KR102285926B1 - 일엽초 추출물을 포함하는 피부 미백용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 일엽초 추출물 또는 그 분획물을 포함하는 피부 미백용 조성물 및 그 제조방법을 제공한다.
본 발명의 일엽초 추출물 또는 그 분획물(에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물, 헥산 분획물, 메틸렌 클로라이드 분획물)을 포함하는 조성물은 우수한 티로시나제 억제 활성을 나타내어, 기능성 화장품 및 기능성 식품 분야에서 미백 효능을 나타내는 천연물 소재로서 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 일엽초 추출물 또는 그 분획물(에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물, 헥산 분획물, 메틸렌 클로라이드 분획물)을 포함하는 조성물은 우수한 티로시나제 억제 활성을 나타내어, 기능성 화장품 및 기능성 식품 분야에서 미백 효능을 나타내는 천연물 소재로서 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 피부 미백용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 일엽초 추출물을 포함하는 피부 미백용 조성물에 관한 것이다.
일엽초(─葉草, weeping fern)는 양치식물 고사리목 고란초과의 상록 여러해살이풀로서, 남부지방의 숲 속 바위나 늙은 나무의 껍질에 붙어서 자란다. 뿌리줄기는 옆으로 뻗으며 겉에는 비늘조각이 덮여 있고, 잎은 가죽질, 선형으로 가장자리가 매끈하다. 포자낭군은 둥근 모양으로 잎 뒷면 위쪽에 가운데잎줄을 중심으로 양쪽에 한 줄로 나란히 달리며, 포막은 없다. 일엽초와 관련하여서는 혈액순환, 항암작용, 신장기능개선 등에 효과가 있다고 보고된 바 있지만, 피부 미백 기능에 대해서는 아직까지 보고된 바 없다.
한편, 티로시나제는 포유동물, 식물, 균류 등 천연에 존재하고 페놀(phenol) 및 카테콜(catechol) 등의 기질을 수용하는 구리를 포함하는 효소이다. 이 효소는 멜라닌 생합성의 첫 두 단계에 관여하여 L-티로신(L-tyrosine)을 L-DOPA(L-3,4-dihydroxyphenylalanine)로 히드록실화(hydroxylation)시키고, o-퀴논(o-quinone, dopaquinone)으로 산화시키는 역할을 한다. 도파퀴논(Dopaquinone)은 몇 단계의 반응을 통해 멜라닌으로 전환되어 피부 색소 침착의 원인 물질로 작용한다. 또한 식품 산업에서 티로시나제는 과일과 채소의 안정성을 제어하는 표적 효소 역할을 한다. 이에 따라 보다 안전하고 효과적인 티로시나제 저해제를 개발하는 것은 식품 및 화장품 산업에서 상당히 중요한 해결과제로 인식되어지고 있다.
본 발명의 발명자들은 피부 미백 활성이 우수한 천연물 소재에 대하여 연구하던 중, 일엽초 추출물과 그 분획물이 티로시나제 활성을 억제하는 것을 확인함으로써 미백용 조성물로 사용할 수 있다는 것을 발견하였다.
따라서, 본 발명은 일엽초 추출물 또는 그 분획물을 포함하는 피부 미백용 조성물 및 그 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 일 측면에 따라, 일엽초 추출물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물이 제공된다.
일 구현예에서, 상기 일엽초 추출물은 C1 내지 C3 알코올 및 물의 혼합 용매 추출물일 수 있으며, 바람직하게는 50 ~ 80 %(v/v) 에탄올의 추출물일 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따라, 일엽초 추출물로부터 분획된 분획물로서, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물, 헥산 분획물, 메틸렌 클로라이드 분획물 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 1종의 분획물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물이 제공된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, (a) 일엽초를 C1 내지 C3 알코올 및 물의 혼합 용매로 추출하여 일엽초 추출물을 얻는 단계; (b) 단계(a)에서 얻은 상기 일엽초 추출물을 물에 현탁하여 일엽초 추출물 현탁액을 얻는 단계; (c) 단계(b)에서 얻은 상기 일엽초 추출물 현탁액을 헥산과 혼합하여 물층과 헥산층으로 분리하고, 헥산층으로부터 헥산 분획물을 얻는 단계; (d) 단계(c)에서의 물층을 메틸렌 클로라이드, 에틸아세테이트 및 부탄올과 순차적으로 혼합하여 메틸렌 클로라이드 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 및 부탄올 분획물을 얻는 단계를 포함하는 일엽초 추출물 분획물의 제조방법이 제공된다.
일 구현예에서, 단계(a)의 상기 C1 내지 C3 알코올은 50 ~ 80 %(v/v) 에탄올일 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 일엽초 추출물을 포함하는 피부 미백용 식품 조성물이 제공된다.
일 구현예에서, 상기 일엽초 추출물은 C1 내지 C3 알코올 및 물의 혼합 용매 추출물일 수 있으며, 바람직하게는 50 ~ 80 %(v/v) 에탄올의 추출물일 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 일엽초 추출물로부터 분획된 분획물로서, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물, 헥산 분획물, 메틸렌 클로라이드 분획물 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 1종의 분획물을 포함하는 피부 미백용 식품 조성물이 제공된다.
본 발명에 의해, 일엽초 추출물 또는 그 분획물(에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물, 헥산 분획물, 메틸렌 클로라이드 분획물)을 포함하는 조성물이 우수한 티로시나제 억제 활성을 나타냄으로써 미백용 조성물로 사용될 수 있다는 것이 밝혀졌다.
따라서, 본 발명의 일엽초 추출물 또는 그 분획물(에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물, 헥산 분획물, 메틸렌 클로라이드 분획물)을 포함하는 조성물은 기능성 화장품 및 기능성 식품 분야에서 미백 효능을 나타내는 천연물 소재로서 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 일엽초 추출물(crude extract)의 티로시나제 활성(tyrosinase activity) 억제에 대한 IC50를 측정한 그래프이다.
도 2는 일엽초 추출물의 에틸아세테이트 분획(Ethyl acetate fraction)의 티로시나제 활성(tyrosinase activity) 억제에 대한 IC50를 측정한 그래프이다.
도 3은 일엽초 추출물의 부탄올 분획(Butanol fraction)의 티로시나제 활성(tyrosinase activity) 억제에 대한 IC50를 측정한 그래프이다.
도 4는 일엽초 추출물의 헥산 분획(Hexane fraction)의 티로시나제 활성(tyrosinase activity) 억제에 대한 IC50를 측정한 그래프이다.
도 5는 일엽초 추출물의 메틸렌 클로라이드 분획(Methylene chloride fraction)의 티로시나제 활성(tyrosinase activity) 억제에 대한 IC50를 측정한 그래프이다.
도 2는 일엽초 추출물의 에틸아세테이트 분획(Ethyl acetate fraction)의 티로시나제 활성(tyrosinase activity) 억제에 대한 IC50를 측정한 그래프이다.
도 3은 일엽초 추출물의 부탄올 분획(Butanol fraction)의 티로시나제 활성(tyrosinase activity) 억제에 대한 IC50를 측정한 그래프이다.
도 4는 일엽초 추출물의 헥산 분획(Hexane fraction)의 티로시나제 활성(tyrosinase activity) 억제에 대한 IC50를 측정한 그래프이다.
도 5는 일엽초 추출물의 메틸렌 클로라이드 분획(Methylene chloride fraction)의 티로시나제 활성(tyrosinase activity) 억제에 대한 IC50를 측정한 그래프이다.
본 발명은 일엽초 추출물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 일엽초 추출물은 티로시나제 효소활성 저해 평가에서 IC50= 0.461을 나타내어, 우수한 티로시나제 억제 효능을 나타낸다.
일 구현예에서, 상기 일엽초 추출물은 C1 내지 C3 알코올 및 물의 혼합 용매 추출물일 수 있으며, 바람직하게는 50 ~ 80 %(v/v) 에탄올의 추출물일 수 있다.
본 발명은 또한, 일엽초 추출물로부터 분획된 분획물로서, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물, 헥산 분획물, 메틸렌 클로라이드 분획물 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 1종의 분획물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 화장료 조성물을 포함하는 화장품을 제공한다. 본 발명의 미백용 화장료 조성물은 기초 화장품, 메이크업 화장품 및 바디케어 화장품에 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
기초 화장품이란, 세안료, 메이크업 리무버, 화장수, 유액, 미용액, 페이스 크림, 팩, 아이케어 및 그 외 얼굴 스킨 케어용 화장품을 가리킨다. 예를 들면, 고형 비누, 세안 폼, 및 세안 파우더 등의 세안료; 클렌징 폼, 클렌징 크림, 클렌징 밀크, 클렌징 로션, 클렌징 젤, 클렌징 오일 및 클렌징 마스크 등의 메이크업 리무버; 리포솜 화장수, 유연 화장수, 수렴 화장수, 세정용 화장수 및 다층식 화장수 등의 화장수; 에몰리언트 로션, 모이스처 로션, 밀키 로션, 너리싱 로션, 너리싱 밀크, 스킨 모이스처, 모이스처 에멀젼, 마사지 로션 및 얼굴용 각질 스무저 등의 유액; 리포솜 화장수, 보습 미용액, 미백 미용액, 및 자외선 방지 미용액 등의 미용액; 에몰리언트 크림, 영양 크림, 모이스처 크림, 나이트 크림, 마사지 크림, 클렌징 크림, 메이크업 크림, 베이스 크림, 셰이빙 크림, 및 얼굴용 각질연화 크림 등의 크림; 필오프팩, 분말팩, 워싱팩, 오일팩, 및 클렌징 마스크 등의 팩; 아이세럼, 아이젤, 아이크림 등의 아이케어; 얼굴용 UV 프로텍트 에멀전, 선프로텍트, 선프로텍터, UV케어밀크, 선스크린, 선스크린 크림 및 선탠 크림 등의 UV 케어, 모이스처 젤 등의 젤, 페이스 필링, 페이스 슬리밍제 등의 그 외의 기초 화장품을 들 수 있다.
메이크업 화장품으로서는, 메이크업 베이스, 베이스 크림, 컬러 컨트롤 베이스, UV 차단 베이스 등의 화장 기초; 파우더 컨실러 및 크림, 리퀴드 컨실러 등의 컨실러; 파우더 파운데이션, UV 차단 파운데이션, 크림 파운데이션, UV 차단 크림 파운데이션 등의 파운데이션; 루스파우더, 프레스토파우더, 페이스컬러, 백분 등의 페이스파우더 등을 들 수 있다.
바디케어 화장품으로서는, 예를 들면, 바디로션, 바디오일 및 바디미스트 등의 바디로션; 바디크림, 바디밀크, 바디젤 및 바디무스 등의 바디크림; 보습용 립 크림, UV케어용 립 크림 및 컬러 립크림 등의 립크림; 핸드크림 및 핸드젤 등의 핸드크림; 바디용의 UV프로텍트에멀전, 선프로텍트, 선프로텍터, UV케어밀크, 선스크린, 선스크린 크림 및 선탠크림 등의 UV케어; 제모크림, 제모무스, 탈모왁스, 잔털 탈색제 및 체모용 셰이빙크림 등의 잔털처리; 풋마사지제, 풋슬리밍제, 풋필링제, 발뒤꿈치 등의 얼굴 이외의 각질제거제, 및 에몰리언트제 등의 풋케어; 데오도란트 로션, 데오도란트 파우더, 데오도란트 스프레이, 데오도란트 스틱 등의 제한방취제; 제충 스프레이 등의 인섹트 리펠러를 들 수 있다.
상기 화장품은 바람직하게는 스킨, 미스트, 세럼, 로션, 마스크팩, 아이크림 및 영양크림으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나일 수 있다.
상기 각 분획물은 (a) 일엽초를 C1 내지 C3 알코올 및 물의 혼합 용매로 추출하여 일엽초 추출물을 얻는 단계; (b) 단계(a)에서 얻은 상기 일엽초 추출물을 물에 현탁하여 일엽초 추출물 현탁액을 얻는 단계; (c) 단계(b)에서 얻은 상기 일엽초 추출물 현탁액을 헥산과 혼합하여 물층과 헥산층으로 분리하고, 헥산층으로부터 헥산 분획물을 얻는 단계; (d) 단계(c)에서의 물층을 메틸렌 클로라이드, 에틸아세테이트 및 부탄올과 순차적으로 혼합하여 메틸렌 클로라이드 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 및 부탄올 분획물을 얻는 단계를 포함하는 일엽초 추출물 분획물의 제조방법에 의해 제조될 수 있다.
일 구현예에서, 단계(a)의 상기 C1 내지 C3 알코올은 50 ~ 80 %(v/v) 에탄올일 수 있다.
본 발명은 또한, 일엽초 추출물을 포함하는 피부 미백용 식품 조성물을 제공한다.
일 구현예에서, 상기 일엽초 추출물은 C1 내지 C3 알코올 및 물의 혼합 용매 추출물일 수 있으며, 바람직하게는 50 ~ 80 %(v/v) 에탄올의 추출물일 수 있다.
본 발명은 또한, 일엽초 추출물로부터 분획된 분획물로서, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물, 헥산 분획물, 메틸렌 클로라이드 분획물 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 1종의 분획물을 포함하는 피부 미백용 식품 조성물을 제공한다.
이하, 본 발명을 실시예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이에 제한되는 것은 아니다.
<실시예>
1. 일엽초 추출물의 제조
건조된 일엽초 30 g을 분쇄기를 이용하여 잘게 분쇄하였다. 70%(v/v) 에탄올 300 ml을 넣고 80 ℃에서 12시간 동안 환류 냉각 추출하였다. 추출액을 침적시킨 후 상등액을 포집하였다. 잔여물은 다시 70% 에탄올 300 ml을 넣고 추가적으로 2회 반복 추출을 통해 상등액을 확보하였다. 상등액을 모두 모아 여과지(ADVANTEC, No. 2 및 No. 1)를 각각 이용하여 감압여과를 총 2회 진행하였다. 감압농축기를 사용하여 추출액을 충분히 농축하고, 동결건조기에 넣고 완전히 건조시켰다.
2. 일엽초 추출물의 용매별 분획물의 제조
상기 추출 과정에서 얻어진 일엽초 에탄올 추출물 3 g과 30 ml의 증류수를 분별깔때기에 넣고 충분히 섞어 준 다음, 헥산 70 ml을 넣고 흔들어 섞어준 뒤 층이 나눠질 때까지 방치하였다. 분별깔때기로부터 물층을 흘려보내 포집하여 다른 분별깔때기로 옮긴 후 다시 헥산 70 ml을 넣고 같은 과정을 2회 더 반복하여 헥산분획물을 얻었다.
남아있는 물층에 메틸렌 클로라이드(methylene chloride, MC) 70 ml을 넣고 섞어준 뒤 층이 나눠질 때까지 기다렸다가 MC 분획물을 포집하였다. 위 과정을 2회 더 반복하여 MC 분획물을 얻는다.
물층에 에틸아세테이트(ethyl acetate, EA) 70 ml을 넣고 섞어준 뒤 층이 나눠질 때까지 기다렸다가 물층을 흘려보내 포집하여 다른 분별깔때기로 옮긴 후 다시 EA 70 ml을 넣고 같은 과정을 2회 더 반복하여 EA 분획물을 얻었다.
물과 부탄올(butanol)을 1:1로 혼합하여 충분히 포화시킨 부탄올 70 ml을 물층에 넣고 흔들어 섞어준 뒤 층이 나눠질 때 까지 기다렸다가 물층을 흘려보내 포집하여 다른 분별깔때기로 옮긴 후 포화시킨 부탄올 70 ml을 넣고 같은 과정을 2회 더 반복하여 부탄올 분획물을 얻었다.
얻어진 각각의 분획물들을 감압농축기를 사용하여 추출액을 충분히 농축하고, 동결건조기에 넣고 완전히 건조시켰다.
3. 티로시나제 활성 저해 평가
(1) 일엽초 추출물과 각각의 분획물 시료를 DMSO에 녹여 100 mg/ml로 만들고, 양성대조군인 아스코르브산(ascorbic acid)은 PBS buffer(pH 6.5)를 이용해 만들었다. 그 다음, PBS buffer(pH 6.5)를 이용해 아스코르브산 액을 희석하여 농도 별로 제조하고 50 μl씩 분주한 다음 티로시나제 액[mushroom tyrosinase, 200 U/ml (in PBS buffer, pH 6.5)]을 제조하여 50 μl씩 넣고 37 ℃에서 10 분간 반응시켰다.
(2) 4 mM L-DOPA 용액(in PBS buffer)을 제조하여 반응용액에 50 μl씩 넣고 37 ℃에서 10 분간 반응시켰다.
(3) FITC(Fluorescein isothiocyanate)를 DMSO에 녹여 10 mg/ml로 제조한 후 PBS buffer를 이용하여 희석해 1.6 μM 용액을 제조하여 50 μl씩 넣고 형광 마이크로플레이트 판독기(fluorescence microplate reader)를 이용해 여기 파장(excitation) 480nm, 방출 파장(emission) 540 nm에서 형광 강도를 측정하였다.
4. 결과
상기 측정에 의해 얻어진 결과를 도 1 내지 도 5에 나타내었다. 일엽초 추출물 자체는 티로시나제 활성 저해 평가에서 IC50= 0.461 mg/ml을 나타내었다(도 1). 또한, 일엽초 추출물의 에틸아세테이트 분획물은 IC50= 0.217 mg/ml을 나타내었고(도 2), 일엽초 추출물의 부탄올 분획물은 IC50= 0.125 mg/ml(도 3), 일엽초 추출물의 헥산 분획물은 IC50= 0.397 mg/ml(도 4), 일엽초 추출물의 메틸렌 클로라이드 분획물은 IC50= 0.451 mg/ml(도 5)를 나타내었다. 상기 결과로부터, 일엽초 추출물은 그 자체로서 티로시나제 억제 활성을 나타내었고, 추가로 분획한 분획물은 모두 일엽초 추출물 자체보다 우수하거나 유사한 티로시나제 억제 활성을 나타내었고, 특히, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물, 헥산 분획물은 우수한 티로시나제 억제 활성을 나타내는 것으로 확인되었다.
Claims (10)
- 일엽초 추출물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물로서,
상기 일엽초 추출물은
(a) 일엽초를 C1 내지 C3 알코올 및 물의 혼합 용매로 추출하여 일엽초 추출물을 얻는 단계;
(b) 단계(a)에서 얻은 상기 일엽초 추출물을 물에 현탁하여 일엽초 추출물 현탁액을 얻는 단계;
(c) 단계(b)에서 얻은 상기 일엽초 추출물 현탁액을 헥산과 혼합하여 물층과 헥산층으로 분리하고, 헥산층으로부터 헥산 분획물을 얻는 단계; 및
(d) 단계(c)에서의 물층을 에틸아세테이트 및 부탄올로 구성되는 군으로부터 선택되는 1 이상과 순차적으로 혼합하여 에틸아세테이트 분획물 및 부탄올 분획물로 구성되는 군으로부터 선택되는 1 이상을 얻는 단계
를 포함하여 제조되는 일엽초 추출물 분획물을 포함하는, 화장료 조성물. - 삭제
- 제1항에 있어서, 단계(a)의 상기 일엽초 추출물이 50 ~ 80 %(v/v) 에탄올의 추출물인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 삭제
- (a) 일엽초를 C1 내지 C3 알코올 및 물의 혼합 용매로 추출하여 일엽초 추출물을 얻는 단계;
(b) 단계(a)에서 얻은 상기 일엽초 추출물을 물에 현탁하여 일엽초 추출물 현탁액을 얻는 단계;
(c) 단계(b)에서 얻은 상기 일엽초 추출물 현탁액을 헥산과 혼합하여 물층과 헥산층으로 분리하고, 헥산층으로부터 헥산 분획물을 얻는 단계; 및
(d) 단계(c)에서의 물층을 에틸아세테이트 및 부탄올로 구성되는 군으로부터 선택되는 1 이상과 순차적으로 혼합하여 에틸아세테이트 분획물 및 부탄올 분획물로 구성되는 군으로부터 선택되는 1 이상을 얻는 단계
를 포함하는 일엽초 추출물 분획물의 제조방법. - 제5항에 있어서, 단계(a)의 상기 C1 내지 C3 알코올이 50 ~ 80 %(v/v) 에탄올인 것을 특징으로 하는 제조방법.
- 일엽초 추출물을 포함하는 피부 미백용 식품 조성물로서,
상기 일엽초 추출물은
(a) 일엽초를 C1 내지 C3 알코올 및 물의 혼합 용매로 추출하여 일엽초 추출물을 얻는 단계;
(b) 단계(a)에서 얻은 상기 일엽초 추출물을 물에 현탁하여 일엽초 추출물 현탁액을 얻는 단계;
(c) 단계(b)에서 얻은 상기 일엽초 추출물 현탁액을 헥산과 혼합하여 물층과 헥산층으로 분리하고, 헥산층으로부터 헥산 분획물을 얻는 단계; 및
(d) 단계(c)에서의 물층을 에틸아세테이트 및 부탄올로 구성되는 군으로부터 선택되는 1 이상과 순차적으로 혼합하여 에틸아세테이트 분획물 및 부탄올 분획물로 구성되는 군으로부터 선택되는 1 이상을 얻는 단계
를 포함하여 제조되는 일엽초 추출물 분획물을 포함하는, 식품 조성물. - 삭제
- 제7항에 있어서, 단계(a)의 상기 일엽초 추출물이 50 ~ 80 %(v/v) 에탄올의 추출물인 것을 특징으로 하는 식품 조성물.
- 삭제
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- 2019-10-29 KR KR1020190135123A patent/KR102285926B1/ko active IP Right Grant
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| Arabian Journal of Chemistry, Vol.8, No.3(2015), pp.407-413(2014.12.16.) 1부.* |
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