KR102137144B1 - 피라칸타 잎 추출물을 포함하는 항염증용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 포함함에 따라, 항염증 효과를 가지는 조성물을 제공하는 데에 있다.

Description

피라칸타 잎 추출물을 포함하는 항염증용 조성물{COMPOSITION FOR ANTI-INFLAMMATION COMPRISING LEAF EXTRACTS OF PYRACANTHA ANGUSTIFOLIA}

본 발명은 피라칸타 잎 추출물을 포함하는 항염증용 조성물에 관한 것이다.

염증은 세포나 조직이 어떠한 원인에 의해 손상을 받으면 그 반응을 최소화하고, 손상된 부위를 원래의 상태로 회복시키려는 일련의 방어 반응이다. 염증을 유발하는 원인에는 외상, 화상, 동상, 방사능 등에 의한 물리적 요인과 산과 같은 화학물질에 의한 화학적 요인 및 항체 반응에 의한 면역학적 요인들이 있고, 그 외에 혈관이나 호르몬 불균형에 의해서도 발생될 수 있다.

초기에는, 외부 자극에 의해 손상된 세포들이 분비하는 여러 종류의 화학 매개 물질에 의해 혈관이 확장되며, 투과성이 높아져 항체, 혈장, 식균 세포 등이 염증 부위로 모여들어 침입한 세균을 공격한 후, 상처 부위에 혈장이 축적되고 혈류가 증가되며 발열, 홍반, 부종, 통증 현상 등의 외적 증상이 발생된다. 이러한 염증 반응이 지속적으로 또는 과도하게 일어나면 오히려 질환의 주요 병리현상(과민성 알러지 질환, 만성 염증 질환)으로 진행되어, 심각한 이상 장애를 초래하게 된다. 이러한 염증 반응에는 다양한 생화학적 현상이 관여하는데, 특히 산화질소 합성효소(Nitric oxide synthase, NOS)가 염증 반응의 중요한 매개체로 알려져 있다.

산화질소 합성효소는 칼슘이나 카모듈린 의존성인 내피성 NOS와 신경성 NOS 및 LPS(Lipopolysccharide)와 같은 세균의 내독소나 IL-Iβ, TNF-α, IL-6, IL-8, IL-12과 같은 여러 염증성 사이토카인에 의해 유도되는 유도성 NOS가 있으며, L-아르기닌(L-arginine)으로부터 산화질소(NO)를 생성한다. 상기 내피성 NOS 및 신경성 NOS에 의해 생성되는 산화질소는 혈압 조절 작용, 신경 전달 작용, 학습, 기억 등과 인체의 항상성 유지에 중요한 역할을 하나, 유도성 NOS에 의해 생성되는 산화질소는 관절염, 폐혈증, 조직이식거부반응, 자가면역질환, 신경세포의 사멸 등 다양한 염증성 질환에 관여하는 것으로 알려져 있다.

현재 염증 완화를 목적으로 비스테로이드계로 이부프로펜(Ibuprofen), 플루페나믹산(Flufenamic acid) 및 인도메타신(Indomethacin) 등이 있고, 스테로이드계로는 프레드니솔린(Prednisolone) 및 덱사메타손(Dexmethasone) 등이 있으나, 상기 물질들은 주 치료작용 외에 위장관 장애, 간 장애, 신장 장애 등의 심각한 부작용을 야기하는 문제가 있었다. 또한, 상기 인도메타신 등은 화장품에 적용이 어렵고, 실제 적용 농도에 제한이 있어 항염 효과가 미미한 문제가 있었다.

이에 따라, 부작용이 거의 없는 천연물질로 이루어져, 인체에 무리가 없으면서도 항염증 효과가 우수하며, 다양한 제형 내지 제품에 적용될 수 있는 조성물에 대한 요구가 증가하고 있다.

Moncade S. et al, Pharmacol. Rev., 1991, 43, 109; Nature Medicine, 2001, 7, 1138; Mu, M. M., J.Endotoxic Res. 7, p341, 2001. Rainsford KD., Subcell biochem., 42, pp3-27, 2007. Guruprasad P.Aithal.,Rheumatology., 7, pp139-150, 2011. Praveen P. N. Rao et al.,Pharmaceuticals., 3, pp1530-1549, 2010.

본 발명의 목적은 피라칸타의 다양한 부위 중, 잎 부분만을 추출한 추출물을 유효성분으로 포함함에 따라, 항염증 효과를 가지는 조성물을 제공하는 데에 있다.

본 발명의 목적은 상기된 바와 같은 기술적 과제로 한정되지 않으며, 이하의 설명으로부터 또 다른 기술적 과제가 도출될 수 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 피라칸타(Pyracantha angustifolia) 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물을 제공한다.

상기 피라칸타 잎 추출물의 추출 용매는 물, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 아세톤, 에틸 아세테이트, 헥산, 프로판올 및 1,3-부틸렌 글리콜로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함할 수 있다.

상기 조성물은 상기 조성물 총 중량 기준으로 상기 피라칸타 잎 추출물을 0.001 내지 10 중량%로 포함할 수 있다.

상기 조성물은 화장료 조성물 또는 약학 조성물 일 수 있다.

상기 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 수렴화장수, 스킨, 로션, 에센스, 크림, 마사지 크림, 팩, 메이크업 베이스, 비비크림, 파운데이션, 파우더, 클렌징 폼, 클렌징 크림 및 클렌징 워터로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 제형일 수 있다.

상기 약학 조성물은 과립제, 레모네이드제, 산제, 시럽제, 액제, 엑스제, 엘릭서제, 유동엑스제, 유제, 현탁제, 전제, 침제, 정제, 주정제, 캡슐제, 틴크제, 환제, 경피흡수제, 로션제, 리니멘트제, 에어로솔제, 연고제, 첩부제, 파스타제, 카타플라스마제, 크림제, 페이스트제제, 비수용성용제, 동결건조 제제, 좌제 및 주사제로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 제형일 수 있다.

본 발명의 조성물은 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 포함함에 따라 항염증 효과를 가질 수 있다. 더 상세히, 피라칸타의 다양한 부위 중에서 선택적으로 잎을 사용함에 따라 항염증 효과를 향상시킬 수 있을 뿐 아니라 그 중에서도 추출용매로서 에탄올을 사용함으로써 항염증 효과를 현저히 향상시킬 수 있다.

도 1은 실험예 3에 따라 분리된 화합물 1의 HPLC 분석 결과이다.
도 2는 실험예 3에 따라 분리된 화합물 2의 HPLC 분석 결과이다.
도 3은 실험예 3에 따라 분리된 화합물 3의 HPLC 분석 결과이다.

아래에서는 첨부한 도면을 참조하여 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예를 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다. 그리고 도면에서 본 발명을 명확하게 설명하기 위해서 설명과 관계없는 부분은 생략하였다.

본 발명의 명세서 및 청구범위에 사용된 용어 또는 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정 해석되지 아니하며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.

본 발명의 명세서 전체에 있어서, 어떤 부분이 어떤 구성 요소를 "포함" 한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성 요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.

본 발명의 명세서 전체에 있어서, "A 및/또는 B"는, A 또는 B, 또는 A 및 B를 의미한다.

본 발명의 명세서 전체에 있어서, "추출물"은 추출 방법, 추출 용매, 추출된 성분 또는 추출물의 형태를 불문하고, 천연물질의 성분을 뽑아냄으로써 얻어진 물질을 모두 포함하는 것이며 또한 천연물질의 성분을 뽑아내어 얻어진 물질을 추출 후 다른 방법으로 가공 또는 처리하여 얻어질 수 있는 물질을 모두 포함하는 광범위한 개념이다.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명을 구체적으로 설명하였으나, 본 발명이 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명은 피라칸타 ( Pyracantha angustifolia ) 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물을 제공한다.

피라칸타(학명 : Pyracantha angustifolia)는 쌍떡잎식물 장미목 장미과 피라칸타속 식물로서, 피라칸타 앙구스티폴리아 또는 피라칸타 안구스티폴리아라고도 불린다. 이러한 피라칸타는 높이 1 ~ 4 m 이며, 줄기는 가지가 많이 갈라져서 엉키고, 가시가 있는 형태로, 잎자루는 없거나 1 ~ 3 mm로 형성된 것이 특징이다. 한국에서는 중국 서남부산인 앙구스티폴리아를 흔히 심으며 속명인 피라칸타로 통하고 있고, 근래에는 남유럽에서 아시아 서부 원신인 콕키네아(P. 　 coccinea)와 중국과 히말라야산인 크레눌라타(P. 　 crenulata) 등도 함께 심고 있다.

본 실시예의 상기 피라칸타 잎 추출물은 피라칸타 잎의 추출 처리에 의해 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 분획물 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. 상기 추출물은 바람직하게는 추출 후 건조 분말 형태로 제조되어 사용될 수 있으며, 상기 피라칸타 잎은 건조된 것일 수 있다.

본 실시예에서 피라칸타 잎의 추출 처리에는 물, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 아세톤, 에틸 아세테이트, 헥산, 프로판올 및 1,3-부틸렌 글리콜로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 추출용매가 적용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 실시예의 피라칸타 잎 추출물은 피라칸타 잎을 세척하고 건조하는 단계; 건조된 피라칸타 잎을 추출용매로 추출하는 단계; 상기 추출된 추출액을 여과하는 단계; 상기 여과된 여과액을 감압 농축하는 단계 등을 포함하는 제조방법에 의해 제조될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 건조된 피라칸타 잎을 추출용매로 추출하는 단계에서는 초음파 처리가 실시될 수 있으며, 상기 추출 이후에는 분획이 더 실시될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 실시예의 피라칸타 잎 추출물은 피라칸타 열매 추출물 또는 피라칸타 가지 추출물과 비교할 때, 세포 독성이 거의 없으면서도 염증성 매개물질인 일산화질소(NO)를 매우 유의적으로 저해할 수 있다. 특히, 본 실시예의 피라칸타 잎 추출물이 피라칸타 잎의 에탄올 추출물일 때, 염증성 매개물질인 일산화질소를 더욱 유의적으로 저해할 수 있다.

또한, 본 실시예의 피라칸타 잎 추출물은 폴리페놀의 일종인, (±)-epicatechin, (-)-catechin, (+)-catechin 포함할 수 있다.

본 실시예의 조성물은 상기 조성물 총 중량 기준으로 피라칸타 잎 추출물을 0.001 ~ 10 중량%, 바람직하게는 0.01 ~ 8 중량%, 더욱 바람직하게는 0.1 ~ 5 중량%로 포함될 수 있다. 만약, 조성물 총 중량 기준으로 피라칸타 잎 추출물을 0.001 중량% 미만으로 포함할 경우에는 피라칸타 잎 추출물에 의한 염증성 질환의 예방, 개선 또는 치료 효과가 미미하며, 조성물 총 중량 기준으로 피라칸타 잎 추출물을 10 중량%를 초과할 경우에는 경제적이지 못한 문제가 있을 수 있다.

본 실시예의 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.

본 실시예의 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 화장료 조성물은 상기 피라칸타 잎 추출물 이외에 미용학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제, 방향제, 계면활성제, 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 등이 있으나, 이에 제한되지 않으며, 화장료 조성물에 적용 가능한 공지된 모든 물질이 포함될 수 있다.

또한, 본 실시예의 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 수렴화장수, 스킨, 로션, 에센스, 크림, 마사지 크림, 팩, 메이크업 베이스, 비비크림, 파운데이션, 파우더, 클렌징 폼, 클렌징 크림 및 클렌징 워터로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 제형으로 형성될 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 공지된 모든 제형으로 형성될 수 있다.

한편, 상기와 같은 제형을 가지는 본 실시예의 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 화장료 조성물이 페이스트, 크림 또는 겔 상태로 형성될 경우에는 동물성유, 식물성유, 확스, 파라핀, 전분, 트라가칸트 검, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 등을 더 포함할 수 있다.

상기 본 실시예의 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 화장료 조성물이 용액 또는 유탁액 형태로 형성될 경우에는 용매, 용해화제, 유탁화제 등을 더 포함할 수 있다. 상기 용매, 용해화제, 유탁화제로는 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸카보네이트, 에틸아세테이트, 벤질알코올, 벤질벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 등을 포함할 수 있다.

상기 본 실시예의 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 화장료 조성물이 현탁액 형태로 형성될 경우에는 물, 에탄올, 프로필렌글리콜 등의 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 등의 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가, 트라가칸트 검 등을 더 포함할 수 있다.

상기 본 실시예의 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 화장료 조성물이 클렌징 폼, 클렌징 크림 또는 클렌징 워터일 경우에는 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메칠타우레이트, 사르코시네이트계 화합물, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세라이드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체, 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등을 더 포함할 수 있다.

본 실시예의 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물은 약학 조성물일 수 있다.

본 실시예의 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 약학조성물의 투여 형태는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용될 수 있으며, 단독 또는 타약학적 활성 화합물과 결합된 형태로 사용될 수 있다. 상기 염으로는 약학적으로 허용되는 것이면 특별히 한정되지 않으며, 예를 들어, 염산, 황산, 질산, 인산, 불화수소산, 브롬화수소산, 포름산아세트산, 타르타르산, 젖산, 시트르산, 푸마르산, 말레산, 숙신산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, 톨루엔술폰산, 나프탈렌술폰산 등을 사용할 수 있다.

상기 약학 조성물은 과립제, 레모네이드제, 산제, 시럽제, 액제, 엑스제, 엘릭서제, 유동엑스제, 유제, 현탁제, 전제, 침제, 정제, 주정제, 캡슐제, 틴크제, 환제, 경피흡수제, 로션제, 리니멘트제, 에어로솔제, 연고제, 첩부제, 파스타제, 카타플라스마제, 크림제, 페이스트제제, 비수용성용제, 동결건조 제제, 좌제 및 주사제로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 제형일 수 있다.

이에 따라, 본 실시예의 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 약학 조성물은 상기 피라칸타 잎 추출물 이외에 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제, 부형제, 담체를 더 포함할 수 있다.

예를 들어, 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 레모네이트제, 엘릭서제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성 용제 및 현탁 용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 실시예의 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 약학 조성물은 랫트, 마우스, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 복강내, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자욱내 경막 또는 뇌혈관내 주사에 의해 투여될 수 있다. 이때, 비경구 경로로는 경피 투여가 바람직하며, 그 중에서도 국소 도포가 가장 바람직할 수 있다.

본 실시예의 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 약학 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서 본 실시예의 약학 조성물은 0.1 ~ 100 mg/kg의 양을 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 실시예의 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 약학 조성물의 비경구 경로 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 외용제의 경우 1 일당 1.0 ~ 3.0 ml를 1회 내지 수회로 나누어 도포할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

이하 실시예, 비교예, 및 실험예를 통하여 본 발명의 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물에 대해 구체적으로 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.

실시예

실시예 1 : 피라칸타 잎의 에탄올 추출물

건조된 피라칸타(Pyracantha angustifolia) 잎 859.7 g과 에탄올 5 Kg을 혼합하여, 실온에서 2회 반복 초음파 추출(1시간 1회 추출)한 다음, 이를 여과하였다. 이어서, 상기 여과된 여과액을 감압농축하여 건조함으로써 분말 형태의 피라칸타 잎 추출물(146.6 g)을 제조하였다.

실시예 2 : 피라칸타 잎의 메탄올 추출물 제조

추출 용매로서 에탄올을 대신하여 메탄올을 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1과 동일하게 제조하였다.

비교예

비교예 1 내지 6

하기 표 1에 개시된 바를 제외하고는 실시예 1과 동일하게 추출물을 제조하였다.

비교예	1	2	3	4	5	6
추출부위	가지		열매		꽃
추출용매	에탄올	메탄올	에탄올	메탄올	에탄올	메탄올

실험예

실험예 1 : 세포 독성 평가

한국 세포주 은행으로부터 분양받은 RAW 264.7(마우스 유래 대식 세포)를 10% FBS(Fetal Bovine Serum, 우태아혈청), 100 IU/mL penicilin 및 100 ㎍/mL streptomycin을 포함하는 DMEM 배지를 이용하여, 약 37 ℃로 유지되는 배양기에서 공기 (95 %)와 CO₂ (5 %)의 혼합기체를 지속적으로 공급하면서 배양하였다.

상기 배양된 RAW 264.7 세포주를 새로운 10 % FBS(Fetal Bovine Serum, 우태아혈청), 100 IU/mL penicilin 및 100 ㎍/mL streptomycin을 포함하는 DMEM 배지로 옮긴 후, 실시예 1, 2 및 비교예 1 내지 6의 추출물을 농도 별로(10, 25, 50 ㎍/ mL) 처리하여 상기와 동일한 조건으로 약 3일 동안 배양하였다.

이어서, 상기에 따라 배양된 RAW 264.7 세포주의 생존율을 MTT[3-(4,5-dimethythiazol-2-yl)-2,5 -diphenyl terazolium bromid] 환원방법으로 측정하였다.

상기 MTT 환원방법은 다음과 같다. 상기에 따라 배양된 RAW 264.7 세포주가 담긴 각 well에 약 5mg/mL 의 MTT 용액을 가하여 37 ℃에서 2 시간 추가 배양한 후, 배지를 제거하고 MTT를 환원시켜 생성된 Formazan을 DMSO를 이용하여 용해시킨 다음 약 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 상기 흡광도 측정시 공시료는 DMSO로 처리하였고, 세포의 생존율은 하기와 같이 계산하였으며, 그 결과를 표 2에 나타내었다.

Cell viability (%) = [Abs. of sample / Abs. of control] × 100

Cell viability( % )	10 ㎍/mL	25 ㎍/mL	50 ㎍/mL
실시예 1	100.4±8.5	99.1±7.5	99.6±6.8
실시예 2	97.5±6.1	96.8±3.8	96.2±3.4
비교예 1	69.6±1.7	69.5±4.7	69.9±4.5
비교예 2	65.3±5.2	63.4±3.7	60.3±3.3
비교예 3	69.6±2.2	68.4±1.7	69.9±3.3
비교예 4	66.9±1.8	65.1±1.0	60.4±4.1
비교예 5	61.5±0.8	60.4±2.2	58.4±1.4
비교예 6	58.4±2.1	56.4±1.8	52.1±1.7

상기 표 2를 보면, 실시예 1 및 2에 비해 비교예 1 내지 6의 세포 생존율이 낮음을 확인할 수 있는바, 이로부터 피라칸타의 다양한 부위 중 잎을 이용하여 추출물을 제조할 경우에는 세포 독성이 거의 없음을 확인할 수 있다.

또한, 동일한 피라칸타 잎 추출물 중에서도 추출용매로서 에탄올을 사용한 실시예 1의 세포 생존률이, 추출용매로서 메탄올을 사용한 실시예 2의 세포 생존률 보다 높음을 확인할 수 있다.

실험예 2 : NO(일산화질소 생성 저해능 )

RAW 264.7 세포주를 배양한 다음, 세포를 1 X 10⁵ cells/mL 로 희석하여 배양 용기에 이식하고 12 시간 후 실시예 1, 2 및 비교예 1 내지 6의 추출물을 농도별(10, 25, 50 ㎍/ mL)로 배양 세포에 처리하였다. 이어서, 약 1 시간 후에 100 mg/mL의 LPS를 처리하여 NO 생성을 유도하고 다시 24시간 후 NO 생성 저해활성을 Griess assay로 측정하여, 시료의 NO 생성 저해 활성을 하기 표 3에 나타내었다.

통계처리 - 각 시험 물질에 대한 농도별 실험은 3개의 well에 걸쳐 수행되었으며, 그 결과를 3개 측정값의 평균 ± 표준편차로 나타내었다. 통계적 유의성을 검토하기 위해 대조값으로부터의 변동을 one-way ANOVA test에 의해 판정하였으며, P 값이 5% 미만인 경우 (p < 0.05) 통계적으로 유의성이 있는 것으로 간주하였다.

NO production( % )	10㎍/mL	25㎍/mL	50㎍/mL
실시예 1	9.3±2.4	9.8±4.1	4.4±6.2
실시예 2	15.1±2.1	13.0±0.8	11.8±1.1
비교예 1	53.0±2.8	55.7±8.2	43.2±1.8
비교예 2	66.8±1.1	63.4±1.8	60.1±1.4
비교예 3	45.4±3.4	41.5±7.2	23.0±0.0
비교예 4	57.2±1.3	53.4±0.0	45.2±1.5
비교예 5	56.8±1.2	51.5±0.0	48.8±1.1
비교예 6	60.8±0.0	51±1.0	43.1±0.8

상기 표 3을 보면, 실시예 1 및 2의 일산화질소 생성량이 비교예 1 내지 6에 비해 현저히 낮은바, 피라칸타의 다양한 부위 중에서 피라칸타 잎의 추출물의 일산화질소 생성 저해능이 우수함을 확인할 수 있다. 즉, 피라칸타 잎 추출물이 항염증 효과를 가짐을 알 수 있다.

또한, 동일한 피라칸타 잎 추출물 중에서도 추출용매로서 에탄올을 사용한 실시예 1의 일산화질소 생성 억제 효율이 추출용매로서 메탄올을 사용한 실시예 2의 일산화질소 생성 억제 효율 보다 높음을 확인할 수 있다.

상기 실험예 1 및 2를 종합하면, 피라칸타의 다양한 부위 중에서 피라칸타 잎을 이용한 피라칸타 잎 추출물의 경우 세포 독성이 거의 없으면서도 일산화질소의 생성을 현저히 억제시킴에 따라, 항염증 효과를 갖음을 알 수 있다.

실험예 3 : 실시예 1의 피라칸타 잎 추출물의 구조동정

상기 실시예 1에 따른 피라칸타 잎 추출물을 증류수로 현탁한 후, 용매(n-hexane, CHCl₃, EtOAc, n-butanol)의 극성에 따라 순차적으로 분획하여, 분획물 n-hexane(4.9 g), CHCl₃(14.8 g), EtOAc(16.9 g), n-butanol(14.6 g)을 수득하였다.

그 중, EtOAc 분획물을 silica gel column chromatography(n-hexane : EtOAc = 100 : 0 → 90 : 10)를 실시하여, 10 개의 소분획(EA1 ~ EA10)을 얻었다. 상기 10 개의 소분획 중 8 번째 분획물(EA8)을 ODS C₁₈ Colunm chromatography(H₂O : AcCN = 95 : 5 → 0 : 100)를 실시하여 추가적으로 20 개의 소분획(EA8-1 ~ EA8-20)을 얻었다. 그 중 4 번째 분획(EA8-4)으로부터 HPLC C₁₈ RP(H₂O : AcCN = 95 : 5 → 0 : 100)를 실시하여, 화합물 1, 2 및 3을 분리하였다.

도 1 ~ 3을 보면, 실시예 1에 따른 피라칸타 잎 추출물로부터 폴리페놀의 일종인, 화합물 1은 (±)-epicatechin이며, 화합물 2는 (-)-catechin 이고, 화합물 3은 (+)-catechin으로 분석되었다.

제형예

제형예 1 : 유연화장수의 제조

상기 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 유연화장수의 조성은 하기 표 4와 같다. 적용된 피라칸타 잎 추출물은 실시예 1 또는 실시예 2일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

구체적으로, 소듐히알루로네이트는 프로펠러믹서(3000rpm)로 정제수에 분산하여 1% 용액상태로 준비하였다. 소듐히알루로네이트를 제외한 원료 1 내지 8은 프로펠러믹서를 사용하여 수상 용해조에 500rpm으로 균일화시키고 75 ℃에서 가온하여 완전 용해한 후, 실온으로 냉각하였다. 이후, 별도의 용해조에 원료 9 내지 11을 완전 용해시킨 후, 상기 수상 용해조에 투입하고 교반 혼합하였다. 여기에 피라칸타 잎 추출물을 투입하고 충분히 교반 혼합하여, 유연화장수를 제조하였다. 한편, 상기 제조를 위해 표에 개시된 성분 이외에 제조에 필요한 공지된 성분들을 더 포함할 수 있다.

유연화장수 제조

	성분	함량(중량%)
1	피라칸타 잎 추출물	0.01
2	폴리옥시에틸렌경화피마자유	0.5
3	글리신	3.3
4	디포타슘글리시리제이트	0.1
5	1,3-부틸렌 글리콜	3.0
6	소듐히아루로네이트	0.1
7	에탄올	5.0
8	항산화제	0.1
9	트리에탄올아민	0.1
10	EDTA	0.1
11	방부제	적량
12	정제수	잔량

제형예 2. 영양화장수의 제조

상기 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 함유한 영양화장수의 조성은 하기 표 5와 같다. 적용된 피라칸타 잎 추출물은 실시예 1 또는 실시예 2일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

구체적으로, 프로펠러믹서를 이용하여 카보머를 4000 rpm으로 분산하여 2 % 용액상태로 준비하였다. 수상 용해조에 원료 1 내지 6을 투입하여 호모믹서(2000 rpm)로 교반하여 분산한 후, 75 ℃까지 가온하였다. 유상 용해조에 원료 7 내지 14을 투입하여 75 ℃까지 가온 용해하였다. 그 다음 수상 용해조에 용해된 유상을 투입하여 유화(3000 rpm/5 분)시킨 후, 실온으로 냉각하였다. 여기에 피라칸타 잎 추출물을 투입하고 충분히 교반 혼합하여, 영양화장수를 제조하였다. 한편, 상기 제조를 위해 표에 개시된 성분 이외에 제조에 필요한 공지된 성분들을 더 포함할 수 있다.

영양화장수 제조

	성분	함량(중량%)
1	피라칸타 잎 추출물	0.01
2	글리세린	7.0
3	소르비탄스테아레이트 슈크로오즈코코에이트	2.0
4	미네랄 오일	4.0
5	트리옥타노인	1.0
6	스테아릭에씨드	1.0
7	글리세릴 스테아레이트	0.5
8	소르비탄모노스테아레이트	1.0
9	디메치콘	0.5
10	항산화제	0.3
11	트리에탄올아민	0.1
12	카보머	0.2
13	EDTA	0.1
14	방부제	적량
15	정제수	잔량

제형예 3. 에센스의 제조

상기 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 함유한 에센스의 조성은 하기 표 6과 같다. 적용된 피라칸타 잎 추출물은 실시예 1 또는 실시예 2일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

구체적으로, 소듐히알루로네이트, 히드록시에틸셀룰로이즈는 각각 정제수에 프로펠러믹서(2000 rpm)로 분산하여 1 중량% 함유용액으로 준비하였다. 또한 카보머는 정제수에 프로펠러믹서(4000 rpm)로 분산하여 2 중량% 함유용액으로 준비하였다. 한편, 수상 용해조에 원료 1 내지 12를 투입하여 호모믹서(2000 rpm)로 교반하여 분산한 후, 75 ℃까지 가온하고, 가온된 수상을 다시 실온으로 냉각하였다. 별도의 용해조에 원료 13 내지 15를 완전 용해시킨 후, 상기 수상 용해조에 투입하여 교반 혼합하였다. 이에, 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 함유한 에센스를 제조하였다. 한편, 상기 제조를 위해 표에 개시된 성분 이외에 제조에 필요한 공지된 성분들을 더 포함할 수 있다.

에센스 제조

	성분	함량(중량%)
1	피라칸타 잎 추출물	0.01
2	글리세린	5.0
3	1,3-부틸렌 글리콜	2.0
4	폴리에틸렌 글리콜	2.0
5	카보머	1.0
6	소듐히아루로네이트	0.1
7	글리신	3.0
8	폴리아크릴아마이드	2.0
9	히드록시에틸셀룰로이즈	0.2
10	에탄올	3.0
11	항산화제	0.3
12	트리에탄올아민	0.1
13	폴리옥시에틸렌경화피마자유	1.0
14	EDTA	0.1
15	방부제	적량
16	정제수	잔량

제형예 4. 크림의 제조

상기 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 함유한 크림의 조성은 하기 표 7과 같다. 적용된 피라칸타 잎 추출물은 실시예 1 또는 실시예 2일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

구체적으로, 수상 용해조에 원료 1 내지 8을 투입하여 호모믹서(2000 rpm)로 교반하여 분산한 후, 75 ℃까지 가온하였다. 별도의 유상 용해조에 원료 9 내지 16을 투입하여 80 ℃까지 가온 용해한 후 상기 수상 용해조에 용해된 유상을 투입하여 유화(3000 rpm/10 분)시킨 후, 실온으로 냉각하였다. 여기에 피라칸타 잎 추출물을 투입하고 충분히 교반 혼합하여, 크림을 제조하였다. 한편, 상기 제조를 위해 표에 개시된 성분 이외에 제조에 필요한 공지된 성분들을 더 포함할 수 있다.

크림 조성

	성분	함량(중량%)
1	피라칸타 잎 추출물	0.01
2	1,3-부틸렌글리콜	3.0
3	글리세린	3.0
4	하이드로제네이티드 레시틴	1.0
5	옥틸도데카놀	3.0
6	트리옥타노인	2.0
7	스테아릭에씨드	1.5
8	세토스테아릴알콜	2.0
9	폴리솔베이트60	1.5
10	소르비탄세스퀴올레이트	2.0
11	디메치콘	3.0
12	항산화제	0.3
13	산탄검	0.2
14	트리에탄올아민	0.1
15	EDTA	0.1
16	방부제	적량
17	정제수	잔량

제형예 5. 팩의 제조

상기 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 함유한 팩의 조성은 하기 표 8과 같다. 적용된 피라칸타 잎 추출물은 실시예 1 또는 실시예 2일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

구체적으로, 별도의 용해조에 원료 1 내지 8을 완전 용해시켜 교반 혼합하고, 여기에 피라칸타 잎 추출물을 투입한 후, 충분히 교반 혼합하여 팩을 제조하였다. 한편, 상기 제조를 위해 표에 개시된 성분 이외에 제조에 필요한 공지된 성분들을 더 포함할 수 있다.

팩의 조성

	성분	함량(중량%)
1	피라칸타 잎 추출물	0.01
2	글리세린	7.0
3	1,3-부틸렌글리콜	3.0
4	스쿠알렌	3.0
5	디메치콘	3.0
6	소듐히알루로네이트	0.1
7	글리신	2.0
8	폴리아크릴아마이드	5.0
9	항산화제	0.3
10	트리에탄올아민	0.1
11	EDTA	0.1
12	방부제	적량
13	정제수	잔량

제형예 6. 클렌징 폼의 제조

상기 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 함유한 클렌징 폼의 조성은 하기 표 9와 같다. 적용된 피라칸타 잎 추출물은 실시예 1 또는 실시예 2일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

수상과 오일상을 각각 분산 용해하여 혼합 검화한 후 실온으로 냉각하여, 클렌징 폼을 제조하였다. 한편, 상기 제조를 위해 표에 개시된 성분 이외에 제조에 필요한 공지된 성분들을 더 포함할 수 있다.

클렌징 폼의 조성

	성분	함량(중량%)
1	피라칸타 잎 추출물	0.01
2	스테아린산	6.5
3	미리스틴산	28.0
4	자가유화형 모노스테아린산 글리세린	3.0
5	프로필렌 글리콜	5.0
6	농글리세린	10.0
7	수산화나트륨	7.0
8	에틸렌디아민테트라초산나트륨	0.1
9	향료	적량
10	정제수	잔량

제형예 7 : 산제의 제조

상기 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 산제는 상기 피라칸타 잎 추출물을 50 mg, 결정셀룰로오즈 2 g을 혼합한 후, 통상의 방법으로 제조하였다. 한편, 상기 제조를 위해 상기 성분 이외에 제조에 필요한 공지된 성분들을 더 포함할 수 있다. 적용된 피라칸타 잎 추출물은 실시예 1 또는 실시예 2일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

제형예 8 : 정제의 제조

상기 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 정제는 상기 피라칸타 잎 추출물을 50 mg, 결정셀룰로오즈 400 mg, 스테아린산 마그네슘 5 mg을 혼합한 후, 통상의 방법으로 제조하였다. 상기 성분 이외에 제조에 필요한 공지된 성분들을 더 포함할 수 있다. 적용된 피라칸타 잎 추출물은 실시예 1 또는 실시예 2일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

제형예 9 : 캡슐제의 제조

상기 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 캡슐제는 상기 피라칸타 잎 추출물을 30 mg, 유청단백질 100 mg, 결정셀룰로오즈 400 mg, 스테아린산 마그네슘 6 mg을 혼합한 후, 통상의 방법으로 제조하였다. 한편, 상기 제조를 위해 상기 성분 이외에 제조에 필요한 공지된 성분들을 더 포함할 수 있다. 적용된 피라칸타 잎 추출물은 실시예 1 또는 실시예 2일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

제형예 10 : 주사제의 제조

상기 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 주사제는 피라칸타 잎 추출물을 100 mg, 주사용 증류수, pH 조절제를 혼합하여 2 ml 용량의 앰플에 충진하고 멸균하는 통상의 방법으로 제조하였다. 한편, 상기 제조를 위해 상기 성분 이외에 제조에 필요한 공지된 성분들을 더 포함할 수 있다. 적용된 피라칸타 잎 추출물은 실시예 1 또는 실시예 2일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

제형예 11. 연고제의 제조

상기 피라칸타 잎 추출물을 유효성분으로 함유한 연고제의 조성은 하기 표 10과 같다. 한편, 상기 제조를 위해 표에 개시된 성분 이외에 제조에 필요한 공지된 성분들을 더 포함할 수 있다. 적용된 피라칸타 잎 추출물은 실시예 1 또는 실시예 2일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

연고제의 조성

	성분	함량(중량%)
1	피라칸타 잎 추출물	0.01
2	글리세린	8.0
3	1,3-부틸렌글리콜	4.0
4	유동 파라핀	15.0
5	베타글루칸	7.0
6	카보머	0.1
7	카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	3.0
8	스쿠알란	1.0
9	세틸아릴 글루코사이드	1.5
10	소르비탄 스테아레이트	0.4
11	세테아릴 알코올	1.0
12	방부제	적량
13	향	적량
14	색소	적량
15	정제수	잔량

전술한 바와 같이, 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며, 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.

본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (7)

1. 피라칸타(Pyracantha angustifolia) 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증 예방 또는 개선용 화장료 조성물로서,
   상기 피라칸타 잎 추출물의 추출 용매는 에탄올이며,
   상기 피라칸타 잎 추출물은 (±)-epicatechin, (-)-catechin, (+)-catechin을 포함하되,
   상기 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 수렴화장수, 스킨, 로션, 에센스, 크림, 마사지 크림, 팩, 메이크업 베이스, 비비크림, 파운데이션, 파우더, 클렌징 폼, 클렌징 크림 및 클렌징 워터로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 제형이며,
   상기 화장료 조성물은 상기 화장료 조성물 총 중량 기준으로 상기 피라칸타 잎 추출물을 0.001 내지 10 중량%로 포함하는 것을 특징으로 하는, 염증 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
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