KR102363846B1 - Cosmetic composition containing natural extracts complex - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 천연 혼합추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로는 다시마, 블래더랙앨지, 녹차잎, 감잎 및 미강 혼합추출물을 유효성분으로 함유하여 미세먼지로부터의 피부 보호활성이 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition containing a natural mixed extract, and specifically, a cosmetic composition having excellent skin protection activity from fine dust by containing kelp, bladder rag algae, green tea leaf, persimmon leaf and rice bran mixed extract as an active ingredient. it's about
피부는 외부 환경에 직접적으로 노출되는 신체 부위로서, 우리 몸의 중요한 기관들을 보호하는 보호막 역할을 할 뿐만 아니라 수분 증발을 조절하고 외부 감염으로부터 몸을 보호하는 역할을 한다. 하지만, 과도한 자외선, 오염된 환경에 의한 스트레스는 피부 자극을 유발하게 되고, 결국에는 피부 노화로 이어지게 된다.The skin is a part of the body that is directly exposed to the external environment, and it not only acts as a protective film to protect important organs of our body, but also regulates water evaporation and protects the body from external infections. However, excessive UV rays and stress caused by a polluted environment cause skin irritation and eventually lead to skin aging.
최근에는 급속한 산업화에 따른 중금속 및 미세먼지가 피부를 자극하고 노화를 유발하는 큰 원인으로 꼽히고 있다. 중금속은 납, 수은, 카드뮴, 아연, 니켈 등 비중 4 이상의 무거운 금속원소를 가리키며, 이러한 중금속은 미량이라도 체내에 축적되면 잘 배설되지 않고 체내에 쌓여 장기간에 걸쳐 부작용을 나타내기 때문에 위험한 것으로 인식되고 있다. 또한, 피부에 대해서는 대기 중에서 화학반응을 일으켜 질소 산화물(NO)과 같은 유해물질을 추가로 생성해 피부 염증, 아토피, 트러블을 유발할 수 있다고 보고되고 있다.In recent years, heavy metals and fine dust caused by rapid industrialization have been cited as major causes of skin irritation and aging. Heavy metals refer to heavy metal elements with a specific gravity of 4 or more, such as lead, mercury, cadmium, zinc, and nickel. . In addition, it has been reported that the skin may cause a chemical reaction in the air to additionally generate harmful substances such as nitrogen oxide (NO), which may cause skin inflammation, atopy, and troubles.
미세먼지는 입자크기 10um 이하인 먼지를 통칭하고, PM 10(Particulate Matter 10) 으로 약칭하며, 그 중에서도 2.5um 이하의 초미세먼지는 PM 2.5(Particulate Matter 2.5)로 구분된다. 이러한 미세먼지는 자동차 매연과 공장 굴뚝에서 나오는 유독물질 또는 중금속 등이 대기중에서 광화학 반응을 일으켜 만들어지며, 황산염, 질산염 등과 같은 독성물질과 중금속이 포함되어 있는 것으로 알려져 있다. 이러한 미세먼지는 입자가 작아 피부 모공 속에 깊이 들어가 피부 트러블을 일으킬 수 있으며, 피부 건조증, 자극성 피부염, 알레르기 피부염, 여드름, 색소 침착 등 각종 증상을 더욱 악화시킨다.Fine dust is a general term for dust with a particle size of 10 μm or less, and is abbreviated as PM 10 (Particulate Matter 10). Such fine dust is produced by photochemical reaction in the atmosphere between toxic substances or heavy metals from automobile smoke and factory chimneys, and it is known that toxic substances such as sulfate and nitrate and heavy metals are included. These fine dust particles are small and can go deep into the skin pores and cause skin troubles, and worsen various symptoms such as dry skin, irritant dermatitis, allergic dermatitis, acne, and pigmentation.
따라서 미세먼지에 의해 유발되는 피부염 발생은 증가할 것으로 판단되며, 중금속과 미세먼지에 의해 유발된 피부 염증 반응을 완화시킬 소재에 대한 필요성이 증가하고 있다. Therefore, the occurrence of dermatitis induced by fine dust is expected to increase, and the need for materials that can alleviate skin inflammatory reactions induced by heavy metals and fine dust is increasing.
이에 본 발명자들은 미세먼지로부터 피부를 보호하는 활성을 가지는 천연 소재들을 탐색하여 왔으며, 다시마, 블래더랙앨지, 녹차잎, 감잎 및 미강 혼합추출물이 미세먼지로 인해 유발되는 피부염증과 자극을 완화하고, 미세먼지 및 중금속 제거효과가 우수한 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors have been searching for natural materials that have the activity to protect the skin from fine dust, and the kelp, bladder rag algae, green tea leaf, persimmon leaf and rice bran mixed extract relieves skin inflammation and irritation caused by fine dust, The present invention was completed by confirming that the effect of removing fine dust and heavy metals was excellent.
본 발명은 다시마, 블래더랙앨지, 녹차잎, 감잎 및 미강 혼합추출물을 유효성분으로 함유하여 미세먼지로 인해 유발되는 피부염증과 자극을 완화하고, 미세먼지 및 중금속 제거효과가 우수한 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.The present invention provides a cosmetic composition containing kelp, bladder rag algae, green tea leaf, persimmon leaf and rice bran mixed extract as an active ingredient to relieve skin inflammation and irritation caused by fine dust, and to provide a cosmetic composition excellent in removing fine dust and heavy metals aim to
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, 다시마, 블래더랙앨지, 녹차잎, 감잎 및 미강 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물이 제공된다.According to the present invention to achieve the above object, there is provided a cosmetic composition containing kelp, bladder rag algae, green tea leaf, persimmon leaf, and a mixed extract of rice bran as an active ingredient.
바람직하게는 상기 혼합추출물은 다시마, 블래더랙앨지, 녹차, 감잎 및 미강이 각각 1~3:1~2:1~4:2~4:0.5~1의 중량비로, 더욱 바람직하게는 2:1~2:1~2:3~4:1의 중량비로, 가장 바람직하게는 2:1:1:4:1의 중량비로 혼합되어 추출되는 것이다.Preferably, the mixed extract is kelp, bladder rack algae, green tea, persimmon leaf and rice bran in a weight ratio of 1-3:1-2:1-4:2-4:0.5-1, more preferably 2:1, respectively. It is extracted by mixing in a weight ratio of ~2:1~2:3~4:1, most preferably 2:1:1:4:1.
유효성분으로서의 상기 혼합추출물은 화장료 조성물 전체 중량에 대해 0.01~20 중량% 함유된다.The mixed extract as an active ingredient is contained in an amount of 0.01 to 20% by weight based on the total weight of the cosmetic composition.
상기 화장료 조성물은 미세먼지에 의해 발생하는 피부염증완화용, 미세먼지로 인한 피부자극 완화용 또는 미세먼지 및 중금속 제거용인 것을 특징으로 한다.The cosmetic composition is characterized in that it is for relieving skin inflammation caused by fine dust, for alleviating skin irritation due to fine dust, or for removing fine dust and heavy metals.
본 발명의 다시마, 블래더랙앨지, 녹차잎, 감잎 및 미강 혼합추출물은 미세먼지에 의한 염증 반응 억제, 자극 완화 효과, 미세먼지 및 중금속 제거 효과가 우수하므로 미세 먼지로부터 피부를 보호하는 화장료로 유용하게 사용될 수 있다. The kelp, bladder rag algae, green tea leaf, persimmon leaf and rice bran mixed extract of the present invention is useful as a cosmetic that protects the skin from fine dust because it is excellent in suppressing the inflammatory reaction caused by fine dust, alleviating irritation, and removing fine dust and heavy metals. can be used
이하 본 발명을 더욱 구체적으로 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.
본 발명은 다시마, 블래더랙앨지, 녹차잎, 감잎 및 미강 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a cosmetic composition containing kelp, bladder rag algae, green tea leaf, persimmon leaf and rice bran mixed extract as an active ingredient.
다시마는 한국, 중국 및 일본의 해안 지역에서 널리 소비되고 있는 갈조류이다. 상기 다시마는 태평양 연안에 약 20여 종이 자라고 있으며, 주요 종으로는 참다시마(L.japonica), 오호츠크다시마(L.ochotensis), 애기다시마(L.religiosa) 등이 있다. 예부터 한국을 비롯하여 일본 및 중국 등 동아시아에서 식용해 왔다. 다시마에는 알긴산, 후코이단 등 수용성 다당류를 다량 함유하고 있다.Kelp is a brown algae widely consumed in coastal areas of Korea, China and Japan. About 20 species of kelp are grown on the Pacific coast, and main species include kelp kelp (L. japonica), kombu Okhotsk (L.ochotensis), kelp kelp (L. religiosa), and the like. It has been eaten in East Asia such as Korea, Japan, and China since ancient times. Kelp contains a large amount of water-soluble polysaccharides such as alginic acid and fucoidan.
블래더랙앨지는 뜸부기과(Fucaceae)의 갈색 해조류로서, 북해, 발트해, 대서양, 태평양 등지에 분포한다. 요오드와 점액질을 다량 함유하고 있으며, 알루미늄, 바륨, 붕소, 칼슘, 코발드, 구리, 칼륨, 요오드 철, 리륨, 마그네슘 등의 미네랄과 비타민을 함유하고 있다.Bladderwrack algae are brown seaweeds of the family Fucaceae, distributed in the North Sea, Baltic Sea, Atlantic Ocean, and Pacific Ocean. It contains a large amount of iodine and mucilage, and contains minerals and vitamins such as aluminum, barium, boron, calcium, cobald, copper, potassium, iron iodine, lithium, and magnesium.
녹차는 싹이나 잎을 이용하여 차엽 속에 존재하는 산화 효소를 실활시켜 제조하여, 기호차로서 음용되어져 왔다. 녹차에 함유된 여러 성분들에 의한 항산화, 항염증, 항균, 항바이러스, 노화방지 등의 약리적인 작용이 알려져 있다.Green tea is produced by inactivating the oxidative enzyme present in the tea leaves by using the buds or leaves, and has been consumed as a favorite tea. The pharmacological actions of antioxidant, anti-inflammatory, antibacterial, anti-viral, anti-aging, etc. by various components contained in green tea are known.
감잎은 비타민 A, C를 함유하고 있으며, 지혈 및 혈압강하작용 등을 하는 루틴 성분을 함유하고 있다. 감잎에 함유되어 있는 탄닌 성분으로 인한 수렴작용으로 인해 체내에서 점막 표면의 조직을 수축시켜 설사를 멎게하고 위궤양의 증상을 완화한다. 또한, 탄닌산의 수렴작용으로 화상에도 효과를 보인다. Persimmon leaf contains vitamins A and C, and contains rutin, which has hemostasis and blood pressure lowering effects. Due to the astringent action of the tannins contained in persimmon leaves, it contracts the tissues of the mucous membrane in the body, stopping diarrhea and alleviating the symptoms of stomach ulcers. In addition, the astringent action of tannic acid shows an effect on burns.
미강은 현미를 백미로 도정할 때 얻어지는 과피, 종피 및 호분층의 분쇄물을 말한다. 미강에는 비타민 A와 티아민, 피리독신, 니아신 등의 비타민 B군 및 칼슘, 아연, 철분 등의 미네랄이 다량 함유되어 있다. 또한, 미강에는 필수 아미노산인 라이신이 다량 함유되어 있고, 올레산, 리놀렌산, 리놀레산 등의 불포화지방산을 함유하고 있어 영양학적으로도 가치가 뛰어나다. Rice bran refers to the pulverized product of pericarp, seed hide and aloe layer obtained when brown rice is polished into white rice. Rice bran contains a large amount of vitamin A, B vitamins such as thiamine, pyridoxine and niacin, and minerals such as calcium, zinc, and iron. In addition, rice bran contains a large amount of lysine, an essential amino acid, and unsaturated fatty acids such as oleic acid, linolenic acid, and linoleic acid, so it has excellent nutritional value.
본 발명에 따르면, 상기 다시마, 블래더랙앨지, 녹차잎, 감잎 및 미강의 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물이 제공된다.According to the present invention, there is provided a cosmetic composition containing the mixed extract of kelp, bladder rag algae, green tea leaf, persimmon leaf and rice bran as an active ingredient.
상기 혼합추출물은 열수 추출물이거나, 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 프로판올, 부틸렌글리콜, 글리세린, 클로로포름, 에틸아세테이트, 디클로로메탄, 헥산, 아세톤, 아세토나이트릴, 페트로레움에테르 및 디에틸에테르로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 용매에 의한 용매 추출물이다. The mixed extract is a hot water extract, water, ethanol, methanol, butanol, propanol, butylene glycol, glycerin, chloroform, ethyl acetate, dichloromethane, hexane, acetone, acetonitrile, the group consisting of petroleum ether and diethyl ether It is a solvent extract with at least one solvent selected from
추출은 통상적인 방법에 의하여 이루어 질 수 있다. 본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 다시마, 블래더랙앨지, 녹차잎, 감잎, 미강을 안정적인 온도에서 침지하거나 냉각 콘덴서가 장착된 추출기에서 가온 환류추출 한 후, 여과하여 감압농축하고 감압 농축물을 동결 건조하여 제조된다. 또한 추출 공정 수행 후 저온 숙성 또는 고온 숙성하는 공정을 포함할 수 있다. Extraction may be performed by a conventional method. According to one embodiment of the present invention, the kelp, bladder rack algae, green tea leaf, persimmon leaf, and rice bran are immersed at a stable temperature or extracted under reflux by heating in an extractor equipped with a cooling condenser, then filtered and concentrated under reduced pressure to obtain the concentrate under reduced pressure. It is prepared by freeze-drying. In addition, it may include a low-temperature aging or high-temperature aging process after performing the extraction process.
이때, 상기 혼합추출물은 다시마, 블래더랙앨지, 녹차, 감잎 및 미강이 각각 1~3:1~2:1~4:2~4:0.5~1의 중량비로, 더욱 바람직하게는 2:1~2:1~2:3~4:1의 중량비로, 가장 바람직하게는 2:1:1:4:1의 중량비로 혼합되어 추출 제조된다.At this time, the mixed extract is kelp, bladder rack algae, green tea, persimmon leaf and rice bran in a weight ratio of 1-3:1-2:1-4:2-4:0.5-1, more preferably 2:1- It is prepared by extraction by mixing in a weight ratio of 2:1 to 2:3 to 4:1, most preferably in a weight ratio of 2:1:1:4:1.
이와 같이 제조된 본 발명의 다시마, 블래더랙앨지, 녹차잎, 감잎 및 미강 혼합추출물은 그 상승작용에 의하여 각각의 성분과 비교하여 미세먼지에 의한 염증 반응 억제 효과와 자극 완화 효과가 우수하여, 미세먼지로부터의 피부 보호에 유리하고, 상기 혼합추출물이 첨가된 클렌징 제형에서는 미세먼지 및 중금속 제거능이 우수한 것으로 확인되었다.The kelp, bladder rag algae, green tea leaf, persimmon leaf and rice bran mixed extract of the present invention prepared in this way has superior inflammatory reaction suppression effect and irritation relief effect due to fine dust compared to each component due to its synergistic action, It is advantageous for skin protection from dust, and it was confirmed that the cleansing formulation to which the mixed extract was added had excellent ability to remove fine dust and heavy metals.
상기 다시마, 블래더랙앨지, 녹차잎, 감잎 및 미강 혼합추출물은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.01~20 중량%의 양으로 첨가될 수 있다. 0.01중량% 미만으로 첨가되는 경우 그 효과가 약하며, 20중량%를 초과하는 경우에는 함량 증가에 비하여 그 효과의 증가가 감소되어 오히려 비효율적이다. The kelp, bladder rag algae, green tea leaf, persimmon leaf and rice bran mixed extract may be added in an amount of 0.01 to 20 wt % based on the total weight of the cosmetic composition. When it is added in an amount of less than 0.01% by weight, the effect is weak, and when it exceeds 20% by weight, the increase in the effect is decreased compared to the increase in the content, which is rather inefficient.
본 발명의 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 화장품 이외에도 피부 과학적으로 허용 가능한 매질 및 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소 적용 및 전신 적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.The cosmetic composition of the present invention can be prepared in the form of general emulsified formulations and solubilized formulations. Cosmetics in emulsified formulations include nutritional lotions, creams, and essences, and solubilized cosmetics include softening lotions. In addition, by containing a dermatologically acceptable medium and base in addition to cosmetics, it can be prepared in the form of an adjuvant that can be applied topically and systemically commonly used in the field of dermatology.
또한, 본 발명에서 상기 화장료 조성물의 제형은 제한되지는 않으나 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 팩, 비누, 샴푸, 트리트먼트, 클렌징 폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도로 구성된 그룹에서 선택된 어느 하나의 제형으로 적용되어질 수 있다. In addition, the formulation of the cosmetic composition in the present invention is not limited, but skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisture lotion, nourishing lotion, massage cream, nourishing cream, moisture cream, hand cream, essence , pack, soap, shampoo, treatment, cleansing foam, cleansing lotion, cleansing cream, body lotion, body cleanser, emulsion, press powder, loose powder, and eye shadow.
[실시예][Example]
이하, 본 발명을 하기 실시예 및 시험예에 의거하여 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명은 하기 실시예에 의해 한정되는 것이 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail based on the following examples and test examples. However, the following examples are only for illustrating the present invention, and the present invention is not limited by the following examples.
실시예 1~8: 혼합 추출물 제조Examples 1-8: Preparation of mixed extracts
건조된 다시마, 블래더랙앨지, 녹차잎, 감잎, 미강을 하기의 표 1의 비율로 혼합 한 후, 건조 중량의 10배에 해당하는 70% 함수 에탄올에 넣고 냉각 콘덴서가 달리 추출기에서 80℃로 8시간 추출하였다. 이를 감압 농축기를 이용하여 50~60℃의 온도에서 농축 한 후 동결건조기로 동결 건조하여 추출분말을 얻었다. After mixing dried kelp, bladder rag algae, green tea leaf, persimmon leaf, and rice bran in the ratio shown in Table 1 below, put it in 70% hydrated ethanol equivalent to 10 times the dry weight, and heat to 80 ° C in the extractor with no cooling condenser. time was extracted. This was concentrated at a temperature of 50 to 60 ℃ using a reduced pressure concentrator, and then freeze-dried with a freeze dryer to obtain an extract powder.
비교예 1: 다시마 추출물 제조Comparative Example 1: Preparation of kelp extract
건조한 다시마를 건조 중량의 10배에 해당하는 70% 함수 에탄올에 넣고 냉각 콘덴서가 달리 추출기에서 80℃로 8시간 추출하였다. 이를 감압 농축기를 이용하여 50~60℃의 온도에서 농축 한 후 동결건조기로 동결 건조하여 추출분말을 얻었다. The dried kelp was put in 70% aqueous ethanol corresponding to 10 times the dry weight, and extracted for 8 hours at 80°C in an extractor with a different cooling condenser. This was concentrated at a temperature of 50 to 60 ℃ using a reduced pressure concentrator, and then freeze-dried with a freeze dryer to obtain an extract powder.
비교예 2: 블래더랙앨지 추출물 제조Comparative Example 2: Preparation of bladder rag algae extract
건조한 블래더랙앨지를 건조 중량의 10배에 해당하는 70% 함수 에탄올에 넣고 냉각 콘덴서가 달리 추출기에서 80℃로 8시간 추출하였다. 이를 감압 농축기를 이용하여 50~60℃의 온도에서 농축 한 후 동결건조기로 동결 건조하여 추출분말을 얻었다. The dried bladder rack AL paper was placed in 70% aqueous ethanol equivalent to 10 times the dry weight and extracted for 8 hours at 80°C in an extractor with a different cooling condenser. This was concentrated at a temperature of 50 to 60° C. using a vacuum concentrator, and then freeze-dried using a freeze dryer to obtain an extract powder.
비교예 3: 녹차잎 추출물 제조Comparative Example 3: Preparation of green tea leaf extract
건조한 녹차잎을 건조 중량의 10배에 해당하는 70% 함수 에탄올에 넣고 냉각 콘덴서가 달리 추출기에서 80℃로 8시간 추출하였다. 이를 감압 농축기를 이용하여 50~60℃의 온도에서 농축 한 후 동결건조기로 동결 건조하여 추출분말을 얻었다.The dried green tea leaves were put in 70% aqueous ethanol corresponding to 10 times the dry weight and extracted for 8 hours at 80°C in an extractor with a cooling condenser. This was concentrated at a temperature of 50 to 60 ℃ using a reduced pressure concentrator, and then freeze-dried with a freeze dryer to obtain an extract powder.
비교예 4: 감잎 추출물 제조Comparative Example 4: Preparation of persimmon leaf extract
건조한 감잎을 건조 중량의 10배에 해당하는 70% 함수 에탄올에 넣고 냉각 콘덴서가 달리 추출기에서 80℃로 8시간 추출하였다. 이를 감압 농축기를 이용하여 50~60℃의 온도에서 농축 한 후 동결건조기로 동결 건조하여 추출분말을 얻었다.The dried persimmon leaves were put in 70% aqueous ethanol corresponding to 10 times the dry weight, and extracted for 8 hours at 80° C. in an extractor using a cooling condenser. This was concentrated at a temperature of 50 to 60° C. using a vacuum concentrator, and then freeze-dried using a freeze dryer to obtain an extract powder.
비교예 5: 미강 추출물 제조Comparative Example 5: Preparation of rice bran extract
건조한 미강을 건조 중량의 10배에 해당하는 70% 함수 에탄올에 넣고 냉각 콘덴서가 달리 추출기에서 80℃로 8시간 추출하였다. 이를 감압 농축기를 이용하여 50~60℃의 온도에서 농축 한 후 동결건조기로 동결 건조하여 추출분말을 얻었다.The dried rice bran was placed in 70% aqueous ethanol equivalent to 10 times the dry weight, and extracted for 8 hours at 80° C. in an extractor using a cooling condenser. This was concentrated at a temperature of 50 to 60 ℃ using a reduced pressure concentrator, and then freeze-dried with a freeze dryer to obtain an extract powder.
시험예 1: 미세먼지에 의해 유발된 세포사멸 억제 효과Test Example 1: Inhibitory effect of apoptosis induced by fine dust
미세먼지에 의해 야기되는 세포 사멸 억제 효과를 확인하였다. 사람 유래 섬유아세포 1×106 cells/well의 농도로 96 well plate에 배양하고 10% FBS를 함유하는 IMDM 배지 0.2㎖를 공급한 후 24시간 동안 CO2 배양기에서 배양하였다. 여기에 미세먼지 25ppm을 시료와 함께 처리 한 다음 24시간 배양한 후 MTT용액(5 mg/mL)을 10 μL씩 첨가하였다. 4시간 후 배지를 버리고 DMSO를 넣어 formazan을 용해시키고 570 nm에서 ELISA reader를 이용하여 흡광도를 측정하였다. 세포생존율(%)은 하기 식에 의해 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.The effect of inhibiting apoptosis caused by fine dust was confirmed. Human-derived fibroblasts were cultured in a 96-well plate at a concentration of 1×10 6 cells/well, 0.2 ml of IMDM medium containing 10% FBS was supplied, and then cultured in a CO 2 incubator for 24 hours. Here, 25 ppm of fine dust was treated with the sample, and after incubation for 24 hours, 10 μL of MTT solution (5 mg/mL) was added. After 4 hours, the medium was discarded, DMSO was added to dissolve formazan, and absorbance was measured at 570 nm using an ELISA reader. Cell viability (%) was measured by the following formula, and the results are shown in Table 2 below.
세포 생존율(%) = [(St-Bo/(Bt-Bo)] × 100Cell viability (%) = [(St-Bo/(Bt-Bo)] × 100
Bo : 세포배양 배지만을 발색 반응한 웰의 570nm 흡광도Bo: Absorbance at 570 nm of wells in which only the cell culture medium was subjected to color development
Bt : 시료를 처리하지 않고 발색 반응한 웰의 570nm 흡광도Bt: Absorbance at 570 nm of wells subjected to color reaction without sample treatment
St : 시료를 처리하고 발색 반응한 웰의 570nm 흡광도St: Absorbance at 570 nm of wells subjected to sample treatment and color reaction
상기 표 2에서 알 수 있듯이 상기 실시예 혼합추출물을 적용한 시료에서 미세먼지에 의해 야기되는 세포 사멸 억제 효과가 비교예의 단일 추출물 시료에 의한 세포 사멸 억제 효과보다 우수한 것으로 확인되었다. As can be seen from Table 2, it was confirmed that the cell death inhibitory effect caused by fine dust in the sample to which the mixed extract of Example was applied was superior to the cell death inhibitory effect of the single extract sample of Comparative Example.
시험예 2: 미세먼지에 의한 COX-2 및 PGE-2 발현 감소 효과 Test Example 2: Reduction of COX-2 and PGE-2 expression by fine dust
Human Epidermal Keratinocyte(HaCaT)의 cytokine 생성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 96 well plate에 5×105cells/ml의 cell을 100 ul씩 넣은 후, CO2배양기에서 48시간 배양한 뒤 배지를 버린 다음, 표면을 PBS 용액으로 세척 한 후, FBS가 첨가되지 않은 배지로 교체하여 18시간 starvation 시키고, 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 자극요인 PMs(25ppm)를 처리하여 세포에 자극을 준 후, 상기 비교예 및 실시예의 각 시료 0.1% 씩 처리하고, 24시간 배양 한 후 세포는 RT-PCR을 이용하여 24시간 배양 한 후 세포는 RT-PCR을 이용하여 mRNA 발현량을 조사하였다.In order to examine the effect on the cytokine production of Human Epidermal Keratinocyte (HaCaT), 100 ul of 5×10 5 cells/ml cells were put into a 96 well plate, incubated in a CO 2 incubator for 48 hours, and then the medium was discarded, After washing the surface with PBS solution, it was replaced with a medium not added with FBS, starvated for 18 hours, and cultured for 24 hours. After incubation, the cells were stimulated by treatment with PMs (25ppm), a stimulatory factor, and then treated with 0.1% of each sample of Comparative Examples and Examples. After culturing for 24 hours, the cells were cultured for 24 hours using RT-PCR. Cells were examined for mRNA expression levels using RT-PCR.
상기 각각의 자극요인에 의해 증가된 mRNA 발현량을 대조군으로 하여 하기 식에 의해 발현감소율이 산출되었고, 그 결과는 표 3에 나타내었다. Using the mRNA expression level increased by each of the stimulatory factors as a control, the expression reduction rate was calculated by the following formula, and the results are shown in Table 3.
mRNA 발현 감소율(%)=[1-(시료 mRNA 발현양/대조군 mRNA 발현양)]×100mRNA expression reduction rate (%) = [1- (sample mRNA expression level / control group mRNA expression level)] × 100
상기 표 3에서 확인되는 바와 같이, 본 발명 실시예의 혼합추출물은 비교예의 단일 추출물에 비하여여 미세먼지에 의해 유도된 염증인자 COX-2 및 PGE-2의 발현을 더욱 크게 감소시켰으며, 실시예 4 내지 6에서 더욱 우수한 효과를 나타내었다. As can be seen in Table 3 above, the mixed extract of the Example of the present invention significantly reduced the expression of the inflammatory factors COX-2 and PGE-2 induced by fine dust compared to the single extract of the Comparative Example, Example 4 to 6 showed a more excellent effect.
시험예 3: 미세먼지에 의한 NF-kB 및 TNF-a 발현 감소 효과 Test Example 3: Effect of reducing NF-kB and TNF-a expression by fine dust
Human Epidermal Keratinocyte(HaCaT)의 cytokine 생성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 96 well plate에 5×105cells/ml의 cell을 100 ul씩 넣은 후, CO2배양기에서 48시간 배양한 뒤 배지를 버린 다음, 표면을 PBS 용액으로 세척 한 후, FBS가 첨가되지 않은 배지로 교체하여 18시간 starvation 시키고, 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 자극요인 PMs(25ppm)를 처리하여 세포에 자극을 준 후, 상기 비교예 및 실시예의 각 시료 0.1% 씩 처리하고, 24시간 배양 한 후 세포는 RT-PCR을 이용하여 24시간 배양 한 후 세포는 RT-PCR을 이용하여 mRNA 발현량을 조사하였다.In order to examine the effect on the cytokine production of Human Epidermal Keratinocyte (HaCaT), 100 ul of 5×10 5 cells/ml cells were put into a 96 well plate, incubated in a CO 2 incubator for 48 hours, and then the medium was discarded, After washing the surface with PBS solution, it was replaced with a medium not added with FBS, starvated for 18 hours, and cultured for 24 hours. After incubation, the cells were stimulated by treatment with PMs (25ppm), a stimulatory factor, and then treated with 0.1% of each sample of Comparative Examples and Examples. After culturing for 24 hours, the cells were cultured for 24 hours using RT-PCR. Cells were examined for mRNA expression levels using RT-PCR.
상기 각각의 자극요인에 의해 증가된 mRNA 발현량을 대조군으로 하여 하기 식에 의해 발현감소율이 산출되었고, 그 결과는 표 4에 나타내었다. Using the mRNA expression level increased by each of the stimulatory factors as a control, the expression reduction rate was calculated by the following formula, and the results are shown in Table 4.
mRNA 발현 감소율(%)=[1-(시료 mRNA 발현양/대조군 mRNA 발현양)]×100mRNA expression reduction rate (%) = [1- (sample mRNA expression level / control group mRNA expression level)] × 100
상기 표 4에서 확인되는 바와 같이, 본 발명 실시예의 혼합추출물은 비교예의 단일 추출물에 비하여 미세먼지에 의해 유도된 염증인자 NF-kB 및 TNF-a의 발현을 크게 감소시켰으며, 실시예 4 내지 6에서 더욱 우수한 효과를 나타내었다. As can be seen in Table 4, the mixed extract of the example of the present invention showed the expression of the inflammatory factors NF-kB and TNF-a induced by fine dust compared to the single extract of the comparative example. It was greatly reduced, and more excellent effects were exhibited in Examples 4 to 6.
시험예 4: 자극에 의한 IL-1a 및 1b 발현 억제 효과 시험Test Example 4: Test for inhibition of IL-1a and 1b expression by stimulation
Human Epidermal Keratinocyte(HaCaT)의 cytokine 생성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 96 well plate에 5×105cells/ml의 cell을 100 ul씩 넣은 후, CO2배양기에서 48시간 배양한 뒤 배지를 버린 다음, 표면을 PBS 용액으로 세척 한 후, FBS가 첨가되지 않은 배지로 교체하여 18시간 starvation 시키고, 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 자극요인 PMs(25ppm)를 처리하여 세포에 자극을 준 후, 상기 제조예 및 실시예의 각 시료 0.1% 씩 처리하고, 24시간 배양 한 후 세포는 RT-PCR을 이용하여 24시간 배양 한 후 세포는 RT-PCR을 이용하여 mRNA 발현량을 조사하였다.In order to examine the effect on the cytokine production of Human Epidermal Keratinocyte (HaCaT), 100 ul of 5×10 5 cells/ml cells were put into a 96 well plate, incubated in a CO 2 incubator for 48 hours, and then the medium was discarded, After washing the surface with PBS solution, it was replaced with a medium not added with FBS, starvated for 18 hours, and cultured for 24 hours. After culturing, the cells were stimulated by treatment with PMs (25ppm), a stimulatory factor, treated with 0.1% of each sample of Preparation Examples and Examples, and cultured for 24 hours. Then, the cells were cultured for 24 hours using RT-PCR. Cells were examined for mRNA expression levels using RT-PCR.
상기 각각의 자극요인에 의해 증가된 mRNA 발현량을 대조군으로 하여 하기 식에 의해 발현감소율이 산출되었고, 그 결과는 표 5에 나타내었다.Using the mRNA expression level increased by each of the stimuli as a control, the expression reduction rate was calculated by the following formula, and the results are shown in Table 5.
mRNA 발현 감소율(%)=[1-(시료 mRNA 발현양/대조군 mRNA 발현양)]×100mRNA expression reduction rate (%) = [1- (sample mRNA expression level / control group mRNA expression level)] × 100
상기 표 5에서 확인되는 바와 같이, 본 발명 실시예의 혼합추출물은 비교예의 단일 추출물에 비하여 미세먼지에 의해 유도된 염증인자 IL-1a 및 1b의 발현을 크게 감소시켰으며, 실시예 5에서 가장 우수한 효과를 나타내었다.As can be seen in Table 5 above, the mixed extract of the example of the present invention significantly reduced the expression of the inflammatory factors IL-1a and 1b induced by fine dust compared to the single extract of the comparative example, and the best effect in Example 5 was shown.
실시예 9: 혼합 추출물을 함유하는 크림 제조Example 9: Preparation of Cream Containing Mixed Extracts
상기 실시예 5의 혼합추출물을 포함한 크림을 하기 표 6의 조성 및 함량으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.A cream containing the mixed extract of Example 5 was prepared according to a conventional method with the composition and content shown in Table 6 below.
시험예 5: 피부 붉은기 완화 효과 확인Test Example 5: Confirmation of skin redness alleviation effect
피부 붉은기 완화 효과를 확인하기 위해, 상기 실시예 9와 대조예 1의 제형을 이용하여 실험 대상자 선정기준에 부합하는 20명의 여성을 대상으로 피부 붉은기 완화에 의한 진정 효과를 평가하였다. 실험 대상자는 실험 결과에 영향을 미칠 수 있는 기능성 케어 제품 사용을 일체 금하였다. In order to confirm the skin redness alleviation effect, the formulation of Example 9 and Control Example 1 was used to evaluate the soothing effect of skin redness relief in 20 women who met the test subject selection criteria. Subjects were prohibited from using functional care products that could affect the experimental results.
실험이 시작되기 전, 측정하고자 하는 피부의 붉은기를 촬영한 후 2주간 매일 아침, 저녁 세안 후 (2회/일)사용 한 후 비교 평가하였다. 평가는 분광광도계(Spectrophotomoter CR-2600D, Konica Minolta, Japan)를 사용하였다. Before the start of the experiment, the redness of the skin to be measured was photographed, and after washing (2 times/day) every morning and evening for 2 weeks, comparative evaluation was performed. For evaluation, a spectrophotometer (Spectrophotomotor CR-2600D, Konica Minolta, Japan) was used.
붉은기 완화에 의한 진정 효과를 측정하는 값으로 피부의 붉은기를 나타내는 a* value를 분석에 사용하였으며, 사용 전과 비교하여 측정값이 감소할수록 붉은기 완화에 의한 진정효과가 있음을 의미한다. 붉은기 완화에 의한 진정 효과의 개선 평가는 하기 식을 이용하여 측정한 후, 표 7에 나타내었다. As a value to measure the soothing effect of redness relief, the a* value indicating the redness of the skin was used for the analysis, and as the measured value decreases compared to before use, it means that there is a calming effect by alleviating redness. The improvement evaluation of the sedative effect by redness relief was measured using the following formula, and then shown in Table 7.
분광광도계를 이용하여 붉은기 완화에 의한 진정 효과 개선도를 분석한 결과, 피부의 붉은기를 나타내는 a* value가 본 발명의 혼합추출물을 함유한 실시예 9의 화장료 조성물이 대조예 1에 비해 붉은기 완화에 대한 개선율이 우수함을 확인하였다. As a result of analyzing the improvement of the soothing effect by alleviating redness using a spectrophotometer, the cosmetic composition of Example 9 containing the mixed extract of the present invention had a* value indicating redness of the skin compared to Control Example 1. It was confirmed that the improvement rate for alleviation was excellent.
실시예 10: 혼합 추출물을 함유하는 클렌징 폼 제조Example 10: Preparation of Cleansing Foam Containing Mixed Extracts
상기 실시예 5의 혼합추출물을 포함한 클렌징 폼을 하기 표 8의 조성 및 함량으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.A cleansing foam containing the mixed extract of Example 5 was prepared according to a conventional method with the composition and content of Table 8 below.
시험예 6: 피부 중금속 제거 효과 Test Example 6: Skin heavy metal removal effect
돼지 피부(1cm * 1cm) 시료 2개를 100ppm 납용액과 카드뮴 용액에 각각 90분 동안 침지한 후, 상온에서 건조시킨 뒤 실시예 10과 대조예 2의 클렌징 폼을 도포하여 세정한 후 유도결합플라즈마 질량분석기(ICP-MS)를 통해 피부 내 중금속 잔여량을 통해서 제거율을 측정하였다. 제거율은 중금속 제거 후 시료의 농도를 제거 전 시료의 농도로 나눠 계산하였고 그 결과를 하기 표 9에 나타내었다.Two samples of pig skin (1 cm * 1 cm) were immersed in 100 ppm lead solution and cadmium solution for 90 minutes, respectively, dried at room temperature, and then washed by applying the cleansing foam of Example 10 and Control Example 2, followed by inductively coupled plasma The removal rate was measured through the residual amount of heavy metals in the skin through mass spectrometry (ICP-MS). The removal rate was calculated by dividing the concentration of the sample after removal of heavy metals by the concentration of the sample before removal, and the results are shown in Table 9 below.
상기 표 9에서 확인되는 바와 같이, 상기 실시예 5의 혼합추출물을 함유하는 클렌징 폼을 이용하여 세정한 경우 중금속 제거 효과가 우수하였다.As can be seen in Table 9, when the cleansing foam containing the mixed extract of Example 5 was used, the heavy metal removal effect was excellent.
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