KR101871897B1 - 혈액 분석용 화합물 및 이의 제조방법 - Google Patents

혈액 분석용 화합물 및 이의 제조방법 Download PDF

Info

Publication number
KR101871897B1
KR101871897B1 KR1020170024167A KR20170024167A KR101871897B1 KR 101871897 B1 KR101871897 B1 KR 101871897B1 KR 1020170024167 A KR1020170024167 A KR 1020170024167A KR 20170024167 A KR20170024167 A KR 20170024167A KR 101871897 B1 KR101871897 B1 KR 101871897B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
chemical formula
compound
formula
compound represented
following formula
Prior art date
Application number
KR1020170024167A
Other languages
English (en)
Inventor
박진우
김진주
이봉규
김기원
Original Assignee
(주)바이오액츠
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by (주)바이오액츠 filed Critical (주)바이오액츠
Priority to KR1020170024167A priority Critical patent/KR101871897B1/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101871897B1 publication Critical patent/KR101871897B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C309/00—Sulfonic acids; Halides, esters, or anhydrides thereof
    • C07C309/01—Sulfonic acids
    • C07C309/28—Sulfonic acids having sulfo groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton
    • C07C309/45—Sulfonic acids having sulfo groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton containing nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the carbon skeleton
    • C07C309/46—Sulfonic acids having sulfo groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton containing nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the carbon skeleton having the sulfo groups bound to carbon atoms of non-condensed six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C309/00—Sulfonic acids; Halides, esters, or anhydrides thereof
    • C07C309/01—Sulfonic acids
    • C07C309/28—Sulfonic acids having sulfo groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton
    • C07C309/57—Sulfonic acids having sulfo groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton containing carboxyl groups bound to the carbon skeleton
    • C07C309/61—Sulfonic acids having sulfo groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton containing carboxyl groups bound to the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5002—Partitioning blood components

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

본 발명은 백혈구를 용해시키지 않고 상기 백혈구를 제외한 나머지 혈구 세포를 용해시킬 수 있는 혈액 분석용 화합물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 여러 구현예에 따른 화합물은 백혈구를 용해시키지 않으면서도 상기 백혈구를 제외한 나머지 혈구 세포를 모두 용해시킬 수 있어, 다양한 분야에 선택적으로 적용이 가능하다.
또한, 상기 화합물을 이용한 혈구 세포 용해용 조성물 또는 키트 및 혈액 분석용 조성물 또는 키트는 종래보다 효율성이 뛰어난 효과를 나타낸다.

Description

혈액 분석용 화합물 및 이의 제조방법{A reagent for analysis of blood and preparation method therof}
본 발명은 백혈구를 용해시키지 않고 상기 백혈구를 제외한 나머지 혈구 세포를 용해시킬 수 있는 혈액 분석용 화합물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
전혈구 검사(일반혈액 검사, Complete Blood cell Count, CBC)는 혈액질환의 진단이나 경과 관찰, 혈구 수의 증감이나 형태적 이상을 감별해 감염상태, 혈액응고 능력, 빈혈 유무 및 원인, 비뇨기 계통의 이상과 혈액성분이나 순환기 계통의 이상 등을 알아보기 위한 목적으로 실시되는 건강검진 시나 의사가 처방하는 가장 기본적인 검사 중에 하나이다.
이러한 전혈구의 검사 항목은 백혈구(WBC), 적혈구(RBC), 혈색소(HGB), 적혈구 용적(hematocrit, HCT), 적혈구 평균용적(mean corpuscular volume, MCV), 적혈구 평균 혈색소(mean corpuscular hemoglobin, MCH), 적혈구 혈색소 평균농도(mean corpuscular hemoglobin concentration), 및 혈소판(PLT)가 기본이며, 연령, 성별, 국가, 거주지, 검사방법 및 검사 장비에 따라 차이는 있지만 각 검사 항목별로 일종의 기준치가 제시되는 것이 일반적이다.
혈구 분석기의 제조사마다 차이는 있지만 전혈 샘플을 적정한 방법으로 분석하기 위해 전용 시약을 사용하고 있으며, 이러한 시약의 용도로는 형광 염료를 이용한 DNA, RNA 및 백혈구 염색(fluorescence staining), 적혈구 용혈(hematolysis), 헤모글로빈 산화 시약, 혈액 샘플의 희석(dilution), 단백질 및 용혈성분 세정(cleaning), 고정(attaching) 및 측정 부위에 혈구를 일렬로 배열하기 위한 시스 시약(sheath reagent) 등이 있다.
종래의 혈액 분석용 시약(조성물)은 백혈구를 포함한 모든 혈구를 용해시키는 문제점으로 인하여 선택적으로 다양하게 적용시키지 못하는 단점을 나타낸다.
한국등록특허 10-0362453호
본 발명의 목적은 혈액 분석이 용이한 화합물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 백혈구를 용해시키지 않으면서, 상기 백혈구를 제외한 나머지 혈구 세포를 모두 용해시킬 수 있는 혈구 세포 용해용 조성물 및 키트를 제공하고자 하는 것이다.
본 발명의 대표적인 일 측면에 따르면, 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure 112017018858675-pat00001
(단, 상기 화학식 1에서,
상기 R1은 카르보닐기 또는 직접 결합이고,
상기 R2는 탄소수 7 내지 25의 알킬기이며,
상기 R3와 R4 중 어느 하나는 술폰산기, 다른 하나는 -NH-R5R6이고,
상기 R5는 카르보닐기 또는 직접 결합이며,
상기 R6는 수소 또는 탄소수 1 내지 25의 알킬기이다.)
본 발명의 다른 대표적인 일 측면에 따르면, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 포함하는 혈구 세포 용해용 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 대표적인 일 측면에 따르면, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 포함하는 혈구 세포 용해용 키트에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 대표적인 일 측면에 따르면, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 포함하는 혈액 분석용 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 대표적인 일 측면에 따르면, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 포함하는 혈액 분석용 키트에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 대표적인 일 측면에 따르면, 하기 화학식 16의 화합물 및 하기 화학식 17의 화합물을 반응시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 하기 화학식 1a로 표시되는 화합물의 제조방법에 관한 것이다.
[화학식 1a]
Figure 112017018858675-pat00002
[화학식 16]
Figure 112017018858675-pat00003
[화학식 17]
Figure 112017018858675-pat00004
(단, 상기 화학식 1a 및 16 내지 17에서,
상기 R1은 카르보닐기,
상기 R2는 탄소수 n개의 알킬기,
상기 R3와 R4 중 어느 하나는 술폰산기, 다른 하나는 -NH-R5R6이며,
상기 R5와 R6는 각각 직접 결합과 수소이거나, 카르보닐기와 탄소수 n개의 알킬기,
상기 n은 7 내지 25의 자연수이다.)
본 발명의 또 다른 대표적인 일 측면에 따르면, 하기 화학식 17의 화합물 및 하기 화학식 18의 화합물을 반응시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 하기 화학식 1b로 표시되는 화합물의 제조방법에 관한 것이다.
[화학식 1b]
Figure 112017018858675-pat00005
[화학식 17]
Figure 112017018858675-pat00006
[화학식 18]
Figure 112017018858675-pat00007
(단, 상기 화학식 1b 및 17 내지 18에서,
상기 R2는 탄소수 m개의 알킬기,
상기 R3와 R4 중 어느 하나는 술폰산기, 다른 하나는 -NHR6이며,
상기 R6는 탄소수 m개의 알킬기,
상기 m은 7 내지 25의 자연수이다.)
본 발명의 여러 구현예에 따른 화합물은 백혈구를 용해시키지 않으면서도 상기 백혈구를 제외한 나머지 혈구 세포를 모두 용해시킬 수 있어, 다양한 분야에 선택적으로 적용이 가능하다.
또한, 상기 화합물을 이용한 혈구 세포 용해용 조성물 또는 키트 및 혈액 분석용 조성물 또는 키트는 종래보다 효율성이 뛰어난 효과를 나타낸다.
도 1은 실시예 1, 3, 5 및 7 화합물의 용해도를 확인한 결과를 나타낸 이미지이다.
도 2는 실시예 1 화합물과 대조군인 Sysmex의 시약으로 혈구 세포 용해시킨 후의 결과를 나타낸 이미지이다.
도 3은 실시예 1 화합물에 의해 혈구 세포가 실제로 용해되는지 판단하기 위해 현미경을 통해 혈구세포를 관찰한 결과를 나타낸 이미지이다.
이하에서, 본 발명의 여러 측면 및 다양한 구현예에 대해 더욱 구체적으로 살펴보도록 한다.
본 발명의 일 측면에 따르면, 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure 112017018858675-pat00008
상기 화학식 1에서,
상기 R1은 카르보닐기 또는 직접 결합이고,
상기 R2는 탄소수 7 내지 25의 알킬기이며,
상기 R3와 R4 중 어느 하나는 술폰산기, 다른 하나는 -NH-R5R6이고,
상기 R5는 카르보닐기 또는 직접 결합이며,
상기 R6는 수소 또는 탄소수 1 내지 25의 알킬기이다.
보다 상세하게는, 상기 R5와 R6는 각각 직접 결합과 수소이거나, 각각 카르보닐기와 탄소수 7 내지 25의 알킬기인 것이다.
상기 R1이 카르보닐인 경우에는 R5는 직접 결합이거나 카르보닐기이고, 상기 R1이 직접 결합인 경우에는 R5는 직접 결합이다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하기 화학식 2 또는 화학식 3인 것이다.
[화학식 2]
Figure 112017018858675-pat00009
[화학식 3]
Figure 112017018858675-pat00010
상기 화학식 2 또는 화학식 3에서, 상기 R1은 카르보닐기 또는 직접 결합이고, 상기 R2는 탄소수 7 내지 25의 알킬기이며, 상기 R5는 카르보닐기 또는 직접 결합이며, 상기 R6는 수소 또는 탄소수 1 내지 25의 알킬기이다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 구체적으로 예를 들면, 하기 화학식 4 내지 화학식 15로 표시되는 화합물일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
다만, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 중에서도 특히 하기 화학식 4, 5, 7, 9 및 11 내지 15로 표시되는 화합물은 그 외의 화학식 1로 표시되는 화합물들과 달리 물과 트리스-염산 버퍼 용액에 용해될 수 있어, 90% 이상의 물로 이루어진 혈장을 포함하는 혈액의 분석 효율을 크게 향상시킬 수 있다는 점을 확인하였다.
[화학식 4]
Figure 112017018858675-pat00011
[화학식 5]
Figure 112017018858675-pat00012
[화학식 6]
Figure 112017018858675-pat00013
[화학식 7]
Figure 112017018858675-pat00014
[화학식 8]
Figure 112017018858675-pat00015
[화학식 9]
Figure 112017018858675-pat00016
[화학식 10]
Figure 112017018858675-pat00017
[화학식 11]
Figure 112017018858675-pat00018
[화학식 12]
Figure 112017018858675-pat00019
[화학식 13]
Figure 112017018858675-pat00020
[화학식 14]
Figure 112017018858675-pat00021
[화학식 15]
Figure 112017018858675-pat00022
본 발명에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 0.1%를 초과하거나 0.2% 미만의 농도로 사용하는 것이 바람직한데, 보다 바람직하게는 0.16 내지 0.18%로 사용하는 것이다. 만일 상기 화합물의 농도가 0.1%이하인 경우에는 혈구 세포의 용해 능력이 떨어져 혈구를 충분히 용해하지 못하게 되어 측정 오차 값이 크게 되므로 바람직하지 않으며, 상기 농도가 0.2% 이상인 경우에는 분석 시약의 농도가 지나치게 크게 되어 혈액 분석을 위한 흡광강도에 영향을 주게 되므로 측정 오차 값이 크게 되어 바람직하지 않다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 혈액과 반응시켰을 때 백혈구를 용해시키지 않으며, 상기 백혈구를 제외한 나머지 혈구 세포인 적혈구와 혈소판을 용해시키는 것을 특징으로 한다.
이러한 특징을 통해, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 혈액과의 반응을 통한 혈액 분석에 사용될 수 있으며, 특히 혈액 속의 유형 성분인 혈구 세포를 분석할 수 있다.
즉, 종래의 혈액 분석용 조성물은 백혈구를 포함한 모든 혈구 세포를 용해시켜 선택적으로 적용시킬 수 없다는 한계가 있었으나, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 백혈구를 용해시키지 않으므로, 백혈구 관련 연구용 또는 분석용으로 사용하기에 적합하다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 사용하여 혈액을 분석하기 위해서는 상기 화합물과 혈액 시료를 혼합하는 간단한 조작으로 측정 시료를 조제할 수가 있다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 포함하는 혈구 세포 용해용 조성물 또는 키트를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 포함하는 혈액 분석용 조성물 또는 키트를 제공한다.
종래의 혈액 분석용 조성물 또는 키트는 백혈구 뿐만 아니라 혈구 세포를 전반적으로 모두 용해시키기 때문에 선택적인 적용이 불가능한 문제점을 나타내었다. 그러나, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 혈액과 반응시켰을 때 백혈구를 제외한 나머지 혈구 세포를 용해시키기 때문에, 본 발명에 따른 화합물을 이용한 혈액 분석용 시약 또는 키트는 혈액 분석기에 선택적으로 적용이 가능하다.
또한, 본 발명의 다른 측면에 따르면, 하기 화학식 16의 화합물 및 하기 화학식 17의 화합물을 반응시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 하기 화학식 1a로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.
본 발명에 따른 하기 화학식 1a로 표시되는 화합물은 하기 화학식 16의 화합물 및 하기 화학식 17의 화합물을 반응시켜 제조될 수 있다.
[화학식 1a]
Figure 112017018858675-pat00023
[화학식 16]
Figure 112017018858675-pat00024
[화학식 17]
Figure 112017018858675-pat00025
(단, 상기 화학식 1a 및 16 내지 17에서,
상기 R1은 카르보닐기,
상기 R2는 탄소수 n개의 알킬기,
상기 R3와 R4 중 어느 하나는 술폰산기, 다른 하나는 -NH-R5R6이며,
상기 R5와 R6는 각각 직접 결합과 수소이거나, 카르보닐기와 탄소수 n개의 알킬기,
상기 n은 7 내지 25의 자연수이다.)
보다 상세하게는, 상기 화학식 16의 화합물 2 당량을 용매에 용해시킨 후, 여기에 상기 화학식 17의 화합물 0.1 내지 15 당량을 투입하여 20 내지 30 ℃의 온도에서 1 내지 5 시간 동안 반응시킴으로써 제조될 수 있다.
이때, 필요에 따라 N,N-디이소프로필에틸아민, 트리에틸아민, 탄산나트륨, 탄산수소나트륨 및 수산화나트륨 중에서 선택된 1종 이상을 0.5 내지 15 당량의 함량으로 추가로 투입하여 반응시킬 수 있다.
상기 용매는 서로 동일하거나 상이하고, 각각 독립적으로 N,N-디메틸포르마이드, 다이메틸설폭사이드, 물 및 메탄올 중에서 선택된 1종 이상을 사용할 수 있다.
다른 방법으로는, 본 발명에 따른 하기 화학식 1b로 표시되는 화합물은 하기 화학식 17의 화합물 및 하기 화학식 18의 화합물을 반응시켜 제조될 수도 있다.
[화학식 1b]
Figure 112017018858675-pat00026
[화학식 17]
Figure 112017018858675-pat00027
[화학식 18]
Figure 112017018858675-pat00028
(단, 상기 화학식 1b 및 17 내지 18에서,
상기 R2는 탄소수 m개의 알킬기,
상기 R3와 R4 중 어느 하나는 술폰산기, 다른 하나는 -NHR6이며,
상기 R6는 탄소수 m개의 알킬기,
상기 m은 7 내지 25의 자연수이다.)
보다 상세하게는, 상기 화학식 17의 화합물 1 당량을 용매에 용해시킨 후, 여기에 상기 화학식 18의 화합물 1 내지 10 당량을 투입하고 30 내지 50 ℃의 온도에서 5 내지 30 시간 동안 반응시켜 제조될 수 있다.
이때, 필요에 따라 N,N-디이소프로필에틸아민, 트리에틸아민, 탄산나트륨, 탄산수소나트륨 및 수산화나트륨 중에서 선택된 1종 이상을 0.5 내지 15 당량의 함량으로 추가로 투입하여 반응시킬 수 있다.
상기 용매는 서로 동일하거나 상이하고, 각각 독립적으로 N,N-디메틸포르마이드, 다이메틸설폭사이드, 물 및 메탄올 중에서 선택된 1종 이상을 사용할 수 있다.
상기 제조방법을 통해 제조된 상기 화학식 1a 및 1b로 표시되는 화합물은 반응이 완료된 반응물을 동결건조 및 여과하여 순수한 화합물을 최종적으로 얻을 수 있으며, 상기 동결, 건조 및 여과 조건은 통상의 방법을 통해 수행될 수 있다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1a 및 1b로 표시되는 화합물을 구체적으로 예를 들면, 상기 화학식 4 내지 화학식 15로 표시되는 화합물일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
이하에서 실시예 등을 통해 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 하며, 다만 이하에 실시예 등에 의해 본 발명의 범위와 내용이 축소되거나 제한되어 해석될 수 없다. 또한, 이하의 실시예를 포함한 본 발명의 개시 내용에 기초한다면, 구체적으로 실험 결과가 제시되지 않은 본 발명을 통상의 기술자가 용이하게 실시할 수 있음은 명백한 것이며, 이러한 변형 및 수정이 첨부된 특허청구범위에 속하는 것도 당연하다.
또한 이하에서 제시되는 실험 결과는 상기 실시예 및 비교예의 대표적인 실험 결과만을 기재한 것이며, 아래에서 명시적으로 제시하지 않은 본 발명의 여러 구현예의 각각의 효과는 해당 부분에서 구체적으로 기재하도록 한다.
(제조예 1: 화합물 2-1의 제조)
라우릭 산(Lauric acid, 1.2 g, 5.99 mmol, 1 eq)을 N,N-디메틸포르마이드(N,N-dimethylformamide, DMF, 70 ml)에 넣고 용해시킨다. 라우릭 산 용액에 N,N-디숙신이미딜 카보네이트(N,N-Disuccinimidyl carbonate, DSC, 4.6 g, 17.97 mmol, 3 eq)와 N,N-디이소프로필에틸아민(N,N-Diisopropylethylamine, Hunig base, 10.2 ml, 59.91 mmol, 10 eq)을 투입한 뒤 질소 치환하여 40 ℃에서 1시간 동안 교반한다. 반응이 완료된 후 동결건조하여 화합물 2-1(2.1 g, 100%)을 얻었다.
Rf = 0.1 (RP-C18, 아세토니트릴/물 1:2 v/v)
[화합물 2-1]
Figure 112017018858675-pat00029

(제조예 2: 화합물 2-2의 제조)
아라치딕 산(Arachidic acid, 1 g, 3.2 mmol, 1 eq)을 N,N-디메틸포르마이드(N,N-dimethylformamide, DMF, 100 ml에 넣고 용해시킨다. 아라치딕 산 용액에 N,N-디숙신이미딜 카보네이트(N,N-Disuccinimidyl carbonate, DSC, 2.54 g, 9.6 mmol, 3 eq)와 N,N-디이소프로필에틸아민(N,N-Diisopropylethylamine, Hunig base, 5.44 ml, 32 mmol, 10 eq)을 투입한 뒤 질소 치환하여 40 ℃에서 1시간 동안 교반한다. 반응이 완료된 후 동결건조 하여 화합물 2-2(1.4 g, 100%)을 얻었다.
Rf = 0.1 (RP-C18, 아세토니트릴/물 1:2 v/v)
[화합물 2-2]
Figure 112017018858675-pat00030

(실시예 1: 화학식 4의 화합물 제조)
상기 제조예 1의 화합물 2-1(2 g, 6.73 mmol, 2 eq)을 DMF 70 ml에 넣고 용해시킨 후 Hunig base(5.7 ml, 33.6 mmol, 10 eq)와 2,5-디아미노벤젠술포닉 산(2,5-diaminobenzenesulfonic acid, PPDSA, 0.63 g, 3.36 mmol, 1 eq)을 투입한 뒤 상온에서 2시간 동안 교반한다. 반응이 완료된 후 동결건조하여, 건조된 화합물을 실리카겔 크로마토그래피하여 하기 화학식 4로 표시되는 순수한 화합물(403 mg, 32.5%)을 얻었다.
Rf = 0.2 (RP-C18, 아세토니트릴/물 1:2 v/v)
LC/MS, 계산치 C18H30N2O4S 370.51, 측정치 369.2
[화학식 4]
Figure 112017018858675-pat00031

(실시예 2: 화학식 5의 화합물 제조)
상기 제조예 1의 화합물 2-1(2 g, 6.73 mmol, 2 eq)을 DMF 70 ml에 넣고 용해시킨 후 Hunig base(5.7 ml, 33.6 mmol, 10 eq)와 PPDSA(0.63 g, 3.36 mmol, 1 eq)을 투입한 뒤 상온에서 2시간 동안 교반한다. 반응이 완료된 후 동결건조하여, 건조된 화합물을 실리카겔 크로마토그래피하여 하기 화학식 5의 순수한 화합물(12 mg, 0.65%)을 얻었다.
Rf = 0.25 (RP-C18, 아세토니트릴/물 1:2 v/v)
LC/MS, 계산치 C30H52N2O5S 552.81, 측정치 551.7
[화학식 5]
Figure 112017018858675-pat00032

(실시예 3: 화학식 6의 화합물 제조)
상기 제조예 1의 화합물 2-1(1 g, 3.36 mmol, 2 eq)을 DMF 10 ml에 넣고 용해하였다. 2,4-디아미노벤젠술포닉 산(2,4-diaminobenzenesulfonic acid, MPDSA, 0.63 g, 3.36 mmol, 1 eq)을 pH=9.5 PBS(Phosphate bufferd saline) 용액 10 ml에 녹여 용해한 후, 상기 화합물 2-1 용액에 투입한 뒤 상온에서 3시간동안 교반한다. 반응이 완료된 후 동결건조하여, 건조된 화합물을 실리카겔 크로마토그래피하여 하기 화학식 6의 순수한 화합물(13 mg, 2.1%)을 얻었다.
Rf = 0.2 (RP-C18, 아세토니트릴/물 1:2 v/v)
LC/MS, 계산치 C18H30N2O4S 370.51, 측정치 369.2
[화학식 6]
Figure 112017018858675-pat00033

(실시예 4: 화학식 7의 화합물 제조)
상기 제조예 1의 화합물 2-1(1 g, 3.36 mmol, 2 eq)을 DMF 10 ml에 넣고 용해하였다. MPDSA(0.63 g, 3.36 mmol, 1 eq)을 pH=9.5 PBS 용액 10 ml에 녹여 용해한 후, 상기 화합물 2-1 용액에 투입한 뒤 상온에서 3시간동안 교반한다. 반응이 완료된 후 동결건조하여, 건조된 화합물을 실리카겔 크로마토그래피하여 하기 화학식 7의 순수한 화합물(6 mg, 0.65%)을 얻었다.
Rf = 0.25 (RP-C18, 아세토니트릴/물 1:2 v/v)
LC/MS, 계산치 C30H52N2O5S 552.81 측정치 551.7
[화학식 7]
Figure 112017018858675-pat00034

(실시예 5: 화학식 8의 화합물 제조)
상기 제조예 2의 화합물 2-2(1 g, 2.44 mmol, 2 eq)을 DMF 70 ml에 넣고 용해시킨 후 Hunig base(2.07 ml, 12.2 mmol, 10 eq)와 PPDSA(0.23 g, 1.22 mmol, 1 eq)을 투입한 뒤 상온에서 2시간 동안 교반한다. 반응이 완료된 후 동결건조하여, 건조된 화합물을 실리카겔 크로마토그래피하여 하기 화학식 8의 순수한 화합물을(39 mg, 6.6%) 얻었다.
Rf = 0.2 (RP-C18, 아세토니트릴/물 1:2 v/v)
LC/MS, 계산치 C26H46N2O4S 482.72, 측정치 481.2
[화학식 8]
Figure 112017018858675-pat00035

(실시예 6: 화학식 9의 화합물 제조)
상기 제조예 2의 화합물 2-2(1 g, 2.44 mmol, 2 eq)을 DMF 70 ml에 넣고 용해시킨 후 Hunig base(2.07 ml, 12.2 mmol, 10 eq)와 PPDSA(0.23 g, 1.22 mmol, 1 eq)을 투입한 뒤 상온에서 2시간 동안 교반한다. 반응이 완료된 후 동결건조하여, 건조된 화합물을 실리카겔 크로마토그래피하여 하기 화학식 9의 순수한 화합물(11 mg, 1.1%)을 얻었다.
Rf = 0.25 (RP-C18, 아세토니트릴/물 1:2 v/v)
LC/MS, 계산치 C46H84N2O5S 777.23, 측정치 777.3
[화학식 9]
Figure 112017018858675-pat00036

(실시예 7: 화학식 10의 화합물 제조)
상기 제조예 2의 화합물 2-2(1 g, 2.44 mmol, 2 eq)을 DMF 70 ml에 넣고 용해시킨 후 Hunig base(2.07 ml, 12.2 mmol, 10 eq)와 MPDSA(0.23 g, 1.22 mmol, 1 eq)을 투입한 뒤 상온에서 2시간 동안 교반한다. 반응이 완료된 후 동결건조하여, 건조된 화합물을 실리카겔 크로마토그래피하여 하기 화학식 10의 순수한 화합물(112 mg, 20.7%)을 얻었다.
Rf = 0.2 (RP-C18, 아세토니트릴/물 1:2 v/v)
LC/MS, 계산치 C26H46N2O4S 482.72, 측정치 481.5
[화학식 10]
Figure 112017018858675-pat00037

(실시예 8: 화학식 11의 화합물 제조)
상기 제조예 2의 화합물 2-2(1 g, 2.44 mmol, 2 eq)을 DMF 70 ml) 에 넣고 용해시킨 후 Hunig base(2.07 ml, 12.2 mmol, 10 eq)와 MPDSA(0.23 g, 1.22 mmol, 1 eq)을 투입한 뒤 상온에서 2시간 동안 교반한다. 반응이 완료된 후 동결건조하여, 건조된 화합물을 실리카겔 크로마토그래피하여 하기 화학식 11의 순수한 화합물(8 mg, 0.84%)을 얻었다.
Rf = 0.25 (RP-C18, 아세토니트릴/물 1:2 v/v)
LC/MS, 계산치 C46H84N2O5S 777.23, 측정치 776.8
[화학식 11]
Figure 112017018858675-pat00038

(실시예 9: 화학식 12의 화합물 제조)
PPDSA(0.3 g, 1.59 mmol, 1 eq)을 DMF 20 ml에 넣고 용해시킨다. 1-브로모운데칸(1-Bromoundecane, 1.49 g, 6.36 mmol, 4 eq)과 Hunig base(2.78 ,ml, 15.9 mmol, 10 eq)을 투입한 후 40℃ 온도에서 일야교반 진행한다. 반응이 완료된 화합물을 동결건조하여, 건조된 화합물을 실리카겔 크로마토그래피하여 하기 화학식 12의 순수한 화합물(58 mg, 7.3 %)을 얻었다.
Rf = 0.25 (RP-C18, 아세토니트릴/물 1:2 v/v)
LC/MS, 계산치 C28H52N2O3S 496.79, 측정치 495.3
[화학식 12]
Figure 112017018858675-pat00039

(실시예 10: 화학식 13의 화합물 제조)
MPDSA(0.3 g, 1.59 mmol, 1 eq)을 DMF 20 ml에 넣고 용해시킨다. 1-브로모운데칸(1-Bromoundecane, 1.49 g, 6.36 mmol, 4 eq)과 Hunig base(2.78 ,ml, 15.9 mmol, 10 eq)을 투입한 후 40℃ 온도에서 일야교반 진행한다. 반응이 완료된 화합물을 동결건조하여, 건조된 화합물을 실리카겔 크로마토그래피하여 하기 화학식 13의 순수한 화합물(34 mg, 4.3 %)을 얻었다.
Rf = 0.25 (RP-C18, 아세토니트릴/물 1:2 v/v)
LC/MS, 계산치 C28H52N2O3S 496.79, 측정치 495.3
[화학식 13]
Figure 112017018858675-pat00040

(실시예 11: 화학식 14의 화합물 제조)
PPDSA(0.3 g, 1.59 mmol, 1 eq)을 DMF 20 ml에 넣고 용해시킨다. 1-브로모옥타데칸(1-Bromooctadecane, 2.12 g, 6.36 mmol, 4 eq)과 Hunig base(2.78 ,ml, 15.9 mmol, 10 eq)을 투입한 후 40℃ 온도에서 일야교반 진행한다. 반응이 완료된 화합물을 동결건조하여, 건조된 화합물을 실리카겔 크로마토그래피하여 하기 화학식 14의 순수한 화합물(72 mg, 6.5 %)을 얻었다.
Rf = 0.25 (RP-C18, 아세토니트릴/물 1:2 v/v)
LC/MS, 계산치 C42H80N2O3S 693.16, 측정치 692.6
[화학식 14]
Figure 112017018858675-pat00041

(실시예 12: 화학식 15의 화합물 제조)
MPDSA(0.3 g, 1.59 mmol, 1 eq)을 DMF 20 ml에 넣고 용해시킨다. 1-브로모옥타데칸(1-Bromooctadecane, 2.12 g, 6.36 mmol, 4 eq)과 Hunig base(2.78 ,ml, 15.9 mmol, 10 eq)을 투입한 후 40℃ 온도에서 일야교반 진행한다. 반응이 완료된 화합물을 동결건조하여, 건조된 화합물을 실리카겔 크로마토그래피하여 하기 화학식 15의 순수한 화합물(67 mg, 6.1 %)을 얻었다.
Rf = 0.25 (RP-C18, 아세토니트릴/물 1:2 v/v)
LC/MS, 계산치 C42H80N2O3S 693.16, 측정치 692.6
[화학식 15]
Figure 112017018858675-pat00042

(시험예 1: 화합물의 용해도 평가)
실시예 1, 3, 5 및 7 화합물의 용해도를 평가하기 위하여, 각 화합물에 0.1M Tris-HCl buffer(sigma)를 넣어 혼합한 후에 10분 동안 섞고(vortexing), 소니케이션(sonication)을 5분 동안 처리하여 용해도를 측정하였다.
단, 화합물과 Tris-HCl buffer의 혼합용액은 0.17%의 농도로 모두 동일하게 제조하였다.
도 1은 실시예 1, 3, 5 및 7 화합물의 용해도를 확인한 결과를 나타낸 이미지이다. 도 1을 참조하면 실시예 1의 화합물만이 0.1M Tris-HCl buffer에 용해되는 것을 확인하였다.
(시험예 2: 화합물의 혈구 세포 용해능력 분석)
혈액 희석 시약(CELLPACK, Sysmex) 997uL와 혈액 3uL를 혼합한 후 0.1M Tris-HCl buffer에 용해시킨 실시예 1의 화합물 500uL를 추가하여 혼합한다. 대조군으로 일반적으로 사용되는 Sysmex의 시약도 동일한 방식으로 분석을 진행하였다.
도 2는 실시예 1 화합물의 혈구 세포 용해시킨 후의 결과를 나타낸 이미지이다. 도 2를 참조하면, 대조군인 Sysmex의 시약과 유사한 결과를 나타내는 것을 육안으로 확인하였다.
또한, 실시예 1 화합물에 의해 혈구 세포가 실제로 용해되는지 판단하기 위해 현미경을 통해 혈구세포를 관찰하였으며, 그 결과를 도 3에 나타내었다.
단, 실험방법은 앞서 진행한 방법과 동일하게 혈액 희석 시약과 혈액을 혼합한 후 혈구 세포 용해 시약을 추가하여 혼합하고 C-Chip(INCYTO)에 10uL를 분주하여 현미경을 통해 관찰하였다.
도 3을 참조하면, 대조군인 Symex에서 혈구 세포가 모두 용해되는 것을 확인할 수 있다. 실시예 1 화합물의 경우에는 혈구 세포를 모두 용해시킴을 확인할 수 있으나, 실시예 1 화합물은 대조군과는 달리 백혈구를 용해시키지 않는 것을 확인하였다.
즉, 대조군은 모든 혈구 세포를 용해시켰지만, 실시예 1 화합물은 백혈구를 제외한 나머지 혈구 세포를 용해 시키므로, 실시예 1의 화합물은 백혈구 관련 연구에 대조군보다 높은 수준의 효과를 나타낼 수 있다는 것을 보여주는 결과이다.
따라서, 본 발명의 여러 구현예에 따른 화합물은 백혈구를 용해시키지 않으면서도 상기 백혈구를 제외한 나머지 혈구 세포를 모두 용해시킬 수 있어, 다양한 분야에 선택적으로 적용이 가능하다.
또한, 상기 화합물을 이용한 혈구 세포 용해용 조성물 또는 키트 및 혈액 분석용 조성물 또는 키트는 종래보다 효율성이 뛰어난 효과를 나타낸다.

Claims (14)

  1. 하기 화학식 14 또는 15로 표시되는 화합물:
    [화학식 14]
    Figure 112018039113167-pat00067

    [화학식 15]
    Figure 112018039113167-pat00068
    .
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 하기 화학식 2 또는 화학식 3으로 표시되는 화합물을 포함하는 혈구 세포 용해용 조성물:
    [화학식 2]
    Figure 112018039113167-pat00044

    [화학식 3]
    Figure 112018039113167-pat00045

    상기 화학식 2 또는 3에 있어서,
    상기 R1은 카르보닐기 또는 직접 결합이고,
    상기 R2는 탄소수 7 내지 25의 알킬기이며,
    상기 R5는 카르보닐기 또는 직접 결합이고,
    상기 R6는 수소 또는 탄소수 1 내지 25의 알킬기이다.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 화학식 2 또는 3으로 표시되는 화합물은 하기 화학식 4 내지 화학식 15 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 혈구 세포 용해용 조성물:
    [화학식 4]
    Figure 112018039113167-pat00046

    [화학식 5]
    Figure 112018039113167-pat00047

    [화학식 6]
    Figure 112018039113167-pat00048

    [화학식 7]
    Figure 112018039113167-pat00049

    [화학식 8]
    Figure 112018039113167-pat00050

    [화학식 9]
    Figure 112018039113167-pat00051

    [화학식 10]
    Figure 112018039113167-pat00052

    [화학식 11]
    Figure 112018039113167-pat00053

    [화학식 12]
    Figure 112018039113167-pat00054

    [화학식 13]
    Figure 112018039113167-pat00055

    [화학식 14]
    Figure 112018039113167-pat00056

    [화학식 15]
    Figure 112018039113167-pat00057
    .
  6. 삭제
  7. 제4항에 있어서,
    상기 혈구 세포는 백혈구를 제외한 나머지 혈구 세포인 것을 특징으로 하는 혈구 세포 용해용 조성물.
  8. 제4항, 제5항 및 제7항 중 어느 한 항에 따른 혈구 세포 용해용 조성물을 포함하는 혈구 세포 용해용 키트.
  9. 제4항, 제5항 및 제7항 중 어느 한 항에 따른 혈구 세포 용해용 조성물을 포함하는 혈액 분석용 조성물.
  10. 제4항, 제5항 및 제7항 중 어느 한 항에 따른 혈구 세포 용해용 조성물을 포함하는 혈액 분석용 키트.
  11. 하기 화학식 16의 화합물 및 하기 화학식 17의 화합물을 반응시켜 하기 화학식 2 또는 3으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계를 포함하는 혈구 세포 용해용 조성물의 제조방법:
    [화학식 2]
    Figure 112018039113167-pat00069

    [화학식 3]
    Figure 112018039113167-pat00070

    [화학식 16]
    Figure 112018039113167-pat00059

    [화학식 17]
    Figure 112018039113167-pat00060

    상기 화학식 2, 3, 16 및 17에서,
    상기 R1은 카르보닐기,
    상기 R2는 탄소수 n개의 알킬기,
    상기 R5와 R6는 각각 직접 결합과 수소이거나, 카르보닐기와 탄소수 n개의 알킬기,
    상기 n은 7 내지 25의 자연수이다.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 화학식 16과 17로 표시되는 화합물 중 적어도 하나 이상은 용매에 용해시켜 사용하고,
    상기 용매는 N,N-디메틸포르마이드, 다이메틸설폭사이드, 물 및 메탄올 중에서 선택된 1종 이상이며,
    상기 반응은 N,N-디이소프로필에틸아민, 트리에틸아민, 탄산나트륨, 탄산수소나트륨 및 수산화나트륨 중에서 선택된 1종 이상을 추가로 투입하여 수행되는 것을 특징으로 하는 혈구 세포 용해용 조성물의 제조방법.
  13. 하기 화학식 17의 화합물 및 하기 화학식 18의 화합물을 반응시켜 하기 화학식 1b로 표시되는 화합물을 제조하는 단계를 포함하는 혈구 세포 용해용 조성물의 제조방법:
    [화학식 1b]
    Figure 112018039113167-pat00061

    [화학식 17]
    Figure 112018039113167-pat00062

    [화학식 18]
    Figure 112018039113167-pat00063

    상기 화학식 1b 및 17 내지 18에서,
    상기 R2는 탄소수 m개의 알킬기,
    상기 R3와 R4 중 어느 하나는 술폰산기, 다른 하나는 -NHR6이며,
    상기 R6는 탄소수 m개의 알킬기,
    상기 m은 7 내지 25의 자연수이다.
  14. 제13항에 있어서,
    상기 화학식 17 내지 18로 표시되는 화합물 중 적어도 하나 이상은 용매에 용해시켜 사용하고,
    상기 용매는 N,N-디메틸포르마이드, 다이메틸설폭사이드, 물 및 메탄올 중에서 선택된 1종 이상이며,
    상기 반응은 N,N-디이소프로필에틸아민, 트리에틸아민, 탄산나트륨, 탄산수소나트륨 및 수산화나트륨 중에서 선택된 1종 이상을 추가로 투입하여 수행되는 것을 특징으로 하는 혈구 세포 용해용 조성물의 제조방법.
KR1020170024167A 2017-02-23 2017-02-23 혈액 분석용 화합물 및 이의 제조방법 KR101871897B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020170024167A KR101871897B1 (ko) 2017-02-23 2017-02-23 혈액 분석용 화합물 및 이의 제조방법

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020170024167A KR101871897B1 (ko) 2017-02-23 2017-02-23 혈액 분석용 화합물 및 이의 제조방법

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR101871897B1 true KR101871897B1 (ko) 2018-07-02

Family

ID=62914261

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020170024167A KR101871897B1 (ko) 2017-02-23 2017-02-23 혈액 분석용 화합물 및 이의 제조방법

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101871897B1 (ko)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2014106059A (ja) * 2012-11-26 2014-06-09 Sysmex Corp 血球分析方法、血球分析装置およびプログラム

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2014106059A (ja) * 2012-11-26 2014-06-09 Sysmex Corp 血球分析方法、血球分析装置およびプログラム

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Bioconjugate Chem. , 2016, vol. 27 (3), pp 509-514
Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2014, vol.22, pp.505-512
Journal of Physiology, 1975, vol. 246, pp.159-179

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4042925B2 (ja) 幼若白血球の分類計数法
JP3886271B2 (ja) 赤芽球の分類計数用試薬及び分類計数方法
US6004816A (en) Reagent and method for classification and counting of leukocytes
EP0430719B1 (en) Compounds and reagents for determination of reticulocytes
EP3382035B1 (en) Cellular analysis of body fluids
CN101881778B (zh) 网织红细胞模拟物及其制备方法
WO2010013678A1 (ja) 子宮頸部異常細胞検出用試薬及びそれを用いる子宮頸部異常細胞検出方法
US20210015092A1 (en) Stabilization of whole blood at room temperature
JP2009080122A (ja) 赤芽球の分類計数方法
CN107760299B (zh) 6-丹磺酰胺-吲哚类荧光探针及其制备方法与应用
KR101833020B1 (ko) 혈액 분석용 화합물 및 이의 제조방법
KR101871897B1 (ko) 혈액 분석용 화합물 및 이의 제조방법
JP2006091024A (ja) 白血球分類計数方法及び白血球分類計数試薬キット
CN112858690B (zh) 一种尿白蛋白/尿肌酐复合质控品及其制备方法
JP3875916B2 (ja) 尿沈渣検査用試薬及び尿沈渣の検査方法
US7569373B2 (en) Method for counting megakaryocytes
CN110243651B (zh) 一种网织红细胞检测试剂盒及其应用
CN102766346A (zh) 一种菁类荧光染料
KR102150803B1 (ko) 전혈분석을 위한 신규 형광 화합물 및 이의 제조방법
JP4107441B2 (ja) 赤芽球の分類計数用試薬
US11835457B2 (en) Fluorescent composition for detecting biological material
KR102027694B1 (ko) 질소환을 포함하는 양친매성 화합물, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 계면활성제 조성물
KR102027693B1 (ko) 벤젠환과 질소환을 포함하는 양친매성 화합물, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 계면활성제 조성물
Preložnik-Zupan et al. Reticulocyte analysis using light microscopy and two different flow cytometric procedures
FI77938C (fi) Reagens foer bestaemning av antalet trombocyter och leukocyter.

Legal Events

Date Code Title Description
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant