KR102150595B1 - 세리포리아 락세라타 배양액을 포함하는 상처 치료용 약학 조성물 - Google Patents

세리포리아 락세라타 배양액을 포함하는 상처 치료용 약학 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 세리포리아 락세라타(Ceriporia lacerata)의 균사체 배양액 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 상처 치료용 약학 조성물, 및 상처 치유 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액 또는 이의 추출물이 마우스 근원세포인 C2C12 세포의 세포 증식률을 증가시키는 것을 확인하였다. 또한, 상기 균사체 배양액 또는 이의 추출물이 인간 각질세포인 HaCaT 세포의 상처 회복을 촉진시키는 것을 확인하였다. 따라서, 본 발명의 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액 또는 이의 추출물은 피부 상처 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

세리포리아 락세라타 배양액을 포함하는 상처 치료용 약학 조성물{PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR TREATING SCAR COMPRISING CULTURE MEDIUM OF CERIPORIA LACERATA}
본 발명은 세리포리아 락세라타(Ceriporia lacerata)의 균사체 배양액 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 상처 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
피부는 인체의 일차 방어막으로서 온도 변화, 습도 변화, 자외선, 유해물질 등 외부 환경으로부터 체내 기관들을 보호한다. 피부 조직이 손상된 것이 상처이며, 상처가 났을 때 적절히 치료되지 않으면 세균 감염 등으로 체내 장기에 치명적인 손상을 일으킬 수도 있다. 상처 발생 시 손상된 피부 부위가 가능한 한 빨리 본래 피부 구조와 유사하게 복원되도록 치료해주는 것이 중요하다.
상처 치료는 지혈(hemostasis)과 염증기(inflammation)의 1단계, 증식기(proliferation)의 2단계 및 성숙기(remodeling)의 3단계로 이루어지며, 각 단계는 중첩되어 연속적으로 진행된다(Bello Y.M. et al., JAMA, 283(6), 716-718, 2000). 실질적으로 섬유아세포가 상처부위로 이동하여 회복하는 단계는 증식기이다. 증식기에는 신생혈관형성, 콜라겐 축적, 육아조직(granulation tissue) 형성, 상피화(epithelialization), 상처 수축 등이 일어난다(Chang H.Y. et al., PLOS Biol., 2(2), E7, 2004). 또한, 증식기에는 상처 유합과 교원질 섬유(collagenous fiber)의 재배열을 위한 초기 단계로서 섬유아세포(fibroblast)들이 상처 부위에 출현하게 된다(Byl N.N. et al., Arch. Phys. Med . Rehabil ., 73(7), 656-664, 1992). 따라서, 실질적으로 세포 조직이 상처부위로 이동하여 회복하는 단계인 증식기를 활성화시키는 물질을 찾으려는 시도가 이루어지고 있다.
한편, 세리포리아 락세라타(Ceriporia lacerata)는 백색 부후균의 일종으로서, 생태계에서 셀룰로오스, 헤미 셀룰로오스, 기타 다당류 및 글리세롤 등의 탄소원을 이용하기 위하여 리그닌 분해라는 공동대사(co-metabolism)를 수행하는 것으로 알려져 있다.
Bello Y.M. et al., JAMA, 283(6), 716-718, 2000 Chang H.Y. et al., PLOS Biol., 2(2), E7, 2004 Byl N.N. et al., Arch. Phys. Med. Rehabil., 73(7), 656-664, 1992
본 발명자는 피부 상처를 보다 효율적으로 치료할 수 있는 물질에 대해 연구한 결과, 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액이 세포의 증식을 활성화시키고, 상처 회복을 촉진시키는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 일 측면은, 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 상처 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 측면은, 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 상처 치유 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액 또는 이의 추출물이 마우스 근원세포인 C2C12 세포의 세포 증식률을 증가시키는 것을 확인하였다. 또한, 상기 균사체 배양액 또는 이의 추출물이 인간 각질세포인 HaCaT 세포의 상처 회복을 촉진시키는 것을 확인하였다. 따라서, 본 발명의 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액 또는 이의 추출물은 피부 상처 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 상처를 낸 HT-29 세포에 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 처리한 후, 배양액의 농도 및 배양 시간에 따른 상처 크기를 촬영한 사진이다.
도 2는 상처를 낸 HT-29 세포에 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 처리한 후, 배양액의 농도 및 배양 시간에 따른 상처 크기를 나타낸 그래프이다.
도 3은 C2C12 세포에 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 처리한 후, 배양액의 농도에 따른 세포 증식률을 나타낸 그래프이다.
도 4는 상처를 낸 HaCaT 세포에 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 처리한 후, 배양액의 농도 및 배양 시간에 따른 상처 크기를 촬영한 사진이다.
도 5는 HaCaT 세포에 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 처리한 후, 배양액의 농도에 따른 세포 증식률을 나타낸 그래프이다.
본 발명의 일 측면은, 세리포리아 락세라타(Ceriporia lacerata)의 균사체 배양액 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 상처 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 균사체 배양액은 세리포리아 락세라타를 계대배양을 통해 육성한 모균을 배양한 것일 수 있다. 상기 균사체 배양액은 본배양(main fermentation) 또는 본배양 전에 전배양(pre-fermentation)을 한 것일 수 있다. 상기 균사체는 배양 조건, 예컨대, 배양 온도 및 시간에 따라 그 생성 속도 및 배양 종료 시점이 달라질 수 있다. 상기 배양 종료 시점은 특정 시점으로 정해져 있지는 않으나, 15℃ 내지 30℃의 온도에서 배양했을 때, 배양 시작일로부터 11일째, 13일째, 20일째 또는 25일째일 수 있다.
상기 균사체 배양액은 15℃ 내지 30℃의 온도에서 3일 이상 배양된 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 균사체 배양액은 15℃ 내지 30℃의 온도에서 9일 이상 또는 11일 이상 배양된 것일 수 있다.
또한, 상기 균사체 배양액은 20℃ 내지 25℃의 온도에서 3일 이상 배양된 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 균사체 배양액은 20℃ 내지 25℃의 온도에서 9일 이상 또는 11일 이상 배양된 것일 수 있다.
또한, 상기 균사체 배양액은 15℃ 내지 30℃의 온도에서 3일 내지 25일, 9일 내지 13일 또는 9일 내지 11일 동안 배양된 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 균사체 배양액은 20℃ 내지 25℃의 온도에서 3일 내지 25일, 9일 내지 13일 또는 9일 내지 11일 동안 배양된 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 균사체 배양액은 20℃ 내지 25℃의 온도에서 9일 또는 11일 동안 균사체를 배양하여 얻어질 수 있다. 상기 배양은 액체 배양일 수 있다.
상기 세리포리아 락세라타 균사체의 배양을 위한 배지는 포도당을 포함하는 배지일 수 있다. 또한, 상기 배지는 추가적으로 전분, 대두분, 소포제 및 증류수 등을 포함할 수 있다. 상기 배지의 성분 및 성분의 함량은 상기 균사체의 충분한 성장을 위해 적절히 변경될 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 배양을 위한 배지는 배지 1 ℓ당 포도당 12.5 g, 전분 2.5 g, 대두분 5 g 및 소포제 0.125 g을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 세리포리아 락세라타 균사체 배양액은 건조시켜 분말화할 수 있다. 상기 건조는 유효물질의 소멸을 방지하기 위해 40℃ 이하의 온도 또는 30℃ 이하의 온도에서 48 내지 96시간 동안 수행될 수 있다. 상기 건조는 증발온도를 상대적으로 높게 설정하는 진공건조기보다 진공동결건조기를 사용하는 것이 유효물질 함량 변화가 최소화되므로 바람직하다.
상기 상처 치료용 약학 조성물은 세리포리아 락세라타 균사체 배양액의 추출물을 유효 성분으로 포함할 수 있다. 상기 추출물은 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액을 용매로 추출함으로써 제조할 수 있다. 또한, 상기 추출물은 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액을 건조시켜 분말화한 것을 용매로 추출함으로써 제조할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 용매는 증류수, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 아세톤, 에테르, 클로로포름 및 에틸아세테이트로 이루어진 군에서 선택되는 용매 또는 이들의 혼합용매일 수 있다. 구체적으로, 상기 용매는 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올, 아세톤 및 에틸아세테이트로 이루어진 군에서 선택되는 용매 또는 이들의 혼합용매일 수 있으며, 바람직하게는 에틸아세테이트일 수 있다.
본 발명자들은 세리포리아 락세라타 균사체 배양액의 상처 치료 효과를 확인하기 위해 인간 세포주 또는 마우스 세포주를 이용하여 실험을 진행하였다.
구체적으로, 세포의 중앙에 상처를 낸 HT-29 세포에 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 처리한 후, 12시간, 48시간 및 72시간 동안 배양하여, 균사체 배양액의 농도 및 배양 시간에 따른 상처의 크기 변화를 관찰하였다. 그 결과, 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 처리한 군에서 상처의 크기가 유의미하게 감소된 것을 확인하였다(도 1 및 도 2).
또한, 마우스 근원세포주인 C2C12 세포에 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 처리한 후, 12시간, 48시간 및 72시간 동안 배양하고, 각 배양 시간에 따른 세포 증식률을 측정하였다. 그 결과, 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 처리한 군에서 세포 증식률이 증가한 것을 확인하였다(도 3).
나아가, 세포의 중앙에 상처를 낸 HaCaT 세포에 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 처리한 후, 12시간, 48시간 및 72시간 동안 배양하고, 균사체 배양액의 농도 및 배양 시간에 따른 상처의 크기 변화를 관찰하였다. 그 결과, 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 처리한 군에서 상처 크기가 유의미하게 감소된 것을 확인하였다(도 4).
또한, HaCaT 세포에 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 처리한 후, 12시간, 48시간 및 72시간 동안 배양하고, 배양 시간에 따른 세포 증식률을 측정하였다. 그 결과, 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 처리한 군에서 세포 증식률이 증가한 것을 확인하였다(도 5).
이를 통해, 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 포함하는 상처 치료용 약학 조성물은 세포의 증식률을 증가시키며, 상처 회복을 촉진시키는 것을 확인하였다. 따라서, 본 발명의 약학 조성물은 상처 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
상기 균사체 배양액 또는 이의 추출물은 상처 치료용 약학 조성물 총 중량 대비 0.1 내지 80 중량%, 또는 0.1 내지 50 중량%로 포함될 수 있다. 상기 균사체 배양액 또는 이의 추출물의 유효 함량은 약학 조성물의 사용방법 및 목적에 따라 적절히 조절될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액, 상기 균사체 배양액의 건조분말 또는 상기 균사체 배양액의 추출물을 유효성분으로 포함할 수 있다.
상기 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는, 상처 치료용 약학 조성물은 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 추가로 포함할 수 있다.
상기 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 제형화하여 사용될 수 있다. 적합한 제형으로는 정제, 환제, 산제, 과립제, 당의정, 경질 또는 연질의 캡슐제, 용액제, 현탁제 또는 유화액제, 주사제, 좌제 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 약학 조성물은 약학적으로 불활성인 유기 또는 무기 담체를 이용하여 적합한 제형으로 제조할 수 있다. 즉, 제형이 정제, 코팅된 정제, 당의정 및 경질 캡슐제인 경우, 락토오스, 수크로오스, 전분 또는 그 유도체, 탈크, 칼슘 카보네이트, 젤라틴, 스테아르산 또는 그 염을 포함할 수 있다. 또한, 제형이 연질 캡슐제인 경우, 식물성 오일, 왁스, 지방, 반고체 및 액체의 폴리올을 포함할 수 있다. 나아가, 제형이 용액 또는 시럽 형태인 경우, 물, 폴리올, 글리세롤, 및/또는 식물성 오일 등을 포함할 수 있다.
상기 약학 조성물은 상기의 담체 외에도 보존제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 용해제, 감미제, 착색제, 삼투압 조절제, 산화방지제 등을 더 포함할 수 있다.
상기 약학 조성물의 투여방법은 제형에 따라 용이하게 선택될 수 있으며, 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 투여량은 환자의 나이, 성별, 체중, 병증의 정도, 투여경로에 따라 달라질 수 있으나, 일반적으로 유효성분인 상기 균사체 배양액을 기준으로 5 내지 1,000 mg/kg체중의 양, 구체적으로는 10 내지 600 mg/kg체중의 양을 1일 1회 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 상기 투여량은 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
상기 약학 조성물의 투여 형태는 상처 치료를 필요로 하는 부위에 국소적 도포 또는 피내 주사일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 다른 측면은, 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 상처 치유 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 화장료 조성물은 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액, 상기 균사체 배양액의 건조분말 또는 상기 균사체 배양액의 추출물을 유효성분으로 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 화장료 제형으로 제제화될 수 있다. 상기 화장료 조성물은 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이크림, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제제화될 수 있다.
이하, 본 발명을 하기 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.
제조예 1. 세리포리아 락세라타 균사체 배양액의 제조
1.1. 전배양 (pre-fermentation) 배지 준비
전배양은 본배양 배지량의 0.1% 비율로 준비하였으며, 전배양시 사용한 배지는 PDB(Potato Dextrose Broth, 254920, Difco, USA)이다. 상기 PDB 배지는 제조사의 지시에 따라 1 ℓ 삼각플라스크에 24 g/ℓ 농도로 증류수에 용해시켰으며, 용해된 배지의 pH는 4.5±0.1이었다. 삼각플라스크의 구멍을 스토퍼로 밀봉한 뒤 알루미늄 호일로 한 번 더 밀봉했다. 이후, 121℃ 온도에서 15분 동안 고온 습식 멸균하고, 멸균이 완료된 전배양 배지는 클린벤치(Clean bench, HB-402V, HANBAEK, Korea) 내에서 6시간 동안 방치하여 실온까지 온도를 낮췄다.
1.2. 전배양
세리포리아 락세라타를 계대배양을 통해 육성한 모균을 -80℃ 온도에 냉동보관하였고, 보관중인 균주를 PDA(potato dextrose agar) 배지(87 플라스틱 배양구; Difco, Becton Dickinson and Company)에서 2회 내지 3회 계대배양한 균주(이하 "PDA 배양균주"라 함)를 4℃ 온도의 냉장고에 보관하여 사용하였다.
클린벤치 내에서 멸균된 믹서에 PDA 배양균주 1개와 상기 제조예 1.1의 전배양 배지 200 ㎖를 넣고 80초간 혼합한 후, 상기 제조예 1.1의 전배양 배지 400 ㎖를 추가하고 혼합하였다. 이후, 혼합액을 새로운 삼각플라스크에 넣고 스토퍼로 밀봉한 뒤에 25℃ 온도, 150 rpm 조건으로 세팅된 진탕배양기(HB-201SL, HANBAEK, Korea)에 넣은 뒤 9일간 배양하였다.
1.3. 본배양 (main-fermentation) 배지 준비
하기 표 1에 기재된 원료와 증류수를 배지용해조에 넣고 임펠라(impella)를 15분간 가동하여 배지를 충분히 용해시켰다. 용해된 배지에 총량이 600 ℓ가 되고 각 원료의 농도가 하기 표 1의 농도가 되도록 증류수를 첨가하였다. 이후, Production fermentor(Aerobic type, Non-stirred)를 이용하여 121℃ 온도에서 60±5분간 배지를 멸균하였다.
원료 농도
포도당(Glucose) 12.5 g/ℓ
전분(Potato starch) 2.5 g/ℓ
탈지 대두분(Defatted soybean) 5.0 g/ℓ
규소 성분을 포함하는 소포제
(Anti-foaming agent; 상품명 TJ2002)		 0.125 g/ℓ
1.4. 본배양
상기 제조예 1.3의 멸균된 배지를 냉각수를 이용하여 22±1℃ 온도까지 냉각시켰으며, 음압을 방지하기 위해 필터링된 공기를 계속 주입하여 외부 오염을 방지했다. 접종구 주변에 화염을 일으켜 외부 입자(particle)의 유입을 방지하면서 플라스크를 화염구 안쪽으로 넣어 주어 시드(seed)를 접종했다. 접종 완료 후, 공기 유입량을 0.05 내지 1 vvm(volume/배지 volumeㆍminute)으로 조절하면서 약 11일간 배양하여 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 제조하였다.
1.5. 세리포리아 락세라타 배양액 분말의 제조
상기 제조예 1.4의 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 진공동결건조기를 이용하여 25℃ 온도에서 72시간 동안 진공동결건조시켜 분말화함으로써, 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 분말을 제조하였다.
제조예 2. 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액의 추출물
상기 제조예 1.4에서 제조된 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 600 ㎖에 에틸아세테이트 900 ㎖를 첨가하고 혼합한 후 정치하였다. 이후, 정치물 중 에틸아세테이트 층을 분리한 후 진공회전농축기(rotary evaporator)를 이용하여 35℃ 온도에서 감압 농축하였다. 상기 감압 농축물을 진공동결건조기를 이용하여 25℃ 온도에서 72시간 진공동결건조시켜 세리포리아 락세라타 균사체 배양액의 에틸아세테이트 추출물을 수득하였다.
실험예 1. 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액 처리에 따른 HT-29 세포의 상처 회복능 평가
한국 세포주 은행으로부터 분양받은 인간 직장 선암 세포주(human colorectal adenocarcinoma cell line, HT-29)를 10% FBS(fetal bovine serum) 및 1% P/S(Penicillin-Streptomycin)를 포함하는 RPMI 1640 배지에서 48시간 동안 배양하였다. 이후, 상기 세포를 세포 배양용 12-웰 플레이트에 웰 당 3x105 (cells/well)으로 접종하여 배양하였다. 이후, 세포가 부착되면 마이크로파이펫 팁(tip)으로 세포가 배양된 부분의 중앙을 긁어 상처를 낸 후, 0시간에 해당하는 사진을 촬영하였다. 이후, 상기 제조예 1.5에서 제조한 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 분말을 DMSO에 녹여 농도별(0 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖, 500 ㎍/㎖ 및 1,000 ㎍/㎖)로 처리하고 CO2 배양기에서 12시간, 48시간 및 72시간 동안 배양하여 각 시간에 따른 상처의 크기 변화를 관찰하였다.
도 1 및 도 2에 나타난 바와 같이, 대조군(0 ㎍/㎖)에 비해 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 처리한 군에서 상처 크기가 감소하였다. 특히, 500 ㎍/㎖의 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 처리한 실험군에서 상처 크기가 시간이 지남에 따라 가장 많이 감소하였다.
실험예 2. 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액 처리에 따른 C2C12 세포 증식률 평가
한국 세포주 은행으로부터 분양받은 마우스 근원세포주(mouse myoblast cell line, C2C12)를 10% FBS 및 1% P/S를 포함하는 DMEM 배지에서 48시간 동안 배양하였다. 이후, 상기 세포를 세포 배양용 24-웰 플레이트에 웰 당 1.5x105 (cells/well)으로 접종하여 배양하였다. 이후, 세포가 부착되면 상기 제조예 1.5에서 제조한 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 분말을 DMSO에 녹여 농도별(0 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖, 500 ㎍/㎖ 및 1,000 ㎍/㎖)로 처리하고 24시간 동안 CO2 배양기 안에서 배양하였다. 상기 배양한 C2C12 세포의 배양액을 96-웰 플레이트에 각각 100 ㎕씩 분주한 후, CCK-8 분석 키트(Dojindo, 미국)를 이용하여 450 nm 파장에서 흡광도를 측정함으로써 각 군의 세포 증식률을 관찰하였다.
도 3에 나타난 바와 같이, 대조군(0 ㎍/㎖)에 비해 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 처리한 군에서 세포 증식률이 증가하였다. 특히, 500 ㎍/㎖의 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 처리군에서 세포 증식률이 가장 높게 나타났다.
실험예 3. 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액 처리에 따른 HaCaT 세포의 상처 회복능 평가
CLS cell line service(Germany)로부터 분양받은 인간 각질세포(human keratinocyte, HaCaT)를 10% FBS 및 1% P/S를 포함하는 RPMI 1640 배지에서 48시간 동안 배양하였다. 이후, 상기 세포를 세포 배양용 12-웰 플레이트에 웰 당 3x105 (cells/well)으로 접종하여 배양하였다. 이후, 세포가 부착되면 마이크로파이펫 팁으로 세포가 배양된 부분의 중앙을 긁어 상처를 낸 후, 0시간에 해당하는 사진을 촬영하였다. 이후, 상기 제조예 1.5에서 제조한 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 분말을 DMSO에 녹여 농도별(0 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖, 500 ㎍/㎖ 및 1,000 ㎍/㎖)로 처리하고 CO2 배양기에서 12시간, 48시간 및 72시간 동안 배양하여 각 시간에 따른 상처의 크기 변화를 관찰하였다.
도 4에 나타난 바와 같이, 대조군(0 ㎍/㎖)에 비해 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 처리한 군에서 상처의 크기가 감소하였다. 특히, 1,000 ㎍/㎖의 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 처리한 실험군에서 상처 크기가 시간이 지남에 따라 가장 많이 감소하였다.
실험예 4. 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액 처리에 따른 HaCaT 세포 증식률 평가
한국 세포주 은행으로부터 분양받은 HaCaT 세포주를 10% FBS 및 1% P/S를 포함하는 DMEM 배지에서 48시간 동안 배양하였다. 이후, 상기 세포를 세포 배양용 24-웰 플레이트에 웰 당 1.5x105 (cells/well)으로 접종하여 배양하였다. 이후, 세포가 부착되면 상기 제조예 1.5에서 제조한 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 분말을 DMSO에 녹여 농도별(0 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖, 500 ㎍/㎖ 및 1,000 ㎍/㎖)로 처리하고 24시간 동안 CO2 배양기 안에서 배양하였다. 상기 배양한 HaCaT 세포의 배양액을 96-웰 플레이트에 각각 100 ㎕씩 분주한 후, CCK-8 분석 키트를 이용하여 450 nm 파장에서 흡광도를 측정함으로써 각 군의 세포 증식률을 관찰하였다.
도 5에 나타난 바와 같이, 대조군(0 ㎍/㎖)에 비해 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 처리한 군에서 세포 증식률이 증가하였으며 특히, 1,000 ㎍/㎖의 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 처리군에서 세포 증식률이 가장 높게 나타났다.
상기 실험예 1. 내지 실험예 4.의 결과들에서 확인되는 바와 같이, 세리포리아 락세라타 균사체 배양액은 세포 증식률을 증가시키며, 상처 회복을 촉진시키는 것을 확인하였다. 상기 균사체 배양액의 추출물 또한 동일한 효과를 나타내었다.

Claims (8)

  1. 세리포리아 락세라타(Ceriporia lacerata)의 균사체 배양액 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는, 상처 치료용 약학 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 균사체 배양액이 15℃ 내지 30℃의 온도에서 3일 이상 배양된 것인, 상처 치료용 약학 조성물.
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 균사체 배양액이 15℃ 내지 30℃의 온도에서 9일 이상 배양된 것인, 상처 치료용 약학 조성물.
  4. 제 1 항에 있어서,
    상기 균사체 배양액이 15℃ 내지 30℃의 온도에서 11일 이상 배양된 것인, 상처 치료용 약학 조성물.
  5. 제 1 항에 있어서,
    상기 추출물이 상기 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 증류수, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 아세톤, 에테르, 클로로포름 및 에틸아세테이트로 이루어진 군에서 선택되는 용매 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것인, 상처 치료용 약학 조성물.
  6. 제 1 항에 있어서,
    상기 균사체 배양액 또는 이의 추출물이 약학 조성물 총 중량에 대하여 0.1 내지 80 중량%로 포함되는, 상처 치료용 약학 조성물.
  7. 제 1 항에 있어서,
    상기 균사체 배양액이, 세리포리아 락세라타의 균사체를 포도당을 포함하는 배지에서 배양한 것인, 상처 치료용 약학 조성물.
  8. 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는, 상처 치유 개선용 화장료 조성물.
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