KR102528620B1

KR102528620B1 - 벌노랑이속 식물의 종자 발효물을 포함하는 액취증의 예방 또는 개선용 조성물

Info

Publication number: KR102528620B1
Application number: KR1020200103243A
Authority: KR
Inventors: 신재호; 김민지; 김민철; 소재현; 조형우; 심규영; 이동걸; 강승현
Original assignee: 코스맥스 주식회사
Priority date: 2020-08-18
Filing date: 2020-08-18
Publication date: 2023-05-04
Also published as: CN115884814A; KR20220022276A; EP4201395A1; US20240016872A1; WO2022039379A1

Abstract

벌노랑이속 식물의 종자 발효물을 포함하는 액취증 예방 또는 개선용 조성물이 개시된다. 본 발명의 조성물은 액취증과 관련된 미생물 군집에서 코리네박테리움속 및 아나에로코커스속 미생물이 차지하는 비율을 감소시킴으로서 액취와 관련된 물질의 생성을 억제할 수 있다.

Description

벌노랑이속 식물의 종자 발효물을 포함하는 액취증의 예방 또는 개선용 조성물{Composition for preventing or improving Osmidrosis axillae comprising Seed fermented of Lotus spp. plant}

본 발명은 벌노랑이속 식물의 종자 발효물을 포함하는 액취증의 예방 또는 개선용 조성물에 관한 것이다.

체취는 인간의 몸에 분포하는 땀샘(sweat gland)에서 분비되는 땀과 노폐물이 미생물 등에 의해 분해되는 과정에서 발생하는 특유의 냄새이며, 인종, 성별, 연령 등에 따라 달라질 수 있다.

그 중 겨드랑이 등 체모가 많은 부분에 주로 분포하는 아포크린 땀샘(apocrine sweat gland)의 분비물은 지방, 단백질, 피지, 신체 노폐물 등의 함량이 높은데, 이 분비물이 미생물에 의해 분해되는 과정에서 액취로 일컬어지는 불쾌한 냄새를 발생시킬 수 있다. 액취증은 격렬한 운동이나 스트레스로 인한 땀과 피지 분비, 또는 섭취하는 음식의 종류에 따라 악화될 수 있으며, 또한 향취가 강한 식품, 카페인이 많이 포함된 음료, 음주 및 흡연 등도 액취증 악화의 원인이 될 수 있다.

액취를 억제하기 위한 일반적인 방법으로는 마스킹 방법과 땀 억제제를 사용하는 방법이 있다. 이 중 마스킹 방법은 다른 향을 이용하여 액취를 감추는 방법이다. 하지만 액취를 가리기 위해 잘못된 향을 사용할 경우에는 오히려 더 강한 악취를 유발할 수 있다. 그리고 땀 억제제 사용은 아포크린 땀샘에 작용하는 화학물질을 사용함으로써 액취의 발생을 억제하는 것이지만, 문제가 없던 다른 부위에서 땀 및 액취가 증가하는 부작용을 나타내기도 한다.

이에 액취를 유발하는 미생물 군집을 변화시킴으로써 액취를 근본적으로 개선하면서도 부작용이 적은 천연물 기반의 치료제가 필요한 실정이다.

대한민국 공개공보 제10-2010-0007520호(2010.01.22)

일 구체예에 따르면, 벌노랑이속 식물의 종자 발효물을 포함하는 액취증 예방 또는 개선용 조성물을 제공한다.

일 양상은 벌노랑이속 식물의 종자 발효물을 포함하는 액취증 예방 또는 개선용 조성물을 제공한다.

상기 벌노랑이속(Lotus spp.) 식물은 콩과에 속하는 여러해살이 풀이다. 벌노랑이속 식물은 예를 들면, 한국에 자생하는 벌노랑이(Lotus corniculatus), 서양벌노랑이(Lotus pedunculatus), 들벌노랑이(Lotus uligninosus)이 포함될 수 있으나 이에 특별히 한정되는 것은 아니다.

벌노랑이속 식물, 특히 벌노랑이의 뿌리는 해열 및 지혈작용이 있어 감기, 인후염, 대장염 등에 완화 효과가 있다고 알려져 있으나, 벌노랑이의 종자 발효물의 액취증 개선 효과는 알려진 바가 없다. 본 발명자는 벌노랑이 종자 발효물을 액취증 환자들의 겨드랑이에 도포하고 도포 전후의 냄새 측정, 액취증 개선 여부에 대한 설문조사, 및 미생물 군집 분포의 변화를 확인함으로써 벌노랑이 종자 발효물이 액취증 개선 효과가 있음을 확인하였다.

용어 "발효"는 벌노랑이속 식물의 종자의 성분이 함유된 조성물에서 유용미생물이 증식되어 유용미생물이 생산하는 효소에 의해 조성물의 성분이 변화되는 과정을 의미한다.

일 구체예에 따르면, 상기 벌노랑이속 식물의 종자 발효물은 피부 미생물 군집에서 액취 유발 물질을 생산하는 코리네박테리움속(Corynebacterium sp.) 미생물 및 아나에로코커스속(Anaerococcus sp.) 미생물의 비중을 감소시킬 수 있다. 또는 상기 벌노랑이속 식물의 종자 발효물은 코리네박테리움속(Corynebacterium sp.) 미생물 및 아나에로코커스속(Anaerococcus sp.) 미생물의 증식 또는 활성을 억제하는 것일 수 있다. 보다 상세하게는 인간의 겨드랑이에 존재하는 미생물군집(microbiome)에서 코리네박테리움속 및 아나에로코커스속이 차지하는 비율을 낮추는 것일 수 있다. 도 2에 따르면, 상기 벌노랑이 종자 발효물을 액취증 환자의 겨드랑이에 도포하면 겨드랑이에 존재하는 미생물 군집에서 코리네박테리움속 미생물 및 아나에로코커스속 미생물이 차지하는 비율이 감소하였다. 반면, 스타필로코커스속(Staphylococcus) 미생물은 오히려 증가하였다. 코리네박테리움속 및 아나에로코커스속 미생물의 감소는 단순히 상기 발효물의 코리네박테리움속 및 아나에로코커스속 미생물에 대한 직접적인 억제에 의한 결과로 평가하기는 어렵다. 왜냐하면 미생물 군집의 변화는 다른 미생물의 생육 또는 활성을 증가시키거나, 또는 코리네박테리움속 및 아나에로코커스속 미생물과 상호작용하는 제3의 미생물에 대한 영향에 의한 결과일 수 있기 때문이다.

일 구체예에 따르면, 상기 벌노랑이속 식물의 종자 발효물은 유산균으로 발효한 것일 수 있다. 상기 유산균은 예를 들면 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 헬베티커스(Lactobacillus Helveticus), 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidium), 비피도박테리움 브레브(Bifidobacterium breve), 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 애니멀리스(Bifidobacterium animalis), 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis), 엔테로코커스 파시움(Enterococcus faecium), 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis), 또는 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus)일 수 있다. 상기 유산균들은 프로바이오틱스 제품에서 널리 사용되고 있는 균주들로서 통상기술자들이 쉽게 입수하거나 구입할 수 있다.

상기 벌노랑이 종자 발효물은 벌노랑이속 식물의 종자 자체 또는 종자의 추출물을 발효한 것일 수 있다. 구체적으로 발효의 대상은 가공되지 않은 종자, 건조된 종자, 분말화된 종자, 종자 추출물, 또는 종자 농축물일 수 있으며 특별히 한정되는 것은 아니다.

예를 들면, 상기 벌노랑이속 식물의 종자 추출물은 예를 들면 벌노랑이속 식물의 종자를 분말화한 후 물, C1 내지 C4의 저급 알코올, 또는 이들의 혼합 용매에서 침지하여 추출한 것일 수 있다. 상기 종자 추출물은 실온 또는 가온에서 추출한 것일 수 있으며, 가온 조건은 약 40 내지 100℃일 수 있다. 상기 상온은 15 내지 40℃, 15 내지 30℃, 15 내지 25℃, 또는 20℃일 수 있다. 상기 추출은 36시간 내지 168시간, 36시간 내지 60시간, 36시간 내지50시간, 또는 36시간 내지 48시간 동안 추출한 것일 수 있다. 추출 방법으로는 용매 추출법, 초음파 추출법, 여과법 및 환류 추출법 등과 같이 종래 알려진 통상적인 추출 방법을 사용할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 추출 과정은 수회 반복할 수 있으며, 이후에 농축 또는 동결건조 등의 단계를 추가적으로 거칠 수 있다.

상기 벌노랑이속 식물의 종자 발효물은 상기 벌노랑이속 식물의 종자 추출물을 주성분으로 포함하는 액체 배지에 유산균을 접종하고 발효하여 제조한 것일 수 있다. 발효 조건은 유산균의 종류에 따라 적절하게 실시할 수 있으며, 예를 들면 37℃에서 72 시간 동안 배양함으로써 발효시키는 것일 수 있다. 상기 벌노랑이속 식물의 종자 발효물은 균주 접종 후 배양한 배양액을 원심분리한 상층액 또는 침전물일 수 있다.

일 구체예에 따르면, 상기 락토바실러스 애시도필러스는 기탁번호 KCTC13233BP로 기탁된 균주일 수 있다.

발효 조건은 사용되는 유산균의 종류, 벌노랑이속 식물의 종자 추출물의 양 및 농도에 따라 조절될 수 있다. 일 구체예에 따르면, 상기 발효는 락토바실러스 애시도필러스를 이용하는 경우 35 내지 37℃에서 3 내지 7일 동안 발효하는 것일 수 있다.

상기 조성물은 겨드랑이 부위에 소정의 양을 도포한 다음 닦아 내는 방식으로 사용할 수 있다. 상기 조성물을 겨드랑이 부위에 도포 후 방치하는 시간은 특별히 한정되는 것은 아니며, 사용의 간편성 및 효과의 극대화 측면에서 사용자가 적절히 조절할 수 있다.

다른 양상은 상기 조성물을 포함하는 액취증 예방 또는 개선용 피부외용제를 제공한다.

상기 피부외용제는 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수(스킨), 영양 화장수(밀크로션), 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

상기 피부외용제 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성 오일, 식물성 오일, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

상기 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있으며, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

상기 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

상기 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

상기 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시테이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 오일, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

상기 피부외용제 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.

다른 양상은 벌노랑이속 식물의 종자 또는 벌노랑이속 식물의 종자 추출물을 유산균으로 발효시키는 단계를 포함하는 액취증 예방 또는 개선용 조성물의 제조방법을 제공한다.

상기 벌노랑이속 식물의 종자 추출물은 벌노랑이의 종자를 분말화한 후 물, C1 내지 C4의 저급 알코올, 또는 이들의 혼합 용매에서 침지하여 추출한 것일 수 있다. 상기 벌노랑이 종자 추출물은 실온 또는 가온에서 추출한 것일 수 있으며, 가온 조건은 약 40 내지 100℃일 수 있다.

상기 발효시키는 단계는 상기 벌노랑이속 식물의 종자 추출물을 주성분으로 포함하는 액체 배지에 유산균을 접종하고 발효하여 제조한 것일 수 있다.

상기 발효시키는 단계 이전에 상기 벌노랑이속 식물의 종자 또는 이의 추출물을 멸균하는 단계를 더 포함할 수 있다. 상기 멸균은 55 내지 70℃에서 20 내지 60분간 멸균하는 것일 수 있다.

상기 발효시키는 단계 이후에 접종한 균주를 배양한 배양액을 원심분리한 상층액을 얻는 단계를 더 포함할 수 있다.

상기 유산균에 대한 설명은 상술한 바와 동일하다. 예를 들면 상기 유산군은 락토바실러스속 균주일 수 있으며, 구체적으로 락토바실러스 애시도필러스일 수 있다. 상기 락토바실러스 애시도필러스는 기탁번호 KCTC13233BP로 기탁된 균주일 수 있다.

상기 발효는 사용되는 유산균의 종류, 벌노랑이 종자 추출물의 양 및 농도에 따라 조절될 수 있으며, 예를 들면 락토바실러스 애시도필러스를 이용하는 경우 35 내지 38℃에서 3 내지 7일 동안 발효하는 것일 수 있다.

일 구체예에 따른 벌노랑이속 식물의 종자 발효물을 포함하는 조성물을 이용하면, 액취를 효과적으로 예방 또는 개선할 수 있다.

도 1은 일 실시예에 따라 제조한 벌노랑이 종자 발효물에 함유된 성분을 GC/TOF-MS로 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 2은 일 실시예에 따라 제조한 벌노랑이 종자 발효물을 사용한 피험자의 액취 강도를 가스 측정 센서를 탑재한 냄새측정기로 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 3는 일 실시예에 따라 제조한 벌노랑이 종자 발효물을 사용한 피험자의 개선감을 관능검사를 통해 나타낸 결과이다.
도 4는 일 실시예에 따른 벌노랑이 종자 발효물 처리구와 무처리구의 겨드랑이 미생물 군집 변화를 주좌표분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 일 실시예에 따라 제조한 벌노랑이 종자 발효물을 사용한 피험자의 겨드랑이 피부 미생물 군집 변화를 나타낸 것이다.

이하 하나 이상의 구체예를 실시예를 통해 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 하나 이상의 구체예를 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 벌노랑이 발효물 제조

1-1. 락토바실러스 애시도필러스 균주 배양

한국생명공학연구원 생물자원센터에 기탁되어 있는 기탁번호 KCTC13233BP의 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) 균주(이하 KNU-02 균주로 지칭할 수 있다)를 분양받았다. KNU-02 균주를 Lactobacilli MRS broth 배지에서 24시간 배양하고, 원심분리기로 7000 rpm, 30분 동안 원심분리하여 상등액을 제거한 균체를 획득하였다. 획득한 균체는 121℃, 15분간 멸균 처리한 PBS(0.8% NaCl, 0.02% KCl, 0.14% Na2HPO4, 0.03% KH2PO4)를 이용해 2번 세척되었다. 세척이 완료된 균체는 이후 벌노랑이 종자의 발효에 사용되었다.

1-2. 락토바실러스 애시도필러스 KNU-02를 이용한 벌노랑이 종자 발효물의 제조

벌노랑이(Lotus corniculatus)의 종자를 분말화한 후 추출용매로서 70% 에탄올 수용액에서 1 L 침적하여 48 시간 동안 실온에서 추출하였다. 추출한 용액을 여과지로 여과한 후, 여액을 회전식 증발 건조기를 이용하여 감압 농축하여 농축한 벌노랑이 종자 추출물을 수득하였다.

상기 벌노랑이 종자 추출물을 주성분으로 포함하는 액체 배지를 제조하고, 121℃, 15분 동안 멸균 처리한 액체 배지 1 L에 벌노랑이 종자 추출물을 100 mg/mL 농도가 되도록 준비하였다. 상기 실시예 1-1에서 획득한 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주를 벌노랑이 종자 추출물을 포함하는 1 L의 액체 배지에 접종하였다. 접종된 액체 배지는 37℃에서 72 시간 동안 발효(100 rpm) 하며, 배양이 종료되면 원심분리기를 통하여 원심분리(7,000 rpm, 30 분) 후 균체는 제거한 상층액만 취하고, 0.2μm 필터를 통해 필터 멸균을 실시하였다. 이를 0.1% 아세트산을 포함하는 에틸아세테이트를 1:1 비율로 추가한 후, 48 시간 용매 추출하였고 감압농축기를 이용하여 농축하여 발효 산물을 수득하였다.

실시예 2: 액취증 환자군 모집

글로벌의학연구센터를 통해 액취증으로 고민하는 9명의 및 액취증으로 고민하지 않는 정상인 8명, 총 17명의 피험자를 모집하였다. 피험자들은 모두 30대 내지 50대 나이의 여성이었다.

상기 액취증으로 고민하는 9명의 피험자들은 겨드랑이(Axilla)에 벌노랑이 종자 발효물을 하루에 2번씩 1주일간 도포하였다. 도포 기간 중 다른 화장품, 향수, 및 항균 비누의 사용을 제한하였다. (이하 벌노랑이 종자 발효물 처리구로 지칭할 수 있다.) 정상인 8명은 벌노랑이 종자 발효물을 사용하지 않았으며 일주일 간 다른 화장품, 향수, 및 항균 비누의 사용을 제한하였다(이하 무처리구로 지칭할 수 있다).

실험 직전 및 일주일 후에 피험자들의 겨드랑이(Axilla)에서 피부 미생물을 수집하였다. 구체적으로 피험자의 겨드랑이(Axilla)의 약 50 cm²의 면적을 보존액을 적신 멸균된 면봉으로 약 3분 가량 문질러 피부 미생물 채취를 실시하였다. 피부 미생물 채취가 완료된 면봉은 0.1% Tween20, 0.15 M NaCl, 0.2% agar powder가 포함된 보존액에 넣어 DNA 추출 전까지 -80℃ 냉동고에 보관하였다.

실시예 3: 락토바실러스 애시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) KNU-02의 유전자 탐색

락토바실러스 애시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) KNU-02의 항균 물질 생성 관련 유전자를 확인하기 위해, PacBio Sequel 장비를 사용하여 whole-genome sequencing을 수행하였다. 시퀀싱 데이터는 HGAP 4.0 Pipeline을 통해 de novo assembly 됐으며, 총 6개의 contigs를 얻었다. 6개 contigs는 RAST (Rapid Annotations using Subsystems Technology)를 통해 유전자 주석화 하였다. 이를 통한 유전자 주석화로, 락토바실러스 애시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) KNU-02의 대사 활성을 확인하였다. Subsystem coverage는 71%가 서브시스템 분류가 정의된 ORF이고, 나머지 29%는 서브시스템 분류가 되지 않은 ORF였다. subsystem category distribution은 하기 표 1에 기재되어 있다. 락토바실러스 애시도필러스는 탄수화물 및 단백질 대사 관련 유전자가 32%의 비율을 차지하는 것으로 확인되었다. 판단건데, 락토바실러스 애시도필러스 KNU-02는 탄수화물 및 단백질 대사 관련 유전자 발현 비율이 높으므로 벌노랑이 종자에 함유된 중합체(polymer) 형태의 탄수화물 및 단백질 분자를 분해하여 겨드랑이 미생물 군집에 영향을 미치는 산물을 생성하기에 적합한 것으로 판단된다.

subsystem	Gene 개수	subsystem	Gene 개수
Cofactors, Vitamins, Prosthetic Groups, Pigments	48	Regulation and Cell signaling	23
Cell wall and Capsule	30	Secondary Metabolism	1
Virulence, Disease and Defense	36	DNA Metabolism	46
Potassium metabolism	5	Fatty Acids, Lipids, and Isoprenoids	23
Photosynthesis	0	Nitrogen Metabolism	1
Miscellaneous	10	Dormancy and Sporulation	6
Phages, Prophages, Transposable elements, Plasmids	0	Respiration	12
Membrane Transport	43	Stress Response	6
Iron acquisition and metabolism	4	Metabolism of Aromatic compounds	0
RNA Metabolism	31	Amino acids and derivatives	91
Nucleosides and Nucleotides	80	Sulfur metabolism	4
Protein Metabolism	131	Phosphorus Metabolism	15
Cell Division and Cell Cycle	4	Carbohydrates	122
Motility and Chemotaxis	0

실시예 4: 벌노랑이 발효물의 유효 성분 분석

상기 실시예 1-2에서 준비한 벌노랑이 발효물의 유효성분을 확인하고자, GC/TOF-MS를 통해 분석을 진행하였다. 각 추출물의 유효 성분 분석은 3회 반복으로 진행되었다. 그리고 분석에 사용된 혼합물 또한 분석의 quality control을 위해 유효 성분 분석과 동일하게 3 반복하여 분석하였다.

도 1에 따르면, 벌노랑이 종자 발효물의 성분은 질량을 기준으로 아미노산이 24%, 지방산 14%, 탄수화물(당)이 31%, 기타 성분(Organic) 24%인 것으로 확인되었다.

실시예 5: 겨드랑이의 냄새 측정

벌노랑이 종자 발효물 처리구 및 무처리구의 실험 참여 전과 일주일 후의 냄새 강도를 측정하였다. 냄새 강도 측정은 가스 센서를 탑재한 냄새 측정기 OMX-ADM을 이용하여 피험자의 겨드랑이로부터 3 cm 거리에서 측정하였다. 상기 OMX-ADM은 에탄올, 아세톤, 수소, 암모니아 등의 가스 강도를 측정할 수 있는 장치이다. 측정된 냄새 강도는 일본 환경성 (Ministry of the Environment, Japan) 기준에 따라 계산된 값이다.

도 2는 실험구의 벌노랑이 종자 발효물 사용 전과 사용 일주일 후, 그리고 무처리구의 실험 참여 전과 일주일 후의 냄새 강도를 측정한 결과를 나타낸 것이다. 도 2에 따르면, 벌노랑이 종자 발효물 처리구의 평균적인 액취 강도는 3.9에서 2.9로 감소하였다. 반면, 무처리구의 냄새 강도는 3.1에서 3.2로 증가하였다. 따라서, 액취증 환자에 벌노랑이 종자 발효물을 사용하면 액취의 강도를 정상인과 비슷한 수준으로 감소시킬 수 있음을 확인하였다.

실시예 6: 피험자들의 개선도 평가

벌노랑이 종자 발효물 처리구 및 무처리구에게 실험 참여 전후의 냄새 변화에 대한 설문조사를 실시하였다. 설문조사는 공통적으로 개인 신상, 도포방법의 준수여부, 액취 고민 여부에 대해 조사하였다. 그리고 벌노랑이 종자 발효물 처리구에 대해서는 도포 전후의 액취 정도, 및 개선 여부에 대해 조사하였고, 무처리구에 대해서는 실험참여 전후의 액취 정도에 대해 조사하였다. 액취의 정도는 '매우 강함(5점)', '강함(4점)', '보통(3점)', '약함(2점)', '매우 약함(1점)' 5단계로 구별하였고, 개선 여부는 긍정과 부정 2단계로 평가하였다. 액취 정도 및 개선 여부는 본인의 주관적 평가를 기준으로 하였다. 설문조사 결과는 하기 표 2 및 표 3에 나타내었다.

벌노랑이 종자 발효물 처리구	액취 고민 여부	도포 전 액취 정도 (점)	도포 후 액취 정도 (점)	개선 여부
S01	있음	3	3	있음
S02	있음	3	3	있음
S03	있음	3	2	있음
S04	있음	3	1	있음
S05	있음	4	2	있음
S06	있음	3	3	있음
S07	있음	3	3	있음
S08	있음	4	1	있음
S09	있음	3	2	있음

무처리 피험자	액취 고민 여부	실험 참여 전 액취 정도	일주일 후 액취 정도	-
S11	없음	2	3	-
S12	없음	3	3	-
S13	없음	3	2	-
S14	없음	1	1	-
S16	없음	2	2	-
S17	없음	3	3	-
S19	없음	2	2	-
S20	없음	3	3	-

벌노랑이 종자 발효물 처리구 9명은 모두 도포방법을 준수하였으며 특별한 부작용이 없다고 답변하였다. 상기 표 2에 따르면, 벌노랑이 발효물을 도포하기 전에는 액취증의 정도가 '강함(4점)'으로 답변한 피험자는 2명이고, '보통(3점)'으로 답변한 피험자는 6명이었다. 벌노랑이 종자 발효물 처리구 9명 중 9명이 발효물 사용에 의해 액취가 개선되었다고 답변하였다.

상기 표 3에 따르면, 무처리구 8명 중 실험 참여 전 액취의 정도가 '보통(3점)'으로 답변한 피험자는 4명, '약함(2점)'으로 답변한 피험자는 3명, '매우 약함(1점)'으로 답변한 피험자는 1명이었다. 무처리구는 일주일 후 액취 정도에 대한 답변 비율에서 큰 변화가 없었다.

도 3은 상기 기준에 의해 실시한 설문조사에서 개선되었다고 느끼는지 여부에 대한 답변 결과를 나타낸 것이다. 피험자 9명 모두가 액취증이 개선 여부에 대해 긍정적으로 답변하였다. 도 3에 따르면, 무처리구는 실험 기간 체취의 변화를 거의 느끼지 못하는 것으로 나타났으나(ns), 벌노랑이 종자 발효물 처리구는 실험 후 체취가 개선되었다고 느끼는 정도가 유의하게 높은 것으로 확인되었다.

실시예 7: 액취증이 개선된 피험자들의 미생물 군집의 변화 확인

상기 실시예 1에서 준비한 미생물의 군집의 변화를 분석하였다. PowerSoil DNA Pro Kit (QIAGEN, Germany)를 이용하여 미생물의 total DNA를 추출하고, 16S rRNA V4-V5 영역(515F: 5′-GTGCCAGCMGCCGCGG-3′, 907R: 5′-CCGTCAATTCMTTTRAGTTT-3′)을 PCR로 증폭하였다. 증폭 산물을 Illumina MiSeq 장비를 사용하여 서열을 분석하였다. 서열 데이터는 QIIME version 1.9.1를 통해 OTUs picking을 진행하였고, Greengenes database에 등재되어 있는 표준 염기서열과 97% 이상의 상동성을 기준으로 박테리아를 분류하였다.

도 4는 실험에 참여한 17명의 피험자의 미생물 군집 변화를 주좌표분석 (Principal Coordinate Analysis; PCoA) 방법을 통해 나타낸 것이다. 도 4에 따르면, 벌노랑이 발효물 처리구는 발효물 사용 전과 후의 미생물 군집의 차이가 뚜렷하였다. 구체적으로 벌노랑이 종자 추출물 사용 전후에 좌표상 위치가 크게 변화하였고(도 4의 붉은색 원과 파란색 원 참조), 좌표상 위치들을 종합한 면적의 크기 및 위치 또한 크게 변화하였다(도 4의 붉은색 면적과 파란색 면적 참조). 유사성 분석 (Analysis of similarities; ANOSIM) 결과, 벌노랑이 종자 발효물 사용 전과 사용 후의 미생물 군집은 통계적으로 유의한 차이를 보였다. 반면 무처리군의 미생물 군집은 실험 참여 전후의 좌표상 위치 및 면적의 차이가 크지 않고, 유사성 분석 결과에서도 통계적으로 유의한 차이를 나타내지 않았다.

도 5는 벌노랑이 종자 발효물 처리구 9명과 무처리구 8명 각각의 미생물 군집 비율의 평균값을 나타낸 것이다. 도 5에 따르면, 벌노랑이 종자 발효물을 처리하면 미생물 군집 내 냄새를 유발하는 코리네박테리움속, 아나에로코커스속 미생물이 상대적으로 감소하였다. 반면 스타필로코커스속(Staphylococcus) 균주는 증가하였다. 반면 무처리구는 미생물 군집 내 미생물의 비율이 크게 변화하지 않았다.

다만, 벌노랑이 종자 발효물 사용에 의해 상기 코리네박테리움속 및 아나에로코커스속 2 종의 미생물이 감소하였더라도, 이러한 결과가 해당 균주에 대한 직접적인 항균 또는 활성 억제 효과에 의한 것이라고 단정할 수는 없다. 미생물 군집에서 특정 미생물의 감소는 다른 미생물의 군집이 증가하거나, 또는 감소한 미생물과 상호 작용하는 제3의 미생물의 활성이 변화하여 일어날 수도 있기 때문이다.

상기 실험결과를 종합하면 벌노랑이 종자 발효물은 액취 물질을 생산하는 코리네박테리움속 및 아나에로코커스속 세균의 군집 내 비율을 감소시킬 수 있으므로 액취증 개선 효과를 가질 수 있는 것으로 판단된다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

벌노랑이(Lotus corniculatus)의 종자 발효물을 포함하는 액취증 예방 또는 개선용 조성물로서,
상기 벌노랑이의 종자 발효물은 유산균으로 발효한 것인, 조성물.
제1항에 있어서,
상기 벌노랑이의 종자 발효물은 코리네박테리움속(Corynebacterium sp.) 미생물 및 아나에로코커스속(Anaerococcus sp.) 미생물의 분해 활성을 억제하는 것인,
액취증 예방 또는 개선용 조성물.
삭제
제1항에 있어서,
상기 유산균은 락토바실러스 애시도필러스인,
액취증 예방 또는 개선용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 발효는 35 내지 37℃에서 3 내지 7일 동안 발효하는 것인,
액취증 예방 또는 개선용 조성물.
제1항의 조성물을 포함하는 액취증 예방 또는 개선용 피부외용제.
벌노랑이(Lotus corniculatus)의 종자를 유산균으로 발효시키는 단계를 포함하는,
액취증 예방 또는 개선용 조성물의 제조방법.