KR102544087B1 - 수율이 개선된 펩타이드 제조방법과 이를 이용한 화장료 조성물 - Google Patents

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Abstract

개선된 정제 공정을 통해 공정이 단순화되고 효율적으로 합성된 펩타이드와 이를 기능성 화장품 제조를 위한 화장료 조성물로서 활용할 수 있는 펩타이드 복합체가 개시된다. 본 발명은 글리신(Glycine, Gly)-글루타민(Glutamine, Gln)-발린(Valine, Val)-세린(Serine, Ser)의 아미노산 서열로 이루어지는 펩타이드와 해당 펩타이드의 개선된 정제법을 통한 효율적 합성 공정을 제공한다.

Description

수율이 개선된 펩타이드 제조방법과 이를 이용한 화장료 조성물{Improved peptide preparation method with improved yield and cosmetic composition using the same}
본 발명은 수율이 개선된 펩타이드 제조방법과 이를 이용한 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 합성 후 정제 방법을 개선하여 수율이 향상된 펩타이드 제조법과 이를 이용한 화장료 조성물에 관한 것이다.
피부는 인체에서 가장 큰 조직으로 햇빛이나 물리, 화학적 자극으로부터 신체 내부를 보호해 주는 기능을 하며, 이는 인간의 생명유지를 위해 절대적으로 필요하며 끊임없이 재생되어 항상성을 유지시킨다. 피부는 바깥쪽으로부터 표피, 진피, 피하지방 순서대로 구성되어 있으며, 가장 얇은 조직인 표피는 피부의 보습과 보호를 담당하는 중요한 기능을 담당하고 있고, 수분 손실, 손상과 세균 침입 등을 방지하는 역할을 맡고 있다. 피부는 신체를 전부 감싸고 있는 조직으로 다양한 기능을 가지고 있다. 신체 내부와 외부 사이에서 장벽 기능을 가지고 있으므로, 랑게르한스섬에 의한 면역 체계를 갖추고 있고 표피에 의한 수분 조절기능을 가지고 있다. 또한, 적절한 햇빛으로 비타민 D를 합성하고 지질의 저장고와 땀샘으로의 배설 기능도 수행한다. 건강한 피부에서의 정상적인 분화과정에 의해 생성된 각질층은 피부의 보습을 유지하고 외부환경의 자극으로부터 보호하는 기능을 가지고 있다. 이러한 기능을 피부 장벽 기능이라 하며 표피의 가장 중요한 역할이라고 할 수 있다.
화장료와 관련하여 가장 큰 관심 분야는 노화로, 구체적으로는 노화와 관련된 색소침착, 탄력감소, 피부건조화, 탈모, 모발의 윤기 부족 등이 있다. 피부는 노화를 통해 다양한 변화를 맞게 된다. 먼저 피부의 구성 성분인 표피, 진피 및 피하조직의 두께가 얇아지고, 피부에 탄력을 주는 세포외 기질(Extracellular matrix; ECM) 성분이 변화하게 되는데, 그 중 세포외 기질의 70 내지 80%를 차지하는 콜라겐은 나이가 들면서 그 생성이 급격하게 저하되어 노화와 밀접한 관계를 가지게 되고, 피부결합조직을 이루고 있는 콜라겐(collagen), 엘라스틴(elastin), 프로티오글리칸(proteoglycans), 글루코스아미노글리칸(glucosaminoglycan), 라미닌(laminin), 파이브로넥틴(fibronectin) 등은 산화되어 그 기능을 잃어버림으로써 피부가 탄력을 잃고 노인성 피부로 변화되어 간다.
세포외 기질의 결합조직섬유에는 아교섬유(교원섬유, collagen fiber), 세망섬유(reticular fiber), 탄력섬유(탄성섬유, elastic fiber)가 있으며, 이 중 피부결합조직의 70% 정도를 차지하고 있는 콜라겐은 피부의 섬유아세포(fibroblast)에서 대부분 형성된다. 나이가 들면서 피부결합조직 내의 콜라겐 함량이 줄어드는데 이는 콜라겐 합성의 저하 및 분해의 촉진에 의한 것이다. 따라서 콜라겐 생합성의 저하 및 콜라겐 분해 촉진은 피부노화 형성의 가장 큰 원인이라 할 수 있다.
콜라겐 생합성 과정은 전사 수준(Transcription level)과 해독 후 수준(Post-translation level)에 관여하는 많은 인자(Factor)들에 의해 조절을 받아 변화를 일으키며, 콜라겐 분해는 자외선 등에 의해 콜라겐을 분해하는 콜라게나아제(Collagenase)와 같은 기질금속단백질 분해효소들(Matrix metalloproteases; MMP)의 발현의 촉진으로 콜라겐 분해가 촉진되어 콜라겐 함량이 줄어든다. 아울러 외부 환경에 의해 콜라겐의 변형이 가속화되면서 피부 노화가 심화된다. 결과적으로 피부노화 현상은 세포의 비균질화, 엘라스틴의 소실, 콜라겐의 파괴, 콜라겐 합성의 감소 및 지연 등에 의해 나타난다. 따라서 피부노화 현상은 피부 표피에서도 일어나지만 이보다는 진피에서 일어나는 현상이라고 볼 수 있다.
이러한 피부노화에 대한 문제점을 해결하기 위한 다양한 화장료 조성물이 연구되고 있고, 그 중 펩타이드는 아미노산의 중합을 통해 생성되는 생체 분자이며 인체에 무해하고 특히 생체 내에서 다양한 생리활동을 조절하는 물질로 알려져 있다. 특히 펩타이드는 아미노산의 거대 조합체인 단백질에 비해 열과 pH 등에 대단히 안정하고 쉽게 활성을 잃지 않는 다는 점에서 의약, 약학 등에 널리 활용되고 있는 약물이며 화장품에서도 피부 주름개선, 주름 개선 등의 용도로 활용되고 있다. 그런데 펩타이드를 이용한 다양한 주름 개선제를 개발하기 위한 다양한 시도가 있었지만, 그 효과는 그리 크지 않았으며, 효과를 보다 극대화하기 위한 비타민 C-펩타이드 복합체, 하이드로 퀴논-펩타이드 복합체 등도 제조에 있어 어려움이 있으며, 고가이기 때문에 이용이 제한적이어서 시장에서의 적용은 그리 많지 않았다. 특히 펩타이드는 물에 용해도가 좋은 물질이며 기름에는 잘 용해되지 않기 때문에 피부 층을 통과하여 피부 내에 침투하여 생리활성 기능을 나타내기 어려운 물성을 가지고 있다.
펩타이드 합성을 원활히 하기 위해서는 보호기(Protecting group)가 필요한데 현재까지 다양한 특성을 가진 보호기가 개발되어 활용되고 있다. 대표적으로 많이 활용되고 있는 보호기는 Fmoc/trt-아미노산 유도체가 개발되어 몇몇 펩티드 합성에 사용되어서는 우수한 효과가 있는 것으로 보고되고 있다.
그러나, 플루오레닐메톡시카르보닐/트리틸(Fmoc/trt)-아미노산 유도체가 고체상 펩티드 합성에 우수한 효과를 나타냄에도 불구하고, 일부 플루오레닐메톡시카르보닐(Fmoc)이 가지는 소수성(hydrophobicity)에 따른 낮은 용해도에 의해 난구조 펩티드 합성에서 낮은 축합 수율을 나타내었다. 이에 반하여, 2-(4-니트로페닐)설포닐에톡시카르보닐(Nsc)은 니트로기와 설포닐기의 구조적 특성에 기인하여 아미노산의 용해도 증가와 펩티드 사슬 사이의 소수성 상호 작용(hydrophobic interaction)을 억제하는 역할을 한다. 또한 자동화 시스템 하에서 플루오레닐메톡시카르보닐(Fmoc)에 비해 2-(4-니트로페닐)설포닐에톡시카르보닐(Nsc)의 안정성이 탁월하여 긴 사슬의 펩티드 합성반응에 매우 유리한 이점을 가지고 있다.
앞서 언급한 것과 같이 펩타이드는 화장품의 기능성 원료로서 높은 활용도를 가지는 화합물이며 현재 펩타이드에 대한 화장품 업계에서의 니즈는 큰 폭으로 증가하고 있다. 높은 안정성과 안전성, 유효성 등을 가지는 펩타이드의 화장품 원료화를 가로막는 가장 큰 장애물은 높은 가격이며 이는 다른 화합물에 비해 고가의 원료인 아미노산과 아미노산 보호기를 사용하며 합성 시 아미노산 잔기가 결합될 때 마나 지속적인 손실이 발생하여 긴 아미노산 서열의 펩타이드의 경우 수율이 크게 낮아져 전체적인 생산 단가를 높이는 원인이 된다. 특히 합성 후 정제 공정에서 펩타이드는 가장 높은 비용이 발생하며 그 이유는 정제 시 사용하는 레진의 원료비와 컬럼의 유지 보수비가 굉장히 고가이며 또한 많은 양의 펩타이드가 정제 공정 중 손실이 일어나기 때문이다. 따라서 화장품 산업에서 펩타이드의 보급을 위해 펩타이드 생산 공정에 대한 개선이 요구되고 있다.
[특허문헌]
한국 등록특허 제10-2450644호 (2022-09-29)
본 발명은 펩타이드 정제 공정을 개선하여 생산 수율을 개선하고 공정 단순화를 통한 비용 감소를 도모할 수 있는 신규한 펩타이드 제조방법을 제공하고 이를 통해 제조된 펩타이드를 이용한 화장료 조성물을 제공하고자 한다.
상기 문제를 해결하기 위하여 본 발명은 글리신(Glycine, Gly)-글루타민(Glutamine, Gln)-발린(Valine, Val)-세린(Serine, Ser)의 아미노산 서열로 이루어지는 펩타이드의 제조방법에 있어서, 2-(4-니트로페닐)설포닐에톡시카르보닐(Nsc) 또는 플루오레닐메톡시카르보닐 (Fmoc)가 보호기로 부착된 아미노산을 이용하여 펩타이드 크루드를 합성하는 단계; 및 용매에 대한 용해도 차이를 이용한 재결정 방식으로 상기 펩타이드 크루드로부터 상기 서열을 갖는 펩타이드를 정제하는 단계;를 포함하는 펩타이드 제조방법을 제공한다.
또한 상기 상기 용매는 메탄올 또는 정제수를 포함하는 것을 특징으로 하는 펩타이드 제조방법을 제공한다.
또한 상기 정제하는 단계는 상기 용매를 상기 펩타이드 크루드에 가하여 모두 녹인 후 일정한 속도로 에테르(ether)를 적가하여 결정화하는 단계; 상기 결정화된 용액을 상온에서 50 내지 200 rpm으로 10 내지 18 시간 교반하는 단계; 및 상기 용액을 여과하고 상기 펩타이드가 포함된 액체를 건조하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 펩타이드 제조방법을 제공한다.
상기 또 다른 과제를 해결하기 위하여 본 발명은 상기 펩타이드 제조방법으로 제조된 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 펩타이드 제조방법은 기존의 컬럼을 이용한 정제 방법 대비 공정이 단순하고, 수율이 향상되며, 컬럼을 사용하지 않으므로 경제성이 향상된다.
또한 본 발명에 따른 펩타이드 제조방법으로 제조된 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 다양한 온도 조건에서도 펩타이드의 함량을 유지시킬 수 있으므로 안정성이 향상된다.
도 1은 본 발명의 실시예 1에서 전체적인 펩타이드 합성 과정을 나타낸 공정도이다.
도 2는 본 발명의 실시예 1 및 2에서 Prep-LC 정제를 통해 확보된 펩타이드의 HPLC(High Pressure Liquid Chromatography) 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 실시예 1 및 2에서 재결정 정제를 통해 확보된 펩타이드의 HPLC(High Pressure Liquid Chromatography) 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 실시예 1 및 2에서 Prep-LC 정제를 통해 확보된 펩타이드의 MS(Mass spectrometry) 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 실시예 1 및 2에서 재결정 정제를 통해 확보된 펩타이드의 MS(Mass spectrometry) 분석 결과를 나타낸 그래프이다
도 6은 본 발명의 실시예 5에서 2종의 펩타이드의 피부세포 독성 실험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 7은 본 발명의 실시예 6에서 피부 자극 첩포 실험 과정 중 패치 사용에 대한 사진이다.
도 8은 본 발명의 제조예에서 재결정 펩타이드의 4주간의 제형 내 안정성을 확인한 그래프이다.
이하 바람직한 실시예를 통하여 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 이에 앞서, 본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여, 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다. 따라서, 본 명세서에 기재된 실시예의 구성은 본 발명의 가장 바람직한 일실시예에 불과할 뿐이고 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형 예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다. 또한, 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한, 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있음을 의미한다.
본 발명은 글리신(Glycine, Gly)-글루타민(Glutamine, Gln)-발린(Valine, Val)-세린(Serine, Ser)의 아미노산 서열로 이루어지는 펩타이드의 제조방법에 있어서, 2-(4-니트로페닐)설포닐에톡시카르보닐(Nsc) 또는 플루오레닐메톡시카르보닐 (Fmoc)가 보호기로 부착된 상기 아미노산을 이용하여 펩타이드 크루드를 합성하는 단계; 및 용매에 대한 용해도 차이를 이용한 재결정 방식으로 상기 펩타이드 크루드로부터 상기 서열을 갖는 펩타이드를 정제하는 단계;를 포함하는 펩타이드 제조방법을 개시한다.
본 발명에서 상기 보호기는 상술한 바와 같이 펩타이드의 합성을 원할히 하기 위해서 사용되고, 2-(4-니트로페닐)설포닐에톡시카르보닐(Nsc) 또는 플루오레닐메톡시카르보닐(Fmoc)일 수 있고, 소수성에 따른 용해도 및 안정성을 고려할 때 2-(4-니트로페닐)설포닐에톡시카르보닐(Nsc)인 것이 바람직하다.
본 발명에서 상기 아미노산은 상기 글리신(Gly), 글루타민(Glu), 발린(Val) 및 세린(Ser)으로 이루어지고 각각 상기 보호기가 N 말단에 결합되어 상기 펩타이드 크루드를 합성하는 단계에서 반응물로 사용된다. 상기 펩타이드 크루드의 합성은 당 업계에 공지된 레진, 시약 및 합성 방법을 적절히 선택하여 수행될 수 있다.
본 발명에서 상기 용매는 상기 펩타이드가 용해될 수 있는 용매이면 되고, 특정 용매로 한정되는 것은 아니지만, 바람직하게는 메탄올 또는 정제수를 포함할 수 있고, 가장 바람직하게는 메탄올일 수 있다.
본 발명에서 상기 펩타이드를 정제하는 단계는 상기 용매에 의한 용해도 차이를 이용한 재결정 방식으로 상기 펩타이드 크루드로부터 상기 펩타이드를 정제할 수 있다. 여기서 재결정에 의한 정제 방식은 기존의 HPLC column을 이용한 정제 방식과 유사한 펩타이드의 순도를 보이고, 기존의 HPLC column을 이용한 방식 대비 공정이 단순하고, 컬럼(column)이 사용되지 않으므로 경제성을 향상시킬 수 있다.
또한 상기 펩타이드를 정제하는 단계는 상기 용매를 상기 펩타이드 크루드에 가하여 모두 녹인 후 일정한 속도로 에테르(ether)를 적가하여 결정화하는 단계, 상기 결정화된 용액을 상온에서 50 내지 200 rpm으로 10 내지 18 시간 교반하는 단계 및 상기 용액을 여과하고 상기 펩타이드가 포함된 액체를 건조하는 단계를 포함할 수 있다.
상기 교반 단계에서 바람직하게는 상기 결정화된 용액을 상온에서 80 내지 120 rpm으로 10 내지 15시간 교반할 수 있고, 더욱 바람직하게는 상기 결정화된 용액을 상온에서 90 내지 110 rpm으로 11 내지 13시간 교반할 수 있다.
또한 본 발명은 상기 펩타이드 제조방법으로 제조된 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 개시한다.
상기 펩타이드는 전체 화장료 조성물 대비 0.001 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 5 중량%, 더욱 바람직하게는 0.05 내지 1 중량% 함량으로 함유될 수 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 젤 타입, 스킨 타입, 크림 타입, 연고 타입 등으로 적용될 수 있지만, 이들만으로 한정되는 것은 아니다. 상기의 조성물은 그것의 타입에 따라 적절한 통상의 연화제, 유화제, 증점제 또는 당업계에 공지되어 있는 기타 물질들을 첨가하여, 공지의 방법에 의해 적절하게 제조될 수 있다.
상기 젤 타입 조성물은 트리메틸올프로판, 폴리에틸렌 글리콜 또는 글리세린 등의 연화제, 프로필렌 글리콜, 에탄올, 이소세틱알콜 등의 용매, 정제주 등을 첨가하여 제조할 수 있다.
상기 스킨 타입 조성물은 스테아릴 알콜, 미리스틸 알콜, 베헤닐 알콜, 아라키딜 알콜, 이소스테아릴 알콜, 이소세틸 알콜 등의 지방 알콜, 부틸렌 글라이콜, 글리세린, 알란토인, 메틸 파라벤, 이디티에이-2-소디움, 잔탄검, 디메티콘, 폴리 에틸렌 글라이콜-60 하이드로제네이트 카스톨 오일, 폴리 소르베이트 60 및 정제수 등을 첨가하여 제조할 수 있다.
상기 크림 타입 조성물은 스테아릴 알콜, 미리스틸 알콜, 베헤닐 알콜, 아라키딜 알콜, 이소스테아릴 알콜, 이소세틸 알콜 등의 지방 알콜, 레시틴, 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 소프파티질세린, 소프파티딜이노시톨 등의 리피드, 이들의 유도체, 글리세릴 스테아레이트, 소르비탄 팔미테이트, 소리비탄 스테아레이트 등의 유화제, 아보카도 오일, 살구 오일, 바바수 오일, 유리지치 오일, 동백 오일 등의 천연 지방 또는 오일, 프로필렌글리콜 등의 용매 및 정제수 등을 첨가하여 제조할 수 있다.
상기 연고 타입 조성물은 연화제, 유화제 및 마이크로크리스탈린납, 파라핀, 세레신, 밀납, 경납, 바세린 등의 왁스를 첨가하여 제조할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 유효성분 이외에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 피부 주름개선 성분을 1종 이상 추가로 함유할 수 있다. 피부주름개선 성분으로는 비타민 C, 레티노산, TGF, 동물 태반 유래의 단백질, 베튤린산 및 클로렐라 추출물로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 형광물질, 살진균제, 굴수성 유발물질, 보습제, 방향제, 방향제 담체, 단백질, 용해화제, 당유도체, 일광차단제, 비타민, 식물 추출물 등을 포함하는 부형제를 추가로 함유할 수 있다.
본 발명에서 상기 화장료 조성물은 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 아이크림, 세럼, 영양크림, 맛사지크림, 클렌징크림, 클렌징로션, 클렌징폼, 클렌징워터, 파우더, 엣센스, 팩, 헤어토닉, 헤어트리트먼트, 샴푸 또는 린스로 제형화 될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 통상의 방법에 의해 제형화될 수 있다. 피부 외용제의 제형화에 있어서 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있고, 화장료 조성물의 제형화에 있어서 International cosmetic ingredient dictionary, 6th ed(The cosmetic, Toiletry and Fragrance Association, Inc, Washington, 1995)에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있다.
구체적으로, 상기 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형으로 제조할 수 있다. 예컨대, 유연 화장수 또는 영양 화장수 등의 화장수; 훼이셜 로션, 바디로션 등의 유액; 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림 등의 크림; 에센스; 화장연고; 스프레이; 젤; 팩; 선 스크린; 메이크업 베이스; 액체 타입, 고체 타입 또는 스프레이 타입 등의 파운데이션; 파우더; 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 오일 등의 메이크업 제거제; 또는 클렌징 폼, 비누, 바디워시 등의 세정제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 상기 피부 외용제는, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 화장료 조성물은 각각의 제형에 있어서 상기 필수성분 외에 제형의 종류 또는 사용 목적 등에 따라 본 발명에 따른 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 다른 성분들이 적절히 배합될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 통상적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있으며, 예컨대 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 허용 가능한 담체는 제형에 따라 달리할 수 있다. 예컨대, 연고, 페이스트, 크림 또는 젤로 제형화될 때담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 파우더 또는 스프레이로 제형화될 때, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있고, 스프레이의 경우 클로 로플루오로히드로카본, 프로판, 부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 더 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 용액 또는 유탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 용매, 용해화제, 또는 유탁화제가 사용될 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-브틸글리콜 오일이 사용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 사용될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 현탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리 옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 사용될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 최종 제품의 품질이나 기능에 따라 업계에서 통상적으로 사용되는 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉 쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 추가적으로 함유할 수 있다. 다만, 상기 보조제 및 그 혼합 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 영향을 미치지 않도록 적절히 선택할 수 있다.
이하, 본 발명에 따른 구체적인 실시예를 들어 설명한다.
실시예 1 : 펩타이드의 합성
개량형 펩타이드를 합성하기 위한 공정은 도 1에 나타내었다. 구체적으로는 4개의 nsc-아미노산(nsc-Gly, nsc-Glu(OtBu), nsc-Ser(tBu), nsc-Val)이 부착된 클로로 트리틸 클로라이드 레진(Chloro trityl chloride resin: CTL resin, Novabiochem Cat No. 01-64-0021)을 96웰 테프론 반응기에 시리즈 별로 각 19 라인에 200 mg을 넣고, 메틸렌 클로라이드(MC) 1 ml를 가하여 3분간 교반하였다. 용액을 제거하고 디메틸포름아마이드(DMF) 1 ml를 넣어 3분간 교반한 후 다시 용매를 제거하였다. 제조된 펩타이드-레진은 DMF, MC 및 메탄올로 각각 3회 세척하고, 질소 공기를 천천히 흘려 건조한 후, P2O5 하에서 진공으로 감압하여 완전히 건조하였다. 제조된 레진에 탈루용액(트리플로로화 초산(Trifluroacetic acid: TFA) 81.5%, 증류수 5%, 티오아니졸(Thioanisole) 5%, 페놀 5%, EDT(1,2-Ethanedithiol) 2.5% 및 TIS(Triisopropylsilane) 1% 포함) 30 ml를 넣은 후 상온에서 가끔 흔들어주며 얼음 수조 안에서 1 시간 반응을 유지하였다. 레진을 여과하고, 소량의 TFA 용액으로 세척한 후 모액과 합하여 펩타이드-레진 복합체를 수득하였고, 펩타이드에서 레진을 분리하기 위해 산을 추가하여 (0.5% HCl) 펩타이드만을 분리하여 펩타이드 크루드를 확보하였다. 공정 후 상기 펩타이드는 하기 화학식 1로 표시된다.
[화학식 1]
Figure 112022116993658-pat00001
실시예 2: 펩타이드의 정제
합성공정을 통해 확보된 펩타이드 크루드를 기존 정제 방식과 신규 정제 방식으로 나누어 정제를 진행하였다. 먼저 기존 Prep LC를 이용한 정제 방식은 펩타이드 크루드를 HPLC column을 통해 분리하기위해 주입 후 펩타이드 별 HPLC 조건으로 분리를 진행하였다. 분리에 사용한 column 은 Shim-pack VP-ODS C18 column (L : 500 mm, LD : 50 mm, 5 μm)을 사용하였다. 자세한 Prep-LC의 조건은 하기 표 1에 나타내었다.
Condition of HPLC analysis
Column Shim-pack VP-ODS C18 column (L : 500 mm, LD : 50 mm, 5 μm)
Detector Waters 2640 detector
Detection wavelength 216 nm
Flow rate 170.0 mL/min
Injection volume 300 mL
Mobile phase
conditions for HPLC gradient-elution 		Program order Time (min) 0.1% TFA
in D.W (%) 		0.1% TFA
in 50% ACN (%)
1 0 100 0
2 2 95 5
3 27 72 28
4 27.05 30 70
5 50 30 70
6 50.05 100 0
신규 공정인 재결정(re-Crystallization) 방식은 결정에 의한 분리를 위해 합성이 완료된 펩타이드 크루드를 다양한 용매에 용해하여 어떠한 용매에 용해도가 없는지 확인하는 실험을 진행하였다. 테트라하이드로퓨란(THF), 아세톤니트릴(Acetonitrile), 에틸 아세테이트(Ethyl Acetate), 메틸렌 클로라이드(Methylene Chloride), 메탄올, 정제수 등 일반적으로 화합물의 합성에 사용하는 다양한 용매들을 대상으로 용해 실험을 진행하였고 최종적으로는 메탄올 및 정제수를 제외하고는 모두 펩타이드가 녹지 않음을 확인하였으며 본 실시예에서는 메탄올을 재결정을 위한 용매로 사용하였다.
먼저 확보된 펩타이드 크루드에 메탄올을 넣어 펩타이드를 모두 녹인 후 에테르(ether)를 일정한 속도로 적가 하였으며. 그 후 수율 저하를 방지하기 위해 보틀에 묻은 크루드도 메탄올로 씻어 적가 하였다. 펩타이드 결정이 충분히 생성된 후 12시간 동안 교반을 상온에서 100 rpm으로 진행하였고, 교반 및 여과 후 이물을 제거하기 위해 에테르로 씻어주었다. 여과된 펩타이드가 포함된 액체를 오븐에서 밤새 건조하여 순도를 확인하였다.
Prep-LC 및 재결정에 의한 정제 방식의 차이에 따른 펩타이드 수율, 공정 시간, 펩타이드 수율 및 시간당 펩타이드 생산량을 측정한 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
구분 prep. LC 정제 재결정(Re-Crystallization) 정제
원리 HPLC를 이용하여 resin이 packing되어 있는 column을 이용한 분리정제방법 액체 혹은 비결정상태의 고체가 결정을 형성하는 분리정제방법
1 batch 공정 시간 ~24hr ~ 6hr
펩타이드 수율 (%) ~33.4% 56.43%
시간당 펩타이드 생산량 2.08g/hr 8.43g/hr
표 2를 참조하면, 재결정 방식이 Prep-LC 방식 대비 23.03% 높은 펩타이드 수율을 보이고, 1 batch 공정 시간은 약 1/4배 감소한 것을 확인할 수 있다.
실시예 3: 합성, 정제된 펩타이드의 순도 HPLC 분석
2가지의 정제 방식을 통해 확보된 펩타이드의 순도를 확인하기 위해 HPLC 함량 분석을 통해 진행하였으며, 펩타이드와 펩타이드 복합체에 대해 waters사의 HPLC (waters 2695)와 waters사의 C18(Waters Xterra MS C18 column(L: 250 mm, LD: 4.6 mm, 5 μm)) 컬럼을 이용하여 분석하였다. 이때 HPLC의 검출기의 파장은 216 nm 파장을 이용하였다. HPLC의 이동상의 용매로는 0.1% 삼불소 아세트산(Trifluoroacetic acid, TFA)이 포함된 아세토니트릴(Acetonitile, ACN)과 0.1% TFA가 포함된 water를 이용하였으며, 시간에 따라 아세토니트릴(ACN)의 농도를 변화시킴으로써 펩타이드의 순도분석을 관찰하였으며 그 결과는 도 2 및 도 3에 나타내었고, 여기서 펩타이드 물질 분석에 사용된 상세한 조건은 하기 표 3에 나타내었다.
도 2 및 도 3을 참조하면, HPLC 분석 결과 2종의 정제 공정에서 확보된 펩타이드의 순도는 모두 95% 이상이며 두 펩타이드 간 순도의 차이는 거의 없는 것으로 확인되었다.
Condition of HPLC analysis
Column Aminex HPX-87H (300 x 7.8 nm)
Detector UVD 170s DIONEX
Detection wavelength 216 nm
Flow rate 0.7 ml/min
Injection volume 10 ㎕
Mobile phase
conditions for HPLC
gradient-elution		 Program order Time (min) 0.1% TFA
in D.W (%)		 0.1% TFA
in 50% ACN(%)
1 0 100 0
2 10 75 25
3 20 50 50
4 30 25 75
5 40 0 100
6 45 100 0
실시예 4: 펩타이드의 MS(Mass spectrometry) 분석
실시예 1 및 2에서의 2종의 정제 방식으로 확보된 펩타이드 대한 MS 분석은 JEOL사의 JMS-700 High Resolution Mass Spectrometer(MS)을 이용하여 수행되었다. 이때 MS의 분석 방법은 ESI 모드를 사용하여 probe bias +4.5 kv 조건으로 측정하였고, MS 분석 결과를 도 4 및 도 5에 나타내었고, MS 분석의 상세 조건은 하기 표 4에 나타내었다.
Ion Polarity Positive
Nebulizer Gas Floe 1.5 L/min
Detector 1.2 kv
CDL -20.0 v
CDL Temp 250℃
Block Temp 400℃
T. Flow 0.2 ml/min
B.conc 50% H20 / 50% ACN
Probe ESI
Probe bias +4.5 kv
도 4 및 도 5를 참조하면, 실시예 1 및 2에서 재결정 방식으로 합성된 펩타이드의 MS 분석을 통해 합성된 펩타이드가 정확한 서열로 합성되었음이 분자량을 통해 확인되었다.
실시예 5 : 세포독성 실험
본 발명에 따른 펩타이드에 대한 각질세포 내독성이 있는지의 여부를 확인하기 위하여, 세포 독성 및 재생능 평가를 MTT assay를 이용하여 측정하였다. HaCat 세포를 24 well plate에 각 well당 4×104 cells/24well의 세포수가 되도록 seeding한 후 24 h 동안 37 ℃, 5% CO2 조건으로 항온 배양하였다. 이후 PBS로 2회 세척하고 배양한 후 실시예 1 및 2에서의 Prep 정제 및 재결정 정제 방식으로 획득한 펩타이드를 각각 농도별(50, 500, 1,000 μM)로 처리하여 24 h 동안 항온 배양하였다. 배양 후 MTT 0.5% in DPBS를 배양배지와 1:9 (v/v)로 혼합하여 첨가한 후 2 h 동안 CO2 incubator에서 배양한 후 생성된 formazan을 DMSO에 녹여 ELISA를 이용하여 570 nm에서 측정하였고, 그 결과를 도 6에 나타내었다.
도 6을 참조하면, 각질세포주의 일종인 HaCat 세포에 대하여, 저농도에서 고농도까지 투여한 조성물에 의한 세포수의 감소는 관찰되지 않았으며, 세포의 현미경적인 관찰에서도 별다른 변화가 관찰되지 않았다.
이상의 결과를 통해 본 발명에 따른 펩타이드 제조방법으로 제조된 펩타이드는 피부 관련 세포에 독성이 전혀 없으며, 이로써 본 발명에 따른 화장료 조성물을 피부에 처리하여도 큰 영향을 끼치지 않으리라는 것을 예측할 수 있다.
실시예 6: 피부 자극 첩포 시험
본 시험은 CTFA Safety Testing Guideline 및 식품의약품안전처 고시 기능성화장품 심사에 관한 규정과 기능성화장품 유효성 평가를 위한 가이드라인에 의거하여 진행하였다. 먼저 시험에 사용할 시료를 실시예 1 및 2에서의 Prep LC 및 재결정으로 정제하여 확보된 글리신-글루타민-발린-세린(이하, GQVS) 서열의 펩타이드 2종을 각각 10 mg/ml 및 1 mg/ml의 농도가 되도록 정제수에 용해하여 시료를 준비하고 이때 시료가 오염이 되지 않도록 주의하여 진행하였다. 연구대상자의 시험 부위는 70% Ethanol로 세척한 후 건조시켰다.
첩포용 패치(Finn Chabers® on Scanpor®: 100 × 10 8mm)를 준비하고 패치 내 챔버 당 준비된 시료 20㎕씩 투여하여, 연구대상자의 팔 상박 하부에 첩포한다. 이때 시료가 투여된 챔버 내의 원형 디스크가 이탈하지 않도록 유의하여 진행하였다. 시료의 종류 및 농도는 하기 표 5에 나타내었다.
샘플 명 성분
대조군 (blank) 정제수
Prep peptide 01 10 mg/ml
Prep peptide 02 1 mg/ml
Re-crystallization peptide 01 10 mg/ml
Re-crystallization peptide 02 1 mg/ml
24시간 폐쇄 첩포 후, 관찰은 패치 제거 직후, 제거 후 24시간 및 제거 후 48시간 시점에 진행하였고, 시료 접촉 부위 피부 반응 및 자극 유무에 대하여 연구대상자 설문(가려움, 따가움 등) 및 육안 관찰(홍반, 부어오름 등)하였다. Frosch & Kligman과 the Cosmetic, Toiletry, and Fragrance Association (CTFA) guideline 을 반영하여 평가하였고, 그 결과는 도 7 및 하기 표 6에 나타내었다.
Figure 112022116993658-pat00002
도 7 및 표 6을 참조하면, 피부 첩포시험 결과 Prep-LC에서 정제한 펩타이드와 재결정으로 정제된 펩타이드 모든 농도에서 유의할 만한 피부 자극이 없는 것으로 파악되었으며 펩타이드 합성과 재결정 공정을 위해 사용되었던 다양한 자극성 용매들에 의한 피부자극은 Prep 정제 펩타이드와 마찬가지로 문제가 없는 것으로 확인되었다.
제조예 : 재결정 펩타이드가 함유된 크림 타입의 조성물 제조
크림 타입 조성물로서 실시예 1 및 2에서 확보된 재결정 GQVS 서열 펩타이드를 0.1 중량부로 포함하여 하기 표 7과 같이 제형을 구성하였다.
구분 원료명 / 성분명 성분명 (Ingredients) / INCI 명칭 중량부
수상A DI WATER Water 39.03
GLYCERIN Glycerin 10.00
Keltrol F Xanthan Gum 0.10
Adenosine Adenosine 0.04
수상B DI Water Water 30.00
beta-glucan beta-glucan 0.20
Carbopol 940 Carbomer 0.02
유상 Kalcol 6870 Cetearyl Alcohol 2.50
GMS-105 Glyceryl Stearate 1.50
Arlacel 165V Glyceryl Stearate, Peg-100 Stearate 1.20
Tween 80 Polysorbate 80 1.00
Arlacel 83 Sorbitan Sesquioleate 0.70
Phytosqualane Squalane 5.00
DUB MCT Caprylic/Capric Triglyceride 3.00
첨가제A DI Water Water 3.00
L-Arginine (pH 4.50 ~ 5.50) Arginine 0.50
첨가제B 1,2-Hexanediol 1,2-Hexanediol 2.00
첨가제C glucosyl rutin glucosyl rutin 0.01
첨가제D(향료) Perfume Fragrance 0.10
기능성 성분 Re-crystallization GQVS Re-crystallization GQVS 0.1
재결정 펩타이드 함유된 크림 타입 조성물을 하기 방법으로 제조하였다.
[크림 타입 조성물 제조방법]
1) [수상B] 제조
물을 가온하여 60 내지 70℃로 교반하면서 분말상 원료를 순차적으로 서서히 투입하여 점증이 될 때까지 디스퍼 믹서로 교반하여 고르게 풀어준 후 식혀주며, 공정 용이성을 위해 사전에 준비해둔다.
2) [수상A] 제조
분말상 원료를 글리세린에 충분히 함침시킨 후, 물을 첨가하여 50 내지 60℃로 가온하여 디스퍼 믹서로 골고루 녹여준다.
3) [수상A] + [수상B] 혼합 교반 제조
미리 준비해 둔 수상B를 수상A에 첨가하여 고르게 섞어주면서 가온한다. 65 내지 75℃가 유지될 수 있도록 준비해둔다.
4) [유상] 혼합 교반 제조
각 원료를 개별 비이커에 평량하여 가온 교반하여 녹여준다(80℃ 이상). 녹여진 상은 75℃ 이상 온도가 유지될 수 있도록 준비해둔다.
5) 전체 크림 제조
준비된 수상 혼합물에 유상을 서서히 투입 첨가하여 약 10분간 강하게 교반(6,000 rpm)하여 유화 공정을 진행한다. 이때 온도는 65~75℃로 유지할 수 있도록 한다.
완료 후, 첨가제 A를 준비하여 pH 조정 및 중화 공정을 진행한다. 이 때, 내용물의 점도가 상승하므로, 강하게(6,000 rpm) 골고루 5분 이상 교반해준다.
50℃ 이하로 내용물이 식으면 첨가제 B를 넣고 서서히 2분 정도 섞어주며(3,000 내지 4,000 rpm), 40℃ 이하가 되면 첨가제 C와 첨가제 D를 순차적으로 첨가하여 2분 정도 천천히(3,000 내지 4,000 rpm) 교반 후, 탈기/여과 공정을 거쳐 내용물을 수거한다.
완료 후, pH 조정 및 중화 공정을 진행한다. 이 때, 내용물의 점도가 상승하므로, 강하게(6,000 rpm) 골고루 5분 이상 교반 해준다.
50℃ 이하로 내용물이 식으면 보존제를 넣고 서서히 2분 정도 섞어주며(3,000 내지 4,000 rpm), 40℃ 이하가 되면 재결정 공정으로 생산된 펩타이드와 향료를 첨가하여 2분 정도 천천히(3,000 내지 4,000 rpm) 교반 후, 탈기/여과 공정을 거쳐 내용물을 수거한다.
제조된 크림은 저온(4℃), 고온 (50℃), 상온 (25℃) 및 일광조건에서 보관하여 크림의 안정성을 확인하였으며 모든 조건에서 4주 동안 크림의 변색, 변취, 상 변화 및 pH 변화와 같은 현상들이 발견되지 않았으며 이를 통해 크림의 안정성이 유지되는 것을 확인하였다. 특히 펩타이드 복합체의 안정성이 유지되어 HPLC 분석 결과 모든 조건에서 4주 동안 90% 이상의 함량이 유지되는 것을 확인하였으며, 그 결과는 도 8에 나타내었다.
이상으로 본 발명의 바람직한 실시예를 상세하게 설명하였다. 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다.
따라서, 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미, 범위 및 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다

Claims (4)

  1. 글리신(Glycine, Gly)-글루타민(Glutamine, Gln)-발린(Valine, Val)-세린(Serine, Ser)의 아미노산 서열로 이루어지는 펩타이드의 제조방법에 있어서,
    2-(4-니트로페닐)설포닐에톡시카르보닐(Nsc) 또는 플루오레닐메톡시카르보닐 (Fmoc)가 보호기로 부착된 아미노산을 이용하여 펩타이드 크루드를 합성하는 단계; 및
    용매에 대한 용해도 차이를 이용한 재결정 방식으로 상기 펩타이드 크루드로부터 상기 서열을 갖는 펩타이드를 정제하는 단계;를 포함하는 펩타이드 제조방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 용매는 메탄올 또는 정제수를 포함하는 것을 특징으로 하는 펩타이드 제조방법.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 정제하는 단계는 상기 용매를 상기 펩타이드 크루드에 가하여 모두 녹인 후 일정한 속도로 에테르(ether)를 적가하여 결정화하는 단계;
    상기 결정화된 용액을 상온에서 50 내지 200 rpm으로 10 내지 18 시간 교반하는 단계; 및
    상기 용액을 여과하고 상기 펩타이드가 포함된 액체를 건조하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 펩타이드 제조방법.
  4. 삭제
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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