KR102193453B1 - 국소 항균 피부과용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 피부과에서 사용될 수 있는 조성물에 관한 것이다. 인체 및 수의학 의약에서 사용하기 위한 이러한 국소 항균 피부과 조성물은 적어도 하나의 양이온성 항균 펩타이드와 중간 분자량의 하이알루론산 또는 그 염을 조합하여 포함한다.
이는 피부, 외피 또는 점막 미생물 감염의 치료에 적용된다.

Description

국소 항균 피부과용 조성물{TOPICAL ANTIMICROBIAL DERMATOLOGICAL COMPOSITION}

본 발명은 치료에 유용하고 항균 특성을 가지는 신규한 조성물, 특히 인체 및 수의과 의약, 특히 세균 감염의 치료를 위해 피부학 및 안과에서 유용한 히알루론산 및 양이온성 항균 펩타이드계 신규한 조성물에 관한 것이다.

피부는 해부학적 부위 및 신체와 이의 환경 사이에서의 교환 구역이며, 이의 효능은 우수한 항상성 평형의 유지에 영향을 미친다. 피부 자체는 표면 층으로부터 출발하여, 표피, 가장 깊은 층까지, 피부 및 진피의 수개의 통합된 층을 포함하는 기관이며, 여기서 이들 층 각각은 전체적으로 환경과 반응하여 이에 적응하도록 하는 기능을 충족시킨다.

대부분 각질 세포, 멜라닌 세포 및 랑게르한스 세포(Langerhans cell)로 구성된 표피는, 두께가 신체의 상이한 부분에 따라 변하며, 외부 환경에 대해 신체를 보호하는 피부의 외부 층을 구성한다. 피부는 신경 섬유 및 혈관이 가로지르는 가장 두꺼운 층이며, 콜라겐, 엘라스틴, 프로테오글리칸 및 글리코사미노글리칸으로 주로 구성되고, 피부 섬유 모세포에 의해 주로 합성된다. 콜라겐 섬유는 피부의 기계적 강도와 감촉(texture)을 제공하며, 엘라스틴은 이의 탄성에 관여하고, 글리코사미노글리칸 및 프로테오글리칸은 피부의 구조 및 습윤화에 중요한 역할을 한다. 피부의 가장 깊은 층은 지질을 생성하고 충격에 대해 근육, 뼈 및 내부 기관을 보호하는 지방 층을 형성하는 지방세포를 함유하는 진피를 형성한다.

습도의 증가 또는 각종 기관의 자극 또는 피부 상처의 존재와 같은, 표피의 구조에 있어서의 변화, 또는 피부병의 발달은 병원성 세균에 의해 피부의 콜로니화(colonization) 및 감염을 촉진한다. 수득되는 세균 증식은 이를 지연시키거나 차단함으로써, 및 초기 상처로부터 감염의 확산을 촉진함으로써, 반흔형성 조건을 개질시키는 효과를 갖는다.

따라서, 피부는 병원성 세균에 의한 일정한 공격하에 있으나, 이의 pH, 이의 비교적 낮은 수분 함량 및, 항세균 작용을 지닌 항균 펩타이드의 존재를 고려하여, 표피의 각질화된 층은 이들 병원성 세균에 제1 라인의 항균 방어로서 작용한다.

대부분의 세균 콜로니는 미생물 생존을 위한 막 구조물인, 생물막(biofilm)이 되어, 항균 방어 공정이 효율적으로 작용하는 것을 방지하는 염증을 생성시켜 성장 및 반흔 형성 인자를 전환시킨다. 항생물질의 매우 광범위하고, 때때로 과도한 사용을 고려할 때, 세균은 항생제에 대한 내성을 발달시켜 왔으며 이는 이들의 항균 효과를 제한하고 심지어 무력화한다. 생물막 세균은 대부분의 항생제 및 소독제에 대해 내성이므로, 병원성 미생물을 효율적으로 박멸하지만 피부 항상성을 가능한 한 많이 고려하여 사람 및 이의 환경에 유해한, 내성 균주의 발달을 촉진시키지 않는 조성물을 개발하는 것이 필수적이다.

양이온성 항균 펩타이드는 양이온성 펩타이드와 그람-음성 세균의 막의 외부 구조에서 발견된 음으로 하전된 인지질 사이에 정전기적 결합에 의해 세균의 막에 대하여 효과를 가지는 반면, 그람-양성 세균의 경우에, 당해 결합은 펩타이드와 세균의 혈장 막 주변의 펩티도글리칸의 성분 사이에서 일어난다. 항균 펩타이드의 양이온성 특성은 세균의 음이온성 막에 대한 이들의 친화성을 설명하며, 결합은 전하가 클수록 비례적으로 더 용이해진다. 결합 후, 당해 펩타이드는 막 투과성을 개질시켜 삼투압 및 이후 세균의 사멸을 유발하는 공극(pore)을 형성한다.

따라서, 항균 펩타이드, 특히 양이온성 펩타이드는 이를 세균 감염 및 염증에 대해 보호함으로써 피부 상에서 작용한다.

방어는 비-특이적이거나, 고유의 면역성에 포함된 천연의 항균 펩타이드의 계열을 구성한다. 이들은 분자내 이황화물 브릿지(disulfide bridge)를 포함하는 36 내지 42개의 아미노산의 쇄로 이루어진 작은 양이온성 항균 펩타이드이다. 인체에서, 이들은 매우 효율적인 항세균 및 항진균 활성의 광범위한 스펙트럼을 가지며, 2개의 그룹, 즉 α-디펜신 및 β-디펜신으로 나누어진다. 후자는 피부의 상피 및 눈물 및 볼 점막을 포함하는 모든 상피 상 및 다수의 기관 내에 존재하며, 감염에 대한 반응시 중요한 역할을 한다. β-디펜신은 특이적인 수용체, 톨 유사 수용체(Toll Like Receptor: TLR)의 활성화 후 방출된다.

연구들에 의하여 공생하는 세균 식물 및 병원성 식물이 상이한 β-디펜신 유도 경로를 사용함이 입증되었다. 따라서, 피부는 세균을 차별화하여 박멸하기 위한 분자 수단을 갖는다.

"톨 유사 수용체"(TLR)는 병원성 미생물의 인식 및 선천적인 면역성의 활성화에 있어서 기본적인 역할을 갖는 TLR 유전자 계열에 의해 발현된 막 수용체이다. 이들은 효율적인 면역성에 필수적인 사이토킨의 생산을 조절한다. TLR4 및 TLR2는 그람-음성 세균 상에 존재하는 지다당류(LPS)의 인식 동안 활성이다. LPS는 전-염증성 세균 내독소이다. TLR2는 그람-양성 세균의 펩티도글리칸을 특히 인식하며 TLR4는 그람-음성 세균의 LPS를 인식한다. 피부에서, 단백질 TLR2 및 TLR4는 각질세포 상에서 발현되고 TLR2는 피지선 상에서 발현된다.

디펜신은 즉, 유기체의 방어 메커니즘을 개시할 수 있는 분자의 유출자의 특수한 역할을 담당한다. 따라서, 피부에 천연적으로 존재하여, 이들은 약화된 피부의 보호를 보강시키도록 자극받는다. 흔히 적대적인 환경에서, 건전하고 건강한 피부의 질 및 상태를 유지하기 위하여 생물학적 기능을 보조하는 것이 중요하다. 유출자의 개념은 피부 속에 존재하는 생물학적 경로를 자극하여 외부 공격에 대해 보다 잘 반응하도록 함을 포함한다.

인체 β-디펜신(HBD-3)의 항균 특성은 특허 출원 WO　01/92309에 기술되어 있다.

하이알루론산은 글루코시드 결합을 통해 연결된 D-글루쿠론산 및 N-아세틸글루코사민 단위를 포함하는 천연의 이당류-계 중합체이다. 이의 특성은 이의 분자량에 따라 매우 가변적이다. 1000kDa 이상의 고 분자량을 지닌 하이알루론산은 이들이 구성하고 있는 친수성 탄수화물 네트워크를 사용하여 피부의 습윤화를 촉진하는데 필수적으로 사용된다. 약 50　kDa 미만의 저 분자량의 하이알루론산은 각질층 장벽을 가로지를 수 있으며 피부 속에서 하이알루론산의 신생합성(neosynthesis)에 관여하는 CD44 수용체를 자극할 수 있다.

콜라겐과 같은 하아알루론산은 피부의 세포외 매트릭스의 주요 구성성분 중 하나이며 이는 세포 성장 및 습윤화의 유지에 있어서 중요한 역할을 한다. 피부 노화 과정 중, 피부 내 이의 농도에 있어서의 감소가 관찰된다. 하이알루론산은 특히 습윤화를 촉진하고 반흔 형성 및 피부의 천연 방어를 자극하기 위한 하이알루론산나트륨의 형태로서 화장품 및 피부과 조성물에서 흔히 사용된다. 이는 또한 주름을 채우기 위한 성형 수술에서, 관절증을 박멸하기 위한 의학적 치료에서, 및 안과에서 사용된다. 효소 분해에 대해 우수한 내성을 나타낼 수 있으며, 특히 화장 조성물에서 사용될 수 있는, 다양한 교차결합되거나 교차결합되지 않은 하이알루론산 유도체가, 예를 들어 특허 출원 WO　2011/080450에 기술되어 있다. 다양한 형태의 하이알루론산이 잘 공지되어 있으며 시판된다.

특허 출원 WO　2009/073437에서와 같이, 하이알루론산 또는 유도체를 콘드로이틴 설페이트와 조합하거나, 특허 FR　2,894,827에서와 같이 하이알루론산 또는 유도체를 레티노이드 및 올리고사카라이드와 조합하는 것이 제안되어 왔다. 하이알루론산의 중금속 염은 또한 특허 출원 WO　87/05517에 기술된 바와 같이, 항균 조성물에서 제안되어 왔다. 특허 US 6,180,601는 펩타이드 또는 단백질, 예를 들면, 성장 호르몬을 혼입시키는 매트릭스를 형성하는, 저 분자량, 즉 50 내지 200kDa의 하이알루론산을 사용하는 약제학적 조성물을 기술하고 있다. 특허 출원 WO　2006/130974는 한편 하이알루론산에 결합할 수 있고, 다른 한편 하이알루론산을 함유하는 세균 캅셀에 결합할 수 있으며 지질의 존재하에 사용되어 리포좀을 형성할 수 있는, 바람직하게는 15 내지 40개의 아미노산을 함유하는 펩타이드에 관한 것이다. 락토페린 및 하이알루론산으로부터 기원한 펩타이드를 포함하는 약제학적 조성물은 특허 출원 WO　2010/081800에 기술되어 있다.

본 출원인에 의해 수행된 연구는, 양이온성 항균 펩타이드를 중간 분자량의 하이알루론산과 조합시킴으로써, 국소 소독제 및 항생제의 것과 동일한, 효율적인 항균 활성을 수득하는 것이 가능하며, 양이온성 펩타이드의 항균 활성은 β-디펜신의 생산을 자극하는 하이알루론산과의 조합에 의해 강력해짐을 입증하였다. 용어 "항균 활성"은 항세균 및/또는 항바이러스 및/또는 항진균 활성을 의미한다.

본 발명의 목적은, 피부 미생물 감염을 효율적으로 치료하고, 화학적 소독제 또는 항생물질에 대한 재손실없이 피부의 천연의 방어를 강화하는 것을 가능하게 하는 항균 특성을 가지는 신규한 국소 조성물을 제안하는 것이다.

따라서, 본 발명의 대상은, 적어도 하나의 양이온성 항균 펩타이드 및 중간 분자량의 하이알루론산 또는 이의 염을 조합하여 포함하는 피부과 조성물이다.

본 발명의 대상은 또한, 지질에 커플링된 적어도 하나의 양이온성 항균 펩타이드, 및 분자량이 100kDa 내지 800kDa인 하이알루론산, 또는 이의 염을 조합하여 포함하는 항균성 국소 피부과 조성물이다.

마지막으로, 본 발명의 대상은, 지질에 커플링된 적어도 하나의 양이온성 항균 펩타이드, 및 중간 분자량의 하이알루론산 또는 이의 염을 조합하여 포함하는, 피부, 외피 또는 점막 미생물 감염 치료시 사용하기 위한 조성물이다.

이러한 조성물은 항균 특성으로 인하여 피부 상처를 치료하기 위한 인체 피부과에서 유용하다.

이는 또한, 특히 만성의 심한 상처, 모낭염, 피부과 염증성 질병, 안건염, 마이봄선염(meibomitis) 및 결막염 과감염(overinfection)과 관련된 감염을 치료하기 위한 피부과 및 안과에서 유용하다.

본 발명에 따르면, 양이온성 항균 펩타이드는 바람직하게는 50개 미만의 아미노산, 더 바람직하게는 3 내지 30개의 아미노산을 포함하고, 그람-양성 및 그람-음성 세균에 대해 광범위한 항균 스펙트럼을 갖는 펩타이드이다.

예를 들면, 나선 구조를 갖는 선형 펩타이드, 하나 이상의 이황화물 브릿지(difulfide bridge)를 포함하는 펩타이드 및 특정 아미노산이 풍부한 선형 펩타이드로부터 선택된 양이온성 항균 펩타이드의 사용으로 이루어질 수 있다.

50개 미만 및 바람직하게는 30개 미만의 아미노산을 포함하는 본 발명의 양이온성 항균 펩타이드는, 예를 들어 마가이닌, 프로테그린, 인돌리키딘 및 히스타틴의 유도체로부터 선택될 수 있다. 또한 인돌리키딘 유사체, 이세가난 하이드로클로라이드, 합성 프로테그린, 및 펙시가난 아세테이트, 마가이닌 유사체인, 오미가난 펩타하이드로클로라이드와 같은 합성의 양이온성 펩타이드의 사용이 이루어질 수 있다. 이들 펩타이드는, 지질과, 및 바람직하게는 팔미트산과 같은 지방산과의 공유 결합에 의해 커플링된다. 특히, 이러한 공유 결합은 리포솜성(liposomial)이 아니다. 이황화물 브릿지를 포함하는 팔미트산에 커플링된 헥사펩타이드인 쉴드 백 펩타이드(Shiel Bact Peptide)(제조원: Infinitec) 또는 올리고펩타이드-10(제조원: Grant Industries)과 같은 상업적으로 이용가능한 펩타이드가 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물의 항균 활성은 항균 내독소를 중화시켜 톨 유사 수용체 상에서의 요구도를 최소화시키고, β-디펜신의 작용을 모사하여 신속한 항-감염성 효과를 제공하며, 염증성 반응을 조절하는 것으로 이루어진 3중 작용을 입증하는, 후에 나타낸 바와 같은 시험관내 또는 생체외 연구를 통해 입증되었다.

항균 펩타이드는 바람직하게는 양친매성일 수 있다. 이러한 양친매성 특성은 양이온성 펩타이드를, 지질, 및 특히, 바람직하게는 탄소수가 6 내지 22인, 선형 또는 측쇄의, 포화되거나 불포화된 지방산, 예를 들면, 올레산, 리놀레산, 라우르산, 사피엔산, 스테아르산 또는 팔미트산과 커플링시켜 강화시킨다. 지방산과 펩타이드의 커플링은 바람직하게는 펩타이드의 구성 아미노산 중의 적어도 하나와의 공유 결합을 통해 일어난다. 지방산과 펩타이드의 커플링은 펩타이드의 구성 성분 아미노산 중의 적어도 하나와의 공유 결합을 통해 일어난다. 공유 결합은 예를 들면 펩타이드의 N-말단 끝 상의 아미드 결합일 수 있다. 실행된 연구들은, 이렇게 강화된 양 친매성 특성이 세균의 표면에 대한 양이온성 펩타이드의 결합을 촉진시켜 다음의 효과를 가짐을 보여준다:

- 세균 막의 외부 층의 구조적 파괴;

- 막 계면에서 미셀(micelle) 형태의 지방산의 축적;

- 이온 채널의 생성에 의한 당해 이중 막의 천공.

당해 삼중 작용의 결과는 이의 막의 투과능의 손실 및 세포질내 음이온성 표적 상의 양이온성 펩타이드의 작용과 관련된 세균 분해이다.

또한, 본 발명의 양이온성 항균 펩타이드는:

- 그람-음성 및 그람-양성 세균 및 사상균, 바이러스 및 기생충 감염을 망라하는 활성의 광범위한 스펙트럼,

- 세균 내에서 지방산에 의해 공격된 다수의 표적과 관련된 고속 작용,

- 통상의 항생제로 관찰된 것과 비교하여 매우 낮은 내성 발생 위험.

본 연구는 또한, 본 발명에 사용된 항세균 양이온성 펩타이드가, 이들이 생산하는 세균(그람-음성 또는 그람-양성)에 따라, 유형에 상관없이, 세균 내독소에 대한 숙주 세포의 반응을 중화시킬 수 있음을 입증하기 위해 수행되었다. 따라서, 이는 염증성 캐스케이드(cascade) 및 수득되는 사이토킨 폭풍(cytokine storm)(IL-6, IL-1b, IL-1a)를 약화시키는, TLR의 활성 및 TNF-α의 생산을 제한함으로써 선천적 면역 반응을 조절한다.

이는 또한 단핵구 및 다핵구 호중구에서 화학주성 작용에 의해, 단핵구에 의한 히스타민의 방출에 의해, 및 조직 파괴를 제한하고 조직 복구를 자극하는 프로테아제를 억제함에 의해 선천적 면역성과 관련한 다른 특성을 갖는다.

수행된 연구는, 세균 공격의 존재 하에서 이러한 선천적 면역 방어 메커니즘이 바람직하게는 아미노산에 연결된 양이온성 항균 펩타이드를 중간 분자량의 하이알루론산과 조합함에 의해 최적화될 수 있음을 입증하였다. 미생물에서의 즉시 작용은, 이들이 분비하는 내독소의 중화에 의해 보충된다.

그 결과, 전-염증성 사이토킨의 방출은 감소되고 하이알루론산의 고유 작용은 이후에 톨-유사 수용체에 대한 가속화된 결합 및 β-디펜신의 증가된 분비에 의해 완전히 발현될 수 있으므로써 미생물에 대해 제2의 방어 라인을 생성한다. 이와 동시에, 복구 메커니즘은 피부의 장벽 효과(barrier effect)를 신속하게 복구하도록 자극받는다.

본 명세서에서, 용어 "하이알루론산"은 유리 형태 또는 이의 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염의 형태, 예를 들면, 중간 분자량, 즉, 바람직하게는 100 내지 800kDa 및 더 바람직하게는 200 내지 600kDa의 나트륨, 칼륨, 칼슘 또는 마그네슘 하이알루로네이트를 의미한다.

본 발명에서 사용될 수 있는 하이알루론산은 이들의 의도된 용도에 적합한 다양한 형태로 상업적으로 이용가능하다. 이는 좀 맨드라미와 같은 동물 조직으로부터의 추출에 의해, 또는 세균 발효에 의해, 또는 달리는 식물 물질, 예를 들면, 밀로부터 생물공학 공정을 통해 산업적으로 대량 생산될 수 있다.

분자량이 300kDa에 근접한 상표명 PrimalHyal 300(제조원: Soliance) 또는 분자량이 450kDa의 범위인 상표명 PrimalHyal 450 하에 상업적으로 이용가능한 제품과 같이, 분자량이 200 내지 600kDa인, 수소화된 하이알루론산 또는 하이알루론산의 나트륨 염의 사용이 이루어질 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 유효량의 각각의 상기 활성제, 예를 들면, 조성물의 총 중량에 대하여, 0.05중량% 내지 2중량%, 및 0.001중량% 내지 1중량%의 양이온성 항균 펩타이드를 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 또한 하이알루론산 및 항균 펩타이드의 조합의 활성을 유리하게 보강하거나 보충하고, 혼용성인, 즉 서로 반응하는 경향이 없거나 이들 각각의 효과를 차폐하거나 제한하지 않는 하나 이상의 추가의 활성제를 포함할 수 있다.

예를 들면, 이들은, 하이알루론산과 조합함으로써, 각질세포 성장 인자의 내인성 생산을 촉진하는 보호성 교차결합된 네트워크 효과를 가지고, 섬유모세포 활성을 유도하며, 콜라겐 생산을 증가시키고 섬유모세포 및 근섬유아세포의 분화를 가속화시킴으로써, 키토산, 또는 키틴을 함유할 수 있다. 이들은 또한 스핑가민 및 피토스핑고신과 같은, 스핑고이드 염기를 함유할 수 있으며, 이는 펩타이드의 항세균 효과를 최적화하고 이의 소염 효과를 보강시킨다.

다양한 제2의 활성제가 유리하게 조성물에 가해질 수 있으며, 예를 들면, 반흔 형성제, 소염제, 항-감염제 및, 비타민 A 또는 E와 같은 비타민으로부터 선택될 수 있다. 반흔 형성제는 예를 들면, 올리고갈락토만난 속에 풍부한 로커스트 콩(locust bean) 추출물 또는 아연 염일 수 있다. 소염제는 세포 부착을 억제하고 염증 반응을 제한하는 Rhamnosoft^® 또는 Teflose^®(제조원: Solabia)와 같은 다당류, 또는 류코트리엔 합성의 효소적 억제를 통해 작용하는 보스웰리아 세라타(Boswellia serrata)(Soothex^®)의 추출물일 수 있다. 추가의 항-감염제는 실란올 및 메틸 카프로일 타이로시네이트(Defensamide^®)와 같은 항균 펩타이드 형성 활성인자로부터 선택될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 국소 적용, 특히 외부 국소 적용에 일반적인 생약 형태일 수 있다. 이들은 예를 들면, 수성 또는 수성-알코올성 액제, 미셀 액제(micellar solution), 분무용 액제, 샴푸제, 분산제, 혈청, 와이프(wipe), 패취(patch), 메쉬(mesh) 또는 조절된 방출의 드레싱(dressing), 겔제(수성, 무수성 또는 친지성), 올레오겔(지질 겔), 연고제, 현탁제, 이온성 또는 비이온성 소낭 분산제, 및 액체 또는 반-액체(예를 들면, 우유), 고체 또는 반-고체 유제의 형태일 수 있다. 유제는 수중유(oil-in-water)(O/W) 또는 유중수(water-in-oil)(W/O) 유형, 예를 들면, 겔제 또는 크림제일 수 있다.

본 발명에 따른 조성물의 제조에 사용될 수 있는 부형제 및 좌제는 피부과 용도를 위한 제제 속에서 일반적으로 사용된 것들이며, 선택된 투여형의 기능으로서 선택된다. 언급될 수 있는 예는 유화제, 증점제, 겔화제, 연화제, 방부제, 가용화제, 현탁제, 및 또한 세척 기재 및 향료를 포함한다.

유화제는 예를 들면, 고 분자량 카복시비닐 중합체, Polysorbate 20^® 또는 Tween 60^®과 같은 폴리소르베이트, 소르비탄 에스테르 및 보다 특히 소르비탄 스테아레이트, 팔미테이트 또는, Arlacel^®과 같은 라우레이트로부터 선택될 수 있다. 또한 사용될 수 있는 유화제는 스테아르산 또는 팔미트산 유도체, 예를 들면 폴리에틸렌 글리콜 스테아레이트, 글리세릴 스테아레이트, PEG 100 stearate^®(예를 들면, Arlacel 165^®), 스테아레쓰 또는 세테아레쓰, 스테아릴, 카프릴릴 또는 세테아릴 알코올과 같은 지방 알코올, 예를 들면, Montanov 68^®, 또는 유화가능한 실리콘을 포함한다.

겔화제 및 증점제는 조성물내로 혼입되어 이의 유동성을 개선시킨다. 이들은 예를 들면 카르보폴 유형의 폴리아크릴아미드, Aculyn^®와 같은 아크릴레이트/아크릴산 공중합체, Carbopol Ultrez^®와 같은 교차결합된 아크릴레이트, 하이드록시프로필 셀룰로즈와 같은 셀룰로즈 유도체, 또는 크산탄 검 및 검 트라가칸트와 같은 천연 검으로부터 선택될 수 있다.

조성물에서 사용된 습윤화제 및 연화제는 예를 들면, 프로필렌 글리콜, 글리세롤, 부틸렌 글리콜 및 시어 버터(shea butter), 및 또한 지방 알코올로부터 선택될 수 있다. 적합한 현탁제는 예를 들면, 벤토나이트 또는 스멕타이트와 같은 점토이다.

코스모페린과 같이, 피부내로 침투를 촉진시키는 제제를 또한 유리하게 가할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 선택된 투여 형태, 항균 펩타이드와 혼합되는, 하이알루론산, 또는 이의 염의 바람직한 양, 및 임의로 생리학적으로 허용되는 매질 중의 키틴 또는 키토산, 및 지지체 및 부형제의 기능으로서, 일반적인 기술을 통해 제조된다.

본 발명의 목적을 위해, 용어 "생리학적으로 허용되는"은 사용된 활성 원리와 관련하여 중성이고, 독성 효과가 없으며 피부에 유해한 부작용을 유발하지 않는, 인체 의약에서 피부과 조성물에 일반적으로 사용된 유형의 지지체 및 부형제를 의미한다.

예를 들면, 크림제의 경우, 공정은 지방 상을 수성 상 속에 분산시켜 수중유 유제를 수득함으로써 수행할 수 있거나, 또는, 역으로, 유중 수 유제를 제조할 수 있으며, 활성 원리는 하나 또는 다른 상이다.

예를 들면, 크림제 형태의 본 발명의 조성물은, 치료가 요구되는 피부의 부위에 1일당 2 내지 3회, 불편함의 중증도에 따라 수일 내지 4주의 범위일 수 있는 기간 동안 바람직하게 적용된다.

다음의 실시예는 본 발명의 영역을 제한하지 않고 이를 보다 상세히 나열한다. 다음의 조성물 실시예 모두에서, 부(parts)는 달리 언급하지 않는 한, 중량 기준으로 표시된다.

실시예 1

실온에서 성분들을 하기 나타낸 순서로 혼합하여 수성 겔이 제조된다.

탈염수 78.60

카보폴 울트레즈 20 0.80

수산화나트륨(32% 수용액) 0.50

글리세롤 2.00

Shield Bact Peptide^®(0.1% 용액) 5.00

탈염수 10.00

하이알루론산(PrimalHyal 450 ^® ) 0.10

탈염수 2.00

펜틸렌 글리콜 1.00

이렇게 구성된 수성 겔을 치료된 불편함의 중증도에 따라 수일의 연속일 동안 전형적으로 1일에 2 내지 3회 사용할 수 있다.

실시예 2

하기 조성의 로션제가 표준 기술을 통해 제조된다.

탈염수 82.65

카보폴 울트레즈 20 0.45

수산화나트륨(32% 수용액) 0.30

탈염수 7.00

하이알루론산(PrimalHyal 450 ^® ) 0.10

글리세롤 2.00

Teflose ^® (제조원: Solabia) 2.00

PEG-7 올리브 오일 에스테르 2.00

폴리소르베이트 20 0.50

Shield Bact Peptide ^® (0.1% 용액) 3.00

당해 로션제를 안건염과 같은 안과 불편함의 치료를 위해 수일 동안 1일에 1회 내지 2회 사용할 수 있다.

실시예 3

하기 나타낸 성분을 함유하는 상들, 상 A 및 상 B를 가온(65 내지 70℃)하면서 완전 혼합한 후, 상 C를 50℃에서 조심스럽게 혼합하면서 가한 후 상 D를 가하여 완전히 혼합함으로써 통상의 기술을 통하여, 항균 크림제가 제조된다.

상 A

비이온성 유화제(Montanov 68) 4.00

미리스틸 알코올 2.00

스테아릴 알코올 0.50

Cetiol RLF^® 3.00

글리세릴 스테아레이트 3.00

올레익 해바라기 오일 4.00

상 B

탈염수 67.90

Carbopol Ultrez 21^® 0.45

프로판디올 2.00

상 C

글리세롤 2.00

Shield Bact Peptide ^® (0.1% 용액) 6.00

상 D

수산화나트륨(32% 수용액) 0.05

탈염수 5.00

하이알루론산(PrimalHyal 300 ^® ) 0.10

당해 조성물의 pH를 32% 수산화나트륨을 첨가하여 6.5로 조절한다.

당해 크림제는 치료될 피부의 부위에 주치의에 의해 결정되고, 치료된 불편함의 특성 및 중증도에 따라 1 내지 3주의 범위일 수 있는 기간 동안 1일에 1회 내지 2회 적용함으로써 사용할 수 있다.

실시예 4

β-디펜신 및 각질세포 증식의 생산에 있어서 하이알루론산의 선택 효과를 다음과 같이 측정하였다.

	베타-디펜신	각질세포 증식
hmw HA	0	NS
mmw HA 1	++++	S
lmw HA 2	+	NS
vlmw HA 3	(+)	NS

상기 표에서, "+"는 매우 불량한(+) 내지 매우 강력한(++++)의 효능을 나타낸다. NS는 "유의적이지 않음"을 의미한다.

사용된 하이알루론산(HA)은 고 분자량(hmw), 본 발명에 따른 중간 분자량(mmw - 약 450　kDa), 저 분자량(lmw) 또는 초 저 분자량(vlmw)이다.

β-데펜신의 생산:

합치 상태의 각질세포 배양물을 0.2% mmw HA, 또는 양성 대조군(에스케리키아 콜라이(Escherichia coli)로부터의 LPS 5㎍/ml) 또는:

· 한편으로, 고 분자량 하이알루론산(hmw HA)

· 다른 한편으로, 저 분자량 하이알루론산(20kDa의 HA 및 10kDa의 HA)를 사용하여 18시간 동안 처리하였다.

HBD2의 방출을 ELISA 키트를 사용하여 상층액 속에서 평가하였다. 나타낸 값은 결과의 평균이다.

	대조군	LPS	mmw HA	lmw HA	vlmw HA
pg/ml	11	43	105	20	18

각질세포 증식:

D0에서, 합치 상태의 각질세포 단층(HaCaT)에서 상처를 만든다. 이후에, 세포를 HA의 부재 하에(참조 조건) 또는 증가하는 분자량(HA　50, HA　300, HA　1000)의 HA의 존재 하에 2.5% FCS(태아 송아지 혈청) 속에서 37℃에서 처리한다.

상처의 2개의 가장자리 사이의 너비를 D0 및 D1에서 각각의 치료에 대한 동일한 사진 상에서 3개의 상이한 점에서 측정한다. 각각의 실험을 5회 별도로 수행한다. 평균을 통계적으로 처리한다(1-인자 변량 분석에 이은 던넷 시험(Dunnett test)(SigmaStat)).

mmw HA(HA 300) 만이 각질세포 증식(HaCat)을 통한 피부 회복 공정을 가속화시키는 것이 가능하도록 한다.

세균 방어의 자극:

3개의 용액을 제조한다:

용액 A: 0.10% mmw HA

용액 B: 0.05% 헥사펩타이드

용액 C: 0.05% 헥사펩타이드 + 0.10% mmw HA

사용된 헥사펩타이드는 상업적으로 이용가능한(제조원: Infinitec) Shield Bact Peptide^®이다. 하이알루론산(mmw HA)은, 평균 분자량이 300kDa이다.

치료(용액 A, B, C 또는 매질 단독) 후 인체 피부 생검(biopsy)으로부터의 단백질을 5% 아세트산 및 프로테아제 억제제(0.02mM PMSF, 2ng/ml 펩스타틴 및 2ng/ml 류펩틴)을 함유하는 용액 속에서 2시간 동안 온화하게 교반하면서 추출한다.

상층액의 가용성 단백질을 진공 하에 건조시키고 0.01% 아세트산 용액 속에서 균질화시킨다.

10⁴개 세균/ml의 이. 콜라이(E. coli)(ATCC 4157)를 인산염 완충액(pH 7.4) 및 100μl의 최종 용적 속에서 대수 성장 배지 속에서 배양한다.

이. 콜라이 현탁액을 30㎍의 단백질 추출물 및 프로테아제 억제제(음성 대조군)을 함유하는 10μl의 0.01% 아세트산 용액과 혼합하고 혼합물을 120분 동안 37℃에서 배양한다.

배양 말기에, 10μl를 취하여 1/10 및 1/100의 희석물을 카제인-대두 브로쓰를 함유하는 페트리 디쉬(Petri dish) 속에서 3회 씨딩(seeding)하고 밤새 37℃에서 배양한다.

페트리 디쉬에서 씨딩하고 37℃에서 밤새 배양한 후, CFU 수를 각각의 시료에 대해 측정한다.

하기 결과의 표는, 팔미트산에 커플링된 항균 헥사펩타이드와 본 발명에 따른 중간 분자량 하이알루론산(용액 C)의 조합이 가장 효과적임을 입증하고, CFU 형성의 억제 퍼센트는 100%임을 나타낸다.

	대조군	용액 A	용액 B	용액 C
억제 %	40	55	77	100

실시예 5

2개의 임상 연구를 상이한 혈통의 개에서 수행하고 1개의 임상 연구를 환자, 인체 피부에 수행하였다.

개에서 제1 연구:

양쪽 눈에 감염성 안검결막염을 나타내는 3 내지 10일령의 상이한 혈통의 5마리의 개를 다음과 같이 제조한 용액으로 처리하였다:

- 용액 A: 본 발명에 따른, 0.10%의 mmw HA 및 0.03%의 헥사펩타이드를 우측 눈에 적용하였다.

-　용액 B: 0.03%의 헥사펩타이드를 함유하는 용액을 좌측 눈에 적용시켰다.

조성물의 하이알루론산의 평균 분자량은 450kDa이고 헥사펩타이드는 Shield Bact Peptide(제조원: Infinitec)이다.

임상 평가를 4, 8, 12, 24 및 48 시간째에 모니터링 하였다. 결과는 하기 표에 보고한다.

평가	개	우측 눈	좌측 눈
4 시간	1	+	+
8 시간	2	++	+(+)
12 시간	3	+++	++
24 시간	4	+++	++
48 시간	5	++++	+++

당해 결과는, 8시간 째로부터 발현되고 12 및 24시간째에 확인되는 본 발명에 따른 용액 A를 사용하는 감염성 징후학에서의 보다 신속한 개선을 나타낸다.

개에서 제2 연구:

사례 1: 수년 동안 건조 각막 결막염을 보이고 사이클로스포린으로 성공적으로 치료하는데 실패한 에어레데일 테리어(Airedale terrier)(10년생). 눈은 과감염된 결막염을 지니고 눈꺼풀 틈이 감소된 건조증이 있다. 8일 동안 1일 1회 초과의 로션제 A의 적용은 경의로운 개선(깨끗하고, 뜬 눈, 통증의 사라짐)을 가져온다.

사례 2: 일반적인 치료의 개선 없이, 장기간의 마취 후 심각한 각막 궤양을 나타내는 말테즈 비숑(Maltese Bichon)(15년생). 눈은 건조증으로 남아있고, 궤양은 심하며 통증은 급성이다. 본 발명에 따른 로션제 A의 8일 동안 1일 2회 사용은 반흔 형성 및 통증의 사라짐을 가져온다.

사례 3: 8　mm 과립화 조직을 지닌 각막 궤양을 나타내는 웨스트 박스(West Boxer)(7년생). 치유는 8일 동안 1일 2회 로션제 A를 사용하여 수득한다.

사례 4: 각막 궤양 및 통증을 지닌 건조 결막-각막염을 나타내는 트주 반스(Tzu Bans). 3주 동안의 통상의 치료는 비효과적인 것으로 남아있다. 8일 동안 1일 2회 본 발명에 따른 로션제 A의 사용은 궤양의 어떠한 현저한 변형없이 통증의 실질적인 약화를 가져온다. 사이클로스포린에 대한 변화는 8일내에 궤양의 임상적 개선을 가져온다.

사례 5: 안구의 천공에 의해 합병증이 생긴 심각한 코리자(coryza)를 나타내는 새끼 고양이. 항생제 치료요법은 어떠한 개선도 제공하지 않는다. 치료학적 눈꺼풀 폐색의 실패, 이후에, 본 발명에 따른 로션제 A를 1일 3회 사용하여 신속한 개선을 생성한다.

인체에서의 연구:

아토피성 피부염은 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus)에 대한 특수한 민감성에 의해 특징화된다. 이의 역할은 습진의 급격한 증가 동안에 분명히 드러나며 피부 표면에서 증식의 조절은 징후학을 개선하는데 필수적이다.

해부학적으로 겹치는 주요 부분(팔의 안쪽, 슬와 공간)에 위치하는 과감염된 습진의 급격한 증가를 나타내는, 18 내지 31세된, 4명의 성인 환자인, 2명의 남성 및 2명의 여성을 2개의 유체 유제로 처리하였다:

- 우측 측면에 적용된, 0.05%에서 헥사펩타이드만을 포함하는 유제 A;

- 좌측 측면에 적용된, 헥사펩타이드(0.05%) 및 mmw HA(0.20%)를 포함하는 유제 B.

하이알루론산의 평균 분자량은 300　kDa이다. 헥사펩타이드는 Shield Bact 펩타이드(제조원: Infinitec)이다.

소양증, 누출(seeping) 및 과감염 기준은 평가 점수매김을 정의하기 위하여 0 내지 4로 나타내었다.

증상	T0		T12		T24		T48
	A	B	A	B	A	B	A	B	결과
소양증	4	4	3	2	2	1	2	1	B>A
누출	4	4	2	1	1	0	(1)	0	B>A
과감염	4	4	2	1	1	0	0	0	B>A

이들 결과는, 크림제 둘 다가 효과적이지만, 크림제 B는 12시간째로부터 확산되는, 증상학에 있어서 보다 신속한 작용을 갖는다.

과감염은 24시간째에 조절된다.

전체적인 개선은 본 발명에 따른 크림제 B 사용으로 더 확연해진다.

Claims (13)

1. 지질에 커플링된 적어도 하나의 양이온성 항균 펩타이드, 및 분자량이 200kDa 내지 800kDa인 하이알루론산 또는 그 염을 조합하여 포함하는, 인체 및 수의학 의약에 사용하기 위한 국소 항균 피부과용 조성물로서,
   지질에 커플링된 상기 항균 펩타이드는 이황화물 브릿지를 포함하는 팔미트산에 커플링된 헥사펩타이드인 것을 특징으로 하는 조성물.
2. 청구항 1에 있어서,
   상기 하이알루론산의 분자량은 300kDa 내지 600kDa인 것을 특징으로 하는 조성물.
3. 청구항 1에 있어서,
   상기 하이알루론산 염은 알칼리 금속 및 알칼리 토금속 염으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
4. 청구항 3에 있어서,
   상기 하이알루론산 염은 나트륨, 칼륨, 칼슘 또는 마그네슘 하이알루로네이트인 것을 특징으로 하는 조성물.
5. 청구항 1에 있어서,
   상기 항균 펩타이드는 공유 결합을 통해 지질에 커플링되는 것을 특징으로 하는 조성물.
6. 청구항 1 내지 청구항 5 중 어느 한 항에 있어서,
   키틴 또는 키토산을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 것을 특징으로 하는 조성물.
7. 청구항 1 내지 청구항 5 중 어느 한 항에 있어서,
   조성물의 총 중량에 대해 0.005중량% 내지 2중량%의 하이알루론산, 및 0.001중량% 내지 1중량%의 양이온성 항균 펩타이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
8. 청구항 1 내지 청구항 5 중 어느 한 항에 있어서,
   외부 국소 도포를 위한 형태인 것을 특징으로 하는 조성물.
9. 청구항 1 내지 청구항 5 중 어느 한 항에 있어서,
   반흔 형성제, 소염제, 항-감염제 및, 비타민으로부터 선택된 하나 이상의 제2의 활성제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
10. 삭제
11. 삭제
12. 삭제
13. 삭제