KR102420544B1 - 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 본 발명은 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물, 식품 조성물, 피부 노화방지 및 피부 주름 개선용 약학적 조성물 및 과색소성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이며, 또한 피부 노화 방지 활성을 갖는 장미꽃잎 추출물의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 장미꽃잎 추출물은 티로시나아제에 대한 억제 활성이 우수하고 콜라겐 분해능을 갖는 MMP-1의 생성을 억제하는 활성이 우수할 뿐만 아니라 상기 추출물에는 다량의 총 플라보노이드를 함유하고 있어 높은 항산화 활성도 가지고 있으므로, 피부주름 개선, 피부탄력 개선, 피부보습 개선 또는 피부미백 개선, 발모 효과가 있으므로 피부 노화방지를 위한 식품, 화장품 및 의약품 등 다양한 산업분야에 유용하게 사용할 수 있다.

Description

장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 조성물{COMPOSITION FOR PREVENTING THE SKIN AGING COMPRISING ROSA GALLICA PETAL EXTRACTS AS AN ACTIVE INGREDIENT}

본 발명은 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부노화 방지용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는, 천연 소재로 세포 독성이 없으며, 콜라겐 분해효소의 억제, 발모 세포의 생장을 촉진하여 주름 개선, 피부 미백, 보습, 발모에 효과적인 장미꽃잎 추출물을 포함하는 피부노화방지용 조성물을 제공한다.

피부는 인체에서 가장 넓은 부피를 차지하여 인체 부피의 약 16%를 차지한다. 피부는 외부환경과 직접 접해 있으면서 다양한 환경적 변수, 이를테면 온도, 습도, 항원 및 자외선 등으로부터 인체를 보호하는 중요한 보호막 역할을 담당한다. 하지만, 나이가 들어감에 따라 세포 증식 및 면역활성이 약해져 외부환경으로부터의 오염물질, 강한 자외선, 스트레스로 인한 피부 세포의 손상을 신속히 복구하지 못하여 피부주름, 탄력 손실 및 각질화 등이 발생한다.

피부의 노화는 크게 내인적 노화와 외인적 노화로 나뉜다[Cosmetics & Toiletories, 111:31-37(1996)]. 내인적 노화는 나이가 듦에 따라 피부의 생리적 기능이 점차 저하되어 자연적으로 나타나는 노화 현상으로, 임상학적으로 탄력이 감소하고 피부의 결이 거칠어지며 깊은 주름이 생기고 색소가 침착되는 특징이 있다[Arch Dermatol, 130:87-95(1994)]. 외인적 노화는 자외선, 활성 산소종(Reactive oxygen species) 및 스트레스 등의 외인적 요인에 의해 발생하는 노화 현상을 말한다.

피부 노화의 주요 원인 중 하나인 활성 산소종은 과도한 방사선과 자외선의 조사, 화학물질과 담배의 섭취 등의 외적 요인, 허혈, 재환류, 염증, 스트레스 및 노화 등의 내적 요인이 원인이 되어 생성된다. 과잉으로 생성된 활성 산소종은 화학적 반응성이 높고, 생체 내에서 인접한 지질, 핵산 및 단백질 등의 성분과 쉽게 반응하여 여러 가지 질병으로 이어져 산화적 장애를 초래할 뿐만 아니라 피부 노화를 촉진시킨다.

또한 사람의 피부색은 표피에 존재하는 멜라닌의 양과 분포에 의하여 주로 결정되어지는데, 멜라닌은 단백질과 결합된 형태의 중합체로 피부에 존재하여 자외선을 포함한 넓은 영역의 빛을 흡수하는 기능이 있어서 자외선 조사로부터 신체를 보호하는 중요한 기능을 가지고 있지만, 비정상적으로 생합성이 저해되면 백반증과 같은 피부병변이 유발되고, 반대로 멜라닌이 과잉 생산되는 경우엔 기미, 주근깨와 같은 색소침착이 형성할 뿐 아니라 피부노화를 촉진하며 피부암 유발과도 밀접한 관련이 있는 것으로 알려져 있다. 멜라닌은 티로시나아제(tyrosinase)를 포함하는 여러 효소의 일련에 걸친 산화 환원 반응을 통하여 생합성 되며, 특히 티로신(L-tyrosine)을 기질로 이용하여 L-DOPA(L-3,4-dihydroxyphenylalanine)와 순차적으로 DOPA퀴논(L-DOPAquinone)으로 전환시키는 티로시나아제는 멜라닌 생합성 초기 반응으로서 멜라닌 생합성 속도결정 단계로 매우 중요하다.

피부색소 이상침착 증상과 자외선 노출 등에 따른 과도한 멜라닌 색소 침착은 피부 노화의 지표가 되며, 다양한 피부 질환의 원인으로 작용할 수 있다.

또한 피부노화는 주름의 증가 처짐 및 이완 등과 밀접한 관련이 있는데, 이러한 현상을 일으키는 원인으로는 생리적인 자연노화와 자외선 노출 등에 의한 환경적인 요인들이 거론되고 있다. 특히 광노화된 피부에서는 거칠어짐, 탄력 손실, 주름 발생 및 불규칙한 색소 침착 등과 같은 외관상의 특징이 관찰된다.

피부의 주름형성은 피부의 주요 구성성분인 콜라겐(collagen)의 합성, 분해 및 수분 함유량 등의 기초적인 생리 대사 변화와 관련되어 있는 것으로 알려져 있으며, 피부 진피층에 존재하는 콜라겐은 피부 전체 건조 중량의 약 70-80%를 차지하며 탄력섬유인 엘라스틴(elastin)과 함께 피부의 탄력을 주관하는 것으로 알려져 있다. 한편, 자외선에 의해 활성 산소종(reactive oxygen species) 생성이 증가되고 피부의 효소적·비효소적 항산화 방어체계가 붕괴되면 콜라겐의 분해가 증가하고 생합성을 감소시켜 진피층 내의 콜라겐이 현저하게 감소된다. 또한 콜라겐 감소에 중요한 영향을 미치는 것은 콜라겐 분해 효소(MMPs; matrix metalloproteinases)인데, 이는 세포외기질(extracellular matrix)과 기저막(basement membrane)의 분해에 관여한다. 이러한 콜라겐 분해 효소는 자외선에 의해 활성이 증가되며 이를 억제함으로써 자외선에 의해 유도되는 피부 두께 증가 및 주름 형성을 감소시킬 수 있어, MMPs의 조절을 통해 피부노화를 예방 및 개선할 수 있다.

한편, 현대인들의 외모에 대한 관심 및 피부에 대한 관심이 증가하면서 피부 노화를 개선할 수 있는 다양한 제품들의 개발이 진행되고 있으나 대부분의 제품들을 합성 화합물을 이용한 것으로 피부 부작용에 대한 문제점들이 발생하고 있어 피부 안정성을 가지면서 피부 주름 및 피부 미백 개선 활성이 우수한 새로운 천연소재의 개발이 필요한 실정이다.

대한민국 등록특허 제10-1787583호

이에 본 발명자들은 장미꽃잎으로부터 피부 주름 및 피부 미백 활성이 우수한 장미꽃잎의 에탄올 추출물을 제조하는 최적의 조건을 확립하였고, 본 발명의 방법으로 제조된 장미꽃잎의 에탄올 추출물이 피부 주름 및 피부 미백 활성이 우수하여 피부 노화를 위한 다양한 용도로 사용 가능함을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명의 목적은 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부 노화 방지용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부 노화 방지용 식품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부 노화방지 및 피부 주름 개선용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하는, 과색소성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하는, 발모 촉진 또는 탈모 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 장미꽃잎에 30%~50%의 에탄올을 첨가하고 70~90℃의 온도에서 추출하는 단계를 포함하는, 피부 노화 방지 활성을 갖는 장미꽃잎 추출물의 제조방법을 제공하는 것이다.

상술한 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부 노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 장미꽃잎 추출물은 에탄올을 이용하여 수득한 에탄올 추출물일 수 있다. 바람직하게는 상기 에탄올 추출물은 30%~50%의 에탄올을 이용하여 70~90℃의 온도에서 추출한 추출물인 것일 수 있다.

본 발명에서, 상기 피부 노화 방지는 피부주름 개선, 피부탄력 개선, 피부보습 개선 또는 피부미백 개선을 포함한다.

본 발명의 다른 실시예에 따르면, 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부 노화 방지용 식품 조성물이 제공된다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 장미꽃잎 추출물은 에탄올을 이용하여 수득한 에탄올 추출물일 수 있으며, 바람직하게는 상기 에탄올 추출물은 30%~50%의 에탄올을 이용하여 70~90℃의 온도에서 추출한 추출물일 수 있다.

또한, 상기 피부 노화 방지는 피부주름 개선, 피부탄력 개선, 피부보습 개선 또는 피부미백 개선을 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시에에 따르면 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부 노화방지 및 피부 주름 개선용 약학적 조성물이 제공된다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 추출물은 30%~50%의 에탄올을 이용하여 70~90℃의 온도에서 추출한 추출물일 수 있다.

본 발명은 또한, 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하는, 과색소성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에서, 상기 과색소성 질환은 기미, 주근깨, 반점, 일광흑자, 약물성 색소침착, 염증성 색소침착, 노인성 색소침착 및 임신성 색소침착을 포함한다.

본 발명은 또한, 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하는, 탈모 방지 또는 발모 촉진용 약학적 조성물, 식품 조성물 및 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에서, 탈모 방지 발모 촉진용 약학적 조성물, 식품 조성물 및 화장료 조성물에서, 상기 장미꽃잎의 에탄올 추출물은 30%~50%의 에탄올을 이용하여 70~90℃의 온도에서 추출한 추출물일 수 있다.

본 발명의 또 다른 실시예에 따르면, 장미꽃잎에 30%~50%의 에탄올을 첨가하고 70~90℃의 온도에서 추출하는 단계를 포함하는, 피부 노화 방지 활성을 갖는 장미꽃잎 추출물의 제조방법이 제공된다. 본 발명에 따르면 상기 피부 노화 방지는 피부주름 개선, 피부탄력 개선, 피부보습 개선, 피부미백 개선 또는 발모 촉진을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 장미꽃잎 추출물은 티로시나아제에 대한 억제 활성이 우수하고 콜라겐 분해능을 갖는 MMP-1의 생성을 억제하는 활성이 우수할 뿐만 아니라 상기 추출물에는 다량의 총 플라보노이드를 함유하고 있어 높은 항산화 활성도 가지고 있으므로, 피부주름 개선, 피부탄력 개선, 피부보습 개선, 피부미백 개선, 발모 효과가 있으므로 피부 노화방지를 위한 식품, 화장품 및 의약품 등 다양한 산업분야에 유용하게 사용할 수 있다.

도 1은 본 발명의 일실시예에서 각기 다른 농도의 에탄올을 이용하여 추출한 장미꽃잎 추출물에 대한 분석 결과로서, 1의 A는 추출공정을 나타낸 모식도이고, 1의 B는 각 추출물의 색깔을 육안으로 관찰한 사진을 나타낸 것이며, 1의 C 및 D는 칼라미터기로 측정한 각 추출물의 발적(redness)에 대한 a* 밸유(a* value) 값을 그래프로 나타낸 것이다.
도 2은 본 발명의 일실시예에서 수득한 에탄올 농도별 장미꽃잎 추출물에 대한 피부 미백 활성을 분석한 결과로, 2의 A는 각 장미꽃잎 추출물의 처리 농도별 티로시나아제 활성도를 측정한 결과이고, 2의 B는 멜라닌 생성정도를 측정한 결과이며, 2의 C는 티로시나제의 발현 정도를 분석한 결과를 나타낸 것이다. 도 2의 D는, 본 발명의 일실시예에서 수득한 에탄올 농도별 장미꽃잎 추출물에 대한 세포독성 여부를 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 장미꽃잎 추출물에 대한 피부 주름 개선 활성을 분석한 것으로, 3의 A는 에탄올 농도별 장미꽃잎 추출물 처리에 따른 UV 조사로 유도된 MMP-1의 발현 억제 정도를 웨스턴 블럿을 통해 확인한 결과를 나타낸 것이며, 도 3의 B는 도 3A의 결과를 정량적으로 그래프화하여 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 장미꽃잎 추출물에 대한 항산화능을 분석한 결과를 나타낸 것으로, 4의 A는 에탄올 농도별 장미꽃잎 추출물에 대한 DPPH 라디칼 소거능을 분석한 결과를 나타낸 것이고, 4의 B는 총 플라보노이드 함량을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는, 본 발명의 장미꽃잎 추출물을 마우스에 경구투여한 후 동물실험 결과 피부의 변화를 시간 경과에 따라 나타낸 이미지이다.
도 6은, 본 발명의 장미꽃잎 추출물을 마우스에 경구투여한 후, 평균 주름의 깊이 및 최고 주름의 깊이를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 7은, 본 발명의 장미꽃잎 추출물을 처리한 마우스의 표피세포를 H&E 염색 및 메리슨 트리크롬 염색(Masson's Trichrome staining)한 후 관찰한 이미지이다.
도 8은, 본 발명에 따른 장미꽃잎 추출물의 처리 시 세포에서의 콜라겐 분해효소의 발현정도를 확인한 결과이며, 도 8의 A 및 B는 콜라겐 분해효소 (MMP-1, MMP-13)의 발현여부를 확인한 이미지이며, 도 8의 C는, 피부조직 내 MMP-13의 발현 여부를 확인한 이미지이다.
도 9는, 본 발명의 장미꽃잎 추출물의 처리 시 농도에 따른 MMP-1의 발현 억제를 나타내는 이미지이다.
도 10은, 본 발명에 따른 장미꽃잎 추출물의 처리에 따른 MMP-1의 발현 억제 정도를 세포 염색 후 관찰한 이미지이다.
도 11의 A는, MEK 및 ERK의 발현정도, 도 11의 B는 MKK4 및 JNK의 발현 정도, 도 11의 C는 MKK3 및 P38의 발현 정도를, 본 발명의 장미꽃잎 추출물을 처리여부에 따라 확인한 이미지이다.
도 12는, 본 발명에 따른 장미꽃잎 추출물의 처리 시, 콜라겐, MPP1, p-c-Jun, MEK, ERK, MKK4, JNK, MKK3 및 p38의 발현 정도를 확인한 이미지이다.
도 13의 A는 본 발명의 장미꽃잎 추출물(시험물질)의 처리 시 시간 경과에 따라 L* 밸유가 대조군에 비하여 높아지는 것을 나타내는 그래프이며, 도 13의 B는 본 발명의 장미꽃잎 추출물(시험물질)의 처리 시 시간 경과에 따라 L* 밸유 개선율이 향상됨을 나타내는 이미지이다.
도 14의 A는, 본 발명의 장미꽃잎 추출물(RPE)처리 시 세포 생존율을 나타낸 이미지이며, 도 14의 B는, 장미꽃잎 추출물의 처리 시 티로시나아제의 활성을 알부틴과 비타민 C처리군과 비교하여 나타낸 그래프이다. 도 14의 C는, 본 발명의 장미꽃잎 추출물 처리 시 멜라닌 분비 정도를 나타낸 그래프이다.
도 15는, 본 발명의 일 실시예에 따라 장미꽃잎 추출물을 피부에 도포한 후, 변화를 나타낸 도표이며, 도 15의 A는 피부 수분 변화를 도 15의 B는 피부 수분 변화의 차이 값을, 도 15의 C는 피부 수분 개선율을, 도 15의 D는 피부 수분 통계 분석 값을 나타낸 이미지이며, 도 15의 E는 시험물질(본 발명의 장미꽃잎 추출물) 도포부위와 대조물질 도포부위 간 피부 수분 차이 값을 통계분석한 이미지이다.
도 16은, 본 발명의 일 실시예에 따른 장미꽃잎 추출물의 처리 후 시간 경과에 따라 피부 수분 변화 및 피부 수분 개선율을 나타낸 그래프이다.
도 17은, 장미꽃잎 추출물의 농도를 다르게 처리 후 인간모유두세포(HDPC) 세포의 증식 정도를 확인하여 나타낸 그래프이다.

이하, 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명한다. 본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 후술되어 있는 실시 예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시 예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 수 있으며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 게시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다. 명세서 전체에 걸쳐 동일 참조 부호는 동일 구성 요소를 지칭한다.

다른 정의가 없다면, 본 명세서에서 사용되는 모든 용어(기술 및 과학적 용어를 포함)는 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 공통적으로 이해될 수 있는 의미로 사용될 수 있을 것이다. 또 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 용어들은 명백하게 특별히 정의되어 있지 않는 한 이상적으로 또는 과도하게 해석되지 않는다. 본 명세서에서 사용된 용어는 실시예들을 설명하기 위한 것이며 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니다. 본 명세서에서, 단수형은 문구에서 특별히 언급하지 않는 한 복수형도 포함한다.

본 발명은 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 조성물을 제공함에 특징이 있다.

장미는 국화 등과 더불어 화전과 화채의 재료로 사용되어 왔으며, 식용으로 사용한 장미의 약리작용으로는 본초강목에 장미를 여름과 가을에 반쯤 핀 꽃봉우리를 채취해서 그늘에 말리거나 약한 불에 쬐어 말려 사용하여 왔는데 장미꽃은 맛이 달고, 성질은 따뜻하며, 독이 없으며, 혈액순환을 촉진시키고 부기를 가라앉히는 효능이 있다고 기재되어 있고, 또한 향기가 아주 진하고 맑으며, 온화하여 우수한 방향성을 가지고 있으며, 각종 비타민, 유기산, 탄닌 등 다양한 성분을 함유하여 강장효과, 혈압조절효과 등을 나타내는 것으로 알려져 있다. 한편, 본 발명자들은 피부 노화를 효과적으로 방지하면서 체내 또는 피부에 부작용을 유발하지 않는 소재를 천연물질로부터 발굴하기 위해 연구하던 중, 장미꽃 잎으로부터 추출한 추출물이 피부주름 개선, 피부탄력 개선, 피부보습 개선 또는 피부미백 개선 활성이 우수함을 확인함으로써, 장미꽃잎 추출물을 피부 노화 방지를 위한 다양한 용도로 사용 가능함을 규명하였다.

본 발명에서 상기 "추출물"이란, 장미꽃잎에 추출용매를 처리하여 얻어지는 조추출물, 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형 또는 가공물을 포함한다.

또한 상기 본 발명의 장미꽃잎 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매를 추출 용매로서 이용하여 장미꽃잎으로부터 추출된 것일 수 있다.

상기 유기용매는 이에 제한되지는 않으나, 저급 알코올, 헥산, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 및 디에틸에테르로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용매일 수 있다. 상기 저급 알코올은 탄소수 1 내지 6의 알코올일 수 있으며, 상기 저급 알코올로는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올, 노말-부탄올, 1-펜탄올, 2-부톡시에탄올 또는 에틸렌글리콜 등을 이용할 수 있다. 유기용매는 이 외에도 아세트산, DMFO(dimethyl-formamide), DMSO(dimethyl sulfoxide) 등의 극성 용매, 아세토나이트릴, 에틸 아세테이트, 메틸 아세테이트, 플루오로알칸, 펜탄, 2,2,4-트리메틸펜탄, 데칸, 사이클로헥산, 사이클로펜탄, 디이소부틸렌, 1-펜텐, 1-클로로부탄, 1-클로로펜탄, o-자일렌, 디이소프로필 에테르, 2-클로로프로판, 톨루엔, 1-클로로프로판, 클로로 벤젠, 벤젠, 디에틸 에테르, 디에틸 설파이드, 클로로포름, 디클로로메탄, 1,2-디클로로에탄, 어닐린, 디에틸아민, 에테르, 사염화탄소 및 THF(Tetrahydrofuran) 등의 비극성 용매를 사용할 수도 있다. 바람직하게는 에탄올을 사용할 수 있다.

또한 추출 방법으로는 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 방법 중 어느 하나를 선택하여 사용할 수 있으며, 바람직하게는 열수추출법을 사용할 수 있다.

또한, 목적하는 추출물은 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있으며, 통상의 정제 방법을 이용하여 정제될 수도 있다.

본 발명의 일실시예에서는 에탄올을 이용하여 수득한 장미꽃잎 추출물에 대한 피부 노화 활성 여부를 확인하기 위한 실험을 수행하였는데, 멜라닌 생산을 통한 과색소 침착과 관련된 주요 효소로 알려져 있는 티로시나아제에 대한 억제 활성 여부를 분석하였다. 그 결과, 본 발명의 장미꽃잎 에탄올 추출물이 티로시나아제를 효과적으로 억제하는 활성이 있음을 확인하였고, 동시에 멜라닌 생성도 효과적으로 억제할 수 있음을 확인하였다.

따라서 이러한 결과를 통해 장미꽃잎 에탄올 추출물이 피부 미백 활성을 가지며 과색소 침착과 관련된 질환을 예방, 개선 또는 치료할 수 있는 용도로 사용 가능함을 확인하였다.

나아가 본 발명의 일실시예에서는 본 발명의 장미꽃잎 에탄올 추출물이 피부 주름 개선 활성이 있는지 확인하기 위해, 콜라겐의 분해활성을 갖는 MMP-1을 저해하지는지를 확인하기 위한 실험을 수행하였는데, 그 결과, 장미꽃잎 에탄올 추출물이 피부 주름의 주요 원인으로 알려진 MMP-1의 생성을 효과적으로 억제하는 것을 확인하였다.

뿐만 아니라 본 발명의 다른 일실시예에서는 본 발명의 장미꽃잎 에탄올 추출물이 항산화 활성을 갖는지를 확인하기 위해, DPPH 라디칼 소거능 및 총 플라보노이드 함량 분석을 수행하였는데, 분석 결과, 본 발명의 장미꽃잎 에탄올 추출물은 DPPH 라디칼 소거능을 갖는 것으로 나타났고, 총 플라보노이드도 다량 함유하고 있는 것으로 나타났다.

그러므로 본 발명은 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부 노화 방지용 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 장미꽃잎 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 본 발명의 화장료 조성물은 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다. 본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다. 본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다. 본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다. 본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

한편, 장미꽃잎은 본 발명의 일실시예에서도 확인한 바와 같이 세포 독성이 없고 세포사멸을 유도하지 않아 피부 및 체내 안정성이 있다. 또한 장미꽃잎은 식용으로도 사용하고 있어 섭취하여도 무방하다.

따라서 본 발명의 장미꽃잎 추출물은 피부 노화 방지를 위한 식품 조성물의 유효성분으로 사용가능하므로, 본 발명은 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부 노화 방지용 식품 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명에서 "식품 조성물"이라는 용어는, 그를 섭취하는 대상체에 제공되는 영양소에 관계없이, 그 생물의 하나 이상의 기능에 유리하게 작용하여 보다 나은 건강 상태를 제공하는 식품을 의미한다. 결과적으로, 상기 식품 조성물은 질병 또는 질병-유발 인자의 예방, 개선 또는 치료를 위해 사용될 수 있다.

따라서 본 발명의 "식품 조성물"이라는 용어는 기능성 식품 또는 특정 영양 목적을 위한 식품 또는 의약 식품의 동의어로서 사용될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 본 발명의 장미꽃잎 추출물 이외에 통상적인 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 추가로 포함할 수 있으며, 이 외 에도 바인더, 분해제, 코팅제, 윤활제 등과 같은 제약학적으로 통상적으로 사용되는 다양한 첨가제와 제형화되어 조제될 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 장미꽃잎 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 ~ 99중량%로 포함될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 본 발명의 장미꽃잎 추출물을 함유하는 것 외에 통상의 식품 조성물과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 향미제는 천연 향미제 (타우마틴), 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.

또한 본 발명의 식품 조성물은 본 발명의 장미꽃잎 추출물 이외에 추가로 식품학적으로 허용 가능하거나 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 식품 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.

상기 식품 조성물의 제제 형태는 정제, 캡슐제, 분말, 과립, 액상, 환, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 또는 점적제 등이 될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약제학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다.

또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄검 등을 포함한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.

상기와 같은 방식으로 제제화된 본 발명의 식품 조성물은 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가될 수 있다.

본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등이 있다.

또한 상기 식품 조성물은 장미꽃잎 추출물 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

본 발명의 유효성분인 장미꽃잎 추출물은 화학약품과 같은 부작용이 거의 없이 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있다.

나아가 본 발명은 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부 노화방지 및 피부 주름 개선용 약학적 조성물을 제공할 수 있으며, 또한 과색소성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명에서 상기 약학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있으며, 상기 "약제학적으로 허용 가능한"이란 생물체를 상당히 자극하지 않고 투여활성 물질의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 것을 의미한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "예방"은 본 발명의 조성물의 투여로 질환의 증상을 억제시키거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "치료"는 본 발명의 조성물의 투여로 대상 질환의 증상을 호전 또는 이롭게 변경시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "개선"은 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다. 이때, 개체는 본 발명의 조성물을 투여하여 대상질환의 증상이 호전될 수 있는 질환을 가진 인간, 원숭이, 개, 염소, 돼지 또는 쥐 등 모든 동물을 의미한다.

본 발명에서 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜 또는 위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 이는 개체의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시에 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 상기 본 발명의 장미꽃잎 추출물 이외에 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.

상기 약제학적 조성물은 투여를 위해서 본 발명의 장미꽃잎 추출물 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 약제학적 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.

상기 약제학적 조성물의 제제 형태는 과립제, 산제, 정제, 피복정, 캡슐제, 좌제, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 등이 될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약제학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄 검 등을 포함한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 해당분야의 적절한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화 할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 본 발명의 장미꽃잎 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 ~ 99중량%로 포함될 수 있다.

본 발명에 따른 장미꽃잎 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 장미꽃잎 추출물은 1일 0.0001 내지 100 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 100 mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명에 따른 장미꽃잎 추출물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유 동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식이 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사 및 피부에 직접 투여될 수 있으며, 또는 피부에 도포하는 방식으로 투여할 수 있다.

또한 본 발명에서 상기 “피부 노화 방지”는 본 발명의 장미꽃잎 추출물을 이용하여 노화를 야기하는 원인을 불문하고 피부의 노화를 억제 또는 지연시키는 것을 의미한다.

또한 본 발명에서 상기 “피부 주름 개선"은 피부의 주름 및 탄력과 관련된 능력을 유지 또는 강화시키는 것을 의미한다. 피부의 구조 중에서 진피층에 존재하는 교원섬유인 콜라겐(collagen)과 탄력섬유인 엘라스틴(elastin)이 그러한 역할을 하는 주요 단백질로서 피부 탄력을 주관하는데, 콜라겐의 생합성은 피부의 내, 외적영향을 받게 된다. 구체적으로, 피부세포는 자연 노화로 인하여 세포 활성이 감소되면 콜라겐 섬유의 감소가 일어나거나, 또는 외적요인으로서 자외선의 과량 조사되거나 스트레스 등에 의해 생성된 활성 산소가 단백질의 티올기(thiol:-SH)와 반응하여 효소 활성을 저해하거나, 콜라겐, 엘라스틴 등의 분해 효소의 발현을 증가시켜 피부의 주름을 증가시키고 탄력을 감소시키게 된다.

본 발명의 장미꽃잎 추출물은 피부 노화 및 주름의 생성과 관련하여 피부 섬유아세포에서 콜라겐의 분해를 촉진하는 MMP-1의 생성을 억제하며 활성산소종 생성 억제를 통한 우수한 항산화 활성을 확인하였다.

따라서 본 발명의 장미꽃잎 추출물은 피부 탄력과 주름개선 및 피부 노화 억제를 효과적으로 개선 및 예방할 수 있다.

한편, 사람의 피부색을 결정하는 멜라닌(melanin)은 멜라노사이트(melanocyte)라 불리는 피부 세포에서 만들어져 케라티노사이트(keratinocyte)라는 표피 세포로 이동한다. 여기서 멜라닌은 핵 주변에 모자와 같은 구조를 형성하여 자외선으로부터 유전자를 보호하고 자유 라디칼(free radical)을 제거하여 세포 내 단백질을 보호하는 등 중요한 역할을 하게 된다.

멜라닌생성(melanogenesis)은 멜라닌세포에서 멜라닌 색소가 생합성되는 것을 의미하며, 이는 세포내 및 세포외 환경에 의해 조절된다. 이러한 멜라닌 생성은 티로시나아제에 의해 촉발되는데, 이는 티로신을 도파퀴논으로 산화시키고, 상기 도파퀴논은 계속해서 엷은 황색/적색 화합물인 페오멜라닌(pheomelanin)과 연갈색 내지 흑색인 유멜라닌(eumelanin)으로 전환된다. 피부에서, 멜라닌은 색소형성에 영향을 주고, 피부를 자외선과 다른 피부질환의 원인들로부터 보호하지만, 반면에 멜라닌의 비정상적인 축적은 기미와 주근깨를 형성시킬 수도 있다.

이와 같이 피부의 과색소 침착은 다양한 피부 질환을 유발시킬 수 있으며, 상기 과색소성 질환으로는 이에 제한되지는 않으나, 기미, 주근깨, 반점, 일광흑자, 약물성 색소침착, 염증성 색소침착, 노인성 색소침착 및 임신성 색소침착을 포함한다.

따라서 본 발명의 장미꽃잎 추출물은 멜라닌 생성 억제 활성이 있는 바, 상기와 같은 과색소성 질환을 예방, 개선 또는 치료할 수 있다.

본 발명은 또한, 발모효과를 갖는 장미꽃잎 추출물을 제공한다. 탈모현상 역시 포유동물 노화 현상 중 하나에 해당한다. 이에 본 발명자들은 장미꽃잎 추출물의 발모 촉진 및 탈모 억제 효과를 확인하였다. 인간모유두세포(hDPC)는, 모발의 생성과 성장을 촉진하는 섬유아세포의 일종으로, 주기적으로 재생되며 모낭의 발달을 조절하는데 결정적인 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 인간모유두세포의 생장이 활발할수록 발모가 촉진되며, 탈모가 방지되는 것으로 파악할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 다르면, 장미꽃잎 추출물을 인간모유두세포에 처리하였을 때, 인간모유두세포의 생장이 촉진되는 것을 확인할 수 있었다. 즉, 본 발명의 장미꽃잎 추출물은 앞서 언급한 바와 같이 두피에서 콜라겐의 형성을 촉진, 분해를 억제하며, 인간모유두세포의 생장을 촉진하여, 발모를 촉진하고 탈모를 예방할 수 있다.

또한 본 발명자들은 피부 노화 방지 활성이 우수한 장미꽃잎 추출물의 최적의 추출 조건을 확립하였다.

피부 노화 방지 활성을 갖는 장미꽃잎 추출물의 최적 제조 공정을 확립하기 위해 에탄올 농도를 각기 달리한 에탄올 용매를 사용하여 장미꽃잎 추출물을 제조하였고, 각 추출물에 대한 피부미백 활성, 주름개선 및 항산화 활성을 분석하였다. 그 결과, 30%~50%의 에탄올을 이용하여 수득한 추출물이 상기 범위를 벗어난 에탄올 추출물에 비해 피부미백 활성, 주름개선 및 항산화 활성이 높은 것으로 나타났고, 특히 50% 에탄올 추출물이 다른 농도의 에탄올 추출물 군에 비해 가장 우수한 피부미백 활성, 주름개선 및 항산화 활성을 갖는 것으로 나타났다.

따라서 본 발명은 피부 노화 방지 활성을 갖는 장미꽃잎 추출물의 제조방법을 제공할 수 있으며, 상기 방법은 장미꽃잎에 30%~50%의 에탄올을 첨가하고 70~90℃의 온도에서 추출하는 단계를 포함한다. 바람직하게는 30~70%의 에탄올을 첨가하고 80~90℃의 온도에서 추출할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 50%의 에탄올을 첨가하고 80℃의 온도에서 추출할 수 있다.

하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 것일 뿐 실시예에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.

<준비 예>

1. 시약

장미꽃잎(Rosa gallica petals)은 터키에서 GN Bio (경기)를 통해 수입한 것을 사용하였다. DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’s medium), 소 태아 혈청 (FBS), 페니실린-스트렙토마이신-네오마이신 및 0.5 % 트립신-EDTA는 GIBCO Invitrogen (오클랜드, 뉴질랜드, 미국)에서 구입하여 사용하였다. tyrosinase 및 db-actin에 대한 항체는 Santa Cruz Biotech (Santa Cruz, CA, USA)에서 구입한 것을 사용하였다. 이외 a-MSH, mushroom tyrosinase 및 L-DOPA (L-3,4-dihydroxyphenylalanine)을 포함하는 모든 시약은 Sigma-Aldrich Co., LLC (St. Louis, MO, USA)사로부터 구입하여 사용하였다.

2. 세포배양

B16F10 흑색종 세포는 한국 세포주 은행(서울)에서 구입하여 사용하였으며, 인간 피부 섬유 아세포(HDF)는 정진호 박사(서울 대학교 의과 대학)로부터 수득하여 사용하였다. 이들 세포들은 모두 10 % 소 태아 혈청(v/v) 및 1 %(v/v) 페니실린이 보충된 DMEM 배지를 이용하여 37℃ 및 5% CO2 조건에서 배양하여 실험에 사용하였다.

3. 세포 생존율 분석

세포 생존율은 MTS [3- (4,5- 디메틸 티아졸-2-일)-5-(3-카르복시메톡시 페닐)-2-(4-설포페닐)-2H- 테트라 졸륨]을 이용하여 분석하였다. 세포를 96 웰 플레이트에 분주하여 배양시켰고, 이후 무혈청 DMEM 배지를 이용하여 밤새도록 배양 후, 24 시간 동안 지시된 농도의 시료를 처리하였다. 이후 20㎕의 MTS 용액을 세포와 1 시간 동안 반응시킨 다음, 마이크로 플레이트리더(Sunrise-Basic Tecan, 오스트리아 테칸 오스트리아 GmbH Gro¨dig, 570 nm) 장치를 이용하여 흡광도를 측정함으로써 세포 생존율을 측정하였다.

4. 티로시나아제 활성도 분석(In vitro mushroom tyrosinase activity)

시험관 내 티로시나아제 분석은 다음과 같이 수행하였다. 먼저 40㎕의 각 시료를 분석 완충액(0.1 M 인산 칼륨용액 20㎕)에 첨가한 후, 20㎕의 mushroom tyrosinase(0.02 mg/mL)를 첨가하여 30분 동안 반응시켰다. 이후 40㎕의 기질 (LDOPA)을 각 혼합물에 첨가하고 실온에서 15분 동안 반응시킨 후, 475 nm에서 도파크롬 형성여부를 마이크로플레이트 리더기를 이용하여 흡광도를 측정하였다.

5. 멜라닌 생성 분석

B16F10 세포 (8x103 세포)를 2 mL 배양 배지를 이용하여 6-웰 플레이트에 분주하고 24시간 동안 배양하였다. 이후 시료를 세포에 1시간 동안 처리하였고, a-MSH (100 nM)를 세포에 처리한 후, 72 시간 후에 세포들을 수집하였다. 그런 뒤, 마이크로 플레이트리더(Infinite 2000 PRO, Switzerland, Tecan)를 사용하여 495nm에서 멜라닌 생성 정도를 측정하였다.

6. 웨스턴 블럿

세포 용해 완충제(Cell Signaling Technology, Danvers, MA)를 이용하여 세포로부터 단백질 시료를 수득하였고, Pierce TM BCA 단백질 분석 키트(Thermo Fisher Scientific, San Jose´, CA, USA)를 이용하여 단백질의 농도를 측정하였다. 단백질 시료를 10 % SDS-폴리아크릴아미드겔에서 전기영동 하였고, Immobilon P 멤브레인(Millipore, Billerica, MA, USA)으로 단백질들을 이동시켰다. 이후 PVDF 멤브레인을 1 시간 동안 5 % 무지방 우유로 블록킹한 후, 4℃에서 밤새도록 항체와 반응시켰다. 이후 HRP- 접합된 이차 항체 (Cell Signaling)와 반응시킨 다음, 화학 발광 검출 키트(GE Healthcare, NJ, USA)를 이용하여 단백질을 검출하였다.

7. DPPH 라디칼 소거능 분석

DPPH 라디칼 소거활성의 분석은 다음의 방법으로 수행하였다. 각 추출물 0.2 mL를 0.8 mL의 400uM DPPH이 용해된 3 mL-에탄올에 첨가하였다. 이후 혼합물을 10 초 동안 볼텍싱하고 실온에서 10 분 동안 방치시킨 후, 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 DPPH 라디칼 소거 활성은 DPPH를 첨가하지 않은 군의 흡광도를 기준으로 백분율로 표시하였고, 모든 실험은 최소 3 회 반복수행하였다.

8. 총 플라보노이드 분석

추출물의 총 플라보노이드 함량은 카테킨을 사용하여 염화알루미늄법을 조금 수정한 방법으로 측정하였는데, 구체적으로, 추출물 100㎕에 증류수 500㎕와 30㎕의 NaNO2를 첨가하였다. 그런 뒤, 6분 후에 60㎕의 AlCl3을 첨가하였고, 5 분 후에 1M NaOH를 200㎕를 첨가한 뒤, 증류수로 1mL이 되도록 맞췄다. 용액을 잘 혼합하고 4 ℃에서 5 분 동안 15,928g의 속도로 원심 분리하였고, 200㎕의 상등액을 마이크로 플레이트 리더기를 이용하여 510 nm에서 흡광도를 측정하였다.

9. 통계분석

모든 실험은 3회 수행하였고, 데이터는 평균 ± 표준 편차 (SD)로 표현하였다. Student’s t 테스트는 단일통계 비교를 위해 사용하였다. 통계적 유의성은 (#) = p < 0.05 및 (##) = p< 0.001로 설정하였고, 이는 α-MSH- 처리된 그룹과 함께 무처리 대조군인 (*) = p < 0.05 및 (**) = p< 0.001과 비교하여 계산하였다.

[실시예 1]

장미꽃잎 추출물의 제조

본 발명자들은 피부미백 및 피부주름 활성을 갖는 장미꽃잎의 추출물을 제조하기 위해 다음의 방법을 수행하였다. 장미꽃잎에 100ml의 에탄올 용매 (0, 10, 30, 50, 70, 90, 100% 에탄올)를 각각 첨가하고 환류 조건 하에서 80℃의 온도로 추출하여 장미꽃잎의 에탄올 추출물을 수득하였다. 이후 각 추출물을 필터 페이퍼 넘버 2(Whatman, Maidstone, England)를 이용하여 여과한 후, 진공감압 농축시켜 본 발명의 장미꽃잎의 에탄올 추출물을 수득하였다. 상기 방법에 따른 장미꽃잎의 에탄올 추출 제조공정에 대한 모식도는 도 1의 A에 나타내었고, 에탄올 농도별 수득한 각 추출물에 대한 색깔을 확인한 사진은 도 1의 B에 나타내었으며, 칼라미터기로 측정한 발적(redness)에 대한 a* 밸유(a* value) 값의 측정결과는 도 1의 C 및 D에 나타내었다.

특히, 도 1의 D에 나타난 바와 같이, 에탄올 농도를 달리하여 수득한 각 추출물 중에서 30%~50% 에탄올 용매로 추출한 군이 다른 군에 비해 가장 높은 a* 밸유(a* value) 값을 보이는 것으로 나타났다.

[실시예 2]

본 발명의 장미꽃잎 추출물에 대한 세포독성여부 분석

실시예 1에서 수득한 본 발명의 장미꽃잎 에탄올 추출물에 대한 세포 독성여부를 확인하기 위해 앞서 기술된 세포 생존율 분석을 수행하였다. B16F10 멜라노마 세포주를 대상으로 에탄올 농도를 달리한 용매를 이용하여 수득한 각 추출물을 100ug/ml씩 처리한 후, 세포 생존율을 분석하였다.

그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 장미꽃잎 에탄올 추출물들은 90% 이상의 세포 생존율을 보이는 것으로 나타나, 상기 추출물은 세포독성을 유발하지 않는다는 것을 확인할 수 있었다.

[실시예 3]

인간 피부섬유아세포에서 본 발명의 장미꽃잎 추출물 처리에 따른 자외선에 의한 MMP1 발현변화 분석

MMP-1(Matrix metalloproteinase-1)은 피부노화 과정에서 피부주름 형성에 관여하는 주요 인자로 알려져 있으며, 따라서 MMP-1의 억제제는 피부주름을 억제할 수 있다. 이에 본 발명자들은 본 발명의 장미꽃잎 에탄올 추출물이 피부 주름을 억제할 수 있는지를 확인하기 위해 인간 피부섬유아세포에서 MMP-1의 발현에 미치는 영향을 분석하였다.

이를 위해 피부섬유아세포에 sUV를 30 kJ/cm²세기로 조사하여 본 발명의 장미꽃잎 추출물을 처리한 군과 처리하지 않은 군에서의 MMP-1 발현정도를 웨스턴 블럿을 통해 확인하였다.

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 100% 에탄올을 이용하여 수득한 추출물을 제외한 다른 에탄올 추출물 처리 군에서는 sUV 조사로 유도된 MMP-1의 발현을 억제하는 것으로 나타났고, 특히 50% 에탄올 추출물의 경우, MMP-1의 발현억제 활성이 가장 우수한 것으로 나타났다(도 3의 A 및 B 참조).

[실시예 4]

본 발명에 따른 장미꽃잎 추출물의 항산화 활성분석

ROS 생성을 억제하는 항산화제는 피부의 과다 색소 침착을 줄이거나 UV로 유도된 멜라닌 생성을 억제할 수 있는 것으로 알려져 있다. 이에 본 발명자들은 본 발명의 장미꽃잎 추출물이 DPPH 라디칼 소거능이 있는지 확인하는 분석을 수행하였고, 추출물 내에 함유된 총 플라보이드의 함량을 분석하였다. 특히, 플라보노이드는 페놀성 화합물의 주요 그룹으로 항산화 및 항염 효과를 갖는 것으로 알려져있다.

본 발명의 장미꽃잎 추출물에 대한 항산화 활성여부를 확인하기 위한 DPPH 라디칼 소거능 분석 결과, 도 4의 A에 나타낸 바와 같이, 에탄올 농도별 수득한 추출물의 처리 농도 의존적으로 DPPH 라디칼 소거능이 증가하는 것으로 나타났고, 특히 50% 에탄올 추출물의 경우, 50ug/ml의 양으로 처리한 다른 추출물 군들에 비해 가장 우수한 DPPH 라디칼 소거능을 보이는 것으로 나타났으며, 이러한 효능은 비타민 C를 처리한 군 보다 더 우수한 항산화 활성을 갖는 것으로 나타났다. 또한 총 플라보노이드 함량 분석에서도 50% 에탄올 추출물군이 다른 추출물 군에 비해 가장 많은 총 플라보노이드 함량을 보이는 것으로 나타났다.

[실시예 5]

장미꽃 추출물의 주름개선 효과 확인

5-1 동물모델 효능평가 시험

자외선을 조사하여 노화가 촉진된 SKH-1 마우스(5주령, 암컷)의 1내지 4MED (MED는 최소홍반선량을 의미; 자외선 조사장치를 이용하여 UVB를 조사한 다음 18시간 후 육안으로 홍반 정도를 평가하여 1MED를 설정함)간 UVB조건(3 회/주) 하에서 본 발명에 따른 장미꽃 추출물을 경구투여하여 주름개선 정도를 확인하였다. 본 실험에서는, 대조군(아무런 처리 없음, group 1), 자외선 조사군(group 2), 0.25% 장미꽃잎추출물 (70% 에탄올 추출, group3), 0.5% 장미꽃잎추출물 (70% 에탄올 추출, group4)로 나누어 관찰하였다.

도 5은 본 실시예에 따른 group 1 내지 4의 마우스의 피부 변화를 관찰한 이미지이며, 도 6은 해당 마우스의 주름 깊이를 나타낸 그래프이다. 도 5을 참조하면, 기간이 지날수록 대조군과 group1에서의 주름은 육안으로도 깊어지는 것을 알 수 있으며, 이는 장미꽃잎 추출물을 경구투여한 group2, 3에서 완화되는 것을 알 수 있다. 도 6을 참조하면, 실제로 장미꽃잎 추출물을 처리하였을 때 평균 주름의 깊이, 최고 주름의 깊이가 얕아지는 것을 알 수 있으며, 이는 특히 0.5% 농도의 장미꽃잎 추출물을 처리하였을 때 두드러졌다.

뿐만 아니라, 본 실험의 group1 내지 group4 마우스의 H&E staining 결과, 노화의 주 원인이 되는 표피 두께 감소가 장미꽃잎 추출물 처리군(group 3,4)에서 둔화되는 것을 관찰할 수 있었으며, 메리슨 트리크롬 염색(Masson's Trichrome staining) 결과, 자외선 노출에 의해 조직내 콜라겐 함량 감소하나, 농도의존적으로 장미꽃잎추출물 경구투여에 의해 콜라겐 함량 회복하는 것을 관찰할 수 있다(도 7참조).

동일한 실험군(group1 내지 4)을 앞서 살펴본 바와 같이, 콜라겐 분해효소의 발현정도를 확인한 결과, 자외선에 의하여 증가한 콜라겐 분해효소 (MMP-1, MMP-13)의 발현이 장미꽃잎추출물 섭취에 의하여 감소하나(도 8의 A 및 B의 대조군 및 자외선 처리군 참조), 자외선에 의하여 감소한 콜라겐 함량이 장미꽃잎추출물 섭취에 의해 회복하는 것을 알 수 있다(도 8의 A 내지 C참조).

5-2 인체 피부조직에서의 주름 개선 효과 확인

28세 백인 여성의 복부 피부조직을 채취하여 1일 2회, 총 10일간 본 발명에 따른 장미 꽃잎 추출물 샘플 처리 (1시간) 및 자외선 조사한 후 단백질 발현(WB) 및 면역학적 염색(IHC) 후 조직을 관찰하였다.

그 결과, 본 발명에 따른 장미꽃잎 추출물을 처리하였을 때, 대조군 대비 농도 의존적으로 MMP-1의 발현이 감소하는 것을 알 수 있다(도 9 및 도 10 참조). 또한, 도 11를 참조하면, 자외선 비 처리군(대조군) 대비 자외선 처리군의 섬유아세포에서 p-MEK 및 p-ERK의 증가가 나타나나, 장미꽃잎 추출물을 함께 처리한 경우 p-MEK 및 p-ERK의 감소를 일으키는 것을 알 수 있었으며(도 11의 A), p-MKK4, p-JNK, p-MKK3 및 p-38 역시 장미꽃잎 추출물을 함께 처리하였을 때, 발현이 저해되었다(도 11의 B, C 및 도 12 참조).

본 실험에 따르면, 자외선이 피부에 조사되는 경우 콜라겐 분해 효소가 발현되어 피부의 노화(주름 등)를 촉진시키나, 장미꽃잎 추출물을 함께 처리하는 경우 콜라겐 분해효소의 발현이 억제되어 피부의 노화를 둔화시킬 수 있음(주름 개선)을 알 수 있다.

[실시예 6]

미백 효능 확인

6-1 인체적용시험

20세 이상의 성인 여성 10명에 6주간 1일 1회 세안 후 (Half-test), 좌측에는 시험물질 (장미꽃잎추출물 함유제형), 우측에는 대조물질 (대조군)을 처리한 후, 피부미백효능 검증을 위해 SkinColorCath, 전안촬영시스템을 통한 피부밝기의 개선을 평가하였고, 이상반응을 평가하기위해 홍반(Erythema), 부종(Edema), 인설생성(Scaling), 가려움(Itching), 자통(Stinging), 작열감(Burning), 뻣뻣함(Tightness), 따끔거림(Prickling)여부를 조사하였다. 본 발명에 사용된 대조군은 정제수, 글리세린, 부틸렌글라이콜, 식물성스쿠알란, 하이드로제네이티드레시틴, 나이아신아마이드, 1,2-헥산디올, 디메치콘, 피탄트리올, 피토스핑고신, 세라마이드엔피, 바틸알코올, 3-O-에틸아스코빅애씨드, 알란토인, 센티드제라늄오일, 광곽향오일 및 일랑일랑꽃오일이 첨가된 조성물이며, 시험 물질은 이에 0.1% 장미꽃잎추출물 (70% 에탄올 추출)를 더 첨가하였다.

해당 시험기간 중 기타 기능성화장품사용을 금하고 팩이나 마사지 등의 시술 등을 금하였다. 평가는 시험시작 전, 적용 3주 후, 적용 6주 후로 나누어 진행하였다.

도 13의 A는 본 실험에 따른 L* 밸유(L* value; L*은, luminosity를 의미함)의 변화를, 도 13의 B는 L* 밸유(L* value)의 개선율을 확인한 결과를 나타내며, L* 밸유(L* value) 이 높을수록 피부가 환해졌다고 볼 수 있다. 도 13의 A를 참조하면, 시험물질의 도포부위에서 대조물질의 도포부위 대비 L* 밸유(L* value)가 크게 상승되는 것을 알 수 있었다. 또한, 도 13의 B를 참조하면, 시험물질을 도포한 경우 6주 후 L* 밸유(L* value)의 개선율이 0.77%으로 나타나 대조군 대비 19배 증가하여, 도포 3주 후 보다 L* 밸유(L* value)의 개선율이 더 높은 것을 알 수 있다.

즉, 본 발명에 따르면, 장미꽃잎 추출물을 처리하였을 때, 피부미백효과가 있음을 알 수 있다.

하기 표 1은, 해당 시험 결과 피시험자의 피부 이상 반응 여부를 나타낸다. 표 1을 참조하면 피시험자의 피부이상은 나타나지 않았으며, 이와 더불어 알레르기성 접촉 피부염, 자극성 접촉 피부염 등도 관찰되지 않았다.

이상반응	3주 사용 후	6주 사용 후	이상 반응	3주 사용 후	6주 사용 후
홍반(붉어짐)	0	0	자통 (통증)	0	0
부종 (부어오름)	0	0	작열감	0	0
인설(각질)	0	0	뻣뻣함	0	0
가려움	0	0	따끔거림	0	0

하기 표 2 및 표 3은, 해당 시험의 피시험자를 대상으로 하여, 피부 상태에 대한 관능평가 결과를 나타낸 것이며, 표 2 및 표 3을 비교하면, 사용 전 보다 피부톤이 밝아졌다, 피부가 촉촉해졌다는 평가가 유의하게 증가하였음을 알 수 있다.

사용 전
문항		빈도	백분율(%)
피부톤이 밝고 화사한 편이다	전혀 그렇지 않다	3	30.0
	그렇지 않다	5	50.0
	보통이다	2	20.0
	그렇다	0	0.0
	매우 그렇다	0	0.0
피부가 촉촉한 편이다	전혀 그렇지 않다	4	40.0
	그렇지 않다	2	20.0
	보통이다	4	40.0
	그렇다	0	0.0
	매우 그렇다	0	0.0
합계		10	100

사용 후
문항		빈도	백분율(%)
칙칙한 피부톤이 밝아진 것 같다	전혀 그렇지 않다	0	0.0
	그렇지 않다	0	0.0
	보통이다	2	20.0
	그렇다	8	80.0
	매우 그렇다	0	0.0
메마른 피부가 촉촉해진 것 같다	전혀 그렇지 않다	0	0.0
	그렇지 않다	0	0.0
	보통이다	0	0.0
	그렇다	6	60.0
	매우 그렇다	4	40.0
합계		10	100

6-2 세포주 모델 시험

티로시나아제는 멜라닌 생산을 통한 과색소 침착과 관련된 주요 효소로 알려져 있다. 이에 본 발명자들은 본 발명의 장미꽃잎 추출물(도 14에서 RPE)이 티로시나아제에 대한 억제 활성이 있는지 확인하기 위해 상기 기술된 티로시나아제 활성도 분석을 수행하였다.

해당 시험 전 장미꽃잎 추출물의 독성 검사 결과 도 14의 A와 같이 장미꽃잎 추출물의 농도가 높아도, 세포 생존에는 변함이 없는 것을 확인할 수 있었으며, 이에 장미꽃잎 추출물은 세포 독성이 없음을 알 수 있다.

본 시험 결과 도 14에 나타낸 바와 같이, 100% 에탄올을 이용하여 수득한 추출물을 제외한 다른 에탄올 추출물들의 경우, 티로시나아제 활성을 억제하는 것으로 나타났으며, 이는 알부틴(Arbutin) 또는 비타민 C(Vit. C) 보다 효과가 우수함을 알 수 있다(도 14의 B).

나아가 본 발명자들은 세포 수준에서 본 발명의 추출물에 대한 피부 미백 활성을 검증하기 위해 B16F10 멜라노마 세포주를 대상으로 추출물 처리에 따른 멜라닌 생성 정도를 분석하였다.

그 결과, 멜라닌세포 자극 호르몬(a-MSH, Melanocyte-Stimulating Hormone)를 처리한 군에서는 B16F10 멜라노마 세포주에서 멜라닌 생성이 증가한 것으로 나타난 반면, 본 발명의 장미꽃잎 에탄올 추출물을 처리한 군에서는 a-MSH로 증가된 멜라닌 생성이 억제되는 것으로 나타났고, 특히 50% 에탄올 추출물이 가장 우수한 멜라닌 생성 억제 활성이 있는 것으로 나타났다(도 14의 C 참조).

뿐만 아니라 본 발명자들은 본 발명의 장미꽃잎 추출물이 티로시나아제 단백질의 발현을 억제하는 활성이 있는지를 웨스턴 블럿을 통해 분석한 결과, 도 2c에 나타낸 바와 같이, a-MSH를 처리한 군에서는 티로시나아제의 발현이 증가한 것으로 나타난 반면, 본 발명의 장미꽃잎 추출물을 처리한 군에서는 티로시나아제의 발현이 억제된 것으로 나타났고, 50% 에탄올 추출물 처리군은 티로시나아제가 거의 발현되지 않는 것을 확인할 수 있었다.

[실시예 7]

장미꽃 추출물의 보습효과 확인

7-1 실험대상

20~60세의 성인 여성 23명을 피시험자로 선정, 피시험자는 시험기간인 4주 동안 1일 1회 세안 후 왼쪽 안면부위에는 본 발명에 따른 '장미꽃 잎추출물 함유 크림', 오른쪽 안면부위에는 대조물질인 '대조군' 각각 동일한 양을 고르게 펴 발라 흡수시켰다.

인체적용시험기간 중에는 본 연구원에서 지급한 제품 이외에 시험결과에 영향을 미칠 수 있는 아이크림, 미백크림, 노화방지용 크림과 같은 기능성화장품 및 각질제거제의 사용을 일체 금하였으며, 팩이나 마사지 등의 시술도 금하였다.

본 실시예에서, 인체적용시험은 한국피부과학연구원에서 동일한 세안제로 세안 후 30분간 항온항습실(온 도 : 22±2℃ 습도 : 50±5%)에서 안정을 취한 뒤 측정하였다.

본 시험에서 사용된 시험 대조군(대조물질)에는 정제수, 글리세린, 부틸렌글라이콜, 식물성스쿠알란, 하이드로제네이티드레시틴, 나이아신아마이드, 1,2- 헥산디올, 디메치콘, 피탄트리올, 피토스핑고신, 세라마이드엔피, 바틸알코올, 3-0-에틸아스코빅애씨드, 알란토인, 센티드제라늄오일, 광곽향오일, 일랑일랑꽃오일이 포함되며, 본 시험에서 사용된 장미꽃잎추출물 함유 크림(시험 물질)에는 대조물질에 0.1% 장미꽃잎추출물을 더 포함하여 사용하였다.

7-2 Epsilon E100에 의한 (대조군 대비) 보습 개선 평가

본 시험에서는 시험물질의 (대조군 대비) 보습 개선 평가를 위하여 Epsilon E100 (Biox Systems Ltd., UK)을 적용하였다. Epsilon E100은 센서에 접촉된 피부 표면의 수분을 Epsilon(ε) 값으로 산정하며, 피부 수분량이 높을수록 이미지 결과물의 명도가 증가하여 파란색 부분이 백 색에 가깝게 변화되어 나타난다. 동일한 시험담당자가 모든 피시험자의 양쪽 볼부위를 측정하였으며, 이에 대한 분석은 Epsilon E100 전용 분석프로그램인 Epsilon E100 Software V3.1을 이용하여 피부 수분의 변화를 분석하였다. 대조물질 도포부위와 비교하여 시험물질 도포부위의 측정 값 변화가 유의하게(p<.05) 증가할수록 (대조군 대비) 보습이 개선되었음을 의미한다. 기기측정 은 시험물질 사용 전과 2주 사용 후, 4주 사용 후의 시점에서 이루어졌다.

피시험자의 일반적 피부상태 특성과 시험물질 사용 전후의 피부상태, 시험물질 사용감 등에 대 해 설문조사를 실시하였다. 일반적 피부상태 특성에 관한 1문항과 시험물질 사용 전의 피부상태에 관한 2문항, 시험물질과 대조물질 사용 후의 피부상태에 관한 2문항을 각각 선다형을 이용하여 조사하였다. 또한 시험물질과 대조물질의 사용감을 살펴보기 위하여 만족/불만족 양자택일형을 이용하여 각각 4문항을 실시하였다.

Epsilon E100을 이용한 시험물질 사용 전과 2주 사용 후, 4주 사용 후의 (대조군 대비) 보습 개선을 평가한 결과는 다음과 같다(도 15 및 도 16).

도 15 및 도 16을 참조하면, Epsilon E100을 이용하여 양쪽 볼부위의 (대조군 대비) 보습 개선도를 분석한 결과 피부 수 분이 시험물질 사용 전과 비교하여 시험물질 도포부위에서 2주 사용 후 11.07%, 4주 사용 후 20.63% 증가, 대조물질 도포부위에서 2주 사용 후 4.21%, 4주 사용 후 7.33%가 증가되는 변 화를 나타냈으며, 시험물질 사용 전과 비교하여 시험물질 도포부위와 대조물질 도포부위 모두 2주 사용 후, 4주 사용 후 통계적으로 유의하게 나타나(p<.001) 보습 개선에 도움을 주는 것으로 판단된다. 또한 대조물질 도포부위의 2주 사용 후, 4주 사용 후 Δ피부 수분과 비교하여 시험물질 도포부위의 2주 사용 후, 4주 사용 후 Δ피부 수분이 통계적으로 유의하게 나타나(p<.001) 본 발명에 따른 장미꽃잎 추출물이 보습 개선에 도움을 주는 것을 알 수 있다.

[실시예 8]

장미꽃잎 추출물의 발모효과 확인

인간모유두세포는 모발의 생성과 성장을 촉진하는 것으로 알려져있다. 본 시험에서는 인간모유두세포(HDPC) 세포 증식에 대한 장미꽃잎 추출물의 효능을 확인하기 위하여, HDPC 세포에 본 발명에 따른 장미꽃잎 70% 에탄올 추출물을 처리하여 모발세포의 증식여부를 확인하였다. 해당 시험결과는 도 17에 나타난 그래프와 같다.

도 17에서 대조군(control)은 비처리군이며, 장미꽃잎 에탄올 추출물을 농도를 달리하여(12.5ug/ml, 25ug/ml, 50ug/ml) 인간모유두세포의 생장정도를 나타내었다. 도 17을 참조하면, 장미꽃잎 추출물의 농도가 높을수록, 특히 50ug/ml의 농도로 장미꽃잎 추출물을 처리하였을 때 인간모유두세포의 생장이 활발하였다.

이를 토대로, 본 발명에 따른 장미꽃잎 추출물은 인간모유두세포의 생장을 촉진하여 발모에 효과있음을 알 수 있다.

따라서 이러한 결과를 통해 본 발명자들은 장미꽃잎 에탄올 추출물이 피부 주름, 피부미백 및 항산화 활성을 모두 가지고 있어 피부 노화를 개선 및 예방하는데 유용하게 사용할 수 있다는 것을 알 수 있었고, 특히 50% 에탄올을 이용하여 수득한 장미꽃잎 에탄올 추출물의 경우, 다른 농도의 에탄올 용매를 사용하여 수득한 추출물에 비해 더 우수한 피부 주름, 피부미백 및 항산화 활성이 있는 것을 확인할 수 있었다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허 청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (20)

1. 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하고,
   상기 장미꽃잎 추출물은 30%~50%의 에탄올을 이용하여 70~90℃의 온도에서 추출한 것인, 피부 노화 방지용 화장료 조성물.
2. 삭제
3. 삭제
4. 제1 항에 있어서,
   상기 피부 노화 방지는 피부주름 개선, 피부탄력 개선, 피부보습 개선 또는 피부미백 개선인 것을 특징으로 하는, 피부 노화 방지용 화장료 조성물.
5. 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하고,
   상기 장미꽃잎 추출물은 30%~50%의 에탄올을 이용하여 70~90℃의 온도에서 추출한 것인, 피부 노화 방지용 식품 조성물.
6. 삭제
7. 삭제
8. 제5 항에 있어서,
   상기 피부 노화 방지는 피부주름 개선, 피부탄력 개선, 피부보습 개선 또는 피부미백 개선인 것을 특징으로 하는, 피부 노화 방지용 식품 조성물.
9. 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하고,
   상기 장미꽃잎 추출물은 30%~50%의 에탄올을 이용하여 70~90℃의 온도에서 추출한 것인, 피부 노화방지 및 피부 주름 개선용 약학적 조성물.
10. 삭제
11. 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하고,
    상기 장미꽃잎 추출물은 30%~50%의 에탄올을 이용하여 70~90℃의 온도에서 추출한 것인, 과색소성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
12. 제11 항에 있어서,
    상기 과색소성 질환은 기미, 주근깨, 반점, 일광흑자, 약물성 색소침착, 염증성 색소침착, 노인성 색소침착 및 임신성 색소침착으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 과색소성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
13. 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하고,
    상기 장미꽃잎 추출물은 30%~50%의 에탄올을 이용하여 70~90℃의 온도에서 추출한 것인, 탈모 방지용 약학적 조성물.
14. 삭제
15. 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하고,
    상기 장미꽃잎 추출물은 30%~50%의 에탄올을 이용하여 70~90℃의 온도에서 추출한 것인, 탈모 방지용 식품 조성물.
16. 삭제
17. 장미꽃잎 추출물을 유효성분으로 포함하고,
    상기 장미꽃 추출물은 30%~50%의 에탄올을 이용하여 70~90℃의 온도에서 추출한 것인, 탈모 방지용 화장료 조성물.
18. 삭제
19. 장미꽃잎에 30%~50%의 에탄올을 첨가하고 70~90℃의 온도에서 추출하는 단계를 포함하는, 피부 노화 방지 활성을 갖는 장미꽃잎 추출물의 제조방법.
20. 제19 항에 있어서,
    상기 피부 노화 방지는 피부주름 개선, 피부탄력 개선, 피부보습 개선 또는 피부미백 개선인 것을 특징으로 하는, 장미꽃잎 추출물의 제조방법.

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