KR102277088B1

KR102277088B1 - 동백 오일, 아르간 오일, 및 모링가 오일의 발효물을 포함하는 나노에멀젼 및 이의 제조 방법

Info

Publication number: KR102277088B1
Application number: KR1020200032925A
Authority: KR
Inventors: 장기영; 주광식; 이선미; 윤종석; 김태희; 배지영
Original assignee: 주식회사 티에스트릴리온
Priority date: 2020-03-18
Filing date: 2020-03-18
Publication date: 2021-07-14

Abstract

동백 오일, 아르간 오일, 및 모링가 오일의 발효물을 포함하는 화장료 조성물 및 이의 제조 방법에 관한 것으로, 동백 오일, 아르간 오일, 및 모링가 오일의 발효물을 유효성분으로 포함하는 두피 개선 또는 탈모 방지에 사용하기 위한 화장료 조성물 및 이의 용도를 제공한다.

Description

동백 오일, 아르간 오일, 및 모링가 오일의 발효물을 포함하는 나노에멀젼 및 이의 제조 방법{Nanoemulsion comprising fermented product of camellia oil, argan oil, and moringa oil and manufacturing method thereof}

동백 오일, 아르간 오일, 및 모링가 오일의 발효물을 포함하는 나노에멀젼 및 이의 제조 방법에 관한 것이다.

두피는 표피(epidermis), 진피(dermis), 피하조직(subcutaneous tissue), 모낭(follicle), 땀샘(sweat gland), 피지샘(oil gland) 등으로 구성되어 있다. 두피는 두피는 혈액순환이 나빠지거나 영양공급이 원활하지 못하면 비듬, 염증, 피지과다, 가려움증, 지루성두피, 두피트러블 등의 문제성 두피로 발전하는 경우가 많으며, 이는 건강한 두피모발 환경을 방해하여 탈모로 이어지는 경우가 많다.

또한, 미용을 중시하는 현대사회에서는 개성표현 욕구를 충족시키기 위하여 많은 사람들이 염모제, 퍼머제 등을 사용하고 있다. 그러나, 일부 민감성 두피의 경우는 이러한 염색, 퍼머 등의 화학적 시술로 인해 두피의 가려움이나 따가움과 같은 자극현상과 염증이 유발되며, 이는 환경적 탈모를 일으키고 있다.

이와 같이, 여러 가지 원인에 의한 환경으로부터의 자극, 스트레스, 화학적 시술 등으로부터 두피를 보호하고, 탈모를 방지하면서 모발 생장을 촉진할 수 있고, 생태계 친화적이면서 환경과 인간에 무해한 성분에 관한 연구가 지속되고 있다.

이러한 기술적 배경 하에서, 비듬 억제, 탈모 방지, 염증 억제, 영양 공급, 혈액순환 개선 등으로 두피를 보호하고 탈모를 방지하기 위한 다각적인 연구가 진행되고 있으나(한국 등록특허 제10-0781470 호), 아직은 미비한 실정이다.

두피 개선 또는 탈모 방지에 사용하기 위한 나노에멀젼 조성물을 제공한다.

두피 개선 또는 탈모 방지에 사용하기 위한 화장료 조성물을 제공한다.

두피 개선 또는 탈모 방지에 사용하기 위한 나노에멀젼 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.

두피를 개선하거나 탈모를 방지하는 방법을 제공한다.

본 출원에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 출원에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 출원의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 출원의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.

일 양상은 동백 오일, 아르간 오일, 및 모링가 오일의 발효물을 유효성분으로 포함하는 나노에멀젼 조성물을 제공한다.

용어 "동백 오일"은 동백나무(Camillia japonica)에서 얻어지는 오일을 말한다. 동백 오일은 동백나무의 하나 이상의 부위를 건조, 분쇄한 후, 착유나 용매를 사용하여 추출하는 방식을 통해 얻어질 수 있고, 예를 들어 동백나무의 종자에서 얻어질 수 있다. 동백 오일은 오메가-3, 오메가-6 등의 불포화 지방산이 많이 함유되어 있는 것으로 알려져 있으며, 특히 올레익산(oleic acid)이 많이 함유되어 있을 수 있다. 올레익산은 활성 산소를 제거하는 데 도움을 주며, 피부 내 수분의 탈수 방지 효과, 보호막 형성과 같은 작용을 할 수 있다.

용어 "아르간 오일"은 아르간 나무 열매의 씨앗에서 유래한 오일 성분을 의미한다. 아르간 오일은 피부에 유익하며, 천연 피부 장벽의 기능을 회복하는 데 도움을 준다고 알려져 있다. 또한, 아르간 오일은 피부가 지성인 경우 피지 수치를 줄여준다는 것이 밝혀졌다. 따라서, 아르간 오일이 여드름 발생을 최소화하는 데 잠재적으로 도움을 줄 수 있을 것으로 예상된다.

용어 "모링가 오일"은 모링가 나무의 씨앗에서 추출되는 오일을 의미한다. 상기 모링가 나무는 학명 Moringa oleifera일 수 있다. 모링가 오일은 요오드, 알칼로이드, 탄닌, 사포닌, 피토스테롤 등의 영양성분 또는 항산화 성분이 함유되어 있는 것으로 알려져 있다. 특히, 모링가 오일은 불포화 지방산인 올레인산의 함유량이 높아 피부 수준을 유지시켜 건조함을 막아주는 효과를 나타낼 수 있다. 또한, 모링가 오일은 여드름 또는 블랙헤드를 제거하는 효과를 발현할 수 있다.

용어 "발효"는 미생물이 자신이 가지고 있는 효소를 이용하여 유기물을 분해시키는 과정 중 부패 반응이 아닌 것을 의미한다. 발효 반응과 부패 반응은 비슷한 과정에 의해 진행되지만, 분해 결과 유용한 물질이 만들어지면 발효라고 하고 악취가 나거나 유해한 물질이 만들어지면 부패라고 한다. "발효물"은 상기 발효를 통해 생산되는 모든 물질을 의미한다. 발효물을 수득하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야 또는 유사 분야에서 통상적으로 사용되는 방법에 따라 수득할 수 있다. 일 실시예에 따르면, 상기 발효는 Candida bombicola Y36에 의한 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

용어 "나노에멀젼(Nanoemulsion)"은 입자의 크기가 나노 단위인 에멀젼을 말한다. 상기 용어 "나노"는 10^-9를 의미하는 접두어이다. 상기 입자의 크기는 약 1 내지 1000 nm, 약 1 내지 800 nm, 1 내지 600 nm, 약 1 내지 500 nm, 약 1 내지 450 nm, 약 1 내지 400 nm, 약 1 내지 350 nm, 약 1 내지 300 nm, 약 1 내지 250 nm, 약 1 내지 200 nm, 약 1 내지 150 nm, 약 1 내지 100 nm, 약 1 내지 90 nm, 약 1 내지 80 nm, 약 1 내지 70 nm, 약 1 내지 60 nm, 약 1 내지 50 nm, 약 1 내지 40 nm, 약 1 내지 30 nm, 약 1 내지 20 nm, 약 1 내지 10 nm일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

용어 "에멀젼(emulsion)"은 서로 녹지 않는 두 가지 액체의 한 편이 유화제의 기능으로 다른 쪽에 작은 입자 상태로 분산된 상태를 의미할 수 있다. 일 실시예에 따른, 상기 나노에멀젼은 안정성이 우수하고, 화장료에 적용시 작은 입자 크기로 인해 유효성분의 침투를 도와 탁월한 두피 개선, 탈모 방지 등의 효과를 나타낼 수 있다.

상기 "유화제"는 서로 녹지 않는 두 가지 액체의 한 편이 다른 쪽에 작은 입자 상태로 수용화, 수화 또는 녹일 수 있도록 기능하는 물질을 의미하며, 계면활성제를 포함하는 개념이다.

상기 "계면활성제"는 분자 내에 친수성부분과 소수성부분을 동시에 가지고 있는 화합물일 수 있다. 상기 계면활성제는 예를 들어, 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 또는 양성 계면 활성제이다.

상기 비이온성 계면 활성제는, 예를 들어 자기 유화형 모노스테아르산 글리세린, 프로필렌 글리콜 지방산 에스테르, 글리세린 지방산 에스테르, 폴리글리세린 지방산 에스테르, 솔비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시 에틸렌(polyoxy ethylene: POE) 솔비탄 지방산 에스테르, POE 솔비트 지방산 에스테르, POE 글리세린 지방산 에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산 에스테르, POE 경화 피마자유, POE 피마자유, 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌(polyoxyethylene-polyoxypropylene: POE-POP) 공중합체, POE-POP 알킬에테르, 폴리에테르 변성 실리콘, 라우린산 알카놀 아미드, 알킬아민 옥시드, 또는 수소첨가 대두 인지질이다.

상기 음이온성 계면 활성제는, 예를 들어 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인산염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐 펩티드염, 또는 퍼플루오로알킬 인산에스테르일 수 있다.

상기 양이온성 계면 활성제는, 예를 들어 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 또는 라놀린 유도체 제4급 암모늄염일 수 있다.

상기 양성 계면 활성제는, 예를 들어 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 또는 아미드아민형 양성 계면 활성제일 수 있다.

상기 나노에멀젼은 두피 상태 개선 또는 탈모 방지에 사용할 수 있다. 상기 "개선"은 상태의 완화 또는 치료와 관련된 파라미터, 예를 들면 질병과 관련된 증상의 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미할 수 있다.

상기 "두피 상태 개선"은 두피 질환의 개선 또는 완화를 포함하여, 두피의 내재적 요인 또는 외인적인 요인에 의하여 유발되는 두피의 상태를 치료, 경감, 완화시키는 과정 또는 그의 효과 등을 포괄적으로 의미할 수 있다. 상기 두피 상태 개선은 예를 들어 두피 염증 개선, 비듬 생성 억제, 영양 공급, 혈액순환 개선, 상처 재생에 의해 나타내는 것으로 해석될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 두피 질환은 두피에서 발생하는 모든 질환을 포함하며, 예를 들어 탈모, 모발손상, 두피 염증, 건선, 아토피, 지루성 피부염, 습진, 백반, 두드러기, 한포진(dyshidrotic eczema), 여드름, 비듬, 가려움증, 또는 민감성 두피가 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 "두피 염증 개선"은 두피의 염증성 사이토카인의 발현 억제 등을 포함하는, 생리학적 또는 병리학적으로 발생한 두피의 염증 반응을 완화 또는 개선시키는 모든 작용을 의미할 수 있다.

상기 "비듬 생성 억제"는, 피지분비, 비듬 원인균 등에 의한 두부의 피부표면에서 각질이 떨어지는 것을 방지하는 것을 의미한다. 상기 비듬 생성의 원인으로는 자연적 현상, 피지분비의 증가, 비듬 원인균, 대사작용 이상에 의한 두피 세포의 분열증가 등이 포함될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 "탈모"란 정상적인 발모 수준을 벗어나 머리카락의 숫자가 일반적인 숫자보다 적은 경우라면 특별한 제한 없이 이에 속할 수 있으며, 바람직하게는 남성형 탈모, 여성형 탈모, 원형 탈모 및 휴지기 탈모 중 어느 하나 이상일 수 있다.

상기 "탈모 방지"는, 유전적인 원인, 호르몬 불균형, 사회생활의 정신적 스트레스, 대기오염 노출, 가공 식품의 섭취 등의 다양한 습관과 환경적 영향으로 인하여 정상적으로 모발이 존재해야 할 부위에 모발이 없는 상태를 개선하고, 탈모가 진행되는 것을 방지하고 털이 나는 것을 의미한다. 따라서, 탈모 방지는 털이 나는 것을 의미하는 "발모", 털이 자라나게 하는 것을 의미하는 "육모"를 포함할 수 있다.

일 양상에 따른 나노에멀젼은, 두피 염증 억제; 비듬 생성균 억제; 탈모 방지 및 모발 생성 촉진 등의 효과를 나타냄으로써, 두피 개선 및 탈모 방지 효과가 우수하다.

상기 나노에멀젼은 동백 오일, 아르간 오일, 및 모링가 오일 다양한 중량비로 발효시킨 발효물을 포함할 수 있다. 예를 들어, 동백 오일, 아르간 오일, 및 모링가 오일을 약 1 내지 20 : 1 내지 20 : 1 내지 10의 중량비, 약 1 내지 15 : 1 내지 20 : 1 내지 8의 중량비, 약 1 내지 20 : 1 내지 15 : 1 내지 6의 중량비, 약 1 내지 15 : 1 내지 20 : 1 내지 5의 중량비, 약 1 내지 20 : 1 내지 15 : 1 내지 4의 중량비, 약 1 내지 15 : 1 내지 20 : 1 내지 3의 중량비, 약 1 내지 20 : 1 내지 15 : 1 내지 2의 중량비, 약 1 내지 15 : 1 내지 15 : 1 내지 10의 중량비, 약 1 내지 15 : 1 내지 10 : 1 내지 8의 중량비, 약 1 내지 10 : 1 내지 15 : 1 내지 6의 중량비 1 내지 15 : 1 내지 10 : 1 내지 5의 중량비, 약 1 내지 10 : 1 내지 15 : 1 내지 3의 중량비, 약 1 내지 15 : 1 내지 15 : 1 내지 2의 중량비, 약 1 내지 10 : 1 내지 10 : 1 내지 10의 중량비, 약 1 내지 5 : 1 내지 10 : 1 내지 8의 중량비 1 내지 10 : 1 내지 5: 1 내지 6의 중량비, 약 1 내지 5 : 1 내지 10 : 1 내지 5의 중량비, 약 1 내지 10 : 1 내지 5 : 1 내지 4의 중량비, 약 1 내지 5 : 1 내지 10 : 1 내지 3의 중량비, 약 1 내지 10 : 1 내지 5 : 1 내지 2의 중량비로 발효시킨 발효물을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

다른 양상은 상기 나노에멀젼 조성물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

상기 화장료 조성물은 상기 나노에멀젼을 화장품학적으로 유효한 양(cosmetically effective amount); 및/또는 화장품학적으로 허용되는 담체를 포함하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

용어 "화장품학적으로 유효한 양"은 상기 화장료 조성물의 두피 상태 개선 또는 탈모 방지 등의 바람직한 효능을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다. 상기 유효한 양은 당업자가 적절하게 선택할 수 있다. 예를 들어, 상기 유효한 양은 상기 조성물 1,000 mg 당 약 0.01 mg 내지 1,000 mg, 약 0.01 mg 내지 500 mg, 약 0.01 mg 내지 250 mg, 약 0.01 mg 내지 100 mg, 약 0.01 mg 내지 25 mg, 약 0.01 mg 내지 10 mg, 약 0.01 mg 내지 1 mg, 약 0.1 mg 내지 500 mg, 약 0.1 mg 내지 250 mg, 약 0.1 mg 내지 100 mg, 약 0.1 mg 내지 25 mg, 약 0.1 mg 내지 10 mg, 약 0.1 mg 내지 1 mg, 약 1 mg 내지 500 mg, 약 1 mg 내지 250 mg, 약 1 mg 내지 100 mg, 약 1 mg 내지 25 mg, 약 1 mg 내지 10 mg, 약 1 mg 내지 5 mg일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양한 양을 포함할 수 있다.

상기 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 에멀젼, 화장수, 에센스, 파운데이션, 파우더, 로션, 크림, 팩, 겔, 연고, 패치, 분무제, 마스크 시트, 세정제, 용액, 현탁액, 페이스트, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 화장료 조성물은 두피에 적용할 수 있으며, 예를 들어 헤어토닉, 헤어컨디셔너, 헤어에센스, 헤어로션, 헤어영양로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 헤어크림, 헤어영양크림, 헤어모이스처크림, 헤어맛사지크림, 헤어왁스, 헤어에어로졸, 헤어팩, 헤어영양팩, 헤어비누, 헤어클렌징폼, 머릿기름, 모발건조제, 모발보존처리제, 모발염색제, 모발용 웨이브제, 모발탈색제, 헤어겔, 헤어글레이즈, 헤어드레싱어, 헤어래커, 헤어모이스처라이저, 헤어무스 및 헤어스프레이 중 어느 하나의 제형일 수 있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 예를 들어, 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 에멀젼인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르를 포함할 수 있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서의 발효물 및 담체 성분 이외에, 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예를 들어, 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제를 포함할 수 있다.

또 다른 양상은 동백 오일, 아르간 오일, 및 모링가 오일의 칸디다(Candida) 속 균주로 인큐베이션하여 발효물을 얻는 단계; 및 상기 발효물을 균질화하는 단계를 포함하는 나노에멀젼의 제조 방법을 제공한다.

상술한 설명에서 언급된 용어 또는 요소 중 이미 언급된 것과 동일한 것은 상술한 바와 같다.

상기 제조 방법은 칸디다 속 균주를 배양하는 전 처리 단계를 추가로 포함할 수 있다. 상기 칸디다 속 균주는 모든 상기 발효물을 생성시킬 수 있는 모든 칸디다 속 균주를 포함하며, 예를 들어 Candida bombicola이다.

상기 인큐베이션하는 온도는 특별히 제한되지 않으나, 예를 들어 약 0℃ 내지 100℃, 약 0℃ 내지 90℃, 약 5℃ 내지 80℃, 약 10℃ 내지 70℃, 약 10℃ 내지 60℃, 약 10℃ 내지 50℃, 약 10℃ 내지 40℃, 약 15℃ 내지 30℃, 약 15℃ 내지 30℃, 약 15℃ 내지 25℃, 또는 약 15℃ 내지 약 20℃이다.

상기 균질화는 불균질한 혼합물의 각 성분을 미세한 입자상으로 분산시켜 전체를 균질하게 하는 방법으로, 기계적 처리방법과 화학적 처리방법이 있다. 기계적 또는 화학적 처리방법에 따라 에멀젼의 형태가 달라질 수 있다.

상기 기계적 처리방법은 연마기(Grinder), 분쇄기(Mill), 균질화기(Homogenizer), 초음파처리기(Sonicator), 플루이다이져(fluidizer) 또는 이들의 조합으로 수행할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 균질화기는 예를 들어 고압균질화기(high pressure homogenizer)가 있으며, 고압균질화기는 고압의 미세노즐을 통과시킬 때 발생하는 충격력, 전단력, 캐비테이션(cavitation) 및 이러한 공정의 반복으로 상기 에멀젼를 나노화할 수 있다.

일 양상에 따른 조성물에 의하면, 동백 오일, 아르간 오일, 및 모링가 오일의 발효물을 포함하는 나노에멀젼은 두피 염증 억제, 비듬 생성균 억제, DKK-1 억제에 의한 탈모 방지 및 모발 생성 촉진 등의 우수한 효과를 나타내므로 두피 개선 또는 탈모 방지에 사용할 수 있으며, 그 자체가 안정하면서도 입자 크기가 매우 작은 나노에멀젼 제형으로 제조될 수 있어, 화장료에 적용시 유효성분의 피부 침투를 도와 상기 효과의 탁월한 상승작용(synergism)을 기대할 수 있다.

도 1은 나노에멀젼인 비교예 2와 실시예 2를 제조한 직후 육안으로 관측한 결과이다.
도 2는 나노에멀젼인 실시예 2의 입자 크기를 입도 분석기(Zetasizer nano ZS, MALVERN Co.)로 분석한 결과이다.
도 3은 LPS에 의해 유도된 NO가 비교예 2 또는 실시예 2에 의해 저해되는지 확인한 결과이다.
도 4는 LPS에 의해 유도된 IL-6의 발현이 비교예 2 또는 실시예 2에 의해 저해되는지 확인한 결과이다.
도 5는 비듬 생성의 원인균으로 알려진 Malassezia furfur 균주를 대상으로 비교예 2 또는 실시예 2의 최소 저해 농도(Minimum Inhibitory Concentration: MIC)를 확인한 결과이다.
도 6은 Wnt/β-catenin신호 경로의 작용을 억제하여 탈모를 일으키는 것으로 알려진 DKK-1의 발현을 비교예 2 또는 실시예 2가 억제하는지 확인한 결과이다.

실시예 1. 동백 오일, 아르간 오일 및 모링가 오일의 발효물 제조

동백 오일, 아르간 오일 및 모링가 오일의 발효물을 제조하고자 하였다. 구체적으로, 종균 배양을 위해 Candida bombicola Y36를 1x10⁶ 세포/ml의 농도로 효모속 미생물 기본 배지인 YM 배지에 접종하여, 25℃, 150rpm의 호기적 조건에서 24시간 동안 종균 배양하였다. 하기 표 1의 1 차 발효 배지 조성으로 배지를 구성한 후배양이 끝난 종균배양액을 10% 접종하여 25℃, 1 vvm 조건에서 300 rpm으로 48 시간 동안 배양하였다. 그 후, 하기 표 1의 2 차 발효 배지 조성으로 배지를 구성한 뒤, 1 차 발효물을 1:9 비율(1차 발효물:2차 발효 배지 = 1:9)로 접종하고, 25℃, 1vvm 조건에서 300 rpm으로 96 시간 동안 배양하였다. 발효가 완료된 후 배지층과 오일층을 분리하여 오일층을 수득하였다. 실리카겔로 잔존하는 수분을 제거하여 발효 동백 오일, 아르간 오일 및 모링가 오일을 제조하였다.

No.	원료	1차 발효(g/L)	2차 발효(g/L)
1	글리세롤	10	10
2	동백 오일	-	300
3	아르간 오일		300
4	모링가오일		150
5	옥틸도데칸올	100	-
6	올레일알코올	100	-
7	Yeast extract	1	1
8	KH₂PO₄	1	1
9	MgSO₄	0.7	0.7
10	CaCl₂	0.3	0.3
11	NaCl	0.05	0.05
12	NH₄Cl	1.5	1.5
13	NaNO₃	5	5

비교예 1. 발효시키지 않은 식물성 오일의 제조

발효시키지 않은 동백오일, 아르간 오일 및 모링가 오일을 1:1:0.5의 비율로 혼합한 식물성 오일을 제조하였다.

실시예 2. 나노에멀젼의 제조

상기 제조한 실시예 1을 이용하여 하기 표 2와 같은 조성으로 나노에멀젼을 제조하고자 하였다. 구체적으로, 메인 용해조에 부틸렌글라이콜, 글리세린, 수첨 대두레시틴, 및 세라마이드를 첨가한 후 80℃에서 가온 교반하여 완전히 용해시켰다. 별도의 용해조에 실시예 1, 토코페롤, 글리세릴올리에이트, 및 글리세릴시트레이트/락테이트/리놀리에이트/올리에이트를 첨가하여 70℃에서 가온 교반하여 용해시켰다. 상기 별도의 용해조에서 용해시킨 용해물을 메인 용해조에 첨가한 후 70℃에서 5 분간 교반하여 균일화하였다. 증류수를 첨가하고 5 분간 추가적으로 교반하여 1 차 균일화물을 제조하였다. 제조된 1 차 균일화물을 고압균질화기(High pressure homogenizer)를 이용하여 1,000 bar에서 2 회 처리한 후 안정화된 나노에멀젼을 수득하였다.

비교예 2. 실시예 2의 대조군 제조

실시예 1 대신 비교예 1를 첨가한 것을 제외하고는 실시예 2와 동일하게 제조하였다. 구체적인 조성은 하기 표 2와 같다.

No.	원료	비교예 2 (%, w/w)	실시예 2 (%, w/w)
1	부틸렌글라이콜	10	10
2	수첨 대두레시틴	5	5
3	비교예 1	10	-
4	실시예 1	-	10
5	글리세린	50	50
6	글리세릴올리에이트	0.5	0.5
7	글리세릴시트레이트/락테이트/리놀리에이트/올리에이트	1	1
8	세라마이드	0.5	0.5
9	토코페롤	0.1	0.1
10	헥산다이올	2	2
11	증류수	To 100	To 100

실시예 3. 나노에멀젼의 안정성 확인

제조한 비교예 2 및 실시예 2의 안정성을 확인하고자 나노에멀젼의 제조 직후 및 50℃에서 1 개월 보관 후의 시점에서 각각 입도 및 성상을 평가하였다. 구체적으로, 비교예 2 및 실시예 2의 성상은 육안으로 확인하였으며, 입자 크기는 입도 분석기(Zetasizer nano ZS, MALVERN Co.)를 이용하여 분석하였다.

그 결과, 하기 표 3 및 도 1에 나타낸 바와 같이, 실시예 2에서는 황색의 투명한 액체 성상을 나타내는 바와 달리, 비교예 2는 반투명한 성상이 나타남을 육안으로 확인할 수 있었으며, 50℃ 조건에서 1 개월이 경과한 후에는 분리가 발생하였음을 확인하였다. 비교예 2의 경우 유연하지 못한 지질막이 형성되어, 오일과 지질막의 극성 밸런스가 무너져 오일이 배어나게 되고, 결국에는 투명성을 상실하여 상분리로 이어지는 것으로 보인다.

또한, 하기 표 3 및 도 2에 나타낸 바와 같이, 실시예 2의 경우 입자 크기는 평균 약 60 nm임을 확인하였고, 50℃ 조건에서 1 달이 경과한 후에도 입자 크기는 62 nm로 유사하게 유지되고 있음을 확인하였다. 실시예 2는 발효 오일에 포함된 당지질의 영향으로 유연하고 견고한 지질막을 형성하였으며, 지질막과 발효오일의 극성 밸런스를 맞춰주어 안정한 나노에멀젼으로 제조된 것으로 보인다.

반면, 일반 식물성 오일로 제조된 나노에멀젼인 비교예 2의 경우 평균 입자 크기는 약 350 nm로 발효 오일로 제조된 나노에멀젼 대비 5 배 내지 6 배 이상 입자 크기가 큰 것을 확인할 수 있었으며, 불안정한 나노에멀젼이 형성되었음을 알 수 있었다.

	성분	비교예 2	실시예 2
제조 직후	입자 크기(nm)	350	60
제조 직후	성상	황색의 반투명 액체	황색의 투명한 액체
제조 한달 후 (50℃)	입자 크기(nm)	관측 불가	62
	성상	-	황색의 투명한 액체
	비고	분리 발생	-

실시예 4. NO 생성 저해에 따른 항염증 효과 확인

실시예 2의 항염증 활성을 측정하기 위하여, Lipopolysaccharide(LPS)로 자극을 유도하여 실시예 2의 Nitric oxide(NO) 생성 저해능을 분석하였다.

구체적으로, 생쥐의 대식세포인 RAW264.7 세포를 수차례 계대배양하고, 웰 하나에 3×10⁵ 개씩 들어가도록 24-웰 플레이트에 넣은 후, 24 시간 동안 배양시켰다. 이어서, 0.5 %의 농도로 실시예 2 또는 비교예 2를 희석한 세포 배지로 교체하였다. 이 때, NO-생성 억제물질인 L-NMMA(L-NG-Monomethylarginine)을 양성 대조군으로 함께 처리하여 30분 동안 배양하였고, 자극원으로 LPS(Lipopolysaccharide)를 100 mg/mL씩 처리하여 24 시간 동안 배양하였다. 상층액을 100 μl씩 취해 96-웰 프레이트에 옮기고, GRIESS 용액을 100 μl씩 가해 상온에서 10분간 반응시키고, 540 nm에서의 흡광도를 측정함으로써 실시예 2 또는 비교예 2의 NO 억제 효과를 판단하였다. 모든 결과값은 3회 이상의 독립적인 실험을 거쳐 평균±표준편차(SD)로 나타내었다.

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 실시예 2는 발효시키지 않은 오일의 나노에멀젼인 비교예 2와 비교하였을 때 LPS에 의해 유도된 NO의 생성을 저해하는 효과가 뛰어남을 확인할 수 있었다.

실시예 5. IL-6 발현 저해에 따른 항염증 효과 확인

실시예 2의 항염증 효과를 확인하기 위하여, 전염증성 시토카인인 IL-6의 생성 억제 활성을 분석하고자 하였다.

구체적으로, RAW 264.7 세포를 48-웰 플레이트에 넣고 18 시간 동안 부착시켰다. 0.5 % 농도의 실시예 2 및 비교예 2를 LPS 100 ng/mL와 함께 처리하여 일정시간 배양하였다. 이후 배양 배지를 원심분리(12,000 rpm, 3 min) 하여 얻어진 상층액의 IL-6 생성 함량을 측정하였다. 모든 시료는 정량 전까지 냉동보관(-20℃) 하였다. IL-6는 mouse enzyme-linked immnunosorbent assay (ELISA) kit (R&D Systems Inc., Minneapolis, MN, USA)를 이용하여 정량하였다.

그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 실시예 2는 발효시키지 않은 오일의 나노에멀젼인 비교예 2와 비교하였을 때 LPS에 의해 유도된 IL-6의 발현을 저해하는 효과가 뛰어남을 확인할 수 있었다.

실시예 6. Malassezia furfur 균주를 이용한 항비듬 효과 확인

비듬 생성의 원인균으로 알려진 Malassezia furfur 균주를 이용하여 최소저해농도(MIC)를 측정함으로써 실시예 2의 항비듬 효과를 확인하고자 하였다.

구체적으로, 3.6 ml의 배지에 2x10⁶ 세포/mL의 농도로 Malassezia furfur 균을 접종하였다. 이어서, 상기 비교예 2 및 실시예 2의 시료를 5,000~156 ppm 수준으로 희석하여 전체 용적 4 ml가 되도록 첨가하였다. 그 후, 30℃조건에서 2~3 일간 배양하였고, MIC 효과를 확인하기 위해 육안 관찰 및 분광광도계를 활용하여 660 nm 조건에서 탁도를 측정하였다.

그 결과, 하기 표 4 및 도 5에 나타낸 바와 같이, 실시예 2의 경우 최소저해농도인 2500 ppm에서 Malassezia furfur 균의 성장을 억제하였으나, 비교예 2의 경우 5000 ppm까지 농도를 상승시켜도 Malassezia furfur 균의 성장을 억제하지 못함을 확인할 수 있었다.

No.	성분	MIC(ppm)
1	비교예 2	-
2	실시예 2	2,500

실시예 7. DKK-1 발현 저해에 따른 탈모 방지 효과 확인

인간모유두세포 내에서 DKK-1의 발현 저해를 평가하여 실시예 2의 탈모 예방 및 개선 효과를 확인하고자 하였다. DKK-1은 세포 괴사를 촉진하여 탈모를 유발하는 대표적인 negative 시토카인 중의 하나로, 남성호르몬(dihydrotestosterone: DHT)의 유도물질인 DKK-1 단백질이 Wnt/β-catenin신호 경로의 작용을 억제하여 탈모를 일으키는 것으로 알려져 있다.

구체적으로, 모유두세포를 4x10⁵세포/웰의 밀도로 6-웰 플레이트에 시딩(seeding)한 후 16 시간 동안 배양하였다. 이후, 배양 배지를 무혈청 배지로 교체한 뒤, ⅰ)미처리군(Control), ⅱ)DHT만을 처리한 군(Non-treated), ⅲ)DHT 및 미녹시딜 100 μM을 처리한 군(Minoxidil 100 μM), ⅳ) DHT 및 비교예 2(1 %)를 처리한 군, ⅴ) DHT 및 실시예 2(1 %)를 처리한 군으로 나누어 각 물질을 첨가하여 24 시간 동안 배양하였다. 상기 배양된 세포로부터 mRNA를 추출한 뒤, cDNA synthesis kit & PCR pre-mix (Intron, Korea)를 사용하여, 상기 추출된 mRNA를 역전사시켰다. 각각의 cDNA를 합성한 후 중합효소연쇄반응(PCR)을 진행하였다. 최종적으로, DKK-1의 발현 정도를 ELISA를 이용해 확인하였다.

그 결과, 도 6에 나타낸 바와 같이, DHT에 의해 유도된 DKK-1의 발현이 비교예 2에서는 약 5% 억제되었으나, 실시예 2의 경우 33 %까지 감소함을 확인하였으며, 실시예 2가 탈모 방지 효과를 가지고 있음을 알 수 있었다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims

동백 오일, 아르간 오일, 및 모링가 오일의 발효물을 유효성분으로 포함하는 나노에멀젼 조성물로서,
상기 발효물은 칸디다(Candida) 속 균주에 의해 발효된 것인 나노에멀젼 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 나노에멀젼의 입자의 크기는 1 내지 300 nm인 것인 나노에멀젼 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 조성물은 유화제를 더 포함하는 것인 나노에멀젼 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 발효물은 동백 오일, 아르간 오일, 및 모링가 오일을 1 내지 10 : 1 내지 10 : 1 내지 5의 중량비로 발효한 것인 나노에멀젼 조성물.
청구항 1에 있어서, 두피 상태 개선 또는 탈모 방지를 위한 것인 나노에멀젼 조성물.
청구항 5에 있어서, 상기 두피 상태 개선 또는 탈모 방지는 하기 중 하나 이상의 효과를 갖는 것인 나노에멀젼 조성물:
(a) 두피 염증 완화;
(b) 비듬 생성 억제;
(c) 탈모 방지; 및
(d) 모발 생성 촉진.
청구항 1의 나노에멀젼 조성물을 포함하는 화장료 조성물.
청구항 7에 있어서, 상기 화장료 조성물은 에멀젼, 화장수, 에센스, 파운데이션, 파우더, 로션, 크림, 팩, 젤, 연고, 패치, 분무제, 마스크 시트 및 세정제 중 어느 하나의 제형인 것인 화장료 조성물.
청구항 7에 있어서, 상기 화장료 조성물은 헤어토닉, 헤어컨디셔너, 헤어에센스, 헤어로션, 헤어영양로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 헤어크림, 헤어영양크림, 헤어모이스처크림, 헤어맛사지크림, 헤어왁스, 헤어에어로졸, 헤어팩, 헤어영양팩, 헤어비누, 헤어클렌징폼, 머릿기름, 모발건조제, 모발보존처리제, 모발염색제, 모발용 웨이브제, 모발탈색제, 헤어겔, 헤어글레이즈, 헤어드레싱어, 헤어래커, 헤어모이스처라이저, 헤어무스 및 헤어스프레이 중 어느 하나의 제형인 화장료 조성물.
동백 오일, 아르간 오일, 및 모링가 오일의 칸디다(Candida) 속 균주로 인큐베이션하여 발효물을 얻는 단계; 및
상기 발효물을 균질화하는 단계를 포함하는 나노에멀젼의 제조 방법.
청구항 10에 있어서, 상기 발효물은 Candida bombicola에 의해 발효되는 것인 방법.