KR102428010B1

KR102428010B1 - 피부외용제 조성물

Info

Publication number: KR102428010B1
Application number: KR1020220046768A
Authority: KR
Inventors: 임승은; 김한영
Original assignee: 애경산업(주)
Priority date: 2022-04-15
Filing date: 2022-04-15
Publication date: 2022-08-03

Abstract

위성류 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부외용제 조성물에 관한 것이다.

Description

피부외용제 조성물{SKIN EXTERNAL COMPOSITION}

피부외용제 조성물에 관한 것이다.

피부 피지선은 진피에 있는 분비선으로, 모낭 옆에 있으며 피지로 알려진 지질의 혼합물을 분비하는 완전 분비선이다. 손바닥과 발바닥을 제외한 몸 전체에 존재하는데, 특히 얼굴과 두피에 가장 많이 분포한다. '피지'라는 용어는 트리글리세라이드, 유리 지방산, 왁스 에스테르, 스크알렌, 콜레스테롤 및 콜레스테릴 에스테르를 포함하는 피지선의 분비물을 가리킨다.

피부는 표피(epidermis), 진피(dermis), 피하지방층(subcutis)으로 구성되어 있으며, 표피의 각질층은 피부를 통한 수분과 전해질의 손실을 억제함으로써 피부가 정상적인 생물학적 기능을 유지할 수 있는 환경을 제공하고, 독성 물질이나 미생물, 기계적 자극, 자외선 같은 외부의 유해한 인자가 피부를 통해 침범할 때 이를 막아내는 일차적인 방어선 역할을 한다. 특히 각질층에 있는 각질 세포간 지질은 피부를 통한 체액과 전해질의 과도한 손실을 억제하고 외부 물질의 흡수와 투과를 제어하는 등 피부 장벽 기능을 수행하는 데에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다.

피지선에서 과다하게 생성된 피지는 피부를 지성 피부로 만들고, 여드름 및 지루성 피부염을 유발하는 등 피부 질환의 원인이 될 수 있다. 피지는 피지선 세포에 의해 생성되어 모낭관을 거쳐 피부 표면으로 분비되는데, 과도하게 생성된 피지는 피부 표면에서 각질 세포간 지질의 구조를 변화시켜 피부 장벽 기능을 저하시키는 것으로 알려져 있다. 또한 지루성 피부염균을 포함하는 두피 염증 원인균들의 과증식이 지루성 피부염을 포함하는 두피염의 원인이 되는 것으로 알려져 있다. 따라서, 두피에서의 피지의 과다 생성 및 염증을 억제하는 것이 중요한 과제로 여겨지고 있다.

일 구현예는 인체에 부작용이 적고 안전하면서도 두피 장벽 기능 유지 및 두피의 염증 억제 효과가 우수한 피부외용제 조성물을 제공한다.

일 구현예는 위성류 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부외용제 조성물을 제공한다.

상기 피부외용제 조성물은 두피 상태 개선용일 수 있다.

상기 위성류 추출물은 위성류의 잎, 꽃, 열매, 줄기, 뿌리, 종자 또는 이들의 조합으로부터 추출될 수 있다.

상기 위성류 추출물의 농도는 1 ppm 내지 1000 ppm일 수 있다.

상기 위성류 추출물은 상기 피부외용제 조성물의 총량에 대하여 0.001 중량% 내지 10 중량%로 포함될 수 있다.

상기 위성류 추출물은 두피 염증 원인균에 의한 피지의 과다 생성을 억제할 수 있다.

상기 위성류 추출물은 두피 염증 원인균에 의한 염증성 사이토카인(cytokine)의 발현을 억제할 수 있다.

상기 위성류 추출물은 두피 염증 원인균의 리파아제(lipase) 활성을 저해할 수 있다.

상기 두피 염증 원인균은 말라세지아 레스트릭타(Malassezia restricta), 말라세지아 글로보사(Malassezia globosa), 큐티박테리움 아크네스(Cutibacterium acnes) 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다.

상기 위성류 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물을 사용하여 추출될 수 있다.

상기 위성류 추출물은 상기 유기용매를 사용하여 추출될 수 있고, 상기 유기용매는 탄소수 1 내지 10의 알코올을 포함할 수 있다.

상기 피부외용제 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클린싱 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 샴푸, 린스, 토닉, 스프레이 또는 이들의 조합을 포함하는 제형일 수 있다.

상기 피부외용제 조성물은 두피 상태 개선용 화장료 조성물, 두피 상태 개선용 의약외품 조성물 또는 두피 상태 개선용 약학 조성물일 수 있다.

일 구현예에 따른 피부외용제 조성물은 부작용이 적고 인체에 안전하면서도 두피 장벽 기능 유지 및 두피의 염증 억제 효과가 우수하여 뛰어난 두피 상태 개선 효과를 나타낼 수 있다.

이하, 구현예들에 대하여 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 상세히 설명한다. 그러나 구현예들은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 구현예에 한정되지 않는다.

일 구현예에 따른 피부외용제 조성물은 위성류 추출물을 유효성분으로 포함할 수 있다.

상기 위성류 추출물을 얻기 위해 사용되는 위성류(Tamarix chinensis)는 쌍떡잎식물 제비꽃목 위성류과의 낙엽소교목이며 주로 한국 중부 이남의 인가 근처에서 자란다. 높이는 5m 이며, 꽃은 1년에 2번 피고, 열매는 삭과()로서 10월에 익으며 종자에 털이 난다. 중국이 원산지로서 정원에 관상용으로 심으며, 잎은 약용으로 쓰인다.

일 구현예에 따른 피부외용제 조성물은 두피 상태 개선용일 수 있다. 상기 위성류 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부외용제 조성물을 두피에 사용하는 경우, 두피 염증 원인균에 의해 유도된 피지의 과다 생성 및 염증성 사이토카인(cytokine)의 발현을 억제하고, 리파아제(lipase)의 활성을 저해함으로써, 두피 장벽 기능 유지 및 두피의 염증 억제 효과가 향상되어 뛰어난 두피 상태 개선 효과를 얻을 수 있다.

상기 위성류 추출물은 위성류의 잎, 꽃, 열매, 줄기, 뿌리, 종자 또는 이들의 조합으로부터 추출될 수 있고, 예를 들면, 전초(全草)를 사용하여 추출할 수 있다.

상기 위성류 추출물의 농도는 1 ppm 내지 1000 ppm일 수 있고, 예를 들면, 1 ppm 내지 900 ppm 일 수 있고, 1 ppm 내지 800 ppm 일 수 있고, 5 ppm 내지 700 ppm 일 수 있다. 위성류 추출물의 농도가 상기 범위 내일 경우 피지의 과다 생성 및 염증성 사이토카인의 발현이 억제되고, 리파아제의 활성이 저해되어, 두피 장벽 기능 유지 및 두피의 염증 억제 효과가 향상될 수 있다.

상기 위성류 추출물은 상기 피부외용제 조성물의 총량에 대하여 0.001 중량% 내지 10 중량%로 포함될 수 있고, 예를 들면, 0.01 중량% 내지 10 중량%, 0.1 중량% 내지 10 중량%, 0.1 중량% 내지 5 중량%로 포함될 수 있다. 위성류 추출물이 상기 함량 범위 내로 포함되는 경우 제형의 안정성이 향상되고, 두피 장벽 기능 유지 및 두피의 염증 억제 효과가 우수하여 뛰어난 두피 상태 개선 효과를 나타내므로, 두피 상태 개선용 화장료 조성물, 의약외품 조성물, 약학 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

상기 위성류 추출물은 두피 염증 원인균에 의한 피지의 과다 생성을 억제할 수 있다. 즉, 인간 피지선 세포(human sebocyte)에 두피 염증 원인균 배양액 및 일 구현예에 따른 위성류 추출물을 처리한 경우 두피 염증 원인균에 의해 유도된 피지 생성을 효과적으로 억제할 수 있다.

상기 위성류 추출물은 두피 염증 원인균에 의한 염증성 사이토카인의 발현을 억제할 수 있다. 즉, 인간 피지선 세포(Human Sebocyte)에 두피 염증 원인균 배양액 및 일 구현예에 따른 위성류 추출물을 처리한 경우 두피 염증 원인균에 의해 유도된 염증성 사이토카인 IL-1β(interleukin-1β), IL-6(interleukin-6), IL-8(interleukin-8) 및 TNF-α(tumor necrosis factor-α)의 발현을 효과적으로 억제할 수 있다.

상기 위성류 추출물은 두피 염증 원인균에 의한 리파아제의 활성을 억제할 수 있다. 즉, 두피 염증 원인균 배양액에 일 구현예에 따른 위성류 추출물을 처리한 경우 두피 염증 원인균이 분비하는 리파아제의 활성을 효과적으로 억제할 수 있다.

상기 두피 염증 원인균은 말라세지아 레스트릭타(Malassezia restricta), 말라세지아 글로보사(Malassezia globosa), 큐티박테리움 아크네스(Cutibacterium acnes) 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 상기 말라세지아 레스트릭타는 인간 피지선 세포의 피지의 과다 생성을 유도하는 균에 해당한다. 상기 말라세지아 글로보사는 리파아제를 분비한다. 리파아제는 피지 구성물인 트리글리세라이드(triglyceride)와 에스테르(ester)를 분해하여 피부 자극성의 불포화 지방산인 리놀레산(linoleic acid)과 올레산(oleic acid)을 만들어낸다. 상기 큐티박테리움 아크네스는 염증성 사이토카인 IL-1β, IL-6, IL-8 및 TNF- α의 발현을 유도한다. 또한 리파아제를 분비함으로써 피부 자극성의 불포화 지방산인 리놀레산과 올레산을 만들어낸다.

상기 위성류 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물을 사용하여 추출될 수 있다. 상기 위성류 추출물을 추출하는 방법은 열수 추출법, 냉침 추출법, 용매 추출법, 수증기 증류법, 용출법, 압착법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등이 있으며, 이들을 단독으로 또는 2종 이상의 방법을 병용하여 수행할 수 있다. 상기 방법 중 예를 들면, 용매 추출법으로 위성류 추출물을 추출할 수 있다. 상기 위성류 전초에 추출용매를 첨가하고, 일정 시간 동안 냉침한 후 여과 및 감압 농축하여 추출물을 회수하는 용매 추출법으로 얻을 수 있다.

상기 추출용매의 양은 위성류 전초의 건조 중량 1g 당 20㎖ 내지 80㎖, 예를 들면, 30ml 내지 70ml일 수 있다. 그리고 실온에서 1일 내지 5일 동안 냉침하거나, 예를 들면, 15℃ 내지 25℃에서 1일 내지 3일 동안 냉침할 수 있다. 상기 온도 범위에서 추출하는 경우 부패, 변색 및 변취의 예방에 효과적이며, 상기 시간 범위에서 추출하는 경우 추출이 잘 이루어져 충분한 활성 성분을 확보할 수 있다.

상기 용매 추출법은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물을 사용하여 추출하는 것으로, 예를 들면, 유기용매를 사용할 수 있다.

상기 유기용매는 탄소수 1 내지 10의 알코올을 포함할 수 있고, 예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로필알코올, 부틸알코올, 글리세린, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 아밀알코올, n-헥실알코올, n-헵탄올 및 n-옥탄올로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함할 수 있고, 예를 들면 에탄올을 포함하여 사용할 수 있다.

일 구현예에 따른 피부외용제 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클린싱 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 샴푸, 린스, 토닉, 스프레이 또는 이들의 조합을 포함하는 제형을 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

일 구현예에 따른 피부외용제 조성물은 상기 위성류 추출물 외에 용도에 따라 첨가제를 더 포함할 수 있다. 상기 첨가제는 보습제, 증점제, 계면활성제, 유상기제, 방부제, 산화방지제, 알코올, 향료, pH 조절제, 천연추출물 등을 단독으로 또는 2종 이상 사용할 수 있다.

일 구현예에 따른 피부외용제 조성물은 두피 상태 개선용 화장료 조성물, 두피 상태 개선용 의약외품 조성물 또는 두피 상태 개선용 약학 조성물일 수 있다.

상기 두피 상태 개선용 화장료 조성물의 제형은 특별히 제한되지 않으며, 목적하는 바에 따라 적절히 선택할 수 있다. 예를 들어, 유연 화장수, 수렴 화장수, 영양 화장수, 마사지 크림, 에센스, 영양 크림, 팩, 파우더, 납상 크림 등의 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 두피 상태 개선용 의약외품 조성물은 샴푸, 린스, 트리트먼트, 헤어팩, 스프레이 등의 제형일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 두피 상태 개선용 약학 조성물은 로션, 연고, 겔, 크림, 패치 등과 같은 경피 투여형 제형일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 약학 조성물은 두피 장벽 관련 질환에 사용될 수 있으며, 예를 들면, 두피에 생긴 아토피성 피부염, 지루성 피부염, 여드름, 건선, 원형 탈모증, 탈모 등의 질환에 사용될 수 있다.

이하에서는 본 발명의 구체적인 실시예들을 제시한다.　다만, 하기에 기재된 실시예들은 본 발명을 구체적으로 예시하거나 설명하기 위한 것에 불과하며, 이로서 본 발명이 제한되어서는 아니된다. 또한, 여기에 기재되지 않은 내용은 이 기술 분야에서 숙련된 자이면 충분히 기술적으로 유추할 수 있는 것이므로 그 설명을 생략한다.

제조예 1: 위성류 추출물의 제조

위성류(입수처: 전라북도) 전초 100g을 수거하여 70% 에탄올 수용액 5L에 넣고 실온(15℃~25℃)에서 48시간 냉침한 후 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 45℃ 이하에서 감압 농축하여 추출물 15g을 얻었다. 세포 실험을 진행하기 위해 추출물을 DMSO(dimethyl sulfoxide)에 녹여 시료를 제조하였다.

인간 피지선 세포(human sebocyte) 및 인간 피부 각질 형성 세포(normal human epidermal keratinocyte, NHEK)의 배양 조건 - 세포 배양 조건

인간 피지선 세포(human sebocyte)는 Celprogen(USA)에서 구입하여 사용하였다. 배양 배지는 혈청이 포함된 인간 피지선 세포 완전 배지(human sebocyte complete media with serum, M36079-01S, Celprogen, USA)를 사용하여 37℃ 및 5% CO₂ 조건에서 배양하였다.

인간 피부 각질 형성 세포(normal human epidermal keratinocyte, NHEK)는 ATCC(american type culture collection, USA)에서 구입하여 사용하였다. 배양 배지는 케라티노사이트 성장 키트(keratinocyte growth kit, ATCC, USA)를 첨가한 피부 세포 기저 배지(dermal cell basal medium, ATCC, USA)를 사용하여 37℃ 및 5% CO₂ 조건에서 배양하였다.

말라세지아 레스트릭타(Malassezia restricta, M.restricta), 말라세지아 글로보사(Malassezia globosa, M.globosa) 및 큐티박테리움 아크네스(Cutibacterium acnes, C.acnes)의 배양 조건 - 균주 배양 조건

실험에 사용된 말라세지아 레스트릭타(Malassezia restricta, M.restricta, KCTC 27527), 말라세지아 글로보사(Malassezia globosa, M.globosa, KCTC 27535), 그리고 큐티박테리움 아크네스(Cutibacterium acnes, C.acnes, KCTC 3314)는 두피 염증 원인 균주들로서, 한국생명공학연구원의 생물자원센터(korean collection for type cultures, KCTC)에서 분양 받았다. 말라세지아 레스트릭타 및 말라세지아 글로보사는 리밍 앤 노트만 아가(leeming and notman agar, LNA, Kisanbio, Korea) 배지를 사용하여 32℃ 조건에서 배양하고, 3일에 한번씩 계대배양하였다. 큐티박테리움 아크네스는 뇌심장침출액(brain heart infusion, BHI)배지를 사용하여 37℃ 조건에서 배양하고, 2일에 한번씩 계대배양하였다.

실험예 1: 말라세지아 레스트릭타( Malassezia restricta, M.restricta) 로 유도된 피지 과다 생성 억제 평가

상기 제조예 1에 따른 위성류 추출물에 의한 염증성 피지 과다 생성 억제 평가를 위하여, 인간 피지선 세포(human sebocyte) 배양액을 1X10⁵ 세포/웰(cells/well)의 농도로 24웰 플레이트(well plate)에 분주한 후 상기 세포 배양 조건으로 24시간 동안 배양하였다.

배양 배지를 제거한 후 인간 피지선 세포를 무혈청 배지(human sebocyte serum free media, M36079-01, Celprogen, USA)로 옮겼고, 인간 피지선 세포가 있는 무혈청 배지에 상기 균주 배양 조건에 따른 말라세지아 레스트릭타 배양액 2.5%(v/v)를 처리하여 피지 생성을 유도하였다. 그 다음 제조예 1에 따른 위성류 추출물을 각 12.5 ppm 및 25 ppm의 농도로 동시에 처리하여 피지 생성 억제 효과를 측정하였다. 피지 생성 억제 효과를 측정하기 위하여 오일 레드 오(Oil Red O) 염색법을 사용하였고, 보다 구체적으로 다음의 과정을 실행하였다. 말라세지아 레스트릭타 배양액과 위성류 추출물을 동시에 처리한 후 48시간 동안 방치하였다. 그 다음 PBS(phosphate buffer saline)로 인간 피지선 세포를 세척하였고, 세척한 인간 피지선 세포를 30분 동안 10% 포름알데히드 용액으로 고정하였다. 고정된 인간 피지선 세포는 PBS로 2회, 50% 이소프로판올로 1회 세척한 후, 0.4% 오일 레드 오 용액으로 45분 동안 염색하였다. 염색된 인간 피지선 세포는 70% 에탄올로 1회, PBS로 2회 세척하였다. 세척 후 웰 플레이트를 충분히 건조하였고, 인간 피지선 세포에 염색된 오일 레드 오 용액을 100% 이소프로판올로 다시 녹여내었다. 그 다음 마이크로 플레이트 리더(micro plate reader)로 520nm 파장에서 흡광도를 측정하여 세포 내 생성된 중성 지방의 양을 측정하였다. 이때 인간 피지선 세포에 말라세지아 레스트릭타 배양액을 처리하고 위성류 추출물은 처리하지 않은 군을 대조군으로, 인간 피지선 세포에 말라세지아 레스트릭타 배양액 및 위성류 추출물을 둘 다 처리하지 않은 군을 무처리 대조군으로 사용하였고, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

시료	피지 생성율 (%)	피지 생성 증가 저해율 (%, 대조군(M) 대비)
무처리 대조군	100	-
대조군(M.restricta 배양액 2.5%) (M)	142.02	0
M+위성류 추출물 12.5 ppm	116.26	18.14
M+위성류 추출물 25 ppm	111.96	21.17

상기 표 1을 통하여, 인간 피지선 세포에 말라세지아 레스트릭타 배양액만 처리한 대조군은 무처리 대조군에 비해 피지 생성을 확연히 유도시키며, 인간 피지선 세포에 말라세지아 레스트릭타 배양액 및 일 구현예에 따른 위성류 추출물을 처리한 경우 말라세지아 레스트릭타 배양액으로 유도된 피지 생성을 효과적으로 억제하는 것을 확인할 수 있었다.

실험예 2: 큐티박테리움 아크네스( Cutibacterium acnes, C.acnes )로 유도된 인간 피지선 세포에서의 염증성 사이토카인 발현 억제 평가

상기 제조예 1에 따른 위성류 추출물에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제 평가를 위하여, 인간 피지선 세포(Human Sebocyte)를 1X10⁶셀/웰(cells/well)의 농도로 6웰 플레이트에 분주한 후 상기 세포 배양 조건으로 24시간 동안 배양하였다. 배양 배지를 제거한 후 인간 피지선 세포를 무혈청 배지로 옮겼고, 인간 피지선 세포가 있는 무혈청 배지에 상기 균주 배양 조건에 따른 큐티박테리움 아크네스 10%(v/v)를 처리하여 염증 반응을 유도하였다. 그 다음 제조예 1에 따른 위성류 추출물을 25 ppm의 농도로 24시간 동안 동시 처리하였고, 이후 세포 내 염증성 사이토카인 IL-1β(interleukin-1β), IL-6(interleukin-6), IL-8(interleukin-8) 및 TNF-α(tumor necrosis factor-α)의 유전자 발현량을 정량 실시간 피씨알(PCR, polymerase chain reaction)(quantitative real time-PCR, qRT-PCR) 실험법을 통해 확인하였다. 구체적인 과정은 이하와 같다.

간편-스핀 총 RNA 추출 키트(easy-spin total RNA extraction kit, iNtRON BIOTECHNOLOGY, Korea)를 이용하여 세포에서 RNA를 추출하였다. 일정량의 RNA를 취한 다음 막심 실시간 프리믹스 올리고 디티(Maxime^TM RT Premix Oligo dt, iNtRON BIOTECHNOLOGY, Korea)를 사용하여 cDNA를 합성하였다. 유전자의 발현을 측정하기 위하여 파워 에스와이비알 그린 피씨알 마스터 믹스(Power SYBR^TM Green PCR master mix, Applied Biosystems, USA)와 각각의 primer 그리고 합성된 cDNA를 이용하여 7500 신속 실시간 피씨알 시스템(7500 Fast Real-Time PCR System, Applied Biosystems, USA) 기기에서 반응시켰다. 피씨알(PCR) 과정은 40 cycle 수행하였고, 결과는 Excel를 이용하여 분석정량하였으며, 분석법으로는 비교 씨티(CT, cycle of threshold)(comparative CT) 방법을 이용하였다. 이때 인간 피지선 세포에 큐티박테리움 아크네스 배양액을 처리하고 위성류 추출물은 처리하지 않은 군을 대조군으로, 인간 피지선 세포에 큐티박테리움 아크네스 배양액 및 위성류 추출물을 둘 다 처리하지 않은 군을 무처리 대조군으로 사용하였고, 그 결과는 하기 표 2에 나타내었다.

시료	IL-1β 비율	IL-6 비율	IL-8 비율	TNF-α 비율
무처리 대조군	1.0	1.0	1.0	1.0
대조군(C.acnes 배양액 10%)	1.95	6.61	1.35	29.00
C+위성류 25 ppm	1.12	3.16	1.09	7.60

- 비율: 무처리 대조군 대비 염증성 사이토카인 유전자 발현 비에 해당함.

상기 표 2를 통하여, 일 구현예에 따른 위성류 추출물이 큐티박테리움 아크네스로 유도된 염증성 사이토카인 IL-1β, IL-6, IL-8 및 TNF-α의 유전자 발현을 효과적으로 감소시킴을 확인하였다.

인간 피지선 세포에 큐티박테리움 아크네스 배양액만 처리한 대조군은 무처리 대조군에 비해 염증성 사이토카인의 발현을 확연히 유도하며, 인간 피지선 세포에 큐티박테리움 아크네스 배양액 및 일 구현예에 따른 위성류 추출물을 처리한 경우 큐티박테리움 아크네스 배양액으로 유도된 염증성 사이토카인의 발현을 효과적으로 억제하는 것을 확인할 수 있었다.

실험예 3: 말라세지아 글로보사( Malassezia globosa, M.globosa) 와 큐티박테리움 아크네스( Cutibacterium acnes, C.acnes )의 리파아제 활성 저해 평가

말라세지아 글로보사와 큐티박테리움 아크네스가 분비하는 리파아제(lipase)는 피지 구성물인 트리글리세라이드(triglyceride)와 에스테르(ester)를 분해하여 피부 자극성의 불포화 지방산인 리놀레산(linoleic acid)과 올레산(oleic acid)이 만들어진다. 제조예 1에 따른 위성류 추출물의, 말라세지아 글로보사와 큐티박테리움 아크네스가 분비하는 리파아제의 활성 저해 효과를 평가하기 위해, 지질분해효소 활성(lipolytic enzyme activity) 측정을 통해 지방 분석(Lipase assay)을 수행하였고, 구체적으로 다음의 과정을 실행하였다.

제조예 1에 따른 위성류 추출물에 의한 리파아제 활성 저해 효과를 평가하기 위해, 먼저 상기 균주 배양 조건에 따른 말라세지아 글로보사 배양액 200μl에 90 mM 시트르산염 완충액(citrate buffer) 30μl, 10 mM 4-나이트로페닐 도데카노에이트(4-Nitrophenyl dodecanoate, p-NPD) 30μl, 5% 트리톤 엑스-100(triton X-100) 30μl, 그리고 트리스-염산 완충액(Tris-HCl buffer)(pH 8.0) 610μl을 첨가하여 효소 완충액(enzyme buffer)을 준비하였다. 효소 완충액에 500 ppm 농도의 제조예 1에 따른 위성류 추출물을 100μl 첨가하여 30℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 이때 말라세지아 글로보사 배양액에 위성류 추출물을 처리하지 않은 군을 대조군으로 사용하였다. 그리고 4-나이트로페닐 도데카노에이트(p-NPD)가 4-나이트로페놀(p-nitrophenol)로 가수분해된 정도를 405nm 파장에서 흡광도로 측정하였다. 큐티박테리움 아크네스의 리파아제 활성 억제 효과도 상기와 같은 방법으로 확인하였으며, 큐티박테리움 아크네스에 위성류 추출물을 처리하지 않은 군을 대조군으로 사용하였다. 리파아제(Lipase) 활성율은 위성류 추출물을 처리하지 않은 대조군의 리파아제 활성을 100으로 하여 위성류 추출물을 처리한 경우의 리파아제 활성을 상대적인 수치로 표현하였다. 리파아제 활성율은 하기 식(1)을 이용하여 계산하였다.

식(1) 리파아제 활성율(%)= (B/A) X 100

- A: 위성류 추출물 시료를 처리하지 않은 대조군의 흡광도

- B: 위성류 추출물 시료를 처리한 실험군의 흡광도

측정 결과는 하기 표 3에 나타내었다.

시료	M.globosa 분비 리파아제 활성 저해			C.acnes 분비 리파아제 활성 저해
시료	A	B	리파아제 활성율(%)	A	B	리파아제 활성율(%)
위성류 추출물 500 ppm	2.29	1.39	60.63	2.17	2.01	92.44

그 결과 상기 표 3에 나타낸 바와 같이, 말라세지아 글로보사와 큐티박테리움 아크네스가 분비한 리파아제의 활성을 위성류 추출물이 효과적으로 저해함을 확인할 수 있었다. 즉, 일 구현예에 따른 위성류 추출물이 두피염의 원인이 되는 피부 자극성 불포화 지방산의 생성을 억제하는 데에 효과가 있음을 알 수 있었다.

실험예 4: 피부에 대한 안전성 시험

일 구현예에 따른 위성류 추출물을 포함하는 피부외용제 조성물의 피부 안전성을 확인하기 위해 성인 남녀 30명을 대상으로 위성류 추출물을 도포한 첩포 시험을 진행하여 본 발명의 조성물에 대한 피부 안전성을 평가하였다. 구체적인 측정방법은 이하와 같다.

위성류 추출물을 도포한 첩포를 피부에 부착한 뒤 24시간 경과 후 첩포를 제거하였다. 상기 첩포를 제거한 때로부터 1시간 경과 후에 1차 판독을 시행하였고, 상기 첩포를 제거한 때로부터 24시간 경과 후에 2차 판독을 시행하였다. 위성류 추출물 시료의 피부 자극 강도를 알아보기 위해 피부의 양성 반응 정도에 따라 가중치를 부여하여 피부의 평균 반응 점수를 구해 추출물 시료의 피부 자극을 육안으로 판정하였고, 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.

시료명	1시간 후				24시간 후				피부의 평균 반응 점수	판정
위성류 추출물 1000 ppm	1시간 후				24시간 후				피부의 평균 반응 점수	판정
피부 양성 반응 정도 가중치	0.5	1	2	3	0.5	1	2	3	0	무자극
해당 인원(명)	0	0	0	0	0	0	0	0	0	무자극

상기 표 4에 나타낸 바와 같이, 위성류 추출물 1000 ppm이 도포된 첩포 제거 후 1차 및 2차 판독시에 가중치 0.5 내지 3에 해당하는 피부 양성 반응을 보이는 사람이 없었고, 이를 통해 1000 ppm 이하의 위성류 추출물을 피부에 도포 시 피부에 자극이 없음을 확인할 수 있었다. 즉, 일 구현예에 따른 위성류 추출물을 포함하는 피부외용제 조성물의 경우 피부에 자극이 없음을 알 수 있었다.

이하, 상기한 실험예의 결과를 근거로 하여, 위성류 추출물을 포함하는 피부외형제 조성물의 여러 제형예를 조성하여 제시한다. 그러나, 이들 제형예는 일 구현예를 설명하기 위한 것으로, 일 구현에의 제형이 이들 제형예에만 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명한 것이다.

제형예 1: 린스(rinse)

성분명	함량(중량%)
위성류 추출물(제조예 1)	1.0
세틸알코올	2
스테아릴알코올	2.5
베헤닐알코올	0.5
향료	0.4
실리콘에멀젼	0.4
사이클로메티콘	1.0
디메틸디스테아릴암모늄클로라이드	0.1
시트릭산	0.1 - 1
정제수	잔량

제형예 2: 앰플(ample)

성분명	함량(중량%)
위성류 추출물(제조예 1)	1.0
에탄올	10.0
프로필렌글리콜	2.0
1,3-부틸렌글리콜	1.0
세틸트리메틸암모늄클로라이드	3
디메틸디스테아릴암모늄클로라이드	0.1
라우릴알코올	3
미리스틸알코올	5
세틸알코올	1
향료	0.5
염료	0.0001
정제수	잔량

제형예 3: 토닉(tonic)

성분명	함량(중량%)
위성류 추출물(제조예 1)	1.0
에탄올	40
프로필렌글리콜	10
폴리소르베이트 20	5
향료	0.5
염료	0.0001
정제수	잔량

상기 표 5 내지 7과 같이, 일 구현예에 따른 위성류 추출물을 포함하여 여러 제형으로 조성된 피부외용제 조성물의 경우, 인체에 부작용이 적고 안전하면서도, 두피 염증 원인균에 의한 피지의 과다 생성 및 염증성 사이토카인의 발현을 억제하고 리파아제의 활성을 저해함으로써, 두피 장벽 기능 유지 및 두피의 염증 억제 효과가 향상, 즉 뛰어난 두피 상태 개선 효과를 나타낼 수 있다.

이상을 통해 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 설명하였지만, 본 발명은 이에 한정되는 것이 아니고 특허청구범위와 발명의 상세한 설명 및 첨부한 도면의 범위 안에서 여러 가지로 변형하여 실시하는 것이 가능하고 이 또한 본 발명의 범위에 속하는 것은 당연하다.

Claims

위성류 추출물을 유효성분으로 포함하고,
상기 위성류 추출물은 두피 염증 원인균에 의한 두피 염증을 억제하고,
상기 두피 염증 원인균은 말라세지아 레스트릭타(Malassezia restricta), 말라세지아 글로보사(Malassezia globosa), 큐티박테리움 아크네스(Cutibacterium acnes) 또는 이들의 조합을 포함하는 것인 두피 상태 개선용 피부외용제 조성물.
삭제
제1항에서,
상기 위성류 추출물은 위성류의 잎, 꽃, 열매, 줄기, 뿌리, 종자 또는 이들의 조합으로부터 추출되는 것인 두피 상태 개선용 피부외용제 조성물.
제1항에서,
상기 위성류 추출물의 농도는 1 ppm 내지 1000 ppm인 것인 두피 상태 개선용 피부외용제 조성물.
제1항에서,
상기 위성류 추출물은 상기 피부외용제 조성물의 총량에 대하여 0.001 중량% 내지 10 중량%로 포함되는 것인 두피 상태 개선용 피부외용제 조성물.
제1항에서,
상기 위성류 추출물은 두피 염증 원인균인 말라세지아 레스트릭타(Malassezia restricta)에 의한 피지의 과다 생성을 억제하는 것인 두피 상태 개선용 피부외용제 조성물.
제1항에서,
상기 위성류 추출물은 두피 염증 원인균인 큐티박테리움 아크네스(Cutibacterium acnes)에 의한 염증성 사이토카인(cytokine)의 발현을 억제하는 것인 두피 상태 개선용 피부외용제 조성물.
제1항에서,
상기 위성류 추출물은 두피 염증 원인균인 말라세지아 글로보사(Malassezia globosa) 및 큐티박테리움 아크네스(Cutibacterium acnes)의 리파아제(lipase) 활성을 저해하는 것인 두피 상태 개선용 피부외용제 조성물.
삭제
제1항에서,
상기 위성류 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물을 사용하여 추출되는 것인 두피 상태 개선용 피부외용제 조성물.
제10항에서,
상기 위성류 추출물은 상기 유기용매를 사용하여 추출되고,
상기 유기용매는 탄소수 1 내지 10의 알코올을 포함하는 것인 두피 상태 개선용 피부외용제 조성물.
제1항에서,
상기 두피 상태 개선용 피부외용제 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클린싱 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 샴푸, 린스, 토닉, 스프레이 또는 이들의 조합을 포함하는 제형을 갖는 것인 두피 상태 개선용 피부외용제 조성물.
제1항에서,
상기 두피 상태 개선용 피부외용제 조성물은 두피 상태 개선용 화장료 조성물, 두피 상태 개선용 의약외품 조성물, 또는 두피에 생긴 아토피성 피부염, 지루성 피부염, 여드름 또는 건선의 예방 또는 치료용 약학 조성물인 것인 두피 상태 개선용 피부외용제 조성물.