KR102260680B1 - 신규 항 인간 tslp 수용체 항체 - Google Patents

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Abstract

[과제] 인간 TSLP 수용체에 특이적으로 결합하여, 인간 TSLP 수용체를 매개하는 인간 TSLP의 작용을 저해하는 항 인간 TSLP 수용체 항체를 제공한다. [해결수단] 본 발명자들은 항 인간 TSLP 수용체 항체에 대해서 검토하고, 서열 번호 1의 아미노산 번호 1부터 118까지의 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 3의 아미노산 번호 1부터 108까지의 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체를 제공하였다. 상기 항 인간 TSLP 수용체 항체가, TSLP에 의해 유발되는 TARC mRNA의 발현 및 MDC 단백질의 생산을 저해하고, 나아가 원숭이 아스카리스(simian ascaris) 항원 감작 모델에 있어서 알레르기 반응을 억제하는 것을 밝히고, 본 발명을 완성하였다.

Description

신규 항 인간 TSLP 수용체 항체{NOVEL ANTI-HUMAN TSLP RECEPTOR ANTIBODY}
본 발명은 신규의 항 인간 TSLP 수용체 항체에 관한 것이다.
흉선 간질성 림프구성 신생 인자(thymic stromal lymphopoietin; TSLP)는 염증 촉진성 자극에 응답해서 생산되는, 상피세포 유래의 사이토카인이다. 주로, TSLP는 수상 세포(dendritic cell) 및 마스트 세포에 대한 활성화를 매개하여, 알레르기성 염증 반응을 촉진한다. 수상 세포는, 헤마토포이에틴 수용체 패밀리의 멤버인 TSLP 수용체와 IL-7 수용체 α쇄를 발현하고, TSLP는 TSLP 수용체와 IL-7 수용체 α쇄를 포함하는 헤테로 이량체를 수용체로서 결합하고, 수상 세포를 활성화한다. TSLP에 의해 활성화된 수상 세포는, 흉선 및 활성화 제어 케모카인(thymus and activation regulated chemokine; TARC(CCL17)), 매크로파지 유래 케모카인(macrophage-derived chemokine; MDC(CCL22)) 등의 염증성 케모카인을 발현한다(Nat.Immunol., 2002, Vol. 7, p.673-680). TARC 및 MDC는 Th2 케모카인이며, 염증 부위에 Th2 세포를 유인하는 것이 알려졌다(Int.Immunol., 1999, Vol. 11, p.81-88). 또한, TSLP에 의해 활성화된 수상 세포는, 나이브 T 세포를 Th2형으로 강력하게 분화 유도시키고, 이 Th2 세포는 IL-4, IL-5, IL-13 및 TNFα를 생산하여, 염증 반응을 야기시킨다(Nat.Immunol., 2002, Vol. 7, p.673-680).
이러한 TSLP 수용체를 매개하는 TSLP에 의한 수상 세포의 활성화는, 천식 등의 알레르기성 염증 질환이나, 전신성 강피증의 병태 형성에 관여하는 것이 보고되어 있다.
천식과의 관련으로서는, TSLP가 폐 특이적으로 발현 항진하는 트랜스제닉 마우스에서, 폐 중의 Th2 사이토카인량과 IgE량의 증가에 수반하여, 기도에서의 염증 반응이 야기되어, 천식 유사 병태에 이르는 것이 보고되어 있다(Nat.Immunol., 2005, Vol. 6, p.1047-1053). 또한, TSLP 수용체의 녹아웃 마우스나 항 TSLP 수용체 항체가 투여된 천식 병태 모델에 있어서, Th2 사이토카인이나 혈중 IgE의 생산이 억제됨과 함께, 호흡 기능의 개선 효과가 확인되었다(J.Exp.Med., 2005, Vol. 202, p.829-839 및 Clin.Immunol., 2008, Vol. 129, p.202-210). 또한, 천식 환자에 있어서, 질환의 중증도와 상관하여, TSLP와 TARC 및 MDC의 발현이 천식 기도에서 증대되는 것이 보고되어 있다(J.Immunol., 2005, Vol. 174, p.8183-8190 및 J.Immunol., 2008, Vol. 181, p.2790-2798).
전신성 강피증과의 관련으로서는, 전신성 강피증 환자의 피부에서 TSLP가 과잉 발현하고 있는 것(Arthritis Rheum., 2013, Vol. 65, p.1335-1346), TSLP 수용체의 녹아웃 마우스를 사용한 블레오마이신 유발 강피증 모델 시험에 있어서, 피부의 염증 국소에서 IL-13 및 IL-17의 발현이 거의 완전히 억제되어, 병리상에 있어서도 콜라겐이 차지하는 비율이 유의미하게 개선되는 것이 보고되어 있다(Ann.Rheum.Dis., 2013, Vol. 72, p.2018-23).
따라서, 인간 TSLP 수용체에 특이적으로 결합하여, 인간 TSLP 수용체를 매개하는 인간 TSLP의 작용을 저해하는 모노클로널 항체를 개발할 수 있으면, 인간 TSLP 및 인간 TSLP 수용체가 병태 형성에 관여하는 각종 질환의 예방 및 치료에 유용한 것이 기대된다.
현재까지 연구가 진행되어 온 인간 TSLP 수용체에 대한 항체로서는, 마우스 모노클로널 항체인 13H5 및 그의 인간화 항체인 hu13H5(특허문헌 1), 마우스 모노클로널 항체인 1D6.C9, 그의 키메라 항체인 NV115-3B-IgG1 및 NV115-3B-IgG4(특허문헌 2), 완전 인간형 항체인 NV164-1 및 NV163-1(특허문헌 3), 햄스터 유래의 인간화 모노클로널 항체인 TSLPR-012_141(특허문헌 4)이 보고되어 있다.
13H5는 TSLP 자극에 의한 인간 TSLP 수용체 안정 발현 Ba/F3 세포의 증식 분석계에 있어서 중화 활성이 확인되었지만, hu13H5의 중화 활성은 확인되어 있지 않다(특허문헌 1). 또한, 특허문헌 2 내지 4의 기재에 기초하여, 이들 문헌에 기재된 항체 중, TSLPR-012_141이 가장 중화 활성이 높다고 이해된다(특허문헌 2 내지 4). TSLPR-012_141에 대해서는 여러 가지 중화 활성 시험으로 평가되고 있다. 예를 들어, TSLP 자극에 의한 인간 TSLP 수용체 안정 발현 Ba/F3 세포의 증식 분석계, TSLP자극 인간 말초혈 유래 수상 세포의 TARC, MDC 및 IL-8 생산 분석계, 및 TSLP 자극 인간 말초혈 유래 수상 세포 및 나이브 T 세포 공배양계에서의 Th2 사이토카인 생산 분석계 등에 있어서, TSLPR-012_141이 중화 활성을 나타내는 것이 확인되었다(특허문헌 4). 그러나 항체 의약으로서 사용하기 위해서 더 높은 중화 활성을 갖는 항체가 요망된다.
항체 의약의 유효 투여량을 규정하는 주된 요인으로서는, 항체가 갖는 항원에 대한 결합 활성이나 중화 활성, 체내에 존재하는 항원의 양을 들 수 있지만, 결합 활성이나 중화 활성을 향상시키는 것은 투여량 감소로 이어지고, 결과로서 환자의 경제적인 부담이나 의료 비용의 절감에도 연결되는 극히 유익한 개량이라고 할 수 있다.
이러한 점에서, 종래의 항 인간 TSLP 수용체 항체보다도 활성이 우수한 항 인간 TSLP 수용체 항체를 취득하는 것이, 각종 질환의 예방 및 치료에 이용하기 위해서는 필요하다.
국제 공개 제2009/100324호 국제 공개 제2007/112146호 국제 공개 제2008/155365호 국제 공개 제2012/007495호
본 발명의 과제는 인간 TSLP 수용체에 특이적으로 결합하여, 인간 TSLP 수용체를 매개하는 인간 TSLP의 작용을 저해하는 항 인간 TSLP 수용체 항체를 제공하는 데 있다.
본 발명자들은 항 인간 TSLP 수용체 항체의 제작에 있어서 상당하는 창의 검토를 거듭한 결과, 서열 번호 1의 아미노산 번호 1부터 118까지의 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 3의 아미노산 번호 1부터 108까지의 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체를 제공하였다. 상기 항 인간 TSLP 수용체 항체가, TSLP에 의해 유발되는 TARC mRNA의 발현 및 MDC 단백질의 생산을 저해하고(실시예 5 및 6), 나아가 원숭이 아스카리스(simian ascaris) 항원 감작 모델에 있어서 알레르기 반응을 억제하는(실시예 7) 것을 밝히고, 본 발명을 완성하였다.
즉, 본 발명은 의학상 또는 산업상 유용한 물질 또는 방법으로서 이하의 발명을 포함하는 것이다.
(1) 서열 번호 1의 아미노산 번호 1부터 118까지의 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 3의 아미노산 번호 1부터 108까지의 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트.
(2) 상기 항체의 중쇄 정상 영역이 인간 Igγ1 정상 영역인, 상기 (1)에 기재된 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트.
(3) 상기 항체의 경쇄 정상 영역이 인간 Igκ 정상 영역인, 상기 (1)에 기재된 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트.
(4) 상기 항체의 중쇄 정상 영역이 인간 Igγ1 정상 영역이며, 상기 항체의 경쇄 정상 영역이 인간 Igκ 정상 영역인, 상기 (1)에 기재된 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트.
(5) 상기 항원 결합 프래그먼트가 단일 쇄 가변 영역 프래그먼트, Fab, Fab' 또는 F(ab')2인, 상기 (1) 내지 (4)에 기재된 항원 결합 프래그먼트.
(6) 서열 번호 1에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 및 서열 번호 3에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는, 상기 (1)에 기재된 항 인간 TSLP 수용체 항체.
(7) 서열 번호 1의 아미노산 번호 1부터 447까지의 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 및 서열 번호 3에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는, 상기 (1)에 기재된 항 인간 TSLP 수용체 항체.
(8) 상기 (1)에 기재된 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는, 폴리뉴클레오티드.
(9) 상기 (1)에 기재된 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는, 폴리뉴클레오티드.
(10) 상기 (8) 및/또는 (9)에 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터.
(11) 이하의 (a) 내지 (d)로 이루어지는 군에서 선택되는, 상기 (10)에 기재된 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
(a) 상기 (1)에 기재된 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드와 해당 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(b) 상기 (1)에 기재된 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터와 해당 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(c) 상기 (1)에 기재된 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; 및
(d) 상기 (1)에 기재된 항 인간 TSLP 수용체 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
(12) 이하의 (a) 내지 (d)로 이루어지는 군에서 선택되는, 상기 (10)에 기재된 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
(a) 상기 (6)에 기재된 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드와 해당 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(b) 상기 (6)에 기재된 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터와 해당 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(c) 상기 (6)에 기재된 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; 및
(d) 상기 (6)에 기재된 항 인간 TSLP 수용체 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
(13) 상기 (11)에 기재된 숙주 세포를 배양하고, 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트를 발현시키는 공정을 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트를 생산하는 방법.
(14) 상기 (12)에 기재된 숙주 세포를 배양하고, 항 인간 TSLP 수용체 항체를 발현시키는 공정을 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체를 생산하는 방법.
(15) 상기 (13)에 기재된 방법으로 생산된 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트.
(16) 상기 (14)에 기재된 방법으로 생산된 항 인간 TSLP 수용체 항체.
(17) 상기 (1) 내지 (7), (15) 및 (16) 중 어느 하나에 기재된 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 의약 조성물.
(18) 천식의 예방 또는 치료용 의약 조성물인, 상기 (17)에 기재된 의약 조성물.
(19) 상기 (1) 내지 (7), (15) 및 (16) 중 어느 하나에 기재된 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트의 치료 유효량을 투여하는 공정을 포함하는, 천식을 예방 또는 치료하는 방법.
(20) 천식의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 상기 (1) 내지 (7), (15) 및 (16) 중 어느 하나에 기재된 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트.
(21) 천식의 예방 또는 치료용 의약 조성물의 제조에서의, 상기 (1) 내지 (7), (15) 및 (16) 중 어느 하나에 기재된 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트의 용도.
상기 (1) 내지 (7), (15) 및 (16)에 기재된 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트에는, 다른 펩티드 및 단백질과의 융합체나, 수식제를 결합시킨 수식체도 포함된다.
본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체는 인간 TSLP 수용체에 결합하여, 인간 TSLP 수용체를 매개하는 인간 TSLP의 작용에 대한 중화 활성을 갖는 것이며, 천식 등의 알레르기성 염증 질환이나, 전신성 강피증 등의 예방 또는 치료제로서 사용할 수 있다.
도 1은 완전 인간형 T7-27의 원숭이 아스카리스 항원 감작 모델에서의 아스카리스 항원 특이적 IgE 농도의 감소 작용을 나타낸다. 종축은 비히클(Vehicle)군 1개체의 22일에서의 혈장 중 아스카리스 항원 특이적 IgE 농도를 2000U/mL로 했을 때의, 각 샘플의 상대적인 혈장 중 아스카리스 항원 특이적 IgE 농도를 나타낸다. 비히클군 및 항체 투여군의 1일(수산화알루미늄 겔로 현탁한 아스카리스 항원 용액을 투여하기 전)의 IgE 농도, 비히클군의 22일의 IgE 농도, 및 항체 투여군의 22일의 IgE 농도를 나타낸다.
도 2는 완전 인간형 T7-27의 원숭이 아스카리스 항원 감작 모델에서의 아스카리스 항원 특이적 피부반응의 감소 작용을 나타낸다. 22일에 인산 완충 생리 식염수(PBS) 및 100μg/mL의 아스카리스 항원 용액을 투여했을 때의 결과를 나타낸다. 종축은 아스카리스 항원 용액 투여 후의 피부반응의 직경에서 PBS 투여 후의 피부반응의 직경을 뺀 값(델타(delta) cm)을 나타낸다.
도 3은 항 TSLP 수용체 항체의 마우스 천식 모델에서의 기도 반응성 항진 반응의 억제 작용을 나타낸다. 종축은 호흡 기능의 지표로서 사용한 PenH의 값을 나타낸다(★★p<0.01, ★p<0.05, ＃＃p<0.01, ＃p<0.05).
도 4는 항 TSLP 수용체 항체의 마우스 천식 모델에서의 호산구의 침윤 억제 작용을 나타낸다. 종축은 BALF 세포 현탁액 내의 호산구 수를 나타낸다(★★p <0.01).
도 5는 항 TSLP 수용체 항체의 마우스 천식 모델에서의 TARC mRNA의 발현 저해 작용을 나타낸다. 종축은 TARC mRNA의 발현량을 나타낸다.
이하에, 본 발명에 대해서 상세하게 설명한다.
항체에는 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE의 5개의 클래스가 존재하고, 항체 분자의 기본 구조는 각 클래스 공통으로, 분자량 5만 내지 7만의 중쇄와 2만 내지 3만의 경쇄로 구성된다. 중쇄는 통상 약 440개의 아미노산을 포함하는 폴리펩티드 쇄로 이루어지고, 클래스마다 특징적인 구조를 가지며, IgG, IgM, IgA, IgD, IgE에 대응해서 Igγ, Igμ, Igα, Igδ, Igε이라고 불린다. 또한, IgG에는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4의 서브클래스가 존재하고, 각각에 대응하는 중쇄는 Igγ1, Igγ2, Igγ3, Igγ4라고 불리고 있다. 경쇄는 통상 약 220개의 아미노산을 포함하는 폴리펩티드 쇄로 이루어지고, L형과 K형의 2종이 알려져 있으며, 각각 Igλ, Igκ라고 불린다. 항체 분자의 기본 구조의 펩티드 구성은, 각각 상동인 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄가, 디술피드 결합(S-S 결합) 및 비공유 결합에 의해 결합되고, 분자량 15만 내지 19만이다. 2종의 경쇄는 어느 중쇄와도 쌍을 이룰 수 있다. 개개의 항체 분자는 항상 동일한 경쇄 2개와 동일한 중쇄 2개로 되어 있다.
쇄내 S-S 결합은 중쇄에 4개(Igμ, Igε에는 5개), 경쇄에는 2개 있고, 아미노산 100 내지 110 잔기마다 하나의 루프를 이루고, 이 입체 구조는 각 루프 간에서 유사하여, 구조 단위 또는 도메인이라고 불린다. 중쇄, 경쇄 모두 아미노 말단(N 말단)측에 위치하는 도메인은, 동종 동물의 동일 클래스(서브클래스)로부터의 표품이어도, 그 아미노산 서열이 일정하지 않아, 가변 영역이라고 불리며, 각 도메인은 각각, 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)이라고 불리고 있다. 가변 영역에서 카르복시 말단(C 말단)측의 아미노산 서열은, 각 클래스 또는 서브클래스마다 거의 일정하여 정상 영역이라고 불리고 있다(각 도메인은 각각, CH1, CH2, CH3 또는 CL로 표시됨).
항체의 항원 결정 부위는 VH 및 VL에 의해 구성되고, 결합의 특이성은 이 부위의 아미노산 서열에 따라 정해진다. 한편, 보체나 각종 세포와의 결합과 같은 생물학적 활성은 각 클래스 Ig의 정상 영역 구조의 차를 반영하고 있다. 경쇄와 중쇄의 가변 영역의 가변성은, 어느 쪽 쇄에도 존재하는 3개의 작은 초가변 영역에 거의 한정됨을 알고 있고, 이들 영역을 상보성 결정 영역(CDR; 각각 N 말단측으로부터 CDR1, CDR2, CDR3)이라고 부르고 있다. 가변 영역의 나머지 부분은 프레임 워크 영역(FR)이라고 불리며, 비교적 일정하다.
항체의 VH 및 VL을 포함하는 각종 항원 결합 프래그먼트도 항원 결합 활성을 갖고, 이러한 대표적인 항원 결합 프래그먼트로서, 단일쇄 가변 영역 프래그먼트(scFv), Fab, Fab', F(ab')2를 들 수 있다. Fab는 경쇄와, VH, CH1 도메인과 힌지 영역의 일부를 포함하는 중쇄 프래그먼트로 구성되는, 1가의 항체 프래그먼트이다. Fab'는 경쇄와, VH, CH1 도메인과 힌지 영역의 일부를 포함하는 중쇄 프래그먼트로 구성되는, 1가의 항체 프래그먼트이며, 이 힌지 영역의 부분에는 중쇄간 S-S 결합을 구성하고 있던 시스테인 잔기가 포함된다. F(ab')2 프래그먼트는 2개의 Fab'프래그먼트가 힌지 영역 중의 중쇄간 S-S 결합으로 결합한 2가의 항체 프래그먼트이다. scFv는 링커로 연결된 VH와 VL로 구성되는, 1가의 항체 프래그먼트이다.
<본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체>
본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트는 이하의 특징을 갖는 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트이다.
서열 번호 1의 아미노산 번호 1부터 118까지의 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 3의 아미노산 번호 1부터 108까지의 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트.
바람직하게는, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 결합 프래그먼트는 상기 특징을 갖고, 중쇄 정상 영역 및 경쇄 정상 영역을 더 포함한다. 정상 영역으로서는, 어떤 서브클래스의 정상 영역(예를 들어, 중쇄 정상 영역으로서 Igγ1, Igγ2, Igγ3 또는 Igγ4의 정상 영역, 경쇄 정상 영역으로서 Igλ 또는 Igκ의 정상 영역)도 선택 가능할 수 있지만, 중쇄 정상 영역으로서 인간 Igγ1 정상 영역이 바람직하고, 경쇄 정상 영역으로서는 인간 Igκ 정상 영역이 바람직하다.
인간 Igγ1 정상 영역으로서는, 예를 들어, 서열 번호 1의 아미노산 번호 119부터 448까지의 아미노산 서열로 이루어지는 인간 Igγ1 정상 영역을 들 수 있다.
인간 Igκ 정상 영역으로서는, 예를 들어, 서열 번호 3의 아미노산 번호 109부터 214까지의 아미노산 서열로 이루어지는 인간 Igκ 정상 영역을 들 수 있다.
본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트로서는, 상기 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 정상 영역이 인간 Igγ1 정상 영역이며, 경쇄 정상 영역이 인간 Igκ 정상 영역인, 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트가 보다 바람직하다.
일 실시 형태에서, 본 발명의 항원 결합 프래그먼트는 scFv, Fab, Fab' 또는 F(ab')2이다.
당업자라면 당해 분야에서 공지된 방법을 사용하여, 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트와 다른 펩티드나 단백질과의 융합체를 제작하는 것이나, 수식제를 결합시킨 수식체를 제작하는 것도 가능하다. 본 발명의 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트에는, 이러한 융합체나 수식체 형태의 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트도 포함된다. 예를 들어, 서열 번호 1의 아미노산 번호 1부터 118까지의 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 3의 아미노산 번호 1부터 108까지의 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트에는, 해당 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 결합 프래그먼트와 다른 펩티드나 단백질과의 융합체나, 수식제를 결합시킨 수식체도 포함된다. 융합에 사용되는 다른 펩티드나 단백질은, 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트의 결합 활성을 저하시키지 않는 것인 한 특별히 한정되지 않고, 예를 들어, 인간 혈청 알부민, 각종 태그 펩티드, 인공 헬릭스 모티브 펩티드, 말토오스 결합 단백질, 글루타티온 S 트란스페라제, 각종 독소, 기타 다량체화를 촉진할 수 있는 펩티드 또는 단백질 등을 들 수 있다. 수식에 사용되는 수식제는 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트의 결합 활성을 저하시키지 않는 것인 한 특별히 한정되지 않고, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜, 당쇄, 인지질, 리포솜, 저분자 화합물 등을 들 수 있다.
일 실시 형태에서, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체는 이하의 특징을 갖는 항 인간 TSLP 수용체 항체이다.
서열 번호 1에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 및 서열 번호 3에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체.
항체를 세포에서 발현시킬 경우, 항체가 번역 후에 수식을 받는 것이 알려져 있다. 번역 후 수식의 예로서는, 중쇄 C 말단의 리신(lysine)의 카르복시 펩티다제에 의한 절단, 중쇄 및 경쇄 N 말단의 글루타민 또는 글루탐산의 피로 글루타밀화에 의한 피로 글루탐산으로의 수식 등을 들 수 있고, 여러 가지 항체에서, 중쇄 C 말단의 리신이 결실하는 것이나 중쇄 N 말단의 글루타민 대부분이 피로글루탐산으로의 수식을 받는 것이 알려져 있다(Journal of Pharmaceutical Sciences, 2008, Vol. 97, p.2426). 또한, 이러한 번역 후 수식이 항체의 활성에 영향을 미치는 것이 아닌 것도 당해 분야에서 알려져 있다(Analytica1 Biochemistry, 2006, Vol. 348, p.24-39).
본 발명의 항체에는, 완전 길이의 중쇄를 갖는 항체뿐만 아니라, C 말단의 리신을 결실하는 중쇄를 갖는 항체, 중쇄 N 말단의 글루타민 또는 글루탐산이 피로글루타밀화에 의한 피로글루탐산으로의 수식을 받은 항체 등, 세포 내에서의 발현 시에 번역 후 수식을 받은 항체도 포함된다. 또한, 본 발명의 항원 결합 프래그먼트에는, 항원 결합 프래그먼트의 N 말단의 글루타민 또는 글루탐산이 피로글루타밀화에 의한 피로글루탐산으로의 수식을 받은 항원 결합 프래그먼트 등, 세포 내에서의 발현 시에 번역 후 수식을 받은 항원 결합 프래그먼트도 포함된다.
예를 들어, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체에는, 이하에 기재되는 항 인간 TSLP 수용체 항체도 포함된다.
서열 번호 1의 아미노산 번호 1의 글루탐산이 피로글루탐산으로 수식되고/되거나 서열 번호 1의 아미노산 번호 448의 리신을 결실하는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄, 및 서열 번호 3에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체.
본 발명에는, 이하의 특징을 갖는 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트도 포함된다.
서열 번호 1의 아미노산 번호 31부터 35까지의 아미노산 서열로 이루어지는 CDR1, 서열 번호 1의 아미노산 번호 50부터 66까지의 아미노산 서열로 이루어지는 CDR2 및 서열 번호 1의 아미노산 번호 99부터 107까지의 아미노산 서열로 이루어지는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 3의 아미노산 번호 24부터 34까지의 아미노산 서열로 이루어지는 CDR1, 서열 번호 3의 아미노산 번호 50부터 56까지의 아미노산 서열로 이루어지는 CDR2 및 서열 번호 3의 아미노산 번호 89부터 97까지의 아미노산 서열로 이루어지는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트.
본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트는, 인간 TSLP 수용체에 결합한다. 항체 또는 항원 결합 프래그먼트가 인간 TSLP 수용체에 결합하는 지의 여부는, 공지된 결합 활성 측정 방법을 사용해서 확인할 수 있다. 결합 활성을 측정하는 방법으로서는, 예를 들어, 효소 결합 면역흡착 측정법(Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA))이나 표면 플라즈몬 공명(SPR) 등의 방법을 들 수 있다. ELISA를 사용하는 경우에는, 예시적인 방법에서, 인간 TSLP 수용체와 인간 Fc를 융합시킨 단백질(인간 TSLP 수용체-인간 Fc 융합 단백질(서열 번호 5의 염기 서열에 의해 코딩됨))을 ELISA 플레이트에 고상화하고, 이에 대해 피검 항체를 첨가해서 반응시킨다. 반응 후, 서양 고추냉이 퍼옥시다아제(HRP) 등의 효소로 표지한 항 IgG 항체 등의 2차 항체를 반응시켜, 세정한 후, 그 활성을 검출하는 시약(예를 들어, HRP 표지의 경우, BM-Chemiluminescence ELISA Substrate(POD)(로슈 다이아그노스틱사)) 등을 사용한 활성 측정에 의해, 피검 항체가 인간 TSLP 수용체에 결합하는 지의 여부를 확인할 수 있다. SPR을 사용하는 경우에는, 예를 들어, Biacore(등록 상표) 2000(GE 헬스케어 재팬사)을 사용할 수 있다. 예시적인 방법에서, 피검 항체를 센서 칩의 표면에 고상화하고, 인간 TSLP 수용체와 마우스 Fc를 융합시킨 단백질(인간 TSLP 수용체-마우스 Fc 융합 단백질(서열 번호 6의 염기 서열에 의해 코딩됨))을 유로에 첨가시킨다. 항체와 인간 TSLP 수용체와의 결합 속도 상수(ka), 해리 속도 상수(kd) 및 해리 상수(KD)를 해석함으로써, 피검 항체가 인간 TSLP 수용체에 결합하는 지의 여부를 확인할 수 있다.
또한, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 프래그먼트에는, 다른 동물 유래의 TSLP 수용체(예를 들어, 원숭이 TSLP 수용체)에도 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트도 포함되고, 마찬가지의 방법을 사용해서 이들 수용체에 대한 결합활성을 측정할 수 있다.
바람직하게는, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트는, 인간 TSLP 수용체에 결합하고, 인간 TSLP 수용체에 대한 중화 활성을 갖는다. 인간 TSLP 수용체에 대한 중화 활성이란, 인간 TSLP 수용체에의 결합에 의해, 인간 TSLP의 인간 TSLP 수용체에의 결합을 통해서 초래되는 임의의 생물활성을 저해하는 활성을 의미하고, 인간 TSLP 수용체를 매개하는 인간 TSLP의 1개 또는 복수의 생물활성을 지표로 평가할 수 있다. 이러한 중화 활성으로서는, 예를 들어, 인간 말초혈 단핵 세포(PBMC)를 사용한 TSLP 유발 TARC mRNA 발현 저해 활성이나 TSLP 유발 MDC 단백질 생산 저해 활성을 들 수 있고, 활성의 구체적인 평가 방법으로서는, 후기 실시예 5 및 6에 기재되는 바와 같은 방법을 사용할 수 있다.
본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트의 효과를 보다 상세하게 평가하기 위해서, 생체 내(in vivo)에서의 시험을 사용할 수도 있다. 예를 들어, 후기 실시예 7에 기재한 바와 같이, 원숭이 아스카리스 항원 감작 모델을 사용하는 항알레르기 반응 시험 등을 사용하여, 항 인간 TSLP 수용체 항체의 생체 내에서의 약효를 평가할 수 있다.
본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트는, 본 명세서에 개시되는, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 서열 정보에 기초하여, 당해 분야에서 공지된 방법을 사용하여, 당업자에 의해 용이하게 제작될 수 있다. 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트는, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예를 들어, 후술하는 <본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체를 생산하는 방법>에 기재된 방법에 따라 제조할 수 있다.
본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트는, 필요에 따라 더 정제된 후, 통상의 방법에 따라서 제제화되어, 천식 등의 알레르기성 염증 질환이나 전신성 강피증 등의, 인간 TSLP 및 인간 TSLP 수용체가 병태 형성에 관여하는 질환의 예방 또는 치료에 사용할 수 있다.
<본 발명의 폴리뉴클레오티드>
본 발명의 폴리뉴클레오티드에는, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 및 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드가 포함된다.
일 실시 형태에서, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호 1의 아미노산 번호 1부터 118까지의 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드이다.
서열 번호 1의 아미노산 번호 1부터 118까지의 아미노산 서열에 나타내는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드로서는, 예를 들어, 서열 번호 2의 염기 번호 1부터 354까지의 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 들 수 있다.
바람직한 실시 형태에서, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호 1에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드이다.
서열 번호 1에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드로서는, 예를 들어, 서열 번호 2에 나타내는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 들 수 있다.
일 실시 형태에서, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호 3의 아미노산 번호 1부터 108까지의 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드이다.
서열 번호 3의 아미노산 번호 1부터 108까지의 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드로서는, 예를 들어, 서열 번호 4의 염기 번호 1부터 324까지의 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 들 수 있다.
바람직한 실시 형태에서, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호 3에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드이다.
서열 번호 3에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드로서는, 예를 들어, 서열 번호 4에 나타내는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 들 수 있다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드는, 그의 염기 서열에 기초하여, 당해 분야에서 공지된 방법을 사용하여, 당업자에 의해 용이하게 제작될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 당해 분야에서 공지된 유전자 합성 방법을 이용해서 합성하는 것이 가능하다. 이러한 유전자 합성 방법으로서는, WO90/07861에 기재된 항체 유전자의 합성 방법 등의 당업자에게 공지된 다양한 방법을 들 수 있다.
<본 발명의 발현 벡터, 본 발명의 형질전환된 숙주 세포, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체를 생산하는 방법 및 해당 방법에 의해 생산된 항 인간 TSLP 수용체 항체>
본 발명의 발현 벡터에는, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 및/또는 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터가 포함된다.
바람직한 본 발명의 발현 벡터로서는, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 또는 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드와 해당 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 들 수 있다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드를 발현시키기 위해서 사용하는 발현 벡터로서는, 진핵세포(예를 들어, 동물 세포, 곤충 세포, 식물 세포, 효모) 및/또는 원핵세포(예를 들어, 대장균)의 각종 숙주 세포 중에서 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 및/또는 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 발현하고, 이들에 의해 코딩되는 폴리펩티드를 생산할 수 있는 것인 한, 특별히 제한되는 것은 아니다. 이러한 발현 벡터로서는, 예를 들어, 플라스미드 벡터, 바이러스 벡터(예를 들어, 아데노바이러스, 레트로바이러스) 등을 들 수 있고, 바람직하게는 pEE 6.4나 pEE 12.4(론자(Lonza)사)를 사용할 수 있다. 또한, AG-γ1이나 AG-κ(예를 들어, WO94/20632를 참조) 등의 미리 인간 Ig 정상 영역 유전자를 갖는 발현 벡터에 가변 영역 유전자 단편을 도입해서 항체 유전자를 발현할 수도 있다.
본 발명의 발현 벡터는 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 기능 가능하게 연결된 프로모터를 포함할 수 있다. 동물 세포에서 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 발현시키기 위한 프로모터로서는, 예를 들어, CMV, RSV, SV40 등의 바이러스 유래 프로모터, 엑틴 프로모터, EF(elongation factor; 신장 인자) 1α 프로모터, 히트 쇼크 프로모터 등을 들 수 있다. 세균(예를 들어, 에세리키아속 균)에서 발현시키기 위한 프로모터로서는, 예를 들어, trp 프로모터, lac 프로모터, λPL 프로모터, tac 프로모터 등을 들 수 있다. 또한, 효모에서 발현시키기 위한 프로모터로서는, 예를 들어, GAL1 프로모터, GAL10 프로모터, PH05 프로모터, PGK 프로모터, GAP 프로모터, ADH 프로모터 등을 들 수 있다.
본 발명의 형질전환된 숙주 세포에게는, 이하의 (a) 내지 (d)로 이루어지는 군에서 선택되는, 본 발명의 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포가 포함된다.
(a) 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드와 해당 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(b) 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터와 해당 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(c) 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; 및
(d) 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
일 실시 형태에서, 본 발명의 형질전환된 숙주 세포는 이하의 (a) 내지 (d)로 이루어지는 군에서 선택되는, 본 발명의 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포이다.
(a) 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드와 해당 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(b) 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터와 해당 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
(c) 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; 및
(d) 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
숙주 세포로서 동물 세포, 곤충 세포, 또는 효모를 사용하는 경우, 본 발명의 발현 벡터는 개시 코돈 및 종지 코돈을 포함할 수 있다. 이 경우, 본 발명의 발현 벡터는 인핸서 서열, 본 발명의 항체 또는 그 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 유전자의 5'측 및 3'측의 비번역 영역, 분비 시그널 서열, 스플라이싱(splicing) 접합부, 폴리아데닐레이션 부위, 또는 복제 가능 단위 등을 포함하고 있어도 된다. 숙주 세포로서 대장균을 사용하는 경우, 본 발명의 발현 벡터는 개시 코돈, 종지 코돈, 터미네이터 영역 및 복제 가능 단위를 포함할 수 있다. 이 경우, 본 발명의 발현 벡터는 목적에 따라서 통상 사용되는 선택 마커(예를 들어, 테트라사이클린 내성 유전자, 암피실린 내성 유전자, 카나마이신 내성 유전자, 네오마이신 내성 유전자, 디히드로 엽산 환원효소 유전자)를 포함하고 있어도 된다.
바람직한 본 발명의 형질전환된 숙주 세포로서는, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드와 해당 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터와 해당 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 들 수 있다.
형질전환되는 숙주 세포로서는, 사용하는 발현 벡터에 적합하고, 해당 발현 벡터로 형질전환되어서 항체를 발현할 수 있는 것인 한, 특별히 한정되는 것은 아니다. 형질전환되는 숙주 세포로서는, 예를 들어, 본 발명의 기술 분야에서 통상 사용되는 천연 세포 또는 인공적으로 수립된 세포 등의 다양한 세포(예를 들어, 동물 세포(예를 들어, CHO-K1SV 세포), 곤충 세포(예를 들어, Sf9), 세균(에세리키아속 균 등), 효모(사카로마이세스속, 피키아속 등) 등)를 들 수 있고, 바람직하게는 CHOK1SV 세포, CHO-DG44 세포, 293 세포, NS0 세포 등의 배양 세포를 사용할 수 있다.
숙주 세포를 형질전환하는 방법은 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예를 들어, 인산 칼슘법, 일렉트로포레이션법 등을 사용할 수 있다.
본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트를 생산하는 방법에는, 본 발명의 형질전환된 숙주 세포를 배양하고, 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트를 발현시키는 공정을 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트를 생산하는 방법이 포함된다.
본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트에는, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트를 생산하는 방법으로 생산된 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트도 포함된다.
본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트를 생산하는 방법은, 본 발명의 형질전환된 숙주 세포를 배양하고, 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트를 발현시키는 공정을 포함하고 있는 한, 특별히 한정되는 것은 아니다. 해당 방법에서 사용되는 바람직한 숙주 세포로서는, 전술한 바람직한 본 발명의 형질전환된 숙주 세포를 들 수 있다.
형질전환된 숙주 세포의 배양은 공지된 방법에 의해 행할 수 있다. 배양 조건, 예를 들어, 온도, 배지의 pH 및 배양 시간은 적절히 선택된다. 숙주 세포가 동물 세포일 경우, 배지로서는 예를 들어, 약 5 내지 20%의 소 태아 혈청을 포함하는 MEM 배지(Science, 1959, Vol. 130, No. 3373, p.432-7), DMEM 배지(Virology, 1959, Vol. 8, p.396), RPMI1640 배지(J.Am.Med.Assoc., 1967, Vol. 199, p.519), 199 배지(Exp.Biol.Med., 1950, Vol. 73, p.1-8) 등을 사용할 수 있다. 배지의 pH는 약 6 내지 8인 것이 바람직하고, 배양은 필요에 따라 통기나 교반하면서, 통상 약 30 내지 40℃에서 약 15 내지 72시간 행하여진다. 숙주 세포가 곤충 세포일 경우, 배지로서는 예를 들어, 소 태아 혈청을 포함하는 그레이스(Grace's) 배지(Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1985, Vol. 82, p.8404) 등을 사용할 수 있다. 배지의 pH는 약 5 내지 8인 것이 바람직하고, 배양은 필요에 따라 통기나 교반하면서, 통상 약 20 내지 40℃에서 약 15 내지 100시간 행하여진다. 숙주 세포가 대장균 또는 효모일 경우, 배지로서는 예를 들어, 영양원을 함유하는 액체 매개가 적당하다. 영양 배지는 형질전환된 숙주 세포의 생육에 필요한 탄소원, 무기 질소원 또는 유기 질소원을 함유하고 있는 것이 바람직하다. 탄소원으로서는, 예를 들어, 글루코오스, 덱스트란, 가용성 전분, 자당 등이, 무기 질소원 또는 유기 질소원으로서는, 예를 들어, 암모늄염류, 질산염류, 아미노산, 콘 스티프·리커, 펩톤, 카제인, 육엑기스(고기즙), 콩깻묵, 바레이쇼(감자) 추출액 등을 들 수 있다. 원하는 경우, 다른 영양소(예를 들어, 무기염(예를 들어, 염화칼슘, 인산이수소나트륨, 염화마그네슘), 비타민류 등), 항생 물질(예를 들어, 테트라사이클린, 네오마이신, 암피실린, 카나마이신 등)를 함유하고 있어도 된다. 배지의 pH는 약 5 내지 8인 것이 바람직하다. 숙주 세포가 대장균일 경우, 바람직한 배지로서는 예를 들어, LB 배지, M9 배지(Mol.Clo., Cold Spring Harbor Laboratory, Vol. 3, A 2.2) 등을 사용할 수 있다. 배양은 필요에 따라 통기나 교반하면서, 통상 약 14 내지 43℃에서 약 3 내지 24시간 행하여진다. 숙주 세포가 효모일 경우, 배지로서 버크홀더(Burkholder) 최소 배지(Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1980, Vol. 77, p.4505) 등을 사용할 수 있다. 배양은 필요에 따라 통기나 교반하면서, 통상 약 20 내지 35℃에서 약 14 내지 144시간 행하여진다. 상술한 바와 같이 배양에 의해, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트를 발현시킬 수 있다.
본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트를 생산하는 방법은, 본 발명의 형질전환된 숙주 세포를 배양하고, 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트를 발현시키는 공정 외에, 나아가, 해당 형질전환된 숙주 세포로부터 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트를 회수, 바람직하게는 단리 또는 정제하는 공정을 포함할 수 있다. 단리 또는 정제 방법으로서는, 예를 들어, 염석, 용매 침전법 등의 용해도를 이용하는 방법, 투석, 한외 여과, 겔 여과 등의 분자량 차를 이용하는 방법, 이온교환크로마토그래피, 히드록시아파타이트 크로마토그래피 등의 하전을 이용하는 방법, 어피니티크로마토그래피 등의 특이적 친화성을 이용하는 방법, 역상 고속 액체 크로마토그래피 등의 소수성의 차를 이용하는 방법, 등전점 전기영동 등의 등전점의 차를 이용하는 방법 등을 들 수 있다. 바람직하게는, 배양 상청 중에 축적된 항체는 각종 크로마토그래피, 예를 들어, 단백질 A 칼럼 또는 단백질 G 칼럼을 사용한 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제할 수 있다.
<본 발명의 의약 조성물>
본 발명의 의약 조성물에는, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 의약 조성물이 포함된다. 본 발명의 의약 조성물은, 당해 분야에서 통상 사용되고 있는 부형제, 즉, 약제용 부형제나 약제용 담체 등을 사용하여, 통상 사용되는 방법에 의해 조제할 수 있다. 이들 의약 조성물의 제형의 예로서는, 예를 들어, 주사제, 점적용제 등의 비경구제를 들 수 있고, 정맥내 투여, 피하 투여 등에 의해 투여할 수 있다. 제제화에 있어서는, 약학적으로 허용되는 범위에서, 이들 제형에 따른 부형제, 담체, 첨가제 등을 사용할 수 있다.
본 발명의 의약 조성물은 복수 종의 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트를 포함할 수 있다. 예를 들어, 중쇄 C 말단 리신의 결실 항체, N 말단 번역 후 수식을 받은 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트, 중쇄 C 말단 리신을 결실해 N 말단 번역 후 수식을 받은 항체, 및/또는 중쇄 C 말단 리신을 갖고 N 말단 번역 후 수식을 받지 않는 항체를 함유하는 의약 조성물도 본 발명에 포함된다.
예를 들어, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체를 함유하는 본 발명의 의약 조성물에는, 이하의 (1) 내지 (4) 중 2종 이상의 항 인간 TSLP 수용체 항체를 함유하는 의약 조성물도 포함된다.
(1) 서열 번호 1의 아미노산 번호 1부터 447까지의 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 및 서열 번호 3에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체.
(2) 서열 번호 1에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지고, 아미노산 번호 1의 글루탐산이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 및 서열 번호 3에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체.
(3) 서열 번호 1의 아미노산 번호 1부터 447까지의 아미노산 서열로 이루어지고, 아미노산 번호 1의 글루탐산이 피로글루탐산으로 수식된 중쇄 및 서열 번호 3에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체.
(4) 서열 번호 1에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 및 서열 번호 3에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체.
제제화에서의 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트의 첨가량은 환자의 증상 정도나 연령, 사용하는 제제의 제형, 또는 항체의 결합 역가 등에 따라 상이하지만, 예를 들어, 0.001mg/kg 내지 100mg/kg 정도를 사용할 수 있다.
본 발명의 의약 조성물은 인간 TSLP 및 인간 TSLP 수용체가 병태 형성에 관여하는 질환, 예를 들어, 천식의 예방 또는 치료용 의약 조성물로서 사용할 수 있다.
본 발명에는, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 천식의 예방 또는 치료용 의약 조성물이 포함된다. 또한, 본 발명에는, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트의 치료 유효량을 투여하는 공정을 포함하는, 천식을 예방 또는 치료하는 방법이 포함된다. 또한, 본 발명에는, 천식의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트가 포함된다. 또한, 본 발명에는, 천식의 예방 또는 치료용 의약 조성물의 제조에서의, 본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트의 용도가 포함된다.
본 발명에 대해서 전반적으로 기재했지만, 이해를 더 얻기 위해서 참조하는 특정한 실시예를 여기에 제공하지만, 이들은 예시 목적으로 하는 것으로서, 본 발명을 한정하는 것이 아니다.
실시예
시판하고 있는 키트 또는 시약 등을 사용한 부분에 대해서는, 특별히 언급하지 않는 한 첨부한 프로토콜에 따라서 실험을 행하였다. 또한, 편의상, 농도 mol/L를 M으로서 나타낸다. 예를 들어, 1M 수산화나트륨 수용액은 1mol/L의 수산화나트륨 수용액인 것을 의미한다.
(실시예 1: TSLP 수용체-Fc 융합 단백질의 취득)
항체의 결합 활성의 평가에 사용하기 위해서, 인간 TSLP 수용체와 인간 Fc를 융합시킨 단백질(인간 TSLP 수용체-인간 Fc 융합 단백질), 인간 TSLP 수용체와 마우스 Fc를 융합시킨 단백질(인간 TSLP 수용체-마우스 Fc 융합 단백질) 및 원숭이 TSLP 수용체와 인간 Fc를 융합시킨 단백질(원숭이 TSLP 수용체-인간 Fc 융합 단백질)을 취득하였다. 인간 TSLP 수용체-인간 Fc 융합 유전자(서열 번호 5), 인간 TSLP 수용체-마우스 Fc 융합 유전자(서열 번호 6) 및 원숭이 TSLP 수용체-인간 Fc 융합 유전자(서열 번호 7)를 포유 세포 발현용 벡터 GS 벡터(론자사) pEE 12.4에 각각 재조합했다. 제작한 벡터를, 유전자 도입 시약 293 펙틴(라이프 테크놀로지즈(Life technologies)사)을 사용해서 FreeStyle 293 세포(라이프 테크놀로지즈사)에 유전자 도입하고, 이 세포를 FreeStyle 293 발현 배지(Expression medium)(라이프 테크놀로지즈사)을 사용한 무혈청 배양계로 1주일 배양 후, 인간 TSLP 수용체-인간 Fc 융합 단백질, 인간 TSLP 수용체-마우스 Fc 융합 단백질 또는 원숭이 TSLP 수용체-인간 Fc 융합 단백질을 포함하는 배양 상청을 각각 취득하였다. 취득한 배양 상청으로부터 단백질 정제 칼럼 단백질 G칼럼(GE 헬스케어 재팬사)을 사용해서 각 TSLP 수용체-Fc 융합 단백질을 정제하였다.
(실시예 2: TSLP 변이체-Flag 단백질의 취득)
항체의 중화 활성의 평가에 사용하기 위해서, 인간 TSLP 변이체에 Flag 태그를 결합시킨 단백질(인간 TSLP 변이체-Flag 단백질) 및 원숭이 TSLP 변이체에 Flag 태그를 결합시킨 단백질(원숭이 TSLP 변이체-Flag 단백질)을 취득하였다. 인간 또는 원숭이 TSLP 변이체-Flag 유전자(서열 번호 8 또는 9(퓨린 프로테아제에 의해 절단되어서 활성이 상실되는 것을 방지하기 위해서, 그 절단 부위에 변이를 삽입한 인간 또는 원숭이 야생형 TSLP의 아미노산 서열을 각각 코딩함))를 GS 벡터 pEE 12.4에 각각 재조합했다. 제작한 벡터를, 293 펙틴을 사용해서 FreeStyle 293 세포에 유전자 도입하고, 이 세포를 FreeStyle 293 발현 배지를 사용한 무혈청 배양계로 1주일 배양 후, 인간 TSLP 변이체-Flag 단백질 또는 원숭이 TSLP 변이체-Flag 단백질을 포함하는 배양 상청을 각각 취득하였다. 취득한 배양 상청으로부터 항 FLAG M2 항체 어피니티 겔(시그마(Sigma)사)을 사용하여, 각 TSLP 변이체-Flag 단백질을 정제하였다.
(실시예 3: 완전 인간형 항 인간 TSLP 수용체 항체의 제작)
인간 모노클로널 항체 개발 기술 「벨로시뮨」(VelocImmune antibody technology: 리제네론(Regeneron)사(미국 특허 제6596541호)) 마우스에, 면역 반응을 야기하는 아쥬반트와 함께, 인간 TSLP 수용체-Fc(R&D사) 및 인간 TSLP 수용체 발현 Ba/F3 세포(인간 TSLP 수용체 유전자(서열 번호 10) 및 인간 IL-7 수용체 α쇄 유전자(서열 번호 11)를 코딩하는 벡터를 마우스 Ba/F3 세포(이화학연구소: RCB0805)에 도입함으로써 제작)룰 면역하였다. 통상의 방법에 따라, 면역한 마우스의 비장이나 림프절을 적출해 림프구를 수집하고, 이것을 마우스 미엘로마 세포 SP2/0(ATCC CRL-1581)과 세포 융합함으로써 하이브리도마를 제작하였다. 하이브리도마의 모노 클론화를 행하여, 무혈청 배양지인 CD 하이브리도마 배지(라이프 테크놀로지즈사)에서 배양하였다. 얻어진 배양 상청으로부터 항체 정제 키트 단백질 G 정제 키트(Protein G Purification kit)(프로테우스(Proteus)사)를 사용해서 항체를 정제하였다.
항체의 결합 활성을 평가하기 위해서, 실시예 1에서 제작한 인간 TSLP 수용체-인간 Fc 융합 단백질 및 원숭이 TSLP 수용체-인간 Fc 융합 단백질을 사용한 ELISA를 각각 행하였다. 또한, 항체의 중화 활성을 평가하기 위해서, 실시예 2에서 제작한 원숭이 TSLP 변이체-Flag 단백질 자극에 의한 인간 TSLP 수용체 발현 Ba/F3 세포의 세포증식 저해 분석 및 실시예 2에서 제작한 원숭이 TSLP 변이체-Flag 단백질 자극에 의한 원숭이 전혈의 MDC 단백질 생산 저해 분석을 행하였다.
이상의 시험으로부터, T7-27이라고 명명한 항체(키메라 항체)가 인간 및 원숭이 TSLP 수용체에 대한 결합 활성 및 중화 활성을 갖는 것이 명확해졌다. T7-27을 생산하는 하이브리도마로부터 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자를 클로닝하고, 서열 결정을 행하였다.
상술한 항체는 가변 영역이 인간 유래이며, 정상 영역이 마우스 유래의 항체이다. 따라서, GS 벡터를 사용하여, 중쇄 및 경쇄의 양쪽 유전자를 포함하는 발현 벡터를 구축하여, 완전 인간형 항체를 제작하였다. 구체적으로는, T7-27의 항체 중쇄 가변 영역 유전자의 5'측에 시그널 서열(Nigel Whittle 등, Protein Engineering 1987; 1(6): 499-505)을 코딩하는 유전자를, 그리고 3'측에 인간 Igγ1의 정상 영역 유전자(서열 번호 2의 염기 번호 355부터 1344까지의 염기 서열을 포함함)를 각각 연결시키고, 이 중쇄 유전자를 GS 벡터 pEE 6.4에 삽입하였다. 또한, 항체의 경쇄 가변 영역 유전자의 5'측에 시그널 서열(Nigel Whittle 등, 앞에서 게재함)을 코딩하는 유전자를, 그리고 3'측에 인간 Igκ의 정상 영역 유전자(서열 번호 4의 염기 번호 325부터 642까지의 염기 서열을 포함함)를 각각 연결시키고, 이 경쇄 유전자를 GS 벡터 pEE 12.4에 삽입하였다.
제작한 T7-27의 완전 인간형 항체(완전 인간형 T7-27)의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 서열 번호 2에, 그것에 의해 코딩되는 아미노산 서열을 서열 번호 1에, 해당 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 서열 번호 4에, 그것에 의해 코딩되는 아미노산 서열을 서열 번호 3에 각각 나타낸다. 완전 인간형 T7-27의 중쇄 가변 영역은, 서열 번호 1의 아미노산 번호 1부터 118까지의 아미노산 서열로 이루어지고, 중쇄의 CDR1, CDR2, CDR3은 각각 서열 번호 1의 아미노산 번호 31부터 35, 50부터 66, 99부터 107까지의 아미노산 서열로 이루어진다. 완전 인간형 T7-27의 경쇄 가변 영역은, 서열 번호 3의 아미노산 번호 1부터 108까지의 아미노산 서열로 이루어지고, 경쇄의 CDR1, CDR2, CDR3은 각각 서열 번호 3의 아미노산 번호 24부터 34, 50부터 56, 89부터 97까지의 아미노산 서열로 이루어진다.
항체의 중쇄와 경쇄의 유전자가 각각 삽입된 전술한 GS 벡터를 사용하여, 일과성 발현 및 항상적 발현의 2종류의 방법으로 항체 발현을 행하였다. 일과성 발현에 대해서는, FreeStyle 293 발현 배지로 약 100만개/mL에 배양된 FreeStyle 293 세포에 대하여 상술한 중쇄 및 경쇄의 양쪽 발현 벡터를 293 펙틴을 사용해서 트랜스펙트하고, 7일간 배양하였다. 또는, 약 1000만개의 CHO-K1SV 세포(론자사)에 대하여 전술한 중쇄 및 경쇄의 양쪽 발현 벡터를 일렉트로포레이션법을 사용해서 트랜스펙트하고, CD-CHO 배지(라이프 테크놀로지즈사) 중에서 7일간 배양하였다. 배양 상청을 단백질 A 칼럼 또는 단백질 G 칼럼(GE 헬스케어 재팬사)을 사용해서 정제하고, 완전 인간형 항체의 정제 항체를 얻었다. 항상적 발현에 대해서는, 항체의 중쇄와 경쇄의 유전자가 각각 삽입된 상술한 GS 벡터를 NotI와 PvuI로 제한 효소 절단하고, 라이게이션용 키트 라이게이션-편의 키트(Ligation-Convenience Kit)(NIPPONGENE사) 또는 라이게이션 시약 라이게이션-하이(Ligation-high)(TOYOBO사)를 사용해서 라이게이션을 행하여, 중쇄와 경쇄의 양쪽 유전자가 삽입된 GS 벡터를 구축하였다. 이 발현 벡터는 완전 길이의 중쇄 및 경쇄를 코딩하고, CHO-K1SV 세포에 트랜스펙션에 의해 항체를 발현시켰다. 배양 상청을 단백질 A 칼럼 또는 단백질 G 칼럼(GE 헬스케어 재팬사)으로 정제하여, 완전 인간형 항체의 정제 항체를 얻었다. 정제한 완전 인간형 T7-27의 아미노산 수식을 분석한 결과, 정제 항체의 대부분에서, 중쇄 C 말단의 리신 결실이 발생하고 있었다.
(실시예 4: SPR 해석에 의한 결합 활성 평가)
완전 인간형 T7-27의 결합 활성을 상세하게 측정하기 위해서, SPR 해석을 행하였다. 본 실시예에서는 비교 항체로서, 항 인간 TSLP 수용체 항체 TSLPR-012_141(특허문헌 4)을 사용하였다.
SPR 해석에서는, Biacore(등록 상표) 2000(GE 헬스케어 재팬사)을 사용해서 해석을 행하였다. 센서 칩 CM5의 표면에 인간 항체 포획 키트(Human Antibody Capture Kit)와 아민 커플링 키트(Amine Coupling Kit)(GE 헬스케어 재팬사)를 사용하여, 각 항 인간 TSLP 수용체 항체를 고상화하였다. 실시예 1에서 취득한 인간 TSLP 수용체-마우스 Fc 융합 단백질을, HBS-EP 용액(GE 헬스케어 재팬사)으로 단계 희석하고, 유속 50μL/min으로, 100μL를 유로에 첨가하였다. 이 측정계에 의해, 인간 TSLP 수용체-마우스 Fc 융합 단백질과 항 인간 TSLP 수용체 항체와의 결합 속도 상수(ka), 해리 속도 상수(kd) 및 해리상수(KD)를 데이터 해석 소프트웨어(BIA Evaluation)를 사용해서 계산했다(표 1).
표 1: SPR 해석에 의한 인간 TSLP 수용체에 대한 결합 활성
Figure 112016021166771-pct00001
이 결과, 완전 인간형 T7-27은 TSLPR-012_141과 비교하여, 약 3배 강한 결합 활성을 갖는 것이 명확해졌다.
(실시예 5: 인간 PBMC를 사용한 TSLP 유발 TARC mRNA 발현 저해 평가)
완전 인간형 T7-27의 중화 활성을 평가하기 위해서, 인간 말초혈 단핵 세포(PBMC)에서의 TSLP 유발의 TARC mRNA 발현 저해를 평가하였다. 인간 PBMC에는 TSLP 수용체를 발현하고 있는 수상 세포도 포함되기 때문에, 항 인간 TSLP 수용체 항체의 평가에 사용할 수 있다. 비교 항체로서, TSLPR-012_141을 사용하였다. 후술하는 시험예 1의 결과로부터, 항 TSLP 수용체 항체에 의한 천식 모델의 병태 개선과 혈중 TARC mRNA의 발현 저해에 상관이 인정된 점에서, 본 평가계는 병태에의 유효성을 시사하는 평가계이다.
인간 PBMC(올셀스(AllCells)사)를 96웰 플레이트(글레이너(Gleiner)사)에 1웰당 20만개를, 160μL의 RPMI1640 배지(라이프 테크놀로지즈사)에서 파종하였다. 실시예 2에서 제작한 인간 TSLP 변이체-Flag 단백질의 희석계열(최종 농도가 0.1ng/mL로부터 100ng/mL까지의 범위에서 7단계)을 RPMI1640 배지로 제작해서 배양액 내에 20μL 첨가하였다. 37℃로 설정한 CO2 인큐베이터에서 24시간 인큐베이트한 후, 각 항 인간 TSLP 수용체 항체를 최종 농도가 0.3μg/mL가 되게 RPMI1640 배지로 제조하고, 배양액 내에 20μL 첨가하여, 72시간 더 인큐베이트하였다. 컨트롤 샘플로서, 인간 TSLP 변이체-Flag 단백질 대신 RPMI1640 배지를 첨가한 웰, 항체 대신 RPMI1640 배지를 첨가한 웰을 각각 준비하였다. 배양 상청 200μL를 제거 후, RNA 정제용 키트 RNeasy 96 키트(퀴아젠사)를 사용해서 토탈 RNA를 30μL의 물로 추출하였다. 이어서, 역전사용 키트 고성능 cDNA 역전사 키트(High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit)(라이프 테크놀로지즈사)를 사용하여, 10μL의 RNA를 역전사 반응하였다. 이어서, TARC의 TaqMan 프로브(Ccl17, Hs00171074, 라이프 테크놀로지즈사), β엑틴의 TaqMan 프로브(Actb, Hs99999903, 라이프 테크놀로지즈사), Express qPCR SuperMix(A10313, 라이프 테크놀로지즈사) 및 2μL의 cDNA를 사용하여, TaqMan PCR법으로 TARC mRNA의 발현량을 측정하였다. 각 항체에 대해서 듀플리케이터로 시험을 행하고, 측정 결과를 비교 CT법으로 해석하여, TARC mRNA의 발현량을 계산하였다. 그로부터, 각 TSLP 농도에서의 항체의 저해율을 계산하였다. 인간 TSLP 변이체-Flag 단백질 대신 RPMI1640 배지를 첨가한 웰의 저해율을 100%로서 설정하고, 인간 TSLP 변이체-Flag 단백질을 30 및 100ng/ml 첨가한 웰의 평균값을 저해율 0%로서 설정하였다. 산출된 저해율을 해석하고, 3 파라미터 로지스틱 곡선에 적용함으로써, 0.3μg/mL의 항체가 50% 저해할 수 있는 TSLP 농도를 산출했다(표 2). 본 TSLP 농도가 높을수록, 피검 항체의 TSLP에 대한 중화 활성이 강한 것을 의미한다.
표 2: 인간 PBMC를 사용한 TSLP 유발 TARC mRNA 발현 저해 활성
Figure 112016021166771-pct00002
이 결과, 완전 인간형 T7-27은 TSLPR-012_141과 비교하여, 인간 TSLP 유발 TARC mRNA 발현 저해 활성이 12배 높은 것이 명확해졌다.
(실시예 6: 인간 PBMC를 사용한 TSLP 유발 MDC 단백질 생산 저해 평가)
완전 인간형 T7-27의 중화 활성을 평가하기 위해서, 인간 PBMC에서의 TSLP 유발의 MDC 단백질 생산 저해를 평가하였다. 비교 항체로서, TSLPR-012_141을 사용하였다.
인간 PBMC는 인간 혈액을 등량의 PBS로 희석 후, 등량의 피콜-파크 플러스(Ficoll-Paque PLUS)(GE 헬스케어 재팬사) 상에 적층하고, 실온, 400×g, 30분간 원심 처리함으로써 제조하였다. 인간 PBMC를 96웰 플레이트(글레이너사)에 1웰당 약 30만개를, 100μL의 RPMI1640 배지(라이프 테크놀로지즈사)에서 파종하였다. 실시예 2에서 제작한 인간 TSLP 변이체-Flag 단백질을 최종 농도가 5ng/mL가 되게 RPMI1640 배지로 제조해 배양액 내에 10μL 첨가하였다. 37℃로 설정한 CO2 인큐베이터에서 24시간 인큐베이트한 후, 각 항 인간 TSLP 수용체 항체의 희석계열(최종 농도가 0.1ng/mL로부터 10μg/mL까지의 범위에서 5단계)을 RPMI1640 배지로 제작해서 배양액 내에 10μL 첨가하고, 5일간 더 인큐베이트하였다. 컨트롤 샘플로서, 인간 TSLP 변이체-Flag 단백질 대신 RPMI1640 배지를 첨가한 웰, 항체 대신 RPMI1640 배지를 첨가한 웰을 각각 준비하였다. 그 후, 배양 상청을 채취하고, PBS(라이프 테크놀로지즈사)로 20배 희석한 상청을 이용하여, MDC의 생산량을 Human CCL22/MDC Quantikine ELISA Kit(R&D사)를 사용해서 평가하였다. 각 항체에 대해서, 듀플리케이터로 시험을 행하고, 각 항체 농도에서의 저해율을 계산하였다. 인간 TSLP 변이체-Flag 단백질 대신 RPMI1640 배지를 첨가한 웰의 저해율을 100%로서 설정하고, 항체 대신 RPMI1640 배지를 첨가한 웰의 저해율을 0%로서 설정하였다. 3 파라미터 로지스틱 곡선에 적용함으로써, 50% 저해할 수 있는 항체 농도를 IC50으로서 산출했다(표 3).
표 3: 인간 PBMC를 사용한 TSLP 유발 MDC 단백질 생산 저해 평가
Figure 112016021166771-pct00003
이 결과, 완전 인간형 T7-27은 TSLPR-012_141과 비교하여, TSLP 유발 MDC 단백질 생산 저해 활성이 약 9배 높은 것이 명확해졌다.
(실시예 7: 원숭이 아스카리스 항원 감작 모델에서의 완전 인간형 T7-27의 평가)
원숭이를 아스카리스 항원으로 감작시킴으로써, 아스카리스 항원 특이적 IgE가 유도되어, 알레르기 반응으로서 피부반응이 야기된다.
웅성 게잡이 원숭이에 1일, 8일 및 15일에 수산화알루미늄 겔(이하, Alum이라고 칭함)로 현탁한 아스카리스 항원 용액(0.5mg/mL DNP-Ascaris(LSL사, 50mg/mL Alum의 농도로 PBS에 현탁한 항원 용액. 이하, 아스카리스 항원-Alum액이라고 칭함)을 복강 내에 3.6mL/kg, 근육 내에 0.4mL/kg을 투여함으로써 감작하였다. 또한, 처치군으로서, 정상(Normal)군(무처치군. n=2), 비히클군(용매(20mM 시트르산 나트륨 완충액/120mM NaCl(pH6.0))을 감작 1일 전에 정맥내 투여한 군. n=3) 및 항체 투여군(10mg/kg의 완전 인간형 T7-27(용매로 희석)을 감작 1일 전에 정맥내 투여한 군. n=3)을 각각 설정하였다.
또한, Alum은 이하의 방법으로 제작하였다.
황산 알루미늄(14 내지 18수화물)(와코(Wako)사)을 초순수에 용해해서 1M 용액을 제조하고, 0.22㎛의 필터에 통과시킨 후, 1M 수산화나트륨(나카라이테스크사)을 백색 침전이 생성되지 않게 될 때까지 첨가하였다. 상청을 제거하고, 초순수로 5회 세정 후, PBS(와코사)로 3회 더 세정하였다. 세정한 백색 침전을, 빙냉 하에서 호모게나이저(KINEMATICA사, CH-6010)에 의해 미세하게 분쇄하였다. 이어서, 원심기(히타치사, himac CR21)로 2000rpm, 5분, 4℃에서 원심 후, 상청을 제거하고, PBS로 2회 세정하였다. 얻어진 침전물을 PBS에 현탁해서 Alum을 얻었다.
혈장 중 아스카리스 항원 특이적 IgE의 측정
상기 게잡이 원숭이로부터 1일(아스카리스 항원-Alum액을 투여하기 전), 8일, 15일 및 22일에 계시적으로 채혈하여, 원심(1800×g, 4℃, 10분) 후, 혈장을 회수하였다. 혈장 중의 아스카리스 항원 특이적 IgE의 생산량은 이하의 방법을 사용하여 측정하였다.
DNP-Ascaris를 100μg/mL의 농도가 되도록 PBS로 제조하고, Nunc-ImmunoTM MicroWellTM 96웰 솔리드 플레이트(Nunc사)에 100μL 첨가해서 실온에서 밤새 고상화하였다. 블로킹제(Blocking One: 나카라이테스크사)를 200μL 첨가하고, 실온에서 30분 정치한 후, 그 용액을 제거하였다. 이어서, 회수한 혈장 및 검량선용 샘플을 각각 100μL 첨가하였다. 검량선용 샘플에는, 비히클군 1개체의 22일에서의 혈장 중 아스카리스 항원 특이적 IgE 농도를 2000U/mL로 하고, 희석 용액(5% Blocking One 함유 PBS)에 의해 제조한 희석계열(2000U/mL 내지 16U/mL)을 사용하였다. 실온에서 1시간 정치한 후, T-PBS(0.05% Tween-20 함유 PBS)로 5회 세정하고, 희석 용액으로 10000배로 희석한 HRP 표지 인간 IgE 검출 항체(A80-108P: 베틸(Bethyl)사)를 100μL 첨가하였다. 다시 실온에서 1시간 정치한 후, T-PBS로 5회 세정하였다. 마지막으로 퍼옥시다아제 발색 키트(ML-1120T: SUMILON사)를 사용하여 측정하였다. 흡광도는 스펙트라맥스(SpectraMax)(몰리큘러 디바이스사)로 측정하였다. 1일 및 22일의 결과를 도 1에 도시한다.
스킨 테스트
22일에, 비히클군 및 항체 투여군의 각 개체의 피내에 PBS 및 1, 10 및 100μg/mL 아스카리스 항원 용액(DNP-Ascaris를 PBS로 현탁한 용액)을 각각 100μL, 동일 개체의 면도한 복부 각 2군데(1마리당 합계 8군데)에 투여하였다. 정상군에는, 각 개체의 피내에 PBS 및 100μg/mL 아스카리스 항원 용액을, 각각 100μL, 동일 개체의 면도한 복부 각 4군데(1마리당 합계 8군데)에 투여하였다. 피부 감작 20분 후에, 노기스를 사용해서 직경을 측정함으로써 피부반응을 관찰하였다. 각각의 개체에서, 아스카리스 항원 용액 투여 후의 피부반응의 직경에서 PBS 투여 후의 피부반응의 직경을 뺀 값을 델타 cm으로 하였다. 100μg/mL 아스카리스 항원 용액 투여시의 결과를 도 2에 도시한다. 또한, 1 및 10μg/mL 아스카리스 항원 용액을 투여한 경우, 피검 항체를 평가하기에 충분한 피부반응은 야기되지 않았다.
각 군의 평균값 및 표준오차를 구하고, 혈장 중 아스카리스 항원 특이적 IgE의 측정에서는, 1일의 값(아스카리스 항원-Alum액을 투여하기 전의 값)을 100%, 22일의 비히클군을 0%로 하여 억제율을 구하였다.
도 1에 도시한 바와 같이, 완전 인간형 T7-27은 비히클군과 비교하여, 원숭이 아스카리스 항원 감작 모델에 있어서, 아스카리스 항원 특이적 IgE 농도를 감소시켰다(97% 억제).
도 2에 도시한 바와 같이, 완전 인간형 T7-27은 비히클군과 비교하여, 원숭이 아스카리스 항원 감작 모델에 있어서, 100μg/mL 아스카리스 항원 용액 투여시의 아스카리스 항원 특이적 피부반응을 감소시켰다.
이들 결과로부터, 완전 인간형 T7-27은 원숭이 아스카리스 항원 감작 모델에 있어서, 아스카리스 항원 특이적 IgE에 의해 야기되는 알레르기 반응을 억제시키는 것이 명확해졌다.
(시험예 1: 마우스 진드기 항원 감작 천식 모델에서의 항 TSLP 수용체 항체의 평가)
마우스 진드기 항원 감작 모델은 천식 모델로서 알려져 있고, 그 병태로서는 기도 반응성의 항진 및 기관지 폐포에의 호산구의 침윤 등을 들 수 있다.
NC/Nga 마우스(찰스 리버사)에, 0일(첫회 감작 시) 및 5일에, 진드기 항원(Dp)(LSL사)을 100μg Dp/0.5mL 생리 식염액/마우스의 용량으로 복강내 투여함으로써 감작을 실시하였다. 12일 및 19일에, 진드기 항원을 100μg Dp/50μL 생리 식염액/마우스의 용량으로 점비 투여함으로써 기도 염증을 야기하였다. 항체 투여군에는 1일, 2일, 5일, 8일, 11일, 14일 및 18일(항체 투여일)에 1일 1회, 각 용량(0.1, 1, 10mg/kg)으로 PBS(와코사)에 용해한 항 마우스 TSLP 수용체 항체(와코사)를 피하 투여하였다. 양성 대조군으로서 덱사메타손 투여군(Dex군)을 설정하였다. Dex군에는 12일로부터 19일까지 1일 1회, 3mg/kg의 용량으로 PBS에 용해한 덱사메타손을 복강내 투여하였다. 설정한 처치군은 이하와 같다.
[처치군]
정상군(n=10):
무처치
생리 식염액(Saline)군(n=6):
0일 및 5일에 진드기 항원을 복강내 투여, 12일 및 19일에 생리 식염액을 점비 투여, 항체 투여일에 PBS를 피하 투여
PBS군(n=10):
0일 및 5일에 진드기 항원을 복강내 투여, 12일 및 19일에 진드기 항원을 점비 투여, 항체 투여일에 PBS를 피하 투여
항체 투여군(0.1, 1, 10mg/kg)(각 용량에 대해서 n=10):
0일 및 5일에 진드기 항원을 복강 내 투여, 12일 및 19일에 진드기 항원을 점비 투여, 항체 투여일에 각 용량의 항체를 피하 투여
Dex군(n=10):
0일 및 5일에 진드기 항원을 복강 내 투여, 12일 및 19일에 진드기 항원을 점비 투여, 12일로부터 19일에 덱사메타손을 복강내 투여
20일에 마우스를 전용의 무 구속 챔버 내에 넣었다. 챔버에 설치한, 호흡 기류계를 이용한 변환기를 호흡 기능 해석 장치 BioSystem XA(Buxco사)에 접속하고, 대기압에 대한 챔버 내압의 변화를 변환기로 검출하였다. 기도 반응성을 조사하기 위해서, 초음파 네블라이저를 사용하여, 생리 식염액에 용해한 아세틸-β-메틸콜린 클로리드(시그마사)(0.25, 0.5, 1, 2, 4mg/mL)를 순서대로 농도를 올리면서 흡입 폭로하였다. 챔버 내압의 변화를 사용해서 기계적으로 산출되는 PenH를, 호흡 기능의 지표로서 사용하였다. 측정 결과를 도 3에 도시한다.
이어서, 마우스의 복부 대정맥으로부터 혈액 채취 후, 마우스를 방혈에 의해 안락사시켰다. 기관 내에 캐뉼라를 삽관하고, 0.1% 소 태아 혈청(BioWest사) 함유 PBS 용액으로 기관지 폐포 세정을 행하고, 기관지 폐포 세정액(BALF)을 회수하였다. BALF를 원심하고, 상청을 제거한 후, 침전물을 생리 식염액 500μL로 현탁하여, BALF 세포 현탁액을 제조하였다. BALF 세포 현탁액 내의 호산구 수를, 다항목 자동 혈구 분석 장치 XT-2000i(SYSMEX사)를 사용하여 측정하였다. 측정 결과를 도 4에 도시한다.
상기에서 취득한 혈액을, RPMI1640 배지(라이프 테크놀로지즈사)로 10배 희석해 플레이트(IWAKI사)에 파종했다(1mL/웰). 마우스 TSLP(R&D사)를 최종 농도로 0 또는 10ng/mL가 되게 PBS로 희석하여, 100μL 첨가하였다. 37℃, 5% CO2 하에서, 24시간 배양한 후, RNeasy 96 키트(퀴아젠사)를 사용해서 토탈 RNA를 30μL의 물로 추출하였다. 이어서, 고성능 cDNA 역전사 키트(라이프 테크놀로지즈사)를 사용하여, 10μL의 RNA를 역전사 반응하였다. 이어서, TARC의 TaqMan 프로브(Ccl17, Mm01244826 g1, 라이프 테크놀로지즈사), β엑틴의 TaqMan 프로브(Actb, Mm00607939 s1, 라이프 테크놀로지즈사), Express qPCR SuperMix(A10313, 라이프 테크놀로지즈사) 및 2μL의 cDNA를 사용하여, TaqMan PCR법으로 TARC mRNA의 발현량을 측정하였다. 측정 결과를 비교 CT법으로 해석하여, 발현량을 계산하였다. 10ng/mL TSLP 첨가시의 결과를 도 5에 도시한다.
각 군의 평균값 및 표준오차를 구하였다. PBS군과 정상군, 생리 식염액군 및 Dex군 각각의 군 간의 유의차 검정에는, 스튜던트-t(Student-t) 검정을 사용하였다. PBS군과 항체 투여군 간의 유의차 검정에는, 던네트(Dunnett)의 다중 비교를 사용하였다. 모든 경우에도, p<0.05의 경우를 유의차 있음으로 하였다.
도 3에 도시한 바와 같이, 항체 투여군에서는 PBS군과 비교하여, 이 마우스 천식 모델에 있어서, 1mg/mL의 아세틸-β-메틸콜린 클로리드로 유발되는 기도 반응성 항진 억제 작용이 인정되었다. 항 TSLP 수용체 항체는 천식 모델에 있어서 호흡 기능을 개선하는 것이 명확해졌다.
도 4에 도시한 바와 같이, 항체 투여군에서는 PBS군과 비교하여, 기관지 폐포에의 호산구의 침윤 억제 작용이 인정되었다.
도 5에 도시한 바와 같이, 항체 투여군에서는 PBS군과 비교하여, TARC mRNA의 발현 저해 작용이 인정되었다.
도 3 및 도 4의 결과로부터 항 TSLP 수용체 항체는, 천식 모델의 병태를 개선하는 것이 확인되었다. 또한, 도 5의 결과와 함께, 항 TSLP 수용체 항체에 의한 병태의 개선과 TARC mRNA의 발현 저해에 상관이 인정되고, TARC mRNA의 발현 저해 효과를 지표로, 병태 개선 효과를 평가할 수 있음이 밝혀졌다.
본 발명의 항 인간 TSLP 수용체 항체는, 인간 TSLP 및 인간 TSLP 수용체가 병태 형성에 관여하는 각종 질환의 예방 또는 치료에 유용하다. 또한, 본 발명의 폴리뉴클레오티드, 발현 벡터, 숙주 세포 및 생산하는 방법은, 상기 항 인간 TSLP 수용체 항체를 생산하는데도 유용하다.
이하의 서열목록의 숫자 표제 <223>에는, 「인공 서열」의 설명을 기재한다. 구체적으로는, 서열목록의 서열 번호 2 및 4로 나타내는 염기 서열은, 각각 완전 인간형 T7-27의 중쇄 및 경쇄의 염기 서열이며, 서열 번호 1 및 3으로 나타내는 아미노산 서열은, 각각 서열 번호 2 및 4에 의해 코딩되는 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열이다. 서열목록의 서열 번호 5, 6, 7, 8 및 9로 나타내는 염기 서열은, 각각 인간 TSLP 수용체-인간 Fc 융합 단백질, 인간 TSLP 수용체-마우스 Fc 융합 단백질, 원숭이 TSLP 수용체-인간 Fc 융합 단백질, 인간 TSLP 변이체-Flag 단백질 및 원숭이 TSLP 변이체-Flag 단백질을 코딩하는 염기 서열이다.
SEQUENCE LISTING <110> Astellas Pharma Inc. <120> Novel anti-human TSLP Receptor antibody <130> A14014A00 <150> JP2013-165676 <151> 2013-08-09 <160> 11 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H-chain of anti-human TSLP Receptor antibody <400> 1 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Ser 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Val 35 40 45 Ser Ser Val Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Lys Glu Gly Gly Ser Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 2 <211> 1347 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> H-chain gene of anti-human TSLP Receptor antibody <400> 2 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc cgggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttcgc agctctgcca tgcattgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gactgaaatg ggtctcaagt gttagtggca gtggtgctgg aacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca atcccaagaa tacactgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggccgtat attattgtgt gaaagaaggg 300 ggcagccggg gttttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcctcc 360 accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca 420 gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480 tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540 tactccctta gtagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc 600 tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct 660 tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca 720 gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 780 acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 840 gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 900 taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 960 aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1020 aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc 1080 aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1140 gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1200 tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1260 gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1320 agcctctccc tgtctccggg taaatga 1347 <210> 3 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L-chain of anti-human TSLP Receptor antibody <400> 3 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Thr Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Leu Tyr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 4 <211> 645 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> L-chain gene of anti-human TSLP Receptor antibody <400> 4 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca ggacattagc aattatttag cctggtttca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagtccct gatctatact gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aagttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatcttt atcctccgac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa acggactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645 <210> 5 <211> 1395 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> gene of human TSLP Receptor-human Fc <400> 5 atgtctgtgc ctacccaggt gctgggactg ctgctgctgt ggctgacaga cgcccgctgt 60 ggagcagcag aaggagtaca gattcagatc atctacttca atttagaaac cgtgcaggtg 120 acatggaatg ccagcaaata ctccaggacc aacctgactt tccactacag attcaacggt 180 gatgaggcct atgaccagtg caccaactac cttctccagg aaggtcacac ttcggggtgc 240 ctcctagacg cagagcagcg agacgacatt ctctatttct ccatcaggaa tgggacgcac 300 cccgttttca ccgcaagtcg ctggatggtt tattacctga aacccagttc cccgaagcac 360 gtgagatttt cgtggcatca ggatgcagtg acggtgacgt gttctgacct gtcctacggg 420 gatctcctct atgaggttca gtaccggagc cccttcgaca ccgagtggca gtccaaacag 480 gaaaatacct gcaacgtcac catagaaggc ttggatgccg agaagtgtta ctctttctgg 540 gtcagggtga aggctatgga ggatgtatat gggccagaca catacccaag cgactggtca 600 gaggtgacat gctggcagag aggcgagatt cgggatgcct gtgcagagac accaacgcct 660 cccaaaccaa agctgtccaa aatcgaaggc aggatggacc ccaaatcttg tgacaaaact 720 cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa ctcctggggg gaccgtcagt cttcctcttc 780 cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg 840 gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 900 gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc 960 agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc 1020 tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 1080 cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc 1140 agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1200 aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc 1260 ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc 1320 tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 1380 tctccgggta aatga 1395 <210> 6 <211> 1437 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> gene of human TSLP Receptor-mouse Fc <400> 6 atgtctgtgc ctacccaggt gctgggactg ctgctgctgt ggctgacaga cgcccgctgt 60 caggcagtgc acgccgcaca tgcagaaatc aacgaaggag cagcagaagg agtacagatt 120 cagatcatct acttcaattt agaaaccgtg caggtgacat ggaatgccag caaatactcc 180 aggaccaacc tgactttcca ctacagattc aacggtgatg aggcctatga ccagtgcacc 240 aactaccttc tccaggaagg tcacacttcg gggtgcctcc tagacgcaga gcagcgagac 300 gacattctct atttctccat caggaatggg acgcaccccg ttttcaccgc aagtcgctgg 360 atggtttatt acctgaaacc cagttccccg aagcacgtga gattttcgtg gcatcaggat 420 gcagtgacgg tgacgtgttc tgacctgtcc tacggggatc tcctctatga ggttcagtac 480 cggagcccct tcgacaccga gtggcagtcc aaacaggaaa atacctgcaa cgtcaccata 540 gaaggcttgg atgccgagaa gtgttactct ttctgggtca gggtgaaggc tatggaggat 600 gtatatgggc cagacacata cccaagcgac tggtcagagg tgacatgctg gcagagaggc 660 gagattcggg atgcctgtgc agagacacca acgcctccca aaccaaagct gtccaaaatc 720 gaaggcagga tggacgagcc tcgaggtcct acaatcaagc cgtgtccacc ttgtaagtgc 780 cccgcgccaa atctgctggg tggtccttct gtattcatat ttccgcccaa gataaaagat 840 gtcttgatga tctctttgtc tccgatcgta acgtgcgtgg tcgtggatgt gtccgaagat 900 gaccctgacg ttcagatttc atggtttgtc aacaacgtgg aagtgcatac ggctcagact 960 cagacccacc gagaggatta caattccact ctgagagttg tgagcgctct tccgatccag 1020 caccaagatt ggatgagcgg gaaagaattt aagtgcaaag tgaacaataa ggaccttccc 1080 gcgcctatcg aaagaaccat atctaagcca aagggatccg tgcgagctcc acaggtgtac 1140 gtgctgcctc cgccagagga ggaaatgact aagaaacagg tgaccctcac atgcatggta 1200 accgacttca tgcctgaaga tatttacgtg gaatggacca acaacggaaa aaccgaactc 1260 aactacaaaa acacagagcc cgttctggac tccgacggga gctacttcat gtactccaaa 1320 ctgagggtgg agaaaaagaa ttgggtggaa cgaaatagtt attcatgcag tgtagtccat 1380 gaggggctgc ataatcacca taccacaaag tctttcagca gaacccctgg gaaatga 1437 <210> 7 <211> 1395 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> gene of cynomolgus TSLP Receptor-human Fc <400> 7 atgtctgtgc ctacccaggt gctgggactg ctgctgctgt ggctgacaga cgcccgctgt 60 gcaacaggag aaggactaca gattcagatc atctacttta atctagaaac ggtgcaggtg 120 acatggaatg ccagccacta ccccaggagt aacctgagtt tccactacaa attcagtcga 180 gatgaggcct atgaccagtg caccgtctac attctccagg aaggtcacac ctcggggtgc 240 ctcctagacg cagagcagca agacgatatt ctgtatttct ccatcaggaa cgggacgcac 300 cccgttttca ccgccagtcg ctggatcttt tattacctga agcccagttc tccgaagcag 360 gtgagctttt cgtggcatca ggacgcggtg acagtgacgt gctctgacct gtcctacagg 420 ggtctcctct atgaggttca gtaccggagc cccttcgaca cggagtggca gtccaaacag 480 gaaaatacct gcaatgtcac tatagaagac ttggatgccg agaagtgtta tgctttccgg 540 gcccgggtga aggccatgga ggatgcgtat gggccggaca cgtacccgag cgactggtca 600 gaggtgacgt gctggcagag aggcgagact cgcgattcgt gcccagagcc tcgcacgcct 660 cccaaaccga agctgtccaa aatcgaaggc aggatggacc ccaaatcttg tgacaaaact 720 cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa ctcctggggg gaccgtcagt cttcctcttc 780 cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg 840 gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 900 gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc 960 agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc 1020 tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 1080 cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc 1140 agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1200 aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc 1260 ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc 1320 tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 1380 tctccgggta aatga 1395 <210> 8 <211> 483 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> gene of human TSLP mutant-Flag <400> 8 atgtctgtgc ctacccaggt gctgggactg ctgctgctgt ggctgacaga cgcccgctgt 60 tacgacttca ctaactgtga ctttgagaag attaaagcag cctatctcag tactatttct 120 aaagacctga ttacatatat gagtgggacc aaaagtactg agttcaacaa caccgtctct 180 tgtagcaatc ggccacattg ccttactgaa atccagagcc taaccttcaa tcccaccgcc 240 ggctgcgcgt cgctcgccaa agaaatgttc gccatgaaaa ctaaggctgc cttagctatc 300 tggtgcccag gctattcgga aactcagata aatgctactc aggcaatgaa gaagaggaga 360 aaagccaaag tcacaaccaa taaatgtctg gaacaagtgt cacaattaca aggattgtgg 420 cgtcgcttca atcgaccttt actgaaacaa caggactaca aggacgacga tgacaaatga 480 taa 483 <210> 9 <211> 498 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> gene of cynomolgus TSLP mutant-Flag <400> 9 atggagacag acacactcct gctatgggta ctgctgctct gggttccagg ttccaccggt 60 tacgacttca ctaactgtga ctttcagaag attgaagcag actatctccg tactatttct 120 aaagacctga ttacatatat gagtgggact aaaagtaccg acttcaacaa caccgtctcc 180 tgtagcaatc ggccacactg ccttactgaa atccagagcc taaccttcaa tcccaccccc 240 cgctgcgcgt cgctcgccaa ggaaatgttc gccaggaaaa ctaaggctac cctcgctctc 300 tggtgcccag gctattcgga aactcagata aatgctactc aggcaatgaa gaagaggaga 360 aaagccaaag tcacaaccaa taaatgtctg gaacaagtgt cacaattact aggattgtgg 420 cgtcgcttca ttcgaacttt actgaaacaa cagcaccacc accaccacca tgactataaa 480 gacgatgacg acaaatga 498 <210> 10 <211> 1116 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 10 atggggcggc tggttctgct gtggggagct gccgtctttc tgctgggagg ctggatggct 60 ttggggcaag gaggagcagc agaaggagta cagattcaga tcatctactt caatttagaa 120 accgtgcagg tgacatggaa tgccagcaaa tactccagga ccaacctgac tttccactac 180 agattcaacg gtgatgaggc ctatgaccag tgcaccaact accttctcca ggaaggtcac 240 acttcggggt gcctcctaga cgcagagcag cgagacgaca ttctctattt ctccatcagg 300 aatgggacgc accccgtttt caccgcaagt cgctggatgg tttattacct gaaacccagt 360 tccccgaagc acgtgagatt ttcgtggcat caggatgcag tgacggtgac gtgttctgac 420 ctgtcctacg gggatctcct ctatgaggtt cagtaccgga gccccttcga caccgagtgg 480 cagtccaaac aggaaaatac ctgcaacgtc accatagaag gcttggatgc cgagaagtgt 540 tactctttct gggtcagggt gaaggctatg gaggatgtat atgggccaga cacataccca 600 agcgactggt cagaggtgac atgctggcag agaggcgaga ttcgggatgc ctgtgcagag 660 acaccaacgc ctcccaaacc aaagctgtcc aaatttattt taatttccag cctggccatc 720 cttctgatgg tgtctctcct ccttctgtct ttatggaaat tatggagagt gaggaagttt 780 ctcattccca gcgtgccaga cccgaaatcc atcttccccg ggctctttga gatacaccaa 840 gggaacttcc aggagtggat cacagacacc cagaacgtgg cccacctcca caagatggca 900 ggtgcagagc aagaaagtgg ccccgaggag cccctggtag tccagttggc caagactgaa 960 gccgagtctc ccaggatgct ggacccacag accgaggaga aagaggcctc tgggggatcc 1020 ctccagcttc cccaccagcc cctccaaggt ggtgatgtgg tcacaatcgg gggcttcacc 1080 tttgtgatga atgaccgctc ctacgtggcg ttgtga 1116 <210> 11 <211> 1380 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 11 atgacaattc taggtacaac ttttggcatg gttttttctt tacttcaagt cgtttctgga 60 gaaagtggct atgctcaaaa tggagacttg gaagatgcag aactggatga ctactcattc 120 tcatgctata gccagttgga agtgaatgga tcgcagcact cactgacctg tgcttttgag 180 gacccagatg tcaacatcac caatctggaa tttgaaatat gtggggccct cgtggaggta 240 aagtgcctga atttcaggaa actacaagag atatatttca tcgagacaaa gaaattctta 300 ctgattggaa agagcaatat atgtgtgaag gttggagaaa agagtctaac ctgcaaaaaa 360 atagacctaa ccactatagt taaacctgag gctccttttg acctgagtgt cgtctatcgg 420 gaaggagcca atgactttgt ggtgacattt aatacatcac acttgcaaaa gaagtatgta 480 aaagttttaa tgcacgatgt agcttaccgc caggaaaagg atgaaaacaa atggacgcat 540 gtgaatttat ccagcacaaa gctgacactc ctgcagagaa agctccaacc ggcagcaatg 600 tatgagatta aagttcgatc catccctgat cactatttta aaggcttctg gagtgaatgg 660 agtccaagtt attacttcag aactccagag atcaataata gctcagggga gatggatcct 720 atcttactaa ccatcagcat tttgagtttt ttctctgtcg ctctgttggt catcttggcc 780 tgtgtgttat ggaaaaaaag gattaagcct atcgtatggc ccagtctccc cgatcataag 840 aagactctgg aacatctttg taagaaacca agaaaaaatt taaatgtgag tttcaatcct 900 gaaagtttcc tggactgcca gattcatagg gtggatgaca ttcaagctag agatgaagtg 960 gaaggttttc tgcaagatac gtttcctcag caactagaag aatctgagaa gcagaggctt 1020 ggaggggatg tgcagagccc caactgccca tctgaggatg tagtcatcac tccagaaagc 1080 tttggaagag attcatccct cacatgcctg gctgggaatg tcagtgcatg tgacgcccct 1140 attctctcct cttccaggtc cctagactgc agggagagtg gcaagaatgg gcctcatgtg 1200 taccaggacc tcctgcttag ccttgggact acaaacagca cgctgccccc tccattttct 1260 ctccaatctg gaatcctgac attgaaccca gttgctcagg gtcagcccat tcttacttcc 1320 ctgggatcaa atcaagaaga agcatatgtc accatgtcca gcttctacca aaaccagtga 1380

Claims (21)

  1. 서열 번호 1의 아미노산 번호 31부터 35까지의 아미노산 서열로 이루어지는 CDR1, 서열 번호 1의 아미노산 번호 50부터 66까지의 아미노산 서열로 이루어지는 CDR2 및 서열 번호 1의 아미노산 번호 99부터 107까지의 아미노산 서열로 이루어지는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 3의 아미노산 번호 24부터 34까지의 아미노산 서열로 이루어지는 CDR1, 서열 번호 3의 아미노산 번호 50부터 56까지의 아미노산 서열로 이루어지는 CDR2 및 서열 번호 3의 아미노산 번호 89부터 97까지의 아미노산 서열로 이루어지는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트.
  2. 제1항에 있어서, 이하의 (1) 또는 (2)로부터 선택되는 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트:
    (1) 서열 번호 1의 아미노산 번호 1부터 118까지의 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 3의 아미노산 번호 1부터 108까지의 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트.
    (2) (1)의 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트의 중쇄 N 말단의 글루탐산이 피로글루탐산으로 수식된 것인, 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트.
  3. 제2항에 있어서, 이하의 (1) 또는 (2)로부터 선택되는 항 인간 TSLP 수용체 항체:
    (1) 서열 번호 1에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 및 서열 번호 3에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체.
    (2) (i) 서열 번호 1의 아미노산 번호 1의 글루탐산이 피로글루탐산으로 수식되거나, (ii) 서열 번호 1의 아미노산 번호 448의 리신을 결실하거나, 또는 상기 (i) 및 (ii) 둘다를 충족하는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄, 및 서열 번호 3에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체.
  4. 제3항에 있어서, 서열 번호 1에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 및 서열 번호 3에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체.
  5. 제3항에 있어서, 서열 번호 1의 아미노산 번호 1부터 447까지의 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 및 서열 번호 3에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄를 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체.
  6. 이하의 (a) 및 (b)로 이루어지는 군에서 선택되는 폴리뉴클레오티드:
    (a) 제2항의 (1)에 따른 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
    (b) 제2항의 (1)에 따른 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
  7. 이하의 (a) 및 (b)로 이루어지는 군에서 선택되는 폴리뉴클레오티드:
    (a) 제4항에 따른 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
    (b) 제4항에 따른 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
  8. (i) 제2항의 (1)에 따른 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및
    (ii) 제2항의 (1)에 따른 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드
    를 포함하는 발현 벡터.
  9. (i) 제4항에 따른 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및
    (ii) 제4항에 따른 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드
    를 포함하는 발현 벡터.
  10. 이하의 (a) 내지 (d)로 이루어지는 군에서 선택되는, 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
    (a) 제2항의 (1)에 따른 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드와 해당 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (b) 제2항의 (1)에 따른 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터와 해당 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (c) 제2항의 (1)에 따른 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; 및
    (d) 제2항의 (1)에 따른 항 인간 TSLP 수용체 항체의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
  11. 이하의 (a) 내지 (d)로 이루어지는 군에서 선택되는, 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
    (a) 제4항에 따른 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드와 해당 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (b) 제4항에 따른 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터와 해당 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포;
    (c) 제4항에 따른 항 인간 TSLP 수용체 항체의 중쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포; 및
    (d) 제4항에 따른 항 인간 TSLP 수용체 항체의 경쇄를 코딩하는 염기 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
  12. 제10항에 따른 숙주 세포를 배양하여 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트를 발현시키는 공정을 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트를 생산하는 방법.
  13. 제11항에 따른 숙주 세포를 배양하여 항 인간 TSLP 수용체 항체를 발현시키는 공정을 포함하는, 항 인간 TSLP 수용체 항체를 생산하는 방법.
  14. 제4항에 따른 항 인간 TSLP 수용체 항체, 제5항에 따른 항 인간 TSLP 수용체 항체, 또는 제4항에 따른 항 인간 TSLP 수용체 항체 및 제5항에 따른 항 인간 TSLP 수용체 항체, 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 천식의 예방 또는 치료용 의약 조성물.
  15. 제3항에 따른 항 인간 TSLP 수용체 항체를 포함하는, 천식의 예방 또는 치료용 의약 조성물.
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