KR102150803B1 - 전혈분석을 위한 신규 형광 화합물 및 이의 제조방법 - Google Patents

전혈분석을 위한 신규 형광 화합물 및 이의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 혈액분석을 통하여 질병의 진단, 치료 및 예후를 예측할 수 있는 전혈분석용 형광 화합물에 관한 것으로서, 전혈분석에 본 발명의 화합물을 이용할 경우에는 적혈구, 백혈구 등 목적 물질의 형태는 그대로 유지할 수 있고 목적 이외의 바이오 물질 등은 용해시킬 수 있어서 타겟에 대한민감도 및 친화도를 높일 수 있고, 상기 혈구세포 핵산의 염색효율을 향상시킬 수 있어서 형광효율이 증가되어 종래의 기술보다 정확한 혈구분석이 가능하며, 이를 통하여 질병의 진단뿐만 아니라, 치료방법 및 예후에 대해서도 정확하게 예측할 수 있다.

Description

전혈분석을 위한 신규 형광 화합물 및 이의 제조방법{Novel fluorescent compound for analyzing complete blood cell and the preparation method thereof}
본 발명은 혈액분석을 통하여 질병의 진단, 치료 및 예후를 예측할 수 있는 전혈분석용 형광 화합물에 관한 것으로서, 전혈분석에 본 발명의 화합물을 이용할 경우에는 적혈구, 백혈구 등의 혈구의 형태를 그대로 보존할 수 있고, 상기 혈구세포 핵산의 염색효율을 향상시킬 수 있어서 형광효율이 증가되어 종래의 기술보다 정확하게 질병을 진단할 수 있다.
전혈구 검사(일반혈액 검사, Complete Blood cell Count, CBC)는 혈액질환의 진단이나 경과 관찰, 혈구 수의 증감이나 형태적 이상을 감별해 감염상태, 혈액응고 능력, 빈혈 유무 및 원인, 비뇨기 계통의 이상과 혈액성분이나 순환기 계통의 이상 등을 알아보기 위한 목적으로 실시되는 건강검진 시나 의사가 처방하는 가장 기본적인 검사 중에 하나이다.
이러한 전혈구의 검사 항목은 백혈구(WBC), 적혈구(RBC), 혈색소(HGB), 적혈구 용적(hematocrit, HCT), 적혈구 평균용적(mean corpuscular volume, MCV), 적혈구 평균 혈색소(mean corpuscular hemoglobin, MCH), 적혈구 혈색소 평균농도(mean corpuscular hemoglobin concentration), 및 혈소판(PLT)가 기본이며, 연령, 성별, 국가, 거주지, 검사방법 및 검사 장비에 따라 차이는 있지만 각 검사 항목별로 일종의 기준치가 제시되는 것이 일반적이다.
전혈분석은 병원 내 환자의 35% 이상이 이용중일만큼 가장 기본적인 검사이면서 특정 질병뿐만 아니라 연관된 다른 질병의 진단과 치료를 위한 기초자료로 활용되고 있어 의료 산업적 시장과 활용 가치가 매우 높다. 그러나 대부분의 병원에서 전혈구 검사에 자동화된 혈구분석기를 사용 중임에도 불구하고 국산 분석 장비는 전무한 상황이며, 여기에 사용되는 혈액 분석용 시약 역시 수입되고 있는 만큼 국내화하는 것이 절실한 실정이다.
혈구 분석기의 제조사마다 차이는 있지만 전혈 샘플을 적정한 방법으로 분석하기 위해 전용 시약을 사용하고 있으며, 이러한 시약의 용도로는 형광 염료를 이용한 DNA, RNA 및 백혈구 염색(fluorescence staining), 적혈구 용혈(hematolysis), 헤모글로빈 산화 시약, 혈액 샘플의 희석(dilution), 단백질 및 용혈성분 세정(cleaning), 고정(attaching) 및 측정 부위에 혈구를 일렬로 배열하기 위한 시스 시약(sheath reagent) 등이 있다.
주로 사용되는 광학분석 장비로는 세포 관찰을 위한 형광 현미경(fluorescence microscope), 공초점 현미경(confocal microscope), 유세포분석기(flow cytometer), 마이크로 어레이(micro array), 정량 중합효소 연쇄반응 장치(qualitative PCR system), 핵산 및 단백질 분리, 분석을 위한 전기영동(electrophoresis) 장치, 실시간 생체 내 영상 장비(in vivo imaging system) 등 연구 목적의 장비 외에도, 면역 분석 기법(immnuno assay)이나 PCR 분석 및 통계기술이 접목된 핵산 및 단백질 진단 키트(또는 바이오칩) 기반 체외 진단(in vitro diagnosis) 장비와 의료 영상 수술(image-guided surgery)을 위한 수술대 및 내시경 장비 등의 진단 및 치료를 위한 것들이 알려져 있으며, 지속적으로 새로운 응용분야 및 더 높은 수준의 해상도 및 데이터 처리 능력을 가진 장비가 개발되고 있다.
일반적으로 혈액분석, 단백질 또는 펩타이드 분석 등 생체 분자의 표지를 위해 사용되는 형광염료(fluorescent dye)는 대부분 안트라닐레이트(anthranilate), 1-알킬틱 이소인돌(1-alkylthic isoindoles), 피롤리논(pyrrolinones), 비메인(bimanes), 벤즈옥사졸(benzoxazole), 벤즈이미다졸(benzimidazole), 벤조퓨란(benzofurazan), 나프탈렌(naphthalenes), 쿠마린(coumarins), 시아닌(cyanine), 스틸벤(stilbenes), 카바졸(carbazoles), 페난트리딘(phenanthridine), 안트라센(anthracenes), 보디피(bodipy), 플로세인(fluoresceins), 에오신(eosins), 로다민(rhodamines), 피렌(pyrenes), 크리센(chrysenes) 및 아크리딘(acridines) 등의 구조가 포함되어 있다.
바이오 분야에서 주로 적용될 수 있는 염료는 가급적 수용액이나 친수성 조건에서 광표백(photobleaching) 및 소광(quenching) 현상이 적고, 다량의 빛을 흡수할 수 있도록 몰흡광계수(molecular extinction coefficient)가 커야 하며, 생체분자 자체의 형광 범위와 멀리 떨어진 500 nm 이상의 가시광선 영역이나 근적외선 영역에 있어야 하고, 다양한 pH 조건에서 안정하여야 하나, 상기 제한 사항을 만족할 수 있는 생체 분자 표지용으로 사용 가능한 염료의 구조는 한정되어 있다.
이러한 요구 조건에 부합하는 형광 색원체로는 시아닌, 로다민, 플로세인, 보디피, 쿠마린, 아크리딘, 피렌 유도체들이 있는데, 염료 단독 또는 생체 분자 구조 내의 특정 치환기와 결합이 가능하도록 반응기를 도입시키기도 하며, 그 중 잔텐(xanthane) 계열의 플로세인 및 로다민과, 폴리메틴(polymethine) 계열의 시아닌 유도체 염료 화합물들이 주로 상품화되어 있다.
특히 시아닌 발색단을 가진 염료 화합물은 다양한 흡수/여기 파장의 화합물을 합성하기 용이하다는 장점 외에도, 일반적으로 광학 및 pH 안정성이 탁월하고, 좁은 흡수 및 발광 파장 범위를 가지며, 500 내지 800 nm의 형광 영역을 갖기 때문에 생체 분자의 자체 형광 영역과 중첩되지 않아 분석이 용이하며, 용매 및 용해도 특성에 따라 다소 차이는 있지만, 높은 몰흡광계수를 나타내는 등 많은 장점이 있어 생물학적 응용에 많이 이용된다.
그러나 상기와 같은 종래의 염료 화합물은 보관 안정성 측면에서 불안정할 뿐만 아니라 생체 분자에 표지된 후에는 시간이 경과함에 따라 보관 안정성과 함께 형광 특성이 급격히 저하되는 문제점을 나타낸다. 따라서 이를 극복하고 산업적으로 유용하게 적용하기 위해서는 광학 및 pH 안정성이 우수하면서도 특정 파장 범위에서 좁은 흡수/발광 파장 범위를 가지면서도 높은 몰흡광계수를 나타내는 신규한 형광염료를 개발하는 것이 중요하다.
또한 전혈분석에 사용되는 형광 화합물을 적혈구, 백혈구 등 목적으로 하는 혈구의 형태를 그대로 유지하고 목적 이외의 바이오물질만을 용해시켜야 하나, 현재 시판되고 있는 대부분의 전혈용 형광 염료 및 시약은 목적 이외의 물질뿐만 아니라 목적물질도 용해하는 문제점이 있어서, 이를 해결하고자 하는 노력이 지속적으로 진행되어 왔다.
한국공개특허 10-2003-0067686 한국등록특허 10-1833020
본 발명은 상기와 같은 전혈분석, 단백질 분석 등 바이오분야에서 형광 화합물을 이용한 분석에 주로 사용되는 신규한 형광 화합물을 제공하기 위한 것이고, 특히 전혈분석에 있어서 분석의 대상이 되는 혈구세포의 형태는 그대로 유지하고 분석대상이 아닌 다른 혈구세포 및 구조물질 등은 용해시킬 수 있는 선택성과 민감성이 탁월한 전혈분석용 형과 화합물을 제공하고자 하는 것이다.
또한, 본 발명에서 제공하는 형광 화합물은 혈구세포 내 핵산 등에 결합하는 효율이 높아서 종래의 형광 화합물의 문제점인 안정성과 형광효율이 시간이 지남에 따라 급격히 저하되는 문제점을 해결할 수 있다.
본 발명이 해결하고자 하는 첫 번째 과제는 전혈분석을 위한 신규한 시아닌계열의 형광 화합물을 제공하기 위한 것이다.
본 발명이 해결하고자 하는 두 번째 과제는 상기 신규한 시아닌계열의 형광 화합물을 포함하는 DNA, RNA 등 핵산을 분석하기 위한 조영제 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명이 해결하고자 하는 세 번째 과제는 상기 신규한 형광 화합물을 제조하기 위한 제조방법을 제공하는 것이다.
상기한 과제를 해결하기 위하여 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 신규한 형광 화합물을 제공한다.
<화학식 1>
Figure 112019110460310-pat00001
상기 화학식 1에서
X는 황이고, R1은 수소 또는 탄소수 1 내지 5의 알콕시이며,
R2는 수소, 브롬 또는 염소이고,
*R3은 탄소수 1 내지 5의 알킬, 탄소수 1 내지 5의 알코올 또는 탄소수 1 내지 5의 알킬로 치환된 페닐이며,
R4는 탄소수 1 내지 8의 알킬, 탄소수 1 내지 5의 알코올, 탄소수 1 내지 5의 디알콜, 탄소수 1 내지 5의 알킬로 치환된 페닐, 탄소수 1 내지 5의 카르복시기로 치환된 페닐, 보론산으로 치환된 페닐 중에서 선택되고, R5는 수소, 브롬 또는 염소이고, n은 1 내지 5의 정수이다.
본 발명에서 제공하는 형광 화합물은 혈액분석을 통하여 질병의 진단, 치료 및 예후를 예측할 수 있는 전혈분석용 형광 화합물에 관한 것이고, 본 발명에서 제공하는 화합물을 이용함으로써 적혈구, 백혈구 등의 혈구의 형태를 그대로 보존할 수 있고, 상기 혈구세포 핵산의 염색효율을 향상시킬 수 있어서 형광효율이 증가되어 종래의 기술보다 정확하게 질병을 진단할 수 있다.
도 1은 본 발명에서 제공하는 형광 화합물이 세포의 핵산에 염색되는 것을 확인한 생세포에서의 형광현미경 분석 사진을 나타낸다.
도 2는 본 발명에서 제공하는 형광 화합물이 고정세포의 핵산에 염색되는 것을 확인한 형광현미경 분석 사진을 나타낸다.
도 3은 본 발명에서 제공하는 형광 화합물이 혈구세포의 핵산에 염색되는 것을 검증하기 위해 백혈구 세포에 염색된 결과를 나타내는 FACS 분석결과를 나타낸다.
이하에서는 본 발명의 실시예를 이용하여, 본 발명의 형광 화합물의 제조방법 및 본 발명의 화합물의 형광 효율 등을 구체적으로 살펴보도록 한다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이의 염을 제공한다.
<화학식 1>
Figure 112019110460310-pat00002
상기 화학식 1에서
X는 황이고, R1은 수소 또는 탄소수 1 내지 5의 알콕시이며,
R2는 수소, 브롬 또는 염소이고,
R3은 탄소수 1 내지 5의 알킬, 탄소수 1 내지 5의 알코올 또는 탄소수 1 내지 5의 알킬로 치환된 페닐이며,
R4는 탄소수 1 내지 8의 알킬, 탄소수 1 내지 5의 알코올, 탄소수 1 내지 5의 디알콜, 탄소수 1 내지 5의 알킬로 치환된 페닐, 탄소수 1 내지 5의 카르복시기로 치환된 페닐, 보론산으로 치환된 페닐 중에서 선택되고,
R5는 수소, 브롬 또는 염소이고, n은 1 내지 5의 정수이다.
이하, 본 발명의 실시예를 통하여 더욱 상세하게 설명하기로 하되, 하기 실시예는 본 발명의 범위를 제한하기 위한 것이 아니며, 본 발명의 이해를 돕기 위한 것으로 서술된 것이다.
아래의 실시예에서 사용되는 화합물 중 1-1, 1-2, 1-3, … 등의 화합물은 본 발명에서 최종적으로 제공하는 신규한 형광 화합물을 나타내고, 이외의 2-1, 3-1, 4-1, … 등의 화합물들은 상기 본 발명에서 최종적으로 제공하는 신규한 형광 화합물을 제조하기 위한 중간체 화합물을 나타낸다.
실시예 1 : 화합물 1-1 의 합성
(화합물 2-1 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00003
5-브로모-2-메틸벤조티아졸 (5-bromo-2-methylbenzothiazole) (1597 mg, 7.0 mmol, 1 eq)을 톨루엔 5 ml 에 녹인 후, 2-아이오도에탄올 (2-iodoethanol) (0.8 ml, 10.3 mmol, 1.47 eq) 을 투입한 후, 115 ℃ 에서 일야 교반하였다. 반응액에 벤젠과 디에틸이더를 투입한 후 얻어진 입자를 필터하여 건조하였다. 건조된 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 2-1을 얻었다(1.25 g, 45 %).
Rf = 0.2 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d4) : δ 8.68 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.39 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.99 (dd, J = 8.7, 1.6 Hz, 1H), 4.85 (t, J = 4.9 Hz, 2H), 3.87 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 3.23 (s, 3H)
(화합물 3-1 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00004
화합물 2-1 (100 mg, 348 umol, 1 eq)을 아세트산 6 ml 에 분산하였다. N,N-디페닐포름아미딘 (N,N-diphenylformamidine) (68 mg, 348 umol, 1 eq) 을 투입한 후 100 ℃에서 2시간 반응 진행하였다. 반응 확인 후 상온으로 냉각 후 동결건조를 진행하였다. 동결건조 완료 후 얻어진 물질은 다음반응을 위해 사용되었다(100 %).
Rf = 0.4 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
(화합물 4-1 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00005
레피딘 (Lepidine) (1 ml, 7.56 mmol, 1 eq) 을 톨루엔 4 ml 에 완용한 후, 아이오도에탄 (Iodoethane) (0.9 ml, 11.34 mmol, 1.5 eq)을 투입하였다. 반응액을 115℃에서 18시간 동안 교반하였다. 슬러리 상태의 반응액을 벤젠과 디에틸이더를 넣고 입자를 생성시킨다. 생성된 입자를 여과 및 건조하여 화합물 4-1을 얻었다(1.5 g, 67%).
Rf = 0.6 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
1H-NMR (DMSO-d4, 400 MHz) δ 9.43 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.55 (dd, J = 8.5, 1.1 Hz, 1H), 8.28-8.23 (m, 1H), 8.09-8.03 (m, 2H), 5.05 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.00 (s, 3H), 1.58 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
(화합물 1-1 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00006
화합물 3-1 (348 umol) 과 화합물 4-1 (60 mg, 348 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-1을 얻었다(42 mg, 24.5 %).
Rf = 0.6 (Silicagel, MC/MeOH 8:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C23H21BrKN2OS 492.49, 측정치 495.2
실시예 2 : 화합물 1-2 의 합성
(화합물 4-2 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00007
7-클로로-4-메틸퀴놀린 (7-chloro-4-methylquinoline) (868 mg, 4.89 mmol, 1 eq)을 톨루엔 5 ml 에 녹인 후, 2-브로모에탄올 (2-bromoethanol) (0.49 ml, 6.37 mmol, 1.3 eq)을 넣었다. 슬러리 상태의 반응액에 벤젠과 디에틸이더를 넣고 고체화하고 감압하에서 건조하여 화합물 4-2를 얻었다(1,500 mg, 88% yield).
1H-NMR (MeOD-d4, 400 MHz) δ 9.18 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 8.71 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.58 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.05 (dd, J = 9.0, 1.8 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 5.12 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 4.15-4.02 (m, 2H), 3.07 (s, 3H).
(화합물 1-2 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00008
화합물 3-1 (348 umol) 과 화합물 4-2 (78 mg, 348 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-2을 얻었다(63 mg, 35.9 %).
Rf = 0.6 (Silicagel, MC/MeOH 8:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C23H20BrClN2OS 503.84, 측정치 505.0
실시예 3 : 화합물 1-3 의 합성
(화합물 4-3 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00009
Lepidine (1.0 mL, 7.56 mmol) 을 toluene (4 mL) 에 녹이고 benzyl bromide (1.1 mL, 9.11 mmol)을 넣었다. 반응액을 115 ℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 슬러리 상태의 반응액에 benzene 과 Et2O을 넣고 고체화하고 감압하에서 건조하여 화합물 4-3 을 회색 고체로 얻었다(2.3 g, 97%).
1H-NMR (DMSO-d4, 400 MHz) δ 9.67 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.56 (dd, J = 8.5, 1.2 Hz, 1H), 8.48 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 8.22-8.16 (m, 2H), 8.04-7.98 (m, 1H), 7.41-7.33 (m, 5H), 6.35 (s, 2H), 3.05 (s, 3H).
(화합물 1-3 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00010
화합물 3-1 (348 umol) 과 화합물 4-3 (82 mg, 348 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-3을 얻었다(76 mg, 42.4 %).
Rf = 0.7 (Silicagel, MC/MeOH 8:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C28H23BrN2OS 515.46, 측정치 515.2
실시예 4 : 화합물 1-4 의 합성
(화합물 4-4 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00011
Lepidine (1.0 mL, 7.56 mmol) 을 toluene (4 mL)에 녹인후 3-Bromo-1,2-propandiol (0.73 mL, 8.32 mmol)을 첨가하였다. 반응액을 115 ℃ 에서 18 시간동안 교반한 후, 반응액을 실온으로 냉각하고 benzene 으로 2회, Et2O로 1회 추출하였다. 유기층을 합친후, 감압 증발시켜 목적 화합물 4-4를 회색 고체로 얻었다(1,784 mg, 88%).
1H-NMR (DMSO-d4, 400 MHz) δ 9.26 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.62 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.56 (dd, J = 8.6, 1.2 Hz, 1H), 8.27-8.22 (m, 1H), 8.08-8.04 (m, 2H), 5.10 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.91 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.40 (s, 1H), 3.03 (s, 3H).
(화합물 1-4 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00012
화합물 3-1 (348 umol) 과 화합물 4-4 (76 mg, 348 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-4을 얻었다(39 mg, 22.4 %)
Rf = 0.5 (Silicagel, MC/MeOH 8:1 v/v).
LC/MS, 계산치 C24H23BrN2O3S 499.42, 측정치 501.2
실시예 5 : 화합물 1-5 의 합성
(화합물 4-5 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00013
7-bromo-4-methylquinoline (1,020 mg, 4.59 mmol)을 toluene (5 mL)에 녹인 후, iodoethane (0.44 mL, 5.51 mmol)을 넣었다. 슬러리 상태의 반응액에 benzene 과 Et2O을 넣고 고체화하고 감압하에서 건조하여 화합물 24 을 회색 고체로 얻었다(1,200 mg, 69%).
1H-NMR (DMSO-d4, 400 MHz) δ 9.40 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 8.89 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 8.47 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.22 (dd, J = 9.0, 1.7 Hz, 1H), 8.09 (dd, J = 6.1, 0.7 Hz, 1H), 5.03 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.98 (s, 3H), 1.55 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
(화합물 1-5 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00014
화합물 3-1 (348 umol) 과 화합물 4-5 (87 mg, 348 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-5을 얻었다(55 mg, 29.7 %).
Rf = 0.6 (Silicagel, MC/MeOH 8:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C23H20Br2N2OS 532.29, 측정치 533.2
실시예 6 : 화합물 1-6 의 합성
(화합물 2-2 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00015
2-methylbenzothiazole (1.0 mL, 7.91 mmol)을 toluene (4 mL)에 녹인 후, benzyl bromide (1.1 mL, 9.49 mmol)를 넣었다. Capped vial에서 반응액을 115 ℃ 에서 20 시간 동안 교반하였다. 슬러리 상태의 반응액에 benzene 및 Et2O를 각 2회씩 사용하여 고체화하였다. 얻어진 고체를 감압에서 건조시켜 화합물 2-2 을 갈색 고체로 얻었다(1.5 g, 63%).
1H-NMR (DMSO-d4, 400 MHz) δ 8.54-8.48 (m, 1H), 8.23-8.18 (m, 1H), 7.87-7.76 (m, 2H), 7.42-7.30 (m, 5H), 6.10 (s, 2H), 3.27 (s, 3H).
(화합물 3-2 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00016
화합물 2-2 (100 mg, 416 umol, 1 eq)을 아세트산 10 ml 에 분산하였다. N,N-디페닐포름아미딘 (N,N-diphenylformamidine) (82 mg, 416 umol, 1 eq) 을 투입한 후 100 ℃에서 2시간 반응 진행하였다. 반응 확인 후 상온으로 냉각 후 동결건조를 진행하였다. 동결건조 완료 후 얻어진 물질은 다음반응을 위해 사용되었다(100 %).
Rf = 0.6 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
(화합물 1-6 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00017
화합물 3-2 (416 umol) 과 화합물 4-5 (104 mg, 416 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-6을 얻었다(80 mg, 38.4 %).
Rf = 0.6 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C28H24BrN2S+ 500.47, 측정치 499.1
실시예 7 : 화합물 1-7 의 합성
(화합물 1-7 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00018
화합물 3-2 (416 umol) 과 화합물 4-4 (91 mg, 416 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-7을 얻었다(54 mg, 27.8 %).
Rf = 0.4 (Silicagel, MC/MeOH 8:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C29H26N2O2S 466.59, 측정치 467.2
실시예 8 : 화합물 1-8 의 합성
(화합물 1-8 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00019
화합물 3-2 (416 umol) 과 화합물 4-1 (73 mg, 416 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-8을 얻었다(56 mg, 27.8 %).
Rf = 0.6 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C28H25N2S+ 421.58, 측정치 421.5
실시예 9 : 화합물 1-9 의 합성
(화합물 1-9 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00020
화합물 3-2 (416 umol) 과 화합물 4-2 (93 mg, 416 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-9을 얻었다(53 mg, 27.0 %).
Rf = 0.4 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C28H24ClN2OS+ 472.02, 측정치 471.2
실시예 10 : 화합물 1-10 의 합성
(화합물 4-6 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00021
7-bromo-4-methylquinoline (1,038 mg, 4.67 mmol)을 toluene (5 mL)에 녹인후 2-iodoethanol (0.47 mL, 6.07 mmol)을 넣었다. 슬러리 상태의 반응액에 benzene 과 Et2O을 넣고 고체화하고 감압하에서 건조하여 화합물 4-6 를 회색 고체로 얻었다(1,700 mg, 92 %).
1H-NMR (DMSO-d4, 400 MHz) δ 9.25 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 8.92 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 8.47 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.22 (dd, J = 9.0, 1.7 Hz, 1H), 8.10 (dd, J = 6.1, 0.7 Hz, 1H), 5.16-5.05 (m, 3H), 3.38 (m, 2H), 3.00 (s, 3H).
(화합물 1-10 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00022
화합물 3-2 (416 umol) 과 화합물 4-6 (111 mg, 416 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-10을 얻었다(70 mg, 32.6 %).
Rf = 0.4 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C28H24BrN2OS+ 516.47, 측정치 515.3
실시예 11 : 화합물 1-11 의 합성
(화합물 2-3 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00023
2-methylbenzothiazole (1.0 mL, 7.81 mmol)을 MeCN (8 mL) 에녹인후, iodomethane (1.0 mL, 16.06 mmol)을 가하였다. 반응액을 capped vial 에 담아 70 ℃ 에서 18 시간동안 교반하였다. 반응액을 EtOAc (x 2) 와Et2O로 입자 생성하고 감압하에서 건조하여 화합물 2-3 을 노란색 고체로 얻었다 (2,044 mg, 89%).
1H-NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.43 (dd, J = 8.1, 1.2, 0.6 Hz, 1H), 8.37-8.22 (m, 1H), 7.90 (dd, J = 8.5, 7.3, 1.3 Hz, 1H), 7.81 (ddd, J = 8.2, 7.3, 1.1 Hz, 1H), 4.20 (s, 3H), 3.17 (s, 3H).
(화합물 3-3 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00024
화합물 2-3 (80 mg, 487 umol, 1 eq)을 아세트산 10 ml 에 분산하였다. N,N-디페닐포름아미딘 (N,N-diphenylformamidine) (96 mg, 487 umol, 1 eq) 을 투입한 후 100 ℃에서 2시간 반응 진행하였다. 반응 확인 후 상온으로 냉각 후 동결건조를 진행하였다. 동결건조 완료 후 얻어진 물질은 다음반응을 위해 사용되었다(100 %).
Rf = 0.4 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
(화합물 1-11 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00025
화합물 3-3 (487 umol) 과 화합물 4-3 (114 mg, 487 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-11을 얻었다(39 mg, 19.6 %).
Rf = 0.6 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C27H23N2S+ 407.55, 측정치 407.4
실시예 12 : 화합물 1-12 의 합성
(화합물 1-12 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00026
화합물 3-3 (487 umol) 과 화합물 4-1 (84 mg, 487 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-12을 얻었다(45 mg, 26.7 %).
Rf = 0.6 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C22H21N2S+ 345.48, 측정치 345.1
실시예 13 : 화합물 1-13 의 합성
(화합물 1-13 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00027
화합물 3-3 (487 umol) 과 화합물 4-5 (122 mg, 487 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-13을 얻었다(58 mg, 28.1 %).
Rf = 0.6 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C22H20BrN2S+ 424.38, 측정치 425.0
실시예 14 : 화합물 1-14 의 합성
(화합물 1-14 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00028
화합물 3-3 (487 umol) 과 화합물 4-6 (131 mg, 487 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-14을 얻었다(57 mg, 26.6 %).
Rf = 0.5 (Silicagel, MC/MeOH 8:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C22H20BrN2OS+ 440.38, 측정치 441.0
실시예 15 : 화합물 1-15 의 합성
(화합물 1-15 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00029
화합물 3-3 (487 umol) 과 화합물 4-2 (109 mg, 487 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-15을 얻었다(88 mg, 45.6 %).
Rf = 0.5 (Silicagel, MC/MeOH 8:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C22H20ClN2OS+ 395.92, 측정치 395.1
실시예 16 : 화합물 1-16 의 합성
(화합물 4-7 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00030
Lepidine (0.7 mL, 5.29 mmol)을 MeCN (8 mL)에 녹인 후, 1-iodooctane (1.3 mL, 6.88 mmol)을 가하였다. 반응액을 capped vial 에 담아, 90 ℃ 에서 24 시간 동안 교반하였다. 반응액을 실온으로 냉각하고 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 (0 to 5% MeOH-CH2Cl2) 정제하여 화합물 4-7 을 점도가 있는 검은색 오일상으로 얻었다(1.9 g, 98%).
1H-NMR(400 MHz, MeOD-d4) δ 9.25 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 8.60-8.55 (m, 1H), 8.53 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.30-8.24 (m, 1H), 8.10-8.03 (m, 1H), 7.97 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.03 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 3.10-3.03 (m, 3H), 2.15-2.03 (m, 2H), 1.54-1.23 (m, 10H), 0.89 (t, J = 6.9 Hz, 3H).
(화합물 1-16 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00031
화합물 3-3 (487 umol) 과 화합물 4-7 (125 mg, 487 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-16을 얻었다(81 mg, 38.7 %).
Rf = 0.7 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C28H33N2S+ 429.64, 측정치 429.2
실시예 17 : 화합물 1-17 의 합성
(화합물 1-17 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00032
화합물 3-2 (416 umol) 과 화합물 4-7 (107 mg, 416 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-17을 얻었다(79 mg, 37.5 %).
Rf = 0.7 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C34H37N2S+ 505.74, 측정치 505.3
실시예 18 : 화합물 1-18 의 합성
(화합물 2-4 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00033
5-chloro-2-methylbenzothiazole (2,500 mg, 13.61 mmol)를 MeCN (10 mL)에 녹인후, ethyl iodide (2.7 mL, 34.03 mmol)를 가하였다. 반응액을 90 ℃ 에서 5일 동안 교반하였다. 얻어진 슬러리를 EtOAc 와 Et2O를 이용하여 고체화한 후 감암하에서 건조하여 화합물 2-4 를 미색의 고체로 얻었다(4.5 g, 98 %).
1H-NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.59 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.46 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.88 (dd, J = 8.8, 1.9 Hz, 1H), 4.75 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 3.21 (s, 3H), 1.44 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
(화합물 3-4 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00034
화합물 2-4 (80 mg, 376 umol, 1 eq)을 아세트산 10 ml 에 분산하였다. N,N-디페닐포름아미딘 (N,N-diphenylformamidine) (74 mg, 376 umol, 1 eq) 을 투입한 후 100 ℃에서 2시간 반응 진행하였다. 반응 확인 후 상온으로 냉각 후 동결건조를 진행하였다. 동결건조 완료 후 얻어진 물질은 다음반응을 위해 사용되었다(100 %).
Rf = 0.5 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
(화합물 1-18 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00035
화합물 3-4 (376 umol) 과 화합물 4-4 (82 mg, 376 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-18을 얻었다(35 mg, 21.2 %).
Rf = 0.4 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C24H23ClN2O2S 438.97, 측정치 439.5
실시예 19 : 화합물 1-19 의 합성
(화합물 1-19 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00036
화합물 3-4 (376 umol) 과 화합물 4-1 (65 mg, 376 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-19을 얻었다(54 mg, 36.5 %).
Rf = 0.6 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C23H22ClN2S 393.95, 측정치 393.1
실시예 20 : 화합물 1-20 의 합성
(화합물 1-20 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00037
화합물 3-4 (376 umol) 과 화합물 4-2 (84 mg, 376 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-20을 얻었다(50 mg, 29.9 %).
Rf = 0.5 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C23H21Cl2N2OS+ 444.4, 측정치 443.0
실시예 21 : 화합물 1-21 의 합성
(화합물 3-5 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00038
화합물 2-3 (80 mg, 487 umol, 1 eq)을 아세트산 10 ml 에 분산하였다. Malonaldehyde Dianilide Hydrochloride (126 mg, 487 umol, 1 eq) 을 투입한 후 90 ℃에서 2시간 반응 진행하였다. 반응 확인 후 상온으로 냉각 후 동결건조를 진행하였다. 동결건조 완료 후 얻어진 물질은 다음반응을 위해 사용되었다(100 %).
Rf = 0.4 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
(화합물 1-21 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00039
화합물 3-5 (487 umol) 과 화합물 4-7 (125 mg, 487 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-21을 얻었다(80 mg, 38.7 %).
Rf = 0.7 (Silicagel, MC/MeOH 8:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C30H35N2S+ 455.68, 측정치 455.3
실시예 22 : 화합물 1-22 의 합성
(화합물 3-6 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00040
화합물 2-2 (100 mg, 416 umol, 1 eq)을 아세트산 10 ml 에 분산하였다. Malonaldehyde Dianilide Hydrochloride (108 mg, 416 umol, 1 eq) 을 투입한 후 90 ℃에서 2시간 반응 진행하였다. 반응 확인 후 상온으로 냉각 후 동결건조를 진행하였다. 동결건조 완료 후 얻어진 물질은 다음반응을 위해 사용되었다(100 %).
Rf = 0.5 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
(화합물 1-22 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00041
화합물 3-6 (416 umol) 과 화합물 4-7 (107 mg, 487 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-22을 얻었다(92 mg, 41.6 %).
Rf = 0.6 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C36H39N2S+ 531.77, 측정치 531.5
실시예 23 : 화합물 1-23 의 합성
(화합물 4-8 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00042
Lepidine (1.0 mL, 7.56 mmol) 을 toluene (4 mL)에 녹인후 2-bromoethyl acetate (1.0 mL, 9.07 mmol)을 첨가하였다. 반응액을 115 ℃에서 18 시간동안 교반한 후, 반응액을 실온으로 냉각하고 benzene 으로 2회, Et2O로 1회 추출하였다. 유기층을 합친후, 감압 증발시켜 목적 화합물 4-8을 회색 고체로 얻었다(1,990 mg, 84%).
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.41 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.66 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.56 (dd, J = 8.4, 1.2 Hz, 1H), 8.32-8.26 (m, 1H), 8.12-8.04 (m, 2H), 5.32 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 4.56 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.03 (s, 3H), 1.89 (s, 3H).
(화합물 1-23 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00043
화합물 3-5 (321 umol) 과 화합물 4-8 (74 mg, 321 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-23을 얻었다(20 mg, 14.5 %).
Rf = 0.5 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C26H25N2O2S+ 429.55, 측정치 429.1
실시예 24 : 화합물 1-24 의 합성
(화합물 1-24 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00044
화합물 3-4 (60 mg, 167 umol) 과 화합물 4-6 (45 mg, 167 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-24을 얻었다(18 mg, 22.1 %).
Rf = 0.7 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C23H21BrClN2OS+ 488.85, 측정치 489.0
실시예 25 : 화합물 1-25 의 합성
(화합물 1-25 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00045
화합물 3-4 (60 mg, 167 umol) 과 화합물 4-5 (42 mg, 167 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-25을 얻었다(16 mg, 20.3 %).
Rf = 0.4 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C23H21BrClN2S+ 472.85, 측정치 473.0
실시예 26 : 화합물 1-26 의 합성
(화합물 1-26 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00046
화합물 3-4 (80 mg, 223 umol) 과 화합물 4-8 (52 mg, 223 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-26을 얻었다(8 mg, 7.6 %).
Rf = 0.4 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C25H24ClN2O2S+ 451.99, 측정치 451.1
실시예 27 : 화합물 1-27 의 합성
(화합물 1-27 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00047
화합물 3-4 (80 mg, 223 umol) 과 화합물 4-3 (52 mg, 223 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-27을 얻었다(13 mg, 12.7 %).
Rf = 0.4 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C28H24ClN2S+ 456.02, 측정치 455.1
실시예 28 : 화합물 1-28 의 합성
(화합물 2-5 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00048
5-chloro-2-methylbenzothiazole (1,286 mg, 7.0 mmol)을 toluene (5 mL)에 녹인후, 2-iodoethanol (0.7 mL, 9.1 mmol)을 넣었다. 반응액을 115 ℃ 에서 18 시간 동안 교반하였다. 슬러리 상태의 반응액에 benzene 과 Et2O을 넣고 고체화하고, 감압 증발시켜 조생성물을 얻었다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 2-5 을 얻었다(950 mg, 38%).
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.56 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.46 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.88 (dd, J = 8.8, 1.8 Hz, 1H), 5.20 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.85 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.91-3.86 (m, 2H), 3.22 (s, 3H).
(화합물 3-7 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00049
화합물 2-5 (100 mg, 437 umol, 1 eq)을 아세트산 10 ml 에 분산하였다. N,N-디페닐포름아미딘 (N,N-diphenylformamidine) (86 mg, 437 umol, 1 eq) 을 투입한 후 100 ℃에서 2시간 반응 진행하였다. 반응 확인 후 상온으로 냉각 후 동결건조를 진행하였다. 동결건조 완료 후 얻어진 물질은 다음반응을 위해 사용되었다(100 %).
Rf = 0.4 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
(화합물 1-28 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00050
화합물 3-7 (85 mg, 227 umol) 과 화합물 4-6 (61 mg, 227 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-28을 얻었다(4 mg, 2.9 %).
Rf = 0.7 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C23H20BrClN2O2S 503.84, 측정치 505.0
실시예 29 : 화합물 1-29 의 합성
(화합물 1-29 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00051
화합물 3-7 (85 mg, 227 umol) 과 화합물 4-5 (58 mg, 227 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-29을 얻었다(19 mg, 17.2 %).
Rf = 0.5 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C23H20BrClN2OS 487.84, 측정치 489.0
실시예 30 : 화합물 1-30 의 합성
(화합물 1-30 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00052
화합물 3-7 (62 mg, 166 umol) 과 화합물 4-8 (58 mg, 166 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-30을 얻었다(7 mg, 8.3 %).
Rf = 0.6 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C25H23ClN2O3S 466.98, 측정치 467.1
실시예 31 : 화합물 1-31 의 합성
(화합물 1-31 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00053
화합물 3-7 (62 mg, 166 umol) 과 화합물 4-3 (39 mg, 166 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-31을 얻었다(10 mg, 12.0 %).
Rf = 0.7 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C28H23ClN2OS 471.01, 측정치 471.1
실시예 32 : 화합물 1-32 의 합성
(화합물 1-32 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00054
화합물 3-7 (62 mg, 166 umol) 과 화합물 4-4 (36 mg, 166 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-32을 얻었다(11 mg, 14.4 %).
Rf = 0.3 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C24H23ClN2O3S 454.97, 측정치 455.1
실시예 33 : 화합물 1-33 의 합성
(화합물 1-33 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00055
화합물 3-7 (62 mg, 166 umol) 과 화합물 4-1 (29 mg, 166 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-33을 얻었다(13 mg, 19.2 %).
Rf = 0.3 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C23H21ClN2OS 408.11, 측정치 409.1
실시예 34 : 화합물 1-34 의 합성
(화합물 1-34 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00056
화합물 3-7 (100 mg, 267 umol) 과 화합물 4-2 (60 mg, 267 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-34을 얻었다(25 mg, 20.3 %).
Rf = 0.3 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C23H20Cl2N2O2S 458.06, 측정치 461.0
실시예 35 : 화합물 1-35 의 합성
(화합물 4-9 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00057
Lepidine (1.0 mL, 7.56 mmol)을 MeCN (8 mL)에 녹인후, 2-iodoethanol (0.8 mL, 10.28 mmol)을 가하였다. 반응액을capped vial 에 담아 90 ℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응액을 EtOAc 와 Et2O을 사용하여 고체를 얻고, 감압하에서 건조하여 화합물 4-9 를 흰색고체로 얻었다(1,910 mg, 80%).
1H-NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.24 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 8.61 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 8.55 (dd, J = 8.5, 1.2 Hz, 1H), 8.28-8.20 (m, 1H), 8.11-8.01 (m, 2H), 5.14 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 5.12-5.04 (m, 2H), 3.96-3.86 (m, 2H), 3.02 (d, J = 0.6 Hz, 3H).
(화합물 1-35 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00058
화합물 3-1 (100 mg, 239 umol) 과 화합물 4-9 (45 mg, 239 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-35을 얻었다(12 mg, 10.7 %).
Rf = 0.7 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C23H21BrN2O2S 468.05, 측정치 471.2
실시예 36 : 화합물 1-36 의 합성
(화합물 1-36 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00059
화합물 3-1 (100 mg, 239 umol) 과 화합물 4-6 (64 mg, 239 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-36을 얻었다(14 mg, 10.7 %).
Rf = 0.4 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C23H20Br2N2O2S 545.96, 측정치 549.2
실시예 37 : 화합물 1-37 의 합성
(화합물 2-6 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00060
2-methylbenzothiazole (1.0 mL, 7.91 mmol)을 MeCN (8 mL) 에녹인후, 2-iodoethanol (0.8 mL, 10.28 mmol)을 가하였다. 반응액을 90 ℃ 에서 72 시간 동안 교반하였다. 반응액에서 침전이 발생할때까지 hexane 을 가한 후, EtOAc 와 Et2O을 사용하여 고체화 한 후, 감압하에 건조하여 화합물 2-6 를 흰색 고체로 얻었다(922 mg, 36%).
1H-NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.50-8.43 (m, 1H), 8.33 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.88 (ddd, J = 8.5, 7.3, 1.3 Hz, 1H), 7.80 (ddd, J = 8.2, 7.3, 1.0 Hz, 1H), 5.21 (t, J = 4.9 Hz, 1H), 4.91-4.83 (m, 2H), 3.97-3.81 (m, 2H), 3.23 (s, 3H).
(화합물 3-8 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00061
화합물 2-6 (100 mg, 514 umol, 1 eq)을 아세트산 10 ml 에 분산하였다. N,N-디페닐포름아미딘 (N,N-diphenylformamidine) (101 mg, 514 umol, 1 eq) 을 투입한 후 100 ℃에서 2시간 반응 진행하였다. 반응 확인 후 상온으로 냉각 후 동결건조를 진행하였다. 동결건조 완료 후 얻어진 물질은 다음반응을 위해 사용되었다(100 %).
Rf = 0.6 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
(화합물 1-37 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00062
화합물 3-8 (100 mg, 336 umol) 과 화합물 4-9 (63 mg, 336 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-37을 얻었다(17 mg, 13.0 %).
Rf = 0.5 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C23H22N2O2S 390.14, 측정치 391.1
실시예 38 : 화합물 1-38 의 합성
(화합물 2-7 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00063
2,6-dimethylbenzothiazole (1.0 mL, 6.98 mmol)을 MeCN (7 mL) 에 녹인후, 2-iodoethanol (0.71 mL, 9.08 mmol)을 가하였다. 반응액을 capped vial 에 담아, 90 ℃ 에서 10 일 동안 교반하였다. 반응액을 진공하에서 농축하고 잔사를 EtOAc 와 Et2O로 처리하여 고체를 얻고 감압하에서 건조하여 화합물 2-7 을 녹회색의 고체로 얻었다(1,729 mg, 75%).
1H-NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.26-8.16 (m, 2H), 7.75-7.63 (m, 1H), 5.35-5.08 (m, 1H), 4.90-4.76 (m, 2H), 3.88 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.20 (s, 3H), 2.53 (s, 3H).
(화합물 3-9 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00064
화합물 2-7 (100 mg, 480 umol, 1 eq)을 아세트산 10 ml 에 분산하였다. N,N-디페닐포름아미딘 (N,N-diphenylformamidine) (94 mg, 480 umol, 1 eq) 을 투입한 후 100 ℃에서 2시간 반응 진행하였다. 반응 확인 후 상온으로 냉각 후 동결건조를 진행하였다. 동결건조 완료 후 얻어진 물질은 다음반응을 위해 사용되었다(100 %).
Rf = 0.5 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
(화합물 1-38 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00065
화합물 3-9 (88 mg, 282 umol) 과 화합물 4-9 (53 mg, 282 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-38을 얻었다(15 mg, 13.2 %).
Rf = 0.5 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C24H24N2O2S 404.16, 측정치 405.4
실시예 39 : 화합물 1-39 의 합성
(화합물 2-8 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00066
6-methoxy-2-methylbenzothiazole (1.0 mL, 6.72 mmol)을 MeCN (7 mL) 에 녹인후, 2-iodoethanol (0.68 mL, 8.73 mmol)을 가하였다. 반응액을 capped vial에 담아 90 ℃에서 10 일 동안 교반하였다. 반응액을 진공하에서 농축하고 잔사를 EtOAc 와 Et2O을 사용하여 고체화 한 후, 감압하에서 건조하여 화합물 2-8 을 연갈색의 고체로 얻었다(1,750 mg, 74%).
1H-NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.22 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 9.3, 2.6 Hz, 1H), 5.36-5.09 (m, 1H), 4.81 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.95-3.83 (m, 5H), 3.17 (s, 3H).
(화합물 3-10 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00067
화합물 2-8 (100 mg, 445 umol, 1 eq)을 아세트산 10 ml 에 분산하였다. N,N-디페닐포름아미딘 (N,N-diphenylformamidine) (87 mg, 445 umol, 1 eq) 을 투입한 후 100 ℃에서 2시간 반응 진행하였다. 반응 확인 후 상온으로 냉각 후 동결건조를 진행하였다. 동결건조 완료 후 얻어진 물질은 다음반응을 위해 사용되었다(100 %).
Rf = 0.5 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
(화합물 1-39 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00068
화합물 3-10 (88 mg, 269 umol) 과 화합물 4-9 (51 mg, 269 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-39 을 얻었다(12 mg, 10.6 %).
Rf = 0.5 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C24H24N2O3S 420.52, 측정치 421.4
실시예 40 : 화합물 1-40 의 합성
(화합물 1-40 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00069
화합물 3-8 (87 mg, 293 umol) 과 화합물 4-3 (69 mg, 293 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-40 을 얻었다(23 mg, 18.0 %).
Rf = 0.7 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C28H24N2OS 436.16, 측정치 438.2
실시예 41 : 화합물 1-41 의 합성
(화합물 4-10 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00070
Lepidine (0.7 mL, 5.29 mmol)을 MeCN (8 mL) 에 녹인후, 3,5-dimethoxybenzyl bromide (1591 mg, 6.88 mmol)을 가하였다. 반응액을 capped vial 에 담아 90 ℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응액을 원심분리한 후, 상등액을 제거하고 남은 잔사를 EtOAc 와 Et2O 로 고체화 한 후 감압건조하여 화합물 4-10 을 흰색 고체로 얻었다(1,877 mg, 95%).
1H-NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.55 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 8.55 (dd, J = 8.5, 1.1 Hz, 1H), 8.47 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 8.24-8.17 (m, 1H), 8.17-8.12 (m, 1H), 8.07-7.98 (m, 1H), 6.53-6.47 (m, 3H), 6.20 (s, 2H), 3.70 (s, 6H), 3.04 (s, 3H).
(화합물 1-41 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00071
화합물 3-8 (87 mg, 293 umol) 과 화합물 4-10 (86 mg, 293 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-41 을 얻었다(16 mg, 11.0 %).
Rf = 0.7 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C30H28N2O3S 496.18, 측정치 497.4
실시예 42 : 화합물 1-42 의 합성
(화합물 4-11 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00072
Lepidine (0.7 mL, 5.29 mmol)을 MeCN (8 mL)에 녹인후, methyl 2-(bromomethyl)phenylboronic acid (1167 mg, 5.43 mmol)을 가하였다. 반응액을 capped vial 에 담아 90 ℃에서 40 시간 동안 교반하였다. 반응액을 원심분리하여 상등액을 제거하고, 남은 잔사를 EtOAc 과 Et2O을 사용하여 고체화 한 후, 갑압하에서 건조하여 화합물 4-11 을 흰색 고체로 얻었다(962 mg, 51%).
1H-NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.66 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.48 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.18 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 8.01 (t, J= 7.5 Hz, 1H), 7.54-7.20 (m, 5H), 6.35 (s, 2H), 3.05 (s, 3H)
(화합물 1-42 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00073
화합물 3-3 (127 mg, 322 umol) 과 화합물 4-11 (90 mg, 322 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-42 을 얻었다(18 mg, 12.4 %).
Rf = 0.6 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C27H24BN2O2S+ 451.16, 측정치 451.0
실시예 43 : 화합물 1-43 의 합성
(화합물 4-12 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00074
Lepidine (0.7 mL, 5.29 mmol)을 MeCN (8 mL)에 녹인후, methyl 4-(bromethyl)benzoate (1,576 mg, 6.88 mmol)을 가하였다. 반응액을 capped vial에 담아 90 ℃에서 72 시간 동안 교반하였다. 반응액을 원심분리한 후, 상등액을 제거하고 남은 잔사를 EtOAc 와 Et2O 로 고체화 한 후, 감압하에서 건조하여 화합물 4-12 를 회색 고체로 얻었다(1,905 mg, 97%).
1H-NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.74-9.61 (m, 1H), 8.57 (dd, J = 8.5, 1.0 Hz, 1H), 8.37 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 8.21 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.20-8.12 (m, 1H), 8.05-7.99 (m, 1H), 7.94 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.45 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.44 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.06 (s, 3H).
(화합물 1-43 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00075
화합물 3-8 (85 mg, 287 umol) 과 화합물 4-12 (84 mg, 287 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-43 을 얻었다(15 mg, 10.6 %).
Rf = 0.7 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C30H26N2O3S 494.17, 측정치 495.4
실시예 44 : 화합물 1-44 의 합성
(화합물 1-44 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00076
화합물 3-8 (89 mg, 300 umol) 과 화합물 4-6 (80 mg, 300 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-44 을 얻었다(27 mg, 19.2 %).
Rf = 0.4 (Silicagel, MC/MeOH 5:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C23H21BrN2O2S 468.05, 측정치 469.0
실시예 45 : 화합물 1-45 의 합성
(화합물 1-45 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00077
화합물 3-2 (34 mg, 100 umol) 과 화합물 4-3 (23 mg, 100 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-45 을 얻었다(22 mg, 45.5 %).
Rf = 0.4 (Silicagel, MC/MeOH 5:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C33H27N2S+ 483.19, 측정치 483.0
실시예 46 : 화합물 1-46 의 합성
(화합물 1-46 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00078
화합물 3-7 (146 mg, 441 umol) 과 화합물 4-9 (83 mg, 441 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-46 을 얻었다(14 mg, 7.5 %).
Rf = 0.3 (Silicagel, MC/MeOH 5:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C23H21ClN2O2S 424.1, 측정치 425.1
실시예 47 : 화합물 1-47 의 합성
(화합물 3-11 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00079
화합물 2-5 (100 mg, 439 umol, 1 eq)을 아세트산 10 ml 에 분산하였다. Malonaldehyde Dianilide Hydrochloride (114 mg, 439 umol, 1 eq) 을 투입한 후 90 ℃에서 2시간 반응 진행하였다. 반응 확인 후 상온으로 냉각 후 동결건조를 진행하였다. 동결건조 완료 후 얻어진 물질은 다음반응을 위해 사용되었다(100 %).
Rf = 0.4 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
(화합물 1-47 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00080
화합물 3-11 (439 umol) 과 화합물 4-9 (83 mg, 441 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-47 을 얻었다(18 mg, 9.1 %).
Rf = 0.3 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C25H23ClN2O2S 450.12, 측정치 451.2
실시예 48 : 화합물 1-48 의 합성
(화합물 3-12 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00081
화합물 2-6 (100 mg, 515 umol, 1 eq)을 아세트산 10 ml 에 분산하였다. Malonaldehyde Dianilide Hydrochloride (133 mg, 515 umol, 1 eq) 을 투입한 후 90 ℃에서 2시간 반응 진행하였다. 반응 확인 후 상온으로 냉각 후 동결건조를 진행하였다. 동결건조 완료 후 얻어진 물질은 다음반응을 위해 사용되었다(100 %).
Rf = 0.4 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
(화합물 1-48 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00082
화합물 3-12 (515 umol) 과 화합물 4-6 (138 mg, 515 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-48 을 얻었다(21 mg, 8.3 %).
Rf = 0.4 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C25H23BrN2O2S 494.07, 측정치 495.1
실시예 49 : 화합물 1-49 의 합성
(화합물 1-49 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00083
화합물 3-4 (471 umol) 과 화합물 4-9 (89 mg, 471 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-49 을 얻었다(44 mg, 22.8 %).
Rf = 0.5 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C23H22ClN2OS+ 409.11, 측정치 409.1
실시예 50 : 화합물 1-50 의 합성
(화합물 3-13 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00084
화합물 2-4 (100 mg, 471 umol, 1 eq)을 아세트산 10 ml 에 분산하였다. Malonaldehyde Dianilide Hydrochloride (122 mg, 471 umol, 1 eq) 을 투입한 후 90 ℃에서 2시간 반응 진행하였다. 반응 확인 후 상온으로 냉각 후 동결건조를 진행하였다. 동결건조 완료 후 얻어진 물질은 다음반응을 위해 사용되었다(100 %).
Rf = 0.5 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
(화합물 1-50 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00085
화합물 3-13 (471 umol) 과 화합물 4-9 (89 mg, 471 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-50 을 얻었다(38 mg, 18.5 %).
Rf = 0.5 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C25H24ClN2OS+ 435.13 측정치 435.1
실시예 51 : 화합물 1-51 의 합성
(화합물 1-51 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00086
화합물 3-5 (471 umol) 과 화합물 4-9 (89 mg, 471 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-51 을 얻었다(30 mg, 16.5 %).
Rf = 0.5 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C24H23N2OS+ 387.15 측정치 387.1
실시예 52 : 화합물 1-52 의 합성
(화합물 1-52 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00087
화합물 3-3 (336 umol) 과 화합물 4-9 (63 mg, 336 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-52 을 얻었다(51 mg, 42.0 %).
Rf = 0.6 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C22H21N2OS+ 361.48 측정치 362.9
실시예 53 : 화합물 1-53 의 합성
(화합물 1-53 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00088
화합물 3-3 (458 umol) 과 화합물 4-4 (100 mg, 458 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-53 을 얻었다(49 mg, 27.3 %).
Rf = 0.6 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C23H23N2O2S+ 391.51 측정치 391.1
실시예 54 : 화합물 1-54 의 합성
(화합물 1-54 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00089
화합물 3-5 (458 umol) 과 화합물 4-4 (100 mg, 458 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-54 을 얻었다(76 mg, 39.8 %).
Rf = 0.6 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C25H25N2O2S+ 417.16 측정치 417.3
실시예 55 : 화합물 1-55 의 합성
(화합물 5-1 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00090
4,7-dichloroquinloine (1500 mg, 7.57 mmol) 와 Fe(acac)3 (130mg, 0.38 mmol)을 넣은후 아르곤으로 치환하고 THF (38 mL) 와 NMP (9.5 mL)를 넣었다. 반응액을 0 ℃로 냉각하고, MeMgBr (1.4 M in 1:3 THF:toluene, 8.8 mL)을 첨가하였다. 아르곤 대기하에서 반응액을 실온에서 4시간 동안 교반한 후, brine (50 mL)을 넣어 반응을 종결시켰다. 반응액에 EtOAc (150 mL)를 첨가하고 30 분 동안 교반한 후 층분리하고, 유기층을 brine 으로 2회 세척하였다. 유기층을 무수 MgSO4로 건조 후 진공하에서 농축하여 조생성물을 얻었다. 크로마토그래피를 통하여 화합물 5-1 을 흰색 고체로 얻었다(910 mg, 68%).
1H-NMR (CDCl3, 400MHz) δ 8.77 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.51 (dd, J = 8.9, 2.2 Hz, 1H), 7.22 (dd, J = 4.4, 0.9 Hz, 1H), 2.69 (d, J = 0.9 Hz, 3H).
(화합물 4-13 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00091
화합물 5-1 (901 mg, 5.07 mmol) 을 toluene (5 mL) 에 녹이고 iodoethane (0.5 mL, 6.09 mmol)을 넣었다. 반응액을 115 ℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 슬러리 상태의 반응액에 benzene 과 Et2O을 넣고 고체화하고 감압하에서 건조하여 화합물 4-13 을 회색 고체로 얻었다(1,650 mg, 98%).
1H-NMR (MeOD-d4, 400 MHz) δ 9.29 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 8.67 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.57 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.05 (dd, J = 9.0, 1.8 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 5.06 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.05 (s, 3H), 1.70 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
(화합물 1-55 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00092
화합물 3-12 (484 umol) 과 화합물 4-13 (100 mg, 484 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-55 을 얻었다(50 mg, 23.7 %).
Rf = 0.5 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C25H23ClN2OS 434.98 측정치 434.1
실시예 56 : 화합물 1-56 의 합성
(화합물 2-9 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00093
5-bromo-2-methylbenzothiazole (1597 mg, 7.0 mmol)을 toluene (5 mL) 에 녹이고, iodoethane (0.7 mL, 8.5 mmol)을 넣었다. 반응액을 115 ℃에서 40 시간 동안 교반하였다. 슬러리 상태의 반응액에 benzene 과 Et2O을 넣고 고체화하고 감압하에서 건조하여 화합물 2-9 를 회색 고체로 얻었다(900 mg, 21%).
1H-NMR (MeOD-d4, 400 MHz) δ 8.70 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.40 (d, J = 8.8, Hz, 1H), 7.84 (dd, J = 8.8, 1.6 Hz, 1H), 4.75 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 3.22 (s, 3H). 1.43 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
(화합물 3-14 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00094
화합물 2-9 (100 mg, 389 umol, 1 eq)을 아세트산 10 ml 에 분산하였다. N,N-디페닐포름아미딘 (N,N-diphenylformamidine) (76 mg, 389 umol, 1 eq) 을 투입한 후 100 ℃에서 2시간 반응 진행하였다. 반응 확인 후 상온으로 냉각 후 동결건조를 진행하였다. 동결건조 완료 후 얻어진 물질은 다음반응을 위해 사용되었다(100 %).
Rf = 0.6 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
(화합물 1-56 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00095
화합물 3-14 (531 umol) 과 화합물 4-9 (100 mg, 531 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-56 을 얻었다(63 mg, 26.1 %).
Rf = 0.5 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C23H22BrN2OS+ 454.4 측정치 455.0
실시예 57 : 화합물 1-57 의 합성
(화합물 1-57 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00096
화합물 3-8 (484 umol) 과 화합물 4-13 (100 mg, 484 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-57 을 얻었다(82 mg, 41.4 %).
Rf = 0.5 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C23H21ClN2OS 408.94 측정치 409.1
실시예 58 : 화합물 1-58 의 합성
(화합물 3-15 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00097
화합물 2-9 (121 mg, 471 umol, 1 eq)을 아세트산 10 ml 에 분산하였다. Malonaldehyde Dianilide Hydrochloride (122 mg, 471 umol, 1 eq) 을 투입한 후 90 ℃에서 2시간 반응 진행하였다. 반응 확인 후 상온으로 냉각 후 동결건조를 진행하였다. 동결건조 완료 후 얻어진 물질은 다음반응을 위해 사용되었다(100 %).
Rf = 0.5 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
(화합물 1-58 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00098
화합물 3-15 (336 umol) 과 화합물 4-9 (63 mg, 336 umol, 1 eq)을 피리딘 (Pyridine) 10 ml 에 혼합하여 교반한다. 80 ℃에서 3시간 반응을 진행한 후, 상온으로 냉각하여 감압건조를 진행한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-58 을 얻었다(45 mg, 27.8 %).
Rf = 0.4 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C25H24BrN2OS+ 480.44 측정치 479.0
실시예 59 : 화합물 1-59 의 합성
(화합물 1-59 의 합성)
Figure 112019110460310-pat00099
화합물 1-57 (50 mg, 122 umol) 을 Acetic anhydride 4 ml 와 Pyridine 1 ml 혼합용액에 투입하여 분산한다. 반응액을 50℃의 조건에서 12시간동안 교반한 후 상온으로 냉각시킨다. 반응액을 Ethyl acetate 100 ml 에 투입하고 10분간 교반하여 얻어진 입자를 여과 및 건조한다. 건조 후 얻어진 화합물을 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제하여 화합물 1-59 을 얻었다(37 mg, 67.1 %).
Rf = 0.6 (Silicagel, MC/MeOH 10:1 v/v)
LC/MS, 계산치 C25H24ClN2O2S+ 451.99 측정치 451.1
이하에서는 상기 본 발명에서 제공하는 신규한 형광 화합물 중 대표적인 화합물을 이용하여 전혈분석에 사용되는 혈구 염색 시약을 제조하고, 그 시약의 혈구 세포의 염색효과 및 형광세기를 측정한 시험예 및 결과에 대해서 설명하겠다.
시험예 1: 혈구 염색 시약 제조
(1) 화학식 1의 화합물을 이용한 혈구 염색 시약 제조
Methanol과 Ethylene glycol을 이용하여 혈구 염색 시약을 제조 하였다. Methanol과 Ethylene glycol에 화합물을 혼합하였고, 용해도가 좋은 1-7, 1-13, 1-17, 1-19, 1-31, 1-33, 1-35 총 7종을 화합물을 선별하였다.
시험예 2: 세포 실험을 통한 핵산 염색 염료 확인
(1) 생 세포에서의 형광현미경 분석
Dulbeco’Modified Eagle’Media (이하 DMEM), 10% FBS, 1% Penicillin/Streptomycin 의 배지 환경에서 배양 한 HeLa 세포주를 형광 현미경 분석을 위해 1x105개의 HeLa 세포 주를 confocal dish에 분주하였다. 분주 후 24시간이 지난 뒤 혈청이 없는 DMEM 배지로 배지를 교체 하였고, 합성된 화합물 중 일부 염료를 선정하여 DMSO에 녹여 2.5uM이 되도록 처리하였다. 이 후 pH 7.4 10 mM Phosphate buffered saline(이하 1X PBS) 으로 세척을 한 후 phenol free DMEM 배지로 교체하고 형광현미경 분석을 하였다. 분석은 Nikon ECLIPSE Ti-U 로 X200, Cy5 filter 설정 하에 분석 하였다. 도 1에 나타낸 바와같이 1, 1-13, 1-19, 1-26, 1-38, 1-39, 1-42 등 7종의 화합물들이 세포의 핵산에 염색이 되는 것을 확인하였다.
(2) 고정 세포에서의 형광 현미경 분석
Dulbeco’Modified Eagle’Media (이하 DMEM), 10% FBS, 1% Penicillin/Streptomycin 의 배지 환경에서 배양 한 HeLa 세포주를 형광 현미경 분석을 위해 1x105개의 HeLa 세포 주를 confocal dish에 분주하였다. 분주 후 24시간이 지난 뒤 4% paraformaldehyde를 처리하여 세포를 고정하였다, 이 후 핵산 염색 염료를 DMSO에 녹여 2.5uM이 되도록 처리 하고, pH 7.4 10 mM Phosphate buffered saline(이하 1X PBS) 으로 세척을 한 후 형광현미경 분석을 하였다. 분석은 Nikon ECLIPSE Ti-U 로 X200, Cy5 filter 설정 하에 분석 하였다. 도 2에 나타낸 바와 같이 1-13, 1-18, 1-19 등 3 종의 화합물들이 세포의 핵산에 염색이 되는 것을 확인하였다.
시험예 3: 혈구 염색 시약을 통한 핵산 염색 염료 분석
(1) FACS 분석
합성된 핵산 염색 염료를 이용하여 제조 된 혈구 염색 시약을 검증하기 위해 Fluorescence Activated Cell Sorting (이하 FACS)를 사용하여 분석을 진행 하였다. 분석 샘플은 Sysmex사의 정도관리시약인 E-check (고농도)에 sysmex-4DL을 이용하여 적혈구를 용혈 시키고 원심분리 후 상층액을 제거하여 남은 백혈구를 이용하여 샘플을 제조 하였다. 제조 된 샘플에 각 화합물들로 만들어진 혈구 염색 시약을 처리하고 FACS 분석을 진행하였고 대조군으로 혈구 염색 시약을 처리하지 않은 백혈구와 비교물질을 사용하였다. 분석은 Thermo fisher 사의 Attune NxT 장비를 사용하였고 FSC 180, SSC 320, BL1 180, RL1 150, RL2 165, YL1 200의 조건 하에 측정 하였고, 알로사이코시아닌(Allophycocyanin, APC) 파장에서 분석 하였다. 도 3에 나타낸 바와 같이 핵산 염색 염료로 제조된 혈구 염색 시약 모두 염색이 된 것을 확인할 수 있었다.
도 3에 나타낸 그래프에서 Y축은 최대 형광세기에 대한 퍼센트를 나타내고, X축은 여기광 637 nm 방출광 670 nm 필터에서의 형광 강도를 로그 스캐일로 나타낸 것이다. 도 3에 나타낸 빨간색 그래프는 점도관리시약의 백혈구를 수집하고 PBS를 이용하여 부유시켜 FACS 측정을 한 결과이고 초록색 그래프는 동일한 방법으로 백혈구를 수집하고, 시험예 1에서 제조된 혈액분석 시약을 백혈구에 처리한 결과이다.
이상의 본 발명은 상기에서 기술된 실시예에 의해 한정되지 않고, 통상의 기술자들에 의해 다양한 변형 및 변경을 가져올 수 있으며, 그 외에 다양한 생물학적, 화학적 분야에서 이용될 수 있고, 이는 첨부된 청구항에서 정의되는 본 발명의 취지와 범위에 포함된다.
본 발명은 산업상 이용가능하다.

Claims (10)

  1. 하기의 화학식 1로 표시되는 화합물 중에서 아래의 화학식 1-2 및 1-4으로 표현되는 화합물 중에서 선택되는 화합물 또는 이의 염
    <화학식 1>
    Figure 112019110460310-pat00100

    (상기 화학식 1에서
    X는 황이고, R1은 수소 또는 탄소수 1 내지 5의 알콕시이며,
    R2는 수소, 브롬 또는 염소이고,
    R3은 탄소수 1 내지 5의 알킬, 탄소수 1 내지 5의 알코올 또는 탄소수 1 내지 5의 알킬로 치환된 페닐이며,
    R4는 탄소수 1 내지 8의 알킬, 탄소수 1 내지 5의 알코올, 탄소수 1 내지 5의 디알콜, 탄소수 1 내지 5의 알킬로 치환된 페닐, 탄소수 1 내지 5의 카르복시기로 치환된 페닐, 보론산으로 치환된 페닐 중에서 선택되고,
    R5는 수소, 브롬 또는 염소이고, n은 1 내지 5의 정수이다)
    Figure 112019110460310-pat00101

    Figure 112019110460310-pat00102

  2. 하기의 화학식 1로 표시되는 화합물 중에서 아래의 화학식 1-14, 1-15, 1-38, 1-46 및 1-53으로 표현되는 화합물 중에서 선택되는 화합물 또는 이의 염
    <화학식 1>
    Figure 112019110460310-pat00103

    (상기 화학식 1에서
    X는 황이고, R1은 수소 또는 탄소수 1 내지 5의 알콕시이며,
    R2는 수소, 브롬 또는 염소이고,
    R3은 탄소수 1 내지 5의 알킬, 탄소수 1 내지 5의 알코올 또는 탄소수 1 내지 5의 알킬로 치환된 페닐이며,
    R4는 탄소수 1 내지 8의 알킬, 탄소수 1 내지 5의 알코올, 탄소수 1 내지 5의 디알콜, 탄소수 1 내지 5의 알킬로 치환된 페닐, 탄소수 1 내지 5의 카르복시기로 치환된 페닐, 보론산으로 치환된 페닐 중에서 선택되고,
    R5는 수소, 브롬 또는 염소이고, n은 1 내지 5의 정수이다)

    Figure 112019110460310-pat00104

    Figure 112019110460310-pat00105

    Figure 112019110460310-pat00106


    Figure 112019110460310-pat00107

    Figure 112019110460310-pat00108
  3. 하기의 화학식 1로 표시되는 화합물 중에서 아래의 화학식 1-18, 1-20, 1-25, 1-28, 1-29, 1-31, 1-32, 1-33 및 1-34로 표현되는 화합물 중에서 선택되는 화합물 또는 이의 염
    <화학식 1>
    Figure 112019110460310-pat00109

    (상기 화학식 1에서
    X는 황이고, R1은 수소 또는 탄소수 1 내지 5의 알콕시이며,
    R2는 수소, 브롬 또는 염소이고,
    R3은 탄소수 1 내지 5의 알킬, 탄소수 1 내지 5의 알코올 또는 탄소수 1 내지 5의 알킬로 치환된 페닐이며,
    R4는 탄소수 1 내지 8의 알킬, 탄소수 1 내지 5의 알코올, 탄소수 1 내지 5의 디알콜, 탄소수 1 내지 5의 알킬로 치환된 페닐, 탄소수 1 내지 5의 카르복시기로 치환된 페닐, 보론산으로 치환된 페닐 중에서 선택되고,
    R5는 수소, 브롬 또는 염소이고, n은 1 내지 5의 정수이다)
    Figure 112019110460310-pat00110

    Figure 112019110460310-pat00111

    Figure 112019110460310-pat00112

    Figure 112019110460310-pat00113

    Figure 112019110460310-pat00114

    Figure 112019110460310-pat00115

    Figure 112019110460310-pat00116

    Figure 112019110460310-pat00117
    Figure 112019110460310-pat00118
  4. 하기의 화학식 1로 표시되는 화합물 중에서 아래의 화학식 1-35 및 1-36으로 표현되는 화합물 중에서 선택되는 화합물 또는 이의 염
    <화학식 1>
    Figure 112019110460310-pat00119

    (상기 화학식 1에서
    X는 황이고, R1은 수소 또는 탄소수 1 내지 5의 알콕시이며,
    R2는 수소, 브롬 또는 염소이고,
    R3은 탄소수 1 내지 5의 알킬, 탄소수 1 내지 5의 알코올 또는 탄소수 1 내지 5의 알킬로 치환된 페닐이며,
    R4는 탄소수 1 내지 8의 알킬, 탄소수 1 내지 5의 알코올, 탄소수 1 내지 5의 디알콜, 탄소수 1 내지 5의 알킬로 치환된 페닐, 탄소수 1 내지 5의 카르복시기로 치환된 페닐, 보론산으로 치환된 페닐 중에서 선택되고,
    R5는 수소, 브롬 또는 염소이고, n은 1 내지 5의 정수이다)
    Figure 112019110460310-pat00120
    Figure 112019110460310-pat00121
  5. 하기의 화학식 1로 표시되는 화합물 중에서 아래의 화학식 1-39로 표현되는 화합물 또는 이의 염
    <화학식 1>
    Figure 112019110460310-pat00122

    (상기 화학식 1에서
    X는 황이고, R1은 수소 또는 탄소수 1 내지 5의 알콕시이며,
    R2는 수소, 브롬 또는 염소이고,
    R3은 탄소수 1 내지 5의 알킬, 탄소수 1 내지 5의 알코올 또는 탄소수 1 내지 5의 알킬로 치환된 페닐이며,
    R4는 탄소수 1 내지 8의 알킬, 탄소수 1 내지 5의 알코올, 탄소수 1 내지 5의 디알콜, 탄소수 1 내지 5의 알킬로 치환된 페닐, 탄소수 1 내지 5의 카르복시기로 치환된 페닐, 보론산으로 치환된 페닐 중에서 선택되고,
    R5는 수소, 브롬 또는 염소이고, n은 1 내지 5의 정수이다)
    Figure 112019110460310-pat00123
  6. 하기의 화학식 1로 표시되는 화합물 중에서 아래의 화학식 1-41, 1-42 및 1-43으로 표현되는 화합물 중에서 선택되는 화합물 또는 이의 염
    <화학식 1>
    Figure 112019110460310-pat00124

    (상기 화학식 1에서
    X는 황이고, R1은 수소 또는 탄소수 1 내지 5의 알콕시이며,
    R2는 수소, 브롬 또는 염소이고,
    R3은 탄소수 1 내지 5의 알킬, 탄소수 1 내지 5의 알코올 또는 탄소수 1 내지 5의 알킬로 치환된 페닐이며,
    R4는 탄소수 1 내지 8의 알킬, 탄소수 1 내지 5의 알코올, 탄소수 1 내지 5의 디알콜, 탄소수 1 내지 5의 알킬로 치환된 페닐, 탄소수 1 내지 5의 카르복시기로 치환된 페닐, 보론산으로 치환된 페닐 중에서 선택되고,
    R5는 수소, 브롬 또는 염소이고, n은 1 내지 5의 정수이다)
    Figure 112019110460310-pat00125
    Figure 112019110460310-pat00126

    Figure 112019110460310-pat00127
  7. 하기의 화학식 1로 표시되는 화합물 중에서 아래의 화학식 1-44, 1-48, 1-55, 1-57 및 1-59로 표현되는 화합물 중에서 선택되는 화합물 또는 이의 염
    <화학식 1>
    Figure 112019110460310-pat00128

    (상기 화학식 1에서
    X는 황이고, R1은 수소 또는 탄소수 1 내지 5의 알콕시이며,
    R2는 수소, 브롬 또는 염소이고,
    R3은 탄소수 1 내지 5의 알킬, 탄소수 1 내지 5의 알코올 또는 탄소수 1 내지 5의 알킬로 치환된 페닐이며,
    R4는 탄소수 1 내지 8의 알킬, 탄소수 1 내지 5의 알코올, 탄소수 1 내지 5의 디알콜, 탄소수 1 내지 5의 알킬로 치환된 페닐, 탄소수 1 내지 5의 카르복시기로 치환된 페닐, 보론산으로 치환된 페닐 중에서 선택되고,
    R5는 수소, 브롬 또는 염소이고, n은 1 내지 5의 정수이다)
    Figure 112019110460310-pat00129
    Figure 112019110460310-pat00130

    Figure 112019110460310-pat00131
    Figure 112019110460310-pat00132

    Figure 112019110460310-pat00133
  8. 하기의 화학식 1로 표시되는 화합물 중에서 아래의 화학식 1-47, 1-54 및 1-58로 표현되는 화합물 중에서 선택되는 화합물 또는 이의 염
    <화학식 1>
    Figure 112019110460310-pat00134

    (상기 화학식 1에서
    X는 황이고, R1은 수소 또는 탄소수 1 내지 5의 알콕시이며,
    R2는 수소, 브롬 또는 염소이고,
    R3은 탄소수 1 내지 5의 알킬, 탄소수 1 내지 5의 알코올 또는 탄소수 1 내지 5의 알킬로 치환된 페닐이며,
    R4는 탄소수 1 내지 8의 알킬, 탄소수 1 내지 5의 알코올, 탄소수 1 내지 5의 디알콜, 탄소수 1 내지 5의 알킬로 치환된 페닐, 탄소수 1 내지 5의 카르복시기로 치환된 페닐, 보론산으로 치환된 페닐 중에서 선택되고,
    R5는 수소, 브롬 또는 염소이고, n은 1 내지 5의 정수이다)
    Figure 112019110460310-pat00135

    Figure 112019110460310-pat00136

    Figure 112019110460310-pat00137
  9. 전혈분석용 조성물에 관한 것으로서, 상기 조성물은 제1항 내지 제8항 중에서 선택된 어느 한 항에 기재되어 있는 화합물 또는 이의 염을 유효성분으로 하는 것을 특징으로 하는 전혈분석용 조성물
  10. 전혈분석용 키트에 관한 것으로서, 상기 키트는 제1항 내지 제8항 중에서 선택된 어느 한 항에 기재되어 있는 화합물 또는 이의 염을 유효성분으로 하는 것을 특징으로 하는 전혈분석용 키트

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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101555246A (zh) * 2008-04-11 2009-10-14 大连理工大学 含卤素不对称菁类化合物、制备方法及应用
CN102516792A (zh) * 2011-12-16 2012-06-27 江南大学 一种用于检测rna的菁染料的结构通式

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6586259B1 (en) 1999-11-15 2003-07-01 Pharmanetics Incorporated Platelet/leukocyte interaction assay and reagent therefor
US9850382B1 (en) * 2016-12-05 2017-12-26 Laiqiang Ying Unsymmetrical cyanine dyes and their application
KR101833020B1 (ko) 2017-02-28 2018-02-27 (주)바이오액츠 혈액 분석용 화합물 및 이의 제조방법

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101555246A (zh) * 2008-04-11 2009-10-14 大连理工大学 含卤素不对称菁类化合物、制备方法及应用
CN102516792A (zh) * 2011-12-16 2012-06-27 江南大学 一种用于检测rna的菁染料的结构通式

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