KR102504560B1 - 피부외용제 조성물 - Google Patents

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임승은
최일순
김한영
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Abstract

블루프래그 아이리스를 포함하는 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부외용제 조성물에 관한 것이다.

Description

피부외용제 조성물{SKIN EXTERNAL COMPOSITION}
피부외용제 조성물에 관한 것이다.
두피는 표피(epidermis), 진피(dermis) 및 피하조직(subcutaneous tissue)으로 구성되어 있으며, 가장 바깥 조직이 표피이다. 표피는 신체의 민감한 조직을 손상 받지 않도록 보호해주는 기능을 한다. 그러나 외부의 온도, 습도의 변화, 공해물질 등의 여러 가지 물리적, 화학적 외부의 자극과 스트레스, 영향 결핍 등으로 인해 두피의 기능을 상실할 수 있으며, 나아가서는 탈모에도 영향을 미칠 수 있다.
피부 피지선은 피지로 알려진 지질의 혼합물을 분비하는 완전 분비선이다. "피지"라는 용어는 트리글리세라이드, 유리 지방산, 왁스 에스테르, 스쿠알렌, 콜레스테롤 및 콜레스테릴 에스테르를 포함하는 피지선의 분비물을 가리킨다. 피지선에서 피지가 과다생성되면 지성 피부가 나타나게 되고, 또한 여드름 및 지루성 피부염 등 다른 피부장애, 질환 또는 상태의 발현 원인이 될 수 있다.
피지선 세포에 의해서 생성된 피지는 모낭관을 거쳐 피부 표면으로 분비되고, 생성된 피지는 피부 표면에서 각질 세포간 지질의 구조를 변화시켜 피부 장벽 기능을 저하시키는 것으로 알려져 있으며, 피지의 과다 생성으로 인한 지루성 두피염균 등의 과증식이 지루성 피부염 및 두피염의 원인으로 알려져 있다.
한편, 비듬이란 인체의 활발한 신진대사에 의해 생긴 두피의 죽거나 벗겨진 세포들이 두피 피지선의 분비물과 함께 말라붙어서 생긴 각질 형태의 덩어리를 말한다. 비듬은 점차 정상 피부와 뚜렷한 경계를 가지며, 붉게 되어 두피에 인설이 증가하여 통상 가려움과 염증을 수반하는 지루피부염으로까지 진행된다. 따라서, 두피에서의 피지의 과다 생성 및 염증 억제가 피부 장벽 기능과 건강한 피부의 유지를 위하여 중요하게 여겨지고 있다.
일 구현예는 인체에 부작용이 적고 안전하면서도 두피 상태 개선 효능이 우수한 피부외용제 조성물을 제공한다.
일 구현예는 블루프래그 아이리스를 포함하는 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부외용제 조성물을 제공한다.
상기 추출물은 병풀, 편백 또는 이들의 조합을 더 포함할 수 있다.
상기 추출물의 농도는 1 ppm 내지 20,000 ppm 일 수 있다.
상기 추출물은 상기 피부외용제 조성물의 총량에 대하여 0.001 중량% 내지 10 중량%로 포함될 수 있다.
상기 추출물은 상기 블루프래그 아이리스, 그리고 상기 병풀 및 상기 편백 중 하나를 1 내지 10 : 1 내지 10의 중량비로 포함할 수 있다.
상기 추출물은 상기 블루프래그 아이리스, 상기 병풀 및 상기 편백을 1 내지 10 : 1 내지 10 : 1 내지 10의 중량비로 포함할 수 있다.
상기 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 조합을 사용하여 추출될 수 있다.
상기 추출물은 유기용매를 사용하여 추출될 수 있고, 상기 유기용매는 C1 내지 C10 알코올을 포함할 수 있다.
상기 피부외용제 조성물은 두피 상태 개선용일 수 있다.
상기 피부외용제 조성물은 두피 염증 원인균인 말라세지아 레스트릭타(Malassezia restricta)에 의한 피지의 과다 생성을 억제할 수 있다.
상기 피부외용제 조성물은 두피 염증 원인균인 말라세지아 글로보사(Malassezia globosa)의 리파아제 활성을 저해할 수 있다.
상기 피부외용제 조성물은 두피 염증 원인균인 말라세지아 퍼퍼(Malassezia furfur), 말라세지아 레스트릭타(Malassezia restricta) 및 말라세지아 글로보사(Malassezia globosa)에 대한 생장 억제 활성을 나타낼 수 있다.
상기 피부외용제 조성물은 용액, 현탁액, 페이스트, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클린싱 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 샴푸, 린스, 토닉, 스프레이 또는 이들의 조합을 포함하는 제형을 가질 수 있다.
상기 피부외용제 조성물은 두피 상태 개선용 화장료 조성물; 두피 상태 개선용 의약외품 조성물; 또는 두피에 생긴 아토피성 피부염, 지루성 피부염, 여드름 또는 건선의 예방 또는 치료용 약학 조성물일 수 있다.
일 구현예에 따른 피부외용제 조성물은 인체에 부작용이 적고 안전하면서도 두피 염증 원인균에 의해 악화된 두피 상태를 개선시킴에 따라, 화장료 조성물, 의약외품 조성물, 약학 조성물 등에 유용하게 사용될 수 있다.
이하, 구현예들에 대하여 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 상세히 설명한다. 그러나 구현예들은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 구현예에 한정되지 않는다.
일 구현예에 따른 피부외용제 조성물은 블루프래그 아이리스를 포함하는 추출물을 유효성분으로 포함할 수 있다.
구체적으로 일 구현예에 따르면, 블루프래그 아이리스 추출물을 단독으로 사용할 수도 있고, 블루프래그 아이리스와 1종 이상의 다른 원료를 혼합하여 추출한 혼합 추출물을 사용할 수도 있다.
상기 블루프래그 아이리스를 포함하는 추출물, 구체적으로 블루프래그 아이리스 추출물을 피부외용제 조성물에 사용할 경우 두피 염증 원인균에 의한 피지의 과다 생성을 억제하고 리파아제 활성을 저해하며 생장 억제 활성을 나타냄에 따라, 두피 장벽 기능을 유지하고 두피의 염증을 억제하는 효과를 가짐으로써 두피 염증 원인균에 의해 악화된 두피 상태를 개선시킬 수 있다. 뿐만 아니라, 천연 유래 식물을 사용함으로써 피부에 자극이 적고 인체에 안전하며 장기간 사용해도 부작용이 없다.
상기 블루프래그 아이리스(Iris versicolor)는 북아메리카 출신인 아이리스 종이며 미국 동부와 캐나다 동부에 있다. 초원, 습지, 개울과 해안가에서 볼 수 있다. 이름의 'versicolor'는 '다양한 색상'을 뜻한다. 뿌리와 줄기는 약재로 사용한다. 상기 블루프래그 아이리스 추출물은 꽃, 잎 또는 뿌리 어느 것이나 다 사용 가능하다.
일 구현예에 따른 추출물은 상기 블루프래그 아이리스 외에 병풀, 편백 또는 이들의 조합을 더 포함할 수 있다.
상기 병풀(Centella asiatica)은 한반도 남부 섬의 산이나 들에 흔히 나는 여러해살이풀이다. 원줄기는 옆으로 뻗고, 뿌리가 내리는 마디 근처에 2개의 퇴화된 비늘 모양의 잎이 있다. 잎은 마디에서 밀생하고, 신장형, 지름 2cm 내지 5cm, 표면은 광택이 나고, 가장자리에 둔한 톱니가 있으며, 잎자루의 길이는 4cm 내지 20cm 이다. 꽃은 홍자색, 잎겨드랑이에 3 내지 4 송이씩 산형꽃차례로 달리며, 머리 모양이다. 암술대는 2갈래이며, 열매는 분과의 편원형이다. 다소 습기가 있는 곳에서 자란다. 옆으로 뻗어가면서 마디에서 뿌리가 내리고 비늘 같은 잎이 있다. 한국, 일본, 중국 등지에 분포한다.
상기 편백(Chamaecyparis obtuse)은 높이 30m 내지 40m, 폭 1m 내지 2m 가량이며, 나무 껍질은 적갈색이고, 작은 바늘 모양의 잎이 가지에 밀생하며 한국에서는 남부 지방의 조림수종으로 재배한다. 봄에 가지 위에 작은 꽃이 피며, 10월에 녹색의 구과가 붉은색으로 익는다. 구과는 지름 1cm로 7 내지 9 개의 방패 모양인 비늘조각으로 되어 있다. 잎과 목재에는 1%의 정유가 포함되어 있으며, 약용으로 이용되고 있다.
블루프래그 아이리스와 병풀 및 편백 중 1종 이상을 혼합하여 추출한 혼합 추출물을 피부외용제 조성물에 사용하는 경우 두피 염증 원인균에 의한 피지의 과다 생성을 억제하고 리파아제 활성을 저해하며 생장 억제 활성을 나타냄에 따라, 두피 염증 원인균에 의해 악화된 두피 상태를 개선시킬 수 있다. 뿐만 아니라, 천연 유래 식물을 사용함으로써 피부에 자극이 적고 인체에 안전하며 장기간 사용해도 부작용이 없다.
추출 방법은 열수 추출법, 냉침 추출법, 용매 추출법, 수증기 증류법, 용출법, 압착법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등이 있으며, 이들을 단독으로 또는 2종 이상의 방법을 병용하여 수행할 수 있다. 상기 방법 중 예를 들면, 열수 추출법 또는 용매 추출법으로 원료를 추출할 수 있다.
상기 용매 추출법은 물, 유기용매 또는 이들의 조합의 추출용매를 사용하여 추출하는 것으로, 예를 들면 유기용매를 사용할 수 있다.
상기 유기용매는 C1 내지 C10 알코올을 포함할 수 있고, 예를 들면, C1 내지 C4 알코올일 수 있다. 구체적으로, 메탄올, 에탄올, 프로필알코올, 부틸알코올, 글리세린, 프로필렌글라이콜 및 부틸렌글라이콜로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상일 수 있다.
상기 추출물, 즉, 블루프래그 아이리스 추출물, 또는 블루프래그 아이리스와 병풀 및 편백 중 1종 이상을 혼합하여 추출한 혼합 추출물의 농도는 1 ppm 내지 20,000 ppm 일 수 있고, 예를 들면, 20 ppm 내지 10,000 ppm, 50 ppm 내지 1,000 ppm 일 수 있다. 추출물의 농도가 상기 범위 내인 경우 두피 염증 원인균에 의한 피지의 과다 생성을 억제하고 리파아제 활성을 저해하며 생장 억제 활성을 나타냄에 따라, 두피 염증 원인균에 의해 악화된 두피 상태를 개선시킬 수 있다.
상기 추출물, 즉, 블루프래그 아이리스 추출물, 또는 블루프래그 아이리스와 병풀 및 편백 중 1종 이상을 혼합하여 추출한 혼합 추출물은 피부외용제 조성물의 총량에 대하여 0.001 중량% 내지 10 중량%로 포함될 수 있고, 예를 들면, 0.01 중량% 내지 10 중량%, 0.01 중량% 내지 1 중량%로 포함될 수 있다. 추출물의 함량이 상기 범위 내인 경우 두피 염증 원인균에 의한 피지의 과다 생성을 억제하고 리파아제 활성을 저해하며 생장 억제 활성을 나타냄에 따라, 두피 염증 원인균에 의해 악화된 두피 상태를 개선시킬 수 있다.
구체적으로, 상기 혼합 추출물은 블루프래그 아이리스와 병풀 및 편백 중 하나를 1 내지 10 : 1 내지 10의 중량비로 혼합한 추출물일 수 있고, 예를 들면, 1 내지 5 : 1 내지 5의 중량비로 혼합한 추출물일 수 있다. 혼합 추출물이 상기 2종의 원료가 상기 중량비 범위 내로 혼합되어 얻어진 경우 두피 염증 원인균에 의한 피지의 과다 생성을 억제하고 리파아제 활성을 저해하며 생장 억제 활성을 나타냄에 따라, 두피 상태의 개선 효능을 향상시킬 수 있다.
또한, 상기 혼합 추출물은 블루프래그 아이리스, 병풀 및 편백을 1 내지 10 : 1 내지 10 : 1 내지 10의 중량비로 혼합한 추출물일 수 있고, 예를 들면, 1 내지 5 : 1 내지 5 : 1 내지 5의 중량비로 혼합한 추출물일 수 있다. 혼합 추출물이 상기 3종의 원료가 상기 중량비 범위 내로 혼합되어 얻어진 경우 두피 염증 원인균에 의한 피지의 과다 생성을 억제하고 리파아제 활성을 저해하며 생장 억제 활성을 나타냄에 따라, 두피 상태의 개선 효능을 향상시킬 수 있다.
상기 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부외용제 조성물은 두피 상태 개선용으로 사용될 수 있다. 구체적으로, 상기 피부외용제 조성물은 두피 염증 원인균, 예를 들면, 말라세지아 레스트릭타(Malassezia restricta)에 의한 피지의 과다 생성을 억제할 수 있다. 또한, 상기 피부외용제 조성물은 두피 염증 원인균, 예를 들면, 말라세지아 글로보사(Malassezia globosa)의 리파아제 활성을 저해할 수도 있다. 또한, 상기 피부외용제 조성물은 두피 염증 원인균, 예를 들면, 말라세지아 퍼퍼(Malassezia furfur), 말라세지아 레스트릭타(Malassezia restricta) 및 말라세지아 글로보사(Malassezia globosa)에 대한 생장 억제 활성을 나타낼 수도 있다.
일 구현예에 따른 피부외용제 조성물은 상기 추출물 외에 용도에 따라 첨가제를 더 포함할 수 있다. 상기 첨가제는 보습제, 증점제, 계면활성제, 유상기제, 방부제, 산화방지제, 알코올, 향료, pH 조절제, 천연추출물 등을 단독으로 또는 2종 이상 사용할 수 있다.
일 구현예에 따른 피부외용제 조성물은 두피 상태 개선용 화장료 조성물; 두피 상태 개선용 의약외품 조성물; 또는 두피에 생긴 아토피성 피부염, 지루성 피부염, 여드름 또는 건선의 예방 또는 치료용 약학 조성물일 수 있다.
상기 피부외용제 조성물의 제형은 특별히 제한되지 않으며, 목적하는 바에 따라 적절히 선택할 수 있다. 예를 들어, 용액, 현탁액, 페이스트, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클린싱 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 샴푸, 린스, 토닉, 스프레이 또는 이들의 조합을 포함하는 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
일 구현예에 따른 피부외용제 조성물은 제형, 사용 목적 등에 따라 추가 성분들을 당업자가 어려움 없이 선정하여 추가로 배합할 수 있으며, 이 경우 추가 성분과 동시에 적용할 경우 상승효과가 일어날 수 있다.
이하에서는 본 발명의 구체적인 실시예들을 제시한다.  다만, 하기에 기재된 실시예들은 본 발명을 구체적으로 예시하거나 설명하기 위한 것에 불과하며, 이로서 본 발명이 제한되어서는 아니된다. 또한, 여기에 기재되지 않은 내용은 이 기술 분야에서 숙련된 자이면 충분히 기술적으로 유추할 수 있는 것이므로 그 설명을 생략한다.
(추출물 제조)
실시예 1: 블루프래그 아이리스 추출물
하기 표 1에서와 같이, 블루프래그 아이리스(입수처: 청주)의 전초 100g을 수거하여 70% 에탄올 수용액 1L를 넣고 15℃ 내지 25℃의 실온에서 48시간 냉침한 후 Whatman No. 2로 여과하였다. 여과된 추출물을 45℃ 이하에서 감압 농축하여 파우더 상태의 블루프래그 아이리스 추출물을 수득하였다.
실시예 2 내지 8: 블루프래그 아이리스, 병풀 및 편백의 혼합 추출물
블루프래그 아이리스(입수처: 청주), 병풀(입수처: 울릉도) 및 편백(입수처: 전라남도)을 하기 표 1에서와 같은 중량비로 혼합한 혼합 원료 100g에 70% 에탄올 수용액 1L를 넣고 15℃ 내지 25℃의 실온에서 48시간 냉침한 후 Whatman No. 2로 여과하였다. 여과된 추출물을 45℃ 이하에서 감압 농축하여 파우더 상태의 혼합 추출물을 수득하였다.
실시예 9: 블루프래그 아이리스 및 병풀의 혼합 추출물
블루프래그 아이리스(입수처: 청주) 및 병풀(입수처: 울릉도)을 하기 표 1에서와 같은 중량비로 혼합한 혼합 원료 100g에 70% 에탄올 수용액 1L를 넣고 15℃ 내지 25℃의 실온에서 48시간 냉침한 후 Whatman No. 2로 여과하였다. 여과된 추출물을 45℃ 이하에서 감압 농축하여 파우더 상태의 혼합 추출물을 수득하였다.
실시예 10: 블루프래그 아이리스 및 편백의 혼합 추출물
블루프래그 아이리스(입수처: 청주) 및 편백(입수처: 전라남도)을 하기 표 1에서와 같은 중량비로 혼합한 혼합 원료 100g에 70% 에탄올 수용액 1L를 넣고 15℃ 내지 25℃의 실온에서 48시간 냉침한 후 Whatman No. 2로 여과하였다. 여과된 추출물을 45℃ 이하에서 감압 농축하여 파우더 상태의 혼합 추출물을 수득하였다.
비교예 1: 병풀 추출물
하기 표 1에서와 같이, 병풀(입수처: 울릉도)의 전초 100g을 수거하여 70% 에탄올 수용액 1L를 넣고 15℃ 내지 25℃의 실온에서 48시간 냉침한 후 Whatman No. 2로 여과하였다. 여과된 추출물을 45℃ 이하에서 감압 농축하여 파우더 상태의 병풀 추출물을 수득하였다.
비교예 2: 편백 추출물
하기 표 1에서와 같이, 편백(입수처: 전라남도)의 전초 100g을 수거하여 70% 에탄올 수용액 1L를 넣고 15℃ 내지 25℃의 실온에서 48시간 냉침한 후 Whatman No. 2로 여과하였다. 여과된 추출물을 45℃ 이하에서 감압 농축하여 파우더 상태의 편백 추출물을 수득하였다.
추출물 원료 수득량(g)
실시예 1 블루프래그 아이리스 14.5
실시예 2 병풀, 편백 및 블루프래그 아이리스 (중량비 1:1:1) 13.2
실시예 3 병풀, 편백 및 블루프래그 아이리스 (중량비 1:1:4) 15.5
실시예 4 병풀, 편백 및 블루프래그 아이리스 (중량비 4:1:1) 14
실시예 5 병풀, 편백 및 블루프래그 아이리스 (중량비 1:4:1) 12.6
실시예 6 병풀, 편백 및 블루프래그 아이리스 (중량비 1:1:8) 16.6
실시예 7 병풀, 편백 및 블루프래그 아이리스 (중량비 8:1:1) 16.4
실시예 8 병풀, 편백 및 블루프래그 아이리스 (중량비 1:8:1) 15.1
실시예 9 블루프래그 아이리스 및 병풀 (중량비 1:1) 12.3
실시예 10 블루프래그 아이리스 및 편백 (중량비 1:1) 18.7
비교예 1 병풀 11.2
비교예 2 편백 15
실험준비예 1: 인간 피지선 세포(human sebocyte)의 배양 조건
인간 피지선 세포(Human Sebocyte)는 Celprogen(USA)에서 구입하여 사용하였다. 배양 배지는 혈청이 포함된 인간 피지선 세포 완전 배지(Human sebocyte complete media with serum ,M36079-01S, Celprogen, USA)를 사용하여 37℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다.
실험준비예 2: 말라세지아 레스트릭타( Malassezia restricta, M.restricta), 말라세지아 글로보사 (Malassezia globosa, M.globosa) 및 말라세지아 퍼퍼( Malassezia furfur, M. furfur) 의 배양 조건
실험에 사용된 말라세지아 레스트릭타(Malassezia restricta, M.restricta, KCTC 27527), 말라세지아 글로보사(Malassezia globosa, M.globosa, KCTC27535), 그리고 말라세지아 퍼퍼(Malassezia furfur, M.furfur KCTC 7546)는 한국생명공학연구원의 생물자원센터(KCTC)에서 분양 받았다. 배양 배지는 리밍 앤 노트만 아가(Leeming and Notman agar, LNA, kisanbio, korea) 배지를 사용하여 32℃ 조건에서 배양하고, 3일에 한번씩 계대 배양을 시행하였다.
실험예 1: 말라세지아 레스트릭타( M.restricta )로 유도된 피지 과다 생성 억제 평가
실시예 1 내지 10의 추출물에 대하여 두피 염증 원인균에 의한 염증성 피지 과다 생성 억제 효과를 오일 레드 오(Oil Red O) 염색법으로 평가하였다.
세포 실험을 진행하기 위해 실시예 1 내지 10의 추출물을 디메틸 설폭사이드(DMSO)에 녹여 각 추출물 시료를 제조하였다.
피지선 세포를 1X105 cells/well 농도로 24웰 플레이트에 분주한 후 24시간 동안 배양하였다. 배양 배지를 제거 후 인간 피지선 세포를 무혈청 배지(Human sebocyte serum free media, M36079-01, Celprogen, USA)로 옮겼고, 인간 피지선 세포가 있는 무혈청 배지에 상기 실험준비예 2의 균주 배양 조건에 따른 말라세지아 레스트릭타 배양액 2.5%(v/v)을 처리하여 피지 생성을 유도하였다. 그 다음, 각 추출물 시료 용액을 농도별로 동시 처리하여 피지 생성 억제 효과를 확인하였다. 피지 생성 억제 효과를 측정하기 위하여 오일 레드 오 염색법을 사용하였고, 구체적으로 다음의 과정을 실행하였다.
말라세지아 레스트릭타 배양액(M)과 각 실시예 1 내지 10과 비교예 1 및 2의 추출물 시료 용액을 48시간 동시 처리 후, PBS(phosphate buffer saline)로 세척한 세포를 30분간 10% 포름알데이드 용액으로 고정하였다. 고정된 세포는 PBS로 2회, 50% 이소프로판올로 1회 세척하고, 0.4% 오일 레드 오 용액으로 45분간 염색하였다. 염색된 세포는 70% 에탄올로 1회, PBS로 2회 세척하였다. 세척 후 웰플레이트를 충분히 건조시킨 후 100% 이소프로판올로 염색된 오일 레드 오 용액을 다시 녹여내어 마이크로 플레이트 리더(micro-plate reader)로 520nm에서 흡광도를 측정하여 세포 내 생성된 중성 지방의 양을 측정하였다. 이때, 인간 피지선 세포에 말라세지아 레스트릭타 배양액(M)을 처리하고 추출물 시료 용액을 처리하지 않은 군을 대조군으로, 인간 피지선 세포에 말라세지아 레스트릭타 배양액(M) 및 추출물 시료 용액을 둘 다 처리하지 않은 군을 무처리 대조군으로 사용하였다. 피지 생성율은 하기 수학식 1을 이용하여 계산하였고, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
[수학식 1]
피지 생성율(%) = (B/A) X 100
(상기 수학식 1에서,
A는 추출물 시료를 처리하지 않은 무처리 대조군의 흡광도이고,
B는 말라세지아 레스트릭타 배양액(M) 및 추출물 시료를 처리한 실험군의 흡광도이다.)
50 ppm 에서의
피지 생성율 (%)
50 ppm에서의
피지 생성 증가 저해율
(%, 대조군(M) 대비)
무처리 대조군 100 -
대조군 (M.restricta 배양액 2.5%)(M) 155.65 0
M + 실시예 1의 추출물 시료 130.87 24.78
M + 실시예 2의 추출물 시료 125.77 29.88
M + 실시예 3의 추출물 시료 113.59 42.06
M + 실시예 4의 추출물 시료 120.27 35.38
M + 실시예 5의 추출물 시료 121.12 34.53
M + 실시예 6의 추출물 시료 104.23 51.42
M + 실시예 7의 추출물 시료 125.19 30.46
M + 실시예 8의 추출물 시료 119.25 36.4
M + 실시예 9의 추출물 시료 127.31 28.34
M + 실시예 10의 추출물 시료 125.63 30.02
M + 비교예 1의 추출물 시료 137.59 18.06
M + 비교예 2의 추출물 시료 134.08 21.57
상기 표 2를 통하여, 인간 피지선 세포에 말라세지아 레스트릭타 배양액만 처리한 대조군은 무처리 대조군에 비해 피지 생성을 확연히 유도시키며, 일 구현예에 따른 블루프래그 아이리스를 포함하는 추출물, 즉, 실시예 1 내지 10의 추출물을 사용한 경우, 비교예 1 및 2의 추출물을 사용한 경우에 비하여 우수한 염증성 피지 과다 생성 억제 효과를 보임을 알 수 있다.
실험예 2: 말라세지아 글로보사( M.globosa )의 리파아제 활성 저해 평가
말라세지아 글로보사가 분비하는 리파아제는 피지 구성물인 트리글리세라이드(triglyceride)와 에스테르(ester)를 분해하여 피부 자극성의 불포화 지방산인 리놀레산(linoleic acid)과 올레산(oleic acid)이 만들어진다. 본 실험예에서는 실시예 1 내지 10과 비교예 1 및 2의 추출물에 대하여 말라세지아 글로보사가 분비하는 리파아제의 활성 저해 효과를 평가하기 위해, 지질분해효소 활성(lipolytic enzyme activity) 측정을 통해 효소 활성 분석(lipase assay)을 수행하였고, 구체적으로 다음의 과정을 실행하였다.
먼저 상기 실험준비예 2의 균주 배양 조건에 따른 말라세지아 글로보사 배양액 200μl에 90mM 시트르산염 완충액(citrate buffer) 30μl, 10mM 4-나이트로페닐 도데카노에이트(4-nitrophenyl dodecanoate, p-NPD) 30μl, 5% 트리톤 엑스-100(triton X-100) 30μl, 그리고 트리스-염산 완충액(tris-HCl buffer)(pH 8.0) 610μl을 첨가하여 효소 완충액(enzyme buffer)을 준비하였다. 효소 완충액에 500 ppm 농도의 실시예 1 내지 10과 비교예 1 및 2의 추출물 100μl를 첨가하여 30℃에서 1시간 반응시켰다. 이때, 말라세지아 글로보사 배양액에 추출물 시료 용액을 처리하지 않은 군을 대조군으로 사용하였다.
그리고 4-나이트로페닐 도데카노에이드(ρ-NPD)가 4-나이트로페놀(ρ-nitrophenol)로 가수분해된 정도를 405nm 파장에서 흡광도로 측정하였다. 리파아제(Lipase) 활성율은 추출물 시료를 처리하지 않은 대조군의 리파아제 활성을 100으로 하여 추출물을 처리한 경우의 리파아제 활성을 상대적인 수치로 표현하였다. 리파아제 활성율은 하기 수학식 2를 이용하여 계산하였고, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.
[수학식 2]
리파아제 활성율(%) = (B/A) X 100
(상기 수학식 2에서,
A는 추출물 시료를 처리하지 않은 대조군의 흡광도이고,
B는 추출물 시료를 처리한 실험군의 흡광도이다.)
시료 말라세지아 글로보사 분비 리파아제 활성 저해
A B 리파아제 활성율 (%)
실시예 1 2.41 1.59 65.98
실시예 2 2.41 1.55 64.63
실시예 3 2.41 1.41 58.51
실시예 4 2.41 1.43 59.34
실시예 5 2.41 1.50 62.24
실시예 6 2.41 1.22 50.62
실시예 7 2.41 1.29 53.53
실시예 8 2.41 1.30 53.94
실시예 9 2.41 1.41 58.51
실시예 10 2.41 1.38 57.26
비교예 1 2.41 1.77 73.44
비교예 2 2.41 1.95 80.91
상기 표 3을 통하여, 일 구현예에 따른 블루프래그 아이리스를 포함하는 추출물, 즉, 실시예 1 내지 10의 추출물을 사용한 경우, 비교예 1 및 2의 추출물을 사용한 경우에 비하여 말라세지아 글로보사가 분비한 리파아제 활성 억제 효과가 우수함을 알 수 있다. 이로부터, 일 구현예에 따르면, 리파아제 활성을 효과적으로 억제시킴을 확인하여, 두피염의 원인이 되는 피부 자극성 불포화 지방산의 생성 억제에 효과가 있음을 확인하였다.
실험예 3: 말라세지아 퍼퍼 ( M. furfur ), 말라세지아 레스트릭타( M.restricta ) 및 말라세지아 글로보사( M.globosa )에 대한 항균력 시험
실시예 1 내지 10과 비교예 1 및 2의 추출물에 대하여 항균력을 평가하기 위해, 두피 염증 원인균인 말라세지아 퍼퍼, 말라세지아 레스트릭타 및 말라세지아 글로보사에 대한 항균력을 시험하였다.
말라세지아 균을 LNA 배지에 32℃, 3일간 진탕 배양하여 시험 균액을 준비하고, 시험 균액은 LNA 배지를 이용하여 희석하였다. 항균 실험을 진행하기 위해 96 웰 플레이트에 시험 균액 100 ㎕을 넣은 후, 농도별로 실시예 1 내지 10과 비교예 1 및 2의 추출물 시료 희석액 100 ㎕을 추가로 넣었다. 모든 웰에 각 시험 균액을 104 내지 105이 되도록 하였고, 시험 농도는 500 ppm 내지 20,000 ppm에서 항균력 시험을 진행하였다. 시험균 배양 조건과 같은 조건으로 48시간 배양한 후 레사주린(resazurin) 시약을 웰 당 40㎕ 넣은 후, 24시간 추가 배양하였다. 균의 증식 유무는 레사주린 시약의 흡광도 변화를 통해 확인하였다. 실시예 1 내지 10과 비교예 1 및 2의 시험균에 대한 성장 저해 여부를 하기 표 4에 나타내었다.
-: 생장 저해 확인, +: 생장 확인
시료 시험균 시료 농도 (ppm)
20,000 10,000 5,000 2,000 1,000 500
실시예 1 M.furfur - - + + + +
M.restricta - - + + + +
M.globosa - - + + + +
실시예 2 M.furfur - - + + + +
M.restricta - - + + + +
M.globosa - - + + + +
실시예 3 M.furfur - - + + + +
M.restricta - - + + + +
M.globosa - - + + + +
실시예 4 M.furfur - - + + + +
M.restricta - - - + + +
M.globosa - - - + + +
실시예 5 M.furfur - - + + + +
M.restricta - - + + + +
M.globosa - - + + + +
실시예 6 M.furfur - - + + + +
M.restricta - - - + + +
M.globosa - - - - + +
실시예 7 M.furfur - - + + + +
M.restricta - - - + + +
M.globosa - - - + + +
실시예 8 M.furfur - - + + + +
M.restricta - - + + + +
M.globosa - - + + + +
실시예 9 M.furfur - - + + + +
M.restricta - - + + + +
M.globosa - - + + + +
실시예 10 M.furfur - - + + + +
M.restricta - - + + + +
M.globosa - - + + + +
비교예 1 M.furfur - + + + + +
M.restricta - + + + + +
M.globosa - - + + + +
비교예 2 M.furfur - + + + + +
M.restricta - + + + + +
M.globosa - + + + + +
상기 표 4를 통하여, 일 구현예에 따른 블루프래그 아이리스를 포함하는 추출물, 즉, 실시예 1 내지 10의 추출물을 사용한 경우, 비교예 1 및 2의 추출물을 사용한 경우에 비하여 두피 염증 원인균인 말라세지아 퍼퍼, 말라세지아 레스트릭타 및 글로보사에 대한 항균 활성이 우수함을 알 수 있다.
실험예 4: 피부에 대한 안전성 시험
일 구현예에 따른 피부외용제 조성물의 피부 안전성을 확인하기 위해, 성인 남녀 30명을 대상으로 실시예 1 내지 10과 비교예 1 및 2의 추출물을 도포한 첩포 시험을 진행하여 피부 안전성을 평가하였다. 구체적인 측정방법은 다음과 같다.
실시예 1 내지 10과 비교예 1 및 2의 추출물을 도포한 첩포를 피부에 부착한 뒤 24시간 경과 후 첩포를 제거하였다. 상기 첩포를 제거한 때로부터 1시간 경과 후에 1차 판독을 시행하였고, 상기 첩포를 제거한 때로부터 24시간 경과 후에 2차 판독을 시행하였다. 피부 자극 강도를 알아보기 위해 피부의 양성 반응 정도에 따라 가중치를 부여하여 피부의 평균 반응 점수를 구해 추출물 시료의 피부 자극을 육안으로 판정하였고, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.
시료명
1시간 후 24시간 후 피부의 평균 반응 점수 판정
피부 양성 반응
정도 가중치
0.5 1 2 3 0.5 1 2 3
실시예 1
1,000 ppm
해당 인원(명)
0 0 0 0 0 0 0 0 0 무자극
실시예 21,000 ppm
해당 인원 (명)
0 0 0 0 0 0 0 0 0 무자극
실시예 31,000 ppm
해당 인원(명)
0 0 0 0 0 0 0 0 0 무자극
실시예 41,000 ppm
해당 인원(명)
0 0 0 0 0 0 0 0 0 무자극
실시예 51,000 ppm
해당 인원(명)
0 0 0 0 0 0 0 0 0 무자극
실시예 61,000 ppm
해당 인원(명)
0 0 0 0 0 0 0 0 0 무자극
실시예 71,000 ppm
해당 인원(명)
0 0 0 0 0 0 0 0 0 무자극
실시예 81,000 ppm
해당 인원(명)
0 0 0 0 0 0 0 0 0 무자극
실시예 91,000 ppm
해당 인원(명)
0 0 0 0 0 0 0 0 0 무자극
실시예 101,000 ppm
해당 인원(명)
0 0 0 0 0 0 0 0 0 무자극
상기 표 5를 통하여, 실시예 1 내지 10의 추출물이 1,000 ppm 도포된 첩포 제거 후 1차 및 2차 판독시에 가중치 0.5 내지 3에 해당하는 피부 양성 반응을 보이는 사람이 없었고, 이를 통해 1,000 ppm 이하의 실시예 1 내지 10의 추출물을 피부에 도포시 피부에 자극이 없음을 확인할 수 있다. 다시 말해, 일 구현예에 따른 실시예 1 내지 10의 추출물을 포함하는 피부외용제 조성물의 경우 피부에 자극이 없음을 알 수 있다.
이하, 상기한 실험예의 결과를 근거로 하여, 블루프래그 아이리스를 포함하는 추출물을 이용한 여러 제형예를 조성하여 제시한다. 그러나, 이들 제형예는 일 구현예를 설명하기 위한 것으로, 일 구현에의 제형이 이들 제형예에만 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명한 것이다.
제형예 1-1 내지 1-10: 샴푸(shampoo)
성분
(중량%)
제형예
1-1 1-2 1-3 1-4 1-5 1-6 1-7 1-8 1-9 1-10
실시예 1 1.0 - - - - - - - - -
실시예 2 - 1.0 - - - - - - - -
실시예 3 - - 1.0 - - - - - - -
실시예 4 - - - 1.0 - - - - - -
실시예 5 - - - - 1.0 - - - - -
실시예 6 - - - - - 1.0 - - - -
실시예 7 - - - - - - 1.0 - - -
실시예 8 - - - - - - - 1.0 - -
실시예 9 - - - - - - - - 1.0 -
실시예 10 - - - - - - - - - 1.0
리우릴황산나트륨 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10
코카미도프로필베타인 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3
카르복실비닐폴리머 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3
폴리쿼터늄-10 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
향료 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7
메틸파라벤 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
세틸트리메틸암모늄클로라이드 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량
- 실시예 1 내지 10은 각 실시예 1 내지 10에 따른 추출물을 나타낸다.
제형예 2-1 내지 2-10: 린스(rinse)
성분
(중량%)
제형예
2-1 2-2 2-3 2-4 2-5 2-6 2-7 2-8 2-9 2-10
실시예 1 1.0 - - - - - - - - -
실시예 2 - 1.0 - - - - - - - -
실시예 3 - - 1.0 - - - - - - -
실시예 4 - - - 1.0 - - - - - -
실시예 5 - - - - 1.0 - - - - -
실시예 6 - - - - - 1.0 - - - -
실시예 7 - - - - - - 1.0 - - -
실시예 8 - - - - - - - 1.0 - -
실시예 9 - - - - - - - - 1.0 -
실시예 10 - - - - - - - - - 1.0
세틸알코올 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2
스테아릴알코올 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5
베헤닐알코올 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
실리콘에멀젼 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
향료 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
사이클로메티콘 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
디메틸디스테아릴암모늄클로라이드 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
시트릭산 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량
- 실시예 1 내지 10은 각 실시예 1 내지 10에 따른 추출물을 나타낸다.
제형예 3-1 내지 3-10: 앰플(ample)
성분
(중량%)
제형예
3-1 3-2 3-3 3-4 3-5 3-6 3-7 3-8 3-9 3-10
실시예 1 1.0 - - - - - - - - -
실시예 2 - 1.0 - - - - - - - -
실시예 3 - - 1.0 - - - - - - -
실시예 4 - - - 1.0 - - - - - -
실시예 5 - - - - 1.0 - - - - -
실시예 6 - - - - - 1.0 - - - -
실시예 7 - - - - - - 1.0 - - -
실시예 8 - - - - - - - 1.0 - -
실시예 9 - - - - - - - - 1.0 -
실시예 10 - - - - - - - - - 1.0
에탄올 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30
프로필렌글리콜 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20
1,3-부틸렌글리콜 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10
세틸트리메틸암모늄클로라이드 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3
디메틸디스테아릴암모늄클로라이드 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
라우릴알코올 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3
미리스틸알코올 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5
세틸알코올 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
향료 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
염료 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량
- 실시예 1 내지 10은 각 실시예 1 내지 10에 따른 추출물을 나타낸다.
제형예 4-1 내지 4-10: 토닉(tonic)
성분
(중량%)
제형예
4-1 4-2 4-3 4-4 4-5 4-6 4-7 4-8 4-9 4-10
실시예 1 1.0 - - - - - - - - -
실시예 2 - 1.0 - - - - - - - -
실시예 3 - - 1.0 - - - - - - -
실시예 4 - - - 1.0 - - - - - -
실시예 5 - - - - 1.0 - - - - -
실시예 6 - - - - - 1.0 - - - -
실시예 7 - - - - - - 1.0 - - -
실시예 8 - - - - - - - 1.0 - -
실시예 9 - - - - - - - - 1.0 -
실시예 10 - - - - - - - - - 1.0
에탄올 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40
프로필렌글리콜 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10
폴리소르베이트 20 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5
향료 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
염료 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001 0.0001
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량
- 실시예 1 내지 10은 각 실시예 1 내지 10에 따른 추출물을 나타낸다.
상기 표 6 내지 9와 같이, 일 구현예에 따라 블루프래그 아이리스를 포함하는 추출물을 이용하여 여러 제형을 조성한 피부외용제 조성물은 인체에 부작용이 적고 안전하면서도, 두피 염증 원인균의 생장 저해, 두피 염증 원인균에 의한 피지의 과다 생성 및 리파아제 활성을 저해함으로써, 두피 장벽 기능을 유지하고 두피의 염증 억제 효과가 향상된, 즉 뛰어난 두피 상태 개선 효과를 나타낼 수 있다.
이상을 통해 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 설명하였지만, 본 발명은 이에 한정되는 것이 아니고 특허청구범위와 발명의 상세한 설명 및 첨부한 도면의 범위 안에서 여러 가지로 변형하여 실시하는 것이 가능하고 이 또한 본 발명의 범위에 속하는 것은 당연하다.

Claims (14)

  1. 블루프래그 아이리스; 및 병풀, 편백 또는 이들의 조합을 포함하는 추출물을 유효성분으로 포함하고,
    두피 염증 원인균인 말라세지아 레스트릭타(Malassezia restricta)에 의한 피지의 과다 생성을 억제하는 피부외용제 조성물.
  2. 삭제
  3. 제1항에서,
    상기 추출물의 농도는 1 ppm 내지 20,000 ppm인 것인 피부외용제 조성물.
  4. 제1항에서,
    상기 추출물은 상기 피부외용제 조성물의 총량에 대하여 0.001 중량% 내지 10 중량%로 포함되는 것인 피부외용제 조성물.
  5. 제1항에서,
    상기 추출물은 상기 블루프래그 아이리스, 그리고 상기 병풀 및 상기 편백 중 하나를 1 내지 10 : 1 내지 10의 중량비로 포함하는 것인 피부외용제 조성물.
  6. 제1항에서,
    상기 추출물은 상기 블루프래그 아이리스, 상기 병풀 및 상기 편백을 1 내지 10 : 1 내지 10 : 1 내지 10의 중량비로 포함하는 것인 피부외용제 조성물.
  7. 제1항에서,
    상기 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 조합을 사용하여 추출되는 것인 피부외용제 조성물.
  8. 제1항에서,
    상기 추출물은 유기용매를 사용하여 추출되고,
    상기 유기용매는 C1 내지 C10 알코올을 포함하는 것인 피부외용제 조성물.
  9. 제1항에서,
    상기 피부외용제 조성물은 두피 상태 개선용인 피부외용제 조성물.
  10. 삭제
  11. 제1항에서,
    상기 피부외용제 조성물은 두피 염증 원인균인 말라세지아 글로보사(Malassezia globosa)의 리파아제 활성을 저해하는 것인 피부외용제 조성물.
  12. 제1항에서,
    상기 피부외용제 조성물은 두피 염증 원인균인 말라세지아 퍼퍼(Malassezia furfur), 말라세지아 레스트릭타(Malassezia restricta) 및 말라세지아 글로보사(Malassezia globosa)에 대한 생장 억제 활성을 나타내는 것인 피부외용제 조성물.
  13. 제1항에서,
    상기 피부외용제 조성물은 용액, 현탁액, 페이스트, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클린싱 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 샴푸, 린스, 토닉, 스프레이 또는 이들의 조합을 포함하는 제형을 갖는 것인 피부외용제 조성물.
  14. 제1항에서,
    상기 피부외용제 조성물은 두피 상태 개선용 화장료 조성물; 두피 상태 개선용 의약외품 조성물; 또는 두피에 생긴 아토피성 피부염, 지루성 피부염, 여드름 또는 건선의 예방 또는 치료용 약학 조성물인 것인 피부외용제 조성물.
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KR20090039458A (ko) * 2007-10-18 2009-04-22 (주)지앤지 편백 오일를 함유한 비듬균 예방 또는 치료용 조성물
JP2013136551A (ja) * 2011-12-28 2013-07-11 Kao Corp ケラチン繊維改質剤
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