (C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국). 합성된 cDNA에 타겟 단백질인 type 1 collagen, COL1A1, primer와 시아닌 염료인 사이버그린을 첨가한 혼합물을 이용하여 real-time PCR 기계에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 실시함으로써, COL1A1 유전자의 발현 수준을 평가하였다.

프라이머의 서열 및 반응 조건은 상기 실시예 3.2와 같았으며, 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였다.

도 4는 인간 섬유아세포에 일 양상의 오크라 추출물 처리한 경우, type 1 collagen 유전자 발현 수준을 나타내는 그래프이다.

그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 인간 섬유아세포에 제조예 17의 오크라 추출물 처리시 type 1 collagen 유전자 발현이 가장 증가한 것을 확인할 수 있었다. 이러한 결과는, 삼투압 탈수 추출 및 분자 압축 탈수 추출 방법을 조합하여 추출한 오크라 추출물이 단일 방법에 의한 오크라 추출물 보다 콜라겐 생성 효과가 더욱 우수할 수 있고, 이로 인해, 더욱 우수한 주름 억제, 탄력 개선, 또는 항노화 효과를 나타낼 수 있음을 의미하는 것이다.

3.4 보습 효과

일 양상의 오크라 추출물의 보습 효과를 확인하기 위해 인간 표피세포에서 발생하는 히알루론산 합성 효소 (Hyaluronan synthase 3, HAS3)의 발현 수준을 측정하였다.

단일 방법으로 추출한 제조예 2 및 8과 삼투압 탈수 추출 및 분자 압축 탈수 추출 방법을 조합하여 추출한 제조예 17의 히알루론산 합성 효소의 발현 증가 효과를 비교하기 위해 실험군을 준비하였다. 구체적으로, i) 오크라 추출물을 포함하지 않은 인간 표피세포 실험군, ii) 레티놀산 (RA)을 포함하는 인간 표피세포 실험군, iii) 제조예 2의 오크라 추출물 약 10 μg/mL을 포함하는 인간 표피세포 실험군, iv) 제조예 8의 오크라 추출물 약 10 μg/mL을 포함하는 인간 표피세포 실험군, v) 제조예 17의 오크라 추출물 약 10 μg/mL을 포함하는 인간 표피세포 실험군, vi) 제조예 2의 오크라 추출물 약 100 μg/mL을 포함하는 인간 표피세포 실험군, vii) 제조예 8의 오크라 추출물 약 100 μg/mL을 포함하는 인간 표피세포 실험군, 및 ix) 제조예 17의 오크라 추출물 약 100 μg/mL을 포함하는 인간 표피세포 실험군을 준비하였다.

상기 실험군 세포를 6 well plate에 분주하고 약 24 시간 동안 배양하였다. 다음으로, 인산 완충 식염수 용액 (PBS)으로 세척한 후, FBS를 넣지 않은 DMEM 배지에 각 실험군을 첨가하여 약 24 시간 동안 추가 배양하였다. 그 후 각 실험군의 세포에서 트리졸 (RNA iso, DAKARA, 일본)을 이용하여 RNA를 분리한 뒤 nanodrop을 이용하여 260 nm에서 RNA를 정량하였다. 다음으로, 정량된 약 2 ㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다 (C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국). 합성된 cDNA에 HAS3의 primer와 시아닌 염료인 사이버그린을 첨가한 혼합물을 이용하여 real-time PCR 기계에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 실시함으로써, 최종적으로 HAS3의 발현 수준을 평가하였다.

프라이머의 서열 및 반응 조건은 상기 실시예 3.2와 같았으며, 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였다.

도 5는 인간 표피세포에 일 양상의 오크라 추출물을 처리한 경우, HAS3 유전자 발현 수준을 나타낸 그래프이다.

그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이, 무처리군 또는 제조예 2 또는 8의 오크라 추출물 처리 실험군에 비해 제조예 17의 오크라 추출물 처리 실험군에서 HAS3 발현 증가 효과가 현저한 것을 확인하였다. 이러한 결과는, 삼투압 탈수 추출 및 분자 압축 탈수 추출 방법을 조합하여 추출한 오크라 추출물이 단일 방법에 의한 오크라 추출물 보다 피부 보습 효과가 더욱 우수함을 의미하는 것이다.

3.5 가려움증 억제 효과

일 양상의 오크라 추출물의 가려움증 억제 효과를 확인하기 위해 인간 표피세포에서 발생하는 가려움증 유발 유전자인 Thymic stromal lymphopoietin (TSLP) 유전자의 발현량을 측정하였다.

단일 방법으로 추출한 제조예 2 및 8과 삼투압 탈수 추출 및 분자 압축 탈수 추출 방법을 조합하여 추출한 제조예 17의 가려움증 억제 효과를 비교하기 위해 실험군을 준비하였다. 구체적으로, i) 가려움증을 유발하지 않고, 오크라 추출물을 포함하지 않은 인간 표피세포 실험군, ii) 가려움증을 유발하고, 오크라 추출물을 포함하지 않은 인간 표피세포 실험군, iii) 가려움증을 유발하고, 제조예 2의 오크라 추출물 약 10 μg/mL을 포함하는 인간 표피세포 실험군 iv) 가려움증을 유발하고, 제조예 8의 오크라 추출물 약 10 μg/mL을 포함하는 인간 표피세포 실험군, v) 가려움증을 유발하고, 제조예 17의 오크라 추출물 약 10 μg/mL을 포함하는 인간 표피세포 실험군, vi) 가려움증을 유발하고, 제조예 2의 오크라 추출물 약 100 μg/mL을 포함하는 인간 표피세포 실험군, vii) 가려움증을 유발하고, 제조예 8의 오크라 추출물 약 100 μg/mL을 포함하는 인간 표피세포 실험군, viii) 가려움증을 유발하고, 제조예 17의 오크라 추출물 약 100 μg/mL을 포함하는 인간 표피세포 실험군, 및 ix) 가려움증을 유발하고, 덱사메타손 (DEX)을 포함하는 인간 표피세포 실험군을 준비하였다.

상기 실험군을 약 24 시간 동안 배양하였다. 다음으로, 인산 완충 식염수 용액 (PBS)으로 세척하고, 각 well에 FBS를 넣지 않은 DMEM 배지에 샘플을 처리한 후, Poly I:C 약 10 ug/ml와 Recombinant human IL-4 약 10 ng/ml을 처리하여, 가려움증을 유도하면서, 약 4 시간 동안 추가 배양하였다. 그 후 각 실험군의 세포에서 트리졸 (RNA iso, DAKARA, 일본)을 이용하여 RNA를 분리한 뒤 nanodrop을 이용하여 260 nm에서 RNA를 정량하였다. 상기 각 실험군의 정량된 약 2 ㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다 (C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국). 합성된 cDNA에 TSLP의 primer와 시아닌 염료인 사이버그린을 첨가한 혼합물을 이용하여 real-time PCR 기계에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 실시함으로써, 최종적으로 TSLP의 발현 수준을 평가하였다.

프라이머 서열 및 반응 조건은 상기 실시예 3.2와 같았으며, 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였다.

도 6은 인간 표피세포에 일 양상의 오크라 추출물을 처리한 경우, 세포의 가려움증 수준을 나타낸 그래프이다.

그 결과, 도 6에 나타낸 바와 같이 무처리군 또는 제조예 2 또는 8의 오크라 추출물 처리 실험군에 비해 제조예 17의 오크라 추출물 처리 실험군에서 피부 가려움증 억제 효과가 현저히 증가한 것을 확인하였다. 이러한 결과는, 삼투압 탈수 추출 및 분자 압축 탈수 추출 방법을 조합하여 추출한 오크라 추출물이 단일 방법에 의한 오크라 추출물 보다 피부 가려움증 억제 효과가 더욱 우수함을 의미하는 것이다.

<110> Intercare <120> Method for extracting okra using process of osmotic pressure dehydration by salt and molecular compression dehydration, and cosmetic composition for anti-aging prepared thereby <130> PN136081KR <160> 10 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-1 Primer_F <400> 1 cgaattgccg acagagatga 20 <210> 2 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-1 Primer_R <400> 2 gtccctgaac agcccagtac tt 22 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> COL1A1 Primer_F <400> 3 gagggccaag acgaagacat c 21 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> COL1A1 Primer_R <400> 4 cagatcacgt catcgcacaa c 21 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HAS3 Primer_F <400> 5 cttaagggtt gcttgcttgc 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HAS3 Primer_R <400> 6 gttcgtggga gatgaaggaa 20 <210> 7 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TSLP Primer_F <400> 7 gctatctggt gcccaggcta t 21 <210> 8 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TSLP Primer_R <400> 8 cgacgccaca atccttgtaa t 21 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> B-actin Primer_F <400> 9 ggccatctct tgctcgaagt 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> B-actin Primer_R <400> 10 gagaccttca acaccccagc 20

Claims (10)

1. 오크라 및 염을 혼합하여 오크라를 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계로서, 상기 오크라 및 염의 혼합 시간은 18 내지 30 시간인 단계; 및
   오크라 및 고분자 물질을 혼합하여 오크라를 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계로서, 상기 오크라 및 고분자 물질의 혼합 시간은 18 내지 30 시간인 단계;를 포함하는 오크라를 추출하는 방법.
2. 청구항 1에 있어서, 상기 방법은 상기 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계 이후 상기 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계; 또는 상기 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계 이후 상기 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계 순서로 진행되는 것인, 오크라를 추출하는 방법.
3. 청구항 1에 있어서, 상기 고분자 물질은 PEG (polyethylene glycol), 아라비아검 (arabic gum), 덱스트린, 및 아라비노갈락탄으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것인 오크라를 추출하는 방법.
4. 청구항 1에 있어서, 상기 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서, 상기 염 및 상기 오크라는 5 내지 100 : 100의 중량비로 혼합되는 것인 오크라를 추출하는 방법.
5. 청구항 1에 있어서, 상기 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서, 상기 고분자 물질 및 상기 오크라는 10 내지 300 : 100의 중량비로 혼합되는 것인 오크라를 추출하는 방법.
6. 삭제
7. 삭제
8. 청구항 1에 있어서, 상기 방법은 상기 삼투압 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계 또는 상기 분자 압축 탈수 추출 방식을 이용하여 추출하는 단계에서 얻어진 추출물을 여과 또는 원심 분리하는 단계를 추가로 포함하는 것인, 오크라를 추출하는 방법.
9. 청구항 1 내지 5 및 8 중 어느 한 항의 방법으로 제조된 오크라 추출물을 포함하는 화장료 조성물.
10. 청구항 9에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 주름 개선 효과, 피부 탄력 개선 효과, 피부 가려움증 개선 효과, 또는 피부 보습 개선 효과를 나타내는 것인 화장료 조성물.