KR102182238B1 - 진세노사이드 Rd를 강화한 효소처리 홍삼추출물을 포함하는 안구건조증 개선용 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents

진세노사이드 Rd를 강화한 효소처리 홍삼추출물을 포함하는 안구건조증 개선용 조성물 및 이의 제조방법 Download PDF

Info

Publication number
KR102182238B1
KR102182238B1 KR1020190056827A KR20190056827A KR102182238B1 KR 102182238 B1 KR102182238 B1 KR 102182238B1 KR 1020190056827 A KR1020190056827 A KR 1020190056827A KR 20190056827 A KR20190056827 A KR 20190056827A KR 102182238 B1 KR102182238 B1 KR 102182238B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
enzyme
red ginseng
ginseng extract
extract
dry eye
Prior art date
Application number
KR1020190056827A
Other languages
English (en)
Inventor
표미경
이경희
이유진
조윤호
정다유
김원용
김진성
조상원
유대석
Original Assignee
재단법인 금산국제인삼약초연구소
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 재단법인 금산국제인삼약초연구소 filed Critical 재단법인 금산국제인삼약초연구소
Priority to KR1020190056827A priority Critical patent/KR102182238B1/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102182238B1 publication Critical patent/KR102182238B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/25—Araliaceae (Ginseng family), e.g. ivy, aralia, schefflera or tetrapanax
    • A61K36/258—Panax (ginseng)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/06—Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/23—Apiaceae or Umbelliferae (Carrot family), e.g. dill, chervil, coriander or cumin
    • A61K36/232—Angelica
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2250/00—Food ingredients
    • A23V2250/20—Natural extracts
    • A23V2250/21—Plant extracts
    • A23V2250/2124—Ginseng
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
    • A61K2236/19—Preparation or pretreatment of starting material involving fermentation using yeast, bacteria or both; enzymatic treatment

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

본 발명은 진세노사이드 Rd 함량이 증가된 효소처리홍삼추출물을 유효성분으로 포함하는 안구건조증 예방, 개선 또는 치료용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 진세노사이드 Rb1, Rc 성분과 Rd 성분의 함량비에 따라 안구건조증 개선에 탁월한 효과를 나타내는 조성물을 제공할 수 있다.

Description

진세노사이드 Rd를 강화한 효소처리 홍삼추출물을 포함하는 안구건조증 개선용 조성물 및 이의 제조방법{Composition for improving the dry eye syndrome comprising enzyme-treated red ginseng extract enriched with ginsenoside Rd and a method for producing the same}
본 발명은 진세노사이드 Rd 함량이 증가된 효소처리 홍삼추출물의 제조방법 및 이로부터 제조된 효소처리 홍삼추출물을 유효성분으로 포함하는 안구건조증 개선용 조성물에 관한 것이다.
안구건조증(건성안:dry eye syndrome)은 단순히 눈물부족이 아닌, 눈물과 안구 표면(각막 및 결막)의 염증에 의한 안구의 불편감, 시력의 질적 저하, 눈물층의 불안정성을 유발하여 안구표면에 손상을 주어, 통증, 불규칙한 각막 표면, 흐리고 변동 폭이 커진 시력 및 각막궤양 등의 발병 위험성이 크다. 그러나 이러한 발병기전은 아직 완전히 규명되지 않았으나, 염증세포의 침윤, 면역활성화 분자 및 접착분자발현 증가, Th1 및 Th17 반응, 세포사멸 마커 및 케모카인의 비정상적인 변화 등 염증이 중요한 역할을 한다는 연구결과가 보고되고 있다.
일반적으로 안구 건조증 치료를 위해서 칼륨과 안토시아닌이 풍부한 음식 섭취를 권장하고 있고, 이외에도 케일, 키위, 사과 등의 과일 섭취도 적극 권장하고 있다. 또한 인공눈물 점안, 눈물점을 막아 배출되는 눈물의 양을 조절하는 치료법을 사용하기도 한다.
그러나 안구건조증은 우리나라 성인의 20% 내외로 발생하는 흔한 질병으로 특히 전 세계적인 기후 변화 특히 엘리뇨 현상으로 온도가 올라가고 있는 상황과 환경오염으로 인해 안구건조증 환자가 지속적으로 증가하고 있으나, 특별한 치료제 또는 기능성 식품이 없는 상황이다.
한편, 인삼은 인삼속 (Panax)에 속하는 식물로, 뿌리를 약용으로 이용하고 있는데, 이러한 인삼의 효능은 인삼에 존재하는 활성성분인 진세노사이드에 기인한 것이다.
진세노사이드는 진세노사이드 아글리콘(ginsenoside aglycone)의 구조에 따라 프로토파낙사다이올계 진세노사이드(Protopanaxadiol-type ginsenoside), 프로토파낙사트라이올계 진세노사이드(Protopanaxatriol-type ginsenoside), 그리고 올레아난계 진세노사이드(Oleanane-type ginsenoside)의 세 가지로 분류될 수 있다.
진세노사이드 유도체들은 트리터펜(triterpene)인 비당부(protopanaxadiol 또는 protopanaxatriol)의 R1, R2, R3의 알콜성 OH기에 글루코스(glucose), 람노스(rhamnose), 자일로스(Xylose), 아라비노스(arabinose)와 같은 당류가 에스테르 결합된 구조를 갖는 화합물로서, 현재 알려져 있는 인삼의 주요 진세노사이드는 약 13종의 일반 진세노사이드와 이로부터 전환되는 것으로 알려진 희귀 진세노사이드 약 11종이 대표적인 진세노사이드로 알려져 있다.
인삼은 수삼(fresh ginseng)을 그대로 사용하거나, 건조시켜 백삼(white ginseng)의 형태로 제조하여 사용하거나, 또는 증숙시켜 홍삼(red ginseng)의 형태로 제조하여 사용될 수 있다.
인삼 중 수삼에는 Rg1, Re, Rb1, Rb2, Rc, Rd 등의 배당체 진세노사이드가 주를 이루고 있으며, 가공 인삼의 경우 수삼에는 거의 존재하지 않는 희귀 진세노사이드인 Rg3, Rh1, Rh2, Compound K의 함량이 증가할 수 있는 것으로 알려져 있다.
최근에는 가공된 인삼에만 존재하는 인삼사포닌의 함량을 더욱 높이기 위한 많은 연구가 활발하게 수행되고 있다. 대표적 가공 인삼인 홍삼은 수삼을 증숙하여 제조할 수 있으며, 이 과정에서 화학구조적으로 불안정한 진세노사이드 아글리콘의 C-20위치에 결합되어 있는 배당체의 결합이 가수분해될 수 있다.
이러한 가공된 인삼에서 암 예방, 암 억제, 혈압강하, 뇌신경세포 보호, 항혈전, 항산화 등에서의 약리 활성 효과가 인삼의 일반 진세노사이드보다 우수하게 나타난다는 결과가 알려지면서, 가공된 인삼에 존재하는 희귀 진세노사이드를 수득하기 위한 여러 방법들이 시도되고 있다.
또한, 진세노사이드 유도체들은 다마란계의 트리터페노이드를 기본구조로 하는 프로토파낙사다이올과 프로토파낙사트라이올의 어글리콘에 글루코스, 람노스, 아라비노스, 자일로스와 같은 당류가 결합한 화합물로서, 결합된 당의 종류와 수 그리고 결합위치에 따라 약리작용이 각각 다른 것으로 알려져 있다. 이들 유도체들 중 프로토파낙사다이올에 속하는 진세노사이드인 Rb1, Rb2 및 Rc 중 한 가지 이상을 원료로 사용하여 진세노사이드 Rd를 만들게 되는데 각각의 특성에 따라 당이 가수분해로 떨어지게 된다. 진세노사이드 Rd는 진세노사이드 Rb1, Rb2, Rc, Re, Rg1 등과 함께 가장 널리 알려진 인삼 사포닌 중 하나이나, 그 함유량은 건삼기준 0.036% 정도로 매우 미미하여(최신고려인삼성분 및 효능편 1996, 한국인삼연초연구원) 다각도의 약리활성 연구나 상업적 활용이 충분히 이루어지지 못하고 그 구조만 밝혀져 있다.
기존에 진세노사이드 Rd의 약리활성으로는 신장보호효과 (Ren Fail. 2000 Mar;22(2):115-27, Nephron. 1999 Feb;81(2):200-7), 면역억제효과 (장기이식, J Surg Res. 2012 Jul;176(1):267-74), 간 보호효과 (항간암, 출원특허10-2010-0118722), 항산화효과 (J Pharm Pharmacol. 2004 Jan;56(1):107-13), 뇌신경세포 보호효과 (항알츠하이머, 항파킨슨병, Int. J. Mol. Sci. 2015, 16, 14395-14408, 항알츠하이머 Neurochem Res. 2012 Dec;37(12):2738-47, 신경세포보호 Neural Regen Res. 2014 Sep 15;9(18):1678-87) 등이 발표되어 상업적 (기능성 식품, 천연물 의약품 등)으로나 의학적으로 큰 잠재력이 있는 것으로 조명되고 있다.
종래 진세노사이드 Rd 제조에 사용된 방법에는 유전자 재조합기술로 고온성 세균 (ThermusCaldophilus)의 DNA를 클로닝하여 생산한 효소인 β-글루코시데이즈를 이용한 방법(Biotechnol Lett (2008) 30:713716, 특허공개번호 10-2002-0029138)이 있다. 이 방법은 생산에 사용한 효소가 유전자 조작으로 얻은 효소이기 때문에 식품 가공에 제약이 있고, 재조합 효소의 생산단가가 높으며, 고온 (70~80℃)에서 반응시켜야 하므로 작업 공정에 어려움이 있다.
효소를 이용한 또 다른 진세노사이드 Rd 제법으로는 역시 유전자 재조합기술로 토양미생물인 플라보박테리움 존소니애 (Flavobacteriumjohnsoniae)의 DNA를 클로닝하여 생산한 효소인 글루코시데이즈를 이용한 방법이 있다(한국등록특허 1427882호). 이 방법도 생산에 사용한 효소가 유전자 조작으로 얻은 효소이기 때문에 식품 가공에 제약이 있고, 재조합 효소의 생산단가가 높다는 단점이 있다.
본 발명자들은 상기 문제점을 해결하기 위하여 연구를 지속하던 중, 홍삼추출물을 특정 조건에서 효소 발효시켜 진세노사이드 Rd의 함량을 증가시킬 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 진세노사이드 Rd가 다량 함유된 홍삼추출물의 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 다른 목적은 Rd의 함량을 증가시키면서 Rb1 및 Rc와의 비율을 일정하게 유지함으로써 안구건조증 예방 및 개선 효과가 있는 약학 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 Rd가 다량 함유되고, Rb1 및 Rc와의 일정한 비율을 유지하여 안구건조증 예방 및 개선 효과가 있는 건강기능식품 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기의 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 홍삼을 주정, 물과 주정 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 용매로 하여 추출하여 추출액을 제조하는 단계; 상기 추출액을 농축하여 3 내지 6 Brix의 농도로 함유된 농축물을 제조하는 단계; 상기 농축물에 효소를 5 내지 15 %(w/w)로 첨가하여 5일 이상 반응시켜 효소 반응물을 제조하는 단계; 및 상기 효소 반응물을 고온 처리하여 효소를 불활성화 시키고 농축하는 단계;를 포함하는 진세노사이드 Rd 함량이 증가된 효소처리 홍삼추출물 제조방법을 제공한다.
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 효소처리 홍삼추출물은 상기 추출액과 비교하여 진세노사이드 Rd의 함량이 2배 이상 증가된 것일 수 있다.
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 효소처리 홍삼추출물은 진세노사이드 Rd/Rg1이 2 이상인 것일 수 있다.
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 진세노사이드 Rb1, Rc 및 Rd 함량은 하기의 식을 만족하는 것일 수 있다.
[식 1]
Figure 112019049570841-pat00001
상기 식에서 i는 상기 추출 단계 후 효소처리 단계 전 홍삼추출물에서의 각 성분의 함량을 측정한 값이고, f는 효소 반응 후의 효소처리 홍삼추출물에서의 함량을 측정한 값이다.
또한 본 발명은 홍삼을 주정, 물과 주정 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 용매로 하여 추출하여 추출액을 제조하는 단계; 상기 추출액을 농축하여 3 내지 6 Brix의 농도로 함유된 농축물을 제조하는 단계; 상기 농축물에 효소를 5 내지 15 %(w/w)로 첨가하여 5일 이상 반응시켜 효소 반응물을 제조하는 단계; 및 상기 효소 반응물을 고온 처리하여 효소를 불활성화 시키고 농축하는 단계;를 포함하는 제조방법에 의해 제조된 효소처리홍삼추출물을 제공한다.
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 효소처리 홍삼추출물은 진세노사이드 Rb1, Rc, Rd의 함량비가 하기의 식을 만족하는 것일 수 있다.
[식 2]
Figure 112019049570841-pat00002
본 발명은 상기 제조방법에 따라 제조된 효소처리 홍삼추출물을 유효성분으로 포함하는 안구건조증 예방, 개선 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 안구건조증 예방, 개선 또는 치료용 약학적 조성물은 효소처리 홍삼추출물 외에 당귀 추출물을 더 포함하는 것일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 제조방법에 따라 제조된 효소처리 홍삼추출물을 유효성분으로 포함하는 안구건조증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따르면 홍삼추출물 중에 존재하는 진세노사이드 Rd의 함량을 현저히 높일 수 있으며, 강화된 Rd, Rb1 및 Rc와의 비율을 일정하게 유지함으로써 안구건조증 예방, 개선 및 치료 효과를 나타낼 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 진세노사이드 Rd가 증가된 효소처리 홍삼추출물의 제조방법의 순서도이다.
도 2는 실시예 및 비교예에 따른 홍삼추출물 및 효소처리 홍삼추출물의 진세노사이드 함량 비교를 도시한 도면이다.
도 3은 실시예 및 비교예에 따른 홍삼추출물 및 효소처리 홍삼추출물을 5일간 투여한 결과 눈물 분비량의 변화를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 실시예 및 비교예에 따른 홍삼추출물 및 효소처리 홍삼추출물을 투여한 후 각막 변성 및 손상의 억제 효과를 확인할 수 있는 이미지이다.
이하에서 본 발명에 대하여 구체적으로 설명한다. 본 명세서에서 사용되는 용어는 따로 정의하지 않는 경우 해당 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 일반적으로 이해하는 내용으로 해석되어야 할 것이다. 본 명세서의 도면 및 실시예는 통상의 지식을 가진 자가 본 발명을 쉽게 이해하고 실시하기 위한 것으로 도면 및 실시예에서 발명의 요지를 흐릴 수 있는 내용은 생략될 수 있으며, 본 발명이 도면 및 실시예로 한정되는 것은 아니다.
본 발명에서 홍삼추출물은 별다른 정의가 없는 한 추출물을 농축하여 분말화한 것을 의미한다.
본 발명에 따른 진세노사이드 Rd 함량이 증가된 효소처리 홍삼추출물 제조방법은, 홍삼을 주정, 물과 주정 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 용매로 하여 추출하여 추출액을 제조하는 단계; 상기 추출액을 농축하여 3 내지 6 Brix의 농도로 함유된 농축물을 제조하는 단계; 상기 농축물에 효소를 5 내지15 %(w/w)로 첨가하여 5일 이상 반응시켜 효소 반응물을 제조하는 단계; 및 상기 효소 반응물을 고온 처리하여 효소를 불활성화 시키고 농축하는 단계;를 포함한다.
본 발명은 원료로서 인삼, 홍삼 또는 흑삼을 사용할 수 있고, 바람직하게는 홍삼근과 홍미삼을 배합하여 사용할 수 있다. 홍삼근은 단맛이 강하고, 홍미삼은 쓴맛이 강하여 홍삼근 비율이 높을수록 관능이 우수한 홍삼 추출액을 얻을 수 있다. 하지만 홍삼근은 홍미삼에 비해 사포닌 함량이 적어 이들 비율을 적당량 조절하여 사포닌 함량을 높일 수 있다. 구체적으로 홍삼근과 홍미삼을 1:0.1 내지 2의 중량비율로 배합할 수 있다. 바람직하게는 1:0.2 내지 1.5의 중량비율로 배합할 수 있으며, 보다 바람직하게는 1:0.8 내지 1.2의 중량비율로 배합할 수 있다.
홍삼을 수용매에서 장시간 고온처리하게 되면 추출과정에서 홍삼에 함유되어 있던 유기산의 영향으로 홍삼의 유효성분인 사포닌 분해가 일어날 수 있는데 본 발명에 의할 때, 주정을 포함한 용매를 사용함으로써 홍삼 추출시의 유효성분의 가수분해 요인을 차단할 수 있다.
본 발명에 따라, 주정을 포함하는 용매를 추출용매로 사용하면 진세노사이드 및 사포닌 성분이 같이 추출되어, 물을 용매로 사용하는 경우보다 진세노사이드 성분의 수득 수율이 높고 추출되는 성분의 종류가 현저히 많아지게 된다. 다만, 주정에 포함된 에탄올에 의한 향미 감소를 고려해 에탄올의 함량은 30 % (v/v)이내로 제한적으로 사용하는 것이 바람직할 수 있다.
추출시 첨가되는 추출용매의 비율은 특별히 한정되지 않으나, 홍삼 건조 중량에 대하여 추출용매를 2배 내지 10배의 중량으로 사용할 수 있다. 추출효율을 증가시키기 위해서는 바람직하게는 홍삼에 대하여 5배 내지 8배를 사용하여 수회 반복 추출할 수 있다.
추출온도는 50 내지 100℃에서 이루어질 수 있고, 바람직하게는 70 내지 90℃이다. 추출시간은 추출온도에 따라 달라질 수 있고, 1시간 내지 24시간, 바람직하게는 4시간 내지 8시간 추출할 수 있다. 추출시 교반기를 사용하면 더욱 추출효율을 증대시킬 수 있다.
본 발명은 바람직한 일 예로서, 상기 홍삼을 주정이 포함된 용매로 3~4회 추출하고, 회수된 홍삼 추출액을 여과기에 통과시켜 침전물 및 이물질을 제거하는 단계를 거친다. 이후 여과시킨 홍삼 추출액을 감압농축기를 이용하여 농축한다.
상기 농축농도는 3 내지 6 Brix인 것으로 제조할 수 있다. 이를 만족하는 범위에서 효소처리시 발효가 잘 일어나며, 겔화 형성이 억제된다. 보다 구체적으로 홍삼 추출액의 농축은 다단계로 농축될 수 있다. 비한정적인 일 예로, 6 내지 10 Brix의 농축농도로 1단계 농축한 후, 3 내지 6 Brix의 농축농도로 2단계로 농축할 수 있으나 이는 구체예일 뿐 본 발명이 이에 제한받지 않는다. 이러한 단계적 농축공정을 통해 얻어진 홍삼 추출액은 후속적인 효소 발효공정을 통해 Rd의 함량이 증가될 수 있고, 안구건조증 개선 효과를 유의적으로 발휘하도록 Rb1, Rc, Rd의 비율이 일정 수준으로 유지될 수 있다.
이후 상기 농축물에 효소를 5 내지 15 %(w/w)로 첨가하여 5일 이상 반응시킨다. 바람직하게는 8 내지 10 %(w/w)가 되도록 효소를 첨가하고 30 내지 60℃의 조건에서 교반 배양기(shaking incubator) 내에서 5일 내지 7일간 발효시킬 수 있으며, 보다 바람직하게는 45 내지 55℃에서 5일 내지 6일간 배양시킬 수 있다.
효소의 첨가로 인하여 발효가 가속화될 수 있고, 전술한 조건은 3 내지 6 Brix 농축물의 발효를 위한 최적화된 조건에 해당할 수 있다.
상기 효소 첨가한 반응물은 효소 반응을 종료시키기 위하여 고온 처리하여 효소를 불활성화 시키고, 농축하는 과정을 거친다.
상기 고온의 온도는 효소의 활성이 억제되어 반응을 중지시킬 정도면 무방하다. 효소는 단백질로 구성된 것으로서 50℃ 이상이면 대부분이 불활성화되지만 효소마다 내열성의 차이가 있는 것을 고려하여 80℃ 이상이 바람직할 수 있다. 보다 바람직하게는 85 내지 95℃일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 효소처리 홍삼추출물은 상기 효소처리하지 않은 홍삼추출물과 비교하여 진세노사이드 Rd의 함량이 2배 이상 증가되고, 바람직하게는 2.5배 이상 4배 이하로 증가된 것을 특징으로 한다. 증가한 진세노사이드 Rd의 함량만큼 다른 진세노사이드 성분의 함량이 감소한 것이므로, 상기 범위의 증가비율에서 본 발명이 목적으로 하는 안구건조증 개선 효과를 유의적으로 발휘하도록 하기 위한 함량비가 유지될 수 있다.
상기 효소처리 홍삼추출물은 효소처리 단계를 거치기 전 추출물 상태에 비하여 진세노사이드 Rd 성분이 강화된 것으로서 추출액을 감압 농축하여 건조, 분말화 시킨 상태인 추출물에서 Rg1 대비 Rd 성분의 비(Rd/Rg1)는 2 이상인 것을 특징으로 한다. 바람직하게는 3 이상 5 이하일 수 있다. 상기의 Rg1 대비 Rd 성분의 비의 범위를 만족함으로써 진세노사이드 Rd 성분의 안구건조증 개선의 약리효과가 유의미하게 나타나고, 우수한 안구건조증 예방, 개선 또는 치료 효과를 위한 진세노사이드 중 다른 성분과의 최적의 함량비율을 유지할 수 있다.
진세노사이드 Rd는 인삼 또는 홍삼에 전체 중량 대비 1% 미만으로 미량 존재하는 성분으로서 상기의 효소처리 단계를 거침으로써 함량이 현저히 증가한다.
상기 효소 반응 단계는 펙티나아제(pectinase)계, 셀룰라아제(cellulase)계, 아밀라아제(amylase)계 효소를 사용하는 것일 수 있다. 셀룰라아제계는 비스코자임 엘(Viscozyme L), 아밀라아제계는 BAN 480L, 테르마밀 120L(Termamyl 120L), AMG 300L을 사용할 수 있고, 펙티나아제계는 울트라자임 AFP(Ultrazyme AFP), 펙티넥스 울트라 AFP(Pectinex Ultra AFP), 펙티넥스 울트라 클리어(Pectinex Ultra clear), 펙티넥스 울트라 펄프(Pectinex Ultra Pulp), 펙티넥스 울트라 SP-L(Pectinex Ultra SP-L), α-허브자임(α-herbzym), 노보자임 33095(Novozym 33095)으로 이루어진 군에서 선택될 수 있으며, 바람직하게는 펙티넥스 울트라 클리어(Pectinex Ultra clear) 또는 노보자임 33095(Novozym 33095) 효소일 수 있으나, 이에 특별히 제한되는 것은 아니다.
일반적인 홍삼 추출법에 의하는 생성되는 추출물의 경우, 포함된 진세노사이드 성분의 대부분을 구성하는 것은 Rb1, Rb2, Rc이다. 그러나 본 발명에 의한 제조방법에 따를 경우, Rb1, Rc의 함량이 이전보다 현저하게 감소하고 Rd 성분의 함량이 큰 폭으로 증가한다. 효소처리시 Rb1, Rc에서 당이 하나 떨어져나가면서 Rd로 전환되기 때문인 것으로 볼 수 있다.
본 발명에 의할 때, 진세노사이드 Rb1, Rc, Rd 함량비는 효소를 처리하여 반응시키기 전과 후가 현저히 달라진다. 구체적으로 본 발명에 있어서, 하기 식 1을 만족하는 함량비 변화를 가질 수 있다.
[식 1]
Figure 112019049570841-pat00003
상기 식에서 i는 상기 추출 단계 후 효소처리 단계 전 홍삼추출물에서의 각 성분의 함량을 측정한 값이고, f는 효소 반응 후의 효소처리 홍삼추출물에서의 함량을 측정한 값이다. 상기 수치는 바람직하게는 10 이상의 값을 가질 수 있으며 20 이하의 값을 가질 수 있다.
본 발명은 효소처리를 통해 Rb1, Rc 성분이 현저히 감소하는 반면, Rd 성분이 크게 증가함에 따라, 하기 식 2의 함량비로 존재할 수 있다.
[식 2]
Figure 112019049570841-pat00004
바람직하게는 상기 식 2의 값은 1.0 내지 1.3의 함량비를 가질 수 있으며, 상기 Rb1, Rc 성분 및 Rd의 함량비가 전술한 범위를 만족하였을 때, 눈물 분비량의 증가가 두드러지고 안구 건조증 개선 효능이 탁월하게 발휘될 수 있다.
또한, 본 발명은 상술한 제조과정을 통하여 제조된 효소처리 홍삼추출물을 유효성분으로 포함하는 안구건조증 예방, 개선 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우 비강 투여, 점안 투여, 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 약제학적 분야에서 공지된 다양한 방법에 의해 제조될 수 있으며, 통상의 제조방법으로 제형화할 수 있다. 이 때 제형은 오일 또는 수성 매질 중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
이에 따라, 본 발명의 약학적 조성물은 피부 외용제, 에어로졸, 스프레이, 점안제, 경구제 및 주사제 형태의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 일 예에 따른 약학적 조성물에 있어, 상기 약학적 조성물은 당귀 추출물을 더 포함할 수 있다. 당귀 추출물을 더 포함함에 따라 안구건조증 예방, 개선 또는 치료 효과가 보다 향상될 수 있는 점에서 바람직할 수 있다.
구체적으로, 상기 당귀 추출물을 더 포함함으로써, 당귀 추출물에 함유된 데커신(Decursin), 데커시놀(Decursinol). 데커시놀 안젤레이트(Decursinol angelate)와 같은 쿠마린(Coumarin) 계열의 유효성분이 염증 반응물질 분비를 억제하고 각막 상피 세포에서의 세포자멸(apoptosis)과 염증 반응을 감소시킴으로써 효소처리 홍삼추출물의 안구건조증 개선 효과를 한층 더 높여 우수한 안구건조증 치료 효과를 발휘한다.
상기 효소처리 홍삼추출물과 당귀 추출물은 건조 중량기준으로 1:0.01 내지 1의 비율로 혼합될 수 있고, 바람직하게 1:0.1 내지 0.5의 비율로 혼합될 수 있으나 이에 제한받지 않는다.
또한, 본 발명은 상기 효소처리 홍삼추출물을 유효성분으로 포함하는 안구건조증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
상기 건강기능식품이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군을 의미할 수 있으며, 또한 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다.
상기 건강기능석품 조성물은 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되고 식품학적으로 허용되는 식품 첨가제를 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.
식품첨가물의 비한정적인 일 예로 단당류, 이당류, 다당류, 당알콜 등의 당류; 타우마틴, 스테비아 추출물, 사카린, 아스파르탐 등의 향미제; 영양제, 비타민, 식용 전해질, 풍미제, 착색제, 증진제, 펙트산, 알긴산, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산화제, 정제수 등이 예시될 수 있다.
본 발명에 따른 건강식품 조성물은 다양한 형태로 제형이 가능하므로 그 형태는 특별히 제한되지 않는다. 바람직하게 건강식품조성물은 음료, 과립, 정제, 파우더, 환, 캡슐 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 형성될 수 있다. 이러한 음료, 과립, 정제, 파우더, 환, 캡슐 제형을 갖는 건강식품 조성물은 휴대가 간편하고 언제 어디서나 수시로 섭취하기가 용이하다.
이하, 하기의 실시 예를 통하여 본 발명에 대해 설명하고자 한다. 다만, 하기의 실시 예는 본 발명을 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위를 하기의 실시예로 한정하는 것은 아니다.
[ 제조예 1]
당귀 추출물의 제조
유기농으로 재배된 함양산 참당귀(심마니 산삼영농조합) 10 kg을 구입하여 건조시킨 후 분쇄기로 분쇄하였다. 분말 상태의 당귀를 주정 에탄올 5배량을 첨가하여 3회 반복 추출하였고, 회전증발농축기(Rotary evaporator)를 사용하여 농축하였다. 주정 에탄올 1 ℓ로 농축물을 녹인 후 4℃ 냉장고에 12시간 냉장 보관하였다. 이후 50 ℓ의 60% 에탄올을 첨가하여 원심분리를 통해 얻어진 상층액을 감압 농축하였다. 농축 후 80℃의 열풍 건조하여 추출물을 수득하였다.
[ 비교예 1]
효소처리 전 홍삼추출물 제조
GAP 인증 4년근 홍삼 및 홍미삼(우신산업)을 중량비 1:1로 혼합한 1 kg에 물과 주정 혼합물(에탄올 30 % v/v) 10 L을 넣고 75℃에서 6시간씩 3회 추출하였다. 추출물은 여과한 후 감압 농축하여 60℃에서 5시간 건조한 후 분말성형기를 사용하여 분말을 제조하였다.
효소처리 홍삼추출물 제조 1:
GAP 인증 4년근 홍삼 및 홍미삼(우신산업)을 중량비 1:1로 혼합한 1 kg에 물과 주정 혼합물(에탄올 30 % v/v) 10 L을 넣고 75℃에서 6시간씩 3회 추출하였다. 이로부터 얻어진 홍삼추출물을 35℃에서 10 Brix로 조정한 후, 상온 및 상압 조건에 2 시간 방치한 후, 이어서 45℃에서 5 Brix로 조정하였고, 펙티넥스 울트라 클리어(Pectinex Ultra clear)를 10 % w/w가 되도록 첨가한 후 50℃ 교반배양기(Shaking incubator)에서 5일 동안 반응이 진행되도록 하였다. 이후 얻어진 효소 반응물은 95℃에서 10분간 처리하여 반응을 중지시켰고, 감압 농축하여 60℃에서 5시간 건조한 후 분말성형기를 사용하여 분말을 제조하였다.
효소처리 홍삼추출물 제조 2:
펙티넥스 울트라 클리어를 8 % w/w가 되도록 첨가한 외에는 실시예 1과 동일한 방법으로 효소처리 홍삼추출물을 제조하였다.
효소처리 홍삼추출물 제조 3:
홍삼추출물을 6 Brix로 조정한 외에는 실시예 1과 동일한 방법으로 효소처리 홍삼추출물을 제조하였다.
[ 실험예 1]
비교예 1 및 실시예 1 내지 실시예 3에 따른 홍삼추출물의 진세노사이드 함량 분석
진세노사이드 분석은 Waters-PAD(Waters 1525, detector 2998, USA)를 활용하여 물(A액)과 ACN (B액)의 하기 표 1과 같은 gradient 조건으로 flow rate 1.0 ml/min으로 하여 분석하였다.
Figure 112019049570841-pat00005
Figure 112019049570841-pat00006
Figure 112019049570841-pat00007
상기 표 3은 비교예 1을 5회 실시하여 나타낸 평균값을 나타낸 것으로 효소처리 하지 않은 홍삼추출물의 Rb1과 Rc 및 Rd 함량비를 나타내는 [식 2]
Figure 112019049570841-pat00008
의 값은 11.71으로, Rd에 비해 Rb1과 Rc의 함량이 현저히 많은 것을 알 수 있다.
Figure 112019049570841-pat00009
상기 표 4는 실시예 1을 5회 실시하여 나타낸 평균값을 나타낸 것으로 홍삼추출물과 효소처리 홍삼추출물의 진세노사이드 함량을 HPLC를 이용하여 분석하였다. 홍삼추출물 5 Brix로 농축한 추출액에 효소 10 %(w/w)를 처리한 경우, 효소처리한 홍삼추출물은 비교예 1에 따른 효소처리하지 않은 홍삼추출물에 비하여 진세노사이드 Rg1, Re가 약간 줄어들었으며, 특히 PPD계열 사포닌인 Rb1과 Rc가 현저하게 줄어들어 Rd로 전환되어 Rd의 함량이 5.9 mg/g에서 23.0 mg/g으로 효소처리 전보다 4배 가량 증가된 것을 확인할 수 있었다.
효소처리 홍삼추출물의 Rd/Rg1은 3.59의 값의 가지는 것으로 나타났고, Rb1과 Rc 및 Rd 함량비인 [식 2]에 해당하는
Figure 112019049570841-pat00010
값은 1.12, 홍삼추출물의 경우와 효소처리 홍삼추출물의 경우의 Rb1과 Rc 및 Rd 함량비 변화를 의미하는 [식 1]
Figure 112019049570841-pat00011
의 값은 10.46으로 나타났다.
Figure 112019049570841-pat00012
상기 표 5는 실시예 2를 5회 실시하여 나타낸 평균값을 나타낸 것으로 홍삼추출물 5 Brix로 농축한 추출액에 효소 8 %(w/w)를 처리한 경우, 효소처리한 홍삼추출물은 비교예 1에 따른 효소처리하지 않은 홍삼추출물에 비하여 Rb1과 Rc 역시 현저하게 줄어들어 Rd로 전환되어 Rd의 함량이 5.9 mg/g에서 21.3 mg/g으로 효소처리 전보다 3.5배 이상 증가된 것을 확인할 수 있었다.
효소처리 홍삼추출물의 Rd/Rg1은 3.87의 값의 가지는 것으로 나타났고, Rb1과 Rc 및 Rd함량비 함량비인 [식 2]에 해당하는
Figure 112019049570841-pat00013
값은 1.28, 홍삼추출물의 경우와 효소처리 홍삼추출물의 경우의 Rb1과 Rc 및 Rd함량비 변화를 의미하는 [식 1]
Figure 112019049570841-pat00014
값은 9.15 의 수치로 나타났다.
Figure 112019049570841-pat00015
상기 표 6은 실시예 3을 5회 실시하여 나타낸 평균값을 나타낸 것으로 홍삼추출물 6 Brix로 농축한 추출액에 효소 10 %(w/w)를 처리한 경우, 효소처리한 홍삼추출물은 홍삼추출물에 비하여 Rb1과 Rc가 현저하게 줄어들어 Rd로 전환되어 Rd의 함량이 5.9 mg/g에서 23.7 mg/g으로 효소처리 전보다 4배 이상 증가된 것을 확인할 수 있었다.
효소처리 홍삼추출물의 Rd/Rg1은 3.65의 값의 가지는 것으로 나타났고, Rb1과 Rc 및 Rd함량비인 [식 2]에 해당하는
Figure 112019049570841-pat00016
값은 1.06, 홍삼추출물의 경우와 효소처리 홍삼추출물의 경우의 Rb1과 Rc 및 Rd의 함량비 변화를 나타내는 [식 1]
Figure 112019049570841-pat00017
값은 11.05 의 수치로 나타났다.
효소처리 홍삼추출물 및 당귀 추출물을 포함하는 안구건조증 개선 조성물의 제조
실시예 1에서 얻은 효소처리 홍삼추출물 분말 40 g, 제조예 1에서 얻은 당귀 추출물을 4 g을 정제수 40 ㎖를 가하여 혼합기를 이용하여 혼합한 후, 60℃에서 5시간 건조한 후 분말성형기를 사용하여 분말을 제조하였다.
[ 실험예 2]
효소처리 홍삼추출물에 대한 안구건조증 모델동물( lacrimal gland excision dry eye rat)에서의 기능성 평가
1) 실험동물 및 안구건조증 유발
6주령 수컷 SD 쥐((주)오리엔트로)를 1주일동안 순화하였다. 안구건조증의 유발을 위해 펜토바르비탈 나트륨(pentobarbital sodium, 한림제약) 25 mg/kg을 복강 주사하여 마취한 후, 안구와 귀 사이 뺨 부위를 약 5 mm 절개하여 눈물샘(exorbital lacrimal gland)을 노출시킨 후 수술적으로 제거하고 봉합하였다.
대조군에는 가짜 수술(Sham surgery)을 위해 동일한 방법으로 눈물샘을 노출시킨 후 눈물샘의 제거는 없이 봉합하여 수술을 완료하였다. 수술 후 1주일 동안 매일 수술부위를 소독하였으며, 임상증상을 관찰하여 염증이나 기타 수술에 의한 합병증이 유발된 개체는 이후 실험과정에서 제외하였다. 실험동물의 사육 및 실험동물을 이용한 모든 실험과정은 한국한의학연구원 동물실험윤리위원회의 승인을 받았고, 규정에 따라 실행하였다.
2) 약물 투여
수술 1주일 뒤, 페놀-레드 쓰레드 눈물량 검사지(FCI Opthalmics Zone Quick, Japan)를 눈꺼풀 외측 끝 부위 안구표면에 접촉시킨 후 30초 후 눈물에 의해 검사지의 색이 변한 길이를 측정하여, 샴 수술(sham surgery)군에 비해 50% 이상 현저하게 눈물 분비량이 감소된 개체들만 선별하여 무작위로 군당 7마리씩 나누어 약효시험을 진행하였다. 군분리 후 시험약물인 실시예 1에 따른 효소처리 홍삼추출물, 비교예 1에 따른 효소처리 전 홍삼추출물, 실시예 4에 따른 효소처리 홍삼추출물 및 당귀추출물의 혼합물을 1일 1회씩 각 군에 대한 100 mg/kg, 250 mg/kg 투여량을 멸균 증류수에 녹여 조제하여 5일 동안 경구투여하였다.
대조약물로는 안구건조증에 사용하는 건기식 소재인 오메가-3 및 루테인을 사용하였고, 이는 지용성 물질로서 100 mg/kg 투여량을 멸균 증류수 및 가용화제를 이용하여 에멀전화하였고, 상기 실시예 및 비교예에 따른 약물투여군과 동일한 조건에서 투여하였다. 샴 수술군에는 멸균 증류수만 동량 투여하였다.
3) 눈물 분비량 분석
5일간의 약물투여 종료 후 눈물 분비량은 페놀-레드 쓰레드 눈물량 검사지(FCI Opthalmics Zone Quick, Japan)를 이용하여 눈꺼풀 외측 끝 부위 안구표면에 접촉시킨 후에, 30초 후 눈물에 의해 검사지의 색이 변한 길이를 측정하여 눈물 분비량을 측정하였다.
실시예 1에 따라 100 mg/kg 및 250 mg/kg의 효소처리 홍삼추출물을 투여한 후 눈물분비량 변화를 확인하였다. 그 결과 효소처리 홍삼추출물 투여군의 경우 모두 눈물분비량을 증가시켜 안구건조증을 개선함을 확인하였으며, 이는 눈건강 증진을 위해 대표적으로 이용되는 성분인 루테인(lutein), 오메가-3(omega-3)와 효능을 비교한 결과, 효소처리 홍삼추출물이 오메가-3와 동등한 효능이 있음을 도 3의 우측 그래프를 통해 확인할 수 있다. 또한, 도 3의 좌측 그래프를 통하여 비교예 1에 따른 효소처리 하지 않은 홍삼추출물의 경우 아무것도 처리하지 않은 건성안의 눈물분비량에 비해 미세한 증가를 보이긴 하나, 안구건조증을 개선하는 유의미한 효과는 나타나지 않음을 알 수 있다.
4) 각막 건조손상 분석
5일간의 약물투여가 종료되고, 눈물분비량 측정 바로 직후, 각막 건조 손상을 분석하였다. 각막의 건조손상은 링 일루미네이터(ring type light illuminator; Olympus, Tokyo, Japan)를 각막에 비춰 반사되는 형태를 DP21 camera (Olympus, Tokyo, Japan)가 장착된 입체현미경(stereomicroscope, Olympus, Tokyo, Japan)을 이용하여 촬영한 후 링타입(ring type) 조명의 각막건조 손상에 의해 왜곡 정도를 다음의 기준을 이용하여 정량적으로 평가하여 분석하였다.
- 0점: 왜곡 없음 (no distortion)
- 1점: 1/4 부위의 왜곡 (distortion in one quarter)
- 2점: 2/4 부위의 왜곡 (distortion in two quarters)
- 3점: 3/4 부위의 왜곡 (distortion in three quarters)
- 4점: 모든 4/4 부위의 왜곡 (distortion in all four quarters)
- 5점: 원형 형태를 구별할 수 없는 심한 왜곡 (severe distortion, in which no ring could be recognized)
Figure 112019049570841-pat00018
상기 표 7은 각막표면 매끄러움 검사를 통한 각막 손상 분석 결과표이며, 각막 표면이 부드럽고 눈물의 안정성이 높을수록 안구 표면의 일루미네이터 링 이미지가 둥글게 나타난다. 링 이미지가 왜곡될수록 수치는 크게 나타나고 눈물막이 불안정함을 의미한다.
본 발명에 따른 실시예 1의 효소처리 홍삼추출물을 투여하였을 때, 약물투여하지 않은 군에 비해 각막의 변성 및 손상 정도가 떨어지는 것을 도 4를 통해 확인할 수 있다. 특히, 100 mg/kg을 투여한 경우보다 250 mg/kg을 투여한 군에서 각막의 변성 및 손상 정도가 더욱 감소한 것을 확인할 수 있었다. 또한, 비교예 1의 효소처리 하지 않은 홍삼추출물의 경우 실시예 1에 비해 각막의 손상 및 눈물막의 불안정도는 더 크게 나타난 것을 알 수 있다.
5) 플루오레세인 염색 검사
눈물층 손상여부를 평가하기 위해 플루오레세인 염색 검사(fluorescein staining)을 실시하였다. 1%의 플루오레세인 나트륨(sodium fluorescein) 1 ㎕를 마이크로피펫을 이용하여 마우스의 오른쪽 눈에 점안하고 점안 후 1분 뒤 블루필터를 장착한 검안경(DM6C ohpthalmoscope, Zumax Medical Co., Ltd, Germany)을 이용하여 마우스의 눈을 관찰하였다. 플루오레세인 염색을 하면 각막 상피 세포가 결손된 부위의 기질이 착색된다.
각막의 상부, 중간부 및 하부의 각각에 대해서 플루오레세인에 의한 염색의 정도를 하기의 기준에 따라 점수 판정하고, 상기 각부의 점수 합계의 평균치를 구하였다.
(판정 기준)
0: 염색되어 있지 않다.
1: 염색이 성기며, 각 점상의 염색 부분은 떨어져 있다.
2: 염색이 중간정도이며, 점상의 염색 부분의 일부가 인접되어 있다.
3: 염색이 조밀하며, 각 점상의 염색 부분은 인접되어 있다.
Figure 112019049570841-pat00019
상기 표 8은 플루오레세인 염색 결과로서, 각막 손상 부위가 클수록 염색 수치는 크게 나타난다. 아무것도 처리하지 않은 건성안 군에서는 각막의 눈물층의 손상을 확인할 수 있었지만 효소처리 홍삼추출물 투여군에서는 눈물층의 손상이 거의 발견되지 않았다. Score 평가로 비교했을 경우에도 건성안 군에서는 평균 2.8로 높았으나 효소처리 홍삼추출물 투여군에서는 각각 평균 1.33 내지 1.53 수준에 있어 정상군의 평균 1점과 큰 차이를 보이지 않았다.
또한, 실시예 4의 당귀 추출물을 포함한 효소처리 홍삼추출물의 약물투여군에서 정상 군에 가장 가까운 평균치를 나타낸 것으로 보아 안구건조증의 개선에 있어서 현저히 우수한 효과가 있음을 알 수 있다.
6) 통계분석
모든 데이터는 평균 ± 표준편차로 표시하며, 각 군간의 통계처리는 일원분산분석(one-way ANOVA test)으로 유의성을 확인하고, 사후검정은 Tukey's 다중비교검정(multiple comparision test)을 이용하여 검정한다. 통계학적 분석은 상용으로 널리 사용되고 있는 통계 패키지인 GraphPad PRISM Version 6.0 (GraphPad Software, USA)를 이용하여 실시하며, P<0.05인 경우 통계적으로 유의하다고 판정하였다.
이상 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실험예 및 실시예를 설명하였지만, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 실시태양일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아니다. 따라서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해되어야 한다.

Claims (9)

  1. 홍삼을 주정, 물과 주정 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 용매로 하여 추출하여 추출액을 제조하는 단계;
    상기 추출액을 농축하여 3 내지 6 Brix의 농도로 함유된 농축물을 제조하는 단계;
    상기 농축물에 효소를 5 내지 15 %(w/w)로 첨가하여 5일 이상 반응시켜 효소 반응물을 제조하는 단계; 및
    상기 효소 반응물을 고온 처리하여 효소를 불활성화 시키고 농축하는 단계;를 포함하는 제조방법으로 제조된 진세노사이드 Rd 함량이 증가된 효소처리 홍삼추출물을 유효성분으로 포함하는 안구건조증 예방, 개선 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 효소처리 홍삼추출물은 상기 추출액과 비교하여 진세노사이드 Rd의 함량이 2배 이상 증가된 것을 특징으로 하는, 안구건조증 예방, 개선 또는 치료용 약학적 조성물.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 효소처리 홍삼추출물은 진세노사이드 Rd/Rg1이 2 이상인, 안구건조증 예방, 개선 또는 치료용 약학적 조성물.
  4. 제 1항에 있어서,
    상기 효소처리 홍삼추출물의 진세노사이드 Rb1, Rc 및 Rd 함량이 하기의 식을 만족하는 것인 안구건조증 예방, 개선 또는 치료용 약학적 조성물
    [식 1]
    Figure 112020118540869-pat00020

    (상기 식에서 i는 상기 추출 단계 후 효소처리 단계 전 홍삼추출물에서의 각 성분의 함량을 측정한 값이고, f는 효소 반응 후의 효소처리 홍삼추출물에서의 함량을 측정한 값이다).
  5. 삭제
  6. 제 1항에 있어서,
    상기 효소처리 홍삼추출물은 진세노사이드 Rb1, Rc, Rd의 함량비가 하기의 식을 만족하는 것인, 안구건조증 예방, 개선 또는 치료용 약학적 조성물.
    [식 2]
    Figure 112020118540869-pat00021
  7. 삭제
  8. 제 1항에 있어서,
    상기 약학적 조성물은 당귀 추출물을 더 포함하는 안구건조증 예방, 개선 또는 치료용 약학적 조성물.
  9. 제 1항에 따른 진세노사이드 Rd 함량이 증가된 효소처리 홍삼추출물을 유효성분으로 포함하는 안구건조증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
KR1020190056827A 2019-05-15 2019-05-15 진세노사이드 Rd를 강화한 효소처리 홍삼추출물을 포함하는 안구건조증 개선용 조성물 및 이의 제조방법 KR102182238B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020190056827A KR102182238B1 (ko) 2019-05-15 2019-05-15 진세노사이드 Rd를 강화한 효소처리 홍삼추출물을 포함하는 안구건조증 개선용 조성물 및 이의 제조방법

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020190056827A KR102182238B1 (ko) 2019-05-15 2019-05-15 진세노사이드 Rd를 강화한 효소처리 홍삼추출물을 포함하는 안구건조증 개선용 조성물 및 이의 제조방법

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR102182238B1 true KR102182238B1 (ko) 2020-11-24

Family

ID=73679404

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020190056827A KR102182238B1 (ko) 2019-05-15 2019-05-15 진세노사이드 Rd를 강화한 효소처리 홍삼추출물을 포함하는 안구건조증 개선용 조성물 및 이의 제조방법

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR102182238B1 (ko)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20240063268A (ko) 2022-10-31 2024-05-10 아레즈 주식회사 진세노사이드 Rg3-S, Rg3-R, RK1 및 Rg5의 고농도 혼합 조성물(GDX-365) 및 이의 제조 방법
KR20240063267A (ko) 2022-10-31 2024-05-10 아레즈 주식회사 진세노사이드 Rb1, Rb2, Rc 및 Rd의 고농도 혼합 조성물(PPDmix) 및 이의 제조 방법

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20160052243A (ko) * 2014-11-04 2016-05-12 재단법인 금산국제인삼약초연구소 효소처리된 발효 인삼 또는 홍삼 추출물을 포함하는 지질개선용 조성물

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20160052243A (ko) * 2014-11-04 2016-05-12 재단법인 금산국제인삼약초연구소 효소처리된 발효 인삼 또는 홍삼 추출물을 포함하는 지질개선용 조성물

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, 2018, Vol.11, No.6, pp.369-375.* *
J. Ginseng Research, 2015, Vol.39, pp.7-13.* *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20240063268A (ko) 2022-10-31 2024-05-10 아레즈 주식회사 진세노사이드 Rg3-S, Rg3-R, RK1 및 Rg5의 고농도 혼합 조성물(GDX-365) 및 이의 제조 방법
KR20240063267A (ko) 2022-10-31 2024-05-10 아레즈 주식회사 진세노사이드 Rb1, Rb2, Rc 및 Rd의 고농도 혼합 조성물(PPDmix) 및 이의 제조 방법

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4676040B2 (ja) 組成物
KR19990014205A (ko) 플라보노이드 및 파피아 가공물을 함유한 조성물
WO2008083513A1 (fr) Extrait de pellicule de soja noir et procédé de préparation et d&#39;utilisation de cet extrait
JP6978325B2 (ja) キサントフィルとヒシ属植物の加工物を含有する組成物
KR102182238B1 (ko) 진세노사이드 Rd를 강화한 효소처리 홍삼추출물을 포함하는 안구건조증 개선용 조성물 및 이의 제조방법
KR101734896B1 (ko) 감나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 각막 손상의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
EP3747453A1 (en) &lt;smallcaps/&gt; aucuba composition for preventing or treating dry eye syndrome, containing &lt;ns1:i&gt;japonica&lt;/ns1:i&gt; extract
CN104302302A (zh) 包含作为活性成分的蓝靛果忍冬的果实提取物用于预防或改善缺血性脑血管病的药物组合物或保健食品
JP6148780B1 (ja) キサントフィルとヒシ属植物の加工物を含有する組成物
CN104337927A (zh) 锦灯笼提取物以及药物组合物和/或功能食品
US11938163B2 (en) Composition for improving respiratory health continuously exposed to particulate matter atmosphere
CN108567914A (zh) 一种具有改善睡眠作用的中药制剂及其制备方法和应用
KR20130035371A (ko) 알레르기성 비염 개선용 조성물 및 이의 제조방법
KR101838142B1 (ko) 쥐눈이콩 추출물을 포함하는 각막 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR101835227B1 (ko) 서목태 추출물을 포함하는 안질환 예방 또는 치료용 조성물
KR102646441B1 (ko) 스페르미딘을 유효성분으로 포함하는 눈 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR102637920B1 (ko) 산수유 추출물을 포함하는 눈 질환 개선 또는 예방용 조성물
KR102611944B1 (ko) 애기우산나물 추출물을 유효성분으로 포함하는 안질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR20160090662A (ko) 쥐눈이콩 추출물을 포함하는 망막질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR20200124107A (ko) 차조기 발효 추출물을 포함하는 망막 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물
KR101644001B1 (ko) 홍삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 노인성 난청 또는 어지럼증의 예방 또는 치료용 조성물
KR20240092308A (ko) 걱 펄프 추출물을 포함하는 녹내장 예방 또는 치료용 조성물
KR102362988B1 (ko) 유청단백 가수분해물 및 인삼열매 추출물을 유효성분으로 함유하는 근기능 개선 또는 근육질환의 개선, 예방 또는 치료용 조성물
WO2024090941A1 (ko) 알로에 속 식물 추출물을 유효성분으로 포함하는 전안부 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
KR102473451B1 (ko) 괭생이모자반 추출물을 포함하는 안구건조증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant