KR102422411B1 - Pd-l1-특이적 항체 및 이를 사용하는 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 일반적으로 프로그래밍된 사멸-리간드 1(PD-L1)에 결합하는 항체 및 이의 기능성 결합 단편에 관한 것이다. 특히, 개시된 항체 및 단편은 인간 PD-L1에 결합하고 본원에 개시된 신규한 상보적인 결정 영역(CDR)을 포함한다. 마지막으로, 본 발명은 암에 걸린 피험자에게 개시된 항체 및 단편을 투여함으로써, 암의 발달 또는 증식을 치료하거나 또는 지연시키는 것에 관한 것이다.

Description

PD-L1-특이적 항체 및 이를 사용하는 방법{PD-L1-Specific Antibodies and methods of using the same}
본 출원은 ASCII 형식으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함하며, 그 전체가 본 명세서에 참고로 병합되어 있다. 2017 년 6 월 19 일자로 만들어진 상기 ASCII 사본의 명칭은 099263-0802_SL.txt이며, 그의 크기는 43,085 바이트이다.
본 발명은 일반적으로 프로그래밍된 사멸-리간드 1(PD-L1)에 결합하는 항체 및 이의 기능성 결합 단편에 관한 것이다. 특히, 기술된 항체 및 단편은 인간 PD-L1에 결합하고 신규의 상보적 결정 영역(CDRs)을 포함한다. 최종적으로, 본 발명은 암에 걸린 피험자에게 기술된 항체 및 단편을 투여하여, 이에 의해 암의 진행 또는 증식을 치료하거나 또는 지연시키는 것에 관한 것이다.
PD-L1(이전에는 B7-H1)은 항원 전달 세포("APC") 및 활성화된 T 세포를 포함하는 많은 세포 유형에서 발현되는 B7 계열 구성원이다[야마자키(Yamazaki) 등의 (2002) J. Immunol 169:5538 참조]. PD-L1은 PD-1(CD279) 및 B7-1에 모두 결합한다. PD-L1에 의한 T 세포 발현 B7-1의 결합 및 B7-1에 의한 T 세포 발현 PD-L1의 결합은 모두 T 세포 억제를 초래한다[부트(Butte) 등의 (2007) Immunity 27:111 참조]. 다른 B7 계열 구성원과 마찬가지로, PD-L1도 또한 T 세포에 대한 동시 자극적 신호를 제공할 수 있다는 증거가 있다[스부디(Subudhi) 등의 (2004) J. Clin. Invest. 113:694, 타무라(Tamura) 등의 (2001) Blood 97: 1809 참조]. 더욱이, 세포 표면에서 PD-L1의 발현은 IFN-γ 자극을 통해 상향 조절되는 것으로 나타나 있다.
PD-1과 그의 리간드 파트너들인 PD-L1(B7-H1; CD274) 및 PD-L2(B7-DC; CD273) 사이의 상호 작용은 T 세포 활성화의 조절에 수반되는 중요한 음성 동시 자극적 신호 전달 경로이다. PD-1은 T 세포, B 세포, 천연 킬러 T 세포, 활성화 단핵 세포 및 수지상 세포(DC)에서 발현될 수 있다. PD-1은 활성화된 인간 CD4+ 및 CD8+ T 세포, B 세포 및 골수 세포에 의해 발현되지만, 자극받지 않은 인간 CD4+ 및 CD8+ T 세포, B 세포 및 골수 세포에 의해서는 발현되지 않는다[니시무라(Nishimura) 등의 Int. Immunol. 8: 773-80 (1996); 보에틀러(Boettler) 등의 J. Virol. 80: 3532-40 (2006) 참조]. (i) 엑손(exon) 2, (ii) 엑손 3, (iii) 엑손 2 및 3 또는 (iv) 엑손 2 내지 4를 결여한 전사체를 포함하여, 활성화된 인간 T 세포로부터 복제된 적어도 4 개의 PD-1의 변종이 존재한다[나일센(Nielsen) 등의 Cell. Immunol. 235: 109-16 (2005) 참조].
편도선, 태반, 및 폐와 간에서의 대식 세포-유사 세포의 작은 단편을 제외하고, 정상적인 생리 조건하에서 PD-L1 mRNA이 엄격한 전사 후 조절 중에 있으면, 정상 인간 조직들은 PD-L1 단백질을 그들의 세포 표면에서 거의 발현하지 않는다. 이와는 대조적으로, 첸 & 한(Chen & Han)의 문헌[Anti - PD-1 / PD-L1 therapy of human cancer: past, present, and future. J. Clin. Invest. 125, 3384-3391 (2015)]에 나타내는 바와 같이, PD-L1 단백질은 다양한 인간 암에서 세포 표면에 풍부하게 발현된다.
다른 한편으로, PD-L2 발현은 PD-L1보다 더욱 제한적이다. 예를 들어, PD-L2는 DC, 대식 세포 및 골수-유래 비만 세포에서 유도 가능하게 발현된다.
부가적으로, 몇몇 연구는 PD-1에 독립적인 PD-L1에 대한 수용체를 보여준다. B7.1은 또한 PD-L1에 대한 결합 파트너로서 확인되었다[부트(Butte) 등의 Immunity 27: 111-22 (2007) 참조]. 화학적 가교 결합 연구는 PD-L1 및 B7.1이 IgV와 유사한 영역을 통해 상호 작용할 수 있음을 제안하고 있다. B7.1:PD-L1 상호 작용은 T 세포 내로 억제 신호를 유도할 수 있다. B7.1에 의해 CD4+ T 세포상에서 PD-L1의 결합 또는 PD-L1에 의해 CD4+ T 세포상에서 B7.1의 결합은 억제 신호를 전달한다. CD28 및 CTLA-4가 결핍된 T 세포는 항-CD3 + B7.1 코팅 비드(coated bead)에 의해 자극될 때 감소된 증식 및 사이토카인(cytokine) 생성을 나타낸다. B7.1에 대한 모든 수용체(즉, CD28, CTLA-4 및 PD-L1)가 결핍된 T 세포 에서, T 세포 증식 및 사이토카인 생성은 항-CD3 + B7.1 코팅 비드에 의해 더 이상 억제되지 않았다. 이것은 B7.1이 CD28 및 CTLA-4의 부재하에 T-세포상에서 PD-L1을 통해 특이적으로 작용한다는 것을 나타낸다. 유사하게, PD-1이 결핍된 T 세포는, 항-CD3 + PD-L1 코팅 비드의 존재하에 자극될 때, 감소된 증식 및 사이토카인 생성을 나타냈으며, 이는 T 세포상에서 B7.1에 대한 PD-L1 결합의 억제 효과를 입증한다. T 세포가 PD-L1에 대한 모든 공지된 수용체를 결여(즉, PD-1 및 B7.1이 없음)할 때, T 세포 증식은 항-CD3 + PD-L1 코팅 비드에 의해 더 이상 손상되지 않는다. 그러므로, PD-L1은 B7.1 또는 PD-1을 통해 T 세포에 대한 억제 효과를 발휘할 수 있다.
인간 질병의 맥락에서, PD-L1 발현은 인간 폐, 난소암, 결장암 및 다양한 골수종을 비롯하여 몇 개의 쥐와 인간암에서 밝혀졌다[이와이(Iwai) 등의 (2002) PNAS 99: 12293-7; 오히가와시(Ohigashi) 등의 (2005) Clin Cancer Res 11: 2947-53 참조]. PD-L1은, 항원-특이적 T-세포 클론의 세포 자멸을 증가시킴으로써, 종양 면역의 역할을 하는 것으로 제안되었다[동(Dong) 등의 (2002) Nat Med 8: 793-800 참조]). 또한, PD-L1이 장 점막 염증에 연루되어 있고, PD-L1의 억제가 대장염과 관련된 소모성 질환을 억제할 수도 있다는 것이 제안되었다[카나이(Kanai) 등의 (2003) J Immunol 171: 4156-63 참조].
결과적으로, PD-L1의 표적 치료는 의학적 관심사가 강렬한 영역이다. PD-L1 징후의 억제는 암의 치료(예를 들어, 종양 면역력), 및 급성 및 만성(예를 들어, 지속성) 감염 모두를 포함하는 감염 치료를 위해 T 세포 면역력을 향상시키는 수단으로서 제안되어 왔다. 그러나, 단 하나의 표적화된 항-PD-L1 치료제만이 현재까지 FDA로부터 마케팅 승인을 받았기 때문에, 충족되지 않은 상당한 의학적 요구가 존재하고 있다.
본 발명은 단리된 항체, 특히 PD-L1에 결합하고 바람직한 치료학적 특성을 나타내는 인간 항체를 제공한다. 이러한 특성은 PD-L1, 특히 인간 PD-L1에 대한 높은 친화성 결합을 포함한다.
일 양태에 있어서, 본 발명은 인간 프로그래밍된 사멸-리간드 1(PD-L1)에 결합하는 항체 또는 이의 기능성 단편에 관한 것으로서, 상기 항체 또는 이의 기능성 단편은 서열 인증 번호 1의 아미노산 1-3 및 7-9를 포함하는 CDRH1(여기서, 아미노산 4-6은 SSY가 아니다); 서열 인증 번호 8의 아미노산 9-17을 포함하는 CDRH2; 및 서열 인증 번호 15를 포함하는 CDRH3를 포함하는 중쇄; 및 서열 인증 번호 20을 포함하는 CDRL1; 서열 인증 번호 21을 포함하는 CDRL2; 및 서열 인증 번호 22, 서열 인증 번호 75 또는 서열 인증 번호 76을 포함하는 CDRL3을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에 있어서, CDRH1 영역은 서열 인증 번호 2, 3, 4, 5, 6 및 7로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 일부 구현예에 있어서, CDRH2 영역은 서열 인증 번호 8, 9, 10, 11, 12, 13 및 14로 이루어진 군으로부터선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 가변성 중쇄 골격 영역 1은 서열 인증 번호 26 또는 서열 인증 번호 27을 포함한다. 일부 구현예에서, 가변성 중쇄 골격 영역 2는 서열 인증 번호 28을 포함하며, 가변성 중쇄 골격 영역 3은 서열 인증 번호 29를 포함하고, 및/또는 가변성 중쇄 골격 영역 4는 서열 인증 번호 30을 포함한다.
일부 구현예에서, 가변성 경쇄 골격 영역 1은 서열 인증 번호 31을 포함하며, 가변성 경쇄 골격 영역 2는 서열 인증 번호 32를 포함하고, 가변성 경쇄 골격 영역 3은 서열 인증 번호 33, 서열 인증 번호 77 또는 서열 인증 번호 78을 포함하고, 및/또는 가변성 경쇄 골격 영역 4는 서열 인증 번호 34를 포함한다.
일부 구현예에서, 가변성 중쇄 서열은 서열 인증 번호 36, 37, 38, 39, 40 및 41로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 가변성 중쇄 서열은 서열 인증 번호 51, 52, 53, 54, 55 및 56으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에 있어서, 가변성 경쇄 서열은 서열 인증 번호 42를 포함한다.
일부 구현예에 있어서, 항체 또는 이의 기능성 단편은 항체 의존성 세포 독성(ADCC) 활성을 나타내며, 항체 또는 그의 기능성 단편은 항종양 활성을 나타내며, 항체 또는 그의 기능성 단편은 PD-1에 대한 PD-L1의 결합을 억제하거나, 또는 그의 항체 또는 기능성 단편은 T- 세포 활성화의 PD-1 매개 억제를 방지한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 기능성 단편은 저 푸코오스(fucose) 항체 또는 이의 기능성 단편이고, 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 기능성 단편은 탈푸코실화(defucosylated)되거나 또는 어푸코실화(afucosylated)된다.
또 다른 양태에 있어서, 본 발명은 인간 프로그래밍된 사멸-리간드 1(PD-L1)에 결합하는 항체 또는 이의 기능성 단편에 관한 것으로, 여기서 항체 또는 이의 기능성 단편은 서열 인증 번호 35를 포함하는 중쇄를 포함한다.
또 다른 양태에 있어서, 본 발명은 인간 프로그래밍 사멸-리간드 1(PD-L1)에 결합하는 항체 또는 그의 기능성 단편에 관한 것으로, 상기 항체 또는 이의 기능성 단편은 서열 인증 번호 16을 포함하는 CDRH1; 서열 인증 번호 17을 포함하는 CDRH2; 및 서열 인증 번호 18의 아미노산 6-13을 포함하는 CDRH3을 포함하는 중쇄; 및 서열 인증 번호 23을 포함하는 CDRL1; 서열 인증 번호 24를 포함하는 CDRL2; 및 서열 인증 번호 25를 포함하는 CDRL3를 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, CDRH3은 서열 인증 번호 18을 포함하고, 일부 구현예에서 CDRH3은 서열 인증 번호 19를 포함한다.
일부 구현예에서, 가변성 중쇄 골격 영역 1은 서열 인증 번호 49를 포함하고, 가변성 중쇄 골격 영역 2는 서열 인증 번호 28을 포함하고, 가변성 중쇄 골격 영역 3은 서열 인증 번호 50을 포함하고, 및/또는 가변성 중쇄 골격 영역 4는 서열 인증 번호 30을 포함한다.
일부 구현예에서, 가변성 경쇄 골격 영역 1은 서열 인증 번호 45를 포함하고, 가변성 경쇄 골격 영역 2는 서열 인증 번호 46을 포함하고, 가변성 경쇄 골격 영역 3은 서열 인증 번호 47을 포함하고, 및/또는 가변성 경쇄 골격 영역 4는 서열 인증 번호 34를 포함한다.
일부 구현예에서, 가변성 중쇄 서열은 서열 인증 번호 48 또는 49를 포함하고, 일부 구현예에서는 가변성 경쇄 서열은 서열 번호 50을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 그의 기능성 단편은 항체 의존성 세포 독성(ADCC) 활성을 나타내며, 항체 또는 그의 기능성 단편은 항종양 활성을 나타내며, 항체 또는 그의 기능성 단편은 PD-1에 대한 PD-L1의 결합을 억제하거나, 또는 항체 또는 그의 기능성 단편은 T-세포 활성화의 PD-1 매개 억제를 방지한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 기능성 단편은 저 푸코오스 항체 또는 이의 기능성 단편이고, 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 기능성 단편은 탈푸코실화되거나 또는 어푸코실화된다.
일부 구현예는 상기 기술된 항체 또는 이의 기능성 단편을 포함하는 약학적조성물에 관한 것이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 상기 기술된 항체 또는 이의 기능성 단편을 암에 걸린 피험자에게 투여하는 것을 포함하는, 피험자에서 암세포 증식을 억제하는 방법에 관한 것이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 본 발명은 적어도 2.50 x 10-8의 KD 및 서열 인증 번호 18의 아미노산 6-13을 포함한 CDRH3와 인간 PD-L1을 결합하는 항체 또는 그의 기능성 단편을 암에 걸린 피험자에게 투여하는 것을 포함하는, 피험자에서 종양 세포 증식을 억제하는 방법에 관한 것이다. 마찬가지로, 일부 구현예에서, 본 발명은 적어도 8.30 x 10-9의 KD 및 서열 인증 번호 15을 포함한 CDRH3와 인간 PD-L1을 결합하는 항체 또는 그의 기능성 단편을 암에 걸린 피험자에게 투여하는 것을 포함하는, 피험자에서 암세포 증식을 억제하는 방법에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 암은 혈액암, 신경암, 유방암, 위장암, 신장 세포 암종 또는 비뇨 생식기암이다. 특히, 일부 구현예에서, 위장암은 결장암이며; 비뇨 생식기암은 난소암, 전립선암 또는 방광암이며; 혈액암은 림프종, 비-호지킨 림프종(Non-Hodgkin's lymphoma), 만성 림프성 백혈병 또는 다발성 골수종이며; 또는 신장 세포 암종은 명확한 세포 신장 세포 암종이다.
일부 구현예에서, 암은 흑색종, 폐암(비-소 세포 폐암과 같은), 두경부암, 간암, 췌장암, 골암 또는 혈관암이다.
일부 구현예에서, 암은 고도의 면역원성 암종이거나 또는 암은 PD-L1 발현 암이다.
일부 구현예에 있어서, 본 방법은 추가의 치료 화합물을 피험자에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가의 치료 화합물은 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포, 종양-표적 항체, 면역 반응 증진 양상 또는 소분자 약물이다.
일부 구현예에 있어서, 면역 반응 증진 양상은 항-GITR 항체, 항-OX40 항체, 항-CD137 항체 또는 TLR 작용제이다.
일부 구현예에 있어서, 종양-표적 항체는 항-CAIX 항체이다.
일부 구현예에 있어서, 소분자 약물은 BTK 억제제, EGFR 억제제, PARP 억제제, BET 억제제, BRAF 억제제 또는 PI3K 델타 억제제와 같은 종양-표적 소분자 약물이다.
전술한 전반적인 설명 및 하기의 상세한 설명은 예시적이고 설명적인 것이며, 청구된 바와 같은 추가의 상세한 설명을 제공하기 위한 것이다. 다른 목적, 장점 및 신규한 특징은 하기의 도면의 간단한 설명 및 명세서의 상세한 설명으로부터 당업자에게 용이하게 명백할 것이다.
본 발명은 단리된 항체, 특히 PD-L1에 결합하고 바람직한 치료학적 특성을 나타내는 인간 항체를 제공한다. 이러한 특성은 PD-L1, 특히 인간 PD-L1에 대한 높은 친화성 결합을 포함한다.
도 1은 항-PD-L1 항체에 의해 PD-L-1+ 세포에 대한 PD-1 결합의 억제율(%)을 나타낸다. 결과는 FACS 분석을 사용하여 얻어졌다.
도 2는 (A) 인간 PD-L1, (B) 마우스 PD-L1 및 (C) 사이노(cyno) PD-L1에 대한 예시적인 항-PD-L1 항체 CTI-48의 결합 동역학을 나타낸다.
도 3은 예시적인 항-PD-L1 항체 CTI-48이 일차 NK 세포를 갖는 PD-L1+ 림프종 세포에서 ADCC 활성을 나타내는 것을 도시한다.
도 4는 선택된 항-PD-L1 항체로 면역 차단의 리포터(NFAT) 생물학적 분석에서 PD-L1에 의한 T-세포 억제의 역전을 보여준다.
도 5는 CTI-48 및 임상 대조군 mAb에 의해 B7.1에 대한 PD-L1 결합의 차단을 나타낸다.
도 6은 IFN-γ 생성에 대한 상기 개시된 항체의 효과를 나타낸다. 항체를 10 μg/mL의 농도로 혼합된 림프구 반응(MLR) 배양물에 투여했다. 데이터를 비히클 대조군에 대해 표준화하고, 조합된 평균 +SEM(n=6)으로서 나타냈다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001은 Dunnett의 다중 비교 포스트-홋(post-hoc) 시험으로 일반적인 원-웨이 아노바(one-way ANOVA)를 사용하여 적절한 동기준(isotype) 대조군(hIgG1)과 비교했을 때 통계적 유의성을 나타낸다. 본 도면은 CTI-48과 임상 대조군 mAb를 나란히 비교한 것을 나타낸다.
본 발명의 조성물 및 방법은, 달리 나타내지 않는 한, 분자 생물학(재조합 기술을 포함), 미생물학, 세포 생물학, 생화학 및 면역학의 통상적인 기술을 사용하며, 이러한 기술들은 당 업계의 기술 범위 내에 있다. 이러한 기술들은 문헌[Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 제 2 판(Sambrook 등, 1989); 올리고뉴클레오티드 합성(M.J. Gait, ed., 1984); 동물 세포 배양(R.I. Freshney, ed., 1987); Methods in Enzymology(Academic Press, Inc.); Current Protocols in Molecular Biology(F. M. Ausubel et al., eds 1987, 및 주기적 업데이트); PCR: 중합효소 연쇄반응(Mullis et al., ed., 1994); 분자 복제에 대한 실용 가이드(Perbal Bernard V., 1988); Phage Display: 실험실 매뉴얼(Barbas et al., 2001)]에 충분히 설명되어 있다.
I. 정 의
방법들은 기술된 특정 구현예들에 한정되어 있지 않으며, 다양한 방식으로 구현할 수도 있음을 이해해야 한다. 또한, 본 명세서에서 사용된 용어는 특정 구현예만을 설명하기 위한 것이지, 이들로 제한하려는 것은 아니다. 본 발명의 기술의 범위는 첨부된 특허 청구 범위에 의해서만 제한될 것이다.
본원에 사용된 바와 같이, 특정 용어들은 하기 정의된 의미들을 가질 수 있다. 명세서 및 특허 청구 범위에서 사용된 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥 상 명확하게 달리 지시하지 않는 한 단수 및 복수의 의미를 포함한다. 예를 들어, "세포"라는 용어는 단일 세포뿐만 아니라 이들의 혼합물을 포함하는 다수의 세포들을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "포함하는"이라는 용어는 상기 조성물 및 방법이 인용된 요소들을 포함하지만, 다른 요소들도 배제하지 않는 것을 의미하는 것으로 의도된다. 조성물 및 방법을 정의하기 위하여 사용되는 경우, "필수적으로 구성되는" 이란 필수적인 중요한 것들의 다른 성분을 조성물 또는 방법에서 제외시킨다는 것을 의미한다. "구성되는"이란 청구된 조성물 및 실질적인 방법 단계에 대해 다른 성분들의 미량 원소라도 배제하는 것을 의미한다. 이들 이행 용어들 각각에 의해 정의된 구현예들은 본 발명의 범위 내에 있다. 따라서, 본 방법 및 조성물은 부가적인 단계 및 성분들을 포함(comprising)하거나 또는 택일적으로 의미 없는 단계 또는 조성물을 포함(필수적으로 구성되는)하거나 또는 택일적으로 명시된 방법 단계 또는 조성물만을 포함(구성되는)할 수 있는 것으로 의도되어 있다.
본원에 사용된 바와 같이, "약"은 플러스 또는 마이너스 10 %를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "선택적인" 또는 "선택적으로"는 후속적으로 기술되는 사건 또는 상황이 일어날 수도 있고 일어나지 않을 수도 있음을 의미하며, 상기 기술이 상기 사건 또는 상황이 일어나는 경우 및 일어나지 않는 경우를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, "개체", "환자"또는 "피험자"라는 용어는 개별 유기체, 척추 동물, 포유류(예를 들어, 소, 개, 고양이 또는 말) 또는 인간일 수 있다. 바람직한 구현예에서, 개체, 환자 또는 피험자는 인간이다.
본원에서 사용된 바와 같이, "단리된 항체"라는 용어는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로없는 항체를 의미한다(예를 들어, PD-L1에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 PD-L1에 결합하지 않는 항체가 실질적으로 없다). 그러나, PD-L1의 에피토프(epitope)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 PD-L2 또는 PD-1과 같은 다른 단백질뿐만 아니라, 다른 종으로부터의 단백질에 대해서도 교차 반응성을 가질 수 있다. 그러나, 항체는 항상 인간 PD-L1에 결합하는 것이 바람직하다. 또한, 단리된 항체는 전형적으로 다른 세포 물질 및/또는 화학 물질이 실질적으로 없다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "인간화 항체"란 인간 이외의 포유 동물에서 유래된 항체의 CDR, 및 인간 항체의 골격(FR) 영역 및 불변 영역을 포함하는 항체를 말한다. 인간화 항체는 인체 내에서 인간화 항체의 항원성이 낮으므로, 본 발명에 따른 치료제의 유효 성분으로서 유용하다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "재조합 인간 항체"는 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리되는 모든 인간 항체를 포함하며, 이들은 (a) 인간 면역 글로불린 유전자 또는 이로부터 제조된 하이브리도마(hybridoma)에 대해 트랜스제닉(transgenic) 또는 트랜스 염색체인 동물(예를 들어, 마우스)로부터 단리된 항체, (b) 항체를 발현하도록 형질 전환된 숙주 세포로부터(예를 들어, 형질 감염체로부터) 단리된 항체, (c) 재조합, 결합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 및 (d) 인간 면역 글로불린 유전자 서열을 다른 DNA 서열에 삽입함을 수반하는 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 이러한 재조합 인간 항체는 인간 생식 세포계 및/또는 비-생식 세포계 면역 글로불린 서열로부터 유래된 가변성 및 불변 영역을 갖는다. 그러나, 특정 구현예에 있어서, 이러한 재조합 인간 항체는 시험관 내 돌연변이 유발(또는, 인간 Ig 서열에 대한 형질 전환 동물이 생체 내 체세포 돌연변이 유발을 할 때)에 적용될 수 있으며, 그에 따라서 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은, 인간 생식 세포계 VH 및 VL 서열로부터 유래하고 이에 관련되지만, 생체 내 인간 항체 생식 세포계 레파토리(repertoire) 내에 자연적으로 존재하지 않을 수도 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "글리코실화 패턴"은 단백질, 보다 구체적으로는 면역 글로불린 단백질에 공유 결합되는 탄수화물 단위의 패턴으로서 정의된다.
본원에서 사용된 바와 같이, "치료 유효량" 및 "치료 수준"이라는 표현은 각각 치료를 필요로 하는 피험자에게 약물이 투여되는 특정 약리학적 효과를 제공하는, 즉 암, 악성 질환 또는 암 세포 증식의 증상 또는 영향을 감소, 개선 또는 제거하는, 피험자의 약물 투여량 또는 혈장 농도를 의미한다. 약물의 치료 유효량 또는 치료 수준은 비록 이러한 투여량이 당해 기술 분야의 숙련자에 의해 치료 유효량으로 간주 되더라도 본 원에 기재된 조건/질환을 치료하는데 항상 효과적인 것은 아니라는 것이 강조된다. 치료 유효량은 다른 인자들 중에서도, 암, 악성 질환 또는 암세포 증식의 유형 및 단계를 비롯하여, 투여 경로 및 투여 형태, 피험자의 연령 및 체중 및/또는 피험자의 상태에 따라 달라질 수 있다.
용어 "고도의 면역원성 암"이란 T 세포 또는 림프구로 침윤되었거나 또는 유사한 림프 반응을 발현시킨 암을 지칭한다. 많은 경우에, 종양의 면역원성은 돌연변이의 증가율과 관련이 있다고 믿어진다. 이런 방식으로, 종양의 돌연변이가 많을수록 종양 항원이 면역 반응을 일으킬 수 있는 가능성이 높아진다.
암, 악성 질환 또는 암 세포 증식과 관련하여 본 원에서 사용된 바와 같은 "치료" 또는 "치료하는"이란 용어는 암, 악성 질환 또는 암 세포 증식의 하나 이상의 증상 또는 영향을 감소하거나, 개선하거나 또는 제거하는 것을 의미한다.
II. 항-PD-L1 항체
다른 이유들 중에서도 암을 치료하는데 사용될 수 있는 항-PD-L1 항체가 본 원에서 제공된다. 본 발명의 항-PD-L1 항체는 PD-L1에 기인하는 적어도 하나의 음성 동시 자극 신호의 길항 작용을 통해 숙주 면역 반응의 동시-자극을 강화시키는 것으로 여겨진다.
기술된 항-PD-L1 항체 및 이의 기능성 단편은 암 또는 악성 질환을 치료하기위한 다양한 기능성 특성을 가지며, 이들 특성으로는 항체 의존성 세포 독성(ADCC) 활성을 가지며, 항종양 활성을 가지며, PD-1에 대한 PD-L1의 결합을 억제하고, T-세포 활성화의 PD-1 매개된 억제를 방지하는 특성들을 들 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.
추가로, PD-L1이 PD-1 또는 B7.1과 상호 작용 또는 둘 모두와 상호 작용하는 것을 차단하는 것을 비롯하여, PD-L1을 통한 신호 전달의 길항 작용의 결과로서, 개시된 항체 및 기능성 단편은 PD-L1이 음성 동시 자극 신호를 T-세포 및 다른 항원 전달 세포로 보내는 것을 방지할 것이며, 이에 따라 암 및 악성 질환에 대한 항종양 면역력 및 면역학적 방어를 향상시킨다. 이외에도, 개시된 항-PD-L1 항체 및 기능성 단편은 CAR T 세포(예를 들어, 항-CD19, 항-CAIX, 항-IL-13Ra2 또는 항-PD-L1 CAR를 발현하는 변형된 T 세포), 다른 종양 표적 항체(예를 들어, 항-CAIX 항체), 면역 반응 증진 양상(예를 들어, 항-GITR 항체, 항-OX40 항체, 항-CD137 항체 또는 TLR 작용제), 및 소분자 약물(예를 들어, BTK 억제제, EGFR 억제제, BET 억제제, PI3K 델타 억제제, BRAF 억제제 또는 PARP 억제제)를 포함하여 부가적인 치료 화합물과 조합될 수 있으며, 이에 제한되어 있지 않다.
개시된 항체는 폴리클로날, 모노클로날, 키메라, 인간, 부분적 또는 완전 인간화된 것 및/또는 재조합물일 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 폴리클로날 항체 또는 그의 PD-L1-결합 기능성 단편이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 모노클로날 항체 또는 그의 PD-L1-결합 기능성 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 및 그의 기능성 단편은 인간, 사이노 및/또는 쥐과 PD-L1을 결합시킬 수 있다.
폴리클로날 항체는 해당 분야에 공지된 방법, 예를 들어, 선별된 동물을 PD-L1 항원으로 면역화시키고 동물로부터 혈청을 수집하고 혈청으로부터 항체를 단리 및/또는 정제함으로써 수득할 수 있다. 모노클로날 항체(mAb)는 해당 업계에 공지된 방법, 예를 들어, 항체-생성 세포를 불멸화된 세포와 융합시켜 하이브리도마를 얻고 및/또는 결합 항체 라이브러리 기술을 사용하여 면역화된 동물의 골수 및 비장 세포에서 추출한 mRNA로부터 mAb를 생성시킴으로써 수득할 수 있다. 재조합 항체는 해당 분야에 공지된 방법, 예를 들어, 파지(phage) 또는 효모 디스플레이 기술을 사용하여 수득할 수 있고, 및/또는 항체 폴리펩티드를 발현 또는 동시 발현시켜서 수득할 수 있다. 항체를 제조하기 위한 다른 기술은 해당 업계에 공지되어 있으며, 본 원에 기재된 방법에서 사용되는 항체를 수득하는데 사용될 수 있다.
전형적으로, 항체는 4 개의 폴리펩티드, 즉 중(H)쇄 폴리펩티드의 2 개의 동일한 전사체 및 경(L)쇄 폴리펩티드의 2 개의 전사체로 구성된다. 전형적으로, 각각의 중쇄는 하나의 N-말단 가변성(VH) 영역 및 3 개의 C-말단 불변(CH1, CH2 및 CH3) 영역을 함유하고, 각각의 경쇄는 하나의 N-말단 가변성(VL) 영역 및 하나의 C-말단 불변(CL) 영역을 함유한다. 경쇄 및 중쇄의 각 쌍의 가변성 영역은 항체의 항원 결합 부위를 형성한다.
본 원에서 사용된 바와 같은 용어 "PD-L1-결합 기능성 단편" 또는 "기능성 단편"이란 PD-L1에 결합하는 능력을 보유하는 항-PD-L1 항체의 하나 이상의 단편을 의미한다. 결합 단편의 예로는 (i) Fab 단편(VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편); (ii) F(ab')2 단편(경첩 부위에서 디설파이드 브릿지에 의해 연결된 2 개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편); (iii) Fd 단편(VH 및 CH1 도메인을 포함한다); (iv) Fv 단편(항체의 단일 아암(arm)의 VL 및 VH 도메인을 포함한다); (v) dAb 단편(VH 도메인을 포함한다); 및 (vi) 단리된 상보성 결정 영역(CDR), 예를 들어, VH CDR3를 들 수 있다. 다른 실례로는 단일 쇄 Fv(scFv) 구조체를 들 수 있다[버드(Bird) 등의 Science, 242:423-26 (1988); 휴스톤(Huston) 등의 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85:5879-83 (1988) 참조]. 또 다른 실례로는 (i) 면역 글로불린 경첩 영역 폴리펩티드에 융합된 PD-L1-결합 도메인 폴리펩티드(예를 들어, 중쇄 가변성 영역, 경쇄 가변성 영역, 또는 링커 펩티드를 통해 경쇄 가변성 영역에 융합된 중쇄 가변성 영역), (ii) 경첩 영역에 융합된 면역 글로불린 중쇄 CH2 불변 영역, 및 (iii) CH2 불변 영역에 융합된 면역 글로불린 중쇄 CH3 불변 영역을 포함하는 포함하는 PD-L1-결합 도메인 면역 글로불린 융합 단백질을 들 수 있다.
개시된 항체의 경첩 영역은 하나 이상의 시스테인 잔기를, 예를 들어, 세린 잔기로 치환하여 이량체화를 방지함으로써 변성될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 제 2003/0118592 호; 미국 특허 출원 공개 제 U.S.2003/0133939 호를 참조 바란다. 부가적으로, 일부 구현예에 있어서, 개시된 항체는 점 돌연변이 S239D/I332E, S239D 또는 I332E를 갖는 IgG1의 변종 Fc 부분 또는 이의 임의의 조합체, 또는 점 돌연변이 S228P를 갖는 IgG4의 변종 Fc 부분을 비롯하여 다른 돌연변이를 포함할 수 있으며, 이에 제한되어 있지 않다. 이러한 변성은 개시된 항체 및 기능성 단편을 Fc 수용체(FcR)에 결합시키는 것을 변경시킬 수 있으며, 일부 구현예에서, 항체는 보다 안정하게 변성될 수 있는 반면, 일부 구현예에서는 항체가 ADCC 기능을 향상시키도록 변성될 수 있다. 잔기의 수를 결정할 때, 잔기의 카바트(Kabat) 넘버링은 항체 서열의 상동성 영역에서 "표준" 카바트 번호가 매겨진 서열과 정렬함으로써 주어진 항체에 대해 결정될 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 개시된 항체의 글리코실화 패턴은 변성되거나 또는 변경될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 개시된 항체 및 이의 기능성 단편은 저 푸크오스 항체일 수 있거나 또는 이들은 탈푸코실화될 수 있거나 또는 상기 항체는 이들이 푸크오스를 완전히 결핍(즉, 후푸고실환)되는 방식으로 발현되거나 생성될 수 있다. 항체 또는 기능성 단편의 푸쿠오스 함량의 변경은, 예를 들어, FUT8이 결핍된 세포 또는 FUT8의 돌연변이 버전(version)을 갖는 세포에서 항체 또는 기능성 단편을 발현시키는 것과 같은 해당 업계에 공지된 다양한 수단을 통해 수행될 수 있다. 저 푸크오스 또는 탈푸코실화된 항체 및 기능성 단편은 ADCC 활성을 증가시킨다. 푸크오스의 변경 이외에도, 개시된 항체 및 기능성 단편은 이들의 글리코실화 패턴에 대한 다른 기능성 변성을 포함할 수 있다. 예를 들어, 위치 297에서의 변성(예: N297A 및 N297Q)은 Fc 영역의 글리코실화를 모두 방지하여 Fc 기능, ADCC 및 CDC를 제거할 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 항-PD-L1 항체는 CTI-07, CTI-09, CTI-48, CTI-49, CTI-50, CTI-76, CTI-77, CTI-78, CTI-57 또는 CTI-58, 또는 이의 기능성 단편이다. 하기 표 1 및 2는 개시된 항-PD-L1 항체 및 이의 기능성 단편의 예시적인 CDR 서열을 제공한다.
항 체 HCDR1 HCDR2 HCDR3
CTI-48 GTFSRSAIS
(서열 인증 번호: 2)		 VIIPAFGEANYAQKFQG
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CTI-49 GTFSGYAIS(서열 인증 번호: 3) VIIPAFGTANYAQKFQG
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CTI-07 YTLSSHGIT(서열 인증 번호: 16) WISAHSGHASNAQKVED
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CTI-97 GTFSRSAIS(서열 인증 번호: 2) VIIPAFGEANYAQKFQG
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CTI-94 GTFSRSAIS(서열 인증 번호: 2) VIIPAFGEANYAQKFQG
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CTI-96 GTFSRSAIS(서열 인증 번호: 2) VIIPAFGEANYAQKFQG
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항 체 LCDR1 LCDR2 LCDR3
CTI-48 TRSSGSIDSNYVQ
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CTI-94 TRSSGSIDSNYVQ(서열 인증 번호: 20) EDNQRPS
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(서열 인증 번호: 75)
CTI-96 TRSSGSIDSNYVQ(서열 인증 번호: 20) EDNQRPS
(서열 인증 번호: 21)		 QSYDSNIRHVI
(서열 인증 번호: 76)
부가적으로, 개시된 항체 및 기능성 단편은 또한 다양한 골격 영역을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 개시된 항체 및 기능성 단편은 서열 인증 번호 26 내지 34 및/또는 43 내지 47을 포함한다. 일부 구현예에서, 골격 영역에 대한 특정 변경이 특히 유리할 수 있다. 예를 들어, 항체의 중쇄 중 하나인 골격 영역의 첫 번째 위치에서 글루타민산(E)을 글루타민(Q)으로 치환하는 것은 제조된 생성물의 안정성 효율을 높일 수 있다. 따라서, 개시된 항체 및 단편의 일부 구현예는 이러한 변형을 포함할 것이다. 그러므로, 일부 구현예에서, 개시된 항체 또는 기능성 단편의 중쇄는 서열 인증 번호 36 내지 41을 포함하는 반면에, 다른 구현예에서, 개시된 항체 또는 기능성 단편의 중쇄는 서열 인증 번호 48 내지 49 또는 51 내지 56을 포함할 것이다. 더욱이, 일부 구현예에서, 개시된 항체 또는 기능성 단편의 중쇄는 서열 인증 번호 71 내지 72, 또는 서열 인증 번호 59 내지 68을 포함하는 핵산 서열에 의해 코딩되는 폴리펩티드를 포함할 것이다.
일부 구현예에 있어서, 개시된 항체 또는 기능성 단편의 경쇄는 서열 인증 번호 42 또는 50을 포함할 것이다. 더욱이, 일부 구현예에서, 개시된 항체 또는 기능성 단편의 경쇄는 서열 인증 번호 69 내지 70을 포함하는 핵산 서열에 의해 코딩된 폴리펩티드를 포함할 것이다.
당업자라면 개시된 항-PD-L1 항체 및 기능성 단편의 결합 친화도 또는 기능을 손상시킴이 없이 개시된 서열에 대해 특정 변화를 이룰 수 있음을 이해할 것이다. 일부 구현예에 따르면, 항-PD-L1 항체 또는 기능성 단편은 약 80 %, 약 81 %, 약 82 %, 약 83 %, 약 84 %, 약 85 %, 약 86 %, 약 87 % 약 88 %, 약 89 %, 약 90 %, 약 91 %, 약 92 %, 약 93 %, 약 94 %, 약 95 %, 약 96 %, 약 97 %, 약 98 % 또는 약 99 %의 개시된 서열의 서열 동일성을 공유할 것이다.
일부 구현예에 있어서, 본 원은 항-PD-L1 항체 또는 이의 기능성 단편을 코딩하는 단리된 핵산 서열, 예를 들어, 서열 인증 번호 59 내지 70을 제공한다.
개시된 항체 및 이의 기능성 단편은 서열 또는 기능성 특성에 의해 정의될 수 있다. 예를 들어, 개시된 항체 및 이의 기능성 단편은 적어도 3.0 x 10-8, 적어도 2.5 x 10-8, 적어도 2.0 x 10-8, 적어도 1.5 x 10-8, 적어도 1.0 x 10-8, 적어도 0.5 x 10-8, 적어도 9.95 x 10-9, 적어도 9.90 x 10-9, 적어도 9.85 x 10-9, 적어도 9.80 x 10-9, 적어도 9.75 x 10-9, 적어도 9.70 x 10-9, 적어도 9.65 x 10-9, 적어도 9.60 x 10-9, 적어도 9.55 x 10-9, 적어도 9.5 x 10-9, 적어도 9.45 x 10-9, 적어도 9.40 x 10-9, 적어도 9.35 x 10-9, 적어도 9.30 x 10-9, 적어도 9.25 x 10-9, 적어도 9.20 x 10-9, 적어도 9.15 x 10-9, 적어도 9.10 x 10-9, 적어도 9.05 x 10-9, 적어도 9.0 x 10-9, 적어도 8.95 x 10-9, 적어도 8.90 x 10-9, 적어도 8.85 x 10-9, 적어도 8.80 x 10-9, 적어도 8.75 x 10-9, 적어도 8.70 x 10-9, 적어도 8.65 x 10-9, 적어도 8.60 x 10-9, 적어도 8.55 x 10-9, 적어도 8.5 x 10-9, 적어도 8.45 x 10-9, 적어도 8.40 x 10-9, 적어도 8.35 x 10-9, 적어도 8.30 x 10-9, 적어도 8.25 x 10-9, 적어도 8.20 x 10-9, 적어도 8.15 x 10-9, 적어도 8.10 x 10-9, 적어도 8.05 x 10-9, 적어도 8.0 x 10-9, 적어도 7.95 x 10-9, 적어도 7.90 x 10-9, 적어도 7.85 x 10-9, 적어도 7.80 x 10-9, 적어도 7.75 x 10-9, 적어도 7.70 x 10-9, 적어도 7.65 x 10-9, 적어도 7.60 x 10-9, 적어도 7.55 x 10-9, 적어도 7.5 x 10-9, 적어도 7.45 x 10-9, 적어도 7.40 x 10-9, 적어도 7.35 x 10-9, 적어도 7.30 x 10-9, 적어도 7.25 x 10-9, 적어도 7.20 x 10-9, 적어도 7.15 x 10-9, 적어도 7.10 x 10-9, 적어도 7.05 x 10-9, 적어도 7.0 x 10-9, 적어도 6.95 x 10-9, 적어도 6.90 x 10-9, 적어도 6.85 x 10-9, 적어도 6.80 x 10-9, 적어도 6.75 x 10-9, 적어도 6.70 x 10-9, 적어도 6.65 x 10-9, 적어도 6.60 x 10-9, 적어도 6.55 x 10-9, 적어도 6.5 x 10-9, 적어도 6.45 x 10-9, 적어도 6.40 x 10-9, 적어도 6.35 x 10-9, 적어도 6.30 x 10-9, 적어도 6.25 x 10-9, 적어도 6.20 x 10-9, 적어도 6.15 x 10-9, 적어도 6.10 x 10-9, 적어도 6.05 x 10-9, 적어도 6.0 x 10-9, 적어도 5.95 x 10-9, 적어도 5.90 x 10-9, 적어도 5.85 x 10-9, 적어도 5.80 x 10-9, 적어도 5.75 x 10-9, 적어도 5.70 x 10-9, 적어도 5.65 x 10-9, 적어도 5.60 x 10-9, 적어도 5.55 x 10-9, 적어도 5.5 x 10-9, 적어도 5.45 x 10-9, 적어도 5.40 x 10-9, 적어도 5.35 x 10-9, 적어도 5.30 x 10-9, 적어도 5.25 x 10-9, 적어도 5.20 x 10-9, 적어도 5.15 x 10-9, 적어도 5.10 x 10-9, 적어도 5.05 x 10-9, 적어도 5.0 x 10-9, 적어도 4.95 x 10-9, 적어도 4.90 x 10-9, 적어도 4.85 x 10-9, 적어도 4.80 x 10-9, 적어도 4.75 x 10-9, 적어도 4.70 x 10-9, 적어도 4.65 x 10-9, 적어도 4.60 x 10-9, 적어도 4.55 x 10-9, 적어도 4.5 x 10-9, 적어도 4.45 x 10-9, 적어도 4.40 x 10-9, 적어도 4.35 x 10-9, 적어도 4.30 x 10-9, 적어도 4.25 x 10-9, 적어도 4.20 x 10-9, 적어도 4.15 x 10-9, 적어도 4.10 x 10-9, 적어도 4.05 x 10-9, 적어도 4.0 x 10-9, 적어도 3.95 x 10-9, 적어도 3.90 x 10-9, 적어도 3.85 x 10-9, 적어도 3.80 x 10-9, 적어도 3.75 x 10-9, 적어도 3.70 x 10-9, 적어도 3.65 x 10-9, 적어도 3.60 x 10-9, 적어도 3.55 x 10-9, 적어도 3.5 x 10-9, 적어도 3.45 x 10-9, 적어도 3.40 x 10-9, 적어도 3.35 x 10-9, 적어도 3.30 x 10-9, 적어도 3.25 x 10-9, 적어도 3.20 x 10-9, 적어도 3.15 x 10-9, 적어도 3.10 x 10-9, 적어도 3.05 x 10-9, 적어도 3.0 x 10-9, 적어도 2.95 x 10-9, 적어도 2.90 x 10-9, 적어도 2.85 x 10-9, 적어도 2.80 x 10-9, 적어도 2.75 x 10-9, 적어도 2.70 x 10-9, 적어도 2.65 x 10-9, 적어도 2.60 x 10-9, 적어도 2.55 x 10-9, 적어도 2.5 x 10-9, 적어도 2.45 x 10-9, 적어도 2.40 x 10-9, 적어도 2.35 x 10-9, 적어도 2.30 x 10-9, 적어도 2.25 x 10-9, 적어도 2.20 x 10-9, 적어도 2.15 x 10-9, 적어도 2.10 x 10-9, 적어도 2.05 x 10-9, 적어도 2.0 x 10-9, 적어도 1.95 x 10-9, 적어도 1.90 x 10-9, 적어도 1.85 x 10-9, 적어도 1.80 x 10-9, 적어도 1.75 x 10-9, 적어도 1.70 x 10-9, 적어도 1.65 x 10-9, 적어도 1.60 x 10-9, 적어도 1.55 x 10-9, 적어도 1.5 x 10-9, 적어도 1.45 x 10-9, 적어도 1.40 x 10-9, 적어도 1.35 x 10-9, 적어도 1.30 x 10-9, 적어도 1.25 x 10-9, 적어도 1.20 x 10-9, 적어도 1.15 x 10-9, 적어도 1.10 x 10-9, 적어도 1.05 x 10-9, 적어도 1.0 x 10-9, 적어도 0.95 x 10-9, 적어도 0.90 x 10-9, 적어도 0.85 x 10-9, 적어도 0.80 x 10-9, 적어도 0.75 x 10-9, 적어도 0.70 x 10-9, 적어도 0.65 x 10-9, 적어도 0.60 x 10-9, 적어도 0.55 x 10-9, 적어도 0.5 x 10-9, 적어도 0.45 x 10-9, 적어도 0.40 x 10-9, 적어도 0.35 x 10-9, 적어도 0.30 x 10-9, 적어도 0.25 x 10-9, 적어도 0.20 x 10-9, 적어도 0.15 x 10-9, 적어도 0.10 x 10-9, 적어도 0.05 x 10-9, 적어도 9.5 x 10-10, 적어도 9.0 x 10-10, 적어도 8.5 x 10-10, 적어도 8.0 x 10-10 또는 그들 사이의 임의의 값의 KD를 가질 수 있다. 예를 들어, 개시된 항체 및 이의 기능성 단편은 8.2 x 10-10, 2.31 x 10-09, 8.24 x 10-09, 3.25 x 10-09, 3.46 x 10-09, 1.91 x 10-09, 7.97 x 10-08, 2.41 x 10-08, 9.5 x 10-10, 또는 8.6 x 10-10의 KD 값을 가질 수 있다.
마찬가지로, 개시된 항체 및 이의 기능성 단편은 4.0 x 10-5 μg/ml 내지 9.5 x 10-7 μg/ml 사이의 IC50 값 또는 그들 사이의 임의의 값을 가질 수 있다. 예를 들어, 개시된 항체 및 이의 기능성 단편은 9.19 x 10-7, 4.156 x 10-5, 9.985 x 10-7, 1.037 x 10-6 또는 3.463 x 10-6의 IC50 값을 가질 수 있다.
항-PD-L1 항체 또는 그의 PD-L1-결합 기능성 단편은 하기에 보다 상세히 설명되는 바와 같이, 의도된 투여 경로에 의해 표적 피험자에 투여하기에 적합한 약학적 조성물로 제제화될 수 있다.
III. 약학적 조성물 및 제형
본 원에 기술된 방법으로 사용하기에 적합한 약학적 조성물은 치료 활성제(예를 들어, 항-PD-L1 항체 또는 이의 기능성 단편) 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함할 수 있다.
조성물은 정맥내, 피하, 복강내, 근육내, 경구, 비강, 폐, 눈, 질 또는 직장 투여용으로 제형화될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 또는 이의 기능성 단편은 용액, 현탁액, 에멀젼, 리포솜 제제 등에서와 같이 정맥내, 피하, 복강내 또는 근육내 투여용으로 제형화 된다. 약학적 조성물은 당업계에 공지된 기술을 사용하여, 즉시-방출 조성물, 서방성 조성물, 지연-방출 조성물 등으로 제형화될 수 있다.
다양한 투여 형태에 대한 약리학적으로 허용가능한 담체는 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 고형 제제에 대해서는 부형제, 윤활제, 결합제 및 붕해제가 알려져 있으며; 액체 제제에 대해서는 용매, 가용화제, 현탁제, 등장제, 완충제 및 진정제가 알려져 있다. 일부 구현예에서, 약학적 조성물은 방부제, 항산화제, 안정화제 등과 같은 하나 이상의 추가 성분을 포함한다.
부가적으로, 개시된 약학적 조성물은 용액, 마이크로에멀젼, 리포솜, 또는 고 약물 농도에 적합한 다른 순차적 구조로 제형화될 수 있다. 담체는, 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등) 및 이들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산액 매질일 수 있다. 적절한 유동성은, 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅의 사용에 의해, 분산액의 경우에는 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 및 계면 활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 일부 구현예에서, 등장제, 예를 들어, 당, 폴리알콜, 예컨대 만니톨, 소르비톨 또는 염화나트륨을 조성물에 포함시키는 것이 바람직할 것이다. 주사용 조성물의 장기 흡수는 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어, 모노스테아린산 염 및 젤라틴을 조성물에 포함시킴으로써 성취될 수 있다.
멸균 주사용 용액은 필요에 따라서 적절한 용매에 상기 열거된 성분 중 하나 또는 조합물과 함께 필요한 양으로 활성 화합물을 혼입하고, 이어서 멸균 미세여과를 수행함으로써 제조할 수 있다. 일반적으로, 분산액은 염기성 분산 매질 및 상기 열거된 것들 중 필요한 다른 성분들을 함유하는 무균 비히클에 활성 화합물을 혼입시킴으로써 제조된다. 멸균 주사용 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 활성 성분의 분말 + 이전에 멸균-여과된 용액으로부터 임의의 추가의 원하는 성분을 생성하는 진공 건조법 및 동결 건조법(냉동 건조법)이다.
본 발명의 약학적 조성물은 다른 치료제와 함께 투여될 수 있다. 예를 들어, 병용 요법은 CAR T 세포(예를 들어, 항-CD19, 항-Her2, 항-BCMA, 항-CS-1, 항-PSCA, 항-CAIX, 항-IL13R 또는 항-PD-L1 CAR을 발현하는 변성된 T 세포), 다른 종양-표적 항체(예를 들어, 항-CAIX 항체), 면역 반응 증진 양상(예를 들어, 항-GITR 항체, 항-OX40 항체, 항-CD137 항체 또는 TLR 작용제), 및 소분자 약물(예를 들어, BTK 억제제, EGFR 억제제, BET 억제제, PI3K 델타 억제제, BRAF 억제제 또는 PARP 억제제)를 포함하는 적어도 하나 이상의 추가적인 치료체와, 개시된 항-PD-L1 항체 또는 그의 기능성 단편 중 적어도 하나를 포함하는 약학적 조성물을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 약학적 조성물은 또한 방사선 요법과 병용 투여될 수 있다.
IV. 암 치료 방법
개시된 항-PD-L1 항체로 암, 악성 질환 또는 암세포 증식을 치료하는 방법이 본 원에 제공된다. 보다 구체적으로, 본 발명은 상기 기재된 항-PD-L1 항체 또는 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, T-세포 기능 및 항종양 면역을 증진시키는 방법을 제공한다.
T-세포 기능 및 항종양 면역 강화는 암, 악성 질환 또는 암세포 증식을 치료하기 위한 광범위한 스펙트럼 접근법을 제공한다. 따라서, 개시된 항-PD-L1 항체 및 이의 기능성 단편을 투여함으로써 수많은 유형의 암을 치료할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 암은 혈액암 (예를 들어, 림프종, 비-호지킨(Non-Hodgkin) 림프종, 만성 림프구성 백혈병 또는 다발성 골수종), 신경계암, 유방암, 위장암(예를 들어, 대장암), 신장 세포 암종(예를 들어, 투명 세포 신장 세포 암종) 또는 비뇨 생식기암 (예를 들어, 난소암)이다. 일부 구현예에서, 암은 흑색종, 폐암(예를 들어, 비-소세포 폐암), 두경부암, 간암, 췌장암, 골암, 전립선암, 방광암 또는 혈관성 암이다.
일부 구현예에 있어서, 개시된 방법에 따라 치료되는 암은 고도의 면역원성 암종이다. 그리고, 일부 구현예에서, 개시된 방법에 따라 치료되는 암은 PD-L1을 발현하는 암이다.
투여량 요법은 최적의 원하는 반응(예를 들어, 종양 퇴행 또는 완화와 같은 치료 반응)을 제공하도록 조절된다. 예를 들어, 일부 구현예에서는 단일의 한 회 분이 투여될 수 있는 반면, 일부 구현예에서는 수 회 분할된 용량이 시간에 걸쳐 투여될 수 있거나 또는 투여량이 상황에 의해 나타난 바와 같이 비례적으로 감소되거나 증가될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 개시된 항체 또는 기능성 단편은 피하 또는 정맥내 주사에 의해 매주 1 회 또는 2 회 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 개시된 항체 또는 기능성 단편은 피하 주사에 의해 매 월 1 회 또는 2 회 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 개시된 항체 또는 기능성 단편은 매 주 1 회, 격 주마다 1 회, 3 주마다 1 회, 4 주마다 1 회, 1 개월 간격으로 1 회, 3 개월마다 1 회, 4 개월마다 1 회, 5 개월마다 1 회, 또는 6 개월마다 1 회 투여될 수 있다.
예시적인 투여량은 치료받는 개인의 크기 및 건강뿐만 아니라 치료받는 상태에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 개시된 항체 또는 기능성 단편은 1 내지 100 mg/kg의 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 개시된 항체 및 기능성 단편은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 100 mg/kg의 용량으로 투여될 수 있다.
더욱이, 개시된 치료 방법은 항-PD-L1 항체 또는 이의 기능성 단편 이외에 제 2 치료 화합물의 투여를 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가의 치료 화합물은 CAR-T 세포, 종양- 표적 항체, 면역 반응 증진 양상 또는 소분자 약물이다.
일부 구현예에 있어서, 개시된 방법은 다양한 기능적 특성을 갖는 항체 및 그의 기능성 단편을 이용할 수 있다. 예를 들어, 개시된 방법은 3.0 x 10-8, 적어도 2.5 x 10-8, 적어도 2.0 x 10-8, 적어도 1.5 x 10-8, 적어도 1.0 x 10-8, 적어도 0.5 x 10-8, 적어도 9.95 x 10-9, 적어도 9.90 x 10-9, 적어도 9.85 x 10-9, 적어도 9.80 x 10-9, 적어도 9.75 x 10-9, 적어도 9.70 x 10-9, 적어도 9.65 x 10-9, 적어도 9.60 x 10-9, 적어도 9.55 x 10-9, 적어도 9.5 x 10-9, 적어도 9.45 x 10-9, 적어도 9.40 x 10-9, 적어도 9.35 x 10-9, 적어도 9.30 x 10-9, 적어도 9.25 x 10-9, 적어도 9.20 x 10-9, 적어도 9.15 x 10-9, 적어도 9.10 x 10-9, 적어도 9.05 x 10-9, 적어도 9.0 x 10-9, 적어도 8.95 x 10-9, 적어도 8.90 x 10-9, 적어도 8.85 x 10-9, 적어도 8.80 x 10-9, 적어도 8.75 x 10-9, 적어도 8.70 x 10-9, 적어도 8.65 x 10-9, 적어도 8.60 x 10-9, 적어도 8.55 x 10-9, 적어도 8.5 x 10-9, 적어도 8.45 x 10-9, 적어도 8.40 x 10-9, 적어도 8.35 x 10-9, 적어도 8.30 x 10-9, 적어도 8.25 x 10-9, 적어도 8.20 x 10-9, 적어도 8.15 x 10-9, 적어도 8.10 x 10-9, 적어도 8.05 x 10-9, 적어도 8.0 x 10-9, 적어도 7.95 x 10-9, 적어도 7.90 x 10-9, 적어도 7.85 x 10-9, 적어도 7.80 x 10-9, 적어도 7.75 x 10-9, 적어도 7.70 x 10-9, 적어도 7.65 x 10-9, 적어도 7.60 x 10-9, 적어도 7.55 x 10-9, 적어도 7.5 x 10-9, 적어도 7.45 x 10-9, 적어도 7.40 x 10-9, 적어도 7.35 x 10-9, 적어도 7.30 x 10-9, 적어도 7.25 x 10-9, 적어도 7.20 x 10-9, 적어도 7.15 x 10-9, 적어도 7.10 x 10-9, 적어도 7.05 x 10-9, 적어도 7.0 x 10-9, 적어도 6.95 x 10-9, 적어도 6.90 x 10-9, 적어도 6.85 x 10-9, 적어도 6.80 x 10-9, 적어도 6.75 x 10-9, 적어도 6.70 x 10-9, 적어도 6.65 x 10-9, 적어도 6.60 x 10-9, 적어도 6.55 x 10-9, 적어도 6.5 x 10-9, 적어도 6.45 x 10-9, 적어도 6.40 x 10-9, 적어도 6.35 x 10-9, 적어도 6.30 x 10-9, 적어도 6.25 x 10-9, 적어도 6.20 x 10-9, 적어도 6.15 x 10-9, 적어도 6.10 x 10-9, 적어도 6.05 x 10-9, 적어도 6.0 x 10-9, 적어도 5.95 x 10-9, 적어도 5.90 x 10-9, 적어도 5.85 x 10-9, 적어도 5.80 x 10-9, 적어도 5.75 x 10-9, 적어도 5.70 x 10-9, 적어도 5.65 x 10-9, 적어도 5.60 x 10-9, 적어도 5.55 x 10-9, 적어도 5.5 x 10-9, 적어도 5.45 x 10-9, 적어도 5.40 x 10-9, 적어도 5.35 x 10-9, 적어도 5.30 x 10-9, 적어도 5.25 x 10-9, 적어도 5.20 x 10-9, 적어도 5.15 x 10-9, 적어도 5.10 x 10-9, 적어도 5.05 x 10-9, 적어도 5.0 x 10-9, 적어도 4.95 x 10-9, 적어도 4.90 x 10-9, 적어도 4.85 x 10-9, 적어도 4.80 x 10-9, 적어도 4.75 x 10-9, 적어도 4.70 x 10-9, 적어도 4.65 x 10-9, 적어도 4.60 x 10-9, 적어도 4.55 x 10-9, 적어도 4.5 x 10-9, 적어도 4.45 x 10-9, 적어도 4.40 x 10-9, 적어도 4.35 x 10-9, 적어도 4.30 x 10-9, 적어도 4.25 x 10-9, 적어도 4.20 x 10-9, 적어도 4.15 x 10-9, 적어도 4.10 x 10-9, 적어도 4.05 x 10-9, 적어도 4.0 x 10-9, 적어도 3.95 x 10-9, 적어도 3.90 x 10-9, 적어도 3.85 x 10-9, 적어도 3.80 x 10-9, 적어도 3.75 x 10-9, 적어도 3.70 x 10-9, 적어도 3.65 x 10-9, 적어도 3.60 x 10-9, 적어도 3.55 x 10-9, 적어도 3.5 x 10-9, 적어도 3.45 x 10-9, 적어도 3.40 x 10-9, 적어도 3.35 x 10-9, 적어도 3.30 x 10-9, 적어도 3.25 x 10-9, 적어도 3.20 x 10-9, 적어도 3.15 x 10-9, 적어도 3.10 x 10-9, 적어도 3.05 x 10-9, 적어도 3.0 x 10-9, 적어도 2.95 x 10-9, 적어도 2.90 x 10-9, 적어도 2.85 x 10-9, 적어도 2.80 x 10-9, 적어도 2.75 x 10-9, 적어도 2.70 x 10-9, 적어도 2.65 x 10-9, 적어도 2.60 x 10-9, 적어도 2.55 x 10-9, 적어도 2.5 x 10-9, 적어도 2.45 x 10-9, 적어도 2.40 x 10-9, 적어도 2.35 x 10-9, 적어도 2.30 x 10-9, 적어도 2.25 x 10-9, 적어도 2.20 x 10-9, 적어도 2.15 x 10-9, 적어도 2.10 x 10-9, 적어도 2.05 x 10-9, 적어도 2.0 x 10-9, 적어도 1.95 x 10-9, 적어도 1.90 x 10-9, 적어도 1.85 x 10-9, 적어도 1.80 x 10-9, 적어도 1.75 x 10-9, 적어도 1.70 x 10-9, 적어도 1.65 x 10-9, 적어도 1.60 x 10-9, 적어도 1.55 x 10-9, 적어도 1.5 x 10-9, 적어도 1.45 x 10-9, 적어도 1.40 x 10-9, 적어도 1.35 x 10-9, 적어도 1.30 x 10-9, 적어도 1.25 x 10-9, 적어도 1.20 x 10-9, 적어도 1.15 x 10-9, 적어도 1.10 x 10-9, 적어도 1.05 x 10-9, 적어도 1.0 x 10-9, 적어도 0.95 x 10-9, 적어도 0.90 x 10-9, 적어도 0.85 x 10-9, 적어도 0.80 x 10-9, 적어도 0.75 x 10-9, 적어도 0.70 x 10-9, 적어도 0.65 x 10-9, 적어도 0.60 x 10-9, 적어도 0.55 x 10-9, 적어도 0.5 x 10-9, 적어도 0.45 x 10-9, 적어도 0.40 x 10-9, 적어도 0.35 x 10-9, 적어도 0.30 x 10-9, 적어도 0.25 x 10-9, 적어도 0.20 x 10-9, 적어도 0.15 x 10-9, 적어도 0.10 x 10-9, 적어도 0.05 x 10-9, 적어도 9.5 x 10-10, 적어도 9.0 x 10-10, 적어도 8.5 x 10-10, 적어도 8.0 x 10-10 또는 그들 사이의 임의의 값의 KD를 갖는 항-PD-L1 항체 및 이의 기능성 단편을 포함할 수 있다. 예를 들어, 개시된 방법은 8.2 x 10-10, 2.31 x 10-09, 8.24 x 10-09, 3.25 x 10-09, 3.46 x 10-09, 1.91 x 10-09, 7.97 x 10-08, 2.41 x 10-08, 9.5 x 10-10, 또는 8.6 x 10-10의 KD 값을 갖는 항-PD-L1 항체 및 이의 기능성 단편을 포함할 수 있다.
마찬가지로, 개시된 방법은 4.0 x 10-5 μg/ml 내지 9.5 x 10-7 μg/ml 사이의 IC50 값 또는 그들 사이의 임의의 값을 갖는 항-PD-L1 항체 및 이의 기능성 단편을 포함할 수 있다. 예를 들어, 개시된 방법은 9.19 x 10-7, 4.156 x 10-5, 9.985 x 10-7, 1.037 x 10-6 또는 3.463 x 10-6의 IC50 값을 갖는 항-PD-L1 항체 및 이의 기능성 단편을 포함할 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 면역 반응 증진 양상은 항-GITR 항체, 항-OX40 항체, 항-CD137 항체, TLR 작용제 또는 항-CD40 항체를 포함할 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 종양-표적 항체는 항-CAIX 항체, 항-BCMA, 항-CS-1, 항-CD20(예를 들어, Ublituximab), 항-Her2, 항-PCSA, 또는 항-FcRL5를 포함할 수 있다.
일부 구현예에 있어서, 소분자 약물은 종양-표적 소분자 약물, 예를 들어, BTK 억제제(예: ibrutinib), EGFR 억제제(예: CK-101), BET 억제제(예: CK -103), PARP 억제제(예: olaparib 또는 CK-102), PI3Kdelta 억제제(예: TGR-1202) 또는 BRAF 억제제(예: Vemurafenib)를 포함할 수 있다.
특정 치료 요법은 주어진 환자의 결과가 개선되는지의 여부, 즉 재발 위험을 감소 시키거나 또는 주어진 암의 무-진행으로 생존 가능성을 증가시키는지의 여부에 따라서 평가될 수 있다.
그러므로, 본 발명의 목적을 위하여, 바람직한 임상 결과를 비롯한 하나 이상의 유익한 또는 목적하는 결과가 얻어지면 환자를 치료한다. 예를 들어, 유익한 또는 목적하는 임상 결과는 다음 중 하나 이상을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다: 질병으로 인한 하나 이상의 증상의 감소, 질병으로 고통받는 사람들의 삶의 질 증가, 질환의 치료에 필요한 다른 약제의 투여량 감소, 질병의 진행 지연, 및/또는 개인의 생존 연장.
더욱이, 본 방법의 피험자는 일반적으로 암 환자이지만, 환자의 연령은 제한되지 않는다. 개시된 방법은 모든 연령군 및 치료 집단 전반야에 걸쳐 다양한 재발 및 예후 결과로 암, 악성 질환 또는 암세포 증식을 치료하는데 유용하다. 그러므로, 일부 구현예에서, 피험자는 소아과 피험자일 수 있는 반면에, 다른 구현예에서는 피험자가 성인 피험자일 수 있다.
하기 실시예들은 본 발명을 예시하기 위하여 제공된다. 그러나, 본 발명은 이들 실시예들에 기재된 특정 조건 또는 세부 사항에 제한되지 않는다는 것을 이해해야 한다.
실시예들
실시예 1 - 개시된 항-PD-L1 항체로 암 환자의 치료
본 실시예는 암 치료에서 항-PD-L1 항체를 사용하는 방법을 예시한다.
암에 걸렸거나 또는 암에 걸린것으로 의심되는 환자에게, 정맥내 또는 피하 주사에 의해 항-PD-L1 항체를 포함하는 약학적 조성물의 치료 유효량을 투여한다. 환자는 통증, 약화 등을 포함(이에 국한되지 않음)하는 암과 관련된 징후 및 증상의 존재 및/또는 중증도에 대해 평가되고, 환자는 하나 이상의 징후/증상이 감소되거나, 개선되거나, 또는 제거될 때까지 치료된다. 선택적으로, 치료 후 암 진행을 추적 관찰하기 위하여 환자로부터 샘플을 채취할 수 있다. 선택적으로, 징후/증상이 지속되거나 및/또는 암이 진행중에 있거나 또는 재발하는 경우에는 약학적 조성물의 다른 용량을 투여한다.
실시예 2 - 최적화된 항체의 생성
피어스(Pierce)의 EZ-Link Sulfo-NHS-바이오티닐화 키트(Biotinylation Kit)를 사용하여 항원을 바이오티닐화시켰다. 사우던 바이오테크 시그마 앤드 모리큘라 프로브스(Southern Biotech, Sigma and Molecular Probes)로부터 염소 항-인간 F(ab')2 카파-FITC(LC-FITC), 엑스트라비딘(Extravidin)-PE(EA-PE) 및 스트렙트아비딘(Streptavidin)-633(SA-633)을 각각 구입했다. 스트랩트아비딘 마이크로비이즈(Streptavidin MicroBeads) 및 MACS LC 분리 컬럼을 밀테니 바이오테크(Miltenyi Biotec)로부터 구입했다.
친화도 성숙
천연 클론의 결합 최적화는 VH CDRH1/CDRH2의 다양화, VH 유전자의 PCR 돌연변이 유발 및 CDRH3에 초점을 둔 VH 돌연변이 유발과 같은 3 가지 성숙 전략을 이용하여 진행되었다.
CTI-07 혈통
최적화의 제 1 사이클은 당업계에 공지된 기술을 사용하여 CTI-07 VH 유전자가 돌연변이 유발 PCR에 의해 다양화된 라이브러리로부터의 개선된 결합제의 선택에 초점을 두었다. 라운드 1: 선택은 효모 표면에 전장 CTI-07 IgG의 VH 돌연변이체를 제시함으로써 수행하였다. 이러한 라이브러리를 100 nM 바이오티닐화 PD-L1과 배양한 다음, 항-LC FITC 시약(IgG 발현) 및 SA-633(항원 결합의 검출) 및 프로피디움 요오드 염색에 의한 생존 세포에 의해 IgG 발현을 검출하였다. 상위 항원 결합/IgG 발현 세포를 FACS에 의해 선택하였다. 라운드 2: 선택은 항원 결합의 구별을 위해 10 nM 바이오티닐화 PD-L1을 사용한 것을 제외하곤 라운드 1에 따라 진행하였다. 라운드 3: 라이브러리 발현은 라운드 1 & 2에 따라 진행되었다. 라운드 3은 선택 산출량으로부터 비-특이적 항체를 제거하기 위해 폴리-특이성 시약(PSR)을 사용하였다[와이. 쑤(Y. Xu) 등의 "Addressing Polyspecificity of Antibodies Selected from an in vitro Yeast Presentation System: a FACS-based, High-Throughput Selection and Analytical Tool." PEDS 26.10 (2013): 663-70 참조]. 이들 라이브러리를 바이오티닐화 PSR 시약의1:10 희석액과 배양하고, IgG 발현을 항-LC FITC 시약(IgG 발현 )에 의해 검출하고, PSR 결합을 EA-PE(항원 결합의 검출) 및 프로피디움 요오드 염색에 의한 생존 세포에 의해 검출하였다. IgG 양성, PSR 음성, PI 음성 세포의 상위 1-2 %를 분류하여 라운드 4로 이동했다. 라운드 4: 선택은 항원 결합의 구별을 위해 1 nM 바이오티닐화 PD-L1을 사용한 것을 제외하곤 라운드 2에 따라 진행하였다. 상위 클론을 평판 배양하고 고유한 IgG 서열을 결정하기 위하여 서열화하였다. 항체 생성, 정제 및 특성화를 위해 고유한 IgG 서열을 제출했다.
최적화의 제 2 사이클은 CDRH3 내에서 돌연변이 유발 비율을 증가시키기 위해 퇴화한 CDRH3 올리고를 이용하면서 VH 유전자가 돌연변이 유발 PCR에 의해 다양화되는 라이브러리로부터의 개선된 결합제의 선택에 촛점을 두었다. 이러한 확장 기술은 당업계에 널리 공지된 기술을 사용하여 수행되었다. 라운드 1: 선택은 효모 표면에 전장 모체 IgG의 VH 돌연변이체를 제시함으로써 수행하였다. 이들 라이브러리를 10 nM 바이오티닐화 PD-L1과 배양한 다음, 항-LC FITC 시약(IgG 발현) 및 SA-633(항원 결합의 검출) 및 프로피디움 요오드 염색에 의한 생존 세포에 의해 IgG 발현을 검출하였다. 상위 항원 결합/IgG 발현 세포는 FACS에 의해 선택되었다. 라운드 2: 선택은 항원 결합의 구별을 위해 2 nM 바이오티닐화 PD-L1을 사용한 것을 제외하곤 라운드 1에 따라서 수행되었다. 상위 클론을 평판 배양하고 고유한 IgG 서열을 결정하기 위하여 서열화하였다. 항체 생성, 정제 및 특성화를 위해 고유한 IgG 서열을 제출했다.
CTI-09 혈통
CTI-09 최적화는 CDRH1 및 CDRH2 잡색(variegation)을 사용했다: CTI-09의 CDRH3은 PCR에 의해 확장된 후 1 × 108의 다양성을 갖는 CDRH1 및 CDRH2 변이체와 함께 미리 만들어진 벡터 라이브러리내로 재조합되었다. 라운드 1: 선택은 효모 표면에 전장 CTI-09 IgG의 VH 돌연변이체를 제시함으로써 수행하였다. 이들 라이브러리를 100 nM 바이오티닐화 PD-L1과 배양하였다. 항원 양성 세포는 밀테니(Miltenyi) MACS 시스템을 통해 자기 분리에 의해 선택되었다. b-PD-L1과 함께 배양된 짧은 라이브러리를 스트렙타비딘 자기 비드(streptavidin magnetic bead)와 배양하였다. 효모/비드 복합체를 MACS LS 컬럼상에서 포획하였으며, 표지화되지 않은 세포는 폐기물로 전달되었다. 이어서, b-PD-L1 결합 세포를 선별 과정의 라운드 2 동안 증식시키기 위해 배지내로 용출시켰다. 라운드 2: 선택은 효모 표면에 전장 CTI-07 IgG의 VH 돌연변이체를 제시함으로써 수행하였다. 이들 라이브러리를 20 nM 바이오티닐화 PD-L1과 함께 배양한 다음, 항-LC FITC 시약(IgG 발현) 및 SA-633(항원 결합의 검출) 및 프로피디움 요오드 염색에 의한 생존 세포에 의해 IgG 발현을 검출하였다. 상위 항원 결합/IgG 발현 세포를 FACS에 의해 선택하였다. 라운드 3: 라이브러리 발현을 라운드 1 & 2에 따라서 수행하였다. 라운드 3은 선택 산출량으로부터 비-특이적 항체를 제거하기 위해 폴리-특이성 시약(PSR)을 사용하였다[와이. 쑤(Y. Xu) 등의 "Addressing Polyspecificity of Antibodies Selected from an in vitro Yeast Presentation System: a FACS-based, High-Throughput Selection and Analytical Tool." PEDS 26.10 (2013): 663-70 참조]. 이들 라이브러리를 바이오티닐화 PSR 시약의 1:10 희석액과 배양하고, IgG 발현을 항-LC FITC 시약(IgG 발현)에 의해 검출하고, PSR 결합을 EA-PE(항원 결합의 검출) 및 프로피디움 요오드 염색에 의한 생존 세포에 의해 검출하였다. IgG 양성, PSR 음성, PI 음성 세포의 상위 1-2 %를 분류하여 라운드 4로 옮겼다. 라운드 4: 유도된 라운드 3 산출량을 20nM b-PD-L1과 배양하였다. 세포를 펠렛화하고 세척하여 임의의 잔류하는 b-PD-L1을 제거하였다. 이러한 세포 펠렛을 1μM의 표지화되지 않은 PD-L1내에서 재현탁시켰다. 상위 항원 결합제는 시간이 지남에 따라 b-PD-L1 항원을 보유할 수 있는 능력에 의해 식별되었다. 상위 클론을 평판 배양하고 고유한 IgG 서열을 결정하기 위해 서열화 하였다. 항체 생성, 정제 및 특성화를 위해 고유한 IgG 서열을 제출했다.
항체 생성 및 정제
효모 클론을 포화 상태까지 성장시킨 다음, 30 ℃에서 48 시간동안 진탕시키면서 유도하였다. 유도 후, 효모 세포를 펠렛화하고 상등액을 정제를 위해 수거하였다. IgG를 단백질 A 컬럼을 사용하여 정제하고 아세트산으로 용출시키고 pH 2.0의 Fab 단편을 파파인(papain) 분해에 의해 생성시키고 카파셀렉트(KappaSelect; GE Healthcare LifeSciences)상에서 정제하였다.
실시예 3 - PD-L1 항체와 경쟁적인 FACS
차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포를 PD-L1 발현 벡터로 형질감염시키고 후속적으로 단백질(PD-L1 + 세포)의 발현을 위해 선택하였다. CHO 세포를 1 μg/ml의 바이오틴(biotin)-표지화된 PD-1과 함께 1 시간동안 배양하였다.
바이오틴-표지화된 PD-1과 함께 배양한 다음, 항-PD-L1 항체를 10 ㎍/ml에서 출발하여 4 배 희석하여 상등액에 첨가하고, 1 시간동안 배양하였다. 세포를 세척 한 후 스트렙트아비딘-PE와 접촉시켰다. 스트렙트아비딘-PE 염색을 유세포 분석법으로 분석하여 항-PD-L1 항체에 의한 PD-1 결합의 억제율을 측정하였다.
임상 대조군 mAb CTI-09 CTI-48 CTI-50 CTI-58
IC50, g/ml 9.19e-007 4.156e-005 9.985e-007 1.037e-006 3.463e-006
(서열 인증 번호 73으로 나타낸 VH 도메인 및 서열 인증 번호 74로 나타낸 VL 도메인에 의해 정의된 바와 같은)임상 대조군 mAb, CTI-09, CTI-48, CTI-50 및 CTI-58을 포함하여 몇 개의 항체에 대한 IC50 값을 계산하였으며, 이를 표 3에서 확인할 수 있다. 도 1은 이러한 연구의 결과를 보여준다.
실시예 4 - 항체 결합 동역학, 특이성 및 선택성
항체 결합 동역학을 평가하는 친화도를 측정하는데 있어서 옥텟(octet) 데이터 분석을 사용하였다. 2 mL의 충전 샘플을 동적 완충제에서 20 ug/mL(기본 농도)로 준비했다. 흑색 96-웰 플레이트(well plate)내로 적어도 200 uL의 분취액. 샘플의 농도 범위는 (가능하다면) 상호 작용의 평가된 KD를 기반으로 하였다. 일반적으로, 일련의 희석액은 0.1 KD 내지 10 KD의 범위에 있었다. 샘플 희석제로서 동적 완충제를 사용하여 샘플 컬럼내에 7-점 희석을 수행하였다. 샘플 컬럼의 마지막 웰은 나중에 데이터 분석에서 참고 웰로서 사용되었으며, 동적 완충제만을 함유해야 한다.
바이오센서를 10 분동안 실온에서 동적 완충제(1x PBS, 0.1 % BSA, 0.02 % 트윈20, 0.05 % 나트륨 아지드)에서 수화시켰다.
샘플 ID 충전 샘플 ID KD (M) kon(1/Ms) kdis(1/s)
huPDL1 CTI-48 8.47E-10 7.20E+05 6.10E-04
msPDL1 CTI-48 해당 없음 해당 없음 해당 없음
사이노PDL1 CTI-48 5.55E-10 1.14E+06 6.35E-04
하나의 예시적인 항-PD-L1 항체인 CTI-48에 대한 동역학적 값을 표 4에서 발견할 수 있으며, 실험 결과를 도 2에 나타내었다.
실시예 5 - 항체 결합 친화도
포르테바이오(ForteBio) 친화도 측정을 일반적으로 상술한 바와 같이 진행하였다[예를 들어, 에스텝(Estep) 등의 2013 참조]. 간략하게, 포르테바이오 친화도 측정은 IgG를 AHQ 센서상에서 온라인으로 충전시킴으로써 수행하였다. 센서를 30 분동안 분석 완충액에서 오프라인으로 평형화시킨 다음, 기준선 형성을 위해 60 초동안 온라인으로 모니터링하였다. IgG로 충전된 센서를 100nM 항원에 5 분간 노출시킨 후, 이를 오프-레이트(off-rate) 측정을 위해 5 분동안 분석 완충제로 옮겼다. 동역학은 1:1 결합 모델을 사용하여 분석되었다.
Ab 명 VH CDR3 혈통 IgG K D (M) 일가 kon (1/Ms) koff (1/s)
CTI-09 1 N.B.
CTI-48 1 8.24E-10 7.68E+05 6.33E-04
CTI-49 1 2.31E-09 7.28E+05 1.68E-03
CTI-76 1 8.24E-09 6.62E+05 5.45E-03
CTI-77 1 3.25E-09 5.44E+05 1.77E-03
CTI-78 1 3.46E-09 6.18E+05 2.14E-03
CTI-50 1 1.91E-09 7.94E+05 1.52E-03
CTI-07 2 7.97E-08 4.92E+05 3.92E-02
CTI-58 2 2.41E-08 4.61E+05 1.11E-02
임상 대조군 mAb 적용 불가 9.5E-10
CTI-57 2 8.6E-10 5.2E+05 4.5E-04
CTI-97 1 1.82E-09 5.11E+05 9.28E-04
CTI-98 1 1.70E-09 5.02E+05 8.52E-04
몇 개의 예시적인 항체에 대한 결합값을 표 5에 나타내었다.
실시예 6 - 항-PD-L1 항체의 ADCC 활성
개시된 항-PD-L1 항체의 항체-의존성 세포-매개 세포 독성(ADCC)을 결정하기 위해 리포터 바이오 분석을 수행하였다. 이 분석은 SUDHL-1 림프종 세포 및 기증자 PBMCs를 이용했다. 다양한 항체를 1 또는 3 ㎍/ml의 농도로 시험하였다.
도 3에서 예시적인 항-PD-L1 항체 CTI-48에 대해 보여진 이 연구의 결과는 개시된 항체와 4 시간 동안 배양한 후에 세포 독성 %로 나타낸다.
실시예 7 - 면역 차단 리포터 분석
96 웰 플레이트에서 PD1/PD-L1 차단 분석 키트(Promega, CS187111)를 사용하여 면역 차단 분석을 수행하였다. 세 가지 주요 사건이 분석에서 발생한다. 사건 1: TCR-매개 NFAT 활성화는 조작된 Jurkat PD-1 이펙터 세포 및 aAPC(인공 항원 제시 세포) PD-L1 세포가 TCR/TCR 활성화자 상호 작용을 통해 작용할 때 발생한다. 사건 2: 차단 항체가 존재하지 않을 때 PD-1:PD-L1 결합에 의한 NFAT 신호의 억제. 사건 3: 항-PD-1 또는 항-PD-L1 차단 항체의 첨가에 의한 NFAT 신호의 재생.
분석 전날에, 22.5 mL F-12에 2.5 mL FBS를 첨가함으로써 해동용(Thaw-And-Use) PD-L1 세포에 대한 50 mL 원추형 튜브에서 세포 재생 배지(10 % FBS/F-12) 25 ml를 제조하였다. 해동용 PD-L1 세포(CS187103)의 한 병을 냉동고 보관에서 꺼내서 드라이 아이스상의 벤치로 옮겼다. 바이러스는 세포가 해동될 때까지(약 3-4 분) 37 ℃ 수조에서 해동시켰다. 세포 현탁액을 위아래로 피펫팅(pipetting)하여 바이알에 완만하게 혼합하고, 14.5 mL 세포 재생 배지를 함유한 "PD-L1 세포"로 표지된 튜브로 모든 세포(0.5 mL)를 옮긴 다음 완만하게 도치시겼다. 세포 현탁액을 무균 시약 저장조로 옮겼다. 즉시로, 다중 채널 피펫을 사용하여 세포 재생 배지 100 μL를 분석 플레이트용 외부 웰에 웰 당 첨가하였다. 플레이트를 37 ℃에서 CO2 배양기에서 하룻밤동안 배양하였다.
분석 당일, 새로운 분석 완충액(RPMI 1640 + 1 % FBS)을 제조하고, 최종 농도의 2 배로 시험 항체 각각에 대한 분석 완충액에서 7-점 3 배의 일련의 희석을 수행하였다. 95 μL의 배지를 분석 플레이트상의 모든 웰에서 제거하고, 40 μL의 시험 항체의 일련의 희석액을 PD-L1 세포를 함유한 웰에 첨가했다. 웰당 80 μL의 분석 완충제를 각 플레이트에 대한 외부 웰에 첨가 하였다.
해동용 PD-1 이펙터 세포(CS187105)를 분석 플레이트에 옮기고 플레이트를 CO2 배양기에서 37 ℃에서 6 시간 동안 배양하였다. 6 시간 유도 후, 분석 플레이트를 CO2 배양기에서 꺼내어 주위 온도에서 5 내지10 분 동안 평형화시켰다. Bio-GloTM 시약 80 μL를 모든 시험 웰에 첨가하고 플레이트를 주위 온도에서 5 내지 10 분 추가로 배양했다. 발광은 POLARstar Omega 플레이트 판독기에서 0.5 초의 통합으로 측정되었다.
다음과 같은 항체를 10 ㎍/㎖, 3.33 ㎍/㎖, 1.11 ㎍/mL, 0.37 ㎍/mL, 0.123 ㎍/mL, 0.041 ㎍/mL 및 0.014 ㎍/mL의 최종 농도로 시험 하였다: CTI-2, 임상 대조군 mAb, CTI-09, CTI-48, CTI-50, CTI-07 및 CTI-58.
임상 대조군 mAb, CTI-48 및 CTI-49를 포함하는 예시적인 항체에 대한 결과를 하기 표 6에 나타내었다.
임상 대조군 mAb CTI-48 CTI-49
EC50, g/ml 9.213e-008 7.750e-008 9.191e-008
실시예 8 - PD-L1/B7.1 억제제 스크리닝 분석
상업적으로 이용 가능한 분석 키트를 사용하여 개시된 항체와 PD-L1/B7.1의 상호 작용을 스크리닝 및 프로파일링 하였다. 키트는 바이오틴으로 표지된 B7-1(CD80), 정제된 PD-L1, 스트렙트아비딘으로 표지된 HRP 및 100 개의 결합 반응용 분석 완충액을 갖는 96-웰 형식으로 제공되었다. 키트는 스트렙트아비딘-HRP에 의해 바이오틴으로 표지된 B7.1을 검출하는데 사용되었다.
먼저, PD-L1을 96-웰 플레이트에 코팅 하였다. 다음으로, 기재된 항체 중 어느 하나, 양성 대조군, 기질 대조군 또는 블랭크를 각 웰에 첨가하고 배양한 후 B7.1-바이오틴을 첨가하였다. 마지막으로, 플레이트를 스트렙트아비딘-HRP로 처리 한 후 HRP 기질을 첨가하여 화학 발광을 발생시키며, 이때, 이것은 화학 발광 판독기를 사용하여 측정할 수 있다.
다음과 같은 항체를 30 μg/mL, 10 μg/mL, 3.33 μg/mL, 1.11 μg/mL, 0.37 μg/mL 및 0.123 μg/mL의 농도에서 PD-L1 및 B7.1의 결합에 대한 억제 효과에 대해 시험하였다: CTI-1, CTI-2, CTI-33, CTI-48 및 CTI-55.
예시적인 결과는 개시된 항체의 결합 억제에 대한 IC50이 0.1816 μg/mL 내지 0.5056 μg/mL 범위에 있는 것으로 나타났다. 예를 들어, CTI-48의 IC50은 0.1816 μg/mL로 계산되었다. CTI-48 및 임상 대조군 mAb의 활성의 비교를 도 5에 나타내었다.
실시예 9 - IFN-γ 생성에 대한 항체의 효과
IFN-γ 생성에 대한 개시된 항체의 효과를 결정하기 위해 항체를 혼합 림프구 반응(MLR) 배양물에 투여했다. IFN-γ의 생성 배수 변화는 10 μg/mL 농도로 항체와 4 일간 MLR 배양한 후 결정되었다. 적절한 동기준 표본 대조군(hIgG1)을 포함한 예시적인 결과. 도 6에 도시된 바와 같이, CTI-48은 임상 대조군 mAb에 대해 필적할만한 반응을 유도했으며, 많은 시험된 항체가 대조군 수준에 비해 CTI-33 및 CTI-55에 의해 대략 10 배의 증가를 비롯하여 IFN-γ 생성의 통계적으로 유의한 증가를 유도했다.
본 명세서에서 언급된 모든 특허 및 공보는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 숙련된 당업자의 수준을 나타낸다. 모든 특허 및 공보는 각각의 개별적인 공보가 구체적으로 및 개별적으로 참고로 포함되도록 나타낸 것과 동일한 정도로 본 원에서 참고로 인용된다.
추가로, 당업자는 본 발명이 목적을 수행하도록 잘 채택되었으며 언급된 의도 및 이점 뿐만 아니라 본 원에 고유한 의도 및 이점을 얻도록 잘 채택되었다는 것을 쉽게 인식할 것이다. 본 원에서의 변형 및 다른 용도는 당업자에게 자명할 것이다. 이러한 변형은 본 발명의 사상내에 포함되며, 본 발명의 비-한정적인 실시 양태를 설명하는 특허 청구 범위에 의해 정의된다.
없음
SEQUENCE LISTING <110> CHECKPOINT THERAPEUTICS, INC. <120> PD-L1-SPECIFIC ANTIBODIES AND METHODS OF USING THE SAME <130> 099263-0802 <140> <141> <160> 78 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Gly Thr Phe Ser Arg Ser Ala Ile Ser 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Gly Thr Phe Ser Gly Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Gly Thr Phe Trp Arg Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Gly Thr Phe Gly Ser Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Gly Thr Phe Gly Thr Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 7 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Gly Thr Phe Ser Pro Lys Ala Ile Ser 1 5 <210> 8 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 9 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Val Ile Ile Pro Ala Phe Gly Glu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 10 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Val Ile Ile Pro Ala Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 11 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Val Ile Ile Pro Ile Trp Gly Lys Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 12 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Gly Ile Tyr Pro Ala Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 13 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Gly Ile Tyr Pro Arg Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 14 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Val Ile Ile Pro Ile Phe Gly Pro Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 15 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Ala Arg Gly Arg Gln Met Phe Gly Ala Gly Ile Asp Phe 1 5 10 <210> 16 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Tyr Thr Leu Ser Ser His Gly Ile Thr 1 5 <210> 17 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Trp Ile Ser Ala His Ser Gly His Ala Ser Asn Ala Gln Lys Val Glu 1 5 10 15 Asp <210> 18 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Ala Arg Val Trp Arg Ala Leu Tyr His Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 19 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Ala Arg Val His Ala Ala Leu Tyr His Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 20 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Asp Ser Asn Tyr Val Gln 1 5 10 <210> 21 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Glu Asp Asn Gln Arg Pro Ser 1 5 <210> 22 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Gln Ser Tyr Asp Ser Asn Asn Arg His Val Ile 1 5 10 <210> 23 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23 Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Gly Val His 1 5 10 <210> 24 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24 Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser 1 5 <210> 25 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Trp Val 1 5 10 <210> 26 <211> 26 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly 20 25 <210> 27 <211> 26 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly 20 25 <210> 28 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 29 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 30 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 31 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31 Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys 1 5 10 15 Thr Val Thr Ile Ser Cys 20 <210> 32 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32 Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Thr Thr Val Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 33 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser 1 5 10 15 Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr 20 25 30 Tyr Cys <210> 34 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 1 5 10 <210> 35 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Gln Met Phe Gly Ala Gly Ile Asp Phe Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 36 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Arg Ser 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Ile Pro Ala Phe Gly Glu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Gln Met Phe Gly Ala Gly Ile Asp Phe Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 37 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Ile Pro Ala Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Gln Met Phe Gly Ala Gly Ile Asp Phe Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 38 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Trp Arg Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Ile Pro Ile Trp Gly Lys Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Gln Met Phe Gly Ala Gly Ile Asp Phe Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 39 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 39 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Gly Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Tyr Pro Ala Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Gln Met Phe Gly Ala Gly Ile Asp Phe Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 40 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 40 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Gly Thr Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Tyr Pro Arg Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Gln Met Phe Gly Ala Gly Ile Asp Phe Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 41 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 41 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Pro Lys 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Ile Pro Ile Phe Gly Pro Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Gln Met Phe Gly Ala Gly Ile Asp Phe Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 42 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 42 Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys 1 5 10 15 Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Asp Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Thr Thr Val 35 40 45 Ile Tyr Glu Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly 65 70 75 80 Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser 85 90 95 Asn Asn Arg His Val Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 43 <211> 26 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 43 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly 20 25 <210> 44 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 44 Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Arg Ser Leu Thr Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 45 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 45 Leu Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys 20 <210> 46 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 46 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr 1 5 10 15 <210> 47 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 47 Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 48 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Ser Ser His 20 25 30 Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ala His Ser Gly His Ala Ser Asn Ala Gln Lys Val 50 55 60 Glu Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val Trp Arg Ala Leu Tyr His Gly Met Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 49 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 49 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Ser Ser His 20 25 30 Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ala His Ser Gly His Ala Ser Asn Ala Gln Lys Val 50 55 60 Glu Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val His Ala Ala Leu Tyr His Gly Met Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 50 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50 Leu Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Gly Val 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr 35 40 45 Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His 85 90 95 Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 51 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 51 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Arg Ser 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Ile Pro Ala Phe Gly Glu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Gln Met Phe Gly Ala Gly Ile Asp Phe Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 52 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Ile Pro Ala Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Gln Met Phe Gly Ala Gly Ile Asp Phe Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 53 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 53 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Trp Arg Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Ile Pro Ile Trp Gly Lys Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Gln Met Phe Gly Ala Gly Ile Asp Phe Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 54 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 54 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Gly Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Tyr Pro Ala Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Gln Met Phe Gly Ala Gly Ile Asp Phe Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 55 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 55 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Gly Thr Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Tyr Pro Arg Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Gln Met Phe Gly Ala Gly Ile Asp Phe Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 56 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 56 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Pro Lys 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Ile Pro Ile Phe Gly Pro Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Gln Met Phe Gly Ala Gly Ile Asp Phe Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 57 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 57 Ala Arg Val His Ala Ala Leu Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 58 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 58 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Ser Ser His 20 25 30 Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ala His Ser Gly His Ala Ser Asn Ala Gln Lys Val 50 55 60 Glu Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val His Ala Ala Leu Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 59 <211> 360 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 59 gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca agtccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc tagaggcaga 300 cagatgttcg gtgcaggcat cgatttctgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcctca 360 <210> 60 <211> 360 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 60 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc cgttcggcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggagtt atcatccctg cgtttggtga ggcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc tagaggcaga 300 cagatgttcg gtgcaggcat cgatttctgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcctca 360 <210> 61 <211> 360 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 61 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggta 60 tcatgcaagg cttctggagg caccttcagc gggtatgcta tctcttgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggagtt atcatccctg cttttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagaggcaga 300 cagatgttcg gtgcaggcat cgatttctgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcctca 360 <210> 62 <211> 360 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 62 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttctgg aggtatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggagtt atcatcccta tctggggtaa agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagaggcaga 300 cagatgttcg gtgcaggcat cgatttctgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcctca 360 <210> 63 <211> 360 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 63 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcggg agctatgcta tctcttgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atctatcctg cttttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc tagaggcaga 300 cagatgttcg gtgcaggcat cgatttctgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcctca 360 <210> 64 <211> 360 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 64 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcggg acgtatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atctatccta ggtttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc tagaggcaga 300 cagatgttcg gtgcaggcat cgatttctgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcctca 360 <210> 65 <211> 360 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 65 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc ccgaaggcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggagtg atcatcccta tctttggtcc ggcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc tagaggcaga 300 cagatgttcg gtgcaggcat cgatttctgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcctca 360 <210> 66 <211> 360 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 66 gaggttcagc tggtgcagtc tggaggtgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggtta cacccttagc agccatggta tcacctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctc acagtggtca cgcaagcaat 180 gcacagaagg tcgaggacag agtcaccatg accacagaca catccacgaa cacagcctac 240 atggagctga ggagcctgac agctgacgac acggcggtgt actactgcgc cagagtccat 300 gccgccttgt actacggtat ggacgtctgg gggcaaggga ccctggtcac cgtctcctca 360 <210> 67 <211> 360 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 67 gaggttcagc tggtgcagtc tggaggtgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggtta cacccttagc agccatggta tcacctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctc acagtggtca cgcaagcaat 180 gcacagaagg tcgaggacag agtcaccatg accacagaca catccacgaa cacagcctac 240 atggagctga ggagcctgac agctgacgac acggcggtgt actactgcgc cagagtccat 300 gccgccttgt accacggtat ggacgtctgg gggcaaggga ccctggtcac cgtctcctca 360 <210> 68 <211> 360 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 68 gaggttcagc tggtgcagtc tggaggtgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggtta cacccttagc agccatggta tcacctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctc acagtggtca cgcaagcaat 180 gcacagaagg tcgaggacag agtcaccatg accacagaca catccacgaa cacagcctac 240 atggagctga ggagcctgac agctgacgac acggcggtgt actactgcgc cagagtgtgg 300 agggccttgt accacggtat ggacgtctgg gggcaaggga ccctggtcac cgtctcctca 360 <210> 69 <211> 336 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 69 aattttatgc tgactcagcc ccactctgtg tcggagtctc cggggaagac ggtaaccatc 60 tcctgcaccc gcagcagtgg cagcattgac agcaactatg tgcagtggta ccagcagcgc 120 ccgggcagtg cccccaccac tgtgatctat gaggataacc aaagaccctc tggggtccct 180 gatcggttct ctggctccat cgacagctcc tccaactctg cctccctcac catctctgga 240 ctgaagactg aggacgaggc tgactactac tgtcagtctt atgatagcaa caataggcat 300 gtgatattcg gcggagggac caagctgacc gtccta 336 <210> 70 <211> 324 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 70 ttgtctgtgc tgactcagcc accctcagtg tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60 acctgtgggg gaaacaacat tggaagtaaa ggtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120 caggcccctg tgctggtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180 ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240 gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gacagtagta gtgatcattg ggtgttcggc 300 ggagggacca agctgaccgt ccta 324 <210> 71 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 71 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Gln Met Phe Gly Ala Gly Ile Asp Phe Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 72 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 72 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Ser Ser His 20 25 30 Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ala His Ser Gly His Ala Ser Asn Ala Gln Lys Val 50 55 60 Glu Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val His Ala Ala Leu Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 73 <211> 451 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 73 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 74 <211> 215 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 74 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 75 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 75 Gln Ser Tyr Asp Ser Asn Leu Arg His Val Ile 1 5 10 <210> 76 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 76 Gln Ser Tyr Asp Ser Asn Ile Arg His Val Ile 1 5 10 <210> 77 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 77 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Trp 1 5 10 15 Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr 20 25 30 Tyr Cys <210> 78 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 78 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Val 1 5 10 15 Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr 20 25 30 Tyr Cys

Claims (36)

  1. 인간 프로그래밍된 사멸-리간드 1(PD-L1)에 결합하는 항체 또는 이의 기능성 단편으로서,
    a) 서열 인증 번호 2를 포함하는 HCDR1, 서열 인증 번호 9를 포함하는 HCDR2, 서열 인증 번호 15를 포함하는 HCDR3, 서열 인증 번호 20을 포함하는 LCDR1, 서열 인증 번호 21을 포함하는 LCDR2, 및 서열 인증 번호 22를 포함하는 LCDR3;
    b) 서열 인증 번호 3을 포함하는 HCDR1, 서열 인증 번호 10을 포함하는 HCDR2, 서열 인증 번호 15를 포함하는 HCDR3, 서열 인증 번호 20을 포함하는 LCDR1, 서열 인증 번호 21을 포함하는 LCDR2, 및 서열 인증 번호 22를 포함하는 LCDR3;
    c) 서열 인증 번호 4를 포함하는 HCDR1, 서열 인증 번호 11을 포함하는 HCDR2, 서열 인증 번호 15를 포함하는 HCDR3, 서열 인증 번호 20을 포함하는 LCDR1, 서열 인증 번호 21을 포함하는 LCDR2, 및 서열 인증 번호 22를 포함하는 LCDR3;
    d) 서열 인증 번호 5를 포함하는 HCDR1, 서열 인증 번호 12를 포함하는 HCDR2, 서열 인증 번호 15를 포함하는 HCDR3, 서열 인증 번호 20을 포함하는 LCDR1, 서열 인증 번호 21을 포함하는 LCDR2, 및 서열 인증 번호 22를 포함하는 LCDR3;
    e) 서열 인증 번호 6을 포함하는 HCDR1, 서열 인증 번호 13을 포함하는 HCDR2, 서열 인증 번호 15를 포함하는 HCDR3, 서열 인증 번호 20을 포함하는 LCDR1, 서열 인증 번호 21을 포함하는 LCDR2, 및 서열 인증 번호 22를 포함하는 LCDR3;
    f) 서열 인증 번호 7을 포함하는 HCDR1, 서열 인증 번호 14를 포함하는 HCDR2, 서열 인증 번호 15를 포함하는 HCDR3, 서열 인증 번호 20을 포함하는 LCDR1, 서열 인증 번호 21을 포함하는 LCDR2, 및 서열 인증 번호 22를 포함하는 LCDR3;
    g) 서열 인증 번호 16을 포함하는 HCDR1, 서열 인증 번호 17을 포함하는 HCDR2, 서열 인증 번호 18을 포함하는 HCDR3, 서열 인증 번호 23을 포함하는 LCDR1, 서열 인증 번호 24를 포함하는 LCDR2, 및 서열 인증 번호 25를 포함하는 LCDR3;
    h) 서열 인증 번호 16을 포함하는 HCDR1, 서열 인증 번호 17을 포함하는 HCDR2, 서열 인증 번호 19를 포함하는 HCDR3, 서열 인증 번호 23을 포함하는 LCDR1, 서열 인증 번호 24을 포함하는 LCDR2, 및 서열 인증 번호 25를 포함하는 LCDR3; 또는
    i) 서열 인증 번호 2을 포함하는 HCDR1, 서열 인증 번호 9를 포함하는 HCDR2, 서열 인증 번호 15를 포함하는 HCDR3, 서열 인증 번호 20을 포함하는 LCDR1, 서열 인증 번호 21을 포함하는 LCDR2, 및 서열 인증 번호 75를 포함하는 LCDR3
    를 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  2. 제1항에 있어서, 서열 인증 번호 2를 포함하는 HCDR1, 서열 인증 번호 9를 포함하는 HCDR2, 서열 인증 번호 15를 포함하는 HCDR3, 서열 인증 번호 20을 포함하는 LCDR1, 서열 인증 번호 21을 포함하는 LCDR2, 및 서열 인증 번호 22를 포함하는 LCDR3를 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  3. 제1항에 있어서, 서열 인증 번호 3을 포함하는 HCDR1, 서열 인증 번호 10을 포함하는 HCDR2, 서열 인증 번호 15를 포함하는 HCDR3, 서열 인증 번호 20을 포함하는 LCDR1, 서열 인증 번호 21을 포함하는 LCDR2, 및 서열 인증 번호 22를 포함하는 LCDR3를 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  4. 제1항에 있어서, 서열 인증 번호 4를 포함하는 HCDR1, 서열 인증 번호 11을 포함하는 HCDR2, 서열 인증 번호 15를 포함하는 HCDR3, 서열 인증 번호 20을 포함하는 LCDR1, 서열 인증 번호 21을 포함하는 LCDR2, 및 서열 인증 번호 22를 포함하는 LCDR3를 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  5. 제1항에 있어서, 서열 인증 번호 5를 포함하는 HCDR1, 서열 인증 번호 12를 포함하는 HCDR2, 서열 인증 번호 15를 포함하는 HCDR3, 서열 인증 번호 20을 포함하는 LCDR1, 서열 인증 번호 21을 포함하는 LCDR2, 및 서열 인증 번호 22를 포함하는 LCDR3를 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  6. 제1항에 있어서, 서열 인증 번호 6을 포함하는 HCDR1, 서열 인증 번호 13을 포함하는 HCDR2, 서열 인증 번호 15를 포함하는 HCDR3, 서열 인증 번호 20을 포함하는 LCDR1, 서열 인증 번호 21을 포함하는 LCDR2, 및 서열 인증 번호 22를 포함하는 LCDR3를 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  7. 제1항에 있어서, 서열 인증 번호 7을 포함하는 HCDR1, 서열 인증 번호 14를 포함하는 HCDR2, 서열 인증 번호 15를 포함하는 HCDR3, 서열 인증 번호 20을 포함하는 LCDR1, 서열 인증 번호 21을 포함하는 LCDR2, 및 서열 인증 번호 22를 포함하는 LCDR3를 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  8. 제1항에 있어서, 서열 인증 번호 16을 포함하는 HCDR1, 서열 인증 번호 17을 포함하는 HCDR2, 서열 인증 번호 18을 포함하는 HCDR3, 서열 인증 번호 23을 포함하는 LCDR1, 서열 인증 번호 24를 포함하는 LCDR2, 및 서열 인증 번호 25를 포함하는 LCDR3를 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  9. 제1항에 있어서, 서열 인증 번호 16을 포함하는 HCDR1, 서열 인증 번호 17을 포함하는 HCDR2, 서열 인증 번호 19를 포함하는 HCDR3, 서열 인증 번호 23을 포함하는 LCDR1, 서열 인증 번호 24을 포함하는 LCDR2, 및 서열 인증 번호 25를 포함하는 LCDR3를 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  10. 제1항에 있어서, 서열 인증 번호 2을 포함하는 HCDR1, 서열 인증 번호 9를 포함하는 HCDR2, 서열 인증 번호 15를 포함하는 HCDR3, 서열 인증 번호 20을 포함하는 LCDR1, 서열 인증 번호 21을 포함하는 LCDR2, 및 서열 인증 번호 75를 포함하는 LCDR3를 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  11. 인간 프로그래밍된 사멸-리간드 1(PD-L1)에 결합하는 항체 또는 이의 기능성 단편으로서, (i) 서열 인증 번호 36, 37, 38, 39, 40 및 41로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 가변성 중쇄 서열 및 (ii) 서열 인증 번호 42를 포함하는 가변성 경쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  12. 제11항에 있어서, 서열 인증 번호 36을 포함하는 가변성 중쇄 서열 및 서열 인증 번호 42를 포함하는 가변성 경쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  13. 제11항에 있어서, 서열 인증 번호 37을 포함하는 가변성 중쇄 서열 및 서열 인증 번호 42를 포함하는 가변성 경쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  14. 제11항에 있어서, 서열 인증 번호 38을 포함하는 가변성 중쇄 서열 및 서열 인증 번호 42를 포함하는 가변성 경쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  15. 제11항에 있어서, 서열 인증 번호 39를 포함하는 가변성 중쇄 서열 및 서열 인증 번호 42를 포함하는 가변성 경쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  16. 제11항에 있어서, 서열 인증 번호 40을 포함하는 가변성 중쇄 서열 및 서열 인증 번호 42를 포함하는 가변성 경쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  17. 제11항에 있어서, 서열 인증 번호 41을 포함하는 가변성 중쇄 서열 및 서열 인증 번호 42를 포함하는 가변성 경쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  18. 인간 프로그래밍된 사멸-리간드 1(PD-L1)에 결합하는 항체 또는 이의 기능성 단편으로서, (i) 서열 인증 번호 51, 52, 53, 54, 55 및 56으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 가변성 중쇄 서열 및 (ii) 서열 인증 번호 42를 포함하는 가변성 경쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  19. 제18항에 있어서, 서열 인증 번호 51을 포함하는 가변성 중쇄 서열 및 서열 인증 번호 42를 포함하는 가변성 경쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  20. 제18항에 있어서, 서열 인증 번호 52를 포함하는 가변성 중쇄 서열 및 서열 인증 번호 42를 포함하는 가변성 경쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  21. 제18항에 있어서, 서열 인증 번호 53을 포함하는 가변성 중쇄 서열 및 서열 인증 번호 42를 포함하는 가변성 경쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  22. 제18항에 있어서, 서열 인증 번호 54를 포함하는 가변성 중쇄 서열 및 서열 인증 번호 42를 포함하는 가변성 경쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  23. 제18항에 있어서, 서열 인증 번호 55를 포함하는 가변성 중쇄 서열 및 서열 인증 번호 42를 포함하는 가변성 경쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  24. 제18항에 있어서, 서열 인증 번호 56을 포함하는 가변성 중쇄 서열 및 서열 인증 번호 42를 포함하는 가변성 경쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  25. 인간 프로그래밍된 사멸-리간드 1(PD-L1)에 결합하는 항체 또는 이의 기능성 단편으로서, (i) 서열 인증 번호 48 및 49로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 가변성 중쇄 서열 및 (ii) 서열 인증 번호 50을 포함하는 가변성 경쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  26. 제25항에 있어서, 서열 인증 번호 48을 포함하는 가변성 중쇄 서열 및 서열 인증 번호 50을 포함하는 가변성 경쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  27. 제25항에 있어서, 서열 인증 번호 49를 포함하는 가변성 중쇄 서열 및 서열 인증 번호 50을 포함하는 가변성 경쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 기능성 단편.
  28. 제1항에 따른 항체 또는 이의 기능성 단편을 포함하는, 암종양 세포 증식 억제용 약학적 조성물.
  29. 제1항에 따른 항체를 포함하는, 암 치료용 약학적 조성물.
  30. 제29항에 있어서, 암이 폐암, 흑색종, 신장 세포 암종, 두경부암, 또는 방광암인, 조성물.
  31. 제29항에 있어서, 암이 암종(carcinoma)인, 조성물.
  32. 제29항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열 인증 번호 2를 포함하는 HCDR1, 서열 인증 번호 9를 포함하는 HCDR2, 서열 인증 번호 15를 포함하는 HCDR3, 서열 인증 번호 20을 포함하는 LCDR1, 서열 인증 번호 21을 포함하는 LCDR2, 및 서열 인증 번호 22를 포함하는 LCDR3를 포함하는, 조성물.
  33. 제32항에 있어서, 항체가 서열 인증 번호 36을 포함하는 가변성 중쇄 서열 및 서열 인증 번호 42를 포함하는 가변성 경쇄 서열을 포함하는, 조성물.
  34. 제32항에 있어서, 항체가 서열 인증 번호 51을 포함하는 가변성 중쇄 서열 및 서열 인증 번호 42를 포함하는 가변성 경쇄 서열을 포함하는, 조성물.

  35. 삭제
  36. 삭제
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