KR102368221B1 - 광대수염 모자이크 바이러스 검출용 프라이머 세트 및 이의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 서열번호 1 및 2의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 3 및 4의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 및 서열번호 5 및 6의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트;로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트를 포함하는, 광대수염 모자이크 바이러스(White dead nettle mosaic virus)를 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 세트, 상기 프라이머 세트를 포함하는 광대수염 모자이크 바이러스 검출 키트 및 상기 프라이머 세트를 이용한 광대수염 모자이크 바이러스 검출 방법에 관한 것이다.

Description

광대수염 모자이크 바이러스 검출용 프라이머 세트 및 이의 용도{Primer sets for detecting White dead nettle mosaic virus and uses thereof}

본 발명은 광대수염 모자이크 바이러스(White dead nettle mosaic virus) 검출용 프라이머 세트 및 이의 용도에 관한 것이다.

식물 바이러스는 많은 식물체에 병을 유발하고, 각종 농작물의 생산량 및 품질저하 등 농업생산 전반에 걸쳐 심각한 경제적 피해를 주고 있다. 특히 최근에는 식량 및 각종 식물체 등의 국제 교역량이 증가되면서 국내에 존재하지 않던 외국의 병원성 식물 바이러스까지 유입되어 그로 인한 피해가 점차 심해지고 있는 추세이다. 이 때문에 주요 농작물에 대한 바이러스의 예방, 치료, 검역은 농업에서 중요한 과제이다. 또한, 식물 바이러스에 의한 병은 곰팡이 또는 세균에 의한 병과는 다르게 농약을 살포하여 예방하거나 치료하는 것이 불가능하다. 따라서, 식물체나 종자의 바이러스 감염 여부에 대한 정밀하고 신속한 진단은 재배 작물의 바이러스 감염에 의한 피해를 사전에 방지하고, 바이러스 병 관리를 위한 선결요건이다.

전 세계적으로 광대수염(White dead nettle, 학명 Lamium album var. barbatum)에서 발생하는 바이러스 병은 현재까지 알려진 바가 없다. 본 발명자는 광대수염에서 신규한 바이러스를 동정하였고, 상기 바이러스를 진단할 수 있는 특이적 검출 프라이머를 개발하였다.

한편, 한국공개특허 제2019-0053733호에는 잠두위조바이러스2(BBWV2), 질경이모자이크포텍스바이러스(PIAMV), 지황모자이크바이러스(ReMV), 토바모바이러스속 서브그룹3(T-sg3)의 바이러스를 단독 또는 다중으로 진단할 수 있는 '지황 감염 바이러스 다중 진단용 프라이머 세트 및 이를 이용한 진단 방법'이 개시되어 있고, 한국등록특허 제0857043호에는 '콩모자이크바이러스 진단용 특이 프라이머'가 개시되어 있으나, 본 발명의 '광대수염 모자이크 바이러스 검출용 프라이머 세트 및 이의 용도'에 대해서는 기재된 바가 없다.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명자들은 바이러스 감염 병징을 보이는 광대수염 식물체로부터 분리한 신규한 바이러스인 광대수염 모자이크 바이러스(White dead nettle mosaic virus)를 특이적으로 검출할 수 있는 프라이머 세트를 제작하고, 특이성 및 검출한계를 분석한 결과, 본 발명에 따른 프라이머 세트가 2.5 ng 농도의 시료까지 검출 가능하고, 광대수염 모자이크 바이러스에만 특이적으로 결합하는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 서열번호 1 및 2의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 3 및 4의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 및 서열번호 5 및 6의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트;로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트를 포함하는, 광대수염 모자이크 바이러스(White dead nettle mosaic virus)를 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 세트를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 프라이머 세트; 및 증폭 반응을 수행하기 위한 시약을 포함하는, 광대수염 모자이크 바이러스를 특이적으로 검출하기 위한 키트를 제공한다.

또한, 본 발명은 광대수염 모자이크 바이러스 감염 의심 시료에서 총 RNA를 분리하는 단계; 상기 분리된 총 RNA를 주형으로 하고, 본 발명에 따른 프라이머 세트를 이용하여 RT-PCR(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)을 수행하여 표적 서열을 증폭하는 단계; 및 상기 증폭 산물을 검출하는 단계;를 포함하는, 광대수염 모자이크 바이러스를 특이적으로 검출하는 방법을 제공한다.

본 발명의 프라이머 세트는 광대수염 식물체로부터 분리한 신규한 바이러스인 광대수염 모자이크 바이러스(White dead nettle mosaic virus)를 특이적으로 검출할 수 있으므로, 꿀풀과 작물의 검역 현장에서 유용하게 활용될 수 있을 것이다.

도 1은 설계한 3개의 프라이머 세트를 이용한 RT-PCR 및 PCR 반응 결과이다.
도 2는 최적온도조건 탐색을 위한 PCR 반응 결과이다.
도 3은 검출한계(detection limit) 분석을 위한 PCR 반응 결과이다.
도 4는 본 발명에서 개발한 프라이머 세트의 광대수염 모자이크 바이러스에 대한 특이성 검정 PCR 반응 결과이다.

본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1 및 2의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 3 및 4의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 및 서열번호 5 및 6의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트;로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트를 포함하는, 광대수염 모자이크 바이러스(White dead nettle mosaic virus)를 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 세트를 제공한다.

본 발명에 따른 광대수염 모자이크 바이러스는 본 발명자가 바이러스 병징 중 하나인 모자이크 증상을 보이는 광대수염 잎 시료로부터 새롭게 분리한 바이러스로, 약 11.8 kb 크기의 (+) 단일-가닥 RNA 게놈 ((+) single-stranded RNA genome)을 가지는 신규한 바이러스이다. 상기 광대수염 모자이크 바이러스의 유전체 정보는 서열번호 7과 같다.

본 발명의 프라이머 세트는 바람직하게는 상기 3개의 프라이머 세트로 이루어진 군으로부터 선택되는 1개 이상, 2개 이상의 프라이머 세트를 포함하며, 3개의 프라이머 세트, 즉, 서열번호 1 및 2의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 3 및 4의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 및 서열번호 5 및 6의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트;를 모두 포함할 수 있다.

상기 프라이머는 각 프라이머의 서열 길이에 따라, 서열번호 1 내지 6의 서열 내의 16개 이상, 17개 이상, 18개 이상, 19개 이상, 20개 이상의 연속 뉴클레오티드의 절편으로 이루어진 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 예를 들면, 서열번호 1의 프라이머(23개 올리고뉴클레오티드)는 서열번호 1의 서열 내의 16개 이상, 17개 이상, 18개 이상, 19개 이상, 20개 이상, 21개 이상, 22개 이상의 연속 뉴클레오티드의 절편으로 이루어진 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 또한, 상기 프라이머는 서열번호 1 내지 6의 염기서열의 부가, 결실 또는 치환된 서열도 포함할 수 있다. 본 발명의 서열번호 1, 3 및 5의 올리고뉴클레오티드 프라이머는 정방향(forward) 프라이머이며, 서열번호 2, 4 및 6의 올리고뉴클레오티드 프라이머는 역방향(reverse) 프라이머이다.

본 발명에 있어서, "프라이머"는 카피하려는 핵산 가닥에 상보적인 단일 가닥 올리고뉴클레오티드 서열을 말하며, 프라이머 연장 산물의 합성을 위한 개시점으로서 작용할 수 있다. 상기 프라이머의 길이 및 서열은 연장 산물의 합성을 시작하도록 허용해야 한다. 프라이머의 구체적인 길이 및 서열은 요구되는 DNA 또는 RNA 표적의 복합도(complexity)뿐만 아니라 온도 및 이온 강도와 같은 프라이머 이용 조건에 의존할 것이다.

본 명세서에 있어서, 프라이머로서 이용된 올리고뉴클레오티드는 또한 뉴클레오티드 유사체(analogue), 예를 들면, 포스포로티오에이트(phosphorothioate), 알킬포스포로티오에이트 또는 펩티드 핵산(peptide nucleic acid)를 포함할 수 있거나 또는 삽입 물질(intercalating agent)를 포함할 수 있다.

본 발명은 또한, 상기 프라이머 세트; 및 증폭 반응을 수행하기 위한 시약을 포함하는, 광대수염 모자이크 바이러스(White dead nettle mosaic virus)를 특이적으로 검출하기 위한 키트를 제공한다.

본 발명의 키트에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트는 전술한 것과 같다.

본 발명의 키트에서, 상기 증폭 반응을 수행하기 위한 시약은 DNA 폴리머라제, dNTPs 및 버퍼를 포함할 수 있으며, 리보뉴클레아제(ribonuclease) 저해제, 내열성 중합효소 등을 추가로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 DNA 폴리머라제는 RNA 의존성 DNA 폴리머라제(RNA dependent DNA polymerase)와 같은 역전사 효소일 수 있으며, 다양한 소스로부터 기원한 역전사 효소, 예를 들면, 조류 골수 아세포증 바이러스-유래 역전사 효소(avian myeloblastosis virus-derived virus reverse transcriptase; AMV RTase), 마우스 백혈병 바이러스-유래 역전사 효소(murine leukemia virus-derived virus reverse transcriptase; MuLV RTase) 및 라우스-관련 바이러스 2 역전사 효소(Rous-associated virus 2 reverse transcriptase; RAV-2 RTase)를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 상기 버퍼는 역전사 버퍼 및 PCR 버퍼를 모두 포함할 수 있다.

본 발명의 일 구현 예에 있어서, 상기 키트는 또한 최적의 반응 수행 조건을 기재한 사용자 안내서를 추가로 포함할 수 있다. 안내서는 키트 사용법, 예를 들면, 역전사 완충액 및 PCR 완충액 제조 방법, 제시되는 반응 조건 등을 설명하는 인쇄물이다. 안내서는 팜플렛 또는 전단지 형태의 안내 책자, 키트에 부착된 라벨, 및 키트를 포함하는 패키지의 표면상에 설명을 포함한다. 또한, 안내서는 인터넷과 같이 전기 매체를 통해 공개되거나 제공되는 정보를 포함한다.

본 발명은 또한, 본 발명에 따른 프라이머 세트를 이용하여 광대수염 모자이크 바이러스 감염 의심 시료에서 광대수염 모자이크 바이러스(White dead nettle mosaic virus)를 검출하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 구체적으로,

광대수염 모자이크 바이러스 감염 의심 시료에서 총 RNA를 분리하는 단계;

상기 분리된 총 RNA를 주형으로 하고, 본 발명의 프라이머 세트를 이용하여 RT-PCR(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)을 수행하여 표적 서열을 증폭하는 단계; 및

상기 증폭 산물을 검출하는 단계;를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 방법은 광대수염 모자이크 바이러스 감염 의심 시료에서 총 RNA를 분리하는 단계를 포함한다. 상기 시료는 광대수염 모자이크 바이러스 감염 병징을 보이는 식물체라면 제한되지 않는다. 상기 시료에서 총 RNA를 분리하는 방법은 당업계에 공지된 임의의 방법을 이용할 수 있으며, 예를 들면, 페놀 추출 방법을 이용할 수 있다. 상기 분리된 전체 RNA를 주형으로 하고, 본 발명의 일 실시예에 따른 하나 이상의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트를 프라이머로 이용하여 RT-PCR을 수행하여 표적 서열을 증폭할 수 있다. 이러한 PCR 방법은 당업계에 잘 알려져 있으며, 상업적으로 이용가능한 키트를 이용할 수도 있다.

본 발명의 일 구현 예에 있어서, 상기 증폭된 표적 서열은 검출가능한 표지 물질로 표지될 수 있다. 상기 표지 물질은 형광, 인광 또는 방사성을 발하는 물질일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 바람직하게는, 상기 표지 물질은 Cy-5 또는 Cy-3이다. 표적 서열의 증폭시 프라이머의 5'-말단에 Cy-5 또는 Cy-3를 표지하여 PCR을 수행하면 표적 서열이 검출가능한 형광 표지 물질로 표지될 수 있다. 또한, 방사성 물질을 이용한 표지는 PCR 수행시 ³²P 또는 ³⁵S 등과 같은 방사성 동위원소를 PCR 반응액에 첨가하면 증폭 산물이 합성되면서 방사성이 증폭 산물에 혼입되어 증폭 산물이 방사성으로 표지될 수 있다. 표적 서열을 증폭하기 위해 이용된 하나 이상의 올리고뉴클레오티드 프라이머 조합은 상기에 기재된 바와 같다.

본 발명의 일 구현 예에 있어서, 상기 광대수염 모자이크 바이러스를 검출하는 방법은 상기 증폭 산물을 검출하는 단계를 포함하며, 상기 증폭 산물의 검출은 겔 전기영동, 모세관 전기영동, 형광 측정, 인광 측정, 방사성 측정 또는 DNA 칩을 통해 수행될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 증폭 산물을 검출하는 방법 중의 하나로서, 모세관 전기영동을 수행할 수 있다. 모세관 전기영동은 예를 들면, ABi Sequencer를 이용할 수 있다. 또한, 겔 전기영동을 수행할 수 있으며, 겔 전기영동은 증폭 산물의 크기에 따라 아가로스 겔 전기영동 또는 아크릴아미드 겔 전기영동을 이용할 수 있다. 또한, 형광 측정 방법은 프라이머의 5'-말단에 Cy-5 또는 Cy-3를 표지하여 PCR을 수행하면 표적 서열이 검출가능한 형광 표지 물질로 표지되며, 이렇게 표지된 형광은 형광 측정기를 이용하여 측정할 수 있다. 또한, 방사성 측정 방법은 PCR 수행시 ³²P 또는 ³⁵S 등과 같은 방사성 동위원소를 PCR 반응액에 첨가하여 증폭 산물을 표지한 후, 방사성 측정기구, 예를 들면, 가이거 계수기(Geiger counter) 또는 액체섬광계수기(liquid scintillation counter)를 이용하여 방사성을 측정할 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

재료 및 방법

1. 공시시료

2019년 5월, 경상북도 봉화에서 모자이크 증상을 보이는 광대수염 시료를 수집하였다. 수집한 시료는 병징을 보이는 잎 조직을 절단하여, Maxwell RSC plant RNA kit (Promega Corporation, USA)를 이용하여 총 RNA를 추출하였다. 추출한 총 RNA를 이용하여 RNA Sequencing과 데이터 분석, PCR 증폭을 통하여 광대수염 모자이크 바이러스(White dead nettle mosaic virus), PhlVS (Phlox virus S) 및 CNDV (Carrot necrotic dieback virus)의 3종 복합감염을 확인하였고, 이를 공시시료로 활용하였다.

2. 총 RNA 추출 및 cDNA 합성

수집한 공시시료는 액체질소를 이용하여 곱게 마쇄된 잎 조직 100 ㎎을 TRI Reagent (Molecular research Center, INC, USA)를 이용하여 제조사의 매뉴얼에 따라 총 RNA를 추출하였다. 추출한 총 RNA는 M-MLV Reverse Transcriptase (Invitrogen, USA)를 이용하여 cDNA를 합성하였다. cDNA 합성은 RN25 랜덤 프라이머 2 ㎕, 10 mM dNTPs 2 ㎕, DNase/RNase-free water 19 ㎕, 총 RNA 3 ㎕를 첨가하여 최초 65℃에서 5분 동안 반응시킨 뒤 얼음위에 1분간 정치하였다. 이후 5x FS Buffer 8 ㎕ 및 0.1M DTT 4 ㎕를 첨가하여 37℃에서 2분간 반응하였다. 이 반응물에 M-MLV RT 2 ㎕를 첨가한 뒤, 37℃에서 50분, 70℃에서 15분 반응을 진행하였다.

3. 광대수염 모자이크 바이러스 종 특이적 프라이머 설계

광대수염 모자이크 바이러스 종 특이적 프라이머 설계를 위하여, 우선 동일한 속(Genus, Waikavirus)에 속한 바이러스 5종 전체 염기서열(complete genome) 정보를 NCBI Genbank에서 다운로드하였다. 상기 다운로드한 5종의 전체 염기서열과 광대수염 모자이크 바이러스 전체 염기서열은 DNAMAN ver. 5.2.10 (Lynnon BioSoft, Canada) 소프트웨어를 이용하여 정렬(alignment)을 수행하였다. 상기 다운로드한 와이카바이러스(Waikavirus) 속 5종의 정보는 표 1에 나타내었다.

다중정렬에 사용된 와이카바이러스(Waikavirus) 속 5종 정보

번호	바이러스명	약칭	분리주	Accession no.	국가
1	Bellflower vein chlorosis virus	BVCV	CT1	KT238881	한국
2	Maize chlorotic dwarf virus	MCDV	TN	U67839	미국
3	Rice tungro spherical virus	RTSV	Shen	M95497	미국
4	Blackcurrant waikavirus A	BCWVA	Oregon	MN701059	미국
5	Red clover associated virus 1	RCaV1	NURH6-2017	MH325329	체코

다음으로, 상기 표 1의 와이카바이러스 속에 속하는 바이러스 5종과 광대수염 모자이크 바이러스 전체 염기서열을 비교하여 광대수염 모자이크 바이러스만이 특이적으로 가지고 있는 영역 내에서 프라이머를 설계하였다. 그 결과 전체 3세트의 광대수염 모자이크 바이러스 종 특이적 프라이머를 설계하였으며, 설계한 프라이머 염기서열은 표 2에 나타내었다.

광대수염 모자이크 바이러스 특이적 프라이머 세트

세트no.	프라이머명	염기서열(5'→3')	서열번호	산물크기(bp)
1	WdnMV-F1	ATTTCTCTTTTTAAGTCTAGCTG	1	844
	WdnMV-R1	CAAGCGATTCTCACGCATAG	2
2	WdnMV-F2	TCTTGATGACGTGACTCAGAT	3	417
	WdnMV-R2	GCGGAATGCCCATTTGCTC	4
3	WdnMV-F3	TTATAGAGCAACTGTATCTCGT	5	210
	WdnMV-R3	TACGGCGTCCCTATATGGAT	6

실시예 1. 광대수염 모자이크 바이러스 특이적 프라이머 세트의 검증

설계한 광대수염 모자이크 바이러스 특이적 프라이머의 특이성 및 최적온도조건을 확인하기 위하여 표 2의 각 프라이머 세트별로 다음과 같은 조건으로 RT-PCR 및 PCR을 수행하였다.

RT-PCR 반응은 SuPrimeScript RT-PCR Premix(2X) (GeNet Bio, Korea)를 이용하여 진행하였다. RT-PCR 반응 조성물은 Premix 10㎕에 cDNA 주형 가닥(total RNA) 1 ㎕, 10 pmol/㎕의 정방향 및 역방향 프라이머 각 1 ㎕, DNase/RNase-free water 7 ㎕를 첨가하여 제조하였다. RT-PCR 반응조건은 50℃에서 30분간 cDNA 합성, 95℃에서 10분간 초기변성(initial denaturation) 과정을 수행한 뒤, 95℃에서 30초, 55℃에서 30초, 72℃에서 1분의 조건으로 35 사이클을 반복하였으며, 72℃에서 5분간 마지막으로 연장(extension)을 한 후 4℃로 온도를 낮추어 반응을 종료하였다.

PCR 반응은 2X TOPsimple DyeMIX (aliquot)-HOT premix (Enzynomics, Korea)을 이용하여 진행하였다. PCR 반응 조성물은 Premix 1 tube에 cDNA 주형 가닥(template) 1 ㎕, 10 pmol/㎕의 정방향 및 역방향 프라이머 각 1 ㎕, DNase/RNase-free water 17 ㎕를 첨가하여 제조하였다. PCR 반응 조건은 95℃에서 10분간 변성(denaturation) 과정을 수행한 뒤, 95℃에서 30초, 55℃에서 30초, 72℃에서 1분 30초의 조건으로 35 사이클을 반복하였으며, 72℃에서 5분간 마지막으로 연장을 한 후 4℃로 온도를 낮추어 반응을 종료하였다.

RT-PCR과 PCR을 통하여 증폭된 유전자 산물은 0.5X TAE buffer 100 ㎖, 아가로스 1 g, EcoDye DNA Stain 5 ㎕가 첨가된 1% 아가로스 겔(agarose gel)에 전기영동을 하여 겔 도큐멘테이션(Gel Documentation)으로 확인하였다.

그 결과, 도 1에 개시된 바와 같이, 프라이머 세트 1 내지 3에 각각 상응하는 Lane 1 내지 3에서 RT-PCR과 PCR 방법 모두 예측된 크기의 밴드가 뚜렷하게 관찰되었으며, 제작된 각각의 프라이머 세트가 광대수염 모자이크 바이러스를 특이적으로 검출할 수 있음을 확인하였다.

또한, 상기와 같이 특이성을 확인한 광대수염 모자이크 바이러스 특이적 프라이머를 이용하여, 최적온도조건 확립을 위하여 결합(annealing) 조건을 달리하여 PCR 반응을 수행하였다. 결합 온도 조건은 5조건(50℃, 53℃, 55℃, 57℃, 60℃)으로 설정한 뒤, 전술한 방법과 동일한 조성물 및 반응 조건으로 PCR 반응을 수행하였다. 이후 증폭된 유전자 산물을 아가로스 겔에 전기영동하여 결과를 확인하였다.

그 결과, 도 2에서와 같이 각 프라이머 세트에 대응되는 Lane 1 내지 3에서 50~57℃ 온도 조건에서 증폭산물은 비특이적 반응 없이 양성 밴드가 뚜렷하게 관찰됨을 확인하였다. 그러나, 60℃ 온도 조건에서는 Lane 2 (프라이머 세트 2 사용)에서만 증폭 산물이 관찰되었다. 이를 통해 상기 표 2에 설계된 프라이머 세트는 50~57℃ 사이의 온도 조건에서 광대수염 모자이크 바이러스를 효율적으로 검출할 수 있음을 알 수 있었다.

실시예 2. 광대수염 모자이크 바이러스 특이적 프라이머 세트의 검출한계 분석

상기 표 2에서 설계한 3개의 프라이머 세트의 광대수염 모자이크 바이러스에 대한 검출한계(detection limit)를 확인하기 위하여 다음과 같은 조건으로 실험을 수행하였다. PCR 반응에 이용된 cDNA는 단계희석법(serial dilution)을 통하여 10배씩 희석하여 이를 주형가닥(template)으로 사용하였다. 희석 전 주형 cDNA 농도는 246.72 ng/㎕ 이다. 희석범위는 10^-0 부터 10^-4 까지 전체 5단계로 수행하였으며, 조성액, 반응조건(결합 온도 조건 55℃) 및 결과 확인은 상기 실시예 1과 동일하게 수행하였다.

그 결과, 도 3에서와 같이 프라이머 세트 2 및 프라이머 세트 3의 경우, 주형 농도 10^-2 까지 증폭 산물이 뚜렷하게 관찰되었으나, 프라이머 세트 1의 경우 주형 농도 10^-2에서 증폭 산물이 희미하게 나타나, 민감도가 다른 2개의 프라이머 세트에 비해서는 다소 낮은 것을 알 수 있었다.

실시예 3. 광대수염 모자이크 바이러스 특이성 검증

표 2에서 설계한 광대수염 모자이크 바이러스 특이적 프라이머 세트의 종 특이적 반응을 검증하기 위하여, 공시시료로부터 유래한 바이러스를 인위적으로 접종한 지표식물 8종을 대상으로 각 프라이머 세트별로 개별 PCR을 수행하였다. 상기 지표식물 8종은 하기와 같으며, 이 중에서 광대수염 모자이크 바이러스 양성 시료는 재배담배(Nicotiana tabacum)이며, 이외 7종의 지표식물은 CNDV (Carrot necrotic dieback virus) 양성 시료이다: Nicotiana glutinosa, Nicotiana tabacum var. KY57, Nicotiana tabacum, Nicotiana tabacum var. White Burley, Nicotiana tabacum var. Xanthi nc, Glycine max, Nicotiana occidentalis, Datura stramonium.

그 결과, 도 4에서와 같이 본 발명에서 설계한 프라이머 세트는 광대수염 모자이크 바이러스 감염 시료에서만 특이적으로 반응함을 확인할 수 있었고, 이외 광대수염에서 유래된 CNDV 감염 지표식물에는 반응하지 않음을 확인할 수 있었다.

<110> Korea Institute of Arboretum Management <120> Primer sets for detecting White dead nettle mosaic virus and uses thereof <130> PN20326 <160> 7 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 1 atttctcttt ttaagtctag ctg 23 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 2 caagcgattc tcacgcatag 20 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 3 tcttgatgac gtgactcaga t 21 <210> 4 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 4 gcggaatgcc catttgctc 19 <210> 5 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 5 ttatagagca actgtatctc gt 22 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 6 tacggcgtcc ctatatggat 20 <210> 7 <211> 11892 <212> DNA <213> Unknown <220> <223> White dead nettle mosaic virus <400> 7 tgaaatagag gaatatagga atatgttttc tggctaattc tctattttgt acatgagtcc 60 cagtttggga ctgcgtgggg gctacttttg tcgaccccct ttagataggc acacaagata 120 tgtctttgtt tagcgactga tttggtgtgt ttcttctcat tgtccaagtc tagcactatg 180 ttcatacctt gggagtcccg agctctttga attatggagc ccttagttat attaaagcta 240 tgcgctttta tttctattgg ctcgtccgta gtgttgtgtg aggaacaatc ctgaagtttc 300 acttcctttc ttttatcaga tactagtaac tgctttgtat tttaatttgg cgttgcccga 360 gaatacacaa ggagtccttg tccattttct cagtcgtggt gcgctttgtt attatccata 420 gtagtgaaag gtttgtagct actccgacac ataggctcta tcagcagttt ccactcatgg 480 ctctgtactc ttcttccata atgcaaaacc aaccaacaac caatctttca ttgtcattgc 540 acagcgttag tcctaataat agtaataata atttgttaca gttaaaggtt tctccaggta 600 tatactttga tccttttgag aactgcacgc actctcgtgc attgtctcgc ttgtcatctt 660 gtggttgcac tttttgttgt tttcttttta agctaaatag cttttatatc aaagaaaagt 720 gtttgctttc taggtccaat atcactagtt tggttaatag agattttatt tctcttttta 780 agtctagctg cttgttattt cttgagtctc gtactaaatc cactctcgct tcacgtggcg 840 atgcagaggg cacttctaat tatcagtttg gcagtcaata tgattgccct tttcctgggg 900 tgcctgggac tgattctcaa gatcgccacg atactgatag ctggggtatt tgtaacgatg 960 ctcaacatct ttttgaatgt tttagcactt gtgaccaggc ccgaggaaag tttttcccaa 1020 tttcacgaga gggcttttgc tggcacacca cttgcaccgc gtgcggagcg agctgcgcct 1080 tttccagtcc gagggagggg ttaattcttt gtatttttat gcattacctt agagtctctt 1140 ataatggtag taaatatacg gtgagacttt tctctgatga tcaatatgtg cactgtagtc 1200 gagacgttgc agaacttgtt ctgcttgttc agggaggtac tattaaatgg aagaatattg 1260 aactatccaa tagtgatccc acttctataa gtgtgagatc tgacatactt gtcacgtctt 1320 ccaatgctta ctacgatttt ggttttgacg ccactcaaag atttgccaag gatgcacctg 1380 ttcttaagga agacatttgc cagcacagct tcattctgtc agcatgcaat ggaaagcaat 1440 tcaacttaac tgatgctatg atgagaactt tcctcatgct tttaccatgt catggctata 1500 tgcatgcttg tgttccactt gatactggca cctctatgcg tgagaatcgc ttgtgcggtt 1560 tgatctctgg aggaggtctt attggagtta acattcgttg caatgctgat tttattcgac 1620 tccataagga attttacaat ggtaatcctc gtggaggggc cagtcaagga gctgtgccca 1680 ttgttgctga ttgtgatgaa gattggtgtt ttgcccaagg atctcgctca agtgatgatg 1740 attatgaagg gcatattgat gaagttgctg aaagtgacga agttgaggat gatactgagg 1800 agcgtcattt gaaggatatt gttgataatt ttttggcaga tgatgatgat cttttagtta 1860 ttccaacccc tagatctcaa ggccgaggtc tgaaggacct agccaaaagg gtaggtggac 1920 tgttgaaggg tgttacgaat tgtgtaacta aattgcatgc tgtatgggac tggcctcttg 1980 atactgctct caaggctgtt actgatgtgg gaactttcct cgaggggaat aaatcctttg 2040 tgagtgataa agtgtgggcg tgtaacatgt gcccagaaat tcaaaaagaa attgaaaagg 2100 tactcactga ccatggtgat atcatgaaac tgcttcaggg tggcgtgcaa aggttgtcaa 2160 aagctcttga tgacgtgact cagatgaata aatccaatat tgaaagcatt gagaagaaag 2220 tgcaagagtt ggagacaggg tatgttcccg gtcgcgaatc aaatgaggag gctcttagag 2280 aggctattaa aaatctgttc gatagtgtca agtcattgtc tgatcaaata ggaaagcaat 2340 ctgagcgaat tgatgcactt gcaactcgcc ctgaaccact accaaaacca aagttgccaa 2400 aatacccaag acctacattt gagccaatcg ctggagagca aatgggcatt ccgcgtagta 2460 agcctcagcc tgttaagaag tataaatcac gcgagtttcc ttttgagttc tatgagaaca 2520 agaagggaag tgttgttgac ggtactacaa gtgctgaatc atttgaaact aaatctcagt 2580 cgggagaagg tagtactagt gagtttgtgg gtggagatga tctgtctaaa gttgtttcga 2640 ctcctgttgt ggcttctcat ggagcagatg acgttcacaa cgtgattttg tccgatattt 2700 atttggggtc tgtcaattgg agtgtgtcga gtggtgaagg aaatattctc aagagtttca 2760 gtttcccaga atcaatatgg agcaacaacc caaggctaaa gaatattgca agtttcttcc 2820 aatactatac ttgtagtggt ttgaggttta ctttgactac tactagtgtt ggtatgcagg 2880 ggggaactct catggtttgc tgggatgctc tggcttgcgc tactagacaa aagatcaaca 2940 ctgtcatcca actcagcaat ttacccacag catatatgtc agcttcatct tcagagaagc 3000 tcgagtttga aatttcttcg ccatcaatcc aacatatgat gtgtttaagt ggaagcgaac 3060 attccagtgc tttgcttgga aatctgctta tatgtgttgt aaatggatta aatgccgctg 3120 cagagaccag ccagagtgtt gctgttaatg tgtgggtgaa atttatgaac ccaaaattta 3180 gcttttacac tcttcaacat gagcttgtta gtgctcagag tggtagttta aagagtctgc 3240 ctggaattca gagtcttgaa gctatcattg cacaaggaaa gtggagtact acttcaagta 3300 caaatcttat ggagctaacg gtacatccaa cagcttgtta tatctcacaa ggattagtta 3360 cccaaactgc acttagtgta attagtagca tttttaatag atggagtggt agccttaaat 3420 ataggtttgt gtttggagct tccatgtttg ttagaggtaa aatagttgtt gctgcagttc 3480 ctgtagcctt tcgtacagag aagatgtccg tcacccaaat tacttcattt cccaatattg 3540 tgtgtgattt gagttccgat accagagatt tttcctttga agttccctat atctcaatag 3600 gaaataatag tgttgtatct agagaatctc tctatgatac gtctgcgtat aatgctgatt 3660 tagttgtttg taggttgcat atggttattc tagaccctct ggtcatgaat gccaatgcca 3720 gcaatagtat tagttatttc gttactgttc agccaggatc agacttctca ttgtatcagt 3780 tttctggtgt taaagctgag tttgtgaatc gtgttcttaa gcaatcattt catgattcct 3840 taacgtgtgg aaagattcta ggagatgggt tcagtgagtg gatgcaacgg gagtctctct 3900 tgcacaagtt taagcttgat gctgatcggg ccaattgttt gtgtgttgtc gtttcaccta 3960 cttatcgcca aaatgcacct tgcacaacac tgttaagttg gttatcccaa ctttttgtta 4020 catggactgg tgacattgtt tacacgctgc gaccacactc ccataaagtt tctaactctg 4080 tgctcatacg agtgtggtac gatagtaatg gttccacttt gtctgggtct gaatttgaat 4140 ttttgacaga agttgatccc cctgccggat gtaagacttt cttttggaac ccagcacgta 4200 ctcccgaatt agttatcacc gttcctttta gtgctcgcac aaagaggctt ggactacaca 4260 aggcaagata cactcctact gatagtgatt ggcttaatta ctataatggt atgcttgtca 4320 ttgattatca aggtctgtat gatattgagt tggaaatcta tactcatgct ggtcccaact 4380 tcgagttgtt tgagcaaaca gttgcacctc gctgtggaag agtttcaaat gcattcacca 4440 agctaacgta tgccaacgaa ttgaaaggtg tgacacagta tccacttgga gagggaaggc 4500 ttggtggtcc cgtcaacaaa gcggagaagt ctccaattgc tttcaaacca gtggctcctg 4560 tgaatgaatc gcctgattct cttgaaggag ctcctcctat gaagcgtact ccagcaaaga 4620 aggagtacag agatccactg ctagacccca gagaaggaga cagagctttt gataaagagg 4680 gtgagccaat tgtttttaga gatggagatt gggagtttga tgaagttcaa gctcaagctg 4740 gttgttttgg atcaatctcc acagttaata aagattgcca gatgctacga gaacgtaaaa 4800 ctcttgctaa gcttgctgat tgtgttgatg tagctcatac cactcttaac gataacactg 4860 aaaatggctt tctttcgtct atgagttttt tgttgccact tctcgagaga gcagaaacaa 4920 tgtcgagcaa actcgaggaa aatcttcagg gactaaatct gatcaaggac aagattgtcg 4980 caggagtgaa atcattgatg ggagagtcta ttccaggctt gcttaaaaat gctttttctg 5040 atgatggcta ctcatgggca actgttatga cgttattggg gggtctctca ttgttgtggt 5100 tctgtaaatc aaagaagaaa tttttgaaga agatctcaat actcattatg gtggtttggt 5160 caccatatct tgttcataga gcttgggaca taggtaaatg gattaagagt aaagcttgcg 5220 agctttttaa cttcccaact ggggaagagg cgtgccgtaa acattctagc gtaggcatgt 5280 tagaaggtgc caagggaacc tttggtaatt ttactgattg gttttctggt aactgggcta 5340 ctgcagttca gagccttttg acaatacttg gagtagtggc gtctcttgtt gcgtggggca 5400 ctatccccga ttctagaagt ttgactggat ttgcagccaa gttcaaggaa gcaggtgaaa 5460 agggtaaaac cttttccaat atttttggtg gcttcacttc cgttgtcaag atgtgtggtg 5520 agtggtctgg aaagctggtt tcatggttgt tgagtctagg tgggacctcc ctccctaggc 5580 atgattgtat tctgcaaaca atgattgatt ttaacttgcg tgagtgggtt gaagaagttc 5640 gtaagatggc ccttgcggaa aacaagtttg tcgactttgg caccactgat tatatagcta 5700 agattcggca tttgtatgat aaaagttgtg ctatacaaga ggctattttg tcgggagtta 5760 agttggatgt ccagctgagt atgatcgtta aagaatgcaa ggagaagtgt gtcgagttgt 5820 tgaacaatac ctattccttt aggggaatga aacagtctcg cattgatcct ttgcacattt 5880 ccattattgg tgctcctggc gttggaaagt ctgctatttc acatgtgctt attgacaact 5940 tgttggatta cagaggagaa cctaagatag acaggatcta cactcggtgt tgttctgatg 6000 catattggag ttgttatcac caagagcctg tcattttgta tgacgatctt ggtgccatta 6060 gttctaaaca gaagctgtct gattacgctg agattatggg agtcaagaca aatgatcctt 6120 tctctatccc tatggccatc gctgaggaaa aaggtcgtca ctgcactagc aagtatattg 6180 tttcatgtac taatatcctg gagcttgatg attctggtga tgttgtcacc aaaactgctt 6240 attacagaag gagaaatatc ttggttaagg tggagatgga ccctactgtg actaaagatg 6300 aggaaaatcc aactaagggc ttattgttca ctgtacttgg atatagcttt gaaggagatg 6360 accaaaatcg agtgattttt ggggtcaaga ccgagtggaa cgaacctttt ttaaggaatg 6420 taaatactga gaactgggtt ttcgagcgtg ttgacttcaa gctttttatg aaatttgttt 6480 gcaaatatac ggatgcgtac atggcaagtc aagaaaagtt acttaagggg atcaaaacat 6540 atagggttga tatggatgct gatgaagttg ttgtagagag tcaagctcct aaacccacaa 6600 tctacttggc agaactcatt gatcgcttca acaattgtaa cttttctatg agtgacattt 6660 gtaagacttt gaaaattgga aaaatggagc ctccaactgg atgggcgtcc attaagaaag 6720 tcactttcca ggagatgtta agattatgct gtgattgtca tgctgagggc cgttgctgtg 6780 ttgattttgt tattaagaga ttggcctctt gttatgaagc ttggagcact ccagcacatg 6840 aagcttttac gctgagtcgt gttgccgcaa tcccccaaga gagtttaatg aatttggtta 6900 gcgaagagaa attggcttcc ttgaaacctg ttcgttactt tgttgctcta gcaagttatt 6960 atcgaatggg gaggcctaat gatctttgcg aatatcagct gtgcaaactc agagaacatg 7020 ctgtgtctga ctcagatata ccagttgagg catcttttta cacagcgatt ccctggaggg 7080 gtgaaagatt ttgtatcgat ggcaaggaag ttctcatttg ggataagatg gaaacatact 7140 tcccaaggat ctcgcaagct tacaggtata tgcccatatg gaatggttca gattattggt 7200 atgttgcgcc aagagttgtc gagtcacttg atttttccct ggaaaatgaa atctgggcaa 7260 caataatgaa cacaggcttt gaagtagagt gtaatagtct agattttttc cgtatgtctg 7320 atagtactat ggtcatgtgc attatggact ctgtagatag tttgtgggaa gttaataatt 7380 ttgcgcctat ttttcgggaa ttacttagta attatagtga tgcttgtaag tcaaagagtt 7440 cagtgataca tcttattttg catgctttta cgtgtagagc taaggcaatc cgtaaatctg 7500 tgacagctgt tgctgtgtcg gctcatgtaa gcgcctttga gaaggctctt tctaagtatg 7560 atgcttgtga ggaaaaagtc gtgtgtggct tgagtaagag agcaaaaata ttgcttgcga 7620 ttggtggggg tgttgtggcg ctcggagtta ttgctggtgc agtcattggt attaagcaca 7680 tgttttctac ttttggctct acagacaata gtgatgaaga aactgttatc gatgctgatg 7740 ctgaaggttg tggagctgga gcttcttctg cctttcaaac agaaagagtt attagaggga 7800 aaagggctcc caaagttgtt gtgactacgt tagacaaaca tggtacttca gctggtgcta 7860 gtgctgcttt tcagactgac agagttatca agggacggag gaaaccatta gcacttcaag 7920 tacagagctt tggtcttact tatgatgagc gagacatgga agtggatctc aaaaagaata 7980 gaagaaaggc taatagaaga aagtttgtgg acactgtaaa gcaattgtcc cttgcgtccc 8040 aacactccaa tgaaaagtgg tttgaggatc tgctcaaaga tggtgtgaaa tcatgtgccc 8100 agattgataa gtcaagagct attagtgtta tagcacaagg tgtgttacat agtgctgatt 8160 gtgtgcctca gagtgaattt acaactgatg atgatgattt taccataagt gaggaagttc 8220 atatgaaatt ggctggtttg ctaagattta cgcctgaaaa catctatgag ctactcacca 8280 atggaatgac cacgaggctt gaaaaacaag gagttgtggg aagttatgga gtgtgtcgtg 8340 atcacaatat gctggaactt gttaagactc atatttcgaa gatgagttgt gttgtgattg 8400 ggaagagagg agagaaatac tacaagtata atgtgttgag gttgcgaagt acctttgttt 8460 tgatgccggt tcactatatt gaggaaatac gtttggcaga ttctctgtgg tttgtttgtc 8520 ctaataaggt tgtcgaaatt tcatttgata ttactaaaac aaccttcgtt tcaagactac 8580 aggatttgtt agtgtgggat cttggtaaca tgttccacca agtaaagatt ttaatgccac 8640 atatttgcaa tgacaaagat tgggagaatt tcaaaaagtg cagtggtgtg ctgagtctca 8700 ctgattacaa tgctgaggct tcaatgcagc ttgtgagtgt tctcgattct attgagttag 8760 tagattctga tgttgaactt ccaactggta cttattccat gtttgattcg acccacacca 8820 ttatcaaggg actgaggtac agagttcatt gtatgccagg cttttgcgga gctgctatag 8880 ttcgtgccgg taccaaaaat attagaaaag tgataggtat gcatgttgct ggtgcgaagg 8940 ataaaggtgt cggttatgct gaaattctct ctgttgagtt actctatgat gccattgaaa 9000 gacttgaagg tctcaacatt actaaggcaa ctgatgatgt tattgatctt gagtactgtc 9060 agaaacacgg ggtcactatt gagggtaaag gcaaccttgg tctagttgga attgtacccc 9120 acaagttgtt gcctcgacta ccagcaaaaa ctggtattgt ccccagtgct atacatggaa 9180 tgattggaga agttaagagt gagccagcta ttctttcggc gtgggaccat aggttggggt 9240 cgttgagagg tttgtgggat ccgactattg aaggtgtcaa gaagtatggt gctcccgtga 9300 aaccctttcc cattggtgag attagaattg ttgaagaaca tttgtcttct ttctttaaga 9360 actttgagaa cagtttgaaa aagagggaag tgaataacat tgagataggt gtgaatggta 9420 tcgatgggac caatttctgg gcgcctatgc ccatggacac ttcagctggt tacccatatg 9480 ttttgagaag accatcagga aaggttggga agtcatggtt gtttgaagag ttggagccct 9540 acccctcagg aaggaggcgt tttctcccag ttgatgaagg atttgtaagt aatcttatgt 9600 tatttcatgc acaaatatta gaaggtgtta ttcctagtat tattacgatg gagtgtccta 9660 aagatgaaag aaggaagtta gcaaagattt atgataagcc agctactaga acttttacgg 9720 ttcttcctcc agaaattaat ttgcttttta gaatgtattt tggagatttt tcagcaatga 9780 ttatggagac tagggcatcc catttttctc aagttggtat taatccagag actcttgaat 9840 ggtcggaact tatgaactca tttcttaagg tcggatctaa gggattcgct ggtgattacg 9900 ctaaatttga tggagttgga gctccagata tttaccactc tatagttagt attgttaata 9960 attggtatga cgatggtccc attaatgcta gggcgcgcca ttgcttgatc aacagtatta 10020 ttcacagaaa tgggattgcc gggaattgtc tcatgtgtta ctctcagggc atgccctctg 10080 gtttttccat gactgttatt tttaactctt ttgtaaatta ttactatatg gctttagctt 10140 ggcaacactt agtctccaag tccaggttaa gccctcaagc taatctaact gattttgatt 10200 attatactaa gctagtagtt tatggtgacg ataatattgt ggcagttgac gatgcctttc 10260 tcgagatttt taatctgaga actgtagcta gttatctgtc tcattatgga gtcacttata 10320 cagatgacgc caaaaatccc attcacgtga gtgagaaata tgtagatatt acgacagtat 10380 cctttctgaa gaggagattc gtgcctgtgg aaaattctcg cctgttatgg aaggcacctt 10440 tagataaggt tagtatagag gaaagatgta attggatccg agagtgtgaa attcccattg 10500 aggcattaaa tcagaatatt gatagtgctc tctatgaggc tagcattcat ggaaaggatt 10560 actttcttga tcttcagagt aggattaata aggcttgtga tgatgtagtt cttcctcaga 10620 ctaatcataa atttgaggag atggcttccc ggtggtgggg caatattact aactatgcct 10680 actcagttac cgatttgcgt aaacttgtta atttgagtag taaaaatagt attaatttat 10740 taagtaggta caaggatgtg tatctcgaga aagatgtttc tcttattgat gccatgtcca 10800 aggccaagca tgctcctgct gcctggtacg ttccataagt atcacttcct gtctgagtga 10860 tggtgtaggc tacctgaaaa gccttttcta ggttgtgaga gctttatctc aagagtcgga 10920 aataaatagc ttccgaaacc ggtagtttcc acggattcta ctcccagggt tgttcacctg 10980 gggttccagc gttcgctggc tccaccctga gtttgggtac tagctgaagt atgttagttg 11040 gtgggatagg ttaggctcac attatatcaa taaaatgtga attctgcctt actgaaagct 11100 ttgaacaata gttcactggt gtatcaaatt gagatccaat ttggctacag ggcgagtaag 11160 agtcaaatcc atggctaact atcagccttt cttattagtt cttggaaaga actgattggt 11220 ggtgaaattc cacttctttg agaggagaca atctctcttt gtgcctgttc taaacaacag 11280 gaataattct tggcacttgt gtgtgatggg attaatatcc cctctagaat agatgtctct 11340 attaatatag agtctgtatt tgtttgtgtg tcagttttat caactctcat gttttgtttt 11400 cttttgatgg gagttatcac tatttttgaa gtgtgcggaa cgcagctttg atagtatcct 11460 aagatcaggg tgtacctttt ggctgtacct gctcgtgttt ggagttctct tgatgtctaa 11520 tgagaccaag agccaaatgc taaggaatta ttgaagtgtg gtggtcctaa tggattctgt 11580 agtgatggtg tggtacaccg attaactaag gctttgtgtc ccaaagtctt ctgccttcgg 11640 gtgggaagcg tctctgtgtg tttttattta tagagcaact gtatctcgtg atactcttcc 11700 ccctcggggg gttgctatgt gtgaaagttt gtttacttta caataaatca cagttaaggt 11760 ctttaagcct tagccctacg tactatgtgg aacccagatg agttgaaatt catgacgatg 11820 gtggaaatgt ccaaccggtg aatactcaaa tttggtcatc catataggga cgccgtagaa 11880 tagtagagtg cc 11892

Claims (5)

1. 서열번호 1 및 2의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 서열번호 3 및 4의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트; 및 서열번호 5 및 6의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트;로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드 프라이머 세트를 포함하는, 광대수염 모자이크 바이러스(White dead nettle mosaic virus)를 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 세트.
2. 제1항의 프라이머 세트; 및 증폭 반응을 수행하기 위한 시약을 포함하는, 광대수염 모자이크 바이러스(White dead nettle mosaic virus)를 특이적으로 검출하기 위한 키트.
3. 제2항에 있어서, 상기 증폭 반응을 수행하기 위한 시약은 DNA 폴리머라제, dNTPs 및 버퍼를 포함하는 것인 키트.
4. 광대수염 모자이크 바이러스 감염 의심 시료에서 총 RNA를 분리하는 단계;
   상기 분리된 총 RNA를 주형으로 하고, 제1항의 프라이머 세트를 이용하여 RT-PCR(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)을 수행하여 표적 서열을 증폭하는 단계; 및
   상기 증폭 산물을 검출하는 단계;를 포함하는, 광대수염 모자이크 바이러스(White dead nettle mosaic virus)를 특이적으로 검출하는 방법.
5. 제4항에 있어서, 상기 증폭 산물의 검출은 겔 전기영동, 형광 측정, 인광 측정, 방사성 측정 또는 DNA 칩을 통해 수행되는 것인 방법.

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