KR102392812B1

KR102392812B1 - 높은 점탄성 및 응집성을 동시에 갖는 히알루론산 필러

Info

Publication number: KR102392812B1
Application number: KR1020190082306A
Authority: KR
Inventors: 장철; 이충; 김지선; 정현태; 이창현; 소진언; 이화연
Original assignee: 주식회사 엘지화학
Priority date: 2018-07-06
Filing date: 2019-07-08
Publication date: 2022-04-29
Also published as: BR112021000188A2; CN112423798B; AU2019299812A2; CN112423798A; CA3105709C; EP3804769A4; RU2769398C1; CA3105709A1; AU2019299812B2; WO2020009555A1; US20210268143A1; EP3804769A1; TWI708607B; TW202005656A; KR20200005505A; AU2019299812A1

Abstract

본 발명에 따른 히알루론산 필러는 개선된 높은 점탄성적 유동 특성을 나타내어, 모노 페이직 히알루론산 필러와 바이 페이직 히알루론산 필러의 장점을 함께 가지므로 피부에 주입시 이동 가능성이 낮으면서도 형태를 오래 유지하여, 주름개선, 볼, 가슴, 코, 입술 및 엉덩이 등과 같은 연조직의 수복 또는 부피를 확대시키고, 윤곽 교정에 사용시 탁월하며, 제조 과정에서 가교제를 작게 사용하더라도 인체 내 지속시간이 증가되고 부작용이 작다.

Description

높은 점탄성 및 응집성을 동시에 갖는 히알루론산 필러{Hyaluronic acid filler having both of high viscoelasticity and cohesivity}

본 발명은 히알루론산 필러에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 모노 페이직 히알루론산(hyaluronic acid, HA) 필러의 높은 응집성과 바이 페이직 히알루론산 필러의 높은 탄성을 동시에 갖춘 히알루론산 필러 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

인체 피부의 조직은 콜라겐, 엘라스틴 등의 단백질과 글리코스아미노글리칸을 포함하는 세포외기질에 의해 그 구조를 유지하고 있는데, 외부의 충격, 질병 또는 노화 등에 의한 연조직의 결손이 발생하는 경우, 연조직 증강과 같은 조직 증강을 의학 및 미용 목적으로 사용하여 왔다. 이러한 증강은 성형수술을 통해 외과적으로 이루어지거나, 해당 부위에 생체 조직이나 합성 고분자 화학물질을 주입하여 연조직의 부피를 증대, 확장함으로써 비외과적인 방법으로 그 형태를 복원, 교정하여 왔다. 이때 피부조직과 유사한 성분으로 특정부위에 삽입되어 연부조직을 확장시킴으로써 미용상으로 볼, 입술, 가슴, 엉덩이 등의 부피를 확대시키고, 피부의 잔주름 및 깊은 주름의 감소를 통한 주름개선이나 윤곽교정 등에 사용되는 물질을 연부조직 확장제(soft tissue augmentation material)라 하는데 일반적으로 피부용 필러(dermal filler)라고 한다. 이러한 필러와 관련하여 최초로 개발된 1세대 피부용 필러로는 동물 유래, 즉, 소나 돼지 등의 동물성 단백질을 추출하여 제조한 자이덤(Zyderm), 자이플라스트(Zyplast)와 인체 콜라겐을 사용하는 코스모덤(Cosmoderm) 또는 코스모플라스트(Cosmoplast) 등의 제품이 있으나, 효과의 지속시간이 짧고 시술 한달 전에 피부과민반응검사를 해야 하는 번거로움 때문에 최근에는 거의 시술되고 있지 않다.

2세대 필러는 히알루론산(이하, 'HA'라고도 함) 필러로 콜라겐 필러보다 효과 지속시간이 길고 인체구성성분과 유사한 다당류인 N-아세틸-D-글루코사민과 D-글루쿠론산으로 구성되어 피부과민반응 등의 부작용이 적고, 시술 및 제거가 용이하며, 물을 끌어당겨 피부 수분 유지, 볼륨 및 탄력성 유지가 가능하여 피부용 필러로서 적합한 장점을 갖는다.

그러나, 히알루론산 그 자체는 인체 내에서 수 시간에 불과한 짧은 반감기를 나타내어 적용에 한계가 있어, 가교 결합을 통해 반감기(체내 지속성)를 증대시키려는 연구가 진행되어 왔다. 예컨대, 미국 특허 제4,582,865호는 디비닐술폰(DVS)을 가교제로 사용하여 가교된 히알루론산 유도체를 개시하고 있으며, 이의 하이드로겔 형태가 Hylaform®이라는 상품명으로 시판되고 있고, 미국특허 제5,827,937호는 다기능에폭시화합물을 가교제로 사용하여 히알루론 유도체 가교물을 제조하는 방법을 개시하고 있으며, 이중 다기능에폭시화합물로서 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르(BDDE)를 가교제로 사용하여 제조한 히알루론산 가교물의 하이드로겔 형태인 Restylane®은 미국 FDA의 승인을 받아 조직증강용 충전제로서 세계적으로 시판되고 있다.

이와 같은 가교된 히알루론산 필러에는 단일상으로 만들어진 필러(모노 페이직 HA 필러, monophasic HA filler)와, 이성상으로 만들어진 필러(바이 페이직 HA 필러, biphasic HA filler)가 있다. 모노페이직 히알루론산 필러는 가교된 히알루론산을 포함하는 균질액을 사용하여 제조되므로, 일반적으로 탄성도가 낮고 응집력이 높다. 이에 따라, 모노 페이직 히알루론산 필러는 피부에 주입될 경우, 주입된 부위에서 이탈할 가능성은 낮으나 주입된 형태를 오래 유지하지 못하고 모양(형태) 유지 기간이 시술 후 2개월 정도에 불과하다는 문제점이 있다.

바이 페이직 히알루론산 필러는 가교된 히알루론산 입자체를 단독으로 또는 액상에 가까운 비가교된 히알루론산(미처리 비가교 결합된 히알루론산, linear HA)를 혼합하여 제조하므로, 일반적으로 탄성도가 높고 응집력이 낮다. 이에 따라, 바이 페이직 HA 필러는 피부에 주입될 경우, 형태를 오래 유지할 수 있지만 주입된 부위에서 이탈할 가능성이 높다는 문제점이 있다. 이러한 바이 페이직 HA 필러의 대표적인 예가 상기 언급한 레스틸렌(Restylane®, 갈더마사 제품)이다.

이와 같이, 모노 페이직 HA 필러와 바이 페이직 HA 필러는 각각 장, 단점을 갖고 있는데, 종래 모노 페이직 히알루론산 필러와 바이 페이직 히알루론산 필러의 특성을 모두 가질 수 있도록 상기 필러들을 혼합한 예가 존재하나, 이와 같은 경우 오히려 모노 페이직 히알루론산 필러 및 바이 페이직 히알루론산 필러의 장점이 모두 동반하여 감소하여 필러로서 적절하지 않다. 따라서, 주입된 부위에서 이탈할 가능성이 낮으면서도 형태를 오래 유지할 수 있는 필러가 필요한 실정이다.

본 발명은 상기 문제점들을 해결하기 위해 제안된 것으로서, 모노 페이직 HA 필러와 바이 페이직 HA 필러의 장점으로 높은 점탄성 및 응집성을 모두 갖는 필러 즉, 주입된 부위에서 이탈할 가능성이 낮으면서도 형태를 오래 유지할 수 있고, 인체 피부에 주입되어 주름 개선 및 모양 형성에 사용될 수 있는 필러를 제공하고자 하는 목적을 갖고 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 이러한 필러를 제조하는 방법을 제공하는 것에 있다.

본 출원인은 상기와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로, 히알루론산이 특정 분자량 및 가교도 등의 조건을 만족하는 경우 모노 페이직 필러의 높은 응집력과 바이 페이직 필러의 높은 점탄성을 동시에 갖게 되며, 이에 따라, 피부 등에 주입시 원하는 형태로 만들기 용이하고 원하는 기간 동안 지속될 수 있다는 점을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

따라서, 하나의 양태로서, 본 발명은 높은 점탄성 및 응집력을 가져 모노 페이직 필러 및 바이 페이직 필러의 특징을 모두 나타내는 히알루론산 필러, 상기 필러가 충진된 프리필드시린지, 상기 필러를 포함하는 조직수복용 생체재료에 관한 것이다.

본 발명의 필러에 포함되는 히알루론산(이하, 'HA'라고도 함)은 N-아세틸-D-글루코사민과 D-글루쿠론산으로 이루어진 반복 단위가 선형으로 연결되어 있는 생체 고분자 물질로서, 안구의 유리액, 관절의 활액, 닭벼슬 등에 많이 존재하며, 우수한 생체적합성을 갖기 때문에, 안과용 수술 보조제, 관절기능 개선제, 약물전달 물질, 점안제, 주름개선제 등의 의료 및 의료 용구나 화장품 용도로 널리 사용되고 있다. 구체적으로 본 발명의 필러에 포함되는 히알루론산은 히알루론산 외에도 이의 염을 의미할 수 있다. 상기 히알루론산의 염은 예를 들어 히알루론산 나트륨, 히알루론산 칼륨, 히알루론산 칼슘, 히알루론산 마그네슘, 히알루론산 아연, 히알루론산 코발트 등의 무기염과, 히알루론산 테트라부틸암모늄 등의 유기염이 모두 포함되는 것이나, 이에 한정되는 것은 아니다.

또한 바람직하게, 상기 히알루론산 또는 이의 염은 적절한 가교제에 의해 가교결합된 것일 수 있다.

가교된 히알루론산 유도체는 상기와 같은 히알루론산 자체 또는 이의 염을 가교제를 사용하여 가교시켜 제조할 수 있다. 가교를 위해서는, 알칼리 수용액 하에서 가교제를 사용하는 방법을 사용할 수 있다. 상기 알칼리 수용액으로는 NaOH, KOH, 바람직하게는 NaOH 수용액을 사용할 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다. 이때 NaOH 수용액의 경우 0.1N 내지 0.5N의 농도로 사용할 수 있다. 본 발명의 필러에 포함되는 가교된 히알루론산은 특히 낮은 농도 및 적은 양의 가교제를 사용하여도 높은 점탄성 및 응집성을 나타낸다. 상기 가교제의 농도는 상기 히알루론산 또는 이의 염 중의 단위유닛인 N-아세틸-D-글루코사민 및 D-글루쿠론산 1몰 대비 1 내지 10mol%일 수 있다.

상기 가교제는 둘 또는 그 이상의 에폭시 작용기를 포함하는 화합물로서 다양할 수 있으며, 바람직한 예로 부탄디올디글리시딜에테르(1,4-butandiol diglycidyl ether: BDDE), 에틸렌글리콜디글리시딜에테르(ethylene glycol diglycidyl ether: EGDGE), 헥산디올디글리시딜에테르(1,6-hexanediol diglycidyl ether), 프로필렌글리콜디글리시딜에테르(propylene glycol diglycidyl ether), 폴리프로필렌글리콜디글리시딜에테르(polypropylene glycol diglycidyl ether), 폴리테트라메틸렌글리콜디글리시딜에테르(polytetramethylene glycol diglycidyl ether), 네오펜틸글리콜디글리시딜에테르 (neopentyl glycol diglycidyl ether), 폴리글리세롤폴리글리시딜에테르(polyglycerol polyglycidyl ether), 디글리세롤폴리글리시딜에테르(diglycerol polyglycidyl ether), 글리세롤폴리글리시딜에테르(glycerol polyglycidyl ether), 트리메틸프로판폴리글리시딜에테르(tri-methylpropane polyglycidyl ether), 비스에폭시프로폭시에틸렌(1,2-(bis(2,3-epoxypropoxy)ethylene), 펜타에리쓰리톨폴리글리시딜에테르(pentaerythritol polyglycidyl ether) 및 소르비톨폴리글리시딜에테르(sorbitol polyglycidyl ether) 등을 들 수 있고, 그 중에서도 바이에폭사이드계인 1,4-부탄디올글리시딜에테르가 낮은 독성을 갖는다는 면에서 특히 바람직하다.

본 발명에서 용어 "변형률"(Degree of modification, MOD)는 고분자 히알루론산에 포함되어있는 히알루론산의 단위 유닛(N-아세틸-D-글루코사민(GlcNAc)+D-글루쿠론산) 중의 N-아세틸-D-글루코사민의 몰수 대비 히알루론산 분자 전체에 결합되어 있는 가교제(예를 들어 BDDE)의 몰수를 나타낸 수치(n)로 산출되는 가교된 정도를 의미하는 것으로, 하기와 같은 수학식 1로 나타낼 수 있다.

[수학식 1]

변형률(Degree of modification) = 총 가교제의 몰수/ 총 N-아세틸-D-글루코사민의 몰수

본 발명에서는 특히, 이러한 변형률이 상기와 같은 가교제에 의한 가교를 통해 1 내지 7의 범위, 바람직하게는 3 내지 5 의 범위를 나타내는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명에서 용어 "가교율(Crosslinking ratio, CrR)"은 전체 가교제의 몰수에 대한 가교된 가교제의 몰비를 의미하는 것으로, 하기 수학식 2와 같이 나타내어질 수 있다.

[수학식 2]

가교율 = 가교된 가교제의 몰수/총 가교제의 몰수

본 발명에서는 특히, 가교를 통해 0.1 내지 0.2의 범위, 바람직하게는 0.14 내지 0.17 의 범위를 나타내는 것을 특징으로 한다. 바람직하게, 본 발명에 따른 히알루론산 필러는 상기 MOD 및 CrR 범위를 가져 모노 페이직 및 바이페이직 필러의 특성을 동시에 상승적으로 나타낼 수 있다는 특징을 갖는다.

본 발명에서, 상기 가교된 히알루론산의 분자량은 2,500,000 Da 이상, 바람직하게는 2,500,000 내지 3,500,000 Da일 수 있다.

본 발명에서 사용되는 용어 탄성(Elasticity)은 물체에 힘을 가했을 때 고체로서의 성질, 즉, 힘을 가하면 형태가 바뀌지만 힘을 제거하면 원래 형태로 되돌아오는 성질을 의미한다. 이러한 탄성은 저장탄성계수(G': elastic modulus, storage modulus)로 나타내며, 단위는 파스칼(Pascal, Pa)이다. 또한 본 발명에서 사용되는 용어 점성(Viscosity)은 액체로서의 성질, 즉, 흐름에 대한 저항인 점성을 지닌 흐름이 나타나는 것을 의미한다. 이러한 점성은 손실 탄성 계수(G": viscous modulus, loss modulus)로 나타낼 수 있고, 단위는 파스칼(Pascal, Pa)이다.

본 발명에서 사용되는 용어 점탄성(Viscoelasticity)는 물체에 힘을 가했을 때, 이러한 탄성변형과 점성을 동시에 갖는 것을 의미하며, 본 발명과 같은 필러에 포함되는 가교된 히알루론산 하이드로겔의 경우 이와 같이 점성과 탄성이 모두 나타나 점탄성을 가지고 있다. 이러한 점탄성은 저장탄성계수(G')와 손실탄성계수(G")를 모두 반영할 수 있는 복소 점도(Complex viscosity)로 평가할 수 있고 단위는 센티포와즈(Centipoise, cP)이다.

본 발명에서 사용되는 용어 응집력(Cohesivity)은 필러 입자들 사이에서 작용하고 있는 인력(부착력)으로 이에 의해 필러 입자들이 뭉치게 할 수 있다. 이러한 응집력이 높을수록 필러를 주입한 조직을 지탱할 수 있는 힘이 커지게 된다. 일반적으로 응집력은 압축시험으로 간접적으로 측정 가능하며, 레오미터(Rheometer)에 로딩한 후 일정 속도로 압축시의 저항력을 측정하며, 단위는 gf(gram force)이다.

일반적으로, 모노 페이직 형태의 히알루론산 필러는 응집성 있는 겔 형태(Cohesive gel)을 나타내어 응집력은 높으나 점탄성이 낮다. 이러한 예로는 알러간사의 쥬비덤(Juvederm®)이 있다. 또한, 바이 페이직 형태의 히알루론산 필러는 입자 형태를 나타내어 점탄성은 높으나 응집력이 낮다는 특징을 갖는다. 이러한 예로는 갈더마사의 레스틸렌(Restyane®)이 있다.

앞서 살펴본 바와 같이, 모노 페이직 형태의 히알루론산 필러와 바이 페이직 형태의 히알루론산 필러는 각각의 장단점을 가지고 있다.

본 발명에 따른 히알루론산 필러는 높은 점탄성과 응집성을 갖고, 이에 따라 모노 페이직 필러의 특성과 바이 페이직 필러의 특성을 동시에 갖는 것을 특징으로 한다. 바람직하게, 본 발명에 따른 히알루론산 필러는 Rheometer로 측정시 1Hz의 각속도에서 6×10⁴이상, 바람직하게는 60,000 내지 130,000 cP의 복소점도(점탄성)을 나타내며, 400 Pa 이상, 바람직하게는 400 내지 800 Pa의 저장탄성계수 G'를 나타내고, 30 gf 이상, 바람직하게는 30 내지 60 gf의 응집력을 나타낸다.

또한, 본 발명에 따른 히알루론산 필러 중의 히알루론산 입자, 바람직하게는 가교 결합된 히알루론산의 입자는 여러 가지 형상을 나타낼 수 있으나 바람직하게는 구(球) 형상일 수 있다. 또한, 이러한 입자의 평균 직경은 300 내지 400μm일 수 있다.

바람직한 양태에서, 본 발명에 따른 히알루론산 필러는 전체 필러 중량 대비 1 내지 3 중량%의 히알루론산을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 히알루론산 필러는 상기 히알루론산뿐만 아니라 물, 마취제 또는 이들의 조합을 더 포함할 수 있다.

상기 마취제로는 당업계에 공지인 마취제, 바람직하게 국소 마취제를 1종 이상 포함하는 것이고, 이러한 하나 이상의 마취제의 농도는 조성물의 주사시 경험하게 되는 통증을 완화시키는 데 효과적인 양이다. 상기 마취제의 예로는 암부카인(ambucaine), 아몰라논(amolanone), 아밀로카인(amylocaine), 베녹시네이트(benoxinate), 벤조카인(benzocaine), 베톡시카인(betoxycaine), 비페나민(biphenamine), 부피바카인(bupivacaine), 부타카인(butacaine), 부탐벤(butamben), 부타닐리카인(butanilicaine), 부테타민(butethamine), 부톡시카인(butoxycaine), 카르티카인(carticaine), 클로로프로카인(chloroprocaine), 코카에틸렌(cocaethylene), 코카인(cocaine), 사이클로메티카인(cyclomethycaine), 다이부카인(dibucaine), 다이메티소퀸(dimethysoquin), 다이메토카인(dimethocaine), 디페로돈(diperodon), 다이사이클로닌(dycyclonine, 에크고니딘(ecgonidine), 에크고닌(ecgonine), 에틸 클로라이드(ethyl chloride), 에티도카인(etidocaine), 베타-유카인(beta-eucaine), 유프로신(euprocin), 페날코민(fenalcomine), 포르모카인(formocaine), 헥실카인(hexylcaine), 하이드록시테트라카인(hydroxytetracaine), 아이소부틸 p-아미노벤조에이트 (isobutyl paminobenzoate), 류시노카인 메실레이트(leucinocaine mesylate), 레복사드롤(levoxadrol), 리도카인(lidocaine), 메피바카인(mepivacaine), 메프릴카인(meprylcaine), 메타부톡시카인(metabutoxycaine), 메틸 클로라이드(methyl chloride), 미르테카인(myrtecaine), 나에파인(naepaine), 옥타카인(octacaine), 오르소카인(orthocaine), 옥세타자인(oxethazaine), 파레톡시카인(parethoxycaine), 페나카인(phenacaine), 페놀(phenol), 피페로카인(piperocaine), 피리도카인(piridocaine), 폴리도카놀(polidocanol), 프라목신(pramoxine), 프릴로카인(prilocaine), 프로카인(procaine), 프로파노카인(propanocaine), 프로파라카인(proparacaine), 프로피오카인(propipocaine), 프로록시카인(propoxycaine), 슈도코카인(psuedococaine), 피로카인(pyrrocaine), 로피바카인(ropivacaine), 살리실 알코올(salicyl alcohol), 테트라카인(tetracaine), 톨릴카인(tolycaine), 트리메카인(trimecaine), 졸라민(zolamine), 및 이들의 염으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 일 실시 형태에서, 상기 마취제는 리도카인, 예들 들어, 리도카인 염산염의 형태일 수 있다.

본 명세서에 따른 히알루론산 필러에 있어서, 상기 필러에 포함되는 마취제의 농도는 필러 전체 중량 대비 약 0.1 중량% 내지 약 1.0 중량%, 예를 들어, 조성물의 약 0.2중량% 내지 약 0.5 중량%일 수 있다.

본 명세서에 기재된 필러 중의 마취제의 농도는 치료학적으로 효과적일 수 있으며, 이는 환자에게 유해하지 않으면서 시술의 편의성과 환자의 순응도 측면에서 이점을 제공하기에 적합한 농도를 의미한다.

또한 본 발명에 따른 필러는 완충액을 더 포함할 수 있고, 완충액은 히알루론산 하이드로겔의 제조에 사용되는 것이면 제한없이 사용할 수 있다. 이러한 바람직한 완충액의 예로는 구연산, 인산일수소나트륨, 인산이수소나트륨, 아세트산, 디에틸 바비투르산(diethyl barbituric acid), 아세트산 나트륨(sodium acetate), TAPS(트리스(하이드록시메틸)메틸아미노)프로판술폰산), Bicine(2-비스(2-하이드록시에틸)아미노)아세트산), 트리스(트리스(하이드록시메틸)암모늄메탄), Tricine(N-(2-하이드록시-1,1-비스(하이드록시메틸)에틸)글라이신), HEPES (4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산), TES (2-[[1,3-디하이드록시-2-(하이드록시메틸)프로판-2-일]아미노]메탄술폰산) 및 PIPES (피페라진-N,N'-비스(2-에탄술폰산)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함하는 완충액을 들 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 완충액 중에 포함되는 상기 성분들의 함량은 적절히 조절될 수 있으나, 바람직하게는 완충액에 대해 0.3 내지 2.0g/L의 농도로 포함될 수 있다.

또한 본 발명에 따른 필러는 등장화제를 더 포함할 수 있고, 이러한 등장화제는 히알루론산 하이드로겔의 제조에 사용되는 것이면 제한없이 사용할 수 있으며, 완충액에 포함될 수 있다. 바람직한 등장화제로서, 염화나트륨을 사용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 등장화제의 함량은 필요에 따라 적절히 조절될 수 있고, 예를 들어 완충액에 대해 7.0 내지 9.0g/L 포함될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 따른 일 실시예에서는 주사용수에 염화나트륨, 인산일수소나트륨 및 인산이수소나트륨을 포함하는 완충액을 사용하였다.

추가적인 양태로서, 본 발명에 따른 조성물은 상기 성분 외에도, 필러의 제조에 포함될 수 있는 허용가능한 성분들을 더 포함할 수 있다.

나아가, 본 발명에 높은 점탄성 및 응집성을 갖는 히알루론산 필러 중의 잔류 가교제는 거의 포함되지 않는 것을 특징으로 하며 잔류 가교제가 바람직하게는 검출 한계인 0.5 ppm 이하이다.

이러한 본 발명에 따른 높은 점탄성 및 응집성을 갖는 히알루론산 필러는 본 특징적인 탄성적 성질, 응집력에 의해, 미용 또는 치료적 목적으로 매우 유용하게 사용될 수 있다. 구체적인 예시로서, 이러한 히알루론산 필러는, 조직수복용 생체재료로서, 생물학적 조직의 필링(filling), 주름의 필링(filling wrinkle)을 통한 주름개선, 안면의 리모델링(remodeling of the face) 또는 입술, 코, 엉덩이, 볼 또는 가슴과 같은 연조직의 용적(volume)의 수복 또는 증가 등에 사용될 수 있다. 상기 히알루론산 필러는 이러한 용도에 알맞은 투여형태로 투여될 수 있고, 바람직하게는 주사제일 수 있다.

또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 다음의 단계를 포함하는 상기와 같은 높은 점탄성 및 응집성을 갖는 히알루론산 필러의 제조방법에 관한 것이다:

(a) 히알루론산 또는 이의 염, 가교제 및 알칼리 수용액에 넣고 교반 후 반응시켜 가교결합된 히알루론산 하이드로겔을 제조하는 단계;

(b) 상기 단계 (a)에서 제조된 히알루론산 하이드로겔을 분쇄하는 단계;

(c) 완충액을 제조하는 단계;

(d) 상기 단계 (b)에서 제조된 분쇄된 히알루론산 하이드로겔을 상기 단계 (c)에서 제조된 완충액을 사용하여 세척 및 팽윤시키는 단계;

(e) 단계 (d)에서 세척 및 팽윤된 히알루론산 하이드로겔을 분쇄하는 단계; 및

(f) 단계 (e)에서 제조된 하이드로겔을 시린지에 충전후 멸균하는 단계.

상기 단계 (a)는 히알루론산 또는 이의 염을 가교제를 사용하여 알칼리 수용액 상에서 가교 반응시켜 가교결합된 히알루론산 하이드로겔을 제조하는 단계로서, 상기 히알루론산 또는 이의 염, 가교제, 가교결합된 히알루론산 하이드로겔에 관한 사항은 상기 히알루론산 필러에서 언급된 것을 동일하게 적용할 수 있다.

상기 알칼리 수용액은 히알루론산 하이드로겔의 제조에 적합한 알칼리 수용액으로 알려진 것은 제한없이 사용가능한데, 예를 들어, NaOH, KOH, NaHCO₃, LiOH 또는 이들의 조합일 수 있고, 바람직하게는 NaOH일 수 있다. 이러한 알칼리 수용액의 농도는 0.1 내지 0.5N일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 가장 바람직하게는 0.25N일 수 있다. 본 발명에 따른 필러의 히알루론산 하이드로겔은 0.25N NaOH 염기성 하에서 가교시킨 후 가장 좋은 물성을 가짐을 확인하였다.

또한 히알루론산 또는 이의 염의 농도는 히알루론산 또는 이의 염 및 알칼리수용액 혼합물의 전체 중량 대비 히알루론산 또는 이의 염의 중량 비율로서 10 내지 25 중량%이고, 가교제의 농도는 상기 투입된 히알루론산 또는 이의 염의 단위 유닛 1몰 대비 1 내지 10 mol%이다. 가교제 농도가 상기 범위를 초과하는 고농도로 사용되는 경우, 탄성이 지나치게 높은 필러가 수득되고, 농도가 상기 범위 미만인 경우 탄성이 지나치게 낮아 적절한 점탄성을 나타낼 수 없다. 구체적으로, 상기 단계 (a)는 히알루론산 또는 이의 염과 가교제 및 알칼리 수용액을 혼합, 교반하여 균질하게 혼합함으로써 수행될 수 있다. 가교 반응시의 온도는 상온 이상, 바람직하게는 25 내지 40℃의 온도 범위에서 15 내지 22 시간 수행될 수 있다.

상기 단계 (b)의 분쇄 공정은 공지된 다양한 히알루론산 하이드로겔의 분쇄 공정을 이용할 수 있다. 일 실시예에서. 반응 후에 제조된 가교젤은 케익과 같은 형태로 얻어지고 이것을 작두 등과 같은 절단기를 이용하여 반달모양으로 분할, 예를 들어 6분할 할 수 있다. 이후에 일정한 칼날의 간격을 갖는 조분쇄기를 사용하여 상기와 같이 분할된 젤을 통과(바람직하게는 2회 이상)시켜 분쇄 공정을 수행할 수 있다.

상기 단계 (c)는 단계 (b)에서 분쇄된 가교된 히알루론산 하이드로겔을 세척 및 팽윤시키는데 사용되는 완충액을 제조하는 단계로서, 상기 완충액은 공지의 완충액 제조방법에 따라 제조할 수 있다. 또한 상기 완충액에는 추가적으로 마취제를 더 포함시킬 수 있다. 본 발명의 구체적인 일 실시양태에서, 상기 완충액은 인산일수소나트륨수화물, 인산이수소나트륨수화물, 염화나트륨 및 리도카인 염산염을 주사용수가 담긴 버퍼 탱크에서 용해시켜 완충액을 조제하였다.

상기 완충액은 히알루론산 하이드로겔의 제조에 사용되는 것이면 제한없이 사용할 수 있다. 이러한 바람직한 완충액의 예로는 구연산, 인산일수소나트륨, 인산이수소나트륨, 아세트산, 디에틸 바비투르산(diethyl barbituric acid), 아세트산 나트륨(sodium acetate), TAPS(트리스(하이드록시메틸)메틸아미노)프로판술폰산), Bicine(2-비스(2-하이드록시에틸)아미노)아세트산), 트리스(트리스(하이드록시메틸)암모늄메탄), Tricine(N-(2-하이드록시-1,1-비스(하이드록시메틸)에틸)글라이신), HEPES (4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산), TES (2-[[1,3-디하이드록시-2-(하이드록시메틸)프로판-2-일]아미노]메탄술폰산) 및 PIPES (피페라진-N,N'-비스(2-에탄술폰산)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함하는 완충액을 들 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 단계 (d)는 단계 (b)에서 분쇄된 가교된 히알루론산 하이드로겔을 상기 단계 (c)에서 제조된 완충액으로 세척 및 팽윤시키는 단계로서, 이러한 단계 (d)는 1회 또는 2회 이상 반복될 수도 있다. 세척 및 팽윤이 완료되면 세척액을 제거할 수 있다.

상기 단계 (e)는 세척 및 팽윤된 하이드로겔을 분쇄하는 단계이며, 이러한 분쇄는 다양한 분쇄방법에 의해 수행될 수 있으나, 바람직하게는 압출 분쇄이다.

또한 단계 (e) 이후에 제조된 하이드로겔을 시린지에 충전하고 멸균하기 위해서는 공지의 충전 및 멸균 방법을 사용할 수 있다. 예를 들어 멸균의 경우 오토클레이브 등을 사용할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니며 필러의 멸균에 사용되는 방법을 적절히 선택하여 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 필러는 다음과 같은 효과를 가진다. 첫째, 모노 페이직 히알루론산 필러와 바이 페이직 히알루론산 필러의 장점을 모두 갖는 필러 즉, 높은 점탄성 및 응집성을 나타내어, 주입된 부위에서 이탈할 가능성이 낮으면서도 형태를 오래 유지할 수 있어 볼, 입술, 가슴, 엉덩이 등과 같은 연조직의 수복 또는 부피를 확대시키고, 피부의 잔주름 및 깊은 주름의 감소를 통한 주름개선이나 윤곽교정을 위한 필러로서 유용할 수 있다.

도 1은 실시예 1, 2, 및 비교예 1 내지 6 에 따른 히알루론산 필러의 저장탄성계수 및 압축시 저항력을 측정하여 그 결과를 나타낸 그래프이다.

이하, 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 본 발명에 따른 히알루론산 필러의 제조

본 발명에 따른 히알루론산 필러의 제조를 위하여, 다음과 같은 공정을 실시하였다.

2.5MDa 내지 3.5MDa의 분자량을 갖는 히알루론산나트륨, 수산화나트륨, BDDE(1,4-Butandiol Diglycidyl Ether)를 칭량하였다. 반응 시 히알루론산나트륨의 농도는 15wt%이며, BDDE의 mol%는 투입 된 히알루론산나트륨 단위 유닛(즉, N-아세틸-D-글루코사민 및 D-글루쿠론산) 1몰 대비 4mol%이었다. 별도로, 0.25N 농도의 수산화나트륨(NaOH) 수용액을 조제하여 여과하였다. 상기 칭량한 히알루론산나트륨, 0.25N 수산화나트륨 수용액 및 BDDE(1,4-Butandiol Diglycidyl Ether)을 믹서(Mixer)통에 넣고 균질하게 혼합하였고, 이 믹서통을 항온수조에 넣고 30℃의 온도에서 밤새 가교반응을 완료시킨다. 이후, 반응이 끝난 가교된 히알루론산 하이드로겔을 조분쇄하였다. 한편, 염과 마취제를 인산일수소나트륨수화물(십이수화물) 1.26g/L, 인산이수소나트륨수화물(일수화물) 0.46g/L, 염화나트륨 7g/L, 리도카인염산염 3g/L 의 농도로 주사용수가 담긴 버퍼 탱크(Buffer Tank)에서 용해 시켜 완충용액을 조제하였다.

상기 완충용액 중 일부를 1차 완충용액으로 하여 0.22㎛ 필터를 통해 워싱탱크(Washing Tank)로 이송하였고, 앞서 제조된 조분쇄된 히알루론산 겔을 1차 완충용액이 담긴 워싱 탱크에 이송 후 교반하여 히알루론산 겔을 1차 세척 및 팽윤시킨 후 팽윤이 완료되면 세척액을 제거하였다. 이후, 2차 완충용액을 0.22㎛ 필터를 통해 워싱탱크(Washing Tank)로 이송한 후 교반하여 히알루론산 겔을 2차 세척 및 팽윤시킨다, 세척 및 팽윤이 완료되면 세척액을 제거하였다. 이후, 3차 완충용액을 적량 0.22㎛ 필터를 통해 워싱탱크(Washing Tank)로 이송한 후 교반하여 히알루론산 겔을 3차 세척 및 팽윤시켰으며, 세척 및 팽윤이 완료되는대로 세척액을 제거하였다.

상기 3차 세척 및 팽윤 완료 후 세척액의 pH가 중성범위에 있는지 확인하였고, 세척 및 팽윤이 완료된 히알루론산 겔을 분쇄한 뒤 압출 탱크(Extruder Tank)로 옮겨 무게를 재고 겔 무게가 목표무게에 도달하도록 완충용액을 넣어 1차 함량 보정을 하였다. 1차 함량 보정이 완료되면 압출 탱크(Extruder Tank)에서 히알루론산겔을 압출하며 분쇄하였다. 이후, 분쇄된 히알루론산 겔을 멸균탱크로 이송하고 균질화를 시킨 후 함량을 측정하고 완충용액을 투입하여 2차 함량보정을 실시하였다. 함량 보정이 완료된 히알루론산 겔을 121℃이상의 온도에서, 1분 이상 열처리하였고, 이를 충전 전 히알루론산 겔을 교반하며 감압하여 탈포를 실시하였다. 이후 정해진 충전량만큼 히알루론산 겔을 각 시린지에 진공/충진과 동시에 고무전으로 밀전(Stoppering)하였다. 충전된 상태의 시린지를 최종멸균기에서 121℃이상의 온도에서, 8분 이상 증기멸균 하였다.

실시예 2: 본 발명에 따른 히알루론산 필러의 제조

2.5MDa 내지 3.5MDa의 분자량을 갖는 히알루론산나트륨, 수산화나트륨, BDDE(1,4-Butandiol Diglycidyl Ether)를 칭량하였다. 반응 시 히알루론산나트륨의 농도는 16wt%이며, BDDE의 mol%는 투입 된 히알루론산나트륨 단위 유닛 1몰 대비 4mol%이었다. 별도로, 0.25N 농도의 수산화나트륨(NaOH) 수용액을 조제하여 여과하였다. 상기 칭량한 히알루론산나트륨, 0.25N 수산화나트륨 수용액 및 BDDE(1,4-Butandiol Diglycidyl Ether)을 믹서(Mixer)통에 넣고 균질하게 혼합하였고, 이 믹서통을 항온수조에 넣고 30℃의 온도로 밤새 가교반응을 완료시킨다. 이후, 반응이 끝난 가교된 히알루론산 하이드로 겔을 조분쇄하였다. 한편, 염과 마취제를 인산일수소나트륨수화물(십이수화물) 1.26g/L, 인산이수소나트륨수화물(일수화물) 0.46g/L, 염화나트륨 7g/L, 리도카인염산염 3g/L 의 농도로 주사용수가 담긴 버퍼 탱크(Buffer Tank)에서 용해 시켜 완충용액을 조제하였다.

상기 완충용액 중 일부를 1차 완충용액으로 하여 0.22㎛ 필터를 통해 워싱탱크(Washing Tank)로 이송하였고, 앞서 제조된 조분쇄된 히알루론산 겔을 1차 완충용액이 담긴 워싱 탱크에 이송 후 교반하여 히알루론산 겔을 1차 세척 및 팽윤시킨 후 팽윤이 완료되면 세척액을 제거하였다. 이후, 2차 완충용액을 0.22㎛ 필터를 통해 워싱탱크(Washing Tank)로 이송한 후 교반하여 히알루론산 겔을 2차 세척 및 팽윤시킨다, 세척 및 팽윤이 완료되면 세척액을 제거하였다. 이후, 3차 완충용액을 적량 0.22㎛ 필터를 통해 워싱탱크(Washing Tank)로 이송한 후 교반하여 히알루론산겔을 3차 세척 및 팽윤시켰으며, 세척 및 팽윤이 완료되는대로 세척액을 제거하였다.

상기 3차 세척 및 팽윤 완료 후 세척액의 pH가 중성범위에 있는지 확인하였고, 세척 및 팽윤이 완료된 히알루론산겔을 분쇄한 뒤 압출 탱크(Extruder Tank)로 옮겨 무게를 재고 겔 무게가 목표무게에 도달하도록 완충용액을 넣어 1차 함량 보정을 하였다. 1차 함량 보정이 완료되면 압출 탱크(Extruder Tank)에서 히알루론산겔을 압출하며 분쇄하였다. 이후, 분쇄된 히알루론산겔을 멸균탱크로 이송하고 균질화를 시킨 후 함량을 측정하고 완충용액을 투입하여 2차 함량보정을 실시하였다. 함량 보정이 완료된 히알루론산겔을 121℃이상의 온도에서, 1분 이상 열처리하였고, 이를 충전 전 히알루론산겔을 교반하며 감압하여 탈포를 실시하였다. 이후 정해진 충전량만큼 히알루론산겔을 각 시린지에 진공/충진과 동시에 고무전으로 밀전(Stoppering)하였다. 충전된 상태의 시린지를 최종멸균기에서 121℃이상의 온도에서, 10분 이상 증기멸균 하였다.

실험예 1: 본 발명에 의해 제조한 히알루론산 필러의 점탄성 특성 조사

제조된 실시예 1 및 2의 유동학적 특성 규명을 위하여 레오미터(rheometer)를 사용하여 분석하였다. 본 발명의 필러와의 비교를 위해, 시판 중인 필러 제제의 점탄성 특성 또한 분석하여 비교하였다. 비교예로서 상기 시판 중인 필러 제제 및 분석 조건은 다음과 같다.

<비교예>

- 비교예 1: 벨로테로 인텐스 리도카인 (Belotero Intense Lidocaine)

- 비교예 2: 벨로테로 볼륨 리도카인 (Belotero Volume Lidocaine)

- 비교예 3: 스타일에이지 엘 리도카인 (Stylage L Lidocaine)

- 비교예 4: 스타일에이지 엑스엘 리도카인 (Stylage XL Lidocaine)

- 비교예 5: 쥬비덤 볼리프트 리도카인 (Juvederm Volift with Lidocaine)

- 비교예 6: 쥬비덤 볼류마 리도카인 (Juvederm Voluma with Lidocaine).

<분석조건>

진동 회전형 레오미터(Oscillatory and Rotational Rheometer)의 분석조건

저장탄성계수(G'), 복소점도(η*) 시험의 경우

(1) 시험장비 : Rheometer (Anton Paar Ltd., MCR301)

(2) Frequency: 1 Hz

(3) Temperature: 25 ℃

(4) Strain: 4 %

(5) Measuring geometry: 25 mm plate

(9) Measuring gap: 1.0 mm

압축시 저항력(Compression force)의 경우

(1) 시험장비 : Rheometer (Anton Paar Ltd., MCR301)

(2) Gap: Initial position: 2.5 mm, Final position: 0.9 mm

(3) Speed: 0.8 mm/min

(4) Temperature: 25 ℃

(5) Measuring geometry: 25 mm plate

(9) Normal Force Measuring gap positon: 1.5 mm

위의 분석 조건으로 주파수별 저장탄성계수(G'), 복소점도(η*), 압축시저항력(Compression force)의 결과값을 표 1에 나타내었다.

실시예/ 비교예	본 발명		Belotero		Stylage		Juvederm
실시예/ 비교예	실시예 1	실시예 2	비교예 1 Belotero Intense Lidocaine	비교예 2 Belotero Volume Lidocaine	비교예 3 Stylage L Lidocaine	비교예 4 Stylage XL Lidocaine	비교예 5 Juvederm Volift with Lidocaine	비교예 6 Juvederm Voluma with Lidocaine
농도 (mg/mL)	20	20	25.5	26	24	26	17.5	20
저장탄성계수(Pa, 1 Hz)	448	707	149	280	225	264	314	310
복소 점도(x10⁴cP, 1 Hz)	7.18	11.3	2.54	4.57	3.65	4.28	5.08	4.97
압축시 저항력(gf)	36	44	71	70	55	65	20	24
농도보정 된 저장탄성계수 (Pa, 1 Hz) (저장탄성계수 * (20/시료농도))	448	707	117	215	188	203	359	310
농도보정 된 복소 점도 (x10⁴ cP, 1 Hz) (복소점도 * (20/시료농도))	7.18	11.30	1.99	3.52	3.04	3.29	5.81	4.97
농도보정 된 압축시 저항력 (gf) (압축시 저항력 * (20/시료농도))	36	44	56	54	46	50	23	24

상기 표 1에서 확인되는 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예 1 및 2는 비교예 1 내지 6에 비해 우수한 점탄성을 나타내는 것으로 판단된다. 나아가, 응집성의 경우, 모노페이직 필러와 바이페이직 필러의 특성을 동시에 나타냄에도 불구하고, 모노페이직 필러인 비교예 5 및 6에 비해서 탁월한 압축시 저항력을 나타낸다. 나아가, 점탄성과 응집성을 모두 고려하면, 본 발명에 따른 실시예 1 및 2가 비교예 1 내지 6에 비해 탁월한 물성을 나타냄을 알 수 있다.

실험예 2: 본 발명에 따른 히알루론산 하이드로겔의 입도 분석

실시예 1 및 2와 비교예 1 내지 6의 히알루론산 하이드로겔의 입자크기와 분포도를 확인하기 위해 다음과 같은 시험을 수행하였다. 이러한 시험 결과를 표 2에 나타내었다.

<분석 조건>

레이저 회절 입도분석기 (Laser diffraction particle size analyzer)의 분석조건

(1) 시험장비 : Laser diffraction particle size analyzer (Malvern Ltd., Mastersizer 3000)

(2) Dispersant: 0.9% NaCl solution

(3) Stirrer rpm: 1,000

(4) Laser obscuration: 5~25 %

실시예/ 비교예	본 발명		Belotero		Stylage		Juvederm
실시예/ 비교예	실시예 1	실시예 2	비교예 1 Belotero Intense Lidocaine	비교예 2 Belotero Volume Lidocaine	비교예 3 Stylage L Lidocaine	비교예 4 Stylage XL Lidocaine	비교예 5 Juvederm Volift with Lidocaine	비교예 6 Juvederm Voluma with Lidocaine
입자경, Dv(50) (μm)	362	343	571	469	375	356	407	408

실험예 3: 본 발명에 따른 히알루론산 하이드로겔의 변형률(Degree of Modification) 분석

실시예 1 및 2와 비교예 1 내지 6의 히알루론산 하이드로겔의 변형률을 확인하기 위해 다음과 같은 조건으로 시험을 수행하였다. 이러한 시험 결과를 표 3에 나타내었다.

<분석 조건>

핵자기공명장치 (Nuclear Magnetic Resonance)의 분석조건

(1) 시험장비 : FT-NMR System (Jeol Ltd., ECA500/ECZ400S),

(2) Pulse: 30°

(3) Scans: 512

(4) Relaxation time (delay): 5 s

(5) Temperature: 25 ℃

실시예/ 비교예	본 발명		Belotero		Stylage		Juvederm
실시예/ 비교예	실시예 1	실시예 2	비교예 1 Belotero Intense Lidocaine	비교예 2 Belotero Volume Lidocaine	비교예 3 Stylage L Lidocaine	비교예 4 Stylage XL Lidocaine	비교예 5 Juvederm Volift with Lidocaine	비교예 6 Juvederm Voluma with Lidocaine
변형률 (%)	3.3	3.5	8.5	12.8	7.8	7.8	6.3	6

상기 표 3에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예 1 및 2의 히알루론산 필러는 앞서 확인한 바와 같이 탁월한 물성을 나타냄에도 불구하고 낮은 변형률을 나타냄을 알 수 있으며, 이는 즉 필러의 제조시에 적은 양의 가교제를 사용하여도 우수한 물성을 나타내는 필러를 제공할 수 있어 매우 생체적합하다는 것을 의미한다.

Claims

가교된 히알루론산을 포함하며, 레오미터(Rheometer)로 측정시 1Hz의 각속도에서 60,000 내지 130,000 cP의 복소점도를 갖고, 400 내지 800 Pa의 저장탄성계수 G'를 나타내고, 30 내지 60 gf 이상의 응집력을 가지고, 1 내지 7의 변형률 및 0.1 내지 0.2의 가교율을 가지며, 상기 가교된 히알루론산은 모노 페이직 및 바이 페이직 필러의 특성을 모두 가지고, 상기 가교된 히알루론산은 분자량이 2,500,000 내지 3,500,000 Da인 히알루론산을, 부탄디올디글리시딜에테르(1,4-butandiol diglycidyl ether: BDDE), 에틸렌글리콜디글리시딜에테르(ethylene glycol diglycidyl ether: EGDGE), 헥산디올디글리시딜에테르(1,6-hexanediol diglycidyl ether), 프로필렌글리콜디글리시딜에테르(propylene glycol diglycidyl ether), 폴리프로필렌글리콜디글리시딜에테르(polypropylene glycol diglycidyl ether), 폴리테트라메틸렌글리콜디글리시딜에테르(polytetramethylene glycol diglycidyl ether), 네오펜틸글리콜디글리시딜에테르 (neopentyl glycol diglycidyl ether), 및 비스에폭시프로폭시에틸렌(1,2-(bis(2,3-epoxypropoxy)ethylene)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 가교제로 가교된 것인, 히알루론산 하이드로겔 필러.
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제1항에 있어서, 상기 가교제는 부탄디올디글리시딜에테르(1,4-butandiol diglycidyl ether: BDDE)인, 히알루론산 하이드로겔 필러.
제1항에 있어서, 마취제를 더 포함하는 것인, 히알루론산 하이드로겔 필러.
제7항에 있어서, 상기 마취제는 리도카인 또는 그의 염인 것인, 히알루론산 하이드로겔 필러.
제1항에 있어서, 상기 필러는 피부주입용인, 히알루론산 하이드로겔 필러.
제1항에 있어서, 상기 필러는 조직수복용인, 히알루론산 하이드로겔 필러.
제1항에 있어서, 상기 필러는 주름 개선, 연조직 수복 또는 부피 확대, 또는 윤곽 교정용인, 히알루론산 하이드로겔 필러.
가교된 히알루론산을 포함하며, 레오미터(Rheometer)로 측정시 1Hz의 각속도에서 60,000 내지 130,000 cP의 복소점도를 갖고, 400 내지 800 Pa의 저장탄성계수 G'를 나타내고, 30 내지 60 gf의 응집력을 갖고, 히알루론산 또는 이의 염 중의 N-아세틸-D-글루코사민 및 D-글루쿠론산 1몰 대비 1 내지 10mol% 농도의 가교제를 포함하고, 1 내지 7의 변형률 및 0.1 내지 0.2의 가교율을 가지며, 상기 가교된 히알루론산은 분자량이 2,500,000 내지 3,500,000 Da인 히알루론산을, 부탄디올디글리시딜에테르(1,4-butandiol diglycidyl ether: BDDE), 에틸렌글리콜디글리시딜에테르(ethylene glycol diglycidyl ether: EGDGE), 헥산디올디글리시딜에테르(1,6-hexanediol diglycidyl ether), 프로필렌글리콜디글리시딜에테르(propylene glycol diglycidyl ether), 폴리프로필렌글리콜디글리시딜에테르(polypropylene glycol diglycidyl ether), 폴리테트라메틸렌글리콜디글리시딜에테르(polytetramethylene glycol diglycidyl ether), 네오펜틸글리콜디글리시딜에테르 (neopentyl glycol diglycidyl ether), 및 비스에폭시프로폭시에틸렌(1,2-(bis(2,3-epoxypropoxy)ethylene)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 가교제로 가교된 것인, 모노 페이직 및 바이 페이직 필러의 특성을 모두 갖는 것인, 히알루론산 하이드로겔 필러.
제12항에 있어서, 히알루론산 또는 이의 염 중의 N-아세틸-D-글루코사민 및 D-글루쿠론산 1몰 대비 1 내지 5mol% 농도의 가교제를 포함하는 것인, 히알루론산 하이드로겔 필러.
하기 단계를 포함하는, 제1항, 및 제6항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 히알루론산 필러의 제조방법:
(a) 히알루론산 또는 이의 염 및 가교제를 알칼리 수용액에 넣고 교반하여 가교결합된 히알루론산 하이드로겔을 제조하는 단계;
(b) 상기 단계 (a)에서 제조된 히알루론산 하이드로겔을 분쇄하는 단계;
(c) 완충액을 제조하는 단계;
(d) 상기 단계 (b)에서 제조된 분쇄된 히알루론산 하이드로겔을 상기 단계 (c)에서 제조된 완충액을 사용하여 세척 및 팽윤시키는 단계;
(e) 단계 (d)에서 세척 및 팽윤된 히알루론산 하이드로겔을 분쇄하는 단계; 및
(f) 단계 (e)에서 제조된 하이드로겔을 시린지에 충전후 멸균하는 단계,
이때, 상기 알칼리 수용액은 NaOH, KOH, NaHCO₃, LiOH 또는 이들의 조합의 수용액이고, 농도는 0.1N 내지 0.5N이고,
상기 가교제의 농도는 히알루론산 또는 이의 염 중의 N-아세틸-D-글루코사민 및 D-글루쿠론산 1몰 대비 1 내지 10mol%이고,
상기 히알루론산 또는 이의 염의 농도는 히알루론산 또는 이의 염 및 알칼리수용액 혼합물의 전체 중량 대비 히알루론산 또는 이의 염의 중량 비율로서 10 내지 25 중량%이다.
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제14항에 있어서, 상기 가교제는 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르인 것인, 제조방법.
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제14항에 있어서, 상기 단계 (a)는 25 내지 40℃의 온도 범위에서 15 내지 22 시간 수행되는 것인, 제조방법.
제14항에 있어서, 상기 단계 (c)의 완충액은 구연산, 인산일수소나트륨, 인산이수소나트륨, 아세트산, 디에틸 바비투르산(diethyl barbituric acid), 아세트산 나트륨(sodium acetate), TAPS(트리스(하이드록시메틸)메틸아미노)프로판술폰산), Bicine(2-비스(2-하이드록시에틸)아미노)아세트산), 트리스(트리스(하이드록시메틸)암모늄메탄), Tricine(N-(2-하이드록시-1,1-비스(하이드록시메틸)에틸)글라이신), HEPES (4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산), TES (2-[[1,3-디하이드록시-2-(하이드록시메틸)프로판-2-일]아미노]메탄술폰산) 및 PIPES (피페라진-N,N'-비스(2-에탄술폰산)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함하는 것인 제조방법.
제14항에 있어서, 상기 완충액은 마취제 및 등장화제를 더 포함하는 것인, 제조방법.
제1항 및 제6항 내지 제13항 중 어느 한 항의 히알루론산 하이드로겔 필러가 충진된 프리필드시린지.
제1항 및 제6항 내지 제13항 중 어느 한 항의 히알루론산 하이드로겔 필러를 포함하는 조직수복용 생체재료.