UA119328C2 - Антитіло до тslp-рецептора людини - Google Patents
Антитіло до тslp-рецептора людини Download PDFInfo
- Publication number
- UA119328C2 UA119328C2 UAA201602101A UAA201602101A UA119328C2 UA 119328 C2 UA119328 C2 UA 119328C2 UA A201602101 A UAA201602101 A UA A201602101A UA A201602101 A UAA201602101 A UA A201602101A UA 119328 C2 UA119328 C2 UA 119328C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- antibody
- human
- receptor
- amino acid
- antigen
- Prior art date
Links
- 102100038497 Cytokine receptor-like factor 2 Human genes 0.000 title 1
- 101710194733 Cytokine receptor-like factor 2 Proteins 0.000 title 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 124
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 124
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 124
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 97
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 83
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims abstract description 61
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 claims abstract description 30
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 23
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 11
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract description 10
- ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N Pyroglutamic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims abstract description 10
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims abstract description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 80
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 73
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 73
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 73
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 72
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 72
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 56
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 35
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 33
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 21
- 241000244186 Ascaris Species 0.000 claims description 19
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 9
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 6
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 12
- 241000566113 Branta sandvicensis Species 0.000 claims 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 abstract description 2
- 101000956427 Homo sapiens Cytokine receptor-like factor 2 Proteins 0.000 abstract 1
- 102200050839 rs386833792 Human genes 0.000 description 153
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 84
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 64
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 63
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 45
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 31
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 24
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 23
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 18
- 241000244203 Caenorhabditis elegans Species 0.000 description 16
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 16
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 16
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 16
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 15
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 13
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 12
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 10
- 102100027983 Molybdenum cofactor sulfurase Human genes 0.000 description 9
- 206010040914 Skin reaction Diseases 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 9
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 9
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 9
- 231100000430 skin reaction Toxicity 0.000 description 9
- 230000035483 skin reaction Effects 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 102100034574 P protein Human genes 0.000 description 8
- 101710181008 P protein Proteins 0.000 description 8
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 8
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 8
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 7
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 7
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 7
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 201000009594 Systemic Scleroderma Diseases 0.000 description 5
- 206010042953 Systemic sclerosis Diseases 0.000 description 5
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 5
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 5
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 230000004202 respiratory function Effects 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 4
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 4
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 4
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 4
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 4
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 4
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 3
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 208000027697 autoimmune lymphoproliferative syndrome due to CTLA4 haploinsuffiency Diseases 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 3
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 3
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 3
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000036428 airway hyperreactivity Effects 0.000 description 2
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 2
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 2
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 2
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 2
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-n-(6-hydrazinyl-6-oxohexyl)pentanamide Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCCCCC(=O)NN)SC[C@@H]21 IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 244000179819 Aechmea magdalenae Species 0.000 description 1
- 235000001291 Aechmea magdalenae Nutrition 0.000 description 1
- XUKUURHRXDUEBC-KAYWLYCHSA-N Atorvastatin Chemical compound C=1C=CC=CC=1C1=C(C=2C=CC(F)=CC=2)N(CC[C@@H](O)C[C@@H](O)CC(O)=O)C(C(C)C)=C1C(=O)NC1=CC=CC=C1 XUKUURHRXDUEBC-KAYWLYCHSA-N 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 101100156339 Caenorhabditis elegans vit-5 gene Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000005367 Carboxypeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010006303 Carboxypeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000006433 Chemokine CCL22 Human genes 0.000 description 1
- 108010083701 Chemokine CCL22 Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 241000611750 Coregonus kiyi Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 229920000089 Cyclic olefin copolymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101100377706 Escherichia phage T5 A2.2 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010015719 Exsanguination Diseases 0.000 description 1
- 108090001126 Furin Proteins 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000874160 Homo sapiens Succinate dehydrogenase [ubiquinone] iron-sulfur subunit, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101000844686 Homo sapiens Thioredoxin reductase 1, cytoplasmic Proteins 0.000 description 1
- 101000835093 Homo sapiens Transferrin receptor protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 241000567769 Isurus oxyrinchus Species 0.000 description 1
- 108700020482 Maltose-Binding protein Proteins 0.000 description 1
- MMVYPOCJESWGTC-UHFFFAOYSA-N Molybdenum(2+) Chemical compound [Mo+2] MMVYPOCJESWGTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- -1 Niiaspi Proteins 0.000 description 1
- 101100230207 Oryza sativa subsp. japonica GSK1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150084044 P gene Proteins 0.000 description 1
- 102000002508 Peptide Elongation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010068204 Peptide Elongation Factors Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 1
- 101150060303 SOK2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 1
- 102400000827 Saposin-D Human genes 0.000 description 1
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 206010070835 Skin sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 102100031294 Thymic stromal lymphopoietin Human genes 0.000 description 1
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 102220380138 c.151A>C Human genes 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000045360 human SDHB Human genes 0.000 description 1
- 238000012872 hydroxylapatite chromatography Methods 0.000 description 1
- 101150046722 idh1 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 230000017095 negative regulation of cell growth Effects 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 244000144985 peep Species 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 231100000370 skin sensitisation Toxicity 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 108010029307 thymic stromal lymphopoietin Proteins 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000013024 troubleshooting Methods 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Винахід стосується антитіла до TSLP-рецептора людини або його антигензв’язувального фрагмента, у тому числі антитіла, в якому глутамінова кислота на N-кінці важкого ланцюга антитіла або його антигензв'язувального фрагмента модифікована в піроглутамінову кислоту. Винахід також стосується експресійного вектора, клітини-хазяїна, способу отримання антитіла, фармацевтичної композиції, яка містить таке антитіло, та застосування антитіла для виготовлення фармацевтичної композиції для профілактики або лікування астми.
Description
опис
ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ
0001
Даний винахід стосується нових антитіл до Т5І Р-рецептору людини.
ПЕРЕДУМОВИ ВИНАХОДУ
ООО2І
Тимусний стромальний лімфопоетин (Т5І Р) є цитокіном, який продукується епітеліальними клітинами у відповідь на прозапальні стимули. У основному, Т5І Р посилює алергічну запальну відповідь за допомогою активації дендритних клітин і тучних клітин. Дендритні клітини експресують Т5І Р-рецептор і а-ланцюг І--7-рецептора, які є членами сімейства гемопоетичних рецепторів, і Т5І Р зв'язується з гетеродимером, що складається з Т5І Р-рецептора і а-ланцюга
І -7-рецептора, тим самим активуючи дендритні клітини. Дендритні клітини, активовані ТІ Р, експресують запальні хемокіни, такі як регульований тимусом і активацією хемокін (ТАКС (ССІ 17)), хемокін макрофагального походження (МОС (ССІ22)) і подібні до них (Маї. Іттипої., 2002, Мої. 7, р. 673-680). Відомо, що ТАКС і МОС є Тп2-хемокінами і зв'язуються з Тп2-клітинами в місці запалення (Іпі. Іттипої., 1999, Мої. 11, р. 81-88). Далі, дендритні клітини, активовані
Т5І Р, індукують диференціювання наївних Т-клітин в Тп2-клітини, а Тп2-клітини продукують І-- 4,11 -5, 11-13 ї ТМЕ, і викликають запальну реакцію (Маї. Іттипої., 2002, Мої. 7, р. 673 10 680).
ІО0ОЗІ
Повідомлялося про те, що активація дендритних клітин за допомогою Т5ї Р через такі Т5І Р- рецептори бере участь в патології захворювань, включаючи такі алергічні запальні захворювання, як астма і системний склероз. 0004)
Що стосується астми, то раніше повідомлялося, що в трансгенних мишах, в яких експресія
ТІ Р посилена специфічно в легенях, викликана запальна відповідь в дихальних шляхах супроводжується збільшенням кількості ІДЕ ії Тп2-цитокінів в легенях, і це веде до астматичної патології (Маї. Іттипої., 2005, Мої. 6, р. 1047-1053). Крім того, в мишах нокаутних по Т5І Р- рецептору або в моделі астми, в якій вводяться антитіла до Т5І Р-рецептору, спостерігалося зниження продукції Тп2-цитокінів і ІДЕ в кров і поліпшення респіраторних функцій (39. Ехр. Меа.,
Зо 2005, МоІЇ. 202, р. 829-839 і Сііп. Іттипої., 2008, МоІ. 129. р. 202-210). В доповнення, повідомлялося, що у пацієнтів, які страждають на астму, експресія ТІ Р, ТАКС і МОСС збільшувалася в астматичних дихальних шляхах, корелюючи з тяжкістю захворювання (..
Ітітипої., 2005, Мої. 174, р. 8183-8190 і 9. Іттипої., 2008, Мої. 181, р. 2790-2798). 0005)
Відносно системного склерозу повідомлялося, що Т5ІР надекспресований в шкірі у пацієнтів з системним склерозом (Агіпгй5 Кпеит., 2013, Мої. 65, р. 1335-1346), і що експресія ІІ - 13 ї 1-17 в запаленій ділянці шкіри була майже повністю придушена, а частка колагену в гістопатології була значно поліпшена в блеоміцин-індукованій моделі склеродерми з використанням мишей нокаутних по Т5І Р-рецептору (Апп. Кпеит. Оі5., 2013, Мої. 72, р. 2018- 2023).
ІО0Об)
Відповідно, коли може бути розроблене моноклональне антитіло, яке специфічно зв'язується з Т5І Р-рецептором людини і інгібує дія Т5ІР людини через Т5ІР-рецептор, очікується, що таке антитіло буде корисним для профілактики і лікування різних захворювань, при яких Т5І Р людини і Т5І Р-рецептор людини залучені до патології хвороби. 00071
Як антитіла до Т5І Р-рецептору людини, для яких дослідження вже ведуться, опубліковані 13Н5 як мишаче моноклональне антитіло і пи1З3Н5 як його гуманізоване антитіло (патентний документ 1), 106.29 як мишаче моноклональне антитіло і Мм115-38-Ідс1 ії ММ115-38-ІЧ4 як його химерні антитіла (патентний документ 1), ММ164-2 і ММ163-1 як повністю людські антитіла (патентний документ 3), і Т5І РК-012 141 як гуманізоване моноклональне антитіло, отримане з хом'яка.
ІО0О8)І
У 13Н5, нейтралізуюча активність підтверджена в методі аналізу Т5ІіР-індукованої проліферації з використанням клітин лінії Ва/ЕЗ, які стабільно експресують Т5І Р-рецептор, але нейтралізуюча активність пи13Н5 досі не підтверджена (патентний документ 1). Додатково, основуючись на описі патентних документів 2-4, з антитіл, описаних в цих документах, Т5І РЕ- 4 8 має найвищу нейтралізуючу активність (патентні документи 2-4). Т5І РА-012 012 було оцінено за допомогою різних тестів на нейтралізуючу активність. Наприклад, в методі аналізу бо ТІ Р-індукованої проліферації з використанням клітин Ва/ЕЗ, які стабільно експресують Т5І Р-
рецептор, в методі аналізу Т5І Р-індукованої продукції ТАКС, МОС і І/-8 з використанням отриманих з периферичної крові дендритних клітин людини, в методі аналізу ТІ Р-індукованої продукції Тп2-цитокінів з використанням отриманих з периферичної крові дендритних клітин людини і в системах спільного культивування з наївними Т-клітинами і т. п. було підтверджено, що ТЗІ РЕК-141 141 демонструють нейтралізуючу активність (патентний документ 2). Однак як лікарське антитіло бажано використовувати антитіло з найвищою нейтралізуючою активністю.
ІО0О9
Основні фактори, які визначають ефективне дозування препарату антитіла включають в себе зв'язувальну активність і нейтралізуючу активність антитіла проти антигену, а також кількість антигену, яка присутня в організмі. Збільшення зв'язувальної активності і нейтралізуючої активності приводить до зниження дозування, і, як наслідок, приводить до скорочення фінансового тягаря і медичних витрат пацієнтів, будучи надто корисними поліпшеннями.
ІОО1ОІ
Таким чином, для профілактики і лікування різних захворювань необхідно отримати антитіло до Т5ІР-рецептору людини, яке перевершує по активності звичайні антитіла до Т5ІР- рецептору людини.
ПОПЕРЕДНІЙ РІВЕНЬ ТЕХНІКИ
ПАТЕНТНИЙ ДОКУМЕНТ
ІО0О11І
ІПатентний документ 1| УМО з 2009/100324
ІПатентний документ 2) МО з 2007/112146
ІПатентний документ З3| УМО з 2008/155365
ІПатентний документ 4| УМО з 2012/007495
ОПИС ВИНАХОДУ
ПРОБЛЕМИ, ЩО ВИРІШУЮТЬСЯ ЗА ДОПОМОГОЮ ВИНАХОДУ 0012
Задачею даного винаходу є створення антитіла до Т5І Р-рецептору людини, яке специфічно зв'язується з ТІ Р-рецептором людини і інгібує дію Т5ЇР людини через Т5ІР-рецептор людини.
ЗАСОБИ РОЗВ'ЯЗАННЯ ПРОБЛЕМ
ІОО1ЗІ
В результаті інтенсивних досліджень авторів даного винаходу по отриманню антитіла до
Т5І Р-рецептору людини, було запропоноване антитіло до ТЗІ Р-рецептору людини, яке містить варіабельну область важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 1-118 з 5ЕО ІЮ МО: 1, і варіабельну область легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 1-108 з БЕО ІО МО: 3. Було виявлено, що антитіло до Т5І Р-рецептору людини інгібує експресію МРНК ТАКС і продукцію білка МОС, індуковану Т5ІР (приклади 5 і 6), і придушує алергічну реакцію в моделі сенсибілізації до аскаридного антигену у мавп (приклад 7), за допомогою чого даний винахід був виконаний.
ІОО141
А саме, даний винахід включає в себе наступні матеріали або способи, які є корисними в медицині або промисловості: (1) Антитіло до ТЗІ Р-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент, які містять варіабельну область важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 1-118 з 5ЕО ІЮ МО: 1, і варіабельну область легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 1-108 з ЗЕО ІЮО МО: 3. (2) Антитіло до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент за п. (1) вище, де константна область важкого ланцюга антитіла являє собою константну область Іду людини. (3) Антитіло до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент за п. (1) вище, де константна область легкого ланцюга антитіла являє собою константну область Їдк людини. (4) Антитіло до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент за п. (1) вище, де константна область важкого ланцюга антитіла являє собою константну область Ідх1 людини, і константна область легкого ланцюга антитіла являє собою константну область Ідк людини.
(5) Антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким одним оз пп. (1)-(4) вище, де антигензв'язувальний фрагмент являє собою одноланцюжковий фрагмент варіабельної області,
Еаб, Ргабр' або ЕК(аб)». (6) Антитіло до Т5І Р-рецептору людини за п. (1) вище, що містить важкий ланцюг, який складається з амінокислотної послідовності, представленої в ЗЕО ІЮ МО: 1, і легкий ланцюг, який складається з амінокислотної послідовності, представленої в зЕО ІЮ МО: 3. (7) Антитіло до Т5І Р-рецептору людини за п. (1) вище, що містить важкий ланцюг, який складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 1-447 з 5ЕО ІЮО МО: 1, і легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності, представленої в БЗЕО ІЮ МО: 3. (8) Полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область важкого ланцюга антитіла за п. (1) вище. (9) Полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область легкого ланцюга антитіла за п. (1) вище. (10) Експресійний вектор, що містить полінуклеотид за п. (8) і/або (9) вище. (11) Клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором за п. (10) вище, яка вибрана з групи, яка складається з пп. (а)-(а): (а) Клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором, що містить полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область важкого ланцюга антитіла до
ТІ Р-рецептору людини за п. (1) вище, і полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область легкого ланцюга цього антитіла; (р) Клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором, що містить полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область важкого ланцюга антитіла до
ТІ Р-рецептору людини за п. (1) вище, і експресійним вектором, що містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область легкого ланцюга цього антитіла; (с) Клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором, що містить полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність варіабельної області важкого ланцюга антитіла до Т5І Р- рецептору людини за п. (1) вище; і (а) Клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором, що містить полінуклеотид, який
Зо містить нуклеотидну послідовність варіабельної області легкого ланцюга антитіла до Т5І Р- рецептору людини за п. (1) вище. (12) Клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором з (10) вище, які були відібрані з групи, яка складається з (а) до (4): (а) Клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором, що містить полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область важкого ланцюга антитіла до
ТІ Р-рецептору людини за п. (6) вище, і полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область легкого ланцюга цього антитіла; (р) Клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором, що містить полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область важкого ланцюга антитіла до
Т5І Р-рецептору людини за п. (6) вище, і експресійним вектором, що містить полінуклеотид, що містить нуклеотидну послідовність, яка кодує легкий ланцюг цього антитіла; (с) Клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором, що містить полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує важкий ланцюг антитіла до Т5ІР-рецептору людини за п. (б) вище; і (а) Клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором, що містить полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує легкий ланцюг антитіла до Т5ІР-рецептору людини за п. (6) вище. (13) Спосіб отримання антитіла до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувального фрагмента, який включає культивування клітин-хазяїв за п. (11) вище для експресії антитіла до
ТІ Р-рецептору людини або його фрагмента. (14) Спосіб отримання антитіл до Т5І Р-рецептору людини, який включає культивування клітини-хазяїна за п. (12) вище для експресії антитіла до Т5І Р-рецептору людини. (15) Антитіло до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент, що отримується способом за п. (13) вище. (16) Антитіло до ТЗІ Р-рецептору людини, що отримується способом за п. (14) вище. (17) Фармацевтична композиція, що містить антитіло до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким одним з пп. (1)-(7), (15) і (16) вище і фармацевтично прийнятний наповнювач. (18) Фармацевтична композиція за п. (17) вище, яка являє собою фармацевтичну бо композицію для профілактики або лікування астми.
(19) Спосіб профілактики або лікування астми, який включає введення терапевтично ефективної кількості антитіла до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувального фрагмента за будь-яким одним з пп. (1)-(7), (15) і (16) вище. (20) Антитіло до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент за будь- яким одним з пп. (1)-(7), (15) ії (16) вище для застосування при профілактики або лікуванні астми. (21) Антитіло до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент за будь- яким одним з пп. (1)-(7), (15) і (16) вище для виробництва фармацевтичної композиції для профілактики або лікування астми.
Антитіло до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент за пп. (1)-(7), (15) ї (16), який вище включає в себе злитий білок антитіла або його антигензв'язувального фрагмента з іншим пептидом або білком і модифікації, що включають модифікуючий агент, пов'язаний з ними.
ЕФЕКТИ ВИНАХОДУ
0015)
Антитіло до Т5І Р-рецептору людини за даним винаходом зв'язується з Т5І Р-рецептором людини, має нейтралізуючу активність відносно дії Т5І Р людини через рецептор Т5І Р людини і може використовуватися як агент для профілактики і лікування алергічних запальних захворювань, такої як астма або системний склероз.
КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ
0016)
ІФіг. 1| На фіг. 1 показана інгібуюча активність повністю людського антитіла Т7-27 на концентрацію ІДЕ, специфічних до аскаридного антигену, в моделі сенсибілізації аскаридним антигеном у мавп. Вертикальна вісь представляє відносну плазматичну концентрацію ІДЕ, специфічних до аскаридного антигену, для відповідних зразків, коли плазматична концентрація
ІДЕ, специфічних до аскаридного антигену, на 22-й день від одного індивідуума з групи носія прийнята за 2000 Од./мл. Показані концентрація ІДЕ в 1-й день в групі носія і групі, якій вводили антитіло (до введення рідкого аскаридного антигену, ресуспендованого в алюміній- гідроксидному гелі), концентрація ІДЕ на 22-й день в групі носія і концентрація ІДЕ на 22-й день в групі, якій вводили антитіло.
ІФіг. 2) На фіг. 2 показана інгібуюча дія повністю людського 17-27 специфічну на аскаридний антиген шкірну реакцію в моделі сенсибілізації аскаридним антигеном у мавп. Показані результати введення фосфатно-сольового буфера (РВ5) і 100 мкг/мл розчину аскаридного антигену на 22-й день. Вертикальна вісь представляє величину (дельту в мм), що є результатом віднімання діаметра шкірної реакції, викликаної РВ5 від діаметра шкірної реакції, викликаної розчином аскаридного антигену.
ІФіг. З| На фіг. З показана інгібуюча дія антитіла до Т5ІР-рецептору на реакцію гіперреактивності дихальних шляхів в мишачій моделі астми. Вертикальна вісь представляє значення РепнН, що використовується як показник функції дихання ("р«е0,01, "р«0,05, ЖЖракО,01,
Жре0,05).
ІФіг. 4| На фіг. 4 показана інгібуюча дія антитіла до ТОЇ Р-рецептору на інфільтрацію еозинофілів в мишачій моделі астми. Вертикальна вісь представляє кількість еозинофілів в клітинній суспензії ВАГ Е ("р«О0,01).
ІФіг. 5| На фіг. 5 показана інгібуюча дія антитіла до Т5І Р-рецептору на експресію мРНК
ТАКС в мишачій моделі астми. Вертикальна вісь представляє рівень експресії мРНК ТАКС.
Варіанти здійснення винаходу 00171
Далі, даний винахід буде описаний більш детально. 0018)
Існує п'ять класів антитіл: дос, ІМ, ІдА, дО і Ід4Е, ії базова структура молекули антитіла складається з важких ланцюгів з молекулярною масою від 50000 до 70000 їі легких ланцюгів з молекулярною масою від 20000 до 30000 загалом для кожного класу. Важкий ланцюг, який звичайно складається з поліпептидного ланцюга, що містить 440 амінокислотних залишків, має характерну структуру для кожного з класів, і називається Іду, Ідн, да, дб і Іде аналогічно з дос,
І9М, ІдЧА, ІдО і ІдчЕ, відповідно. Додатково, дос включає чотири підкласи Ідс1, Ідс2, Ід, і Ідса,ї їх важкі ланцюги відповідно називаються Іду, дуг, ІдуЗ і Іду4. Легкий ланцюг звичайно містить 220 амінокислотних залишків, серед яких відомо два типи, тип І. і тип К, і вони називаються Ідл і
Ідк. У білковій конфігурації базової структури молекул антитіл два гомологічні важкі ланцюги і два гомологічні легкі ланцюги пов'язані дисульфідними (5-5 зв'язки) і нековалентними 60 зв'язками, і їх молекулярна вага складає від 150000 до 190000. Два типи легких ланцюгів можуть бути пов'язані з будь-яким важким ланцюгом. Відповідні молекули антитіла, як правило, складаються з двох ідентичних легких ланцюгів і двох ідентичних важких ланцюгів. 0019)
Відносно внутрішніх 5-5 зв'язків, у важкому ланцюгу присутні чотири 5-5 зв'язки (п'ять в ІднН і
Іде), і два з них присутні в легкому ланцюгу; одна петля утворюється на 100-110 амінокислотних залишків, і дана просторова структура схожа у всіх петель і називається структурною одиницею або доменом. Домен, розташований на аміноконцевій (М-кінцевій) стороні обох важкого і легкого ланцюгів, амінокислотна послідовність якого не постійна навіть у разі представників одного класу (підкласу) з однієї і тієї ж тварини, називається варіабельною областю, і відповідні домени називаються варіабельною областю важкого ланцюга (Мн) і варіабельною областю легкого ланцюга (М). Амінокислотна послідовність з карбоксильної (С-кінцевої) сторони від варіабельної області майже незмінна для кожного класу або підкласу і називається константною областю (кожний з доменів називається Сні, Снг, СнЗ і Сі, відповідно). 0020
Ділянка розпізнавання антигену в антитілі складається з Мн і М, і його специфічність зв'язування залежить від амінокислотної послідовності в даній ділянці. З іншого боку, такі види біологічної активності, як зв'язування з системою комплементу і різними клітинами, відображають відмінності в структурах константних областей серед різних класів Ід. Відомо, що змінюваність варіабельних областей легких і важких ланцюгів в основному лімітована трьома невеликими гіперваріабельними областями, присутніми в обох ланцюгах, і ці області називаються областями, які визначають комплементарність (СОК: СОКІ, СОК2 і СОКЗ, починаючи з М-кінця). Інша ділянка варіабельної області називається каркасною областю (ЕК) і є відносно постійною. 00211
Крім того, різні види антигензв'язувальних фрагментів, що містять Мн і Мі антитіла, мають антигензв'язувальну активність. Наприклад, одноланцюжковий фрагмент варіабельної області (5сЕм), Раб, Рар' і Е(абр)» приведені як приклади типових антигензв'язувальних фрагментів. Раб є моновалентним антигензв'язувальним фрагментом, який утворений легким ланцюгом і фрагментом важкого ланцюга, що включає в себе Мн, Сні і ділянку шарнірної області. Бар' є
Зо моновалентним антигензв'язувальним фрагментом, який утворений легким ланцюгом і фрагментом важкого ланцюга, що включає в себе Ун, Сні і ділянку шарнірної області, і залишки цистеїну, які утворюють 5-5 зв'язки між важкими ланцюгами, включені в ділянку шарнірної області. (аб): є бівалентним антигензв'язувальним фрагментом, що має димерну структуру, в якій два Рар'-фрагменти зв'язані один з одним за допомогою 5-5 зв'язків в шарнірній області. 5сЕм є моновалентним антигензв'язувальним фрагментом, який складається з Мн і Мі, з'єднаних за допомогою лінкерного пептиду. 0022 «Антитіло до Т5І Р-рецептору людини за даним винаходом»
Антитіло до Т5І Р-рецептору людини або його антигезв'язувальний фрагмент за даним винаходом являє собою антитіло до Т5І Р-рецептору людини або його антигезв'язувальний фрагмент, що має наступні характеристики.
Антитіло до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент, який містить варіабельну область важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 1-118 з 5ЕО ІЮ МО: 1, і варіабельну область легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 1-108 з БЕО ІЮО МО: 3.
ІОО23І
Переважно, щоб антитіло до Т5ІР-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент за даним винаходом мали вищеописані характеристики і додатково містили константну область важкого ланцюга і константну область легкого ланцюга. Як константна область можуть бути вибрані будь-які підкласи константних областей (наприклад, константна область Іду!, дуг, ІдуЗ їі Іду4 як константна область важкого ланцюга і константні області ІдА або Ідк як константні області легкого ланцюга), але переважна константна область Іду! людини як константна область важкого ланцюга і константна область Ідк людини як константна область легкого ланцюга. 00241
Константна область (ду! людини включає в себе, наприклад, константну область Іду людини, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 119-448 з БЕО
ІО МО. (0025)
Константна область Ідк людини включає в себе, наприклад, константну область дк людини, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 109-214 з БЕО ІО МО:3. (оО26)
Крім того, як антитіло до Т5ІР-рецептору людини або його антигензв'язувального фрагмента за даним винаходом, переважним є антитіло до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент, що містить описану вище варіабельну область важкого ланцюга і варіабельну область легкого ланцюга, в яких константною областю важкого ланцюга є константна область Іду! людини, а константною областю легкого ланцюга є константна область
Їдк людини. (00271
У одному варіанті здійснення антигензв'язувальним фрагментом за даним винаходом є 5СЕм, Раб, Раб", або Р(аб)». (оО28)
Будь-який фахівець в даній галузі може сконструювати антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, злиті з іншим пептидом або білком, а так само може сконструювати модифікацію, що має зв'язаний з нею модифікуючий агент, використовуючи відомі в даній галузі способи. Антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за даним винаходом включає антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент в формі такого злитого білка або модифікації. Наприклад, антитіло до Т5ІР-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент, які містять варіабельну область важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 1-118 з 5БЕО ІЮ МО/1, і варіабельну область легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 1-108 з БЕО ІЮ МО:3, включає антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, злиті з іншим пептидом або білком, і модифікацію, при якій модифікуючий агент зв'язаний з ними. Інший пептид або білок, що використовується для злиття, конкретно не обмежений, за умови, що він не знижує зв'язувальну активність антитіла або його антигензв'язувального фрагмента; їх приклади включають сироватковий альбумін людини, різні тегові пептиди, штучні пептиди зі спіральними мотивами, мальтозозв'язувальні білки, глутатіон-
З-трансферазу, різні токсини, інші пептиди або білки, здатні сприяти мультимеризації, і т. п.
Зо Модифікуючий агент, що використовується для модифікації, конкретно не обмежений, за умови, що він не знижує зв'язувальну активність антитіла або його антигензв'язувального фрагмента; їх приклади включають поліетиленгліколь, ланцюги цукру, фосфоліпіди, ліпосоми, низькомолекулярні сполуки і т. п. оО29
У одному варіанті здійснення антитіло до Т5І Р-рецептору людини за даним винаходом є антитілом до Т5І Р-рецептору людини, що має наступні характеристики.
Антитіло до Т5І Р-рецептору людини, що містить важкий ланцюг, який складається з амінокислотної послідовності, представленої у в ЗЕО ІЮ МО:1, і легкий ланцюг, який складається з амінокислотної послідовності, представленої в ЗЕО ІЮ МО:3.
ІООЗОЇ
У випадку, коли антитіло експресується в клітинах, відомо, що антитіло модифікується після трансляції. Приклади посттрансляційної модифікації включають в себе видалення лізину з С- кінця важкого ланцюга за допомогою карбоксипептидази, модифікацію глутамінової кислоти або глутаміну на М-кінці важкого ланцюга в піроглутамінову кислоту за допомогою піроглутамінування і т. п. Відомо, що лізин на С-кінці важкого ланцюга видалений, і більша частина глутаміну на М-кінці важкого ланцюга модифікована в піроглутамінову кислоту (оигпаї ої Рпагтасеціїса! Зсіепсе5, 2008, Мої. 97, р. 2426). Крім того, також відомо, що модифікація після трансляції не впливає на активність антитіла в даній галузі (Апаїуїїса! Віоспетівігу, 2006, Мої. 348, р. 24-39). 0091)
Антитіло за даним винаходом включає в себе антитіло, модифіковане після трансляції під час експресії в клітинах, таке як антитіло, яке містить видалений з С-кінця важкого ланцюга лізин, антитіло, в якому глутамін або глутамінова кислота на М-кінці важкого ланцюга модифіковані в піроглутамінову кислоти за допомогою піроглутамінування, і т. п. в доповненні до антитіла, що містить повнорозмірний важкий ланцюг. Додатково, антигензв'язувальний фрагмент за даним винаходом включає в себе антигензв'язувальний фрагмент, модифікований після трансляції під час експресії в клітинах, такий як антигензв'язувальний фрагмент, в якому глутамін або глутамінова кислота на М-кінці важкого ланцюга модифіковані в піроглутамінову кислоти за допомогою піроглутамінування. бо І0ОоЗ2І
Наприклад, антитіло до Т5І Р-рецептору людини за винаходом включає в себе антитіло до
ТІ Р-рецептору людини, описане нижче.
Антитіло до Т5І Р-рецептору людини, що містить важкий ланцюг, який складається з амінокислотної послідовності, представленої в ЗЕО ІЮ МО:1, в якій глутамінова кислота в позиції 17 в 5ЕО ІЮ МО:1 модифікована в піроглутамінову кислоту і/або видалений лізин з амінокислотним номером 448 в 5ЕО ІЮ МО:ї1, і легкий ланцюг, який складається з амінокислотної послідовності, представленої в 5ЕО ІЮ МО:3.
І0ОЗЗІ
Даний винахід включає антитіло до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент, що має наступні характеристики.
Антитіло до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент, які містять варіабельну область важкого ланцюга, що містить СОКІ, яка складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 31-35 з 5ЕО ІЮ МО:1, СОК2, яка складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 50-66 з 5ЕБО ІЮ МО:1, ії СОКЗ, яка складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 99-107 з 5ЕО ІЮО МО, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить СОМКІ, яка складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 24-34 з 5ЕО ІЮ МО:3, СОК2, яка складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 50-56 з ЗЕБЕО ІЮ МО:3, і СОКЗ, яка складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 89-97 з БЕО ІО МО:3.
І0ОЗА4І
Антитіло до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент за даним винаходом зв'язується з Т5ІР-рецептором людини. Як для антитіла, так і для його антигензв'язувального фрагмента, зв'язування з Т5І Р-рецептором людини підтверджують з використанням способу вимірювання активності зв'язування в даній галузі. Приклади способів вимірювання активності зв'язування включають спосіб твердофазний імуноферментний аналіз (ЕГІЗА) або спосіб поверхневого плазмонного резонансу (5РК). У разі використання ЕГІЗА, у використаному для прикладу способі, злитий білок Т5І Р-рецептора і Ес людини (злитий білок
Т5І Р-рецептор людини-Рс людини (кодується нуклеотидною послідовністю 5ЕО ІЮ МО:5)) іммобілізується на ЕГІЗА-планшеті, а досліджуване антитіло додається до нього для
Зо проходження реакції. Після реакції, проводять взаємодію з вторинним антитілом, таким як анти-
Іо антитіло і т. п., міченим ферментом, таким як пероксидаза хріну (НКР), і відмивають його, після чого можна підтвердити, чи зв'язується досліджуване антитіло з Т5І Р-рецептором людини за допомогою вимірювання активності з використанням реагенту для виявлення активності (наприклад, у випадку мічення НКР-ВМ-хемілюмінесцентного ЕГІЗА-субстрату (РОД) (Коспе
Оіадповійс5. Іпс.)). У разі використання 5РК, наприклад, можливе використання Віасоге (зареєстрована торгова марка) 2000 (СЕ Неайсаге дарап Согрогаййоп). У використаному для прикладу способі, досліджуване антитіло іммобілізоване на поверхні сенсорного чипа, а злитий білок ТІ Р-рецептора людини і мишачий Ес (злитий білок Т5І Р-рецептор людини-Ес миші (кодується нуклеотидною послідовністю ЕС ІЮ МО:6)) додається в потік. Підтвердити, чи зв'язується антитіло, що тестується, з Т5І Р-рецептором людини, можна, аналізуючи константу швидкості зв'язування (Ка), константу швидкості дисоціації (Ка), і константу дисоціації (КО) між антитілом і Т5І Р-рецептором людини.
І0ОЗ5І
Додатково, антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за даним винаходом включають антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, що зв'язується з Т51Р- рецептором, отриманим з інших тварин (наприклад, Т5І Р-рецептором мавпи) і зв'язувальна активність з цими рецепторів може бути виміряна з використанням цих же способів.
І0ОЗ6)
Переважно, щоб антитіло до Т5ІР-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент за даним винаходом зв'язувалися з Т5І Р-рецептором людини і мали нейтралізуючу активність відносно Т5ІР-рецептора людини. Нейтралізуюча активність відносно Т5ІР- рецептора людини означає активність, інгібуючу будь-яку біологічну активність ТЗІ Р. шляхом зв'язування з Т5І Р-рецептором людини, і може бути оцінена на основі однієї або декількох біологічної активності ТЗІ Р людини через Т5І Р-рецептор людини як показник. Приклади такої нейтралізуючої активності включають інгібуючу активність відносно Т5І Р-індукованої експресії
МРНАНК ТАКС і інгібуючу активність відносно Т5їР-індукованої продукції білка МОСС з використанням мононуклеарних клітин периферичної крові людини (РВМС), а способи, описані в прикладах 5 і 6 нижче, можуть бути використані як специфічні способи оцінки.
І0ОЗ7І
Для більш детальної оцінки ефектів антитіла до Т5ІР-рецептору людини або його антигензв'язувального фрагмента за даним винаходом можна використати дослідження іп мімо.
Наприклад, в прикладі 7, приведеному нижче, описано, що можна оцінити ефекти антитіла до
ТІ Р-рецептору людини іп мімо за допомогою тесту на придушення алергічної реакції з використанням моделі сенсибілізації аскаридним антигеном у мавп.
ІООЗ8І
Антитіло до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент за винаходом можуть бути легко отримані фахівцем в даній галузі з використанням відомого способу в даній галузі на основі інформації про послідовність варіабельної області важкого ланцюга і варіабельної області легкого ланцюга антитіла до Т5І Р-рецептору людини за винаходом, описаного в даній специфікації. Антитіло до Т5ІР-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент за даним винаходом конкретно не обмежені, але вони можуть бути отримані відповідно до способу, описаного в розділі «Спосіб отримання антитіла до ТІ Р- рецептору людини за винаходом», приведеному нижче.
ІООЗО9І
Антитіло до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент за даним винаходом додатково очищають при необхідності і вводять в рецептуру відповідно до звичайного способу. Вони можуть бути використані для профілактики або лікування захворювань, при яких Т5ЗІЇР людини і Т5І Р-рецептор людини беруть участь в патології захворювання, що включає алергічні запальні захворювання, такі як астма і системний склероз. 0040) «Полінуклеотид за даним винаходом»
Полінуклеотид за даним винаходом включає полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область важкого ланцюга антитіла до Т5І Р-рецептору людини за даним винаходом, і полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область легкого ланцюга антитіла до Т5ІР-рецептору людини за даним винаходом.
ІО0АТІ
У одному варіанті здійснення полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка
Зо кодує варіабельну область важкого ланцюга антитіла до ТЗІ Р-рецептору людини за даним винаходом, являє собою полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 1-118 з БЕО ІЮО МО:1. 0042
Полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область важкого ланцюга, представлену амінокислотною послідовністю з номерами амінокислот 1-118 з
ЗЕО ІО МО:1, включає, наприклад, полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність з номерами основ 1-354 з 5БЕО ІЮ МО:2.
ІО04ЗІ
У переважному варіанті здійснення полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область важкого ланцюга антитіла до Т5І Р-рецептору людини за даним винаходом, являє собою полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує важкий ланцюг, який складається з амінокислотної послідовності, представленої в ЗЕО ІЮ МО:1. 00441
Полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує важкий ланцюг, який складається з амінокислотної послідовності, представленої в ЗЕО ІЮ МО:1, включає, наприклад, полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, представлену в ЗХЕО ІЮ МО:2. 0045
У одному варіанті здійснення полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область легкого ланцюга антитіла до Т5І Р-рецептору людини за даним винаходом, являє собою полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 1-108 з БЕО ІЮО МО:3.
ІО046)
Полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 1-108 з ЗЕО ІЮ МО:3, включає, наприклад, полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність з номерами основ 1-324 з 5БЕО ІЮ МО 4. 00471
У переважному варіанті здійснення полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область легкого ланцюга антитіла до Т5І Р-рецептору людини за даним винаходом, являє собою полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує легкий ланцюг, який складається з амінокислотної послідовності, представленої в ЗЕО ІЮО МО:3.
ІО048)І
Полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує легкий ланцюг, який складається з амінокислотної послідовності, представленої в ЗЕО ІО МО:3, включає, наприклад, полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, представлену в ЗХЕО ІЮ МО 4.
І0049
Полінуклеотид за даним винаходом може бути легко отриманий фахівцем в даній галузі з використанням відомого способу в даній галузі на основі нуклеотидної послідовності.
Наприклад, полінуклеотид за даним винаходом може бути синтезований з використанням відомого способу синтезу генів в даній галузі. Способи синтезу генів, включають, наприклад, різні способи, відомі фахівцям в даній галузі, такі як спосіб синтезу генів антитіл, описаний в УМО 90/07861.
І0О5О «Експресійний вектор за даним винаходом, трансформована клітина-хазяїн за даним винаходом, спосіб отримання антитіла до Т5І Р-рецептору людини за даним винаходом і отримане цим способом антитіло до Т5І Р-рецептору людини»
Експресійний вектор за даним винаходом включає експресійний вектор, що включає полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область важкого ланцюга антитіла до Т5І Р-рецептору людини за даним винаходом, і/або полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область легкого ланцюга антитіла до
ТОЇ Р-рецептору людини за даним винаходом. 0051)
Переважні експресійні вектори за даним винаходом, включають експресійний вектор, що містить полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує важкий ланцюг антитіла до Т5І Р-рецептору людини за даним винаходом, експресійний вектор, що містить полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує легкий ланцюг антитіла до
Зо ТІ Р-рецептору людини за даним винаходом, або експресійний вектор, що містить полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує важкий ланцюг антитіла до
Т5І Р-рецептору людини за даним винаходом, і полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує легкий ланцюг цього антитіла.
ІО0О52І
Експресійний вектор, що використовується для експресії полінуклеотиду за даним винаходом, конкретно не обмежений, за умови що полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область важкого ланцюга антитіла до Т5І Р-рецептору людини за даним винаходом, і/або полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область легкого ланцюга антитіла до Т5І Р-рецептору людини за даним винаходом, можуть бути проекспресований в різних еукаріотичних клітинах-хазяях (наприклад, клітинах тварин, клітинах комах, клітинах рослин і дріжджів) і/або прокаріотичних клітинах- хазяях (наприклад, ЕбсПегіспіа сої), і можуть бути отримані кодовані ними поліпептиди.
Приклади експресійних векторів включають плазмідні вектори, вірусні вектори (наприклад, аденовірусні або ретровірусні) і т. п. Переважно використання рЕЕб.4 або рЕЕ12.4 (І опа, Іпс.).
Крім того, гени антитіл можуть бути проекспресовані шляхом перенесення фрагмента гена варіабельної області в експресійні вектори, що вже містять константні області генів Ід людини, такі як АС-у! або АСі-к (наприклад, см УМО 94/20632).
І0О5ЗІ
Експресійний вектор за даним винаходом може включати промотор, який функціонально пов'язаний з полінуклеотидом за даним винаходом. Приклади промотору для експресії полінуклеотиду за винаходом в клітинах тварин включають отримані з вірусів промотори, такі як
СММУ, БМ, або 5М40, промотор актину, промотор ЕЕтТа (фактора елонгації 10) і промотор білка теплового шоку. Приклади промоторів для експресії в бактеріях (наприклад, в Ез5спПегіспіа) включають в себе Тгр-промотор, Іас-промотор, АРІ-промотор і їас-промотор. Крім того, приклади промоторів для експресії в дріжджах включають СА 1-промотор, СА! 10-промотор,
РНО5-промотор, РОК-промотор, САР-промотор і АОН-промотор.
ІОО5АІ
Трансформована клітина-хазяїн за даним винаходом включає в себе клітину-хазяїна, трансформовану експресійним вектором за даним винаходом, яка вибрана з групи, яка бо складається з наступних пп. (а)-(а):
(а) клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором, що включає полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область важкого ланцюга антитіла до
Т5І Р-рецептору людини за даним винаходом, і полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область легкого ланцюга цього антитіла; (Б) клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором, що включає полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область важкого ланцюга антитіла до
ТІ Р-рецептору людини за даним винаходом, і експресійним вектором, що включає полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область легкого ланцюга цього антитіла; (с) клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором, що включає полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область важкого ланцюга антитіла до
Т5І Р-рецептору людини за даним винаходом; і (а) клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором, що включає полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область легкого ланцюга антитіла до
ТОЇ Р-рецептору людини за даним винаходом.
І0О55)
У одному варіанті здійснення трансформована клітина-хазяїн за даним винаходом являє собою клітину-хазяїна, трансформовану експресійним вектором за даним винаходом, яка вибрана з групи, яка складається з наступних пп.(а)-(а): (а) клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором, що включає полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує важкий ланцюг антитіла до Т5ІР-рецептору людини за даним винаходом, і полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує легкий ланцюг цього антитіла; (р) клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором, що включає полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує важкий ланцюг антитіла до Т5ІР-рецептору людини за даним винаходом, і експресійним вектором, що включає полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує легкий ланцюг цього антитіла; (с) клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором, що включає полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує важкий ланцюг антитіла до Т5ІР-рецептору
Зо людини за даним винаходом; і (а) клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором, що включає полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує легкий ланцюг антитіла до Т5ІР-рецептору людини за даним винаходом.
І0О56)
У разі використання клітини тварини, клітини комахи або дріжджів як клітини-хазяїна, експресійний вектор за даним винаходом може містити кодон ініціації і кодон термінації. У цьому випадку експресійний вектор за даним винаходом може містити енхансерну послідовність, нетрансльовану область на 5'-стороні і 3-стороні генів, що кодують антитіло за даним винаходом або варіабельну область важкого ланцюга або варіабельну область легкого ланцюга, секреторну сигнальну послідовність, сплайсингову сполуку, сайт поліаденілювання або реплікон. При використанні Е5сПегіснпіа соїї як клітини-хазяїна, експресійний вектор за даним винаходом може містити кодон ініціації, кодон термінації, термінаторну область і реплікон. У цьому випадку експресійний вектор за даним винаходом може містити селективний маркер (наприклад, гени стійкості до тетрацикліну, гени стійкості до ампіциліну, гени стійкості до канаміцину, гени стійкості до неоміцину або гени дигідрофолатредуктази), який звичайно використовується при необхідності. 0057
Переважні приклади трансформованої клітини-хазяїна за даним винаходом включають в себе клітину-хазяїна, трансформовану експресійним вектором, що включає полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує важкий ланцюг антитіла до Т5ІР-рецептору людини за даним винаходом, і полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує легкий ланцюг цього антитіла, і клітини-хазяїна, трансформованої експресійним вектором, що включає полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує важкий ланцюг антитіла до ТОЇ Р-рецептору людини за даним винаходом, і експресійним вектором, що включає полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує легкий ланцюг цього антитіла.
І0О58)
Трансформована клітина-хазяїн особливо не обмежена, за умови, що клітина-хазяїн підходить для використовуваного експресійного вектора, трансформована експресійним вектором і може експресувати антитіло. Приклади трансформованої клітини-хазяїна включають бо різні клітини, такі як природні клітини або штучно створені клітини, які звичайно використовуються в галузі даного винаходу (наприклад, клітини тварин (наприклад, клітини
СНО-КІЗМ), клітини комах (наприклад, 519), бактерії (наприклад, ЕзспПегіспіа), дріжджі (наприклад, Засспаготусе5 або Ріспіа) і т. п.). Переважно використовувати клітини, що культивуються, такі як клітини СНО-КІ15МУ, клітини СНО-ОО 44, клітини 293 або клітини М5О.
І0О59)
Спосіб трансформації клітини-хазяїна конкретно не обмежений, але, наприклад, можна використовувати кальцій-фосфатний спосіб або електропораційний спосіб.
І0ОбО
Способи отримання антитіла до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувального фрагмента за даним винаходом включають в себе спосіб отримання антитіла до Т5ІР- рецептору людини або його антигензв'язувального фрагмента, який включає культивування трансформованої клітини-хазяїна за даним винаходом для експресії антитіла до Т5ІР- рецептору людини або його антигензв'язувального фрагмента. 00611
Антитіло до ТЗІ Р-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент за даним винаходом включає антитіло до Т5ІР-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент, отримані способом отримання антитіла до Т5ІР-рецептору людини або його антигензв'язувального фрагмента за даним винаходом. 0О62
Спосіб отримання антитіла до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувального фрагмента за даним винаходом конкретно не обмежений, за умови, що спосіб включає культивування трансформованої клітини-хазяїна за даним винаходом для експресії антитіла до
ТІ Р-рецептору людини або його антигензв'язувального фрагмента. Переважна клітина-хазяїн, що використовується в способі, включає як переважний приклад трансформовану клітину- хазяїна за даним винаходом, яка описано вище.
І0О6ЗІ
Трансформовані клітини-хазяїни можна культивувати за допомогою відомих способів. Умови культивування, наприклад, температуру, рН культурального середовища і час культивування, вибирають відповідно. У випадку, коли клітина-хазяїн являє собою тваринну клітину, приклади
Зо культурального середовища включають культуральне середовище МЕМ, що містить приблизно від 595 до 20 95 фетальної бичачої сироватки (Зсіепсе, 1959, Мої. 130, Мо. 3373, р. 432-7), культуральне середовище ОМЕМ (Мігоіоду, 1959, Мої. 8, р. 396), а також культуральне середовище КРМІ 1640 (у. Ат. Меа. Аззос., 1967, Мої. 199, р. 519) і культуральне середовище 199 (Ехр. Віої. Медй., 1950, Мої. 73, р. 1-8). Значення рН культурального середовища, переважно, становить приблизно від б до 8, а культивування звичайно проводять при температурі приблизно 30 "С-40 "С протягом приблизно 15-72 годин при вентиляції повітрям і перемішуванні при необхідності. У випадку, коли клітина-хазяїн являє собою клітину комахи, як культуральне середовище, наприклад, може використовуватися культуральне середовище Грейса (Ргос. Маї!.
Асайд. Зсі. ОБА, 1985, Мої. 82, р. 8404), доповнене фетальною бичачою сироваткою. Значення рН культурального середовища, переважно, становить приблизно 5-8, а культивування звичайно проводять при температурі приблизно 20 "С-40 "С протягом приблизно 15-100 годин при вентиляції повітрям і перемішуванні при необхідності. У випадку, коли клітина-хазяїн являє собою Езспегіспіа соїї або дріжджі, як культуральне середовище, наприклад, підходить рідке культуральне середовище, що містить джерело поживних речовин. Переважно, щоб поживне культуральне середовище включало джерело вуглецю, неорганічне джерело азоту або органічне джерело азоту, необхідне для росту трансформованої клітини-хазяїна. Приклади джерела вуглецю включають глюкозу, декстран, розчинний крохмаль, сахарозу, а приклади неорганічного джерела азоту або органічного джерела азоту включають солі амонію, нітратні солі, амінокислоти, рідкий кукурудзяний екстракт, пептон, казеїн, м'ясний екстракт, соєву макуху і картопляний екстракт. Інші поживні речовини (наприклад, неорганічні солі (наприклад, хлорид кальцію, дигідрофосфат натрію і хлорид магнію), вітаміни і антибіотики (наприклад, тетрациклін, неоміцин, ампіцилін і канаміцин)) можуть бути включені за бажанням. Значення рн культурального середовища, переважно, становить приблизно від 5 до 8. У випадку, коли клітина-хазяїн являє собою ЕзспПегіспіа соїї, переважні приклади культурального середовища включають культуральне середовище І В і культуральне середовище МОУ (Мої. Сіо., Соїа 5ргіпу
Нартбог І арогаюгу, Мої. 3, А2.2). Культивування звичайно проводять при температурі приблизно 1470-43 7С протягом приблизно 3-24 годин при вентиляції повітрям і перемішуванні при необхідності. У випадку, коли клітина-хазяїн представляє дріжджі, як культуральне середовище, наприклад, може бути використане мінімальне середовище Беркхолдера (Ргос. Маї!. Асай, зсі, бо ОА, 1980, Мої. 77, р. 4505). Культивування звичайно проводять при температурі приблизно
20 70-357С протягом приблизно 14-144 годин при вентиляції повітрям і перемішуванні при необхідності. При проведенні культивування вищеописаним способом можна експресувати антитіло до Т5ІР-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент за даним винаходом. 0064)
У доповнення до культивування трансформованих клітин-хазяїв за даним винаходом для експресії антитіла до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувального фрагмента спосіб отримання антитіла до ТЗІ Р-рецептору людини або його антигензв'язувального фрагмента за даним винаходом може включати в себе виділення, переважно екстракцію або очищення, антитіла до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувального фрагмента з трансформованих клітин-хазяїв. Приклади способу виділення або очищення включають способи, в яких використовується розчинність, такі як висолювання і спосіб осадження розчинником; способи, в яких використовується відмінність в молекулярній масі, такі як діаліз, ультрафільтрація, гель-фільтрація; способи, в яких використовується електричний заряд, такі як іонообмінна хроматографія і гідроксилапатитна хроматографія; способи, в яких використовується специфічна спорідненість, такі як афінна хроматографія; способи, в яких використовується відмінність в гідрофобності, такі як зворотнофазова високоефективна рідинна хроматографія; і способи, в яких використовуються відмінності в ізоелектричних точках, такі як ізоелектрофокусуючий форез. Переважно, щоб антитіла, які накопичуються в культуральному супернатанті, можна було очищати за допомогою різних хроматографічних методів, наприклад, колонковою хроматографією з використанням колонки з білком А або колонки з білком о. 0065) «Фармацевтична композиція за даним винаходом»
Фармацевтичні композиції за даним винаходом включають в себе фармацевтичну композицію, що містить антитіло до ТЗІ Р-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент за даним винаходом і фармацевтично прийнятні допоміжні речовини. Фармацевтична композиція за даним винаходом може бути отримана способом, що звичайно використовується з допоміжними речовинами, а саме, з допоміжними речовинами для медицини або з носіями для медицини, що звичайно використовуються в даній галузі. Приклади лікарських форм
Зо фармацевтичних композицій включають парентеральні препарати, такі як препарати для ін'єкцій і препарати для краплинного вливання, і вони можуть бути введені внутрішньовенно, підшкірно або аналогічним шляхом. При отриманні лікарських препаратів, допоміжні речовини, носії і добавки відповідно до лікарської форми можуть бути використані в фармацевтично прийнятному діапазоні. 0066)
Фармацевтичні композиції за даним винаходом можуть включати в себе множину видів антитіл до Т5ІР-рецептору людини або їх антигензв'язувальних фрагментів за даним винаходом. Наприклад, даний винахід включає фармацевтичну композицію, що містить антитіло, в якому видалений лізин на С-кінці важкого ланцюга, антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент з посттрансляційною модифікацією на М-кінці, антитіло, в якому видалений лізин на С-кінці важкого ланцюга і проведена посттрансляційна модифікація на М- кінці, і/або антитіло, яке має лізин на С-кінці важкого ланцюга і не має посттрансляційної модифікації на М-кінці. 0067
Наприклад, фармацевтична композиція за даним винаходом, що містить антитіло до Т5І Р- рецептору людини за даним винаходом, включає в себе фармацевтичну композицію, яка містить два або декілька видів антитіла до Т5І Р-рецептору людини за пп. (1)-(4) нижче. (1) Антитіло до Т5І Р-рецептору людини, що включає важкий ланцюг, який складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 1-447 з 5БЕО ІЮ МО, і легкий ланцюг, який складається з амінокислотної послідовності, представленої в зЕО ІЮ МО:3. (2) Антитіло до Т5І Р-рецептору людини, що включає важкий ланцюг, який складається з амінокислотної послідовності, представленої в ЗЕО ІЮ МО:1, в якій глутамінова кислота з амінокислотним номером 1 модифікована в піроглутамінову кислоту, і легкий ланцюг, який складається з амінокислотної послідовності, представленої в ЗЕО ІЮ МО:3. (3) Антитіло до Т5І Р-рецептору людини, що включає важкий ланцюг, який складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 1-447 з БЕО ІО МО/:1, в якій глутамінова кислота з амінокислотним номером 1 модифікована в піроглутамінову кислоту, і легкий ланцюг, який складається з амінокислотної послідовності, представленої в зЕО ІЮ МО:3.
(4) Антитіло до Т5І Р-рецептору людини, що включає важкий ланцюг, який складається з амінокислотної послідовності, представленої в зЕО ІЮ МО':1, і легкий ланцюг, який складається з амінокислотної послідовності, представленої в ЗЕО ІЮ МО:3. 0068)
Кількість антитіла до Т5І Р-рецептору або його антигензв'язувального фрагмента за даним винаходом, що додається в лікарський препарат, варіює залежно від ступеня вираженості симптомів пацієнта, віку пацієнта, лікарської форми препарату, що використовується, титру зв'язування антитіла і т. п., ії, наприклад, може бути використана кількість, що додається, з приблизно від 0,001 мг/кг до 100 мг/кг.
І00О69
Фармацевтична композиція за даним винаходом може бути використана як фармацевтична композиція для профілактики або лікування захворювань, при яких Т5ІР людини і ТО Р- рецептор людини беруть участь в патології захворювання, таких як астма. 0070
Даний винахід включає фармацевтичну композицію для профілактики або лікування астми, що містить антитіло до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент за даним винаходом. Крім того, даний винахід включає спосіб профілактики або лікування астми, що включає введення терапевтично ефективної кількості антитіла до Т5І Р-рецептору людини або його антигензв'язувального фрагмента за даним винаходом. Додатково, даний винахід включає антитіло до ТЗІ Р-рецептору людини або його антигензв'язувальний фрагмент за даним винаходом для застосування в профілактиці або лікуванні астми. Додатково, даний винахід включає використання антитіла до Т5ІР-рецептору людини або його антигензв'язувального фрагмента за даним винаходом для виробництва фармацевтичної композиції для профілактики або лікування астми. 00711
Даний винахід був описаний в загальному значенні, а для кращого розуміння будуть приведені конкретні приклади, на які дається посилання, але вони є тільки прикладами і не обмежують даний винахід.
ІПриклади)
Зо 00721
Відносно частин, в яких використовуються комерційно доступні набори або реактиви, тести проводяться відповідно до прикладеного протоколу, якщо не вказане інше. Крім того, для зручності, концентрація моль/л виражена як М. Наприклад, 1 М водний розчин гідроксиду натрію означає 1 моль/л водного розчину гідроксиду натрію.
І0О7ЗІ (Приклад 1: отримання злитого білка Т5І Р-рецептор-Ес)
Для оцінки зв'язувальної активності антитіла були отримані злитий білок Т5І Р-рецептора людини і Ес людини (злитий білок Т5І Р-рецептор людини-Ес людини), злитий білок ТОЇ Р- рецептор людини і Ес миші (злитий білок Т5І Р-рецептор людини-Ес мишії) і злитий білок ТО Р- рецептора мавпи і Ес людини (злитий білок Т5І Р-рецептор мавпи-Ес людини). Ген злитого білка
ТІ Р-рецептора людини-Ес людини (5ЕО ІЮО МО:5), ген злитого білка ТЗІ Р-рецептора людини-
Ес миші (ЗЕО ІЮО МО:6) і ген злитого білка Т5І Р-рецептора мавпи-Ес людини (ЗЕО ІЮО МО:7), відповідно, рекомбінували з вектором для експресії в клітинах ссавців, (з35-вектором рЕЕ12.4 (Гопла, Іпс.). Отриманими векторами трансфікували клітини Егеезіуює 293 (Ше Тесппо!одієв,
Іпс.) з використанням трансфекційного реагенту 293Тесііп (Ше Тесппопіодієв5, Іпс.), ї клітини культивували в безсироватковій культуральній системі використанням експресійного середовища ЕКЕЕБЗТМІЕ 293 (Ше ТесПппоїодіез5, Іпс.) протягом одного тижня, а потім, відповідно, були отримані супернатанти, що містять злитий білок Т5І Р-рецептора людини-Ес людини, злитий білок ТЗІ Р-рецептора людини-Ес миші і злитий білок Т5І Р-рецептора мавпи-Ес людини. Відповідні злиті білки Т5І Р-рецептор-с очищали з використанням колонки для очищення білків - колонки з білком с (ЗЕ Неакйсаге Согрогайоп Зарап) з отриманих культуральних супернатантів. 00741 (Приклад 2: отримання мутованих білків Т5І Р з РІад-тегом)
Для оцінки нейтралізуючої активності антитіла були отримані мутований білок Т5І Р людини з БРіІад-тегом (мутований Т5ІР людини-Біад) і мутований білок Т5ІР мавпи з РіІад-тегом (мутований Т5І Р. мавпи-Ріад). Ген мутованого Т5І Р людини або мавпи з Ріад-тегом (ЗЕО ІЮ
МО:8 або 9 (які, відповідно, кодують амінокислотні послідовності Т5І Р. дикого типу людини або мавпи, в які для попередження втрати активності внаслідок розщеплення фуриновою бо протеазою була внесена мутація в сайт розщеплення), відповідно, рекомбінували з О5-
вектором рЕЕ12.4. Отриманими векторами трансфікували клітини Егеез(уює 293 з використанням 293гесіїп, і клітини культивували в безсироватковій культуральній системі з використанням експресійного середовища Егеезіує 293 протягом одного тижня, а потім, відповідно, отримували культуральні супернатанти, що містять мутований білок Т5І Р. людини з
Над-тегом або мутований білок Т5І Р мавпи з НРіад-тегом. Відповідні мутовані білки ТЗІ Р з Ріад- тегом очищали з отриманих культуральних супернатантів за допомогою афінного гелю з анти-
ЕЦАС антитілом М2 (Зідта, Іпс.). 0075) (Приклад 3: отримання повністю людського антитіла до Т5І Р-рецептору людини)
Мишу з технології отримання моноклональних антитіл людини, "Меіосіттипе" (технологія отримання антитіл Меосіттипе, Кедепегоп, Іпс. (патент США Мо 6596541)) імунізували ад'ювантом для стимуляції імунної відповіді, ЗІР рецептором людини-Бс (К 8 0, Іпс.) і експреуючими Т5ІР-рецептор людини клітинами Ва/ЕЗ (отриманими шляхом перенесення векторів, що кодують ген Т5ІР-рецептора людини (5ЕО ІЮ МО:10) і ген а-ланцюга 1--7- рецептора людини (5ЕО ІЮ МО:11), в мишачі клітини Ва/ЕРЗ (КІКЕМ: КСВО805)). Відповідно до звичайного способу виділяли селезінку або лімфатичний вузол імунізованої миші, збирали лімфоцити і зливали з клітинами мишачої мієломи ЗР2/0 (АТСС СТІ -1581), таким чином отримуючи гібридоми. Гібридоми моноклонізували, а потім культивували в гібридомному культуральному середовищі СО (І їе Тесппоїодіе5, Іпс.), яке є безсироватковим середовищем.
Антитіла очищали з отриманих культуральних супернатантів з використанням набору для очищення антитіл Ргоївїіп с Ригіїсацоп Кії (Ргоїецв, Іпо.).
ІЇ0076| Для оцінки зв'язувальної активності антитіл, відповідно проводили ЕгІ5А з використанням злитого білка Т5ІР-рецептора людини-Ес людини і злитого білка Ті Р- рецептора мавпи-Ес людини, отриманих в прикладі 1. Крім того, для оцінки нейтралізуючої активності антитіл, проводили аналіз інгібування зростання клітин на клітинах Ва/Е3, які експресують ТОЇ Р-рецептор людини, при стимуляції мутованими білками Т5ІР мавпи з Ріад- тегом, отриманими в прикладі 2, і проводили аналіз інгібування продукції білка МОС на цільній крові мавпи при стимуляції мутованими білками Т5ІР мавпи з Ріад-тегом, отриманими в прикладі 2.
Коо) 00771
За допомогою описаних вище тестів було виявлено, що антитіло (химерне антитіло), яке називається 17-27, мало зв'язувальну активність і нейтралізуючу активність відносно ТІ Р- рецепторів людини і мавпи. Гени, що кодують важкий ланцюг і легкий ланцюг антитіла з гібридоми, яка продукує 17-27, були клоновані, і була визначена їх послідовність. 0078)
У вищеописаному антитілі варіабельна область отримана від людини, а константна область отримана від миші. З цієї причини, експресійні вектори, що містять гени важкого ланцюга і легкого ланцюга були сконструйовані за допомогою (з5-векторів, і було отримане повністю людське антитіло. Більш конкретно, гени, що кодують сигнальні послідовності (Міде! МУпіше еї аІ,, Ргоївіп Епдіпеегіпуд 1987; 1(6): 499 (о 505.) були сполучені з 5'-стороною генів варіабельної області важкого ланцюга антитіла 77-27, а гени константної області (що складаються з нуклеотидної послідовності з номерами основ 355-1344 з 5ЕБЕО ІЮ МО:2) Іду! людини були сполучені з їх 3'-стороною, а потім гени важкого ланцюга були вставлені в (з5-вектор РЕЕб.4.
Крім того, гени, що кодують сигнальні послідовності (Міде! М/піше еї аї., указано вище) були сполучені з 5'-стороною генів варіабельної області легкого ланцюга антитіла, а гени константної області (що складаються з нуклеотидної послідовності з номерами основ 325-642 з 5ЕО І
МО:4) Їдк людини були сполучені з їх 3'-стороною, а потім гени легкого ланцюга були вставлені в 5-вектор РЕЕ12.4.
І0О79
Нуклеотидна послідовність, яка кодує важкий ланцюг повністю людського антитіла з отриманого 77-27 (повністю людське 77-27) показана в 5ЕБЕО ІЮ МО: 2, амінокислотна послідовність, що кодується нею, показана в 5ЕО ІЮО МО:1, і нуклеотидна послідовність, яка кодує легкий ланцюг антитіла показана в 5ЕО ІЮ МО:4, а амінокислотна послідовність, що кодується нею, показана в ЗЕО ІЮ МО:3. Варіабельна область важкого ланцюга повністю людського 17-27 складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 1-118 в
ЗБО ІЮ МО:1, а СОКІ, СОК2 ії СОКЗ важкого ланцюга, відповідно, складаються з амінокислотних послідовностей з номерами амінокислот 31-35, 50-66 і 99-107 в БЕО ІЮО МО:1.
Варіабельна область легкого ланцюга повністю людського 17-27 складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 1-108 в БЕО ІО МО: 3, а СОКІ, СОК2 і СОК З легкого ланцюга, відповідно, складаються з амінокислотних послідовностей з номерами амінокислот 24- 34, 50-56 і 89-97 в ЗЕО ІЮ МО:3. 0080)
Антитіло було проекспресоване з використанням двох варіантів способів транзієнтної експресії і конститутивної експресії з описаними вище (з5-векторами, в якій гени важкого ланцюга і легкого ланцюга антитіла були, відповідно, вставлені. У разі транзієнтної експресії, експресійні вектори обох важкого і легкого ланцюгів трансфікували з використанням 293гесіїп в клітини Егеебіує 293, що культивуються в кількості приблизно 1000000 клітин/мл в експресійному середовищі Егеезіуєє 293, і потім культивували протягом 7 днів. У альтернативному варіанті, експресійні вектори обох важкого і легкого ланцюгів, описаних вище, трансфікували з використанням методу електропорації в приблизно 10000000 клітин СНО-КІ5М (Гопла, Іпс.), а потім культивували в середовищі СО-СНО (І Ше Тесппоїодіеєв5, Іпс.) протягом 7 днів. Культуральні супернатанти очищали з використанням колонки з білком А або колонки з білком З (СЕ Неаййсаге Согрогайоп дарап), і таким чином отримували очищене повністю людське антитіло. У разі конститутивної експресії, (з5-вектори, в які гени важкого ланцюга і легкого ланцюга антитіла були, відповідно, вставлені, розрізали рестриктазою по сайтах Мої! і
РушіІ і проводили лігування з використанням набору для лігування І ідайоп-Сопмуиепіепсе Кії (МІРРОМОЕМЕ, Іпс.) або лігуючого реагенту Гідайоп-підпй (ТОМОВО, Іпс.), а потім були сконструйовані 5 вектори, в які були вставлені обидва гени важкого ланцюга і легких ланцюги.
Експресійні вектори кодували повнорозмірний важкий ланцюг і легкий ланцюг, і антитіло було проекспресоване шляхом трансфекції в клітини СНО-КІ5М. Культуральні супернатанти очищали з використанням колонки з білком А або колонки з білком 5 (ЗЕ Неайсаге Согрогайоп
У9арап), ії таким чином отримували очищене повністю людське антитіло. В результаті аналізу амінокислотної модифікації очищеного повністю людського 17-27 було показано, що в значній частині очищеного антитіла сталося видалення лізину на С-кінці важкого ланцюга. 00811 (Приклад 4: оцінка зв'язувальної активності за допомогою ЗРЕ-аналізу)
Для більш точного вимірювання зв'язувальної активності повністю людського 17-27 проводили 5РЕ-аналіз. У даному прикладі як порівняльне антитіло було використане антитіло
Зо до Т5І Р-рецептору людини, ТЗІ РК-012 141 (патентний документ 4). 0О82І
У 5РЕ-аналізі, аналіз проводили з використанням Віасоге (зареєстрована торгова марка) 2000 (СЕ Неапйсаге дарап Согрогаїйоп). Відповідні антитіла до Т5ІР-рецептору людини іммобілізували на поверхні сенсорного чипа СМ5 з використанням наборів Нитап Апіїбоду
Саріиге КИ і Атіпе Соиріпуд Кий (ЗЕ Неакрсаге дарап Согрогайоп). Отриманий в прикладі 1 злитий білок Т5І Р-рецептора людини з мишачим Ес серійно розводили розчином НВЗ-ЕР (СЕ
Неайрсаге Согрогайоп дарап), і 100 мкл розчину додавали в потік, що має швидкість потоку 50 мкл/хв. За допомогою цієї системи вимірювання були обчислені константа швидкості зв'язування (Ка), константа швидкості дисоціації (Ка) і константа дисоціації (КО) злитого білка
ТІ Р-рецептора людини-Ес миші і антитіла до Т5І Р-рецептору людини з використанням програмного забезпечення для аналізу даних ((ВІА ЕмаїІчаїйіоп) (таблиця 1)).
Таблиця 1
Активність зв'язування Т5І Р-рецептора людини за допомогою ЗРЕ-аналізу 11111111 ком1111171 11111111 касою сс
І0О83ЗІ
У результаті, стало зрозуміло, що повністю людське 77-27 мало приблизно в З рази більш сильну зв'язувальну активність в порівнянні з Т5І РК-012 141. 00841 (Приклад 5: оцінка інгібування індукованої Т5І Р експресії МРНК ТАКС з використанням
РВМС людини)
Для оцінки нейтралізуючої активності повністю людського 17-27, проводили оцінку інгібування індукованої Т5І Р експресії МРНК ТАКС в мононуклеарних клітинах периферичної крові (РВМОС) людини. Оскільки РВМС людини включають дендритні клітини, які експресують
ТІ Р-рецептор, РВМС людини можуть бути використані для оцінки антитіла до Т5ЗІР-
рецептору. Як порівняльне антитіло використовували Т5ІРК-012 141. Оскільки за результатами випробувального прикладу 1, описаного нижче, була виявлена кореляція між поліпшенням патології в моделі астми і інгібуванням в крові експресії мРНК ТАКС з використанням антитіла до Т5І Р-рецептору, дана система оцінки являє собою систему оцінки, яка вказує на ефективність відносно патології. 0085)
Висівали 200000 клітин РВМС людини (АЇїЇСеїІ5, пс.) на ямку в 96-ямкових планшетах (СіІвїпег, Іпс.) в 160 мкл культурального середовища РЕМІ1640 (І їе Тесппоїодієев, Іпс.). Готували серії розведення (7 точок з кінцевою концентрацією в діапазоні від 0,1 нг/мл до 100 нг/мл) мутованого білка ТЗІР людини з БЕіІад-тегом, отриманого в прикладі 2, в культуральному середовищі КРМІ164, і по 20 мкл цього розведення додавали в культуру, а потім інкубували протягом 24 годин в СОг-інкубаторі зі встановленою температурою 37 "С. Потім отримували відповідні антитіла до Т5ІР-рецептору людини в середовищі КРМІ1640, так що кінцева концентрація становила 0,3 мкг/мл, додавали в культуру в кількості 20 мкл і додатково інкубували протягом 72 годин. Як контрольні зразки, відповідно, готували ямку, в яку додавали культуральне середовище КРМІ1640 замість мутованого білка ТР людини з Ріад-тегом, і ямку, в яку додавали культуральне середовище КРМІ1640 замість антитіл. Видаляли 200 мкл культуральної рідини, а потім загальну РНК виділяли в 30 мкл води з використанням набору
ЕМеазу 96 (Оіадеп, Іпс.) для очищення РНК. Згодом, 10 мкл РНК використовували для реакції зворотної транскрипції з використанням набору для зворотної транскрипції, Нідй Сарасйу СОМА
Кемегзе Тгапзсгірійоп Кі (І е Тесппоїодієв5, Іпс.). Потім рівень експресії МРНК ТАКС вимірювали
ПЛР-способом ТадМап з використанням ТадМап-зонда для ТАКС (Ссі17, НеьО0171074, І їе
ІТесппоіодієв, Іпс), ТадмМап-зонда для р-актину (Асіб, Н599999903, І Пе Тесппо!одієв, Іпс.), суміші
Ехрге55 дРСК ЗирегМіх (А10313, І їе Тесппоїодіев, Іпс.) і 2 мкл кКДНК. Експеримент проводили в двох повторах для відповідних антитіл, і результати вимірювання були проаналізовані з використанням методу порівняння СТ, а потім розраховували рівень експресії МРНК ТАКС.
Після чого була розрахований ступінь інгібування антитілами при кожній концентрації ТЗІ Р.
Ступінь інгібування для ямки, в яку було додане культуральне середовище КРМІ1640 замість мутованого білка Т5І Р людини з РІад-тегом був прийнятий як 100 95, а середнє значення для ямки, в яку були, відповідно, були додані 30 нг/мл і 100 нг/мл мутованого білки Т5І Р. людини з
Над-тегом, приймали як ступінь інгібування 0 95. Проводили аналіз розрахованого ступеня інгібування і обчислювали концентрацію Т5І Р, що має 50 95 ступінь інгібування антитілом 0,3 мкг/мл (таблиця 2) шляхом апроксимації трипараметричної логарифмічної кривої. Оскільки ця концентрація Т5І Р стає вищою, нейтралізуюча активність відносно до Т5І Р. випробуваного антитіла стає сильнішою.
Таблиця 2
Активність інгібування Т5І Р-індукованої експресії
МРНК ТАКС з використанням РВМС 11111111 Концентрація ТЗІ Р(нимлуїд/-/::/ З 0086)
У результаті, було з'ясовано, що повністю людське антитіло 17-27 мало приблизно в 12 раз вищу активність інгібування індукованої ТЗІ Р людини експресії мРНК ТАКС людини в порівнянні з ТІ РК-012 141. 00871 (Приклад 6: Оцінка інгібування Т5ІР-індукованої продукції білла МОС виробництва з використанням РВМС людини)
Проводили оцінку інгібування Т5І Р-індукованої продукції білла МОС в РВМС людину для дослідження нейтралізуючої активності повністю людського антитіла 17-27. Як порівняльне антитіло використовували Т5І РК-012 141. 0088)
Кров людини розводили однаковим об'ємом РВ5 і нашаровували на такий же об'єм РісоїїЇ-
Радше РІГ ОБ (СЕ Неайсаге Японії Согрогайоп), а потім центрифугували протягом 30 хвилин при кімнатній температурі і 400худ, таким чином отримуючи РВМОС людини. Висівали приблизно 300000 клітин РВМС людини на ямку в 96б-ямкові планшети (Сіеїпег, Іпс.) в 100 мкл культурального середовища РЕМІ1640 (І їїе Тесппоіодіев, Іпс.). Мутований білок Т5І Р. людини з
Над-тегом, отриманий в прикладі 2, розводили в культуральному середовищі КРМІ1640 таким чином, щоб його кінцева концентрація стала 5 нг/мл, і додавали в культуру клітин в кількості 10 мкл з подальшою інкубацією протягом 24 год. в СО2г-інкубаторі, температура якого була встановлена на 37 "С. Потім готували серійне розведення (5 точок з кінцевою концентрацією в діапазоні від 0,1 нг/мл до 10 мкг/мл) відповідного антитіла до Т5І Р-рецептору людини в культуральному середовищі КРМІ164 і додавали по 10 мкл в культуру клітин з подальшою інкубацією протягом 5 днів. Як контрольний зразок, відповідно, готували ямку, в яку додавали культуральне середовище КРМІ1640 замість мутованого білка ТЗІ Р людини з Ріад-тегом, і ямку, в яку додавали культуральне середовище КРМІ1640 замість антитіла. Згодом збирали культуральні супернатанти і кількість продукованого МОСС оцінювали за допомогою набору
Нитап ССІ22/МОС ОцапцкКіпе Кий (ЕГІ5БА КаО, Іпс.) з використанням супернатантів, розбавлених РВ5 в 20 разів (І їе Тесппоіодієв5, Іпс.). Експеримент проводили в двох повторах для відповідних антитіл і розраховували ступінь інгібування для кожної концентрації антитіла.
Ступінь інгібування для ямки, в яку було додане культуральне середовище КРМІ1640 замість мутованого білка Т5І Р людини з Ріад-тегом, був прийнятий за 100 95, а ступінь інгібування в ямці, в яку було додане культуральне середовище КРМІ1640 замість антитіл, був прийнятий за
О 95. Концентрацію антитіла, що дає 50 95 ступеня інгібування, розраховували як ІС 50 (таблиця
З) шляхом апроксимації трипараметричної логарифмічної кривої.
Таблиця З
Оцінка інгібування Т5І Р-індукованої продукції білка
МОС з використанням РВМС людини 1111111111111111111сб5о(нм7777777С 0089)
У результаті було з'ясовано, що повністю людське антитіло Т7-27 мало приблизно в 9 разів вищу активність інгібування Т5ІР-індукованої продукції білла МОС в порівнянні з Т5І РЕ- 012 141. 0090) (Приклад 7: оцінка повністю людського 17-27 в моделі сенсибілізації аскаридним антигеном мавп)
Поява специфічних до аскаридного антигену ІДЕ індукується при сенсибілізації мавп
Зо аскаридним антигеном, а реакція шкіри викликається алергічною реакцією.
Рідкий аскаридний антиген (ОМР-Авсагіз (151, Іпс.)), ресуспендований в алюміній- гідроксидному гелі (що далі називається галунами) (0,5 мг/мл ОМР-Авзсагі5, ресуспендованого в
РВ5 з концентрацією галунів 50 мг/мл, далі називається рідкий аскаридний антиген в галунах) вводили в 1 день, 8-й день і 15-й день самцям яванської макаки в кількості 3,6 мл/кг внутрішньоочеревинно і кількості 0,4 мл/кг внутрішньом'язово для сенсибілізації. Крім того, аналогічно обробленим групам були організовані нормальна група (необроблена група, п-2), група носія (група, якій водили розчинник (20 мМ буферний розчин цитрату натрію/120 мМ Масі (рН 6,0)) внутрішньовенно за один день до сенсибілізації, п--3) і група введення антитіла (група, якій вводили 10 мг/кг повністю людського антитіла 17-27 (розбавленого розчинником) внутрішньовенно за один день до сенсибілізації, п-3).
Крім того, галуни були приготовані наступним способом.
Сульфат алюмінію (14-18-гідрати) (УМако, Іпс.) розчиняли в надчистій воді для приготування 1М розчину, і розчин фільтрували через фільтр 0,22 мкм, а потім до нього додавали 1М розчин гідроксиду натрію (Масаіаії Тездие) до тих пір, поки не випадав білий осад. Видаляли надосадову рідину, осад промивали надчистою водою 5 разів, а потім додатково промивали
РВЗ (МАКО, Іпс.) три рази. Промитий осад білого кольору дрібно подрібнювали в гомогенізаторі (СН-6010, КІМЕМАТІСА, Іпс.) при охолоджуванні льодом, з подальшим центрифугуванням протягом 5 хвилин при 2000 об./хв. і температурі 4 "С з використанням центрифуги (пітас
СК21, Ніїаспі, Ца.). Потім видаляли надосадову рідину, і осад два рази промивали РВ5.
Отриманий осад ресуспендували в РВ5, щоб отримати галуни. 00911
Вимірювання плазматичних ІДЕ, специфічних до аскаридного антигену
Кров послідовно збирали у вищеописаних макак в 1-й день (до введення рідкого аскаридного антигену в галунах), 8-й день, 15-й день і 22-й день, і плазму відбирали після центрифугування (1800х9д, 4 "С, 10 хвилин). Концентрацію специфічних до аскаридного антигену ІДЕ в плазмі вимірювали, використовуючи наступний спосіб.
ОМР-Азсагі5 готували в РВЗ таким чином, щоб його концентрація становила 100 мкг/мл, і додавали в 96-ямкові нерозбірні планшети Мипс-Іттипо "мМ Місгоумеї "м (Муипс Іпс.) в кількості 100 мкл, а потім іммобілізували при кімнатній температурі протягом ночі. Блокувальний агент (ВІіосКіпд Опе, Масаїаї Тездиє) додавали в кількості 200 мкл і залишали на 30 хвилин, після чого розчин видаляли. Далі, відповідно, додавали в кількості 100 мкл виділену плазму і зразок калібрувальної кривої. Як зразок калібрувальної кривої, концентрація плазматичних ІДЕ, специфічних до аскаридного антигену від однієї тварини з групи, якій вводили носій, на 22-й день була прийнята як 2000 Од./мл, і були приготовані і використані серійне розведення (2000 мОд./мл - 16 мОд./мл) в розчині для розведення (5 95 Віоскіпд Опе в РВ5). Інкубацію проводили при кімнатній температурі протягом 1 години, з подальшим 5-кратним промиванням в Т-РВ5 (0,05 95 Гуееп-20 в РВ5), а потім додавали 100 мкл НКР-міченого антитіла для детекції ЧЕ (АВО-108Р, Веїйпу! Іпс.), розведеного в 10000 разів в розчині для розведення. Після чого інкубацію проводили при кімнатній температурі протягом 1 години з подальшим 5-кратним промиванням Т-РВ5. У кінці, вимірювання проводили з використанням набору для колірної детекції пероксидази (МІ-1120Т, Зитіоп Іпс.). Оптичну густину вимірювали на 5ресігатах (МоІесшаг Оеємісев, Іпс.). Результати для 1-го і 22-го дні показані на фіг. 1. 0092
Шкірний тест
На 22-й день, РВ5, 1, 10 ї 100 мкг/мл розчини аскаридного антигену (розчину, в якому ОМР-
Азсагіз ресуспендований в РВ5) вводили внутрішньошкірно в двох точках, відповідно (всього 8 точок на одну тварину) на поголеному животі кожного індивідуума в групі, що отримувала носій, і в групі, якій вводили антитіло, в кількості 100 мкл. У нормальній групі, внутрішньошкірно вводили РВ5 і 100 мкг/мл розчини аскаридного антигену в 4-х точках, відповідно (всього 8 точок на одну тварину), на поголеному животі кожної тварини в кількості 100 мкл. Через 20 хвилин після сенсибілізації шкіри, шкірну реакцію фіксували шляхом вимірювання діаметра за
Зо допомогою ноніусного штангенциркуля. Для кожної тварини величина, в якій діаметр шкірної реакції на введення РВ5 був віднятий від діаметра шкірної реакції на введення аскаридного антигену, приведена як різниця (дельта) в мм. Результати при введенні аскаридного антигену в концентрації 100 мкг/мл показані на фіг. 2. Потрібно зазначити, що у разі введення розчину аскаридного антигену в концентрації 1 і 10 мкг/мл не розвивалася шкірна реакція, достатня для оцінки досліджуваного антитіла.
І0093
Обчислювали середнє значення і стандартну помилку для кожної групи і обчислювали ступінь інгібування, приймаючи значення в 1-й день (значення перед введенням рідкого аскаридного антигену у галунах) за 100 95 і значення в групі носія на 22-й день за 095 у вимірюванні плазматичних ІДЕ, специфічних до аскаридного антигену. 00941
Як показано на фіг. 1, повністю людське антитіло 77-27 знижувало (97 95-е інгібування) концентрацію ІДЕ, специфічних до аскаридного антигену, в моделі сенсибілізації аскаридним антигеном мавп в порівнянні з групою носія. 0095)
Як показано на фіг. 2, повністю людське антитіло 77-27 знижувало шкірну реакцію на аскаридний антиген при введенні 100 мкг/мл розчину аскаридного антигену в моделі сенсибілізації аскаридним антигеном мавп в порівнянні з групою носія. 0096)
З результатів, описаних вище, було з'ясовано, що повністю людське антитіло 77-27 придушувало алергічну реакцію, викликану ІДЕ, специфічними до аскаридного антигену, в моделі сенсибілізації аскаридним антигеном мавп. 0097 (Випробувальний приклад 1: оцінка антитіла до Т5І Р-рецептору в мишачій моделі астми при сенсибілізації кліщовим антигеном)
Мишача модель сенсибілізації кліщовим антигеном відома як модель астми, і патологічний стан включає підвищення реактивності дихальних шляхів і інфільтрацію еозинофілів в бронхоальвеолярний лаваж.
Сенсибілізацію проводили шляхом внутрішньоочеревинного введення мишам МС/Мда бо (Спапев Кімег, Іпс.) кліщового антигену (Ор) (5, Іпс.) в дозуванні 100 мкг Ор на 0,5 мл фізіологічного розчину на мишу в 0-й день (точка початку сенсибілізації) і 5-й день. Запалення дихальних шляхів викликали назальним введенням кліщового антигену з дозуванням 100 мкг
ОР на 50 мкл фізіологічного розчину на мишу на 12-й день і 19-й день. Антитіло проти мишачого
ТІ Р-рецептора (М/АКО, Іпс.), розчинене в РВ5 (УМАКО, Іпс.), вводили групі введення антитіла підшкірно в дозуванні (0,1, 1, 10 мг/кг) в 1-й день, 2-й день, 5-й день, 8-й день, 11-й день, 14-й день і 18-й день (дні введення антитіла) один раз на день. Як позитивну контрольну групу створювали групу введення дексаметазону (група Оех). Дексаметазон, розчинений в РВ5, вводили групі Оех внутрішньоочеревинно в дозуванні З мг/кг з 12-го по 19-й день один раз на день. Набір оброблених груп був наступним.
ІЕкспериментальні групи)
Нормальна група (п-10):
Необроблені тварини
Група фізіологічного розчину (п-6):
Кліщовий антиген вводили внутрішньоочеревинно в 0-й день і 5-й день, фізіологічний розчин вводили інтраназально в 12-й день і 19-й день, і РВ5 вводили підшкірно в день введення антитіла.
Група РВ5 (п-10):
Кліщовий антиген вводили внутрішньоочеревинно в 0-й день і 5-й день, кліщовий антиген вводили інтраназально в 12-й день і 19-й день, і РВ5 вводили підшкірно в день введення антитіла.
Група введення антитіла (0,1, 1, 10 мг/кг) (п-10 для кожного дозування):
Кліщовий антиген вводили внутрішньоочеревинно в 0-й день і 5-й день, кліщовий антиген вводили інтраназально в 12-й день і 19-й день, і антитіло вводили підшкірно в день введення антитіла.
Група Оеєх (п-10):
Кліщовий антиген вводили внутрішньоочеревинно в 0-й день і 5-й день, кліщовий антиген вводили інтраназально в 12-й день і 19-й день, і дексаметазон вводили внутрішньоочеревинно з 12-го дня до 19-го дня. 0098)
Зо Мишу вміщували в не обмежуючу рух камеру тільки для мишей на 20-й день. Датчик, в якому використовувався пневмотахограф, був прикріплений до камери і підключений до аналізатора дихальної функції Віобубзіет ХА (Вихсо, Іпс.), і зміну тиску всередині камери відносно атмосферного тиску детектували за допомогою датчика. Концентрацію хлориду ацетил-В-метил холіну (Зідта, Іпс.) (0,25, 0,5, 1, 2, 4 мг/мл), розчиненого в фізіологічному розчині, послідовно підвищували, і потім вводили через дихальний отвір за допомогою небулайзера для вивчення реактивності дихальних шляхів. РепН, автоматично розрахований по зміні тиску у внутрішній частині камери, використовували як показник дихальної функції.
Результати вимірювань показані на фіг. 3.
І0099
Далі, після збору крові у мишей з порожнистої вени черевної порожнини, їх умертвляли шляхом знекровлення. Канюлю інтубували в трахею, і бронхоальвеолярний лаваж здійснювали 0,1 95-м розчином фетальної бичачої сироватки (Віоууеві, Іпс.) в РВ5, а потім збирали рідину після бронхоальвеолярного лаважу (ВАГ Е). ВАГ Е центрифугували, видаляли супернатант, осад ресуспендували в 500 мкл фізіологічного розчину, і отримували суспензію ВАГ Е-клітин. Кількість еозинофілів в ВАГЕ-клітинній суспензії вимірювали з використанням мультипозиційнного автоматичного аналізатора клітин крові ХТ-2000і (Зубтех, Іпс.). Результати вимірювань показані на фіг. 4.
ІОТООІ
Отриману кров розводили в 10 разів культуральним середовищем КРМІ1640 (І їе
Тесппоодіе5, Іпс.). Розбавлену кров висівали в кількості 1 мл на планшет (ММАКІ Со. ца...
Мишачий Т5І Р (КУО, Іпс.) розводили в РВ5 так, щоб його кінцева концентрація становила 0 або 10 нг/мл, і додавали по 100 мкл цих розчинів. Інкубацію проводили при 37 "С протягом 24 годин в атмосфері 5 95 СО», а загальну РНК виділяли в 30 мкл води з використанням набору
ЕМеазу 96 Кії (Оіадеп, Іпс.). Далі, 10 мкл РНК використовували в реакції зворотної транскрипції з використанням набору Нідчпй Сарасйу СОМА Кемегзе Тгапзогіріоп Кії (І їе Тесппоїіодіев, Іпс.).
Далі, рівень експресії мРНК ТАКС вимірювали за допомогою ПЛР-способу ТадМап з використанням Тадмап-зонда для ТАКС (Ссі17, Мп01244826 91, І Ге Тесппоїодієв5, Іпс.), ТадМап- зонда для р-актину (Асіб, МітО0607939 51, І Те ТесппоїпІодіев, Іпс.), суміші Ехрге55 ЗФРСК ЗирегМіх (А10313, І Те Тесппо!одієв, Іпс.) і 2 мкл кКДНК. Рівень експресії був розрахований шляхом аналізу результатів вимірювання з використанням методу порівняння СТ. Результати при 10 нг/мл Т5І Р показані на фіг. 5.
ІОТО1І
Були обчислені середні значення і стандартні помилки для відповідних груп. Тест
Стьюдента використовували для визначення достовірної відмінності між групою РВ5 і нормальною групою, групою РВБ5 і групою ЮОех, відповідно. Для визначення достовірної відмінності між групою РВЗ і групою введення антитіла використовували множинне порівняння
Даннета. У обох випадках, достовірна відмінність була присутньою у випадку р«е0,05.
ІОТО2І
Як показано на фіг. 3, в групі, якій вводили антитіло, інгібуючу дію на гіперреактивність дихальних шляхів, індуковану 1 мг/мл хлориду ацетил-В-метил холіну, було знайдено в мишачій моделі астми в порівнянні з групою РВ5. Стало зрозуміло, що антитіло до ТІ Р-рецептору поліпшує дихальну функцію в моделі астми.
ІОТОЗІ
Як показано на фіг. 4, в групі, якій вводили антитіло, інгібуюча дія на інфільтрацію еозинофілів в бронхоальвеолярний лаваж була виявлена в порівнянні з групою РВ5.
ІОТО41
Як показано на фіг. 5, в групі, якій вводили антитіло, інгібуюча дія на експресію МРНК ТАКС була знайдена в порівнянні з групою РВ5.
ІОТОБІ
Результати, представлені на фіг. З і 4, підтверджували, що антитіло до Т5І Р-рецептору поліпшувало патологічний стан в моделі астми. Крім того на основі результатів, представлених на фіг. 3-5, була виявлена кореляція між поліпшенням патологічного стану і інгібуванням експресії МРНК ТАКС після введення антитіла до рецептору анти-Т5І Р, і стало очевидно, що позитивний вплив на патологічний стан може бути оцінений по інгібуючому ефекту на експресію
МРНК ТАКС якості показника.
Промислова застосовність
ІО1ТО6Ї
Антитіло до ТЗІ Р-рецептору людини за даним винаходом є корисним для профілактики і
Зо лікування різних захворювань, в яких Т5І Р людини і ТЗІ Р-рецептор людини беруть участь в патології захворювання. Крім того, способи отримання полінуклеотидів, експресійних векторів і клітин-хазяїв за даним винаходом можуть використовуватися для отримання антитіла до Т5І Р- рецептору людини.
ІВільний текст списку послідовностей)
ІО1О71
У ряді заголовків «223» в списку послідовностей приведений опис "Штучна послідовність".
Зокрема, нуклеотидними послідовностями, приведеними в ЗЕО ІЮ МО:2 і 5ЕО ІЮ МО:4 зі списку послідовностей, є нуклеотидні послідовності важкого ланцюга і легкого ланцюга повністю людського антитіла 17-27, відповідно, а амінокислотними послідовностями, приведеними в 5ЕО
ІО МО-1 ї БЕО ІО МО:3, є амінокислотні послідовності важкого ланцюга і легкого ланцюга, що кодуються 5ЕО ІЮ МО:2 і 5ЕБЕО 10 МО:4, відповідно. Нуклеотидними послідовностями, приведеними в ЗЕО ІЮО МО:5, 6, 7, 8, і 9 зі списку послідовностей, є нуклеотидні послідовності, що кодують злитий білок Т5І Р-рецептора людини з Ес людини, злитий білок Т5І Р-рецептора людини з Ес миші, злитий білок Т5І Р-рецептора мавпи з Ес людини, мутований білок Т5І Р людини з Ріад-тегом і мутований білок Т5І Р мавпи з Ріад-тегом, відповідно.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«110» Авсеїіїіає Рпбахщта пс. «1950» Нове знтитіло проти ТБЬРр-вацептора людини «1305 дізо1лаАОо «150» лрРІШ13-165676 «151» 8013-08-09 «1605 11 «І705 рРасекнсів чесвіоп 3.5 «їй» 1 -з1ї» 448 «віх Білок «13» Штучна послідовність «вх «223» Н-ланцюг антитіла проти ТЕПР-рецептора людини «400» 1 сій уаї біз бе бец біз бек біу біу сіу ем уві бів Ро аіу біу 1 З 10 15
Чех їеч Ака їєз бек Сув Аїа Аїа бек О1у Ріє Тік РНе Ак бек Бех 20 25 30 діа Меї Нів їж Ууді ДІ сіп віз РКО бі ув Зіу Пец Був Ткроуаї 35 40 45
Бех бек чаї беїг біу бек О1у Аїа П1і1у Тих Тут Тухк йїа Ав бак Уві 50 55 ко пув сту АжУ ра Тік т16 бек АкЧ Авр Ада РКО Ту Ав тах пем Тук 65 то 75 80
Іа сій Мес АБ бер тей Або діа бій АБр ТЕ Аїа уаї Тук тТук Сув за з5 чаї Був бів Піу Сіу Бек Ака біу Рре Авр Тук ТкроФ1іу бів С1у Тк 105 165 110 теп Уаії так оче) бек Бек Аза беє ТК був З1іу Рго Чек уайї пе РКО 115 129 135 їецд Аіа рко бек бек Пух Бек Ту бек С1у Фіу Тих А1а Аїа Геч с1у 1359 155 140
Су ви уаї був АвротТук Ра Бгто біз бко Уві Ту Заї бек Тер Авп 145 150 55 160 бех йпіу Аїа пе) ТВх бек Сіу Уаї Ні тиж Рре Рго Аїа уаї бер с1а 1658 170 175 бек бех 5іу Ппей Тук БЗехб Гео бек Зек Уаї чаї ть уві Рго бек Бех:
Іч180 їв 1950
Бех без і1у так бів тв тує їв Сув АБа уаї Де Нів ув РО 58 135 200 205
Авап тах рув УВІ Аво Су пув уаії їй рко бує Бех Сув дер Був ТВЖ 210 ІЗ еВ нів так оСув рЕО Рго Сув ро Аза ро бів Ппейб їв) бСіу б0їу РКО Бех 225 230 азу 240
Уаї Бе пец Ре Ро Рхо Був Рко Пув АвроТйх рез Меб І1е бек Атха 245 250 255
Тпе о рго БРБо Уві Ту Су Уаї Уаї уаї Авр Уаї Бех Нів бій Авр Бго 280 285 ато ри уві Був Ре Авп оТхр тТух Ууаі АБросіу Уаі сіш Уаі Нів Аво А1їа 280 285 був тах був Бо АхЯ ста сій бій тує Авповек тп тух Ака Уві Уаї 250 235 300
Зеж Ууаї рез Тавг Уаї бек Нів' 1 ав отТКо Печ Ай 01 Був бій Тух 305 310 315 329
Був Су Пцув чав Бер Ави Був йіа еп Ро Аіа ро Тіе сій їсув ТЕ 325 зо 335
Тіе Бек Був Аїіа був С1у 105 РКО Ак бі рго бів уві Тук Тк Бец 340 345 350 вгОо Бко зе Ах Авр біз Бем Ти Був лап піп уві бек еп Ти Сує
ЗАВ. зво зва
Пец уві Був З1у Ра Тут Рко бех дер тів діа Уві біц тр бій бер
Зо 375 зво
Авп у стій вто бій ап Ав Тух був Тк Тк орто Ро уаї рец АЕр
385 3950 395 400
Зек Авр С1у бек РБе Ре Пец Тухк бет Пув їм Тих уаї Ар Бук Бех 205 410 15
Апу Тхр зів бів біу АБа уУаї Ре бек Сув бах Чаї Меєс Нів бі: Аїа а2о0 425 430 їв Ні Аа нів Тухк ТЕ сій Був бех Бей бек Бей дек Рко біу пув 445 «105 й «її» 1347 «віт5 ДНК «313» Штучна поспідовнаість «ВВ «ввіз ген нН-ланцюва антитіла проти ТеОЕрР-рецептора лЛЮюЮлЛиИнНИи «4005 2 чачукосачс ЧЕ чачЕс сучас єсуЧвасавує сзуузуЗуєс ссгрузвасес ва бсссчсасач сссвозасс сасеоскксос ачесестачсса спсавсацЧчев ссдесадеаєе 1250 сезаоузаєо зассоааакоу зуссесавує сссачсусаса Усач ссоя авсабастає: 80 чсезчассссу бчаазачассЯ чеЕссассаєо бссачачаса абссоазвага сасастусає ха ссдсагасча асадіссоач зуссзвасас асузссчбає ассасвукує зазадуаавуцо КІН часазссоча чес ЕсЧаста ссзсаоосссач чЧааассотат ссассцісте стсаческео 359 азссавозЗцос сакссасесео ссссооссоЗса сссессссса вуассасссс содучосасв. 429 чеччоссосуч чсгасобаЧЕ созачеаорас боссссузас судеуасЯає сісцсадває ап ссасчсоссос ссассвосоуд соабосасаєс Берессудеса сестасеасс сесасчаєсс 5АО тастссстта згацезчзбаче зЗасссбчсос Ессачсадчеє Єсчасассса часскасаєс 50
БКазсавсчявза абсасначсс Своспасаєсс авначебчсаса азаавачеЕвєЧда чессаваєсеоє вБО сзссасвайа сісвсасаєц ссеассусусє ссвдеассгоЯа впасгссосучоа чЧачЧассоса то чЕсЕБсессє сосссссзва асссавоуає звсосесасда Есрессудає ссссдазоаєе 789 атстасусзкач сучас уауссвсова уасеостчача Єсзачсссза сгачсбасас ва часочсчсач апобосабєаа бассаазаса задесосодо зудадсадта саасвосасоу запо тассзсоєза севоасавессо сасозісссо сассаззасє адессоаасає сазоасваєас зво зачцбсосзаду бЄсбссавсаз адсссгсеса десессабсЯ адазавссає ссессавачеє т102а аваууусацє сссуазвасо асаччєасас асосбасосо сабсссодоча Есауссвасе 16550 вачазвссача бсачесгсчас среасссосавс азасчсбЕсс всссозасов сзссоссяу 1140 чачсочччаче чЧеаасочеса чссодачаає вассасавуа ссасодсеєсс сасасвочас 1200
Ессчасочцчоєс ссссесскссЕ ссасаасава сосассчбач асавуацчсва зсовсадев 1860 чоадаасчссс єсссавбдссс сосзасзсає чаздоссесоас асваєсавста сасуєвосаву 13720 адсовосссс сеасоєссоюе базаєца 1347 «Й» 3 «шк їй «-8125 Білож кгї3» ЩюЕУучна послідовність «920» «вах Б-ланцюг антитіла проти ТеПр-рецептора людини «а000х
Авр їтїТе Ів Меб Тих Сі Бех Рго Бек Беж Мец бек Аза бек Уві с1уУ ї 5 136 ІВ
Авр о дхо Уаї ТВкК о Т1е Тк Сув Ага Аза бек біп Авроїї2е бек Два Ту: їжа Аїа Ткр ве бів віп Був рко біУу Буш Аза БтЗ пув Бех бе Ге аз 40 35
Тут Тих Аза беж йдех Пец бій бек піу уаї Рко бек Гу Не Беж сту 5О 55 во
Бек б1іу Бе СТУ ТЬх Авр о Рпє Тв Пе) Тк їТ1е Бек Бех Бей бій с РБко 7 Та 805
Сів дво Ре діа ТБт Ту Тужх Суш Сій біп Тух Аєпоцен Тук Бко Рго а 0 95
ТЕ РБце сіу біп сіу ТВ о зув уаї бій ї1іє ув Аке ТЕ Уаї АЇїа Ата. 100 тав ьо
Рто Беї Уа! Рне І1їе Ре Рко Рес бек Авр бів бів Ппею Му бек 01У
ІІ5 1230 195
Твж діа Яех Уаї уаї був їв бе АБп ДвЮ бле тук рес Аку бій Дів 1350 135 180 ув уаї піп Тюкр пув уаї двр дя діз ей бій бек З1у Авя бек бів 145 ї5О ї55 їБО
Січ дек уаї Ту сі: біп Авр оЗехк губ АБО бек так тує бек опеб Беж
165 ЕТО 75
Бек тах рей Тих ре бек руш Аза двБЮ Тук бій Пув Нів Був Уаї Тук 180 185 19590
АзіаСув бій Уві Тв оБів біп бі цей бек бек Рко Уаї ТБ Був бек 195 ай 205 "Ріпе дп Ака біу сб1а Сув їй «війж 4 «ій ва5 «10» днЕ «б2їі3» Штучна послідовність «й «Вй3ї» Ган Б-ланцюга антитіла проти ТЯБДр-озцептора людини «АП» 4 часасссаса счасссачьс босассовбса сбосссасає ссусводача сачачесасс бо аксаєєсссЕс чозсуаосса ачасаєсаує гассаєссву ссбочсекса ссадвавесса 1259 чпоаозчааасссс ставотсссос світсастасс ссасссвосс сусааачічЯа уарсссарса ї18О вачессеацев зчсацеочаєс содчасачає сєссСастссса сесзссацеви сегавачесе зай чЧчазчавссве саавессаєста срассаасад каса сЄвв асссбтссчасє чсесдассаа 00 чоачассзаои содавяєсав асоовссаа добасаєсає сбабевєссає сессссоссв 360
ЕсвЧассацче азстувавос сссаассясс кесабсесоє чесвчусрчав баассеескає зо есссачазчаси сосзазвусаса зсоччвзаччо Часавсоасос Єссазссчоз саассосову 450
Чачачсосса садацсаєста сеусавучаєс апсовоссаса уссссачсач сасестцаса Ай сссчачсавач сачассасча чуааасасаза усогбасячссї дсуувачессво ссабеваччс во ссчачсссоус ссЯссасааа чачосесаас васедазчазс чесат вав «8105 5 «її» 1395 «ий ЛК «іі» штучна послідовнисть «вв» -233» Ген тТ50рР-рецептора людини-ЕЄ лЛюБиНИ «адО» Кк асчессроасус стасссасос сссчочцчасья ссчесастяс зассуасача счссоЯекає во ччачсаодсад авучачсаса засссачаєс асссаєскса асссадавнає сагасачоєа ї3о асассодаасо ссаусаваса сеосаоуаєсєс васссзасьс Ессасбасач асссавсоуєс 180 чассачУссє аєдассзусу сассваєсас скЕссссвод авучессасає Ебсацовеце вад сеЕсСсгазасяч сададсазуса асасчасаєсє скстассссс ссабсачаваа счудасосас зай сесеасеЕссса ссасаачесу ссоЗасачев Сбасєсзессча аасссвесте сссуаваосає зей сдецачавсеє сасЧчасаєса сцасасваєа асадсдаєсає чЧеЕЕссСавссЄє двессасада 420 часскоссотї асСсаочесса дсассучацс соссссуаса ссчачбддса дсссавасач 480 чаавасбассв ссавсчссбас сагазуавауцде Ссазасусся асаачсаева сбсесусгоаФ 5АО чкесвасчсча апостсасоча счасосасас дасессазаса сабассосава сзаствсекса вО0 часдасстасає чекоссвову асисаадаєе сзадасосеє чсапсвовцас ассзаєсесь во сбилазассаа асдссчсссва вассуазозсес азчасодаєс сосзаатниса саасаацдасе 7 сасасаєчес сассябасес азсассобова сесссодоада чассассаує сстсовесес тво сесссвааас ссаавудасас осссаєсаєс ссссадассс ссчвозесає асчсчечєя вай пссчаєчєсча зсосасовача сссбцатеасс аазессвасс доагастсеча соадочсоцдас Зп зтасаєваєо ссаауаєкнаа спессецчаЧчаз чаддсазсдса асвосасоба ссосасУуЧчЕе зво ачопроссіса ссИпссосзса ссаводдассоч сгуузаєзчаса зузазсасав чзсасавачео 1050 сссзасаавац сссісссвоас ссосассчач зааасоассє ссадацссаай ачочодсачесе 1080 счадаассас адуєцтасас сстассобса Есссаоачасу ачсбсассаа чаассадеєе 1140 вчсссцвсос чсссозссавз азосЕЕсває сссвассачаса сочесзсода чеоздадаЗе 1295 закучсаце судвузасєва ссасвачасс всусссссса бустачасес счасачекеє 280
ЕКессЕссвсЄ асаздсааусє сассуєуаас аазачсаооає дусзасвоадчу завсаксвес 1370 ксабосєссу сцабодсабоа ччегстосас адосасєсаса счозузачвоя ссбскосого 13850 гестосасдба звасоа 1395 «2105 6 -21їз 1437 кевїиз ДНК к«віЗх Штучна посСспідсвність «вух шо «ха3» Ген Т5Бр-рецептора людини-Ее мищі. «005 6 акчсссчедо сквсосауЯє дссчочассо стассоссує соаседасвав субосассах во садосачсчо асосостсаса сусачазаєс засада Садсачааче азсасачаєє 150 сачаєсасссї асттсаасс: асадассубуа сазчасчасає соазасуссаєт сааабаєсссс 50 аччассваасс Єдасссвсса стасачабсс засозсчасч зоасставча созчабсасасс 240 звассассссо Ессаадчавсоя ссасаєсскся дчосасстсс свуасосаса зсвусчачасє 300 часаєрсвсо актсевссає сводваєсозо асусвсессе сЕЕЕсаєссяс вачесувкся За акозсссаєс авассбдавасо сазбссосся аадсасуєна дассбссосе ссассаозає 420 з-сачечасцє бдасосусес гоасосявес сасазезаєс сесктекасуа часЕсадває аво сачачеоссЕ ссдасассуа чбдоусавуєсс азасвоуава абсассіудсава себсассакєв 545 пвначчсссдо абассозаза зак басвесв сесесадеса созчсчавоас сасусвасає 500 сгасасодос сауасасаса ссозачссдас сдуссзазву суасасассо дсезазачас во часаєссвю асческеакає вавуасасса асчссссосеа аассазвадесх чбссевазаєс 7230 чавззсазча гссасчачсо соЧчазассст асаабссавоуєс ссесчсіссасс стсчсавоакас "и сссодсочссза асскоассзчу гочціоссвсс дсасксвзкає ссссдсосва уасаввачає вад
Чесетсасоз сосок бесчассура асосасасод сезсачасоє дссесувацає 00 чассеєдасо Ессачаєсьс асоуссЕцьс аасвасуєай аацдбдсабає частсавачасе зво сачасссасо чачасцаєста савесссаст седчачавсса кчацсастов кссдасссава тро сассвазабЕ чсагсавоасує чавасававссє азчсасаваз Єувасваєай чзассЕвесе 1080 чоечоссагед азвцяавосавс асссвачеса зазчвакссу басчазсесс асачесусас 1150 чесстасово соссадчадца содааєчаєс аачазаєача сдасссесас акдсаєозва х2300 дсосуастсеса Бессгозазча сасрсасуєса чдаасодасса асаасадцаеаза аассетаасіо 1355 заствсадав асасадаусс сипсестучає сссчасочауа тсгассесає чесвобсссава 1320 ссчавнточ адавааазчаа сучас сва сузвавсачев асссасуєва кубадсесає 1380 чЧачасускос асааєсєсавоса Сассасаавач Бссскссадса саасссссоо чЧчазваєча 1437 каї0ж їз 1595 «йЖійз ДНК кхаї13У Штучна послідовна сть «20» «ей» Тен ТоиР-рецептора янанської макаки-Ео людини «400» 7 асшсососос ссасссвочЕ зссучсасся ссУусЕоссЯє дчусеуасаца сесосуєвох во
Чесвасаччва ааогссесв часссачаєс ассгаєсєсса асосабзавасє чакасвочку 150 асакузааба ссадесаста соссзазаує зассучачсе босастасав аебсадкоза Іво здасзачуєсь агдаєссацчеу сассабсває аєсстсовоз аасобсасає сесададесае 246 стсстачасу сачадсауса асасчасасєс сстосхассьсе ссаєсаччва соччавасасає Зо сесусевсса оссссассоу сбтоздавсве: сСаскассєча адсссадесо сссовадесва 360 чечазсЕссс сасачсаєса зоасусчзся асачестасає ассосовссї зесссасвач 329 счессЕсосгсЕ ассезчеЕсса чбассочвос сссісодаса созачсоачаса чсоссававесау 480 чЧаааасассї зсаавєуєсасєс сагадавчає скачасосст адаазчесовєва бостжессай вай
Чиссточесца вччессасача оддасоасубає дууссодчаса субассесуач счассучеса 500 чадоєоасЯє дссодсазау аччедчачаєє сосвасесує дсоссацачсо бсосасасеє БО сссавассса ачссчссоза зассуавоює зоцасосасс ссазаєтсссу Ссдасававсє 720 сасасасусєс сессуєасос адсасстсаа ссссєсодув чассабсває сресорсрвес 780 сесссазаас ссаваазчасає ссссавдаєс Ессецчасее сгзаччссас восчсЧечага Бад чеосасуєув уссасотаата сессоадуєс зазсесвасЕ адсасатода соусгочад зо тсасагаасЯ ссазоасава досасоцава садсвосаса зсадсасяса ссабасоаЧчео 9560 зчесдіессса сочсоссоса ссеасуаєсуд сідавсспаса вачазсасваа ствсавачео то
Сссавасвдад сосесссадчо ссссаєсодач ававосаєсо бсавацєсайа аскасачосо но суачаассає ацпдасосасає ссгосососа бессзадаса азссзвасосаа чуазссвзаиасо 13450 васссЧассу чссбаоссаа асассєстсає сссвчусчаса бсуссуєвда сссюдчачачес 1200 васузасаче сачачаасва єтасвачаєс ассссессесу бассчуасес суасччстес 1250 сЕсссестев асвосвавачсс сассугоцає зачеазвсвоЯе чесаспсасвує даавевсесеес 1325 ссасасссся Єсасусаєоз заоссссоасас адосассаса счсабавчад сссевососа І380
Есессозуєа вабса 1395 «й В «її» 8853 «їй ДЕК «йї3» Штучна послідовність «вах «аа» Ген мутованоко ТЕБЕ людини-кіда «400 й ассЕстатоє скасссасив чседовасто ссссчесвав зоуссуасада сасссусесе 6о
Еасазотеса сотвассаедча сСЕЕБазазач ассавачсая сстасстсяая сасгасвсься ї2га авачасстда срасавсасає Задсдодасс вавачсассо ачсссавсаа сассоєсюсє 189 сусачсаасс одссасаєсе сесбраскчав асосавовуєс савсосессав Єсссассуєє 240 часвасасУє сусссоєсваа адававБцссс досаєцдвааа ссвазчучєбсаєс ссвадекаксс зов ктошсасссву чеЕВЕссода засксачаєса вахсассассо адпсоваксова заачазчача зво азавассавац Ссасазссаз савасассбЯ давсзазчктцс сасаассаса воцчассабах 420 сассасстЕса ассчассосЕб ассуавасаа Седддаєтаса водчасозоса Єдасаваєда 480 гав 483 «відж 9 «їм дов «йїйх ДНК «213» Штучна послідовність «в2й» «паї» Тен мутованого ТБ яванської макаки-кіад «а00ж в аскзчачасач зсазсастссї зосаєцоадса сгоссусвсє сао сссазчу сеЕссасоває во сасчасссса стаассоасча сігісаценя асбавазчисач всбассгося бастасекее 120 азачасстсца ссасасаєсає пзасозЗасс аазачсассу ассссвасСаа сессесесос ВО сусвцсвасєс шессасаєту сстсассЧаа абссСсазчадес савесЕкова Ссосасоссо 246 сасвасосоє сусісоссаа доаваєцьсс досадавава сіаадоаскає ссксасьсте 00 почкасссат ссстасссяча васссачета вабоастасьс вучсааєсав узачавуаса з6о аавуссавац ссасавассва сазасчссва зазсааасяе сасваєтаєсє вазаскавуц 150 счссаскеса БозавосЕв ассзадасаа садсасстасс ассассаєса бЧдастасбавза 480 цасчаєсстасу асазаєча ав «пай» 10 хЕРїї» 116
Та» «ДНК «3» НОощо варієпия «4005 10 акрчасоце соапсоссесо дсоспчачес дссУусессе саосСсоззацо ссодчавечеє 5 гео Зусава чЧчаззассвує запаассауса сачасксача ссасссассє саасссачах 150 асспстуусачу сувасасоЧаз гуєссачевая гГассссвоаца сспаосьчЧчає сЕбессасрас ї8о аззасстсзася чсчасчаззс сгаєчассву сосассавос зосесеасоса чзоавассссас о асЕБсосуає усссоссада сусадаусач сдачасдвса ЕбеКебаєве скессаєсвоє зОой засзосасят ассссакбЕЕ сассусавує сосьгддчасая вебсастассює даваєссаче 360
Ссеосесуаачес асусосазчаєс сссчєссас саззасасаст гочасочеічас ссчсессвас 20 стссоссасо суЧчаєссссс ссассачасЕ садкассоча досессЕсда сассзчачсодя «о сачесссваас здузавазсас сросаасуєс ассабсачаву дсебсоачасос созуаааеоє 5ІЙ сассстссеї сезсауоус шааодекасу ддасстаєусає аксодессада сасасвсссв во аассчассозс саддачосоас асоассоосаз ауавосечадча Ессзодасус ссзбасачаа 66О асассаасяс сєсссвавсос аавастуєсс аавЕсваєсс сааєссссво ссводбесавсс ти сссссдчабач бабссссесс ссгЕсЕцЕсеЄ ссасодаває сакучачаЧче уавсвазеске 780 сесассссса ссасассача сссаваєсс асесссссосЯа счсссссгда сдасасассаа ай зтзчавствесс вучачеечає сасадаєвсс свуавсзбЯЯ сесассвеса савчаєоачеа 950 чсарасасачс васавачьоч ссссдаддау ссоссгодбсай бесачесоадс саасаєсдав 960 зссвзачЕсее ссадцасосї здзасссасач ассчасцчаза вачазЗзассбс ЄдоЧчачассе 1050 сгссаессво ссесассвасо ссоссзачаї чассасоасач гсасаассуч чес есасо вово сскассасча асуассусес стасасоадеся єЄЗсца 4116 «ех 11 «йлї» 1580 «вій» ДНК «13» НошЖо варів. «й0а» 11 ! ; асцдасавнсс гводіасває ЕсеЕсосаба ЧЕ бЕсесве Касттісвасеь сябЕбсвода во вдааасечЧеасе згаєсесвана сачачассса чзачаєовсасй аассосчаєдча стасссацсе 120 ссакчсстаста чссачссоча вусчаасойа ссосачсаєє сбассзчасстая каса ї83 часссачаєту ссвасаєтсас сзасссочаа сседазасає зсодузсссе сабодачаса 249 зачесоссіца вісссаопав астасавова абасасссоса гссчасасаав даваєсскова 300 сеуаєстодаа адассваєз: зкУусуссаава сссачазаза зуадсставс ссасваавааа ЗО асгазЗзасстаа ссзссасва: баавсссчає зсооссссез асесуачече счесгаєссоч 420 чааєсчадеса зедасЕккУуєЄ чУрчасавсе васасаєсає асбсусавав пайосаєоєа «во азавзссксав Сусасчабо? здсєбассує сацдчвазачу абуазаасав асочасяасає зай чечааєссає ссазсасава чссоасассс стосвочазвна засЕссавсс сдсвоасавсу 500 їакоазаєсса азчєбссчасс сабссссзає саставеесса зачассісссо зазсоавсоу 680 аусссваціє асстастксау часкссадчач ассааскаса чотсавуоуча часове 729 асссгтастаа ссассвусає базове сесСсововсЯ сустестачу сассовеусеє 786 сабчсассас Ядаававагу забєсавуєсть ассасаєдує ссачессссо сзвссасаву 840 аачаєксеєуо васаєссессЯ баасеаассв вупваввнаавсе гсазасорудау бесваєсеє 906 чазацчеессс сочЧассучусса часссасечаз зсочаєчаса сісавоассво еазасовасса 3680 чазучесвЕю бЄсшсвачасас зсескосссач сааскзувау засссцачай зчсазадасесе 1525 ччачудчаву босавачесс саассчосса єсбаапвчася базссассас єссачаваде това
Зо
ЕЕБоцавцаєт аббсаєсессе саєсзвзбасста аседучаава гсачбцсавяа Єуасуссосе 1149 акеесктсск сесесвнс сссасастс азоазачачва чсазоадаасча чессвасчсу Еш бассвучаєс єсстасстау ссссддузасс асавасачса садстдссссе Ессаєееессє 1250 стссваєссо даасосісас абссовассса зсбосрсаду зєсводсссає бсвтасевосс 1320 пічуччаєсва ассвзацаачв азсабсаєчьс ассаєсвсса сисссравоса авассачесоа 1380
Claims (14)
1. Антитіло до Т5І Р-рецептора людини або його антигензв'язувальний фрагмент, що вибране з наступного (1) або (2): (1) антитіла до Т5І Р-рецептора людини або його антигензв'язувального фрагмента, що містить варіабельну область важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 1-118 з 5ЕО ІЮ МО: 1, і варіабельну область легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 1-108 з БЕО ІО МО: 3, (2) антитіла до Т5І Р-рецептора людини або його антигензв'язувального фрагмента, в якому глутамінова кислота на М-кінці важкого ланцюга антитіла або його антигензв'язувального фрагмента (1) модифікована в піроглутамінову кислоту.
2. Антитіло до Т5І Р-рецептора людини за п. 1, вибране з наступних (1) або (2): (1) антитіла до Т5ІР-рецептора людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої в ЗЕО ІЮО МО: 1, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої в 5ЕО ІЮ МО: 3, (2) антитіла до Т5ІР-рецептора людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої в 5ЕО ІО МО: 1, в якій глутамінова кислота в позиції амінокислот 1 в ЗЕО ІЮ МО: 1 модифікована в піроглутамінову кислоту і/або видалений лізин з амінокислотним номером 448 в 5ЕО ІЮО МО: 1, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої в 5ЕО ІО МО: 3.
3. Антитіло до Т5І Р-рецептора людини за п. 2, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої в ЗЕО ІО МО: 1, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої в 5ЕО ІЮ МО: 3.
4. Антитіло до Т5І Р-рецептора людини за п. 2, що містить важкий ланцюг, який складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 1-447 з 5ЕО ІЮО МО: 1, і легкий ланцюг, який складається з амінокислотної послідовності, представленої в 5ЕО ІЮО МО: 3.
5. Експресійний вектор, що містить: Зо () полінуклеотид, що містить нуклеотидну послідовність, що кодує варіабельну область важкого ланцюга антитіла за п. 101), і (ії) полінуклеотид, що містить нуклеотидну послідовність, що кодує варіабельну область легкого ланцюга антитіла за п. 1(1).
6. Експресійний вектор, що містить: () полінуклеотид, що містить нуклеотидну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла за п. З, (ії) полінуклеотид, що містить нуклеотидну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла за п.
З.
7. Клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором, яка вибрана з групи, що складається з наступних пп. (а)-(Б): (а) клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором, що включає полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область важкого ланцюга антитіла до ТІ Р-рецептора людини за п. 1(1), і полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область легкого ланцюга цього антитіла за п. 1(1); (Б) клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором, що включає полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область важкого ланцюга антитіла до ТІ Р-рецептора людини за п. 1(1), і експресійним вектором, що включає полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує варіабельну область легкого ланцюга цього антитіла за п. 1(1).
8. Клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором, яка вибрана з групи, яка складається з наступних пп. (а)-(Б):
(а) клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором, що включає полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує важкий ланцюг антитіла до Т5Ї Р-рецептора людини за п. 3, і полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує легкий ланцюг цього антитіла за п. 3; (Б) клітина-хазяїн, трансформована експресійним вектором, що включає полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує важкий ланцюг антитіла до Т5Ї Р-рецептора людини за п. 3, і експресійним вектором, що включає полінуклеотид, який містить нуклеотидну послідовність, яка кодує легкий ланцюг цього антитіла за п. 3.
9. Спосіб отримання антитіла до ТЗІ Р-рецептора людини або його антигензв'язувального фрагмента, який включає культивування клітини-хазяїна за п. 7 для експресії антитіла до Т5І р- рецептора людини або його антигензв'язувального фрагмента.
10. Спосіб отримання антитіла до ТЗІ Р-рецептора людини, який включає культивування клітини-хазяїна за п. 8 для експресії антитіла до Т5І Р-рецептора людини.
11. Фармацевтична композиція, яка містить антитіло до Т5І Р-рецептора людини за п. З і/або антитіло до Т5І Р-рецептора людини за п. 4 і фармацевтично прийнятну допоміжну речовину.
12. Фармацевтична композиція за п. 11, яка є фармацевтичною композицією для профілактики або лікування астми.
13. Антитіло до Т5І Р-рецептора людини за п. З для застосування в профілактиці або лікуванні астми.
14. Застосування антитіла до Т5ІР-рецептора людини за п. 2 для виготовлення фармацевтичної композиції для профілактики або лікування астми. 20004 Ф а | . ЗНИЩ -1000. : г 9795-е інгібування День 7 носій Повністю людське Г7-27
Фіг. 1
Ж | Ї г 104 з | - ш п Нормальна Носій Повністю людське група 17-27 Розчин аскаридного антигену (100 мкг/мл)
Фіг. 2 т 153 і --: ПИ
8. 4.04 Б Р Кт ня 7 же Ж т Ба ! У Биці о5- Б ще ЕЕ КЗ ТЕ РА ТЕО ем Б в КЕ Стовоев А Б иа ШЕ ШО ВО В жа щ З ШИ С ! во - Я гнакаве : ЖЖ:
0.0. Я ие ее Я ВО НН М й і, ш- ! ж и нн СИ Е ЕВ х «о З ВЕ Антитіло до ТУ Р-рецептору людини (мкг) р-й є Ка зві
Фіг. 3
- І рла Ж | | А й | шк А БО ЕЕ БИ і. 5о- БЕ и і п ШЕ ЖИ МК дено, Ж г ! Га У ООН з ц з З и ди она я ВЕ 5 З ко сей ке І В в ж КЕ Антитіло до ТУ. Р-рецептору людини (мг/кг) я ся к ща
Фіг. 4
100000: : піні нах Ям шк «леж со шк ;. нина 100005 Я ке . І БО режи ш зоро- БЯОКиК « " Я я З пенндийх інн нені і- ши адмам юне |: пікивниннвіненнніне 1 МОЯ пненнженнннь нене п «айпи пеки ення - 1 о 3 БОМ фая ай : замамманменкн й. 1 55 ий овали мишиюжтиннн - 1 БО ори рн тої БЕН МН ОН 91 ОО ож 0 рен ОК скенвянини" ШИ пес а БО ий СОЯ лий. Ф з Кк Антитіло до ТЕГ. Р-рецептору людини (мг/кг)
Фіг. 5
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2013165676 | 2013-08-09 | ||
| PCT/JP2014/071008 WO2015020193A1 (ja) | 2013-08-09 | 2014-08-08 | 新規抗ヒトｔｓｌｐ受容体抗体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA119328C2 true UA119328C2 (uk) | 2019-06-10 |
Family
ID=52461517
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201602101A UA119328C2 (uk) | 2013-08-09 | 2014-08-08 | Антитіло до тslp-рецептора людини |
Country Status (29)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US9328171B2 (uk) |
| EP (1) | EP3031913B1 (uk) |
| JP (1) | JP6380394B2 (uk) |
| KR (1) | KR102260680B1 (uk) |
| AR (1) | AR097293A1 (uk) |
| AU (1) | AU2014303356B2 (uk) |
| BR (1) | BR112016002743B1 (uk) |
| CA (1) | CA2920484C (uk) |
| CY (1) | CY1121678T1 (uk) |
| DK (1) | DK3031913T3 (uk) |
| ES (1) | ES2730978T3 (uk) |
| HK (1) | HK1223123A1 (uk) |
| HR (1) | HRP20190752T1 (uk) |
| HU (1) | HUE043111T2 (uk) |
| IL (1) | IL243851B (uk) |
| LT (1) | LT3031913T (uk) |
| MX (1) | MX369208B (uk) |
| MY (1) | MY177098A (uk) |
| PH (1) | PH12016500237B1 (uk) |
| PL (1) | PL3031913T3 (uk) |
| PT (1) | PT3031913T (uk) |
| RS (1) | RS58696B1 (uk) |
| RU (1) | RU2689528C2 (uk) |
| SG (1) | SG11201600935SA (uk) |
| SI (1) | SI3031913T1 (uk) |
| TR (1) | TR201906969T4 (uk) |
| TW (1) | TWI635097B (uk) |
| UA (1) | UA119328C2 (uk) |
| WO (1) | WO2015020193A1 (uk) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SG11201805123XA (en) * | 2015-12-18 | 2018-07-30 | Astellas Pharma Inc | Pharmaceutical composition comprising anti-human tslp receptor antibody |
| WO2022010921A1 (en) | 2020-07-06 | 2022-01-13 | Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc | Antigen binding molecules targeting sars-cov-2 |
| KR20230058434A (ko) | 2020-08-26 | 2023-05-03 | 플래그쉽 파이어니어링 이노베이션스 브이아이, 엘엘씨 | SARS-CoV-2를 표적으로 하는 항원 결합 분자 |
| CN114853888B (zh) * | 2021-02-05 | 2023-11-03 | 上海洛启生物医药技术有限公司 | 抗tslp纳米抗体及其应用 |
| CN113069543B (zh) * | 2021-06-07 | 2021-08-06 | 迈威(上海)生物科技股份有限公司 | 包含抗胸腺基质淋巴细胞生成素的单克隆抗体的液体组合物 |
| WO2023028612A2 (en) * | 2021-08-27 | 2023-03-02 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Anti-tslpr (crlf2) antibodies |
| CN114028562B (zh) * | 2021-11-01 | 2022-05-24 | 江苏荃信生物医药股份有限公司 | 包含抗人胸腺基质淋巴细胞生成素(tslp)单克隆抗体的液体制剂 |
| CN117106084B (zh) * | 2021-12-02 | 2024-03-22 | 北京东方百泰生物科技股份有限公司 | 一种抗tslp的单克隆抗体、其抗原结合片段及其应用 |
| CN116217725B (zh) * | 2021-12-02 | 2023-09-22 | 北京东方百泰生物科技股份有限公司 | 一种抗tslp单克隆抗体的纯化方法 |
| WO2023215910A1 (en) | 2022-05-06 | 2023-11-09 | Generate Biomedicines, Inc. | Antigen binding molecules targeting sars-cov-2 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL162181A (en) | 1988-12-28 | 2006-04-10 | Pdl Biopharma Inc | A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same |
| DE69433422T2 (de) | 1993-03-11 | 2004-09-16 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Monoklonaler anti-hiv antikörper |
| MXPA02012747A (es) * | 2000-06-28 | 2003-09-25 | Amgen Inc | Moleculas del receptor de linfopoietina estromica timica y sus usos. |
| US6596541B2 (en) | 2000-10-31 | 2003-07-22 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of modifying eukaryotic cells |
| US20050249712A1 (en) * | 2004-03-23 | 2005-11-10 | The Government Of The Usa As Represented By The Secretary Of The Dept. Of Health & Human Services | Methods for use of TSLP and agonists and antagonists thereof |
| CN101370831B (zh) * | 2006-01-13 | 2013-06-19 | Irm责任有限公司 | 用于治疗过敏性疾病的针对胸腺基质淋巴细胞生成素受体的抗体 |
| US7718772B2 (en) * | 2006-12-14 | 2010-05-18 | Schering-Plough Animal Health Corporation | Canine thymic stromal lymphopoietin protein and uses thereof |
| EA201000006A1 (ru) | 2007-06-20 | 2010-10-29 | Айрм Ллк | Способы и композиции для лечения аллергических заболеваний |
| JP2011511638A (ja) * | 2008-02-07 | 2011-04-14 | シェーリング コーポレイション | 抗ｔｓｌｐｒ抗体の設計製作 |
| AR082163A1 (es) * | 2010-07-15 | 2012-11-14 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos especificamente ligantes del tslpr humano y metodos de utilizacion de los mismos |
| US20120020960A1 (en) * | 2010-07-26 | 2012-01-26 | Baylor Research Institute | Thymic Stromal Lymphopoietin (TSLP) and OX40 Ligand in Cancer |
| WO2013067051A1 (en) * | 2011-11-03 | 2013-05-10 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Biomarkers for tslp treatment |
-
2014
- 2014-08-08 JP JP2015530978A patent/JP6380394B2/ja active Active
- 2014-08-08 TR TR2019/06969T patent/TR201906969T4/tr unknown
- 2014-08-08 LT LTEP14833804.9T patent/LT3031913T/lt unknown
- 2014-08-08 RS RS20190580A patent/RS58696B1/sr unknown
- 2014-08-08 WO PCT/JP2014/071008 patent/WO2015020193A1/ja active Application Filing
- 2014-08-08 UA UAA201602101A patent/UA119328C2/uk unknown
- 2014-08-08 EP EP14833804.9A patent/EP3031913B1/en active Active
- 2014-08-08 PL PL14833804T patent/PL3031913T3/pl unknown
- 2014-08-08 HU HUE14833804A patent/HUE043111T2/hu unknown
- 2014-08-08 MX MX2016001796A patent/MX369208B/es active IP Right Grant
- 2014-08-08 ES ES14833804T patent/ES2730978T3/es active Active
- 2014-08-08 PT PT14833804T patent/PT3031913T/pt unknown
- 2014-08-08 SI SI201431208T patent/SI3031913T1/sl unknown
- 2014-08-08 CA CA2920484A patent/CA2920484C/en active Active
- 2014-08-08 BR BR112016002743-4A patent/BR112016002743B1/pt active IP Right Grant
- 2014-08-08 AU AU2014303356A patent/AU2014303356B2/en active Active
- 2014-08-08 RU RU2016107814A patent/RU2689528C2/ru active
- 2014-08-08 KR KR1020167005884A patent/KR102260680B1/ko active IP Right Grant
- 2014-08-08 MY MYPI2016700421A patent/MY177098A/en unknown
- 2014-08-08 SG SG11201600935SA patent/SG11201600935SA/en unknown
- 2014-08-08 AR ARP140102993A patent/AR097293A1/es active IP Right Grant
- 2014-08-08 TW TW103127264A patent/TWI635097B/zh active
- 2014-08-08 DK DK14833804.9T patent/DK3031913T3/da active
-
2015
- 2015-10-29 US US14/927,007 patent/US9328171B2/en active Active
-
2016
- 2016-01-28 IL IL24385116A patent/IL243851B/en active IP Right Grant
- 2016-02-03 PH PH12016500237A patent/PH12016500237B1/en unknown
- 2016-04-04 US US15/090,051 patent/US9908941B2/en active Active
- 2016-09-23 HK HK16111216.7A patent/HK1223123A1/zh unknown
-
2019
- 2019-04-23 HR HRP20190752TT patent/HRP20190752T1/hr unknown
- 2019-05-08 CY CY20191100496T patent/CY1121678T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA119328C2 (uk) | Антитіло до тslp-рецептора людини | |
| CN111171150B (zh) | 抗人tslp抗体及其用途 | |
| CN107709355B (zh) | 单链cd40受体激动剂蛋白 | |
| JP2004533248A (ja) | 腫瘍特異的組換え抗体およびその使用 | |
| US20120253017A1 (en) | Stem cell targeting | |
| US20230295312A1 (en) | Antibody against human il-4ra and use thereof | |
| CN115109154A (zh) | 一种靶向cldn18.2的抗体或其抗原结合片段及其应用 | |
| EP3109320B1 (en) | New anti-human pai-1 antibody | |
| EP2695897B1 (en) | Novel anti-human il-23 receptor antibody | |
| WO2019096219A1 (zh) | 一种人源化抗il-13抗体及其制备方法和应用 | |
| EP2796550B1 (en) | Novel anti-human ctgf antibody | |
| JP5440179B2 (ja) | 改良型ヒト化抗ヒトα９インテグリン抗体 | |
| CN107840885B (zh) | Gm-csf抗体及其用途 | |
| US9371391B2 (en) | Anti-human IL-23 receptor antibody and encoding polynucleotides | |
| WO2020239014A1 (zh) | 抗cgrp抗体及其应用 | |
| WO2011004847A1 (ja) | 新規ヒト化抗ヒトα９インテグリン抗体 | |
| WO2024002145A1 (zh) | 结合il-17a和il-17f的抗体分子及其应用 | |
| CN114907480B (zh) | 无钩状效应的抗人cd73单克隆抗体 | |
| WO2023208104A1 (zh) | 抗人il-4ra的抗体及其用途 | |
| AU2022409610A1 (en) | Caninized antibodies to canine interleukin-31 receptor alpha 1 |