KR102511379B1

KR102511379B1 - 화장품에 사용하기 위한 천연 항산화제 및 그 제조 방법

Info

Publication number: KR102511379B1
Application number: KR1020200157944A
Authority: KR
Inventors: 취안 리우; 원쥐안 스
Original assignee: 란저우 유니버시티
Priority date: 2019-12-16
Filing date: 2020-11-23
Publication date: 2023-03-16
Also published as: CN112972321B; CN112972321A; KR20210077593A

Abstract

본 발명은 화장품에 사용하기 위한 천연 항산화제 및 그 제조 방법을 공개하는데, 주요 조성성분은 붉은 토끼풀 추출물이고, 성분은 플라본, 다당 및 그 복합물이다. 다른 성분은 활성, 수용성 및 비용 계산상 다른 특징을 가지는데, 활성, 수용도(度) 및 비용 등의 요소를 종합하여, 다종 성분의 배합 방안을 채용할 수 있고, 특히 다당과 이소플라본의 질량비가 1:2일 때, 2종류의 성분 간의 시너지 효과가 가장 좋고, 활성이 가장 높다. 붉은 토끼풀은 콩과의 목초로, 전세계에 광범위하게 분포하고, 자원이 풍부하고, 그 이소플라본 성분은 보건 기능을 구비한다. 그 제품은 제조가 용이하고, 과정이 안전하고 친환경적이고, 비용이 높지 않고, 배합 다양화는 다른 용도, 제형 등의 수요에 적합하고, 식물성 항산화제는 화장품에 있어서 응용 범위가 매우 넓다.

Description

화장품에 사용하기 위한 천연 항산화제 및 그 제조 방법{NATURAL ANTIOXIDANTS FOR USE IN COSMETICS AND MANUFACTURING METHOD THEREOF}

본 발명은 화장품 산업 기술 분야에 관한 것으로, 구체적으로 화장품에 사용하기 위한 천연 항산화제 및 그 제조 방법이다.

피부는 인체 최외층의 조직 기관으로서, 인체를 보호하여 외부 자극 또는 상처를 받지 않도록 하는 기능을 하고, 유기체 노쇠를 가장 먼저 반영하는 조직이기도 하다. 피부 노쇠를 야기하는 요소는 매우 많은데, 유전 요소 외에, 외계 환경(예를 들어 자외선, 미세먼지 등), 이에 더하여 신체 내부의 정신 스트레스, 생활과 업무의 불규칙성 등으로부터 발생하고, 모두 대량의 유리기(활성산소)를 생성하여, 세포 신호 전달을 간섭하고, 세포 자멸(apoptosis)을 가속화하고, 피부 노화를 가속화하며, 구체적으로 피부 건조, 처짐, 부스럼, 멜라닌 증가로 나타나고 심지어 색소 반점 등이 출현하기도 하고, 심지어 피부암의 발생을 야기하기도 하여, 사람들의 신체 건강 및 생활의 질에 영향을 미친다.

항산화제는 일종의 "외인성 항산화물"로서, 유리기(활성산소)를 효과적으로 제거하여, 피부가 항노화, 미백, 태양광 차단 및 보습 등의 목적을 달성하도록 만들 수 있다. 국민 생활의 질이 지속적으로 제고됨에 따라, 사람들의 신체에 대한 관리도 갈수록 중시되고 있고, 화장품도 더 이상 ??은 여성들의 전유물이 아니게 되었고, 수요량이 많고, 제품의 수요도 갈수록 다원화되는 추세이다.

항산화제는 일정 농도에서 유리기를 제거함으로써 산화 손상을 저지하거나 억제하는 일종의 물질을 의미한다. 현재, 인공 합성된 항산화제 중, tert-부틸p-하이드록시아니솔(tert-Butyl p-hydroxyanisole, BHA) 및 디부틸히드록시톨루엔(Dibutyl hydroxy toluene, BHT) 사용이 비교적 광범위하다. 그러나 수컷 어린 쥐 복막 내에 BHA, BHT 및 그 대사물을 주입하는 실험 중, 쥐 폐세포 수량이 증가하는 것이 발견되었고, 현재 미국, 유럽 등 국가에서는 이미 이러한 종류의 합성 항산화제 사용을 점차 금지하고 있다.

천연 항산화제를 사용하여 인공 합성 항산화제를 대체하는 것은 미래 발전 추세이다. 화장품은 사람 피부와 장시간 연속하여 접촉하는 물질로, 반드시 따듯하고, 안전하고, 무독성이고, 부작용이 없는 제품이어야 한다. 따라서 고효율, 저독성, 염가의 천연 항산화제는 안전하고, 건강한 화장품에게 필수 불가결한 것이다.

본 발명의 목적은 화장품에 사용하기 위한 천연 항산화제 및 그 제조 방법을 제공하는 것으로, 본 발명이 해당 식물로부터 추출 제조한 항산화제 성분은 이소플라본 성분보다 우수하고, 수용성이 더 좋고, 적용 범위가 더 넓고, 매우 좋은 개발 응용 전망을 가짐으로써, 상술한 배경기술에서 제시한 문제를 해결한다.

상술한 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 아래 기술방안을 제공한다: 화장품에 사용하기 위한 천연 항산화제로, 주요 조성성분은 붉은 토끼풀 추출물의 취출물이고, 성분은 각각 조(粗)다당, 조(粗)이소플라본, 정제 다당과 정제 이소플라본, 및 정제 다당과 정제 이소플라본의 복합물이다.

진일보하게는, 정제 다당과 정제 이소플라본의 복합물은 질량비 1:10 내지 15:1로 배합될 수 있다.

본 발명은 다른 종류의 기술방안을 제공한다: 일종의 화장품에 사용하기 위한 천연 항산화제의 제조 방법으로, 아래 단계를 포함함:

단계(S1): 붉은 토끼풀 추출물의 제조

채집한 붉은 토끼풀 잎 조각을 105℃에서 2분 내지 60분 살청(殺靑)하고, 65℃에서 1시간 내지 160시간 건조하고, 분쇄하고, 소량의 석유 에테르를 이용하여 1회 내지 10회 탈지하고, 용매를 휘발시켜 응달 건조하고, 일정 품질의 탈지 붉은 토끼풀 분말을 칭량 수득하고, 10배 내지 50배의 10% 내지 100% 에탄올을 사용하여 30℃ 내지 70℃에서 10분 내지 90분 초음파 보조 추출하고, 상청액을 여과 수집하고, 샘플 잔여물에 5배 내지 120배 용매를 다시 첨가하여10분 내지 90분 추출하고, 두 차례에 걸쳐 추출된 추출액을 병합함;

단계(S2): 조다당 및 조이소플라본의 제조

조다당: 추출액을 15℃ 내지 90℃에서 진공 회전기를 사용하여 농축하고, 부피가 1/8이 되었을 때, 농축액에 대해 교반하면서 천천히 2배 내지 20배 부피의 무수에탄올을 첨가하고, 4℃ 냉장고에 두어 밤새 정치하고, 4800rpm으로 2분 내지 20분 원심 분리하고, 원심 분리 후 갈색 침전은 조다당 부분이고, 침전 부분은 무수에탄올을 사용하여 1회 내지 10회 반복 세척하고, 알코올 용해성 불순물을 세척하여 제거하고, 최종적으로 에탄올을 사용하여 침전을 세척하여 페트리 접시에 담고, 용매가 휘발되기를 기다려, 갈색의 붉은 토끼풀 조다당을 수득하고;

상청은 이소플라본 부분이고, 상청액에 대해 감압 농축하여, 붉은 토끼풀 조이소플라본을 수득함;

단계(S3): 붉은 토끼풀 이소플라본의 정제

사전 처리를 거친 수지를 증류수를 이용하여 10시간 내지 90시간 이상 침수시키고, 습식법으로 컬럼을 장착하고 수지 높이는 3cm 내지 50cm이고, 조이소플라본 1g 내지 30g을 물을 이용하여 용해하고, 샘플을 로딩하고 흡착을 0.5시간 내지 24시간 기다린 후, 각각 증류수, 30%, 50% 에탄올을 사용하여 각각 1BV 내지 5BV 용리한 다음, 70% 에탄올을 사용하여 1BV 내지 5BV 용리하고, 최종적으로 100% 에탄올을 사용하여 1BV 내지 10BV 용리하고, 70% 에탄올 용리액을 수집하고, 감압 농축하고, 정제 이소플라본을 수득함;

단계(S4): 붉은 토끼풀 다당의 정제

단백 제거: 붉은 토끼풀 조다당을 증류수를 이용하여 1mg/ml 내지 10mg/ml 용액이 되도록 배합하고, 1/4 부피의 sevage 용액을 첨가하고, 1분 내지 30분 진동시키고, 분별 깔때기로 이동시켜 1분 내지 120분 정치하고, 하층 용액 및 중층의 단백질을 방출하고, 이러한 조작을 하층 유기 용매에 단백질이 더 이상 발생하지 않을 때까지 1회 내지 6회 반복함;

투석: 단백질을 제거한 다당 용액을, 저온 감압 농축한 후, 사전 처리한 투석 주머니에 주입하고, 대용량 비커에 투입하고, 증류수를 가득 채워 정치 투석하고, 1시간 내지 16시간마다 1회 물을 교체하고, 1시간 내지 72시간 투석하고, 1%의 AgNO₃을 사용하여 NaCl, KCl 등의 잔류 상황을 검사하고, 마지막으로 정제된 다당을 수득함.

진일보하게는, 단계(S3)에서, 수지 사전 처리는: 수지를 20% 내지 100% 에탄올을 사용하여 1시간 내지 72시간 침수시키고, 여과하고, 탈이온수를 이용하여 무알코올 향이 될 때까지 반복하여 헹구고, 용액을 헹궈 백색 혼탁이 없도록 하고, 다시 1% 내지 30% NaOH를 사용하여 1시간 내지 72시간 침수시키고, 여과하고, 탈이온수를 사용하여 수지 pH가 중성을 나타낼 때까지 반복하여 헹구고, 다시 1% 내지 30% HCl 용액을 사용하여 1시간 내지 72시간 침수시키고, 수지가 중성을 나타낼 때까지 여과하여 헹구고, 20℃ 내지 90℃에서 화건(火乾)하여 준비한다.

종래기술 대비, 본 발명의 유익한 효과는:

본 발명이 해당 식물로부터 추출 제조한 항산화제 성분은 활성이 높고, 수용성이 좋고, 적용 범위가 넓고, 환경적으로 안전하고, 보건 기능을 겸비한다. 그 밖에 붉은 토끼풀 식물 자원이 풍부하여, 개발 비용이 낮고, 매우 좋은 시장 전망이 있다.

이하에서 본 발명의 실시예를 상세히 설명하는데, 본 발명 실시예는 결코 이에 제한되는 것이 아니다. 본 발명 중의 실시예에 기초하여, 통상의 기술자가 창조적 노동을 투입하지 않는다는 전제 하에 획득하는 모든 기타 실시예는, 모두 본 발명의 보호범위에 속한다.

실시예 1

화장품에 사용하기 위한 천연 항산화제에 있어서, 붉은 토끼풀 조다당 및 조이소플라본을 포함하고, 여기에서:

붉은 토끼풀 조다당 및 조이소플라본의 원료 배합비는 다음과 같음: 붉은 토끼풀 잎 조각 50g, 석유 에테르 탈지 0.2g, 40% 에탄올 5g, 무수에탄올 4g.

상기 화장품에 사용하기 위한 천연 항산화제에 기초하여, 본 실시예가 추출한 화장품에 사용하기 위한 천연 항산화제의 제조 방법은 다음 단계를 포함함:

단계(S101): 채집한 붉은 토끼풀 잎 조각을 105℃에서 10분 살청(殺靑)하고, 65℃에서 72시간 건조하고, 분쇄하고, 소량의 석유 에테르를 이용하여 4회 탈지하고, 용매를 휘발시켜 응달 건조하고;

단계(S102): 2g 탈지 붉은 토끼풀 분말을 칭량 수득하고, 25배 40% 에탄올을 이용하여 50℃에서 30분 초음파 보조 추출하고, 상청액을 여과 수집하고;

단계(S103): 샘플 잔여물에 20배 용매를 다시 첨가하여 30분 추출하고, 2회 추출액을 병합하고;

단계(S104): 추출액을 45℃에서 진공회전기를 사용하여 농축하고, 부피가 1/8이 되었을 때, 농축액에 대해 교반하면서 천천히 4배 부피의 무수에탄올을 첨가하여, 용액 에탄올 농도가 80%에 달하도록 하고, 4℃ 냉장고에 두어 밤새 정치하고, 4800rpm으로 10분 원심 분리하고, 원심 분리 후 갈색 침전은 조다당 부분이고, 상청은 이소플라본 부분이고;

단계(S105): 침전 부분을 무수에탄올을 사용하여 3회 반복 세척하고, 알코올 용해성 불순물을 세척하여 제거하고, 최종적으로 에탄올을 사용하여 침전을 세척하여 페트리 접시에 담고, 용매가 휘발되기를 기다려, 갈색의 붉은 토끼풀 조다당 45.2mg을 수득하고, 추출율은 2.26%이고, 상청액을 감압 농축하여, 붉은 토끼풀 조이소플라본 320.62mg을 수득하고, 추출율은 16.3%이다.

실시예 2

붉은 토끼풀 조이소플라본 샘플에는 단당, 올리고당, 무기염이 함유되어 있고, 진일보하게 정제할 필요가 있다.

붉은 토끼풀 조이소플라본 정제는 다음 단계를 포함함:

AB-8 거대다공성 흡착 수지 사전 처리: 수지를 95% 에탄올을 사용하여 24시간 침수시키고, 여과하고, 탈이온수를 사용하여 무알코올 향이 될 때까지 반복하여 헹구고, 용액을 헹궈 백색 혼탁이 없도록 하고, 다시 5% NaOH를 사용하여 24시간 침수시키고, 여과하고, 탈이온수를 사용하여 수지 pH가 중성을 나타낼 때까지 반복하여 헹구고, 다시 5% HCl 용액을 사용하여 24시간 침수시키고, 수지가 중성을 나타낼 때까지 여과하여 헹구고, 60℃에서 화건하여 준비하고;

정제: 사전 처리를 거친 수지를 증류수를 사용하여 48시간 이상 침수시키고, 습식법으로 컬럼을 장착하고, 수지 높이는 13cm이고, 조이소플라본 10g을 물을 사용하여 용해하고, 샘플을 로딩하고 흡착을 2시간 기다린 후, 각각 증류수, 30%, 50% 에탄올을 사용하여 각각 1BV 용리한 다음, 70% 에탄올을 사용하여 2BV 용리하고, 최종적으로 100% 에탄올을 사용하여 1BV 용리하고, 70% 에탄올 용리액을 수집하고, 감압 농축하여, 정제 이소플라본 1.73g을 수득하고, 이소플라본 함량은 42%이다.

실시예 3

붉은 토끼풀 조다당 샘플이 함유한 단백질, 단당, 올리고당, 무기염은, 진일보하게 정제할 필요가 있다.

붉은 토끼풀 조다당 정제는 다음 단계를 포함함:

단백 제거: 붉은 토끼풀 조다당을 증류수를 사용하여 2mg/ml 용액이 되도록 배합하고, 1/4 부피의 sevage 용액(N-부탄올:클로로포름 1:4)을 첨가하고, 20분 진동시키고, 분별 깔때기로 이동시켜 20분 정치하고, 하층 용액 및 중층의 단백질을 방출하고, 이러한 조작을 하층 유기 용매에 단백질이 더 이상 발생하지 않을 때까지 3회 반복하고;

투석: 단백질을 제거한 다당 용액을, 저온 감압 농축한 후, 사전 처리한 투석 주머니에 주입하고(규격 MD34, 분자량 컷오프는 3500Da), 대용량 비커에 투입하고, 증류수를 가득 채워 정치 투석하고, 8시간마다 1회 물을 교체하고, 24시간 투석한다. 1% AgNO₃을 사용하여 NaCl, KCl 등의 잔류 상황을 검사하고;

94.6g의 붉은 토끼풀 분말을 추출하고, 실시예 1에 따라 추출하고, 실시예 4 방법을 사용하여 단백을 제거하고, 투석하고, 최종적으로 정제된 다당 0.83g을 수득하고, 추출율은 0.877%이다.

실시예 4

DPPH·는 인공 합성된 안정적인 유리기에 속하며, 가시광선 영역에서 흡수 특징이 있고, 측정 방법이 간단하고, 속도가 빠르고 재현성이 좋다.

실시예 1 내지 3이 제조한 플라본류, 및 플라본과 다당 혼합 샘플은 모두 70% 에탄올로 배합 제조되고, 다당 샘플, 양성 대조군 비타민C(Vc) 및 비타민 E(Ve)는 증류수를 사용하여 배합 제조되고, 각각의 테스트 물질에 1.280mg/ml의 원액을 배합 제조하고, 다시 7개의 농도 구배(gradient)가 되도록 희석하여 사용 준비한다.

96웰 ELISA plate에 각 농도의 테스트 용액 75μL을 정확히 첨가하고, 0.1mM DPPH 70% 에탄올 용액 150μL을 다시 첨가하고, 각각의 농도의 반응 웰에는 모두 블랭크 대조군이 설치되고, 블랭크 대조군은 75μL 테스트 용액 및 150μL 에탄올이고, 반응한 총 부피는 225μL이고, 충분히 흔들어 균일하게 하고, 암흑에서 실온에 30분 둔 후, 파장이 519nm인 지점의 흡광값을 측정한다. 흡광도의 하강은 유리기 활성의 증가를 제거했음을 나타내고, 각각의 샘플을 각각의 농도에 대해 3회 반복한다.

제거율=[A₀-(A₁-A₂)]/A₀

A₀은 DPPH 용액에 농도가 0인 테스트 용액을 첨가한 흡광값이고, A₁은 테스트 용액이 DPPH와 반응한 후의 흡광값이고, A₂는 블랭크 대조군(즉 각 테스트 용액과 블랭크 용매의 흡광값)이다.

DPPH항산화 활성

샘플	IC₅₀ of DPPH (μg/mL)
붉은 토끼풀 이소플라본	53.23±1.27^c
붉은 토끼풀 다당	51.43±2.72^c
1P：2 IF	37.49±5.98^b
2P：1 IF	64.87±3.18^d
3P：1 IF	86.11±2.88^e
Vc	2.95+0.39^a
Ve	5.33+0.45^a

비고: P는 정제 붉은 토끼풀 다당을 의미하고, IF는 정제 붉은 토끼풀 이소플라본을 의미하고, 양자는 질량비에 따라 혼합된다. 소문자는 유의적 차이(P<0.05)를 의미한다.

표 1로부터 알 수 있듯이, 붉은 토끼풀의 정제 다당 활성은 정제 이소플라본에 상당한다. 양자의 혼합 질량비가 1:2일 때 활성이 가장 높고, 각각의 샘플에서 현저히 우수하다. 다당 함량이 증가함에 따라, DPPH 활성은 현저히 하강한다.

실시예 5

과산화 양이온 항산화 활성 측정

O^2-·는 유기체 내 수명이 비교적 긴 일종의 유리기이다. 유리기 연쇄반응 중 O^2-·는 개시제로서 기타 유리기의 생성을 촉진하고, 유기체에 대해 진일보한 위해를 야기하고, 여러 종류의 질병과 밀접하게 관련된다. 따라서, 샘플이 O^2-·를 제거하는 기능은 항산화물질 활성으로서의 중요 지표가 된다.

실시예 1 내지 3이 제조한 플라본류, 및 플라본과 다당 혼합 샘플은 모두 70% 에탄올로 배합 제조되고, 다당 샘플, 양성 대조군 비타민 C(Vc) 및 비타민 E(Ve)은 증류수를 이용하여 배합 제조되고, 각각의 테스트 물질에 1.280mg/ml의 원액을 배합 제조하고, 다시 7개의 농도 구배가 되도록 희석하여 사용 준비한다.

PMS-NADH-NBT 시스템법을 사용하여 과산화 양이온 (O^2-·) 제거 활성을 측정하고, 그 원리는, 환원형 코엔자임 I(니코틴아미드아데닌디뉴클레오티드, NADH) 환원 페나진메틸설페이트(PMS)로 과산화 양이온을 생성하고, O^2-· 및 니트로테트라졸리움 블루 클로라이드(NBT)는 반응하여 파란색 산물을 생성하고, 560nm에서 강한 흡수 피크(peak)를 가지고, 항산화 물질이 PMS-NADH-NBT 시스템으로 첨가된 후, O^2-와 NBT 반응을 억제하고, 흡광도 측정을 통해 항산화 물질의 유리기 제거 능력을 계산할 수 있다. 96웰 ELISA plate에 30μL NBT(144 μmol/L), 100μL 테스트 용액(2.50-125.0μg/mL, 용매를 사용하여 샘플액을 대체하여 블랭크가 되도록), 30μL NADH(0.68mmol/L, 인산 완충액을 사용하여 배합 제조), 30μL 새로 배합 제조한 PMS(60μmol/L) 30μL pH 7.4 인산 완충액을 순차적으로 첨가한다. 블랭크 튜브는 120μL 완충액 및 100μL 테스트 용액이고, 30초, 5분 진동 후 테스트 용액 560nm 지점에서의 흡광값을 측정한다.

과산화 양이온 항산화 활성

샘플	IC₅₀ of O^2-· (μg/mL)
붉은 토끼풀 이소플라본	219.58±6.95 ^b
붉은 토끼풀	2.37±0.03 ^a
1P：2 IF	3.15±0.01 ^a
2P：1 IF	2.46±0.19 ^a
3P：1 IF	2.17±0.03 ^a
Vc	208.83±10.41 ^b
Ve	353.33±4.16 ^c

표 2로부터 알 수 있듯이, 붉은 토끼풀의 이소플라본의 활성은 Vc, Ve에 상당하는데, 붉은 토끼풀 다당 활성은 Vc 및 Ve보다 현저히 높고, 특히 정제 다당 활성은 양성 대조군보다 100배 높다. 3종 복합물 활성은 정제 다당에 상당하고, 다당 함량의 증가에 따라, 활성이 약간 증가한다.

실시예 6

2종 성분 항산화 활성 간의 관계를 판단하는 방법 - 연합 지수(CI, combination index) - 을 이용하여 붉은 토끼풀 이소플라본과 다당의 연합 항산화 작용의 효과를 평가한다. 본 발명자들은 여기에서 Talady 및 Chou의 중간 효과 원리 연합 작용 지수 CI를 채용하였다.

CI = D₁/ D_{X 1} + D₂/ D_{X 2}

D₁ 및 D₂는 플라본 및 다당 연합 작용 억제율이 50%일 때의 작용 농도이다. D_x1 및 D_x2는 플라본 및 다당이 단독 작용할 때의 작용 억제율이 50%일 때의 작용 농도이다.

Talady 및 Chou의 이론에 기초하여, CI=1인 경우, 약물(1) 및 약물(2)은 연합 작용 효과가 중첩되는 작용을 가지는 것임을 의미하고; CI>1인 경우, 약물(1) 및 약물(2) 연합 작용 효과가 길항 작용을 가지는 것임을 의미하고; CL<1인 경우, 약물(1) 및 약물(2) 연합 작용이 시너지 작용을 가지는 것임을 의미한다.

연합 길항 항산화 작용 지수CI

샘플	CI of DPPH	CI of O^2-·
1P：2 IF	0.71±0.11 ^a	0.45±0.002 ^a
2P：1 IF	1.25±0.06 ^b	0.69±0.053 ^b
3P：1 IF	1.66±0.06 ^c	0.69±0.009 ^b

비고: 소문자는 유의적 차이(P<0.05)를 나타낸다.

표 3으로부터 알 수 있듯이, 다당과 이소플라본 양자의 혼합 질량비가 1:2인 경우, 2종류 성분은 상호 협동하고, 여기에서 과산화 양이온의 시너지 작용이 더 강하다. 그러나 다당 함량이 증가함에 따라, DPPH 활성에 대해, 2종류 성분은 일정 정도의 길항 작용이 발생한다.

실시예 7

수용성 측정 방법: 각 측정 샘플을 정확히 칭량 수득하고, 각각 0.5mg, 25℃ 실온 환경에서, 1ml 증류수가 첨가된 투명한 원심 분리관에, 순차적으로 5.0mg를, 침전이 발생할 때까지 첨가한다. 반복 조작하되 첨가 후 완전 용해가 불가능할 때 첨가를 중지하고, 가속 용해를 사용할 수 있고, 그 후 1ml 증류수 중 각각의 샘플 첨가량을 기록하고, 용해되지 않은 부분의 질량을 관찰하여 계산하고, 1ml 증류수 중의 실제 용해량을 도출한다.

다른 제조 성분의 물에서의 용해 범위

샘플	수용성 (g/L, 25℃)
붉은 토끼풀 다당	25-30
붉은 토끼풀 이소플라본	5-10

본 발명은 붉은 토끼풀을 원료로 하는데, 제조된 서로 다른 유형의 천연 항산화 성분은 그 기능 및 적용 범위가 다소 차이가 있고, 이는 다방면과 다용도로 화장품 연구개발 및 생산에 응용되는 조건을 제공하고, 시장 전망이 매우 밝다. 여기에서, 정제 붉은 토끼풀 다당은 높은 활성을 구비하고, 수용성이 좋은 장점이 있다. 그 다음으로, 비용을 고려하면, 양자 성분을 채용하여 화합하는 방안을 채용할 수 있고, 특히 다당과 이소플라본의 질량비가 1:2일 때, 2종류 성분 간의 시너지 효과가 가장 좋고, 활성이 가장 높다.

그 밖에, 붉은 토끼풀 자체는 일종의 우량 목초로, 그것의 이소플라본도 보건품으로서 국내외에서 널리 판매되고 있는데, 따라서 그 식물을 이용하여 제조된 화장품은 친환경적일 뿐만 아니라, 인체에도 매우 안전하고, 자원도 풍부하다.

Claims

화장품에 사용하기 위한 천연 항산화제에 있어서,
붉은 토끼풀 추출물로부터 수득된 정제 다당과 정제 이소플라본의 복합물을 포함하고,
정제 다당과 정제 이소플라본의 복합물은 질량비 1:2로 배합되는 것을 특징으로 하는,
화장품에 사용하기 위한 천연 항산화제.
삭제
제1항의 화장품에 사용하기 위한 천연 항산화제의 제조 방법에 있어서,
단계(S1): 붉은 토끼풀 추출물의 제조
채집한 붉은 토끼풀 잎 조각을 105℃에서 2분 내지 60분 살청(殺靑)하고, 65℃에서 1시간 내지 160시간 건조하고, 분쇄하고, 소량의 석유 에테르를 이용하여 1회 내지 10회 탈지하고, 용매를 휘발시켜 응달 건조하고, 일정 품질의 탈지 붉은 토끼풀 분말을 칭량 수득하고, 10배 내지 50배의 10% 내지 100% 에탄올을 사용하여 30℃ 내지 70℃에서 10분 내지 90분 동안 초음파로 제1차 추출하고, 상청액을 여과 수집하고, 샘플 잔여물에 5배 내지 120배 용매를 다시 첨가하여 10분 내지 90분 동안 제2차 추출하며, 상기 제1차 추출물과 제2차 추출물을 혼합하여 붉은 토끼풀 추출물을 수득하는 단계;
단계(S2): 조다당 및 조이소플라본의 제조
조다당: 단계(S1)에서 수득된 붉은 토끼풀 추출물을 15℃ 내지 90℃에서 진공 회전기를 사용하여 농축하고, 부피가 1/8이 되었을 때, 농축액에 대해 교반하면서 천천히 2배 내지 20배 부피의 무수에탄올을 첨가하고, 4℃ 냉장고에 두어 밤새 정치하고, 4800rpm으로 2분 내지 20분 원심 분리하고, 원심 분리 후 갈색 침전은 조다당 부분이고, 침전 부분은 무수에탄올을 사용하여 1회 내지 10회 반복 세척하고, 알코올 용해성 불순물을 세척하여 제거하고, 최종적으로 에탄올을 사용하여 침전을 세척하여 페트리 접시에 담고, 용매가 휘발되기를 기다려, 갈색의 붉은 토끼풀 조다당을 수득하고;
상청은 이소플라본 부분이고, 상청액에 대해 감압 농축하여, 붉은 토끼풀 조이소플라본을 수득하는 단계;
단계(S3): 붉은 토끼풀 이소플라본의 정제
사전 처리를 거친 거대다공성 흡착 수지를 증류수를 이용하여 10시간 내지 90시간 이상 침수시키고, 습식법으로 컬럼을 장착하고, 수지 높이는 3cm 내지 50cm이고, 조이소플라본 1g 내지 30g을 물을 사용하여 용해하고, 샘플을 로딩하고 흡착을 0.5시간 내지 24시간 기다린 후, 각각 증류수, 30%, 50% 에탄올을 사용하여 각각 1BV 내지 5BV 용리한 다음, 70% 에탄올을 사용하여 1BV 내지 5BV 용리하고, 최종적으로 100% 에탄올을 사용하여 1BV 내지 10BV 용리하고, 70% 에탄올 용리액을 수집하고, 감압 농축하고, 정제 이소플라본을 수득하는 단계;
단계(S4): 붉은 토끼풀 다당의 정제
단백 제거: 붉은 토끼풀 조다당을 증류수를 이용하여 1mg/ml 내지 10mg/ml 용액이 되도록 배합하고, 1/4 부피의 sevage 용액을 첨가하고, 1분 내지 30분 진동시키고, 분별 깔때기로 이동시켜 1분 내지 120분 정치하고, 하층 용액 및 중층의 단백질을 방출하고, 이러한 조작을 하층 유기 용매에 단백질이 더 이상 발생하지 않을 때까지 1회 내지 6회 반복함;
투석: 단백질을 제거한 다당 용액을, 저온 감압 농축한 후, 사전 처리한 투석 주머니에 주입하고, 대용량 비커에 투입하고, 증류수를 가득 채워 정치 투석하고, 1시간 내지 16시간마다 1회 물을 교체하고, 1시간 내지 72시간 투석하고, 1%의 AgNO₃을 사용하여 NaCl, KCl 등의 잔류 상황을 검사하고, 마지막으로 정제된 다당을 수득하는 단계; 및
상기 단계(S4)에서 수득된 붉은 토끼풀 정제 다당과 단계(S3)에서 수득된 붉은 토끼풀 정제 이소플라본을 배합하여 정제 다당과 정제 이소플라본의 복합물을 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는,
제조 방법.
제3항에 있어서,
단계(S3)에서, 거대다공성 흡착 수지의 사전 처리는: 수지를 20% 내지 100% 에탄올을 사용하여 1시간 내지 72시간 침수시키고, 여과하고, 탈이온수를 이용하여 무알코올 향이 될 때까지 반복하여 헹구고, 용액을 헹궈 백색 혼탁이 없도록 하고, 다시 1% 내지 30% NaOH를 사용하여 1시간 내지 72시간 침수시키고, 여과하고, 탈이온수를 사용하여 수지 pH가 중성을 나타낼 때까지 반복하여 헹구고, 다시 1% 내지 30% HCl 용액을 사용하여 1시간 내지 72시간 침수시키고, 수지가 중성을 나타낼 때까지 여과하여 헹구고, 20℃ 내지 90℃에서 화건(火乾)하여 준비하는 것을 특징으로 하는,
제조 방법.