KR102417864B1

KR102417864B1 - 손상모발 개선용 헤어케어 화장료, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 헤어케어 제품

Info

Publication number: KR102417864B1
Application number: KR1020220041719A
Authority: KR
Inventors: 권락균
Original assignee: (주)뉴겐코스메틱
Priority date: 2022-04-04
Filing date: 2022-04-04
Publication date: 2022-07-06

Abstract

본 발명은 헤어케어 화장료 및 이를 이용한 헤어케어 제품에 관한 것으로서, 좀 더 구체적으로 설명하면, 손상된 모발 개선 효과가 이수한 헤어케어 화장료, 이의 제조방법 및 이를 이용한 헤어케어 제품에 관한 발명이다.

Description

손상모발 개선용 헤어케어 화장료, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 헤어케어 제품{Haircare cosmetic materials for improving condition ofdamagedhair, Manufacturing method thereof and Hair-care products}

본 발명은 천연식물 추출물을 이용한 헤어케어 화장료, 이의 제법 및 이를 이용한 헤어케어 제품에 관한 것으로서, 손상된 모발의 회복 및 강화 효과가 우수한 헤어케어 화장료에 관한 것이다.

모발의 끝부분은 두피쪽 부분에 비해 외부 환경에 노출된 시간이 길므로 손상도가 더 크게 나타나게 된다. 이와같은 외부 환경에의 노출에 의한 풍화작용은 모발의 큐티클의 손실을 유발하여 모발 끝이 갈라지고 결국 끊어지는 결과를 초래하게 된다. 일예로 모발에 헤어드라이어 등을 통한 고열을 지속적으로 가하는 경우 모발의 장력이 감소하고 약해지는 현상 등이 이에 해당한다.

잦은 퍼머와 염색 등에 의한 다양한 물리, 화학적 또는 환경적 요인에 의한 모발 손상에 의해 모발 내부의 단백질 및 지질이 용출되어 다공성화되게 된다. 이로 인해 모발이 거칠어지고 윤기를 잃으며 마찰력이 증가하여 모발 손실이 어려워지고 모발이 쉽게 절단되거나 끝이 갈라지는 현상이 발생한다. 또한 탄력 상실로 인해 모발이쳐지면서 볼륨감이 없어지거나 모발이 가늘어지는 문제점 또한 발생한다.

모발을 구성하는 지질 성분은 지방, 오일, 왁스 등의 소수성 물질을 포함하여 모발의 윤기를 유지하는 컨디셔닝작용을 수행한다. 모간 성분 중 0.7-1.3%가 지질성분에 해당한다. 모발 표면의 얇은 지질층이 모발의 단백질과공유결합을 하여 모발 본연의 성질인 완고함과 소수성 특징을 유지하도록 하는 중요한 역할을 수행한다.

모발 개선을 위한 다양한 헤어케어 제품이 시중에 판매되고 있는데,헤어케어 제품에 사용되는 화학성분에 의해 두피 자극,손상 및 두피 염증 유발에 의해 탈모 문제가 발생하여 최근 천연 소재를 이용한 다양한 헤어케어 제품이 개발,판매되고 있다.

그러나, 종래의 기능성 샴푸 및 헤어토닉 제품은 눈으로 그 효과를 쉽게 확인할 수 있는 모발개선 효과에만 치중한 나머지 두피에 대한 영향을 고려치 못한 경우가 많았으며, 상기와 같이 두피 트러블을 방지하면서,손상된 모발 개선효과가 우수한 헤어케어 제품의 개발이 요구는 지속적으로 증가하고 있다.

대한민국 공개특허 10-2017-0132460(공개일:2017.12.04) 대한민국 공개특허 10-2013-0134505(공개일: 2013.12.10)

본 발명자들은 오랜 연구 끝에 두피 자극이 없으면서도, 모발의 강도강화 효과, 모발 윤기강화 효과, 모발생장 효과가 우수한 천연 소재를 이용한 헤어케어용 화장료, 이의 제조방법 및 이를 이용한 헤어케어 제품을 제공하고자 한다.

상술한 과제를 해결하기 위한 본 발명은 헤어케어용 화장료에 관한 것으로서, 황금누에고치 추출물을 포함한다.

또한, 본 발명은 상기 헤어케어용 화장료를 제조하는 방법에 관한 것으로서, 황금누에고치 분말을 열수 추출 공정 또는 에탄올 공정을 수행하여 액상의 추출물을 수득하는 1단계; 발효조에 상기 액상 추출물을 투입한 후,정제수,효소 및 효모를 투입 및 혼합한 후, 발효 공정을 수행하여 발효액을 수득하는 2단계; 상기 발효액을 원심분리하여 발효균을 제거한 후, 여과를 수행하는 3단계; 여과액을 숙성시킨 후, 여과를 수행하는 4단계; 및 4단계를 수행한 여과액을 동결 건조 및 분쇄하여 분말화된 황금누에고치 추출물을 수득하는 5단계;를 포함하는 공정을 수행하여 제조할 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 화장료를 이용한 헤어케어용 제품으로서, 헤어컨디셔너, 헤어 토닉, 헤어 크림, 헤어 로션, 헤어 페이스, 헤어 겔, 헤어 팩, 헤어 마사지, 헤어 리퀴드, 헤어 스프레이, 헤어 무스, 트리트먼트, 비에어로졸 무스, 비에어로졸 스프레이, 에어로졸 무스, 에어로졸 스프레이, 파마제, 탈색제, 염색제, 앰플, 샴푸 또는 린스 등의 헤어케어 제품에 관한 것이다.

본 발명의 헤어케어 화장료의 주성분인 황금누에고치 추출물은 피부(두피) 세포 독성이 없을 뿐만 아니라, 두피 트러블을 유발하지 않으며,다량의 세라신을 함유하는 바, 손상된 모발 개선 효과가 우수하다.

이하, 본 발명을 더욱 자세하게 설명한다.

본 발명의 헤어케어용 화장료는 황금누에고치 추출물을 포함한다.

황금누에(goldsilk)고치는 황금누에가 튼 고치를 의미하며,황금누에는 천연 황색실크 생산용으로 육종된 것으로서, 이로부터 얻은 황색실크는 의류용, 인테리어 벽지, 생활잡화등으로 사용되고 있다.

본 발명의 황금누에고치 추출물은 황금누에고치 내 세레신 및 특정 아미노산 함량 증가시킨 것으로서,하기와 같은 방법으로 제조할 수 있다.

황금누에고치 분말을 열수 추출 공정 또는 에탄올 공정을 수행하여 액상의 추출물을 수득하는 1단계; 발효조에 상기 액상 추출물을 투입한 후,정제수,효소 및 효모를 투입 및 혼합한 후, 발효 공정을 수행하여 발효액을 수득하는 2단계; 상기 발효액을 원심분리하여 발효균을 제거한 후, 여과를 수행하는 3단계; 여과액을 숙성시킨 후, 여과를 수행하는 4단계; 및 4단계를 수행한 여과액을 동결 건조 및 분쇄하여 분말화된 황금누에고치 추출물을 수득하는 5단계;를 포함하는 공정을 을 수행하여 제조할 수 있다.

황금누에고치 추출물 제조공정에 있어서,1단계의 열수 추출 공정은, 황금누에고치 분말을 8 ~ 10배의 정제수에 담지한 후, 80 ~ 90℃ 하에서 24 ~ 48시간 동안 열수 추출을 수행하는 1-1단계;추출액을 냉각 및 여과하여 액상의 추출무을 수득하는 1-2단계;를 포함하는 공정을 수행할 수 있다.

또한,1단계의 에탄올 추출 공정은, 황금누에고치 분말을 4 ~ 5배 중량비의 에탄올 수용액에 담지한 후, 40 ~ 60℃, 바람직하게는 45 ~ 55℃의 온도를 4 ~ 6시간 동안 유지하여 추출액을 수득하는 1-1단계; 및 에탄올 추출액을 냉각한 다음, 여과하는 1-2단계;를 포함하는 공정을 수행할 수 있다.

다음으로,황금누에고치 추출물 제조공정에 있어서, 2단계는 1단계에서 수득한 액상 추출물을 발효시키는 공정으로서, 발효조에 상기 액상 추출물을 투입한 후, 정제수, 효소 및 효모를 투입 및 혼합한 후, 발효 공정을 수행하여 발효액을 수득하는 공정이다.

상기 정제수 투입량은 액상 추출물 100 중량부에 대하여 100 ~ 300 중량부, 바람직하게는 120 ~ 200 중량부, 더욱 120 ~ 180 중량부 정도로 투입하는 것이 좋으며, 100 중량부 미만이거나 300 중량부를 초과하여 투입하면 발효가 잘 되지 않을 수 있으므로 상기 범위 내로 정제수를 사용하는 것이 좋다.

상기 효소는 코지자임(Kojizyme), 플로보자임(Flavourzyme) 및 알칼라제(Alcalase)중에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있고, 바람직하게는 코지자임, 플로보자임 및 알칼라제를 1 : 0.5 ~ 1.5 : 2.0 ~ 2.5 중량비로, 더욱 바람직하게는 코지자임, 플로보자임 및 알칼라제를 1 : 0.6 ~ 1.0 : 2.2 ~ 2.5 중량비로 포함하는 것이 발효된 황금누에고치 추출물 내 모발 개선에 유리한 아미노산 함량 증대에 유리하다.

그리고, 효소의 사용량은 상기 액상 추출물 100 중량부에 대하여,0.050 ~ 0.200 중량부를, 바람직하게는 0.080 ~ 0.150 중량부, 더욱 바람직하게는 0.090 ~ 0.120 중량부이며, 효소 사용량이 0.050 중량부 미만이면 발효 진행이 잘 되지 않을 수 있으며, 0.200 중량부 초과 사용시 원치 않는 아미노산 함량이 증가할 수 있으므로 상기 범위 내로 사용하는 것이 좋다.

또한, 상기 효모는 캔디다속 효모를,바람직하게는 캔디다 봄비콜라 (Candida bombicola)를 사용하는 것이 좋다. 그리고, 효모의 사용량은 상기 액상 추출물 100 중량부에 대하여, 0.002 ~ 0.050 중량부를, 바람직하게는 0.005 ~ 0.040 중량부를, 더욱 바람직하게는 0.010 ~ 0.025 중량부를 사용하는 것이 원할한 발효 및 황금누에고치 추출물 내 모발 개선 성분 함량 증대 측면에서 바람직하다.

그리고, 2단계의 발효 공정은 50 ~ 60℃ 하에서 4 ~ 6일간, 바람직하게는 50 ~ 55℃ 하에서 5 ~ 6일간 수행하는 것이 좋으며, 이 발효 조건을 벗어나는 경우, 발효가 잘 진행되지 않거나,황금누에고치 추출물 내 모발 개선 성분 함량이 적어질 수 있다.

그리고, 3단계는 2단계에서 수득한 발효액 내 발효균 및 이물질을 제거하는 공정으로서, 상기 발효액을 원심분리하여 발효균을 제거한 후, 여과를 수행할 수 있다. 이때, 상기 원심분리 및 여과는 당업계에서 사용하는 일반적인 방법으로 수행할 수 있다.

그리고, 4단계의 숙성은 3단계에서 수득한 여과액(또는 발효액)을 안정화시키는 공정으로서, 2 ~ 7℃ 하에서 5 ~ 7일간 방치하여 숙성을 수행할 수 있다.

그리고, 5단계의 상기 동결건조 및 여과는 당업계에서 사용하는 일반적인 방법으로 수행할 수 있다.

알려진 누에고치의 세리신 및 황금누에고치의 세라신 내 아미노산 함량은 하기 표 1과 같으며, 앞서 설명한 방법으로 제조한 본 발명의 황금누에고치 추출물 내 세라신의 아미노산 함량은 하기 표 1과 같은 차이가 있다.

즉,앞서 설명한 방법으로 제조한 본 발명의 황금누에고치 추출물내 세라신은 하기 표 1과 같은 아미노산 조성을 가질 수 있으며,비추출물의 일반 누에고치 및 황금누에고치 내 세리신 아미노산 조성과는 다르다.

구분 (중량%)	일반 누에고치 세리신	황금누에고치 세라신	본 발명 추출물 세라신
글리신(Glycine)	12.7	12.81	14.00 ~ 15.00
알라닌(Alanine)	5.51	4.74	4.00 ~ 4.50
세린(Serine)	31.97	29.07	22.00 ~ 24.00
티로신(Tyrosine)	3.4	4.8	6.00 ~ 6.30
발린(Valine)	2.68	4.19	4.50 ~ 4.80
아스파틱산(Asparticacid)	13.83	9.88	5.00 ~ 7.00
글루타믹산(Glutamicacid)	5.8	6.28	7.00 ~ 7.25
트레오닌(Thereonine)	8.25	8.76	7.00 ~ 7.30
류신(Leusine)	0.72	1.98	2.50 ~ 3.00
아이소류신(Isoleusine)	0.55	1.37	1.45 ~ 1.82
프롤린(proline)	0.57	1.07	1.00 ~ 1.50
페닐알라닌(phenylalanine)	0.43	1.67	2.05 ~ 2.34
기타 아미노산	나머지 잔량	나머지 잔량	나머지 잔량

본 발명의 헤어케어용 화장료는 모발 개선 뿐만 아니라, 두피 개선 통한 탈모 예방을 위해천연 복합 추출물을 더 포함할 수도 있다.

상기 천연 복합 추출물은 황련 추출물, 라벤더 추출물, 인디안구스베리 추출물 및 박하 추출물을 각각 제조하는 1단계; 및 황련 추출물, 라벤더 추출물, 인디안구스베리 추출물 및 박하 추출물 혼합하는 2단계;를 포함하는 공정을 수행하여 제조할 수 있다.

놀랍게도, 상기 추출물 단독 또는 2 ~ 3종을 사용할 때 보다, 상기 4종의 추출물을 혼합 사용시, 두피세포 재생 활성, 모유도세포 증식 활성 및 모성장 유도 사이토카인 유도 활성을 극대화된다.

황련(Coptis chinensis)은 미나리아재비과(Ranunculaceae)의 여러해살이 초본식물로서, 중국이 원산지이며, 생약용으로 한국·일본·중국 등지에서 재배하는 식물로서, 한방에서는 11월경에, 재식 5 ~ 6년 된 황련·왜황련의 뿌리를 채취하여 햇볕에 말린 것을 황련(黃連)이라 하며, 건위, 진정, 소염, 항균 등의 효능이 있어 소화불량, 위염, 장염, 복통, 구토, 정신불안, 토혈, 하혈, 화상 등의 치료에 처방하는 약재이며, 본 발명에서 상기 황련 추출물은 박하 추출물과 함께 두피의 열을 식히고, 모유두세포의 증식 활성을 유도하는 역할을 한다.

천연 복합 추출물 중 상기 황련 추출물은 건조된 황련 뿌리를 세절 및 분쇄하여 황련 분말을 제조하는 1단계; 상기 황련 분말 및 1,3-부틸렌글리콜을 혼합한 후, 환류 추출하여 추출액을 수득하는 2단계; 및 추출액을 여과하는 3단계;를 포함하는 공정을 수행하여 제조한 것을 사용할 수 있다.

또한, 여과된 추출액을 농축 및/또는 동결 건조시키는 4단계;를 더 포함하는 공정을 수행하여 제조할 수도 있다.

황련 추출물 제조공정에 있어서, 2단계의 혼합은 황련 분말 및 1,3-부틸렌글리콜을 1 : 5 ~ 15 중량비로, 바람직하게는 1 : 7 ~ 12 중량비로, 더욱 바람직하게는 8 ~ 10 중량부로 혼합하는 것이 적절하다.

그리고, 2단계의 상기 환류 추출은 50 ~ 70℃에서 5 ~ 8 시간 동안, 바람직하게는 60 ~ 70℃에서 5 ~ 6시간 동안 수행하는 것이 적절하다.

다음으로, 라벤더(lavender)는 쌍떡잎식물 통화식물목 꿀풀과 라반둘라속에 속하는 25 내지 30종의 식물로, 꽃과 식물체에서 향유를 채취하기 위하여 재배하고 관상용으로도 심는다. 향유는 향수와 화장품의 원료로 사용하고 두통이나 신경안정을 치료하는 데도 쓰이는 식물이다. 라반둘라 오피시날리스(Lavandula officnalis) 또는 라반둘라 안구스티폴리아(Lavandulaangustifolis) 종이 주로 아로마 테라피에 사용된다. 라벤더 에센셜 오일은 포마드(pomade)의 원료가 되며 희석한 것을 두피에 문지르면 발모를 촉진시키며, 증류시 빼낸 라벤더워터(lavender water)는 피부 세정이나 상처 치료에 효과적인 것으로 알려져 있고, 햇볕에 그을렸을 때나 손상된 피부 개선에도 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

천연 복합 추출물 중 상기 라벤더 추출물은 모성장 유도 사이토카인 유도 활성을 유도하며, 두피 가려움증을 개선하고, 두피에 항산, 항염 효과를 부여하는 역할을 한다.

상기 라벤더 추출물은 건조된 라벤더 잎을 분쇄하여 라벤더 잎 분말을 준비하는 1단계; 상기 라벤더 잎 분말을 초임계 이산화탄소 추출을 수행하여 추출물을 수득하는 2단계; 및 상기 추출물을 여과하는 3단계;를 포함하는 공정을 수행하여 제조한 것을 사용할 수 있다.

2단계의 초임계 이산화탄소 추출은 20 ~ 35℃ 및 80 ~ 100 기압 조건 하에서, 바람직하게는 20 ~ 35℃ 및 80 ~ 90 기압 조건 하에서, 12 ~ 36 시간 동안, 바람직하게는 18 ~ 28 시간 동안 수행할 수 있다.

그리고, 상기 천연식물 복합 추출물 내 라벤더 추출물의 사용량은 상기 황련 추출물 100 중량부에 대하여, 20 ~ 50 중량부, 바람직하게는 30 ~ 50 중량부를 사용하는 것이 좋으며, 라벤더 추출물을 20 중량부 미만으로 사용시 이의 사용으로 인한 모성장 유도 사이토카인 활성 촉진 효과가 떨어질 수 있고, 50 중량부 초과하여 사용하더라도 모성장 유도 사이토카인 활성 증대가 없으므로 상기 범위 내로 사용하는 것이 좋다.

인디안구스베리는 중국, 인도, 인도네시아, 대만 등 열대·아열대 기후 국가에 널리 분포되어 있으며, 비타민 C, 미네랄, 아미노산, 탄닌, 필램블릭산, 루틴, 커큐미노이드, 엠블리콜, 페놀릭 화합물들을 함유하고 있는 것으로 알려져 있다 (Zhang YJet al., J Nat Prod, 63: 1507-1510, 2000). 암라는 오렌지보다 20배 많은 비타민 C를 함유하고 있는데, 열에 대단히 안정적이어서 고온에 장시간 노출되어 있더라도 나무에서 갓 수확했을 때처럼 비타민이 거의 파괴되지 않는다. 암라의 비타민 C 내구성 및 내열성은 함께 들어있는 탄닌 성분에서 비롯된 것으로 여겨지는데, 암라 열매 추출물의 항산화, 항종양, 항염증 활성은 고함유 비타민 C와 폴리페놀 성분들의 영향으로 알려져 있다(Scartezzini P et al., J Ethnopharmacology, 104: 113-118, 2006).

상기 인디안구스베리 추출물은 항산, 항염 작용을 하여 비듬 방지, 두피 가려움 완화 및 방지 등 효과를 부여하여 두피를 개선 및 탈모를 방지하고, 다른 식물 추출물과 함께 사용하여 모성장 유도 사이토카인 유도 활성을 증대시키는 역할을 한다.

상기 인디안구스베리 추출물은 열수 추출물을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 상기 열수 추출물을 특정 균으로 발효시킨 발효물을 사용하는 것이 좋다.

상기 인디안구스베리 추출물은 건조된 인디안구스베리를 분쇄하여 인디안구스베리 분말을 준비하는 1단계; 상기 인디안구스베리 분말을 열수 추출 공정을 수행하여 추출액을 수득하는 2단계; 및 상기 추출액을 여과하는 3단계;를 포함하는 공정을 수행하여 제조한 것을 사용할 수 있다.

인디안구스베리 추출물 제조시, 상기 2단계의 열수 추출 공정은 인디안구스베리 분말을 및 물을 1 : 3 ~ 5 중량비로 혼합한 후, 70 ~ 90℃에서, 바람직하게는 75 ~ 85℃에서 5 ~ 10 시간 동안, 바람직하게는 6 ~ 8 시간 동안 열수 추출 공정을 수행할 수 있다.

상기 인디안구스베리 추출물은 추출물 내 폴리페놀 등의 두피 유익 성분 함량을 증대시키기 위해 열수 추출물을 발효시킨 발효물을 사용할 수도 있다.

인디안구스베리 추출물의 발효물은, 인디안구스베리를 분쇄하여 인디안구스베리 분말을 준비하는 1단계; 상기 인디안구스베리 분말을 열수 추출 공정을 수행하여 추출액을 수득하는 2단계; 추출액을 물과 희석한 희석용액을 제조하는 3단계; 상기 희석용액 혐기성균을 접종한 후, 혐기성 발효를 수행하여 발효액을 수득하는 4단계; 및 상기 발효액을 살균 처리 후, 여과하여 발효물을 제조하는 5단계;를 포함하는 공정을 수행하여 제조할 수 있다.

또한, 발효물을 숙성, 농축 및/또는 동결 건조시키는 6단계;를 더 포함하는 공정을 수행하여 제조할 수도 있다.

인디안구스베리 추출물의 발효물 제조 공정에 있어서, 상기 3단계의 희석용액은 인디안구스베리 추출액과 물을 1 : 0.5 ~ 1.5 부피비로, 바람직하게는 1 : 0.8 ~ 1.2 부피비로 혼합하여 희석용액을 제조한다. 인디안구스베리 추출액을 희석하는 이유는 4단계의 발효 공정이 원할하게 잘 진행되게 하기 위한 것이며, 상기 혼합비를 벗어나면 발효가 잘 되지 않을 수 있으므로 상기 범위 내로 물로 희석하는 것이 적절하다.

인디안구스베리 추출물의 발효물 제조 공정에 있어서, 상기 4단계의 발효는 2단계에서 수득한 인디안구스베리 추출액을 발효조에 투입 및 교반한 다음, 발효조를 밀봉시킨 후, 35 ~ 50℃, 바람직하게는 40 ~ 50℃ 온도에서 10 ~ 20일간, 바람직하게는 10 ~ 14일간 혐기성 발효를 수행한다.

그리고, 상기 혐기성균은 바실러스 속균(고초균) 및 누룩균을 1 : 0.3 ~ 0.4 CFU 비율로 혼합한 혐기성 혼합 균주를 사용하며, 혼합액에 대해 1×10³~ 5×10⁵cell/mL 정도를, 바람직하게는 5.0×10³~ 1.0×10⁵cell/mL 정도의 혐기성 혼합 균주를 접종시킨다.

또한, 상기 바실러스속균(고초균)은 바실러스 리체니포르미스(Bacilluslicheniformis) F1017, 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis) F1232, 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis) F1267, 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis) F1268, 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis) F1200, 바실러스 푸미루스(Bacillus pumilus) F1337, 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) F1005, 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) F1236 및/또는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) F1279 등을 사용할 수 있으며, 이에 한정되는 것은 아니고, 바람직하게는 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis) F1200, 바실러스 푸미루스(Bacillus pumilus) F1337, 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) F1005 및/또는바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) F1236를 사용할 수 있다.

또한, 상기 누룩균은 라이조푸스(Rhyzopus), 우사미(Usami),아스퍼질러스 오리재(Aspergillus oryzae) 및/또는 아스퍼질러스 소재(Aspergillus sojae)을 사용할 수 있다.

그리고, 5단계는 4단계에서 수득한 발효액을 원심 분리하여 필터링하여 침전물 및 혐기성균 등을 제거된 발효액을 수득한 후, 발효액 내 균을 사멸시키는 살균 처리를 수행한 후, 여과를 수행하며, 이때, 살균 처리와 여과는 당업계에서 사용하는 일반적인 방법으로 수행할 수 있다.

그리고, 6단계의 숙성은 발효물을 3 ~ 10℃ 하에서 24 ~ 48 시간 동안, 바람직하게는 5 ~ 10℃ 하에서 32 ~ 48 시간 숙성시켜서 발효로 인해 발생한 성분 등을 안정화시키기 위한 공정이다.

그리고, 6단계의 농축은 숙성물을 감압 농축하여 수득할 수 있으며, 일례를 들면, 물 또는 탄소수 1 ~ 4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들어, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올 등) 및상기 저급 알코올과 물의 혼합용매 중 1종 이상을 용매를 숙성물과 혼합한 후, 50 ~ 80℃ 하에서 1 ~ 5시간 동안 감압 농축하여 농축물을 수득할 수 있다.

그리고, 상기 천연식물 복합 추출물 내 인디안구스베리 추출물(또는 인디안구스베리 추출물의 발효물)의 사용량은 상기 황련 추출물 100 중량부에 대하여, 80 ~ 200 중량부, 바람직하게는 100 ~ 180 중량부를 사용하는 것이 좋으며, 인디안구스베리 추출물(또는 인디안구스베리 추출물의 발효물)을 80 중량부 미만으로 사용시 이의 사용으로 인한 두피를 개선 및 탈모를 방지 효과가 미비할 수 있고, 200 중량부를 초과하여 사용하면 이의 과량 사용으로 인한 모성장 유도 사이토카인 활성 효과 등이 오히려 떨어지고, 피부 세포 독성을 야기할 수 있으므로, 상기 범위 내로 사용하는 것이 좋다.

박하(Mentha arvensis var. piperascens)는 꿀풀과의 다년생 초본으로, 식물자체에 방향성을 가지고 있고 직립하여 상부에서 분지되어있다. 박하에는 멘톨, 이소멘톤, 피넨, 캄펜, 리모넨, 진게론, 쇼가올 등의 유효성분을 함유하여 청량하면서도 산뜻한 향을 발산하고, 피부나 두피에 존재하는 습진, 옴 등을 일으키는 병원성 진균, 대장균 포도상구균 등의 미생물에 대해서 살균 및 항균작용을 갖는 것으로 알려져 있다. 특히 비듬과 가려움증을 악화시키는 주요 원인인 피티로스포름 오발레(Pityrosporum Ovale)라는 미생물의 증식 및 활성 중대를 억제할 수 있고, 자극, 홍반 및 지루성 염증을 완화하는 효과가 있는 것을 알려져 있다.

상기 박하 추출물은 인디안구스베리 추출물과 함께 사용하여 두피 항균 및 항염 작용을 통한 두피 가려움 완화 및 방지, 지루성 염증 개선, 완화 등 효과를 부여하여 두피를 개선 및 탈모를 방지 효과를 증대시키는 역할, 두피에 청량감 부여 역할을 한다.

상기 박하 추출물은 열수 추출물 또는 저급 알코올 추출물을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 60 ~ 80 부피% 농도의 에탄올 수용액으로 추출한 에탄올 추출물을 사용할 수 있다. 박하 추출물을 제조하는 바람직한 일구현예를 들면, 건조된 박하잎 및 건조된 박하줄기를 혼합하여 혼합물을 준비하는 1단계; 상기 혼합물을 60 ~ 80 부피% 농도의 에탄올 수용액에 담지한 후, 40 ~ 60℃로 4 ~ 6 시간 동안 가열하여 에탄올 추출액을 수득하는 2단계; 및 에탄올 추출액을 냉각한 다음, 여과하는 3단계;를 포함하는 공정을 수행하여 제조할 수 있다.

그리고, 상기 천연식물 복합 추출물 내 박하 추출물의 사용량은 상기 황련 추출물 100 중량부에 대하여, 50 ~ 100 중량부, 바람직하게는 60 ~ 80 중량부를 사용하는 것이 좋으며, 박하 추출물을 50 중량부 미만으로 사용시 청량감 부여 효과, 두피 가려움 완화 효과가 미비할 수 있고, 100 중량부를 초과하여 사용하면 이의 과량 사용으로 오히려 두피 트러블을 유발 및/또는 추가적인 염증 개선 효과 증대가 없을 수 있으므로, 상기 범위 내로 사용하는 것이 좋다.

앞서 설명한 본 발명의 헤어케어 화장료는 헤어컨디셔너, 헤어 토닉, 헤어 크림, 헤어 로션, 헤어 페이스, 헤어 겔, 헤어 팩, 헤어 마사지, 헤어 리퀴드, 헤어 스프레이, 헤어 무스, 트리트먼트, 비에어로졸 무스, 비에어로졸 스프레이, 에어로졸 무스, 에어로졸 스프레이, 파마제, 탈색제, 염색제, 앰플, 샴푸 또는 린스 등 다양한 제형의 헤어케어 제품으로 응용할 수 있다.

헤어케어 제품의 일례들 들면, 헤어용 샴푸(SHAMPOO)로서, 용제; 앞서 설명한 황금누에고치 추출물, 또는 황금누에고치 추출물과 천연식물 복합 추출물을 포함하는 헤어케어 화장료; 두피 컨디셔닝제; 모발 컨디셔닝제; 증점제; 향료; pH 조절제; 및 금속이온봉쇄제;를 포함하는 두피 개선, 탈모 방지 효과가 우수한 헤어용 샴푸를 제공할 수 있다.

상기 용제는 정제수, 아이소프로필알코올 및 1,2-헥산디올 중에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있으며, 이에 본 발명이 한정되는 것은 아니다.

상기 두피 컨디셔닝제는 프로필렌글라이콜, 카퍼트라이펩타이드-1, 판테놀, 바이오틴 및/또는 나이아신아마이드 등을 포함할 수 있으며, 이에 본 발명이 한정되는 것은 아니다.

상기 모발 컨디셔닝제는 글리세린, 구아하이드록시프로필트라이모늄클로라이드, 폴리쿼터늄-10 등을 포함할 수 있으며, 이에 본 발명이 한정되는 것은 아니다.

상기 살균 보존제는 페녹시에탄올, 소듐벤조에이트 등을 포함할 수 있으며, 이에 본 발명이 한정되는 것은 아니다..

상기 점증제는 폴리쿼터늄-4, 폴리쿼터늄-7, 폴리쿼터늄-44, 잔탄검, 글루카메이트, 소듐클로라이드, 셀룰로오스 검 등을 포함할 수 있으며, 이에 본 발명이 한정되는 것은 아니다.

상기 pH 조절제는 소듐아세테이트, 시트릭액시드 등을 포함할 수 있으며, 이에 본 발명이 한정되는 것은 아니다.

상기 금속이온봉쇄제는 다이소듐이디티에이 등을 포함할 수 있으며, 이에 본 발명이 한정되는 것은 아니다.

또한, 계면활성제를 더 포함할 수 있으며, 계면활성제는 데실글루코사이드, 코코베타인, 올리브리퀴드 등을 포함할 수 있다.

본 발명의 헤어케어용 제품은 각각의 제형에 있어서 상기 필수성분 외에 제형의 종류 또는 사용 목적 등에 따라 본 발명에 따른 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 다른 성분들이 적절히 배합될 수 있다.

이하에서는 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하기로 하지만, 하기 실시예가 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니며, 이는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것으로 해석되어야 할 것이다.

[실시예]

실시예 1 : 황금누에고치 추출물의 제조

건조된 황금누에고치를 분쇄하여 황금누에고치 분말을 제조하였다.

다음으로, 황금누에고치 분말을 4.5배의 중량비의 에탄올 수용액에 담지한 후, 가열한 다음 45 ~ 55℃의 온도를 유지하면서 5시간 동안 천천히 교반한 후 여과하여 액상 추출물을 수득하였다.

다음으로, 발효조에 상기 액상 추출물, 정제수, 효소 및 효모를 투입하였다. 이때, 정제수는 액상 추출물 100 중량부에 대하여, 150 중량부를 투입하였고, 효소는 0.110 중량부, 효모는 0.018 중량부를 투입하였다. 그리고, 상기 효소는 코지자임, 플로보자임 및 알칼라제를 1:0.8 :2.3 중량비로 혼합한 혼합효소를 사용하였으며, 상기 효모는 캔디다 봄비콜라 (Candida bombicola)를 사용하였다.

그리고, 발효조 내부 온도를 52 ~ 54℃를 유지하면서 6일간 발효공정을 수행하여 발효액을 수득하였다.

다음으로, 상기 발효액을 원심분리하여 발효액 내 발효균 등을 제거한 후, 여과를 수행하여 여과액을 수득하였다.

다음으로, 상기 여과액을 3 ~ 5℃에서 7일간 냉장 보관하여 숙성시켰다.

다음으로, 숙성물을 동결건조 및 분쇄하여 분말화된 황금누에고치 추출물을 제조하였다.

실험예 1

실시예 1에서 제조한 황금누에고치 추출물의 아미노산 정량분석을 수행하였고,그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

구분(중량%)	실시예 1 추출물 세라신 내 아미노산 분석
글리신(Glycine)	14.67
알라닌(Alanine)	4.32
세린(Serine)	23.18
티로신(Tyrosine)	6.22
발린(Valine)	4.66
아스파틱산(Asparticacid)	5.93
글루타믹산(Glutamicacid)	7.14
트레오닌(Thereonine)	7.20
류신(Leusine)	2.78
아이소류신(Isoleusine)	1.65
프롤린(proline)	1.31
페닐알라닌(phenylalanine)	2.19
기타 아미노산	나머지 잔량

실험예 2: 모발 강도 평가

실시예 1에서 제조한 황금누에고치 추출물의 손상된 모발에 대한 모발 개선 효과를 평가하기 위하여 모발의 인장강도를 측정하였으며,인장강도는 인장강도계(TA-XT-Plus, Stable micro systems LTD.)를 이용하여 측정하였다.

정상모발을 10% 과산화산소가 포함된 암모니아수에 20분간 침지한 뒤 흐르는 물에서 30초간 세척한 후 35℃, 상대습도 45%에서 2시간 동안 자연건조하여 손상 모발을 제조하였다.

제조된 손상 모발 모델을 실시예 1에서 제조한 추출물에 10분간 침지한 뒤 35℃, 상대습도 45%에서 2시간 동안 건조하여 시료를 준비하였다.

그리고, 준비한 시료(모발) 각각을 크리프 시험기를 이용하여 모발의 인장강도를 측정하였다. 모발의 각 말단을 장력이 가해지는 방향으로 고정한 뒤 클램핑거리(clamping distance) 20mm, 인장속도 20mm/분으로 설정하여 인장강도를 측정하였다. 측정은 모발을 달리하여 10회 반복측정하여 그 평균값으로 계산하였으며, 분석된 인장강도의 세기를 표 3에 나타내었으며, 인장강도가 높을수록 모발의 강도가 강한 것으로 해석된다.

양성대조군은 손상되지 않은 모발 트레스에 대한 측정 값이며 음성대조군으로는 정제수로 실험을 진행한 결과이고,측정 결과를 아래 표 3에 나타내었다.

구분	인장강도(cN)
양성대조군	161.8
음성대조군	126.7
실시예 1	144.1

상기 표 3을 살펴보면, 실시예 1의 추출물이 손상모발인 음성대조군과 비교할 때, 인장강도가 크게 증가하는 결과를 보였으며, 이를 통해서 본 발명의 황금누에고치 추출물이 손상된 모발을 개선시킬 수 있음을 확인할 수 있었다.

실시예 2-1 :천연식물 복합 추출물의 제조

(1) 황련 추출물의 제조

건조된 황련 뿌리를 세절 및 분쇄하여 황련 분말을 준비하였다.

수직으로 환류냉각관을 부착시킨 둥근 플라스크에 상기 황련 분말을 투입한 후, 황련 분말의 9배 중량으로 1,3-부틸렌글리콜(1,3-Butylene glycol)을 넣음 다음, 65℃의 조건에서 6시간 동안 환류 추출기(Reflux extractor, 창신사 제품)를 이용하여 환류 추출을 수행하여 추출액을 수득하였다.

다음으로, 상기 추출액을 filter paper(Whatman No 2)로 여과하여 황련 추출물을 수득하였다.

그리고, 이를 동결건조 후 분쇄하여 분말화된 황련 추출물을 제조하였다.

(2) 라벤더 추출물의 제조

건조된 라벤더 잎 분쇄하여 라벤더 잎 분말을 준비하였다.

다음으로, 상기 라벤더 잎 분말을 초임계 추출 반응기에 투입한 다음, 반응기에 이산화탄소 충진한 후, 90기압 및 30 ~ 35℃ 하에서 24시간 동안 초임계 추출 공정을 수행하여 추출액을 수득하였다.

다음으로, 상기 추출액을 filter paper(Whatman No 2)로 여과하여 라벤더 추출물을 수득하였다.

그리고, 이를 동결건조 후 분쇄하여 분말화된 라벤더 추출물을 제조하였다.

(3) 인디안구스베리 추출물의 제조

건조된 인디안구스베리를 분쇄하여 인디안구스베리 분말을 준비하였다.

다음으로, 인디안구스베리 분말을 및 물을 1 : 4.2 중량비로 혼합한 후, 80℃에서 6 시간 동안 열수 추출 공정을 수행하였다.

다음으로, 열수 추출 공정을 통해 수득한 추출액을 냉각시킨 다음, 추출액을 filter paper(Whatman No 2)로 여과하여 인디안구스베리 추출물을 수득하였다.

그리고, 이를 동결건조 후 분쇄하여 분말화된 인디안구스베리 추출물을 제조하였다.

(4) 박하 추출물의 제조

건조된 박하 잎 및 건조된 박하 줄기를 1 : 4 중량비로 혼합하여 혼합물을 준비하였다.

다음으로, 상기 혼합물을 70 부피% 농도의 에탄올 수용액에 1 : 4 중량비로 혼합 및 담지한 후, 52 ~ 55℃로 5 시간 동안 가열하여 에탄올 추출액을 수득하였다.

수득한 에탄올 추출액을 냉각한 다음, 냉각된 추출액을 filter paper(Whatman No 2)로 여과하여 박하 추출물을 수득하였다.

그리고, 이를 동결건조 후 분쇄하여 분말화된 박하 추출물을 제조하였다.

(5) 천연식물 복합 추출물의 제조

앞서 제조한 황련 추출물 100 중량부에 대하여, 상기 라벤더 추출물 40 중량부, 인디안구스베리 추출물 150 중량부 및 박하 추출물 65 중량부를 포함하는 천연식물 복합 추출물을 제조하였다.

실시예 2-2 : 천연식물 복합 추출물의 제조

상기 실시예 2-1과 동일한 방법으로 제조한 황련 추출물, 라벤더 추출물 및 박하 추출물을 사용하되, 상기 인디안구스베리 추출물 대신 하기와 같이 제조한 인디안구스베리 추출물의 발효물을 사용하여, 황련 추출물 100 중량부에 대하여, 라벤더 추출물 40 중량부, 인디안구스베리 추출물의 발효물 130 중량부 및 박하 추출물 65 중량부를 포함하는 천연식물 복합 추출물을 제조하였다.

(1) 인디안구스베리 추출물의 발효물 제조

다음으로, 열수 추출 공정을 통해 수득한 추출액을 냉각시킨 다음, 추출액을 filter paper(Whatman No 2)로 여과하여 인디안구스베리 추출물(액상)을 수득하였다.

다음으로, 액상의 인디안구스베리 추출물을 정제수와 1 : 1 부피비로 혼합하여 희석용액을 제조하였다.

다음으로, 상기 희석용액에 혐기성 혼합 균주 약 3.0×10⁴cell/mL를 접종한 후, 발효조에 투입한 다음 서서히 교반시켜 주었다. 이때, 상기 바실러스 속균은 바실러스 푸미루스(Bacillus pumilus) F1337를 사용하였으며, 누룩균은 아스퍼질러스 소재(Aspergillus sojae)를 사용하였으며, 바실실러스 속균(고초균) 및 누룩균은1 : 0.34 CFU 비로 혼합하였다.

그리고, 발효조를 밀봉시킨 후 45 ~ 48℃ 온도에서 12일간 혐기성 발효를 수행하여 발효액을 수득하였다. 수득한 발효액을 수득한 발효액을 원심 분리하여 필터링하여 침전물 및 혐기성균 등을 제거된 발효액을 수득한 다음, 이를 살균 처리 및 filter paper(Whatman No 2)로 여과하여 수행하였다.

다음으로, 수득한 여과액을 4 ~ 5℃에서 36시간 동안 숙성시켰다.

다음으로, 숙성된 숙성물을 물과 혼합한 후, 50 ~ 55℃ 하에서 2시간 동안 감압 농축하여 농축물을 수득한 후, 이를 동결건조시킨 다음 분쇄하여 분말화된 인디안구스베리 추출물의 발효물을 수득하였다.

실시예 2-3 ~ 2-5 및 비교예 2-1 ~ 2-4

상기 실시예 2-1과 동일한 방법으로 천연식물 복합 추출물을 제조하되, 하기 표 5와 같은 함량의 천연식물 복합 추출물을 제조하여, 실시예 2-3 ~ 2-5 및 비교예 2-1 ~ 2-4를 각각 실시하였다.

비교예 2-5

상기 실시예 2-1과 동일한 방법으로 천연식물 복합 추출물을 제조하되, 라벤다 추출액을 하기와 같이 제조한 에탄올 추출액을 사용하였다.

건조된 라벤더 잎 분쇄하여 라벤더 잎 분말을 준비하였다.

다음으로, 상기 라벤더 잎 분말을 65 부피% 농도의 에탄올 수용액에 1 : 5 중량비로 혼합 및 담지한 후, 50℃로 4 시간 동안 가열하여 에탄올 추출액을 수득하였다.

수득한 에탄올 추출액을 냉각한 다음, 냉각된 추출액을 filter paper(Whatman No 2)로 여과하여 라벤더 추출물을 수득하였다.

그리고, 이를 동결건조 후 분쇄하여 분말화된 라벤더의 에탄올 추출물을 제조하였다.

구분 (중량부)	황련 추출물	라벤더 추출물	인디안구스 베리추출물	인디안구스베리 추출물의 발효물	박하 추출물
양성대조군 1	100	-	-	-	-
양성대조군 2	-	100	-	-	-
양성대조군 3	-	-	100	-	-
실시예2-1	100	40	150	-	65
실시예2-2	100	40	-	130	65
실시예2-3	100	40	80	-	65
실시예2-4	100	40	180	-	65
실시예2-5	100	25	150	-	65
비교예2-1	100	40	50	-	65
비교예2-2	100	40	230	-	65
비교예2-3	100	10	150	-	65
비교예2-4	100	40	150	-	35
비교예2-5	100	40(에탄올 추출물)	150	-	65

실험예 3 : 천연 식물 복합 추출물의 세포 독성 측정

실시예 2-1 ~ 2-5 및 비교예 2-1 ~ 2-5에서 제조한 천연식물 복합 추출물의 세포 독성 실험을 하기와 같이 수행하였다.

(1) 세포 배양

B16-F10 멜로마(melanoma) 세포를10% FBS(fetal bovine serum), 1% 페니실린/스트렙토마이신(Penicillin/Streptomycin)이 첨가된 DMEM 배지로 세포수가 5X10⁵cells/dish이 되도록 배양한다. 150mm 세포배양접시(cell culture dish)를 사용하여 37℃, 5% CO₂배양기(incubator)에서 배양한다. 컨플루언스(Confluence)에 도달한 세포는 트립신-EDTA(Trypsin-EDTA)를 사용하여 계대배양하여 유지시켰다.

(2) 세포 생존율 실험(WST assay)

세포 생존율은 물질이 가지는 독성을 체외 배양되는 세포의 생존율을 이용하여 확인하는 시험법으로서, 세포 생존율 확인은 생존 세포 내의 미토콘드리아 NADH 탈수효소 활성(mitochondrial NADH-dehydrogenase activity)에 의해 테트라졸리윰염(tetrazolium salt)의 4개의 질소로 이루어진 테트라졸모이티(tetrazole moiety)가 환원되어 유색의 포르마잔(formazan)으로 전환되는 원리를 이용하여 확인할 수 있다.

기질인WST(Water Soluble Tetrazolium Salt)는 물에 잘 녹는 높은 WST로써 살아있는 세포의 탈수소효소(Dehydrogenase)와 반응하여 오렌지 색의 수용성 포르마잔(formazan)을 생성한다.

WST와 반응하는 탈수소효소(Dehydrogenase)는 대사적으로 왕성한 활동을 하는 세포의 미토콘드리아 전자전달계에 존재하는 효소로써 살아있는 세포에만 유효하다.

따라서, 포르마잔(formazan)의 생성은 살아있는 세포수와 직선 상관관계를 가지며, 이는 흡광도(450 nm)를 측정함으로써 확인할 수 있다.

세포 생존율 실험(WST assay) 측정 방법은 하기 표 5에 나타내었으며, 세포 생존율(%)은 하기 수학식 1에 의거하여 계산하였다.

1) 멜라노마(melanoma) 세포를 96 well cell culture plate에 5×10³ cells/well 농도로 DMEM 배지(10% FBS, 1% Penicillin/Streptomycin)를 이용해 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 24시간 배양한다.
2) 시료와 양성대조군 베타-알부틴(beta-arbutin)를 DMEM 배지에 희석하여 농도별로 준비한다.
3) 24시간 배양한 세포의 배양액을 제거한 후 DPBS 100㎕로 세척한다.
4) 농도별로 희석하여 준비한 시료를100㎕씩 처리한다.
5) 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 48시간 배양한다.
6) WST 시약을 제조한다.(Ez-cytox : DMEM= 1 : 9)
7) 48시간 배양한 세포의 배양액을 제거한 후 DPBS 100㎕로 세포를 세척한다.
8) 10% WST 시약을 각 well에 100㎕씩 처리한다.
9) 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 2시간 배양한 후 450nm에서 흡광도를 측정하여 세포생존율을 구한다.
10) 무처리군 대비 세포생존율이 90% 이상인 경우 세포독성이 없는 것으로 판단하며, 90% 미만인 경우는 세포독성이 있는 것으로 판단한다.

[수학식 1]

세포 생존율(cell viability, %)= (시료 첨가군의 흡광도/무처리군 흡광도)×100(%)

그리고, 세포 생존율 측정 결과를 하기 표 6에 나타내었다.

세포생존율 (%)	천연식물 복합 추출물 농도
세포생존율 (%)	0(㎍/㎖)	100(㎍/㎖)	500(㎍/㎖)	1000(㎍/㎖)
실시예2-1	100%	100.8	99.3	98.1
실시예2-2	100%	102.4	100.5	99.3
실시예2-3	100%	101.7	100.4	98.9
실시예2-4	100%	99.5	98.7	97.6
실시예2-5	100%	101.3	100.2	99.4
비교예2-1	100%	102.2	101.0	99.2
비교예2-2	100%	97.3	90.6	87.6
비교예2-3	100%	101.6	100.7	99.6
비교예2-4	100%	101.3	99.8	98.3
비교예2-5	100%	100.5	99.6	98.0

상기 표 6의 세포 생존율 측정 결과를 살펴보면, 농도 500 ㎍/㎖ 이하에서는 대부분 세포 독성이 없는 결과를 보였다. 하지만, 인디안구스베리 추출물을 200 중량부 초과하여 사용한 비교예 2의 경우, 실시예 2-1 및 실시예 2-4와 비교할 때, 상대적으로 낮은 세포 생존율을 보였으며, 500 ㎍/㎖에서는 약 90% 정도로, 1000㎍/㎖에서는 87.6%의 낮은 세포 생존율을 보였다.

그리고, 인디안구스베리 추출물을 사용한 실시예 2-1 보다 추출물을 발효시킨 발효물을 사용한 실시예 2-2가 전반적으로 높은 세포 생존율을 보였다. 이를 통해서, 발효로 인해 인디안구스베리 추출물 내 피부 세포에 독성, 즉 피부 트러블을 야기시킬 수 있는 성분이 다소 낮아졌다는 것을 확인할 수 있었다.

실험예 4 : 두피세포 재생 활성, 모유두세포 증식 활성 및 모성장 유도 사이토카인의 생성 촉진 활성 실험

상기 표 4에 정리된 양성대조군 1 ~ 3, 실시예 2-1 ~ 2-5 및 비교예 2-1 ~ 2-5의 천연식물 복합 추출물의 두피세포 재생 활성, 모유두세포 증식 활성 및 모성장 유도 사이토카인의 생성 촉진 활성을 다음과 같이 수행하였다.

(1) 두피세포재생활성

HaCaT(immortalized human keratinocytes) 세포주를 2Х10³cells/well의 농도로 96 well plate에 분주하고, 24시간 동안 37℃, 습도 95%, 5% CO²로 조절된 CO₂배양기에서 배양하였다.

새로운 배지에 각 시료를 적절한 농도에 맞춰 세포에 처리한 후 24, 48,72 시간 동안 배양하였다. 세포주의 생존율을 측정하기 위해 CCK-8(Cell Counting Kit-8, Dojindo Mol.Tech., Rockville)를 이용하여 분광광도계(Molecular Devices, VersaMax ELISA MicroplateReader)로 450 nm에서 흡광하였다.

두피 세포의 재생 활성은 시료를 처리하지 않은 음성대조군에 대비한 시료처리군의 흡광도를 측정하였고, 음성대조군을 기준으로 상대적인 흡광도 값 증가율(%)를 계산하여, 그 결과를 하기 표 8에 나타내었다. 그리고, 처리군의 농도는 0.30 부피% 농도로 하였다.

(2) 모유두세포 증식 활성

HFDPC(피부유두세포)를 5X10³ cells/well의 농도로 96 well plate에 분주하고, 24시간 동안 37℃, 습도 95%, 5% CO²로 조절된 CO₂배양기에서 배양하였다. 새로운 배지에 각 시료를 적절한 농도에 맞춰 세포에 처리한 후, 24, 48, 72시간 동안 배양하였다. 세포의 생존율을 측정하기 위해 CCK-8(Cell Counting Kit-8, Dojindo Mol.Tech., Rockville)를 이용하여 분광광도계(Molecular Devices, VersaMax ELISA MicroplateReader)로 450 nm에서 흡광하였다. HFDPC 세포 증식 활성 효능은 시료를 처리하지 않은 음성대조군에 대비한 시료 처리군의 흡광도를 측정하였고, 음성대조군을 기준으로 상대적인 흡광도 값 증가율(%)를 계산하여 하기 표 4에 나타내었다. 그리고, 처리군의 농도는 0.30 부피% 농도로 하였다.

(3) 모성장 유도 사이토카인의 생성 촉진 활성

HFDPC(피부유두세포)를 1X10⁴ cells/well의 농도로 96 well plate에 분주하고, 24시간 동안 37℃, 습도 95%, 5% CO²로 조절된 CO₂배양기에서 배양하였다. 새로운 배지에 각 시료를 적절한 농도에 맞춰 세포에 처리한 후 24 시간 동안 배양하였다. HGF(Hepatocyte Growth Factor)을 측정하기 위해 HGF kit (ELM-HGF, RayBio, Norcross)를 이용하여 분광광도계(Molecular Devices, VersaMax ELISA MicroplateReader)로 450 nm에서 흡광도를 측정하였고, 측정하였고, 음성대조군을 기준으로 상대적인 흡광도 값 증가율(%)를 계산하여 하기 표 4에 나타내었다. 그리고, HGF 생성 촉진 활성은 HGF 표준품 검량선을 작성하여 결과를 도출 후, 단백질 함량을 보정하였다. 그리고, 처리군의 농도는 0.30 부피% 농도로 하였다.

구분	두피세포 재생활성(%)	모유두세포 증식활성(%)	모성장 유도 사이토카인의 생성 촉진 활성(%)
음성대조군	100%	100%	100%
양성대조군1(황련)	105.3%	102.4%	100.9%
양성대조군2(라벤더)	102.6%	105.8%	103.4%
양성대조군3(인디안구스베리)	107.5%	104.3%	101.9%
실시예2-1	115.8%	118.1%	109.4%
실시예2-2	118.9%	120.5%	113.2%
실시예2-3	111.4%	113.9%	108.5%
실시예2-4	119.3%	119.8%	110.7%
실시예2-5	112.3%	113.0%	106.9%
비교예2-1	106.9%	106.4%	103.0%
비교예2-2	113.3%	118.3%	109.6%
비교예2-3	109.9%	110.1%	103.8%
비교예2-4	113.6%	115.9%	108.1%
비교예2-5	109.5%	110.3%	105.7%

상기 표 7의 측정결과를 살펴보면, 단독 추출물을 사용한 황련 추출물(양성대조군 1), 라벤더 추출물(양성대조군 2) 또는 인디안구스베리 추출물(양성대조군 3)과 비교할 때, 실시예 2-1 ~ 2-5가 상대적으로 매우 높은 두피세포 재생활성, 모유두세포 증식 활성 및 모성장 유도 사이토카인의 생성 촉진 활성을 보였다.

인디안구스베리 추출물을 80 중량부 미만으로 사용한 비교예 2-1의 경우, 실시예 2-3과 비교할 때, 두피세포 재생 활성 및 모성장 유도 사이토카인의 생성 촉진 활성이 크게 낮은 결과를 보였으며, 인디안구수베리 추출물을 단독으로 사용한 비교예 2-1 보다도 오히려 낮은 결과를 보였다.

또한, 인디안구스베리 추출물을 200 중량부 초과하여 사용한 비교예 2-2의 경우, 실시예 2-4와 비교할 때, 오히려 두피세포 재생활성, 모유두세포 증식 활성 및 모성장 유도 사이토카인의 생성 촉진 활성이 낮거나, 큰 변화를 보이지 않았는데, 이는 실험예 3에서 확인한 바와 같이 세포 독성이 있기 때문으로 판단된다.

또한, 라벤더 추출물을 20 중량부 미만으로 사용한 비교예 2-3 및 박하 추출물을 50 중량부 미만으로 사용한 비교예 2-4의 경우, 실시예 2-1 또는 실시예 2-5와 비교할 때, 전반적으로 두피세포 재생활성, 모유두세포 증식 활성 및 모성장 유도 사이토카인의 생성 촉진 활성이 급격하게 낮아지는 결과를 보였다.

그리고, 라벤더 추출물을 에탄올 추출물로 사용한 비교예 2-5의 경우, 실시예 2-1과 비교할 때, 상대적으로 낮은 모유두세포 증식 활성 및 모성장 유도 사이토카인의 생성 촉진 활성을 보였으며, 이를 통해서 라벤더 추출물로서, 초임계 이산화탄소 추출물을 사용하는 것이, 에탄올 추출물을 사용하는 것보다 두피 개선 및/또는 탈모방지 효과에 유리함을 확인할 수 있었다.

상기 실시예 및 실험예를 통하여,본 발명의 황금누에고치 추출물을 헤어케어 제품의 화장료로 사용시 손상된 모발 개선 효과가 있음을 확인할 수 있었으며,황금누에고치 추출물과 함께,천연식물 복합 추출물을 함께 사용시 모발 개선 효과 뿐만 아니라, 두피개선, 탈모방지 효과가 있는 기능성 헤어케어 제품으로 제공할 수 있음을 확인할 수 있었다.

Claims

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황금누에고치 추출물을 포함하며,
상기 황금누에고치 추출물은 열수 추출물 또는 에탄올 추출물를 포함하는 추출물을 효소 및 효모로 발효시킨 발효물이고,
상기 효소는 코지자임(Kojizyme), 플로보자임(Flavourzyme) 및 알칼라제(Alcalase)를 1 : 0.5 ~ 1.5 : 2.0 ~ 2.5중량비로 포함하며,
상기 효모는 캔디다 봄비콜라(Candida bombicola)를 포함하는 것을 특징으로 하는 손상모발 개선용 헤어케어 화장료.
제4항에 있어서, 황련 추출물, 라벤더 추출물, 인디안구스베리 추출물 및 박하 추출물을 포함하는 천연식물 복합 추출물을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 손상모발 개선용 헤어케어 화장료.
제4항 또는 제5항의 화장료를 포함하는 것을 특징으로 하는 손상모발 개선용 헤어케어 제품.
제6항에 있어서, 헤어케어 제품은 헤어컨디셔너, 헤어 토닉, 헤어 크림, 헤어 로션, 헤어 페이스, 헤어 겔, 헤어 팩, 헤어 마사지, 헤어 리퀴드, 헤어 스프레이, 헤어 무스, 트리트먼트, 비에어로졸 무스, 비에어로졸 스프레이, 에어로졸 무스, 에어로졸 스프레이, 파마제, 탈색제, 염색제, 앰플, 샴푸 또는 린스인 것을 특징으로 하는 손상모발 개선용 헤어케어 제품.
제6항에 있어서, 상기 헤어케어 제품은 샴푸이며,
용제, 상기 헤어케어 화장료, 두피컨디셔닝제, 모발 컨디셔닝제, 증점제, 향료, pH 조절제 및 금속이온봉쇄제를 포함하는 것을 특징으로 하는 손상모발 개선용 헤어케어 제품.
황금누에고치 분말을 열수 추출 공정 또는 에탄올 공정을 수행하여 액상 추출물을 수득하는 1단계;
발효조에 상기 액상 추출물을 투입한 후, 액상 추출물 100 중량부에 대하여,효소 0.050 ~ 0.200 중량부 및 효모 0.002 ~ 0.050 중량부를 투입 및 혼합한 후, 50 ~ 60℃ 하에서 4 ~ 6일간 발효를 수행하여 발효액을 수득하는 2단계;
상기 발효액을 원심분리하여 발효균을 제거한 후, 여과를 수행하는 3단계;
여과액을 2 ~ 7℃ 하에서 5 ~ 7일간 숙성시킨 후, 여과를 수행하는 4단계;및
4단계를 수행한 여과액을 동결 건조 및 분쇄하여 분말화된 황금누에고치 추출물을 수득하는 5단계;를 포함하는 공정을 수행하고,
상기 효소는 코지자임(Kojizyme), 플로보자임(Flavourzyme) 및 알칼라제(Alcalase)를 1 : 0.5 ~ 1.5 : 2.0 ~ 2.5중량비로 포함하며,
상기 효모는 캔디다 봄비콜라(Candida bombicola)를 포함하는 것을 특징으로 하는 손상모발 개선용 헤어케어 화장료의 제조방법.
제9항에 있어서, 5단계에서 수득한 황금누에고치 추출물과 천연복합 추출물을 혼합하는 공정을 더 수행하며,
상기 천연복합 추출물은 황련 추출물, 라벤더 추출물, 인디안구스베리 추출물 및 박하 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 손상모발 개선용 헤어케어 화장료의 제조방법.