KR102149253B1 - 붓기 제거에 효과가 있는 식물성 천연물의 혼합 추출물을 포함하는 혈전증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품 - Google Patents

Abstract

본 발명은 붓기 제거, 면역력 강화, 신진대사 증강 활성이 우수한 식물성 천연물의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전증(thrombosis)의 예방 또는 치료/개선용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품에 관한 것으로서, 보다 상세하게는, 미나리, 우엉, 호박, 질경이 잎, 팥, 검정콩, 대추 및 생강을 포함하는 식물성 천연물의 혼합물의 열수 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈액 응고 저해 활성 및 혈소판 응집 저해 활성을 통한 혈전증의 예방 또는 치료/개선용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품에 관한 것이다. 본 발명의 항혈전 조성물의 유효성분으로서의 미나리, 우엉, 호박, 질경이 잎, 팥, 검정콩, 대추 및 생강을 포함하는 식물성 천연물의 혼합 추출물은, 본 명세서의 실시예를 통해 증명된 바와 같이, 총 폴리페놀, 총 플라보노이드 함량이 매우 높은 반면, 총 당 및 환원당 함량이 매우 낮으면서, 혈전 생성 관련 효소 저해 및 혈액 응고 인자의 저해에 의한 항응고 활성 및 혈소판 응집 저해 활성을 나타냄과 동시에, 인간 적혈구에 대한 용혈 활성을 전혀 나타내지 않고, 열 안정성이 우수하고, pH 2의 산성 조건 및 혈장 내에서도 혈전 생성 관련 효소 및 혈액 응고 인자 저해 효과의 손실이 나타나지 않으므로, 혈행 개선을 통해 허혈성 뇌졸중 및 출혈성 뇌졸중과 같은 혈전증의 예방 및 치료용으로 사용할 수 있을 것으로 기대되며, 상기 유효성분은 추출액, 분말, 환, 정 등의 다양한 형태로 가공되어 상시 복용이 가능한 형태로 조제할 수 있는 뛰어난 효과가 있으므로 제약 산업 및 식품 산업상 매우 유용한 발명인 것이다.

Description

붓기 제거에 효과가 있는 식물성 천연물의 혼합 추출물을 포함하는 혈전증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품{PHARNACEUTICAL COMPOSITION FOR PREVENTION OR TREATMENT OF THROMBOSIS COMPRISING THE MIXED EXTRACT OF VEGETABLE NATURAL PRODUCTS HAVING THE EFFECT ON REMOVAL OF SWELLING AND HEALTH FUNCTIONAL FOOD FOR PREVENTION OR IMPROVEMENT OF THROMBOSIS COMPRISING THE SAME}

본 발명은 붓기 제거, 면역력 강화, 신진대사 증강 활성이 우수한 식물성 천연물의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전증(thrombosis)의 예방 또는 치료/개선용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품에 관한 것으로서, 보다 상세하게는, 미나리, 우엉, 호박, 질경이 잎, 팥, 검정콩, 대추 및 생강을 포함하는 식물성 천연물의 혼합물의 열수 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈액 응고 저해 활성 및 혈소판 응집 저해 활성을 통한 혈전증의 예방 또는 치료/개선용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품에 관한 것이다.

최근 급증하고 있는 혈전증은 사회의 고도화, 인스턴트 식품 문화 보급, 불규칙적인 생활, 과로 및 영양 과잉의 식생활로 인해 커다란 사회적 문제로 대두되고 있다.

혈액은 산소, 영양분, 노폐물의 운반 기능과 완충 작용, 체온 유지, 삼투압 조절 및 이온 평형 유지, 수분 일정 유지, 액성 조절 작용, 혈압의 유지 및 조절, 생체 방어 등 다양한 중요 기능들을 가지고 있다. 정상적인 혈액 순환은 체내에서의 혈액 응고 반응계와 혈전 용해 반응계가 상호 보완적으로 조절되면서 혈액 순환을 용이하게 하며, 이들 중 혈액 응고 반응계의 기작은 혈관벽에 혈소판이 점착, 응집하여 혈소판 혈전을 형성한 후, 혈액 응고계가 활성화되어 혈소판 응집괴를 중심으로 피브린 혈전이 형성되는 것으로 보고되어 있다.

피브린 혈전의 생성은 수많은 혈액 응고 인자들의 여러 단계 반응을 거쳐 피브린 응고에 관여하는 트롬빈이 활성화되어, 최종적으로 피브리노겐으로부터 피브린 단량체를 생성하게 하며, 피브린 단량체들은 칼슘에 의해 중합되어, 혈소판과 내피 세포에 결합하게 되며 XIII 인자에 의해 교차 결합된 피브린 폴리머를 형성하면서 영구적인 혈전을 생성하게 된다. 또한, 트롬빈은 혈소판, V 인자, VII 인자들을 활성화시켜 혈액 응고 반응을 촉진시키는 등 혈전 생성에 중추적 역할을 하게 된다. 따라서, 트롬빈의 활성 저해물질은 과다한 혈액 응고 이상으로 발생하는 다양한 혈전성 질환에 매우 유용한 예방 및 치료제로 사용될 수 있다. 한편, 내인성 혈전 생성 경로에는 XII 인자, XI 인자, XII 인자, IX 인자, X 인자의 순차적 활성화에 이은 프로트롬빈의 활성화가 최종적으로 트롬빈을 활성화하는 것으로 알려져 상기의 혈액 응고 인자의 특이적 저해 역시 중요한 혈전성 질환 치료제의 개발 타겟이 되고 있으며, 외인성 혈전 생성 경로의 경우, II 인자(prothrombin), V 인자, VII 인자, X 인자의 활성화에 따른 혈전 생성이 알려져 있다.

현재까지, 혈전성 질환의 예방과 치료에 헤파린, 쿠마린, 아스피린, 유로키네이즈 등의 다양한 항응고제, 항혈소판제, 혈전용해제 등이 사용되고 있으나, 이들은 가격이 매우 높을 뿐 아니라, 출혈성 부작용과 위장 장해 및 과민 반응 등으로 그 사용이 한정되고 있는 실정이다.

한편, 사회의 고도화, 식문화의 인스턴트화 등에 따라 다양한 만성질환이 증가되고 있으며, 의약품보다는 안전성이 확인된 천연 약용작물을 이용한 질병 예방 및 개선에 많은 연구가 집중되고 있다.

예컨대, 미나리(Oenanthe javanica (Blume) DC.)는 쌍떡잎식물 산형화목 미나리과의 여러해살이풀로 한방에서는 수근, 수영이라 부르면, 동의보감에서는 갈증을 풀어주고, 머리를 맑게 하며, 주독을 제거하고 황달, 부인병, 음주 후의 두통 및 구토에 효과적이라고 기록되어 있다. 또한, 최근 연구에서는 간 기능개선, 해독작용, 중금속 배출 등의 효능이 알려져 있다.

우엉(Arctium lappa)은 쌍떡잎 식물 초롱꽃목 국화과의 두해살이 식물로서, 원산지는 유럽이며, 시베리아, 만주, 한국 등에 널리 분포한다. 국내에서는 경남을 중심으로 대량 재배되고 있으며, 특유의 향과 씹는 맛이 좋아 어린 순을 삶아 먹거나 뿌리를 먹는 근채류이다. 통상 생으로 먹지 않고 소금에 절이거나, 식초에 데치거나, 또는 간장에 졸여 식용한다. 한방에서는 그 뿌리를 우방근, 열매를 우방자, 줄기를 악실경이라 부르며, 그 용도를 엄격히 구분하고 있다. 식용으로 주로 이용되는 우엉 지하부는 점성이 있고 쓴맛을 가져 주로 간장에 졸여 식용하며, 이눌린, 비타민 B1, 아세트산, 아르크티제닌, 베타-카로텐, 부티릭산, 커피산, 클로로겐산, 코스틱산, 이소바레익산, 로릭산, 리그닌, 미리스트산, 프로피오닉산, 시토스테롤, 스티그마스테롤 및 구리, 크롬, 망간, 인, 셀렌, 규소, 아연 등 다량의 미네랄을 포함하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 우엉은 항산화, 독소제거, 암세포 성장억제, 혈당조절 및 체중 감량에 탁월한 것으로 알려져 있다.

호박(Cucurbita moschata)은 박과의 덩굴성 한해살이풀로 열대 및 남아메리카가 원산이나 국내에서도 널리 재배하고 있다. 성숙 호박은 다량의 비타민 A와 비타민 B 및 C를 함유하여 비타민 원으로서 매우 중요하며, 베타 카로틴을 함유하여 노화방지에 도움을 주며, 다량의 식이섬유 함유로 장 건강 및 변비개선에 도움을 나타낸다.

질경이 잎(leaf of Plantago asiatica L.)은 질경이과(Plantaginaceae)의 여러해살이풀로서 잎이 질기다하여 질경이라고 불리며, 잎 및 씨껍질(차전자피)을 식용 및 약용으로 이용하고 있다. 한방에서는 이뇨, 설사완화, 방광염, 요로염 등에 사용하며, 간기능 활성화 기능이 있다고 알려져 있다.

팥(Phaseolus radiatus L.)은 장미목 콩과의 한해살이 식물로서 한국, 중국, 일본 등의 동북아시아에서 주로 재배되며, 국내에서는 콩 다음으로 수요가 많은 두류이다. 팥알은 그 형태와 구조는 콩과 비슷하나, 적색 광택을 나타내며 콩과는 달리 중앙에 흰색 띠를 가지는 특징이 있으며, 8~9%의 수분, 68%의 탄수화물 및 20%의 단백질을 함유하고 있어 영양적으로 매우 우수하다. 특히, 팥은 비타민 B1을 포함한 각종 비타민, 칼륨, 칼슘, 인 등의 미네랄 및 쌀에 부족한 라이신을 다량 함유하고 있어 각기병 및 피로회복에 효과가 있으며, 아미노산 부족을 해소하여 단백질 생산에 도움을 주며, 탄수화물 대사 촉진의 유익한 기능을 나타내어 영양보충용 식품소재로 이용되고 있다. 팥은 두류 중에서도 특이하게 세포벽 외부의 열 응고성 단백질을 가지며, 이들이 가열시 우선적으로 열 변성되므로 풀처럼 되지 않고 앙금이 만들어질 수 있는 특이한 구조를 가지고 있어, 주로 팥죽, 팥 앙금, 양갱, 빙과 제조용으로 이용되어 왔으며, 최근에는 팥 음료 및 팥을 이용한 장류 발효식품 등의 다양한 가공식품으로 개발되고 있다. 한방에서는 팥을 적소두로 불리며 설사, 이질, 수종, 비만을 치료하는 데 사용되고 있으며, 팥 삶은 물을 민간에서는 이뇨 및 배변 촉진작용을 통한 붓기 제거용 및 다이어트 음료로 애용하여 왔다.

검정콩(Glycine max (L.) Merr)은 흑두, 서리태, 블랙빈(black beans) 등으로 불리며, 다량의 단백질, 비타민과 이소플라본과 같은 노화억제, 시스테인과 같은 탈모방지 성분이 확인되어 있다. 또한, 검정콩은 시력 증진, 해독 작용 및 소갈(消渴) 치료에 사용되어 왔으며, '약콩'이라 불릴 만큼 한국의 전통 식문화에 중요한 기능성 소재로 자리 잡고 있다. 최근 연구결과, 탈모예방, 부종 제거에 효과적임이 알려져 있다.

대추(Zizyphus jujuba)는 갈매나무과의 대추나무의 열매로 목밀, 조, 홍조라고 불리며, 국내 관혼상제의 필수적인 과실로 과육에는 주로 당분이 들어 있으며, 점액질·능금산·주석산 등도 들어 있다. 씨에는 베툴린·베투릭산·지방 등이 포함되어 있다. 대추는 생으로 식용할 뿐만 아니라, 건조하여 과자 제조, 요리 및 약용으로 사용한다. 또한, 가공하여 대추술, 대추차, 대추식초, 대추죽 등으로도 활용되며, 특히 한방에서는 이뇨·강장제 및 건위진정·완화제, 폐렴, 기관지염 및 기침 등을 치료 완화하는 데 사용되고 있다.

생강(Zingiber officinale)은 생강과(Zingiberaceae)의 아열대, 열대산 다년생 초본식물의 하나로서, 지하부 근경은 특이한 맛과 향을 가지고 있어, 국내에서는 마늘, 고추와 함께 3대 향신료로 이용되고 있다. 생강은 그대로 식품으로 이용되기도 하며, 김치, 젓갈, 과자류 등의 다양한 식품산업에 양념으로도 이용되고 있다. 또한, 건조한 생강(건강 또는 건조분말), 올레오레진(생강 함유지), 생강 정유 등의 제품 형태로 가공되어 식의약 소재 및 화장품 소재로 이용되기도 한다(김선희 2013. 한양대학교 박사논문). 실제 생강은 본초강목에 백사(백가지 질병)를 방지한다고 기술될 만큼 다양한 생리활성이 알려져 있으며, 한방에서는 건위약 및 소화불량, 구토, 진통에 효과가 우수하다고 알려져 있다. 생강의 생약명은 [건강]이며, 일반인은 [새앙]으로도 많이 부른다. 고려시대에는 왕의 하사품으로 사용될 만큼 진기하였으며, 인도의 고대의학서적 [아유르데바]에는 '신이 내린 치료제'로 소개되어 있다.

상술한 식물성 천연물의 단일 소재의 항혈전 연구 및 특허로는 대한민국 등록특허 제10-1602190호 "우엉 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전증 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강기능식품" 및 등록특허 제10-0704003호에 대추의 주요 성분인 "2-알파-하이드록시-올레아놀산을 함유하는 트롬빈 저해혈전증 예방 및 치료용 조성물"이 등록되어 있으며, 대한민국 공개특허 제10-2017-0004937호 "유색콩 추출물을 함유하는 조성물", 공개특허 제10-2013-0065236호에 "미나리 추출물을 함유하는 혈전증 예방 및 치료용 조성물"이 공개되어 있다. 또한, 혼합 조성물의 추출물로는 대한민국 등록특허 제10-1041437호 "혈관질환 예방 또는 개선용 조성물", 등록특허 제10-0784339호에 "혼합 생약재 추출물을 유효성분으로 함유하는 항혈전제"가 개시되어 있으며, 공개특허 제10-2011-0042772호 "혼합 생약추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전용해용 건강식품"이 알려져 있다.

그러나, 현재까지 미나리, 우엉, 호박, 질경이 잎, 팥, 검정콩, 대두 및 생강을 포함하는 식물성 천연물을 각각 동일 중량비로 첨가한 후 이를 열수 추출한 추출물의 관능성 및 항혈전 활성에 관한 특허나 연구는 알려진 바가 없다.

KR 10-2013-0065236 A KR 10-1602190 B KR 10-2017-0004937 A KR 10-0704003 B KR 10-2011-0042772 A KR 10-1041437 B KR 10-0784339 B

김미선 외, 2014, 우엉뿌리의 항혈전 및 항산화 활성, 한국식품저장유통학회지, 21, 727-734

본 발명은 상기와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서, 본 발명에서 해결하고자 하는 과제는 미나리, 우엉, 호박, 질경이 잎, 팥, 검정콩, 대두 및 생강을 포함하는 식물성 천연물의 혼합 추출물을 포함하는 혈전증의 예방 또는 치료 및 개선용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품을 제공하고자 하는 것이다.

상기와 같은 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 미나리, 우엉, 호박, 질경이 잎, 팥, 검정콩, 대추 및 생강을 포함하는 식물성 천연물의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 미나리, 우엉, 호박, 질경이 잎, 팥, 검정콩, 대추 및 생강을 포함하는 식물성 천연물의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전증의 예방 또는 개선용 건강 기능 식품을 제공한다.

본 발명의 항혈전 조성물의 유효성분으로서의 미나리, 우엉, 호박, 질경이 잎, 팥, 검정콩, 대추 및 생강을 포함하는 식물성 천연물의 혼합 추출물은, 본 명세서의 실시예를 통해 증명된 바와 같이, 총 폴리페놀, 총 플라보노이드 함량이 매우 높은 반면, 총 당 및 환원당 함량이 매우 낮으면서, 혈전 생성 관련 효소 저해 및 혈액 응고 인자의 저해에 의한 항응고 활성 및 혈소판 응집 저해 활성을 나타냄과 동시에, 인간 적혈구에 대한 용혈 활성을 전혀 나타내지 않고, 열 안정성이 우수하고, pH 2의 산성 조건 및 혈장 내에서도 혈전 생성 관련 효소 및 혈액 응고 인자 저해 효과의 손실이 나타나지 않으므로, 혈행 개선을 통해 허혈성 뇌졸중 및 출혈성 뇌졸중과 같은 혈전증의 예방 및 치료용으로 사용할 수 있을 것으로 기대되며, 상기 유효성분은 추출액, 분말, 환, 정 등의 다양한 형태로 가공되어 상시 복용이 가능한 형태로 조제할 수 있는 뛰어난 효과가 있으므로 제약 산업 및 식품 산업상 매우 유용한 발명인 것이다.

도 1은 본 발명의 (가) 추출물 분말 및 (나) 10% 수용액의 상등액을 나타낸 것이고,
도 2는 본 발명의 추출물의 인간 혈소판 응집 저해 활성을 나타낸 것이다. 1: 용매 대조구(물), 2: 아스피린(0.25mg/ml), 3: 아스피린(0.125mg/ml), 4: 본 발명의 추출물(10%), 5: 시판 제품 1(본 발명의 실시예 1 참고), 6: 시판 제품 2(본 발명의 실시예 1 참고).

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명의 발명자들은 미나리, 우엉, 호박, 질경이 잎, 팥, 검정콩, 대추 및 생강의 혼합물을 대상으로 항혈전 활성을 검정하기 위하여, 미나리, 우엉, 호박, 질경이 잎, 팥, 검정콩, 대추 및 생강을 각각 동일 중량비로 첨가한 후, 가수하고, 고온에서 16시간 이상 추출하여 추출액을 조제하고, 이를 분무 건조시켜 분말상의 추출물을 조제하였으며, 이의 관능성 및 항혈전 활성을 평가하여 상기 추출물이 관능성과 항혈전 활성이 우수함을 확인하였다. 상기 추출물은 인간 적혈구에 대해 용혈 활성은 전혀 나타내지 않으면서도, 열 안정성과 산 안정성이 우수한 특징을 가짐을 확인함으로써 상기 추출물을 항혈전용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품으로 활용하고자 하였다.

구체적으로, 본 발명자들은 민간에서 다양한 생리 활성이 있다고 알려진 미나리, 우엉, 호박, 질경이 잎, 팥, 검정콩, 대추 및 생강을 이용하여 항혈전 조성물로 개발하기 위하여, 상기 7종의 식용 또는 약용의 식물성 천연물을 각각 동일 중량비로 혼합하고, 여기에 15배 중량비를 가수한 후, 100℃의 고온에서 16시간 이상 추출하여 추출액을 조제하고, 이를 분무건조하여 본 발명의 추출물을 조제하였다. 상기 추출물은 우수한 관능성과 항혈전 활성을 나타냄을 확인하였으며, 1mg/ml 농도에서도 인간 적혈구에 대한 용혈활성을 전혀 나타내지 않아 급성 독성을 유발하지 않음을 확인하였다.

따라서, 본 발명은 미나리, 우엉, 호박, 질경이 잎, 팥, 검정콩, 대추 및 생강을 포함하는 식물성 천연물의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 미나리, 우엉, 호박, 질경이 잎, 팥, 검정콩, 대추 및 생강을 포함하는 식물성 천연물의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전증의 예방 또는 개선용 건강 기능 식품을 제공한다.

이하에서는, 본 발명의 미나리, 우엉, 호박, 질경이 잎, 팥, 검정콩, 대추 및 생강을 포함하는 식물성 천연물의 혼합 추출물의 제조 방법 및 효능 실험 등을 보다 구체적으로 설명한다.

본 발명의 발명자들은, 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 정선, 세척된 미나리, 우엉, 호박, 질경이 잎, 팥, 검정콩, 대추 및 생강을 세절하는 단계: 세절된 상기 7종 천연물을 100℃에서 16시간 이상 밀폐 조건에서 가열처리하여 추출하는 단계; 이후 열수 추출액으로부터 추출물을 조제하는 단계; 상기 조성물의 관능성 및 항혈전 활성 평가 및 활성 물질의 안정성 평가 단계의 실험들을 수행하였다.

상기 7종의 천연물은 동일 중량으로 혼합될 수 있으며, 열수 추출액은 감압건조 및 동결건조, 또는 분무건조 등과 같은 통상적인 분말화 과정을 거쳐 분말 형태의 추출물로 제조될 수 있다.

본 발명의 추출물은, 기존 제품들과 달리, 우수한 인간 혈소판 응집도(무첨가구에 비해 혈소판 응집도가 65.0%)를 나타내었으며, 혈전 생성에 관련된 트롬빈, 프로트롬빈, 혈액응고인자 저해 활성도 우수하다.

또한, 본 발명의 추출물은 혈장 내의 다양한 분해효소에 분해되지 않으며, 100℃의 열처리와 pH 2의 인체 위 내의 pH에서도 활성을 유지한다.

본 발명의 유효성분은 혈전증과 관련된 다양한 질환들의 예방 또는 치료용으로 사용될 수 있다. 상기 질환들은, 예를 들어, 동맥 혈전증으로서, 급성 심근 경색증, 가슴 통증, 호흡 곤란, 의식 소실, 허혈성 뇌졸중, 출혈성 뇌졸중, 두통, 운동 이상, 감각 이상, 성격 변화, 시력 저하, 간질 발작, 폐 혈전증, 심부정맥 혈전증, 하지 부종, 통증 및 급성 말초 동맥 폐쇄증 등을 들 수 있고, 정맥 혈전증으로서, 심부정맥 혈전증, 간문맥 혈전증, 급성 신장정맥 폐쇄증, 뇌 정맥동 혈전증 및 중심 망막정맥 폐쇄 등을 들 수 있다.

본 발명의 유효 성분을 포함하는 약학적 조성물은 각각의 사용 목적에 맞게 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구 제형, 멸균 주사용액의 주사제 등 다양한 형태로 제형화하여 사용할 수 있으며, 경구 투여하거나 정맥 내, 복강 내, 피하, 직장, 국소 투여 등을 포함한 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다.

이러한 약학적 조성물에는 추가적으로 담체, 부형제 또는 희석제 등이 더 포함될 수 있으며, 포함될 수 있는 적합한 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리쓰리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 비정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 들 수 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 충전제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 더 포함할 수도 있다.

바람직한 구체예로서, 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 약학적 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 혼합하여 제형화한다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 등과 같은 윤활제가 사용될 수도 있다.

바람직한 구체예로서, 경구용 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 예시될 수 있으며, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 액체 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

바람직한 구체예로서, 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액제, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제, 좌제 등을 예시할 수 있다. 비수성용제, 현탁제에는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 포함될 수 있다. 주사제에는 용해제, 등장화제, 현탁화제, 유화제, 안정화제, 방부제 등과 같은 종래의 첨가제가 포함될 수 있다.

본 발명의 유효 성분은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

바람직한 구체예로서, 본 발명의 약학적 조성물에서 유효성분의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 ㎏ 당 1 내지 5,000mg, 바람직하게는 100 내지 3,000mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 투여 경로, 질병의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 약학적 조성물은 다양한 경로를 통하여 대상에 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관 내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명에서 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 제공하는 것을 의미하며, 본 발명의 약학적 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 일반적인 모든 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 유효성분을 표적 세포로 전달할 수 있는 임의의 장치를 이용해 투여될 수도 있다.

본 발명에서 "대상"은, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예를 들어, 인간, 원숭이, 소, 말, 양, 돼지, 닭, 칠면조, 메추라기, 고양이, 개, 마우스, 쥐, 토끼 또는 기니아 피그를 포함하고, 바람직하게는 포유류, 보다 바람직하게는 인간을 의미한다.

또한, 본 발명의 건강 기능 식품은 혈전증의 예방 또는 개선에 효과적인 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 유효성분을 포함하는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

본 발명의 유효성분은 일반적으로 전체 식품 중량의 0.01 내지 50중량%로 가할 수 있으며, 건강음료 조성물은 100ml를 기준으로 0.02 내지 50g, 바람직하게는 0.3 내지 10g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 기능 식품은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 것 외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제, 예컨대, 천연 탄수화물 및 다양한 향미제 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

상기 천연 탄수화물의 예로는 포도당, 과당 등의 단당류, 말토오스, 수크로오스 등의 이당류 및 덱스트린, 시클로덱스트린 등의 다당류와 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등의 당알코올이 있다.

상기 향미제로는 타우마틴; 레바우디오시드 A 또는 글리시르히진과 같은 스테비아 등의 천연 향미제 및 사카린, 아스파르탐 등의 합성 향미제를 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강 기능 식품 100ml당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g을 사용한다. 상기 외에 본 발명의 건강 기능 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물, 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강 기능 식품은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료 등의 제조를 위한 과육을 함유할 수도 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 본 발명의 유효성분 100중량부 당 0.01 내지 약 20중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하에서는 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 하기 실시예는 본 발명의 바람직한 일 구체예일 뿐이며, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예의 범위로 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

실시예 1: 추출물의 조제 및 관능성 평가

안전성이 확보된 천연 식용 또는 약용 혼합 추출물을 이용한 항산화 조성물을 개발하기 위하여, 미나리, 우엉, 호박, 질경이 잎, 팥, 검정콩, 대추 및 생강을 각각 구입한 후, 이물질을 제거하고, 선별한 후, 세절하고, 상기 7종 천연물을 각각 동일 중량비로 첨가한 후, 이의 15배 중량비를 가수하고, 이를 밀폐 조건, 100℃에서 16시간 이상 열수 추출하였다. 이때, 14시간 이하로 열수 추출때까지는 질경이 잎 등의 섬유소 분해가 나타나지 않아 제대로 추출이 이루어지지 않았으며, 특유의 풋내가 나타나 관능성이 낮았다. 따라서, 16시간 이상 추출시 추출물은 충분한 열수 추출과 관능성 향상이 매우 증대된다. 한편, 상기 혼합 추출물은 상품명 '라온차'라는 명칭으로 공지되어 있는 제품의 원료 추출물이다.

본 발명의 추출물의 특성을 비교하기 위하여, 약용 또는 식용 천연물의 혼합 추출물로 제조된 기존 시판 제품 2종(시판 제품 1: 정진 농업회사법인의 '목애' 제품으로서 조청, 배, 도라지, 오미자를 함유, 시판 제품 2: (주)메가바이오숲의 '공미' 제품으로서 진피, 대나무잎, 황기, 복령, 창출, 소맥, 계지, 연자육, 노근, 지황, 창출 및 옥수수 수염을 함유)과 본 발명의 추출물의 이화학적 특성 및 색차 분석을 수행하고, 그 결과는 표 1에 나타내었다. 또한, 본 발명의 추출물 분말 및 10% 수용액 상등액을 도 1에 나타내었다. 이때, 색차 분석은 Hunter Color Difference meter(Super color SP-80 Colormeter, Tokyo Denshoku Co., Japan)를 이용하여 측정하였으며, 명도(백색 100 ~ 0 검정색), 적색도(적색 100 ~ -80 녹색), 황색도(황색 70 ~ -80 검정색)를 측정하였다. 이때, 표준백판의 색도는 L값이 92.44, a값이 -0.06, b값이 1.35로 기준을 정하였으며, 시료당 3회 측정하여 평균값을 구하여 나타내었고 색차(△E)는 다음의 식을 이용하여 계산하였다.

[표 1] 추출물의 이화학적 특성 및 색차 분석

표 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 추출물의 경우, 95% 이상의 매우 높은 brix를 나타내었으며, pH는 기존 시판 제품 2와 유사한 4.9로 나타났다. 그러나, 산도는 상대적으로 낮은 0.8을 나타내어 쉽게 음용할 수 있음을 알 수 있었다. 상기의 기존 제품과 본 발명의 추출물을 9.5 brix로 조정한 후 관능성을 평가한 결과는 표 2에 나타내었다. 이때, 관능 평가는 식품영양학 전공의 전문가 10명 및 20대 소비자 40명을 대상으로 맛, 향 및 전체적 선호도로 구분하여 7점 척도법으로 평가하였다.

[표 2] 추출물의 관능성 평가

표 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 추출물은 기존 천연물 복합 추출물인 시판 제품 1에 비해1.36점 이상의 전체적 선호도 상승이 확인되었으며, 맛, 향, 목넘김, 입안 잔류감 모두에서 증가된 관능성을 확인하였다. 또한, 본 발명의 추출물은 낮은 산도로 인해 자극도가 낮으면서 당도가 낮아, 지속적인 음용이 용이하리라 판단된다.

실시예 2: 추출물의 성분 분석

실시예 1에서 제조된 본 발명의 추출물의 성분 분석으로 총 폴리페놀, 총 플라보노이드, 총 당 및 환원당 함량을 측정하였다. 총 폴리페놀 함량은 추출 검액 400μl에 50μl의 Folin-ciocalteau, 100μl의 Na₂CO₃ 포화용액을 넣고, 실온에서 1시간 방치한 후, 725nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준시약으로는 tannic acid를 사용하였다. 총 플라보노이드 함량은 각각의 시료를 18시간 메탄올 교반 추출하고, 여과한 추출 검액 400μl에 90% diethylene glycol 4ml를 첨가하고 다시 1N NaOH 40μl를 넣고 37℃에서 1시간 반응 후 420nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준시약으로는 rutin을 사용하였다. 환원당은 DNS법으로, 총 당은 phenol-sulfuric acid법을 이용하여 정량하였다. 시료 대조구로는 유사한 천연물 복합 추출물 시판 농축 스틱제품 2종을 사용하였고, 본 발명의 추출물은 분말을 10% 용액으로 제조하여 사용하였다.

[표 3] 추출물의 성분 분석 결과

그 결과, 표 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 추출물은 총 폴리페놀 함량은 2.10mg/g, 총 플라보노이드 함량은 0.915mg/g으로 나타났으며, 총당 및 환원당 함량은 각각 47.1mg/g 및 8.2mg/g으로 나타났다. 폴리페놀 함량의 경우, 기존 시판 제품 2와 비교하면 68% 수준이나, 시판 제품 1과 비교시는 1.78배 높은 양을 나타내었다. 그러나, 총 플라보노이드 함량은 기존 제품의 4.9~35.2배 높았으며, 총당 및 환원당 함량은 각각 9~20% 및 2.5~7.6%를 포함하고 있었다. 따라서, 기존 시판 제품들과 비교시 본 발명의 추출물은 높은 플라보노이드 함량과 낮은 당 함량을 가진 것이 특징이었다.

실시예 3: 추출물의 혈액응고 저해활성 평가

실시예 1에서 조제된 본 발명의 추출물을 대상으로 혈액응고 저해활성(혈전생성 억제활성)을 평가하였으며, 기존에 보고된 방법(Sohn et al., 2004. Kor. J. Pharmacogn 35. 521; Kwon et al., 2004. J. Life Science, 14. 509-513; 류 등 2010. J. Life Science, 20. 922-928)과 동일하게, 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임, 에이피티 타임을 측정하여 평가하였다. 혈장은 시판 control plasma(MD Pacific Technology Co., Ltd, Huayuan Industrial Area, China)를 사용하였으며, 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임 및 에이피티 타임 측정법은 다음과 같은 과정으로 수행되었다.

트롬빈 타임(Thrombin Time)

37℃에서 0.5U 트롬빈(Sigma Co., USA) 50μl와 20 mM CaCl₂ 50μl, 다양한 농도의 시료 추출액 10μl를 Amelung coagulometer KC-1A(Japan)의 튜브에 혼합하여 2분간 반응시킨 후, 혈장 100μl를 첨가한 후 혈장이 응고될 때까지의 시간을 측정하였다. 대조로는 아스피린(Sigma Co., USA)을 사용하였으며, 용매 대조구로는 시료 대신 DMSO를 사용하였다. DMSO의 경우 30.5초의 응고시간을 나타내었다. 트롬빈 저해 효과는 3회 이상 반복한 실험의 평균치로 나타내었으며, 트롬빈 저해 활성은 시료 첨가시의 응고시간을 용매 대조구의 응고시간으로 나눈 값으로 나타내었다.

프로트롬빈 타임(prothrombin time)

표준혈장(MD Pacific Co., China) 70μl와 다양한 농도의 시료액 10μl를 Amelung coagulometer KC-1A(Japan)의 튜브에 첨가하여 37℃에서 3분간 가온 후, 130μl의 PT reagent를 첨가하고 혈장이 응고될 때까지의 시간을 3회 반복한 실험의 평균치로 나타내었다. 대조로는 아스피린(Sigma Co., USA)을 사용하였으며, 용매 대조구로는 시료 대신 DMSO를 사용하였다. DMSO의 경우 16.7초의 응고시간을 나타내었다. 프로트롬빈 저해활성은 시료 첨가시의 응고시간을 용매 대조구의 응고시간으로 나눈 값으로 나타내었다.

aPTT(activated Partial Thromboplastin Time)

혈장 100μl와 다양한 농도의 시료 추출액 10μl를 Amelung coagulometer KC-1A(Japan)의 튜브에 첨가하여 37℃에서 3분간 가온한 후, 50μl의 aPTT reagent(Sigma, ALEXIN^TM)를 첨가하고, 다시 37℃에서 3분간 배양하였다. 이후, 50μl CaCl₂(35mM)을 첨가한 후 혈장이 응고될 때까지의 시간을 측정하였다. 용매 대조구로는 시료 대신 DMSO를 사용하였으며, 이 경우, 58.1초의 응고시간을 나타내었다. aPTT의 결과는 3회 반복한 실험의 평균치로 나타내었으며, 혈액응고인자 저해활성은 시료 첨가시의 aPTT를 용매 대조구의 aPTT로 나눈 값으로 나타내었다.

[표 4] 추출물의 혈액응고 저해활성 평가

그 결과, 표 4에 나타난 바와 같이, 본 발명의 추출물은 기존 제품에 비해 우수한 트롬빈 저해, 프로트롬빈 저해 및 혈액응고인자 저해를 나타내었다. 특히, 시판 제품보다 월등히 낮은 7mg/ml 농도에서도 아스피린 1.5 mg/ml에 해당하는 강력한 혈전 생성 억제 활성을 나타내었다. 이때, 대조구로 사용된 아스피린은 1.5mg/ml 농도에서 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임, 에이피티 타임을 각각 1.42배, 1.63배 및 1.46배 연장시켰다. 이러한 결과는 본 발명의 추출물이 혈액응고를 억제하여 혈행개선에 기여할 것임을 암시하고 있다.

실시예 4: 추출물의 혈소판 응집 저해 활성 평가

실시예 1에서 조제된 본 발명의 추출물을 대상으로 혈소판 응집저해 활성을 평가하여, 그 결과를 표 5 및 도 2에 나타내었다. 혈소판은 다양한 혈구세포와 함께 혈관을 순환하는 원반형의 작은 세포로서, 핵이 없는 대신 혈관손상보호 및 혈소판 응집과 관련된 다양한 물질을 고농도로 포함하는 cytoplasmic granule을 가지고 있으며, 혈관내벽의 손상이 나타나는 경우 응집인자들을 분비하고, 내피세포의 손상으로 노출된 collagen 등과 결합하여 1차 지혈 플러그(primary hemostatic plug)를 형성하여 혈전생성을 개시하는 중요한 세포이다. 따라서, 혈소판 응집저해는 혈전 생성을 방지하는 매우 중요한 활성이다. 혈소판 응집저해 활성은 다음의 방법에 준해 평가하였다.

혈소판 응집저해 활성(Platelet aggregation inhibition activity)

혈소판은 인간 농축혈소판을 사용하였으며, 이를 washing buffer(138mM NaCl, 2.7mM KCl, 12mM NaHCO₃, 0.36mM NaH₂PO₄, 5.5mM Glucose, 1mM EDTA, pH 6.5)로 1회 세척하였다. 이후, suspending buffer(138mM NaCl, 2.7mM KCl, 12mM NaHCO₃, 0.36mM NaH₂PO₄, 5.5mM Glucose, 0.49mM MgCl₂, 0.25% gelatin, pH 7.4)에 재 현탁한 후, 3,000rpm에서 10분간 원심분리한 후, 다시 suspending buffer에 재 현탁하였으며, 이때 혈소판 수는 4x10⁹/ml이 되도록 조정하였다. 이후, 1ml 현탁액에 2.5μl collagen을 가해 5분간 반응시키고, whole-blood aggregometer(Chrono-log, USA)를 사용하여 37℃에서 혈소판 응집을 측정하였다.

[표 5] 추출물의 인간 혈소판 응집저해 활성

그 결과, 용매대조구인 DMSO의 경우, 혈소판은 콜라겐 첨가에 의해 빠르고 강하게 응집이 나타났으며, 혈소판 응집저해제인 아스피린은 농도 의존적으로 혈소판 응집을 강력하게 저해하였다. 이때, 아스피린은 0.25mg/ml 농도에서 27.5%의 응집도, 0.125mg/ml 농도에서 58.3%의 응집도를 나타내어 임상에서 항혈전제로 사용되는 근거를 확인하였다. 한편, 본 발명의 추출물을 0.23mg/ml 농도에서 혈소판 응집도를 평가한 결과, 무첨가구에 비해 65.0%를 나타내었다. 반면, 기존 제품의 경우 3.0~5.78배 높은 농도인 0.7~1.35mg/ml 농도에서도 혈소판 응집에 영향을 미치지 않았다(도 2). 따라서, 본 발명의 추출물은 혈소판 응집을 농도 의존적으로 저해하여 우수한 항혈전 활성을 나타냄을 확인하였다.

실시예 5: 추출물의 인간 적혈구 용혈 활성 평가

본 발명의 추출물의 원료인 미나리, 우엉, 호박, 질경이 잎, 팥, 검정콩, 대추 및 생강은 과거부터 식용 및 약용으로 사용되어 온 바, 그 추출물은 별도의 특이한 독성은 없을 것으로 판단된다. 본 발명의 추출물의 잠재적 급성 독성을 평가하기 위해 인간 적혈구 용혈 활성을 평가하였으며, 그 결과는 표 6에 나타내었다. 이때, 용혈 활성은 기존의 보고(정인창, 손호용, 2014년, Korean J. Microbiol. Biotechnol. 42: 285~292)에 준해 평가하였으며, 간단하게는 PBS로 3회 수세한 인간 적혈구 100μl를 96-well microplate에 가하고 다양한 농도의 시료용액 100μl를 가한 다음 37℃에서 30분간 반응시켰으며, 이후 반응액을 10분간 원심분리(1,500rpm)하여 상등액 100μl를 새로운 microtiter plate로 옮긴 후 용혈에 따른 헤모글로빈 유출 정도를 414nm에서 측정하였다. 시료의 용매 대조구로는 DMSO(2%)를 사용하였으며, 적혈구 용혈을 위한 실험 대조구로는 Triton X-100(1mg/ml)를 사용하였다. 용혈 활성은 다음의 수식을 이용하여 계산하였다.

[표 6] 추출물의 인간 적혈구 용혈 활성

먼저, 대조구로 사용된 DMSO와 증류수는 적혈구 용혈 활성이 없었으며, Triton X-100은 1mg/ml 농도에서 적혈구를 100% 용혈시킴을 확인하였다. 항진균제 및 항암제로 사용되고 있는 엠포테라신 비의 경우, 0.025mg/ml 농도에서도 85.3%의 강력한 용혈 활성이 나타났다. 한편, 본 발명의 추출물 및 시판 천연물 복합 추출물인 시판 제품 1과 시판 제품 2의 경우, 모두 용혈활성이 나타나지 않았다. 따라서, 본 발명의 추출물은 별도의 급성 독성 유발의 문제점을 나타내지 않으리라 판단된다.

실시예 6: 추출물의 혈장, 산 및 열 안정성 평가

상기 실시예 1에서 조제된 본 발명의 추출물을 대상으로 항산화 활성에 대한 혈장 안정성, 열 안정성 및 산 안정성을 확인하였다. 상기 추출물은 100 ℃에서 1시간 열 처리, pH 2(0.01M HCl)에서의 1시간 처리, 혈장에서 1시간 처리시에도 DPPH 음이온 및 ABTS 양이온에 대한 소거능의 심각한 감소가 나타나지 않아 높은 안정성을 나타내었다. 따라서, 본 발명의 추출물은 소화 흡수 과정 및 식품 제조 과정 중 우수한 항산화 활성을 유지할 것으로 예상된다.

Claims (2)

1. 미나리, 우엉, 호박, 질경이 잎, 팥, 검정콩, 대추 및 생강을 포함하는 식물성 천연물의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈소판 응집 저해용 약학적 조성물.
2. 삭제

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