KR102372943B1

KR102372943B1 - 동애등에 용각 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품

Info

Publication number: KR102372943B1
Application number: KR1020200070610A
Authority: KR
Inventors: 손호용; 표수진
Original assignee: 안동대학교 산학협력단
Priority date: 2020-06-10
Filing date: 2020-06-10
Publication date: 2022-03-10
Also published as: KR20220000425A

Abstract

본 발명은 동애등에(Hermetia illucens) 용각 추출물을 유효성분으로 함유하는 항혈전 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는, 아메리카 동애등에의 용각(번데기 탈피 후의 껍데기) 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈전증의 예방 또는 치료/개선용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품에 관한 것이다. 본 발명의 혈전증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품의 유효성분으로서의 동애등에 용각 추출물은, 본 명세서의 실시예를 통해 증명된 바와 같이, 혈전 생성 관련 효소 저해 및 혈액 응고 인자의 저해에 의한 강력한 항혈전 활성을 나타냄과 동시에, 인간 혈소판 응집 저해에 따른 항혈전 효과를 나타내며, 열 안정성이 우수하고, pH 2의 산성 조건 및 혈장 내에서도 혈전 생성 관련 효소 및 혈액 응고인자 저해 효과의 손실이 나타나지 않으므로, 혈행 개선을 통해 허혈성 뇌졸중 및 출혈성 뇌졸중과 같은 혈전증의 예방 및 치료용으로 사용할 수 있을 것으로 기대되며, 상기 유효성분은 추출액, 분말, 환, 정 등의 다양한 형태로 가공되어 상시 복용이 가능한 형태로 조제할 수 있는 뛰어난 효과가 있으므로 제약 산업 및 식품 산업상 매우 유용한 발명인 것이다.

Description

동애등에 용각 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품{PHARMACEUTICAL COMPOSITION COMPRISING THE EXTRACT OF PUPARIUM OF BLACK SOLDIER FLY AS AN EFFECTIVE COMPONENT FOR PREVENTION OR TREATMENT OF THROMBOSIS AND HEALTH FUNCTIONAL FOOD COMPRISING THE SAME}

본 발명은 동애등에(Hermetia illucens) 용각 추출물을 유효성분으로 함유하는 항혈전 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는, 아메리카 동애등에의 용각(번데기 탈피 후의 껍데기) 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈전증의 예방 또는 치료/개선용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품에 관한 것이다.

인체 구성 성분으로서의 혈액은 산소, 영양분, 노폐물의 운반 기능과 완충 작용, 체온 유지, 삼투압 조절 및 이온 평형 유지, 수분 일정 유지, 액성 조절 작용, 혈압의 유지 및 조절, 생체 방어 등 다양한 중요 기능들을 가지고 있다. 정상적인 혈액 순환은 체내에서의 혈액 응고 반응계와 혈전 용해 반응계가 상호 보완적으로 조절되면서 혈액 순환을 용이하게 하며, 이들 중 혈액 응고 반응계의 기작은 혈관벽에 혈소판이 점착, 응집하여 혈소판 혈전을 형성한 후, 혈액 응고계가 활성화되어 혈소판 응집괴를 중심으로 피브린 혈전이 형성되는 것으로 보고되어 있다.

피브린 혈전의 생성은 수많은 혈액 응고 인자들의 여러 단계 반응을 거쳐 피브린 응고에 관여하는 트롬빈이 활성화되어, 최종적으로 피브리노겐으로부터 피브린 단량체를 생성하게 하며, 피브린 단량체들은 칼슘에 의해 중합되어, 혈소판과 내피세포에 결합하게 되며 XIII 인자에 의해 교차 결합된 피브린 폴리머를 형성하면서 영구적인 혈전을 생성하게 된다. 또한, 트롬빈은 혈소판, V 인자, VII 인자들을 활성화시켜 혈액 응고 반응을 촉진시키는 등 혈전 생성에 중추적 역할을 하게 된다. 따라서, 트롬빈의 활성 저해물질은 과다한 혈액 응고 이상으로 발생하는 다양한 혈전성 질환에 매우 유용한 예방 및 치료제로 사용될 수 있다. 한편, 내인성 혈전 생성 경로에는 XII 인자, XI 인자, XII 인자, IX 인자, X 인자의 순차적 활성화에 이은 프로트롬빈의 활성화가 최종적으로 트롬빈을 활성화하는 것으로 알려져 상기의 혈액 응고 인자의 특이적 저해 역시 중요한 혈전성 질환 치료제의 개발 타겟이 되고 있으며, 외인성 혈전 생성경로의 경우, factor II(prothrombin), V 인자, VII 인자, X 인자의 활성화에 따른 혈전생성이 알려져 있다. 현재까지, 혈전성 질환의 예방과 치료에 헤파린, 쿠마린, 아스피린, 유로키네이즈 등의 다양한 항응고제, 항혈소판제, 혈전용해제 등이 사용되고 있으나, 이들은 가격이 매우 높을 뿐 아니라, 출혈성 부작용과 위장 장해 및 과민 반응 등으로 그 사용이 한정되고 있는 실정이다.

한편, 동애등에(아메리카동애등애, Hermetia illucens, Black Soldeir Fly) 는 파리목 동애등에과의 곤충으로, 몸 길이는 13~20mm 정도이며, 전체적인 색상은 흑색이다. 얼굴은 흑갈색으로 길이가 매우 짧으며, 앞이마는 작고 뚜렷이 융기했으며, 황색을 띤다. 더듬이는 흑갈색이고, 어깨의 혹과 옆 가장자리 융기선은 황갈색이며 날개는 흑색을 띤다. 작은 방패판은 짧고 뒷 가장자리는 둔각이며, 날개는 크고 흐리며, 다리는 가늘고 긴 형태로 흑색을 띄고, 가운뎃다리 발목마디 기부(基部) 2마디와 앞다리 종아리마디의 기부(基部)는 황적색이다. 동애등에는 주로 한국, 일본, 중국 등에 분포하며, 거름더미, 화장실 등지에서 서식한다. 성충은 행동이 느려 쉽게 발견되며 파리에 비해 잘 날지 않는 특징이 있다.

동애등에는 전 세계적으로도 인간에게 해를 주지 않는 곤충으로 인정하고 있으며, 잡식성으로 환경 정화, 음식 쓰레기 제거용으로 사육되고 있다. 특히, 유충의 경우 강력한 소화 능력과 빠른 생육으로 최근 급속도로 사육장이 증가하고 있으며, 사육된 유충은 단백질 사료용으로 광범위하게 사용되거나 퇴비 생산용으로도 이용되고 있다. 통상 유충 1마리가 2~3g의 음식물 쓰레기를 분해하고 있어 환경 정화용으로 전 세계적으로 관심이 집중되고 있는 실정이다. 동애등에 유충은 통상 조단백 함량 42%, 지방 35%, 조섬유 7%, 기타 회분과 물을 함유하는 것으로 알려져 있어 단백질성 사료로 유망하며, 국내에서 건조 유충 분말은 kg당 3,500~5,000원에 판매되고 있으며(2019년 기준), 미국에서는 kg당 8~40달러에 판매되고 있다. 또한, 유충과 음식물 쓰레기를 혼합 후 2~3일 정도 지나면 분변토로 이용 가능하며, 국내에서는 분변토 비료로 20kg당 8,500원에 판매되고 있는 실정이다.

동애등에의 유충 기간은 사육 환경에 따라 달라지나 통상 15~20일 소요되며, 성장에 따라 흰색-미색-흑갈색으로 변화된다. 통상 1령에서 6령까지 령당 2~3일 정도가 소요되며, 이후 6령을 거쳐 번데기로 바뀌고 성충으로 우화한다. 동애등에 성충은 먹이 활동을 하지 않으며, 약 10일의 생존기간 중 비행을 하면서 교미를 하며 이후 암컷은 매우 작은 장타원형 알(평균 크기 장경 1mm, 단경 0.2mm)을 약 1,000개 정도 산란한다. 전체 세대기간은 약 35~41일로 알려져 있다.

동애등에와 관련된 연구로는 동애등에의 생태 및 생활상에 대한 연구[국내 서식하는 아메리카동애등에(Hermetia illucens)의 생태 특성, 김종길 외, 2008. 한국응용곤충학회지 47: 337-343; 아메리카동애등에(Hermetia illucens)의 생태 및 유충 유래 생리 활성 물질 특성, 박관호. 2014. 경북대학교 박사논문; 아메리카동애등에 발육에 미치는 스트레스 음파 효과, 박지영 외, 2013. 한국응용곤충학회지 52: 227-237], 동애등에의 사료학적 가치와 실제 적용에 대한 연구[국내산 동애등에 추출물 투여가 흰다리새우(Litopenaeus vannamei) 치하의 성장과 수질에 미치는 영향, 김태훈 외, 2019. 한국환경과학회지 28: 1-6; 동애등에(Hermetia illucens) 분말을 사료에 첨가 시 육계 생산성에 대한 변화, 최인학 외, 2018. 환경과학회지 27: 1299-1303; 동애등에의 급이가 육계의 생산성에 미치는 영향, 최영철 외, 2013, 한국잠사곤충학회지 51: 30-35; 물고기 사료로서 동애등에의 영양학적 가치, 박관호 외, 2013. 한국잠사곤충학회지 51: 95-98; 동애등에(Hermetia illucens) 분말을 오리 사료에 첨가 시 오리 깔짚 특성과 축산환경에 미치는 영향, 2019. 정태호. 한국환경과학회지 28: 713-717; Gariglio M 등, 2019. J Anim Sci Biotechnol. doi: 10.1186/s40104-019-0344-7] 및 동애등애 분변토에 대한 연구(동애등에 분변토의 혼합 상토가 한국잔디의 생육 및 근권 토양에 미치는 영향, 이상범 외, 2013. Weed & Turfgrass Science 2: 298-305)가 알려져 있다.

또한, 동애등에의 생리활성에 대한 연구도 일부 진행된 바, 항산화 활성(아메리카동애등에 추출물의 항산화 활성, 박관호 외, 2014. 한국잠사곤충학회지 52: 142-146), 항균활성(세균에 의해 면역이 유도된 동애등에의 항균활성, 박관호 외, 2016. 생명과학회지 26: 1409-1414; Li Z 등, 2017. Sci Rep. doi: 10.1038/s41598-017-10839-4), 육계에서의 면역증강 활성(Lee J. 등, 2018. J Vet Med Sci. 80: 736-740)이 보고되어 있다. 또한, 장내의 amylopullulanase가 확인되어 있으며(Lee YS 등, 2016. Int J Biol Macromol. 82: 514-521), 동애등애 장내세균의 분리 및 특성연구가 진행된 바 있다(이윤엽, 2013, 경희대학교 석사논문; 김은성 외, 2014. 한국응용곤충학회지, 53: 15-26) . 그러나, 현재까지 동애등에, 특히 동애등애 용각(번데기 탈피각)의 강력한 항혈전 활성에 대한 보고는 알려진 바 없다.

동애등에와 관련된 특허로는 대한민국 등록특허 제10-1815115호에 동애등에 산란장, 제10-1076686호에 동애등에 유충을 이용한 사료, 제10-1759518호에 동애등에 사료조성물, 제10-2026974 동애등에 유충을 이용한 유기성 폐기물 처리장치, 제10-1428157호에 동애등에 유충 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 항균용 조성물, 제10-1726951호에 동애등에 유충에서 분리한 항균펩타이드, 제10-1465096호에 동애등에 유충 추출물을 포함하는 식물 병원균 방제용 조성물, 제10-1796766호에 면역화된 동애등에 유충에서 분리된 펩타이드 분획물을 포함하는 항균성 조성물 및 제10-1504879호에 아메리카동애등에(Hermetia illucens)의 장내에서 유래된 바실러스 속의 새로운 유용성 균주 및 이의 용도 및 제10-1491770호에 유기용매 하에서 안정성이 높은 신규 만난분해 유전자 EM17과 이의 형질전환 균주로부터 생산된 재조합 만난분해 효소가 개시되어 있으며, 대한민국 공개특허 제10-2017-0068752호에 동애등에 산란 유도 장치, 제10-2017-0111997호에 동애등에 유충유래 단백질 또는 단백질 분획물을 포함하는 임질 또는 임질균으로 유발되는 질환의 치료 또는 예방용 단백질 조성물, 제10-2018-0081554호에 아메리카동애등에 추출물을 함유하는 스킨케어 제품이 공개되어 있다. 그러나, 현재까지 동애등에 용각의 활성 분획물에 의한 강력한 항혈전 활성에 대한 보고는 전혀 없는 실정이다.

KR

10-1428157

B

박관호 외, 2014. 한국잠사곤충학회지 52: 142-146

본 발명은 상기와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서, 본 발명에서 해결하고자 하는 과제는 동애등에 용각 추출물을 유효성분으로 함유하는 항혈전 조성물을 제공하고자 하는 것이다.

상기와 같은 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 동애등에(Hermetia illucens) 용각 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈전증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 동애등에(Hermetia illucens) 용각 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 포함하는 혈전증의 예방 또는 개선용 건강 기능 식품을 제공한다.

또한, 본 발명은 동애등에(Hermetia illucens) 용각 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈액 응고 저해제를 제공한다.

또한, 본 발명은 동애등에(Hermetia illucens) 용각 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈소판 응집 저해제를 제공한다.

본 발명의 혈전증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품의 유효성분으로서의 동애등에 용각 추출물은, 본 명세서의 실시예를 통해 증명된 바와 같이, 혈전 생성 관련 효소 저해 및 혈액 응고 인자의 저해에 의한 강력한 항혈전 활성을 나타냄과 동시에, 인간 혈소판 응집 저해에 따른 항혈전 효과를 나타내며, 열 안정성이 우수하고, pH 2의 산성 조건 및 혈장 내에서도 혈전 생성 관련 효소 및 혈액 응고인자 저해 효과의 손실이 나타나지 않으므로, 혈행 개선을 통해 허혈성 뇌졸중 및 출혈성 뇌졸중과 같은 혈전증의 예방 및 치료용으로 사용할 수 있을 것으로 기대되며, 상기 유효성분은 추출액, 분말, 환, 정 등의 다양한 형태로 가공되어 상시 복용이 가능한 형태로 조제할 수 있는 뛰어난 효과가 있으므로 제약 산업 및 식품 산업상 매우 유용한 발명인 것이다.

도 1은 실험에 사용된 동애등에 유충 내지 성충의 사진도이다. 좌측으로부터 2령, 3령, 4령, 5령, 6령의 유충, 번데기, 용각 및 성충의 사진도이다.
도 2는 동애등에 유충 내지 성충의 에탄올 추출물의 인간 혈소판 응집저해 활성을 나타낸 것이다: 1: 용매 대조구(DMSO), 2: 아스피린(0.25mg/ml), 3: 동애등에 2령 유충 추출물(0.25mg/ml), 4: 동애등에 3령 유충 추출물(0.25mg/ml), 5: 동애등에 4령 유충 추출물(0.25mg/ml), 6: 동애등에 5령 유충 추출물(0.25mg/ml), 7: 동애등에 6령 유충 추출물(0.25mg/ml), 8: 동애등에 번데기 추출물(0.25mg/ml), 9: 동애등에 용각 추출물(0.25mg/ml), 10: 동애등에 성충 추출물(0.25mg/ml).
도 3은 동애등에 용각 에탄올 추출물의 유기용매 분획물의 인간 혈소판 응집저해 활성을 나타낸 것이다: 1: 용매 대조구(DMSO), 2: 아스피린(0.25mg/ml), 3: 동애등에 용각 에탄올 추출물의 헥센 분획물(0.25mg/ml), 4: 동애등에 용각 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물(0.25mg/ml), 5: 동애등에 용각 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(0.25mg/ml), 6: 동애등에 용각 에탄올 추출물의 용매 분획 후의 물 잔류물(0.25mg/ml).

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명의 발명자들은 동애등에를 대상으로 항혈전 효능을 검정하기 위하여, 먼저 25℃의 사육상자에서 톱밥과 음식물을 혼합한 사료를 공급하여 동애등에를 성충으로 사육하였으며, 2~3일마다 2~6령의 유충을 회수한 후, 번데기, 용각 및 성충으로 완전 변태하도록 유도하였다. 이후, 각각의 유충, 번데기, 용각 및 성충을 약 200g씩 회수한 후, 이를 전자레인지에서 8분간 건조하였으며, 회수된 건조물은 막자사발을 이용하여 분말로 제조하였다. 이후, 제조분말을 이용하여 에탄올 추출물을 조제하고 항혈전 활성을 평가하여 용각 에탄올 추출물을 항혈전 활성 성분으로 회수하였으며, 특히 상기 추출물의 유기용매 분획물 중 에틸아세테이트 분획물에서 가장 우수한 항혈전 활성이 있음을 확인하였고, 상기 분획물은 열 안정성과 산 안정성이 우수한 특징을 가짐을 확인함으로써 상기 분획물을 혈전증의 예방 또는 치료/개선용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품으로 활용하고자 하였다.

구체적으로, 본 발명자들은 항염증, 간 보호, 항암, 항고혈압 효과가 있다고 알려진 동애등에를 이용하여 혈전증의 예방 또는 치료/개선용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품을 개발하기 위하여, 동애등에의 다양한 생육 시기별 유충, 번데기, 용각 및 성충을 대상으로 에탄올 추출물을 조제하고, 이들을 대상으로 항혈전 활성을 인간 트롬빈에 대한 트롬빈 직접 저해(Thrombin Time), 프로트롬빈 저해(Prothrombin Time) 및 활성부분 트롬보플라스틴 타임(activated Partial Thromboplastin Time: aPTT)을 평가하고, 또한, 인간 농축혈소판을 사용하여 혈소판 응집 저해활성을 평가하여, 용각 추출물이 강력한 항혈전 활성을 나타냄을 확인하였다. 다음으로, 상기 용각 에탄올 추출물을 대상으로 헥센 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물 및 물 잔류물을 수득하였으며, 특히, 에틸아세테이트 분획물은 5mg/ml 농도에서 무첨가구에 비해 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임 및 에이피티 타임을 각각 2.26배, 2.88배 및 3.70배 연장시켰으며, 7mg/ml 농도에서는 무첨가구에 비해 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임 및 에이피티 타임을 각각 3.52배, 4.08배 및 >15배 연장시켰다. 뿐만 아니라, 상기 에틸아세테이트 분획물은 용매 대조구 대비 19.8%의 매우 낮은 혈소판 응집능을 보였는데, 이는 동일 농도의 아스피린보다 2배 이상 우수한 혈소판 응집 저해 활성에 해당하는 것임을 확인하였다.

따라서, 본 발명은 동애등에(Hermetia illucens) 용각 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈전증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

이하에서는, 본 발명의 동애등에 용각 추출물의 제조 방법 및 효능 실험 등을 보다 구체적으로 설명한다.

본 발명의 발명자들은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 동애등에를 사육하는 단계; 유충, 번데기, 용각 및 성충의 회수 및 전처리 건조단계; 상기 시료의 분말화 단계; 동애등에 분말시료의 추출물 및 분획물을 조제하는 단계; 상기 추출물 및 분획물의 항혈전 활성 평가 단계; 및 안정성 조사 단계의 실험들을 수행하였다.

본 발명의 활성 분획물의 제조를 위하여 동애등에는 통상의 곤충 사육과 동일한 방법을 사용하며, 25℃의 사육상자에서 톱밥과 음식물을 혼합한 사료를 공급하여 동애등에를 6령으로 사육하고, 6령 유충을 번데기 및 성충으로 변태시키고, 이때 번데기 탈피 후의 용각을 회수하고, 상기 시료들을 전자레인지(LG, M-279W)로 8분간 건조시키고, 건조 시료를 막자사발을 이용하여 분말로 제조하여 용매로 추출하고, 상기 추출액을 0.06mm 이하의 여과망을 사용하여 여과하고, 이를 감압농축하는 단계에 의해 수득될 수 있다.

본 발명에서 사용되는 용매는 물(냉수, 열수), 주정, 탄소수 1~4의 무수 또는 함수 저급 알코올(메탄올, 에탄올, 주정, 프로판올, 부탄올 등), 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매 등을 이용할 수 있으며, 열수, 또는 95% 에탄올 추출이 가장 바람직하다. 바람직한 구체예로서, 본 발명의 활성 분획물은 동애등에 용각 에탄올로부터 수득할 수 있다.

본 발명에서는, 동애등에 유충, 번데기 용각 및 성충의 에탄올 추출물을 5mg/ml의 농도로 하여 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임, 에이피티 타임을 측정한 결과, 용각 추출물에서 가장 우수한 항응고 활성을 확인하였고, 용각 추출물의 유기용매 분획물들 중에서는 에틸아세테이트 분획물에서 가장 우수한 항응고 활성을 확인하였다. 상기 에틸아세테이트 분획물의 활성은, 상업적으로 항혈전제로 사용되고 있는 아스피린(상품명: 프로텍트)의 경우 1.5mg/ml 농도에서 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임, 에이피티 타임을 각각 무첨가구에 비해 1.83배, 1.29배 및 1.48배 연장시키는 것과 비교하여, 아스피린의 3~4배 농도에서 아스피린의 거의 2배 이상의 항응고 활성임을 확인하였고, 상기 활성 분획물은, 항혈전제, 특히 혈액 응고 억제제(항응고제)의 용도로 사용될 수 있다.

또한, 본 발명에서는, 동애등에 용각 에탄올 추출물의 각 유기용매 분획물을 0.25mg/ml의 농도로 하여 인간 혈소판 응집저해 활성을 평가한 결과, 에틸아세테이트 분획물에서 19.8%의 혈소판 응집능을 나타냄을 확인하였는데, 이러한 결과는 동일 농도의 아스피린보다 2배 이상 우수한 혈소판 응집 저해 활성에 해당되어, 상기 활성 분획물을 항혈전제, 특히 혈소판 응집 저해제(항혈소판제)로 사용 가능함을 확인하였다.

본 발명의 동애등에 용각 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물은 감압건조 및 동결건조, 또는 분무건조 등과 같은 통상적인 분말화 과정을 거쳐 분말로 제조될 수 있다. 상기 분획물은 혈장 내의 다양한 분해효소에 분해되지 않으며, 100℃의 열처리와 pH 2의 인체 위 내의 pH에서도 활성을 유지한다.

본 발명의 유효성분은 혈전증과 관련된 다양한 질환들의 예방 또는 치료용으로 사용될 수 있다. 상기 질환들은, 예를 들어, 동맥 혈전증으로서, 급성 심근 경색증, 가슴 통증, 호흡 곤란, 의식 소실, 허혈성 뇌졸중, 출혈성 뇌졸중, 두통, 운동 이상, 감각 이상, 성격 변화, 시력 저하, 간질 발작, 폐 혈전증, 심부정맥 혈전증, 하지 부종, 통증 및 급성 말초 동맥 폐쇄증 등을 들 수 있고, 정맥 혈전증으로서, 심부정맥 혈전증, 간문맥 혈전증, 급성 신장정맥 폐쇄증, 뇌 정맥동 혈전증 및 중심 망막정맥 폐쇄 등을 들 수 있다.

본 발명의 유효 성분을 포함하는 약학적 조성물은 각각의 사용 목적에 맞게 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구 제형, 멸균 주사용액의 주사제 등 다양한 형태로 제형화하여 사용할 수 있으며, 경구 투여하거나 정맥 내, 복강 내, 피하, 직장, 국소 투여 등을 포함한 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다.

이러한 약학적 조성물에는 추가적으로 담체, 부형제 또는 희석제 등이 더 포함될 수 있으며, 포함될 수 있는 적합한 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리쓰리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 비정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 들 수 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 충전제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 더 포함할 수도 있다.

바람직한 구체예로서, 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 약학적 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 혼합하여 제형화한다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 등과 같은 윤활제가 사용될 수도 있다.

바람직한 구체예로서, 경구용 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 예시될 수 있으며, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 액체 파라핀 이외에 여러 동애등에부형제, 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

바람직한 구체예로서, 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액제, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제, 좌제 등을 예시할 수 있다. 비수성용제, 현탁제에는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 포함될 수 있다. 주사제에는 용해제, 등장화제, 현탁화제, 유화제, 안정화제, 방부제 등과 같은 종래의 첨가제가 포함될 수 있다.

본 발명의 유효 성분은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

바람직한 구체예로서, 본 발명의 약학적 조성물에서 유효성분의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 ㎏ 당 1 내지 5,000mg, 바람직하게는 100 내지 3,000mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 투여 경로, 질병의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 약학적 조성물은 다양한 경로를 통하여 대상에 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관 내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명에서 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 제공하는 것을 의미하며, 본 발명의 약학적 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 일반적인 모든 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 유효성분을 표적 세포로 전달할 수 있는 임의의 장치를 이용해 투여될 수도 있다.

본 발명에서 "대상"은, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예를 들어, 인간, 원숭이, 소, 말, 양, 돼지, 닭, 칠면조, 메추라기, 고양이, 개, 마우스, 쥐, 토끼 또는 기니아 피그를 포함하고, 바람직하게는 포유류, 보다 바람직하게는 인간을 의미한다.

또한, 본 발명의 건강 기능 식품은 혈전증의 예방 또는 개선에 효과적인 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 유효성분을 포함하는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

본 발명의 유효성분은 일반적으로 전체 식품 중량의 0.01 내지 15중량%로 가할 수 있으며, 건강음료 조성물은 100ml를 기준으로 0.02 내지 10g, 바람직하게는 0.3 내지 1g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 기능 식품은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 것 외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제, 예컨대, 천연 탄수화물 및 다양한 향미제 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

상기 천연 탄수화물의 예로는 포도당, 과당 등의 단당류, 말토오스, 수크로오스 등의 이당류 및 덱스트린, 시클로덱스트린 등의 다당류와 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등의 당알코올이 있다.

상기 향미제로는 타우마틴; 레바우디오시드 A 또는 글리시르히진과 같은 스테비아 등의 천연 향미제 및 사카린, 아스파르탐 등의 합성 향미제를 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강 기능 식품 100ml당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g을 사용한다. 상기 외에 본 발명의 건강 기능 식품은 여러 동애등에영양제, 비타민, 광물, 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강 기능 식품은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료 등의 제조를 위한 과육을 함유할 수도 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 본 발명의 유효성분 100중량부 당 0.01 내지 약 20중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명의 구체적인 방법을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 하기 실시예는 본 발명의 바람직한 하나의 구체예일뿐이며, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예의 범위로 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

실시예 1: 동애등에 사육 및 유충, 번데기, 용각, 성충 분말 조제

동애등에는 잡식성으로 사육이 용이하며, 대량사육 시스템이 이미 확립되어 있다. 국내에서는 농진청에서 동애등에 사육법을 전파하여 다수의 농장에서 사육하고 있으며, 유충 및 번데기를 다양한 조류, 어류, 갑각류, 파충류의 먹이사료로 폭 넓게 이용하고 있는 실정이다. 본 실시예에서는 동애등에 사육을 위해 25℃의 사육상자에서 톱밥과 음식물을 혼합한 사료를 충분히 공급하며, 1개월 이상 사육하여 동애등에 성충으로 사육하였다. 각각의 유충, 번데기, 용각 및 성충은 도 1에, 크기와 무게는 표 1에 나타내었다. 각각의 생육시기별 동애등에 유충 및 성충을 회수한 다음 전자레인지에서 8분간 건조하였으며, 이후 막자사발을 이용하여 각각의 시료들은 분말로 제조하였다.

[표 1] 동애등에 유충, 번데기, 용각, 성충의 크기와 무게

실시예 2: 동애등에 분말의 영영성분 분석

실시예 1에서 제조된 동애등에 유충, 번데기, 용각, 성충 분말을 이용하여 영양성분을 분석하였다. 단백질, 조지방, 조탄수화물 및 조회분 함량을 식품공전에서 정한대로 평가하였다.

[표 2] 동애등에 유충, 번데기, 용각, 성충 분말의 영양성분 분석

그 결과 표 2에 나타낸 바와 같이, 동애등에 유충 2령~6령, 번데기, 용각은 35~45%의 단백질 함량을 보였으며, 가장 낮은 함량은 4령에서, 가장 높은 함량은 용각에서 확인되었다. 반면, 성충의 경우, 23.3%의 낮은 단백질 함량을 보였다. 조지질의 경우, 4령에서 가장 높은 44.4%, 성충에서 가장 낮은 11.8%를 보였으며, 회분은 용각에서 가장 높은 30.9%, 성충에서 가장 낮은 3.7%를 보였다. 따라서, 열량은 조지방 함량이 4령에서 가장 높게 나타났으며, 번데기 껍질인 용각에서 가장 낮게 나타났다. 이러한 결과는 향후 다양한 사육시기의 동애등에를 다양한 용도의 사료개발 및 영양식품 개발이 가능함을 제시하고 있다.

실시예 3: 동애등에 추출물 제조 및 추출물의 성분 분석

실시예 1에서 제조된 동애등에 분말을 대상으로 에탄올 추출물을 제조하였다. 이때, 각각의 생육시기에 회수된 시료에 대해 10배의 에탄올을 가하고, 상온에서 2회 반복 추출한 후 추출액을 모아 필터링한 후, 감압 농축하여 분말로 제조하였다. 조제된 동애등에 추출물의 성분 분석으로 총 폴리페놀, 총 플라보노이드 함량을 측정하였다. 총 폴리페놀 함량은 추출 검액 400μl에 50μl의 Folin-ciocalteau, 100μl의 Na₂CO₃ 포화용액을 넣고 실온에서 1시간 방치한 후 725nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준시약으로는 tannic acid를 사용하였다. 총 플라보노이드 함량은 각각의 시료를 18시간 메탄올 교반 추출하고, 여과한 추출 검액 400μl에 90% diethylene glycol 4ml를 첨가하고 다시 1N NaOH 40μl를 넣고 37℃에서 1시간 반응 후 420nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준시약으로는 rutin을 사용하였다.

[표 3] 동애등에 유충, 번데기, 용각, 성충 에탄올 추출물의 추출수율 및 추출물들의 성분 분석

그 결과, 표 3에 나타낸 바와 같이, 동애등에 추출효율은 2령의 경우 8.2%에서 령수가 증가됨에 따라 점차 증가하여 4령의 경우 13.1%로 가장 높았으며, 이후 감소하여 6령의 경우 1.7%로 낮게 나타났다. 그러나, 성충의 경우 18.5%로 가장 높은 추출 수율을 나타내었다.

한편, 총 폴리페놀 함량 분석 결과, 2령의 1.8mg/g에서 령수가 증가할수록 감소하여 6령의 경우 거의 검출되지 않았으며, 용각에서 다시 증가하여 17.2mg/g의 가장 높은 함량을 나타내었다. 총 플라보노이드 함량의 경우, 오히려 령수가 증가할수록 증가하며 번데기의 경우, 가장 높은 3.4mg/g을 나타내었으며, 용각에서는 2.8mg/g으로 감소하였다. 이러한 결과로, 동애등에 번데기 및 용각 추출물이 다양한 생리활성을 나타낼 것으로 예상된다.

실시예 4: 동애등에 추출물의 혈액응고 저해활성 평가

실시예 3에서 제조된 동애등에 시료 추출물의 혈액응고 저해활성을 평가하였으며, 기존에 보고된 방법(Sohn et al., 2004. Kor. J. Pharmacogn 35. 52-61; Kwon et al., 2004. J. Life Science, 14. 509-513; 류 등 2010. J. Life Science, 20. 922-928)과 동일하게, 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임, 에이피티 타임을 측정하여 평가하였다. 혈장은 시판 control plasma(MD Pacific Technology Co., Ltd, Huayuan Industrial Area, China)를 사용하였으며, 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임과 에이피티 타임 측정법은 다음과 같은 과정으로 수행되었다.

트롬빈 타임(Thrombin Time)

37℃에서 0.5U 트롬빈(Sigma Co., USA) 50μl와 20 mM CaCl₂ 50μl, 다양한 농도의 시료 추출액 10μl를 Amelung coagulometer KC-1A(Japan)의 튜브에 혼합하여 2분간 반응시킨 후, 혈장 100μl를 첨가한 후 혈장이 응고될 때까지의 시간을 측정하였다. 대조로는 아스피린(Sigma Co., USA)을 사용하였으며, 용매 대조구로는 시료 대신 DMSO를 사용하였다. DMSO의 경우 30.5초의 응고시간을 나타내었다. 트롬빈 저해 효과는 3회 이상 반복한 실험의 평균치로 나타내었으며, 트롬빈 저해 활성은 시료 첨가시의 응고시간을 용매 대조구의 응고시간으로 나눈 값으로 나타내었다.

프로트롬빈 타임(prothrombin time)

표준혈장(MD Pacific Co., China) 70μl와 다양한 농도의 시료액 10μl를 Amelung coagulometer KC-1A(Japan)의 튜브에 첨가하여 37℃에서 3분간 가온 후, 130μl의 PT reagent를 첨가하고 혈장이 응고될 때까지의 시간을 3회 반복한 실험의 평균치로 나타내었다. 대조로는 아스피린(Sigma Co., USA)을 사용하였으며, 용매 대조구로는 시료 대신 DMSO를 사용하였다. DMSO의 경우 16.7초의 응고시간을 나타내었다. 프로트롬빈 저해활성은 시료 첨가시의 응고시간을 용매 대조구의 응고시간으로 나눈 값으로 나타내었다.

aPTT(activated Partial Thromboplastin Time)

혈장 100μl와 다양한 농도의 시료 추출액 10μl를 Amelung coagulometer KC-1A(Japan)의 튜브에 첨가하여 37℃에서 3분간 가온한 후, 50μl의 aPTT reagent(Sigma, ALEXIN^TM)를 첨가하고, 다시 37℃에서 3분간 배양하였다. 이후, 50μl CaCl₂(35mM)을 첨가한 후 혈장이 응고될 때까지의 시간을 측정하였다. 용매 대조구로는 시료 대신 DMSO를 사용하였으며, 이 경우, 58.1초의 응고시간을 나타내었다. aPTT의 결과는 3회 반복한 실험의 평균치로 나타내었으며, 혈액응고인자 저해활성은 시료 첨가시의 aPTT를 용매 대조구의 aPTT로 나눈 값으로 나타내었다.

[표 4] 동애등에 유충, 번데기, 용각, 성충 에탄올 추출물의 혈액응고저해 활성 평가

그 결과, 표 4에 나타난 바와 같이, 동애등에 유충 2령~5령 추출물(5mg/ml)은 항응고 활성이 미미하였으며, 5령에서 혈액응고인자 저해에 의한 에이피티 타임 연장 활성이 확인되었다. 그러나, 6령 및 번데기 추출물에서는 트롬빈 저해 및 프로트롬빈 저해가 나타났으며, 용각 추출물의 경우, 가장 강력한 항응고 활성을 나타내었다. 특히, 용각 추출물은 농도 의존적으로 항응고 활성이 나타나며, 5mg/ml 농도에서 무첨가구에 비해 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임, 에이피티 타임이 각각 1.53배, 1.72배 및 1.44배로 나타나, 아스피린(임상에서 사용하는 항혈전제, 제품명: 프로텍트) 1.5mg/ml와 유사한 항응고 활성을 나타내었으며, 7mg/ml 농도에서는 무첨가구에 비해 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임, 에이피티 타임이 각각 2.04배, 2.35배 및 2.51배로 나타나 우수한 항혈전 활성을 나타내었다. 대조구로 사용된 상업용 항혈전제 아스피린(상품명: 프로텍트)이 1.5mg/ml 농도에서 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임, 에이피티 타임을 각각 무첨가구에 비해 1.83배, 1.29배 및 1.48배 연장시킴을 고려할 때, 동애등에 용각 추출물은 아스피린의 3~4배 농도에서 아스피린과 유사한 혈전 생성 억제효과를 나타내리라 판단되었다.

실시예 5: 동애등에 추출물의 혈소판 응집저해 활성 평가

실시예 3에서 제조된 동애등에 시료 추출물의 인간 혈소판 응집저해활성을 평가하여 그 결과를 표 5 및 도 2에 나타내었다. 혈소판은 다양한 혈구세포와 함께 혈관을 순환하는 원반형의 작은 세포로서, 핵이 없는 대신 혈관손상보호 및 혈소판 응집과 관련된 다양한 물질을 고농도로 포함하는 cytoplasmic granule을 가지고 있으며, 혈관내벽의 손상이 나타나는 경우 응집인자들을 분비하고, 내피세포의 손상으로 노출된 collagen 등과 결합하여 1차 지혈 플러그(primary hemostatic plug)를 형성하여 혈전생성을 개시하는 중요한 세포이다. 따라서, 혈소판 응집저해는 혈전 생성을 방지하는 매우 중요한 활성이다. 혈소판 응집저해 활성은 다음의 방법에 준해 평가하였다.

혈소판 응집저해 활성(Platelet aggregation inhibition activity)

혈소판은 인간 농축혈소판을 사용하였으며, 이를 washing buffer(138mM NaCl, 2.7mM KCl, 12mM NaHCO₃, 0.36mM NaH₂PO₄, 5.5mM Glucose, 1mM EDTA, pH 6.5)로 1회 세척하였다. 이후, suspending buffer(138mM NaCl, 2.7mM KCl, 12mM NaHCO₃, 0.36mM NaH₂PO₄, 5.5mM Glucose, 0.49mM MgCl₂, 0.25% gelatin, pH 7.4)에 재 현탁한 후, 3,000rpm에서 10분간 원심분리한 후 다시 suspending buffer에 재 현탁하였으며, 이때 혈소판 수는 4x10⁹/ml이 되도록 조정하였다. 이후, 1ml 현탁액에 2.5μl collagen을 가해 5분간 반응시키고, whole-blood aggregometer(Chrono-log, USA)를 사용하여 37℃에서 혈소판 응집을 측정하였다.

[표 5] 동애등에 유충, 번데기, 용각, 성충 에탄올 추출물의 혈소판 응집저해 활성

표 5 및 도 2에 나타낸 바와 같이, 먼저 아스피린은 0.25mg/ml 농도에서 32.2%의 응집을 나타내어 우수한 혈소판 응집저해를 나타내어 임상에서 항혈전제로 사용되는 근거를 알 수 있었다. 한편, 동애등에 유충 추출물에서는 4령 및 5령 추출물에서 혈소판 응집촉진 활성이 나타났으며, 기타 2, 3, 6령 유충 추출물, 번데기 추출물, 용각 및 성충 추출물에서는 응집저해 활성이 나타났다. 저해활성은 성충 > 3령 유충 > 용각 > 2령 유충, 번데기 > 6령 유충의 순으로 나타났다. 따라서, 동애등에 번데기, 용각 및 6령 추출물은 강력한 항응고 및 혈소판 응집저해 활성을 동시에 나타내어 항혈전제로 사용 가능함을 확인하였다.

실시예 6: 동애등에 용각 에탄올 추출물의 유기용매 분획물의 제조 및 성분 분석

실시예 3에서 제조된 동애등에 용각 에탄올 추출물을 대상으로 헥센, 에틸아세테이트, 부탄올로 순차적 유기용매 분획하였으며, 최종적으로 물 잔류물을 회수하였다. 다양한 분획물의 분획 효율 및 분획물의 성분 분석 결과는 표 6에 나타내었다.

[표 6] 동애등에 용각 에탄올 추출물의 유기용매 분획물의 수율 및 추출물들의 성분 분석

그 결과, 표 6에 나타낸 바와 같이, 수율은 헥센 분획물에서 가장 높았고(60.2%), 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물 및 물 잔류물에서 10.0~15.9%로 비슷하게 나타났다.

한편, 총 폴리페놀 함량 분석 결과, 에틸아세테이트 분획물에서 28.3mg/g으로 가장 높게 나타났으며, 다음으로 부탄올 분획물과 헥센 분획물의 순으로 나타났으며, 물 잔류물에서는 거의 검출되지 않았다. 총 플라보노이드 함량의 경우, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물 및 물 잔류물에서 비슷하게 나타났으며, 헥센 분획물에서는 거의 검출되지 않음을 확인하였다. 이러한 결과로, 에틸아세테이트 분획물에서 다양한 생리활성을 나타낼 것으로 예상되었다.

실시예 7: 동애등에 용각 에탄올 추출물의 유기용매 분획물의 혈액응고 저해활성 평가

실시예 6에서 제조된 시료 분획물의 혈액응고 저해활성을 평가하였으며, 그 결과를 아래 표 7에 나타내었다.

[표 7] 동애등에 용각 에탄올 추출물의 유기용매 분획물의 혈액응고저해 활성 평가

그 결과, 표 7에 나타난 바와 같이, 헥센 분획물, 부탄올 분획물 및 물 잔류물의 경우, 에탄올 추출물의 항응고 활성과 유사하게 나타났다. 그러나, 에틸아세테이트 분획물의 경우, 농도 의존적으로 항응고 활성이 나타나며, 5mg/ml 농도에서 무첨가구에 비해 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임, 에이피티 타임이 각각 2.26배, 2.88배 및 3.70배로 나타나, 아스피린(임상에서 사용하는 항혈전제, 제품명: 프로텍트) 1.5mg/ml보다 2배 이상 우수한 항응고 활성을 나타내었으며, 7mg/ml 농도에서는 무첨가구에 비해 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임, 에이피티 타임이 각각 3.52배, 4.08배 및 >15배로 나타나 매우 우수한 항혈전 활성을 나타내었다. 대조구로 사용된 상업용 항혈전제 아스피린(상품명: 프로텍트)이 1.5mg/ml 농도에서 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임, 에이피티 타임을 각각 무첨가구에 비해 1.83배, 1.29배 및 1.48배 연장시킴을 고려할 때, 에틸아세테이트 분획물은 아스피린의 3~4배 농도에서 아스피린과 유사한 혈전 생성 억제효과를 나타내리라 판단되었다.

실시예 8: 동애등에 용각 에탄올 추출물의 유기용매 분획물의 혈소판 응집저해 활성 평가

실시예 6에서 제조된 유기용매 분획물의 인간 혈소판 응집저해활성을 평가하여 그 결과를 표 8 및 도 3에 나타내었다.

[표 8] 동애등에 용각 에탄올 추출물의 유기용매 분획물의 혈소판 응집저해 활성

표 8 및 도 3에 나타낸 바와 같이, 먼저 아스피린은 0.25mg/ml 농도에서 42.4%의 응집을 나타내어 우수한 혈소판 응집저해를 나타내어 임상에서 항혈전제로 사용되는 근거를 알 수 있었다. 한편, 헥센 분획물과 부탄올 분획물에서는 에탄올 추출물과 유사한 혈소판 응집능을 나타내었고, 물 잔류물에서는 혈소판 응집 저해 활성이 거의 없음을 확인하였다. 그러나, 에틸아세테이트 분획물에서는 19.8%의 혈소판 응집능이 측정되어 동일 농도의 아스피린 보다 2배 이상 우수한 혈소판 응집 저해 활성이 있음을 확인하였다. 따라서, 동애등에 용각 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물은 강력한 항응고 및 혈소판 응집저해 활성을 동시에 나타내어 항혈전제로 사용 가능함을 확인하였다.

실시예 9: 동애등에 용각 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물의 혈장, 산 및 열 안정성 평가

상기 실시예 6에서 얻은 동애등에 용각 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 대상으로 항혈전 활성에 대한 혈장 안정성, 열 안정성 및 산 안정성을 확인하였다. 상기 추출물들은 100℃에서 1시간 열 처리, pH 2(0.01M HCl)에서의 1시간 처리, 혈장에서 1시간 처리시에도 항혈전 활성의 소실이 없이 우수한 활성을 나타내었다.

Claims

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동애등에(Hermetia illucens) 용각 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈소판 응집 저해제.