KR102129532B1 - Pten 억제제에 대한 췌장암 치료 반응성 예측용 바이오마커 및 이의 용도 - Google Patents

Pten 억제제에 대한 췌장암 치료 반응성 예측용 바이오마커 및 이의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 PTEN(phosphatase and tensin homologue) 억제제에 대한 췌장암 치료 반응성 예측용 바이오마커 및 이의 용도에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 췌장암 세포주를 PTEN 단백질의 활성을 억제하였을 때 성장, 전이 및 침습이 촉진되는 세포주와 성장, 전이 및 침습이 억제되는 세포주로 구분하였을 때, 항암효과가 나타나는 세포주에서 PLK1 단백질의 발현이 증가해있음을 확인하였다. 따라서, 상기 PLK1 단백질은 PTEN 억제제에 대한 췌장암 치료 반응성 예측용 바이오마커로, 아울러 PLK1 단백질의 발현이 증가해 있는 췌장암에서 PTEN 억제제는 췌장암 치료용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

PTEN 억제제에 대한 췌장암 치료 반응성 예측용 바이오마커 및 이의 용도{Biomarker for predicting therapeutic response of pancreatic cancer to PTEN inhibitor and use thereof}
본 발명은 PTEN(phosphatase and tensin homologue) 억제제에 대한 췌장암 치료 반응성 예측용 바이오마커 및 이의 용도에 관한 것이다.
췌장암(Pancreatic cancer)은 세계에서 14번째로 다발하는 암으로서, 그 발병 빈도가 현저히 증가하고 있으며 미국에서는 암으로 인한 사망의 주요 원인 중 4위에 해당한다. 췌장암은 초기 증상이 특이적이지 않으며, 이미 전신전이가 일어난 후에 쇠약, 식욕감퇴, 체중감소 등의 임상증상이 발생하므로 정기적인 진단이 필요하다.
췌장암은 1 내지 4%의 환자만이 수술 후 5년의 생존율을 보이며, 중앙 생존기간이 5개월에 이를 정도로 예후가 불량하다. 80 내지 90%의 환자가 진단시 완치를 기대하는 근치적 절제가 불가능한 상태에서 발견되기 때문에, 치료는 주로 항암요법에 의존하고 있다. 현재까지 췌장암에 효과가 있다고 알려진 항암제는 5-플루오로유라실, 젬시타빈(gemcitabine), 타르세바(tarceva) 등이 있으나 효과가 지극히 저조하여 반응율이 15% 내외에 불과하다. 따라서 췌장암 환자의 예후를 향상시키기 위해 보다 효과적인 조기 진단법 및 치료법의 개발이 절실하다.
PTEN(phosphatase and tensin homologue)은 403개의 아미노산으로 이루어진 단백질로서, MMAC1(mutated in multiple advanced cancers 1) 또는 TEP1(TGF-βregulated and epithelial cell enriched phosphatase 1)이라고도 불린다. PTEN은 PDK(Phosphoinositide-dependent kinase) 및 AKT(Protein kinase B)를 활성화시키는 포스파티딜이노시톨-3,4,5-삼인산(phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate)을 탈인산화 시키는 기능이 있으며, 이에 따라 PTEN의 기능을 상실하면 포스파티딜이노시톨-3,4,5-삼인산이 증가하여 PI3K()-AKT 경로가 활성화된다. 즉, PTEN은 PI3K에 의해 유도된 증폭성 신호전달 캐스케이드에 작용하여 세포 증식(cell proliferation), 세포 생존(cell survival), 세포 이동(cell migration), 세포 침입(cell invasion) 등을 조절함으로써 종양 억제 기능을 하는 것으로 알려져 있다(Besson A et al, Eur J Biochem, 263: 605, 1990).
그러나, 최근 PTEN을 저해하는 화합물이 오히려 간암 세포주에서 세포 생존율, 증식 및 콜로니 형성을 억제하고 세포의 노화를 유도하여 간암의 치료에 적용될 수 있음이 보고되었다(Giuseppa Augello, et al., Cell Cycle, Vol.15, No.4, 573-583, 2016). 즉, PTEN의 억제가 오히려 PI3K-AKT 경로를 저해할 수 있으며, PTEN 억제제가 오히려 암세포의 증식을 억제할 수 있음이 확인되었다.
한편, PLK1(Polo-like kinase 1) 단백질은 유사분열의 개시 또는 방추(spindle) 형성에 관여해 세포주기를 조절하고, 다양한 종양에서 과발현되는 것으로 보고되어, 암 진단 마커 및 치료 타겟으로서 연구되고 있다. 이와 관련해 PLK1 단백질이 PTEN 단백질의 상위 신호물질로 작용하고, PTEN 단백질을 인산화시켜 종양 억제 기능을 저해하는 것으로 보고되었다(Li, Z. et al., Molecular and cellular biology, 34: 3642-3661, 2014).
이에, 본 발명자들은 암의 발생으로 체내 항상성의 균형이 유지되지 않는 상황에서는 PTEN이 종양 억제 기능을 유지하지 못할 수 있다는 가설을 바탕으로, 정상세포주 및 췌장암세포주에서 PTEN 억제제에 대한 치료반응성을 확인하고, PTEN 억제제에 대해 치료반응성이 우수한 췌장암의 경우 PLK1의 발현이 증가해 있음을 발견, PLK1 유전자나 단백질을 PTEN 억제약물을 이용한 췌장암 치료에 있어 그 약물 반응성을 예측할 수 있는 동반마커로 활용할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 PLK1 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합하는 검출시약을 포함하는, PTEN 억제제에 대한 췌장암 치료 반응성 예측용 조성물 및 이의 용도를 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 PLK1 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합하는 검출시약을 포함하는, PTEN 억제제에 대한 췌장암 치료 반응성 예측용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는, PTEN 억제제에 대한 췌장암 치료 반응성 예측용 키트를 제공한다.
또한, 본 발명은 1) 췌장암에 걸린 개체로부터 분리된 시료로부터 PLK1 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현량을 측정하는 단계; 및 2) 상기 단계 1)의 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현량을 정상 개체의 발현량과 비교하는 단계를 포함하는, PTEN 억제제에 대한 췌장암 치료 반응성 예측의 정보를 제공하기 위한 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 PTEN 유전자의 발현 억제제 또는 PTEN 단백질의 활성 억제제를 유효성분으로 함유하는 췌장암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 PTEN 유전자의 발현 억제제 또는 PTEN 단백질의 활성 억제제를 유효성분으로 함유하는 췌장암의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
또한, 본 발명은 1) 혈액 시료로부터 PLK1 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현량을 측정하는 단계; 및 2) 상기 단계 1)의 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현량을 정상 개체의 발현량과 비교하는 단계를 포함하는, 췌장암 진단 정보를 제공하기 위한 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 PLK1 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합하는 검출시약을 포함하는 혈액용 췌장암 진단 키트를 제공한다.
본 발명은 췌장암 세포주를 PTEN 단백질의 활성을 억제하였을 때 성장, 전이 및 침습이 촉진되는 세포주와 성장, 전이 및 침습이 억제되는 세포주로 구분하였을 때, 항암효과가 나타나는 세포주에서 PLK1 단백질의 발현이 증가해있음을 확인하였다. 따라서, 상기 PLK1 단백질은 PTEN 억제제에 대한 췌장암 치료 반응성 예측용 바이오마커로, 아울러 PLK1 단백질의 발현이 증가해 있는 췌장암에서 PTEN 억제제는 췌장암 치료용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 인간 남성의 다양한 정상조직 또는 췌장암조직에서 PTEN mRNA의 발현량을 확인한 도이다.
도 2는 인간 여성의 다양한 정상조직 또는 췌장암조직에서 PTEN mRNA의 발현량을 확인한 도이다.
도 3은 인간의 다양한 정상조직 또는 암조직에서 PTEN 단백질의 발현량을 확인한 도이다.
도 4는 정상췌장세포(H6c7) 또는 췌장암세포(AsPC-1, Capan-2, SNU-213, CFPAC-1, Panc-1, Miapaca-2)에서 PTEN 단백질의 발현량을 확인한 도이다.
도 5는 SF1670 처리에 따른 정상췌장세포(H6c7)의 생존률 변화를 확인한 도이다.
도 6은 SF1670 처리에 따른 정상췌장세포(H6c7)의 이동 정도를 확인한 도이다.
도 7은 SF1670 처리에 따른 췌장암세포(AsPC-1, Capan-2, SNU-213, CFPAC-1, Panc-1, Miapaca-2)의 생존률 변화를 확인한 도이다.
도 8은 SF1670 처리에 따른 췌장암세포(AsPC-1, Capan-2, SNU-213, CFPAC-1, Panc-1, Miapaca-2)의 이동 정도를 확인한 도이다.
도 9는 siRNA를 이용한 PTEN 단백질 발현 억제에 따른 정상췌장세포(H6c7) 또는 췌장암세포(AsPC-1, Capan-2, SNU-213, CFPAC-1, Panc-1, Miapaca-2)의 생존률 변화를 확인한 도이다.
도 10은 siRNA를 이용한 PTEN 단백질 발현 억제에 따른 정상췌장세포(H6c7) 또는 췌장암세포(AsPC-1, Capan-2, SNU-213, CFPAC-1, Panc-1, Miapaca-2)의 이동 정도를 확인한 도이다.
도 11은 siRNA를 이용한 PTEN 단백질 발현 억제에 따른 정상췌장세포(H6c7) 또는 췌장암세포(AsPC-1, Panc-1)내 신호전달체계와 관련된 단백질의 발현량 변화를 확인한 도이다.
도 12는 정상췌장세포(H6c7) 또는 췌장암세포(AsPC-1, Capan-2, SNU-213, CFPAC-1, Panc-1, Miapaca-2)에서 PLK1 단백질의 발현량을 확인한 도이다.
도 13은 정상췌장세포(H6c7) 또는 췌장암세포(AsPC-1, Capan-2, SNU-213, CFPAC-1, Panc-1, Miapaca-2)에서 PLK1 단백질의 상대적 발현 정도를 확인한 도이다.
도 14는 siRNA를 이용한 PTEN 단백질 발현 억제에 따른 정상췌장세포(H6c7) 또는 췌장암세포(AsPC-1, Panc-1)에서 PLK1 단백질의 발현량을 나타낸 도이다.
도 15는 SF1670 처리에 따른 췌장암 종양(Panc-1)의 부피 변화를 확인한 도이다(DPI: days post inoculation).
도 16은 SF1670 처리에 따른 췌장암 종양(Panc-1)의 무게 변화를 확인한 도이다(DPI: days post inoculation).
도 17은 SF1670 처리에 따른 췌장암 종양(AsPC-1)의 부피 변화를 확인한 도이다(DPI: days post inoculation).
도 18은 SF1670 처리에 따른 췌장암 종양(AsPC-1)의 무게 변화를 확인한 도이다(DPI: days post inoculation).
도 19는 PAAD-US-TCGA 데이터베이스에서 PTEN 유전자 발현에 따른 췌장암 환자의 생존률 변화를 확인한 도이다.
도 20은 GSE78229 데이터베이스에서 PTEN 유전자 발현에 따른 췌장암 환자의 생존률 변화를 확인한 도이다.
도 21은 GSE62452 데이터베이스에서 PTEN 유전자 발현에 따른 췌장암 환자의 생존률 변화를 확인한 도이다.
도 22는 GSE62452 데이터베이스에서 PTEN 유전자 발현에 따른 PLK1 단백질의 발현 정도를 확인한 도이다.
도 23은 GSE78229 데이터베이스에서 PTEN 유전자 발현에 따른 PLK1 단백질의 발현 정도를 확인한 도이다.
도 24은 PACA-AU(TNM: T=3) 데이터베이스에서 PTEN 유전자 발현에 따른 췌장암 환자의 생존률 변화를 확인한 도이다.
도 25는 PACA-AU(Grade 2) 데이터베이스에서 PTEN 유전자 발현에 따른 췌장암 환자의 생존률 변화를 확인한 도이다.
도 26은 GSE21501 데이터베이스에서 PTEN 유전자 발현에 따른 췌장암 환자의 생존률 변화를 확인한 도이다.
도 27은 PACA-AU(TNM: T=3) 데이터베이스에서 PTEN 유전자 발현에 따른 PLK1 단백질의 발현 정도를 확인한 도이다.
도 28은 PACA-AU(Grade 2) 데이터베이스에서 PTEN 유전자 발현에 따른 PLK1 단백질의 발현 정도를 확인한 도이다.
도 29는 GSE21501 데이터베이스에서 PTEN 유전자 발현에 따른 PLK1 단백질의 발현 정도를 확인한 도이다.
도 30은 정상인의 혈액(N1 내지 N12) 또는 췌장암 환자의 혈액(T1 내지 T11)에서 가용성(soluble) PLK1 단백질의 함량을 확인한 도이다. 췌장암 환자 중 T7은 1기, T8은 2기, T9 및 T10은 3기, T11은 4기의 췌장암 환자 결과이다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 PLK1(Polo-like kinase 1) 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합하는 검출시약을 포함하는, PTEN 억제제에 대한 췌장암 치료 반응성 예측용 조성물을 제공한다.
상기 PLK1 단백질은 STPK13(Serine/threonine-protein kinase 13) 단백질로도 불리며, 세포분열기에 작용하는 세린/트레오닌 인산화 효소이다. 인간 PLK1 단백질은 603개의 아미노산으로 구성된 66kDa 크기의 단백질로 중심체(centrosome)의 기능적 성숙에 관여, G2/M 세포주기 전환에 중요한 단백질로서, 생체에서 세포의 성장이 빠르게 일어나는 골수, 고환, 비장 등의 조직에서 주로 발현된다. 또한, 비소세포폐암, 두부경부암, 후두암, 유방암, 간암, 자궁내막암, 대장암, 난소암, 췌장암, 전립선암 등의 암조직에서 발현이 증가되어 있는 것으로 보고되었다. 상기 PLK1 단백질은 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열로 구성되는 폴리펩티드일 수 있으며 그 단편일 수 있다. 또한, 상기 PLK1 단백질을 암호화하는 유전자는 서열번호 2로 기재되는 염기서열로 구성되는 폴리뉴클레오티드일 수 있다.
상기 PTEN 단백질은 PDK 및 AKT 등 세포의 증식을 매개하는 효소를 활성화시키는 포스파티딜이노시톨-3,4,5-삼인산을 탈인산화 시켜 종양억제 단백질로 기능을 하는 것이 보고되었다. 그러나, 최근 PTEN을 저해하는 화합물이 오히려 간암 세포주에서 세포 생존율, 증식 및 콜로니 형성을 억제하고 세포의 노화를 유도하여 간암의 치료에 적용될 수 있음이 보고되었는데, 상기 PTEN 단백질은 서열번호 3으로 기재되는 아미노산 서열로 구성되는 폴리펩티드일 수 있으며 그 단편일 수 있다. 상기 PTEN 단백질을 암호화하는 유전자는 서열번호 4로 기재되는 염기서열로 구성되는 폴리뉴클레오티드일 수 있다.
상기 PTEN 억제제는 PTEN 유전자의 발현 억제제 또는 PTEN 단백질의 활성 억제제일 수 있다. 상기 PTEN 유전자의 발현 억제제는 PTEN 단백질을 암호화하는 유전자의 mRNA의 발현이나 번역을 억제하거나 mRNA의 분해를 촉진하는 것이면 당업계에 알려진 어떠한 물질도 포함할 수 있고, 화학적으로 합성하거나, 인비트로 전사를 이용하여 합성하는 등 다양한 방법으로 제조될 수 있다. 상기 발현 억제제는 PTEN 유전자를 구성하는 폴리뉴클레오티드에 상보적으로 결합하는 안티센스 뉴클레오티드(antisense nucleotide), siRNA(small interfering RNA), shRNA(short hairpin RNA) 및 리보자임(ribozyme)으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
또한, 상기 PTEN 단백질의 활성 억제제는 PTEN 단백질을 구성하는 폴리펩티드에 상보적으로 결합하는 화합물, 펩티드, 펩티드 미메틱스(mimetics), 기질유사체, 앱타머(aptamer) 및 항체로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있다. 일례로, 상기 PTEN 단백질의 활성 억제제는 하기 화학식 1, 2, 3 또는 4로 표시되는 화합물일 수 있다:
[화학식 1]
Figure 112018071356869-pat00001
,
[화학식 2]
Figure 112018071356869-pat00002
,
[화학식 3]
Figure 112018071356869-pat00003
,
[화학식 4]
Figure 112018071356869-pat00004
.
본 발명에 따른 조성물에서 검출시약은 항체, 항체 단편, 앱타머, 프라이머, 프로브(probe) 및 안티센스 뉴클레오티드(anti-sense nucleotide)로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다. 검출하고자 하는 PLK1이 단백질인 경우, 검출시약은 항체, 항체 단편 및 앱타머로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있으며, PLK1이 유전자인 경우, 검출시약은 프라이머, 프로브 및 안티센스 뉴클레오티드로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.
상기 항체는 단일클론항체, 다클론항체 또는 재조합항체일 수 있다. 특정 단백질에 대한 항체는 단백질의 서열이 공지되어 있다면 당업계에 잘 알려진 기술을 이용하여 용이하게 제조할 수 있다. 상기 항체 단편은 항체 분자의 기능적인 단편을 포함할 수 있다. 항체 분자의 기능적인 단편이란 적어도 항원 결합 기능을 보유하고 있는 단편을 뜻하며, Fab, F(ab'), F(ab') 2 및 Fv 등일 수 있으며 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 단일클론항체는 하이브리도마 방법, 또는 파지 항체 라이브러리 기술을 이용하여 제조될 수 있다. 일반적으로, 단일클론항체를 분비하는 하이브리도마 세포는 항원 단백질을 주사한 마우스와 같이 면역학적으로 적합한 숙주 동물로부터 분리된 면역 세포와 암 세포주를 융합하여 만들 수 있다. 이런 두 집단의 세포 융합은 폴리에틸렌글리콜 등을 이용하여 융합시키고 항체 생산 세포를 표준적인 배양 방법에 의해 증식시킬 수 있다. 한계 희석법을 이용하여 서브 클로닝을 실시하고, 균일한 세포 집단을 수득한 뒤 항원에 특이적인 항체를 생산할 수 있는 하이브리도마 세포를 시험관 또는 생체 내에서 대량으로 배양하여 제조할 수 있다. 상기 방법으로 제조된 항체는 겔 전기영동, 투석, 염 침전, 이온교환 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피 등의 방법을 이용하여 분리 및 정제될 수 있다.
상기 다클론항체는 면역원인 바이오마커 단백질 또는 그 단편을 외부 숙주에 주사함으로써 제조될 수 있다. 외부 숙주는 마우스, 래트, 양, 토끼와 같은 포유동물일 수 있다. 상기 면역원이 근내, 복강내 또는 피하 주사 방법으로 주사되는 경우, 항원성을 증가시키기 위한 보조제(adjuvant)와 함께 투여될 수 있다. 이후, 외부 숙주로부터 정기적으로 혈액을 채취하여 향상된 역가 및 항원에 대한 특이성을 보이는 혈청을 수득하고 이로부터 항체를 분리 및 정제하여 제조될 수 있다.
상기 앱타머는 그 자체로 안정된 삼차구조를 가지면서 표적분자에 높은 친화성과 특이성으로 결합할 수 있는 특징을 가진 단일가닥 핵산(DNA, RNA 또는 변형핵산)을 의미하고, 분자 유기물, 펩타이드, 막 단백질등에 결합하여 그 기능을 차단할 수 있으므로 단일 항체를 대체하는 일종의 화학 항체로 볼 수 있다. 또한, 상기 앱타머는 SELEX(systematic evolution of ligands by exponential enrichment)라 불리는 올리고뉴클레오타이드(oligonucleotide) 라이브러리를 이용하여, 특정 화학 분자나 생물학적 분자에 높은 친화력과 선별력을 갖고 결합하는 올리고머를 분리함으로써 수득할 수 있다.
상기 프라이머는 짧은 자유 3 말단 수산화기(free 3' hydroxyl group)를 가지는 핵산 서열로서, 상보적인 주형(template)과 염기쌍을 형성할 수 있고 주형 가닥 복사를 위한 시작 지점으로 기능한다. 이는 정방향 및 역방향의 프라이머 쌍으로 이루어지며, 보통, 7 내지 50, 구체적으로 10 내지 30개의 핵산으로 구성된다. 프라이머는 적절한 완충용액 및 온도에서 중합반응을 위한 효소, 시약 및 상이한 4가지 뉴클레오시드 3인산(nucleoside triphosphate)의 존재 하에서 DNA 합성을 개시할 수 있다. 상기 프라이머는 본 발명의 PLK1 단백질을 암호화하는 유전자와 상보적이며, 이를 증폭할 수 있도록 설계된 프라이머라면 모두 사용할 수 있다.
상기 프로브는 DNA 또는 RNA와 특이적 결합을 이룰 수 있는, 짧게는 수개 내지 길게는 수백개의 염기에 해당하는 핵산 단편으로서, 특정 DNA 또는 RNA의 존재 유무를 확인하는데 사용될 수 있다. 상기 프로브는 올리고뉴클레오티드 프로브, 단쇄 DNA 프로브, 이중쇄 DNA 프로브, RNA 프로브 등의 형태로 제작될 수 있고, 비오틴, FITC, 로다민, DIG(digoxigenin) 등으로 표지되거나 방사선 동위원소 등으로 표지될 수 있다.
상기 안티센스 뉴클레오티드는 왓슨-클릭 염기쌍에 정의된 바에 따라, DNA, 미성숙-mRNA 또는 성숙된 mRNA의 상보적 염기서열에 결합(혼성화)하여 DNA에서 단백질로서 유전정보의 흐름을 방해하는 것을 의미한다. 또한, 상기 안티센스 뉴클레오티드는 모노머 단위의 긴 사슬이기 때문에 표적 RNA 서열에 대해 쉽게 합성될 수 있다.
상기 검출시약은 추가로 상기 검출시약에 특이적으로 결합할 수 있는 리간드를 포함할 수 있다. 상기 리간드는 발색효소, 형광물질, 방사성 동위원소 또는 콜로이드 등의 검출체로 표지된 접합체, 및 스트렙타비딘(streptavidin) 또는 아비딘(avidin)이 처리된 리간드일 수 있다.
상기 PTEN 억제제에 대한 췌장암 치료 반응성 예측용 조성물은 상기 서술한 바와 같은 검출시약 외에도 이들의 구조를 안정하게 유지시키는 증류수 또는 완충액을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는, PTEN 억제제에 대한 췌장암 치료 반응성 예측용 키트를 제공한다.
본 발명의 PTEN 억제제에 대한 췌장암 치료 반응성 예측용 키트에 포함되는 조성물은 상술한 바와 같은 특징을 가질 수 있다. 일례로, 상기 조성물은 PLK1 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합하는 검출시약을 포함할 수 있다.
상기 키트는 췌장암 환자에 PTEN 억제제를 투여했을 때 치료 반응성이 있을지를 판단하는 것을 가능하게 할 뿐 아니라, 치료에 대한 환자의 반응을 모니터링하여 그 결과에 따라 치료를 변경할 수 있게 하며, 췌장암 환자의 예후를 예측할 수 있게 한다.
상기 PTEN 억제제에 대한 췌장암 치료 반응성 예측용 키트는 당업자에게 알려진 종래의 제조방법에 의해 제조될 수 있으며, 완충액, 안정화제, 불활성 단백질 등을 더 포함할 수 있다.
상기 키트는 검출시약의 양을 탐색하기 위해 검출체로서 부착된 형광물질의 형광을 검출함으로써 수행되는 형광법 또는 검출체로서 부착된 방사선 동위원소의 방사선을 검출함으로써 수행되는 방사선법을 통한 초고속 스크리닝(high throughput screening, HTS) 시스템, 검출체의 표지 없이 표면의 플라즈몬 공명 변화를 실시간으로 측정하는 SPR(surface plasmon resonance) 방법 또는 SPR 시스템을 영상화하여 확인하는 SPRI(surface plasmon resonance imaging) 방법을 이용할 수 있다.
또한, 본 발명은 1) 췌장암에 걸린 개체로부터 분리된 시료로부터 PLK1 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현량을 측정하는 단계; 및 2) 상기 단계 1)의 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현량을 정상 개체의 발현량과 비교하는 단계를 포함하는, PTEN 억제제에 대한 췌장암 치료 반응성 예측의 정보를 제공하기 위한 방법을 제공한다.
상기 단계 1)의 시료는 소변, 혈액, 혈청, 혈장 또는 조직 등 정상적인 상태와 구별될 수 있는 질환 특이적 폴리펩티드를 확인할 수 있는 생체 시료를 포함할 수 있다. 일례로, 상기 시료는 혈액일 수 있다.
또한, 상기 시료는 음이온 교환 크로마토그래피, 친화도 크로마토그래피, 크기별 배제 크로마토그래피, 액체 크로마토그래피, 연속추출, 원심분리 또는 젤 전기영동 등의 방법을 이용하여 전처리될 수 있다.
상기 방법은 췌장암에 걸린 개체로부터 분리된 시료에서 PLK1 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현량이 정상 개체의 발현량보다 높은 경우, PTEN 억제제에 대한 췌장암 치료 반응성이 좋을 것으로 예측하는 것을 특징으로 할 수 있다.
상기 단계 1)의 단백질 발현량은 효소면역분석법(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA), 방사능면역분석법(radioimmunoassays), 샌드위치 효소면역분석법, 웨스턴 블롯(Western blot), 면역침강법(immunoprecipitation), 면역조직화학염색법(immunohistochemistry) 및 형광면역법(fluoroimmunoassay)으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 방법으로 측정될 수 있다.
상기 단계 1)의 유전자 발현량은 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR), 경쟁적 역전사 중합효소 연쇄반응(competitive RT-PCR), 실시간 역전사 중합효소 연쇄반응(real-time RT-PCR), RNase 보호 분석법(RNase protection assay), 노던 블롯(Northern blot) 및 마이크로어레이(microarray)로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 방법으로 측정될 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 PTEN 단백질이 정상조직과 암조직에서 구분없이 발현되고(도 1 내지 4), 췌장암 세포주에서 PTEN 단백질을 억제하였을 때 발암효과가 나타나는 세포주와 항암효과가 나타나는 세포주가 구분되며(도 5 내지 11), 항암효과가 나타나는 세포주에서 PLK1 단백질은 상대적으로 강하게 발현되고(도 12 내지 13), 항암효과가 나타나는 세포주에서 PTEN 단백질을 억제했을 때 PLK1 단백질의 발현량이 감소하며(도 14), 항암효과가 나타나는 세포주를 이식한 이종이식 모델에서 PTEN을 억제했을 때 종양의 크기가 감소하고(도 15 내지 18), PTEN 단백질의 발현이 높을수록 예후가 나빠지는 환자군은 PLK1 단백질의 발현수준이 높으며(도 19 내지 23), PTEN 단백질의 발현이 높을수록 예후가 좋아지는 환자군은 PLK1 단백질의 발현 수준이 낮음을(도 24 내지 29) 확인하였다. 따라서, 상기 PLK1 단백질은 PTEN 억제제에 대한 췌장암 치료 반응성 예측용 바이오마커로 유용하게 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 PTEN 유전자의 발현 억제제 또는 PTEN 단백질의 활성 억제제를 유효성분으로 함유하는 췌장암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 PTEN 유전자는 당업계에 알려진 어떠한 서열로 구성되는 폴리뉴클레오티드를 모두 포함할 수 있고, 일례로, 서열번호 4로 기재되는 염기서열로 구성되는 폴리뉴클레오티드일 수 있다
상기 PTEN 유전자의 발현 억제제는 PTEN 단백질을 암호화하는 유전자의 mRNA를 억제하는 것이면 당업계에 알려진 어떠한 물질도 포함할 수 있고, 화학적으로 합성하거나, 인비트로 전사를 이용하여 합성하는 등 다양한 방법으로 제조될 수 있다. 상기 발현 억제제는 PTEN 유전자를 구성하는 폴리뉴클레오티드에 상보적으로 결합하는 안티센스 뉴클레오티드(antisense nucleotide), siRNA(small interfering RNA), shRNA(short hairpin RNA) 및 리보자임(ribozyme)으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
상기 안티센스 뉴클레오티드는 왓슨-클릭 염기쌍에 정의된 바에 따라, DNA, 미성숙-mRNA 또는 성숙된 mRNA의 상보적 염기서열에 결합(혼성화)하여 DNA에서 단백질로서 유전정보의 흐름을 방해하는 것을 의미한다. 또한, 상기 안티센스 뉴클레오티드는 모노머 단위의 긴 사슬이기 때문에 표적 RNA 서열에 대해 쉽게 합성될 수 있다.
상기 siRNA는 특정 mRNA의 절단을 통하여 RNA의 간섭을 유도할 수 있는 짧은 이중가닥 RNA를 의미한다. 또한, 상기 siRNA는 RNA끼리 짝을 이루는 이중가닥 RNA 부분이 완전히 쌍을 이루는 것에 한정되지 않고, 미스매치(대응하는 염기가 상보적이지 않음), 벌지(일방의 사슬에 대응하는 염기가 없음) 등에 의하여 쌍을 이루지 않는 부분도 포함할 수 있다. siRNA 말단 구조는 표적 유전자의 발현을 RNA 간섭 효과에 의하여 억제할 수 있는 것이면 평활 말단 또는 돌출 말단 모두 가능하며, 점착 말단 구조는 3' 말단 돌출 구조와 5' 말단 돌출 구조 모두 가능하다.
상기 shRNA는 견고한 헤어핀 턴을 만드는 RNA의 서열을 의미하며, 이는 RNA 간섭을 통해 유전자 발현을 사일런스시키는 데 이용될 수 있다. 또한, 상기 shRNA는 세포 도입용 벡터를 이용하여 세포로 전달될 수 있으며, 이러한 벡터는 항상 딸세포로 전달되어 유전자 사일런싱이 유전될 수 있다. shRNA 헤어핀 구조는 세포 내 기작에 의해 siRNA로 분해되어 RNA-유도 사일런싱 복합체(RNA-induced silencing complex)에 결합되고, 상기 복합체가 siRNA에 상응하는 mRNA에 결합하여 이를 분해시킬 수 있다.
상기 리보자임은 특이적 RNA 절단을 촉매할 수 있는 효소 RNA 분자를 의미한다. 리보자임의 분자 서열과 상보적인 표적 RNA의 특이적 혼성화에 의해 핵산내부용해성 절단이 유도될 수 있고, 리보자임은 표적 RNA에 상보적인 하나 이상의 서열 또는 기능적 등가 서열의 절단을 담당하는 공지된 서열을 포함할 수 있다. 또한, 상기 리보자임은 햄머-헤드(hammer-head) 리보자임 또는 리보핵산내부분해효소(endoribonuclease) RNA인 체크형(Cech type)리보자임일 수 있고, 변경된 올리고뉴클레오티드에 의해 형성되어 안전성, 표적화 등이 개선될 수 있다. 한편, 상기 리보자임은 생체내에서 표적 유전자를 발현하는 세포에 분포될 수 있고, 형질감염된 세포가 내생성 표적 메신저를 파괴하고 번역을 억제하기에 충분한 양의 리보자임을 생성하도록 강한 항시성 중합효소 III 또는 중합효소 II 프로모터의 조절 하에서 리보자임을 코딩하는 DNA 구축물이 사용될 수 있다. 리보자임은 촉매활성을 갖기 때문에, 다른 안티센스 분자와 달리 세포내에서 낮은 농도로 유지되어야 할 수 있다.
또한, 상기 PTEN 단백질은 당업계에 알려진 어떠한 서열로 구성되는 폴리펩티드를 포함할 수 있고, 일례로, 서열번호 3으로 기재되는 아미노산 서열로 구성되는 폴리펩티드일 수 있다.
상기 PTEN 단백질의 활성 억제제는 PTEN 단백질을 구성하는 폴리펩티드에 상보적으로 결합하는 화합물, 펩티드, 펩티드 미메틱스(mimetics), 기질유사체, 앱타머(aptamer) 및 항체로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
상기 화합물은 하기 화학식 1, 2, 3 또는 4로 표시되는 화합물일 수 있다:
[화학식 1]
Figure 112018071356869-pat00005
,
[화학식 2]
Figure 112018071356869-pat00006
,
[화학식 3]
Figure 112018071356869-pat00007
,
[화학식 4]
Figure 112018071356869-pat00008
.
상기 펩티드 및 펩티드 미메틱스는 PTEN 단백질이 다른 단백질과 결합하는 것을 억제함으로써 PTEN 단백질의 활성을 억제하는 것일 수 있다. 상기 펩티드 미메틱스는 펩티드 또는 비펩티드일 수 있고, psi 결합과 같은 비펩티드 결합에 의해 결합된 아미노산으로 구성될 수 있다. 비가수분해성 펩티드 미메틱스는 주요 잔기로서 β-턴 디펩티드 코어, 케토-메틸렌 슈도펩티드류, 아제핀, 벤조디아제핀, β-아미노알콜 또는 치환 감마락탐환을 사용하여 제조할 수 있다.
상기 앱타머(Aptamer)는 그 자체로 안정된 삼차구조를 가지면서 표적분자에 높은 친화성과 특이성으로 결합할 수 있는 특징을 가진 단일가닥 핵산(DNA, RNA 또는 변형핵산)을 의미하고, 분자 유기물, 펩타이드, 막 단백질등에 결합하여 그 기능을 차단할 수 있으므로 단일 항체를 대체하는 일종의 화학 항체로 볼 수 있다. 또한, 상기 앱타머는 SELEX(systematic evolution of ligands by exponential enrichment)라 불리는 올리고뉴클레오타이드(oligonucleotide) 라이브러리를 이용하여, 특정 화학 분자나 생물학적 분자에 높은 친화력과 선별력을 갖고 결합하는 올리고머를 분리함으로써 수득할 수 있다.
상기 항체는 단일클론항체, 다클론항체 또는 재조합항체일 수 있다. 특정 단백질에 대한 항체는 단백질의 서열이 공지되어 있다면 당업계에 잘 알려진 기술을 이용하여 용이하게 제조할 수 있다. 구체적으로, 하이브리도마 방법, 또는 파지 항체 라이브러리 기술을 이용하여 제조될 수 있다. 일반적으로, 단일클론항체를 분비하는 하이브리도마 세포는 항원 단백질을 주사한 마우스와 같이 면역학적으로 적합한 숙주 동물로부터 분리된 면역 세포와 암 세포주를 융합하여 만들 수 있다. 이런 두 집단의 세포 융합은 폴리에틸렌글리콜 등을 이용하여 융합시키고 항체 생산 세포를 표준적인 배양 방법에 의해 증식시킬 수 있다. 한계 희석법을 이용하여 서브 클로닝을 실시하고, 균일한 세포 집단을 수득한 뒤 항원에 특이적인 항체를 생산할 수 있는 하이브리도마 세포를 시험관 또는 생체 내에서 대량으로 배양하여 제조할 수 있다. 상기 방법으로 제조된 항체는 겔 전기영동, 투석, 염 침전, 이온교환 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피 등의 방법을 이용하여 분리 및 정제될 수 있다.
상기 다클론항체는 면역원인 바이오마커 단백질 또는 그 단편을 외부 숙주에 주사함으로써 제조될 수 있다. 외부 숙주는 마우스, 래트, 양, 토끼와 같은 포유동물일 수 있다. 상기 면역원이 근내, 복강내 또는 피하 주사 방법으로 주사되는 경우, 항원성을 증가시키기 위한 보조제(adjuvant)와 함께 투여될 수 있다. 이후, 외부 숙주로부터 정기적으로 혈액을 채취하여 향상된 역가 및 항원에 대한 특이성을 보이는 혈청을 수득하고 이로부터 항체를 분리 및 정제하여 제조될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 췌장암 세포의 성장, 전이 또는 침습을 억제하는 것일 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 PTEN 단백질이 정상조직과 암조직에서 구분없이 발현되고(도 1 내지 4), 췌장암 세포주에서 PTEN 단백질을 억제하였을 때 발암효과가 나타나는 세포주와 항암효과가 나타나는 세포주가 구분되며(도 5 내지 11), 항암효과가 나타나는 세포주에서 PLK1 단백질은 상대적으로 강하게 발현되고(도 12 내지 13), 항암효과가 나타나는 세포주에서 PTEN 단백질을 억제했을 때 PLK1 단백질의 발현량이 감소하며(도 14), 항암효과가 나타나는 세포주를 이식한 이종이식 모델에서 PTEN을 억제했을 때 종양의 크기가 감소하고(도 15 내지 18), PTEN 단백질의 발현이 높을수록 예후가 나빠지는 환자군은 PLK1 단백질의 발현수준이 높으며(도 19 내지 23), PTEN 단백질의 발현이 높을수록 예후가 좋아지는 환자군은 PLK1 단백질의 발현 수준이 낮음을(도 24 내지 29) 확인하였다. 따라서, 상기 PTEN 유전자의 발현 억제제 또는 PTEN 단백질의 활성 억제제는 PLK1 단백질의 발현이 증가해 있는 췌장암의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 약학적 조성물 전체 중량에 대하여 유효성분인 본 발명에 따른 PTEN 유전자의 발현 억제제 또는 PTEN 단백질의 활성 억제제를 10 내지 95 중량%로 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 상기 유효성분 외에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 추가로 함유할 수 있다.
본 발명의 조성물은 또한 생물학적 제제에 통상적으로 사용되는 담체, 희석제, 부형제 또는 둘 이상의 이들의 조합을 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 조성물을 생체 내에 전달하는데 적합한 것이면 특별히 제한되지 않으며, 예로서, Merck Index, 13th ed., Merck & Co. Inc. 에 기재된 화합물, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로스 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 또는 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합한 것일 수 있다. 이때, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다.
상기 조성물을 제제화할 경우, 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조된다.
본 발명의 조성물은 경구제제 또는 비경구제제로 제형화 될 수 있다. 경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스, 락토오스 및 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 첨가될 수 있다. 한편, 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 여기에는 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등과 같은 부형제가 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제 등의 주사제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여될수 있으며, 비경구 투여는 피부 외용 또는 복강내 주사, 직장내 주사, 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부 내 주사 주입 방식 중 선택될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여된다. 이는 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물 등에 따라 달라질 수 있다. 본 발명의 조성물은 단독 또는 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있다. 병용 투여시, 투여는 순차적 또는 동시일 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명에 따른 약학적 조성물에 포함되는 유효성분의 양은 0.001 내지 10,000 mg/㎏, 구체적으로는 0.1 내지 5 g/kg 일 수 있다. 상기 투여는 하루에 1회일 수 있고, 수회로 나뉠 수도 있다.
또한, 본 발명은 PTEN 유전자의 발현 억제제 또는 PTEN 단백질의 활성 억제제를 유효성분으로 함유하는 췌장암의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
상기 PTEN 유전자 및 PTEN 유전자의 발현 억제제는 상술한 바와 같은 특징을 가질 수 있다. 일례로, 상기 PTEN 유전자는 서열번호 4로 기재되는 염기서열로 구성되는 폴리뉴클레오티드일 수 있다. 또한, 상기 발현 억제제는 PTEN 유전자를 구성하는 폴리뉴클레오티드에 상보적으로 결합하는 안티센스 뉴클레오티드, siRNA, shRNA 및 리보자임(ribozyme)으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
상기 PTEN 단백질 및 PTEN 단백질의 활성 억제제는 상술한 바와 같은 특징을 가질 수 있다. 일례로, 상기 PTEN 단백질은 서열번호 3으로 기재되는 아미노산 서열로 구성되는 폴리펩티드일 수 있다. 또한, 상기 활성 억제제는 PTEN 단백질을 구성하는 폴리펩티드에 상보적으로 결합하는 화합물, 펩티드, 펩티드 미메틱스, 기질유사체, 앱타머 및 항체로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있고, 이때, 화합물은 하기 화학식 1, 2, 3 또는 4로 표시되는 화합물일 수 있다:
[화학식 1]
Figure 112018071356869-pat00009
,
[화학식 2]
Figure 112018071356869-pat00010
,
[화학식 3]
Figure 112018071356869-pat00011
,
[화학식 4]
Figure 112018071356869-pat00012
.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 PTEN 단백질이 정상조직과 암조직에서 구분없이 발현되고(도 1 내지 4), 췌장암 세포주에서 PTEN 단백질을 억제하였을 때 발암효과가 나타나는 세포주와 항암효과가 나타나는 세포주가 구분되며(도 5 내지 11), 항암효과가 나타나는 세포주에서 PLK1 단백질은 상대적으로 강하게 발현되고(도 12 내지 13), 항암효과가 나타나는 세포주에서 PTEN 단백질을 억제했을 때 PLK1 단백질의 발현량이 감소하며(도 14), 항암효과가 나타나는 세포주를 이식한 이종이식 모델에서 PTEN을 억제했을 때 종양의 크기가 감소하고(도 15 내지 18), PTEN 단백질의 발현이 높을수록 예후가 나빠지는 환자군은 PLK1 단백질의 발현수준이 높으며(도 19 내지 23), PTEN 단백질의 발현이 높을수록 예후가 좋아지는 환자군은 PLK1 단백질의 발현 수준이 낮음을(도 24 내지 29) 확인하였다. 따라서, 상기 PTEN 유전자의 발현 억제제 또는 PTEN 단백질의 활성 억제제는 PLK1 단백질의 발현이 증가해 있는 췌장암의 예방 또는 개선에 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 PTEN 유전자의 발현 억제제 또는 PTEN 단백질의 활성 억제제는 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있다. 이때, 첨가되는 유효성분의 함량은 목적에 따라 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강기능식품 중의 함량은 전체 식품 중량의 0.01 내지 90 중량부일 수 있다.
또한, 상기 건강기능식품의 형태 및 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 건강기능식품의 형태는 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상및 환 등일 수 있다.
본 발명의 건강기능식품은 통상의 건강기능식품과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다.
상기 외에 본 발명의 건강기능식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용 될 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택될 수 있다.
또한, 본 발명은 1) 혈액 시료로부터 PLK1 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현량을 측정하는 단계; 및 2) 상기 단계 1)의 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현량을 정상 개체의 발현량과 비교하는 단계를 포함하는, 췌장암 진단 정보를 제공하기 위한 방법을 제공한다.
상기 방법은 혈액 시료에서 PLK1 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현량이 정상 개체의 발현량보다 높은 경우, 췌장암으로 진단하는 것을 특징으로 할 수 있다.
상기 단계 1)의 PLK1 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현량을 측정하는 방법은 상기 서술한 바와 같은 특징을 가질 수 있다.
또한, 본 발명은 PLK1 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합하는 검출시약을 포함하는 혈액용 췌장암 진단 키트를 제공한다.
상기 검출시약 또는 진단 키트는 상기 서술한 바와 같은 특징을 가질 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 정상인의 혈액에 비해 췌장암 환자의 혈액에서 가용성 PLK1 단백질의 함량이 높고, 췌장암 환자 중 췌장암의 병기(stage)가 진행된 환자일수록 가용성 PLK1 단백질의 함량이 더 높음을 확인하였다(도 30). 따라서, 상기 PLK1 단백질은 췌장암 진단용 바이오마커로 유용하게 사용될 수 있다.
이하 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해서 한정되는 것은 아니다.
실험예 1. PTEN 단백질의 발현 비교
종양 억제 기능을 갖는 PTEN 단백질이 정상조직과 암조직에서 차별적인 발현을 나타내는지를 다음과 같은 방법으로 확인하였다.
1-1. PTEN mRNA의 발현 확인
다양한 정상조직 또는 췌장암조직에서 PTEN mRNA의 발현량을 GEO(Gene Expression Omnibus) 마이크로어레이(microarray) 데이터베이스(www.oncopression.com)로 확인하였다.
그 결과, 도 1 및 2에 나타낸 바와 같이, PTEN mRNA가 다양한 정상조직 또는 췌장암조직에서 특이성 없이 산발적으로 발현되었다.
1-2. PTEN 단백질의 발현 확인
먼저, 다양한 정상조직 또는 암조직에서 PTEN 단백질의 발현량을 웨스턴 블롯(Western blot)으로 확인하였다. 구체적으로, 인간의 뇌, 대장, 심장, 신장, 간, 폐, 췌장 또는 비장의 정상조직과, 뇌, 대장, 신장, 간, 췌장, 피부, 비장, 위 또는 폐의 암조직에 대한 단백질 20 μg을 SDS-PAGE에서 전기영동한 후 트렌스퍼(transfer)시킨 막(membrane)을 구입해(ProSci, 미국, 정상조직;#1522, 암조직:#1542), 4℃에서 밤새 5% 스킴 밀크(skim milk)를 포함하는 TBST로 블로킹하였다. 여기에 1차 항체로 항-PTEN 항체(Cell signaling, #9188)를 처리해 4℃에서 12시간 동안 반응시키고, 이후 2차 항체로 항-토끼 IgG HRP항체(santacruz)를 처리해 상온에서 1시간 동안 반응시켜 현상하였다.
또한, 정상췌장세포주 또는 췌장암세포주에서 PTEN 단백질의 발현량을 웨스턴 블롯으로 확인하였다. 구체적으로, 정상췌장세포주인 H6c7(Kerafast, 미국) 세포를 KBM(lonza, 미국) 배지 키트에, 췌장암세포주인 AsPC-1(한국세포주은행), Capan-2(한국세포주은행), 또는 SNU-213(한국세포주은행) 세포를 10%의 FBS(invitrogen, 미국)를 포함하는 RPMI-1640(gibco, 미국) 배지에, CFPAC-1(American Type Culture Collection, 미국), Miapaca-2(한국세포주은행), 또는 Panc-1(한국세포주은행) 세포를 10%의 FBS를 포함하는 DMEM(gibco, 미국) 배지에 분주하였고, 37℃, 5% CO2 환경의 배양기에서 배양하였다. 배양한 세포를 M-PER lysis 버퍼(Thermo, 미국)로 용해하고, BCA(bicinchoninic acid) 단백질 검정 키트(Pierce)를 이용하여 단백질 농도를 측정하였다. 같은 양의 단백질을 SDS-PAGE에서 전기영동한 뒤 35V에서 15시간 동안 니트로셀룰로스 막으로 트랜스퍼하였고, 4℃에서 밤새 5% 스킴 밀크(skim milk)로 블로킹하였다. 여기에 1차 항체로 항-PTEN 항체(Cell signaling, 1:1000)를 처리해 1% 탈지유에서 밤새 반응시키고, 이후 2차 항체로 항-토끼 IgG HRP항체(Cell Signaling, 1: 10000)를 처리해 1시간 동안 반응시켰으며, TBST로 세척한 뒤 ECL(Enhanced Chemiluminescence, Amersham Pharmacia Biotech)을 이용하여 PTEN 단백질 발현을 확인하였다.
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 폐조직을 제외하고 정상조직보다 암조직에서 PTEN 단백질이 높게 발현되었다. 또한, 도 4에 나타낸 바와 같이, 정상췌장세포와 췌장암세포에서 PTEN 단백질이 모두 발현되었다.
상기 결과로부터, PTEN mRNA 및 단백질은 정상조직과 암조직에서 구별없이 유사한 양상으로 발현되는 것을 알 수 있었다.
실험예 2. PTEN 단백질 억제에 의한 세포의 성장 및 전이 변화 비교
PTEN 단백질 억제에 의해 정상췌장세포와 췌장암세포의 성장 및 전이가 달라지는지를 세포생존률 분석(cell viability assay) 및 세포이동 분석(cell migration assay)으로 확인하였다.
2-1. SF1670에 의한 세포의 성장 및 전이 변화
PTEN 단백질 억제제인 SF1670에 의해 정상췌장세포와 췌장암세포의 성장 및 전이가 변하는지를 다음과 같은 방법으로 확인하였다.
먼저, 정상췌장세포주인 H6c7 세포와, 췌장암세포주인 AsPC-1, Capan-2, SNU-213, CFPAC-1, Panc-1 또는 Miapaca-2 세포에 대해 PTEN 단백질 억제제인 SF1670(N-(9,10-Dihydro-9,10-dioxo-2-phenanthrenyl)-2,2 dimethylpropanamide, Sigma-Aldrich, 미국)을 0, 0.1, 0.3, 0.5, 또는 1 μM의 농도로 처리하고 세포생존률 및 전이 변화를 확인하였다. 구체적으로, SF1670이 처리된 각 세포에 WST-1(water soluble tetrazolium-1, Nalgene, 미국) 시약을 처리한 뒤 상온에서 10분 동안 반응시킨 후, 마이크로플레이트 리더기(microplate reader, Bio-Rad, 미국)로 450 nm의 파장에서 흡광도를 측정해 생존률을 확인하였다.
또한, SF1670이 처리된 각 세포를 무혈청 RPMI(serum-free Roswell Park Memorial Institute) 배지가 포함된 24-웰 트렌스-웰 장치(24-well trnas-well apparatus, Corning, 미국)의 상부 챔버(upper chamber)에 넣고, 6시간 뒤 필터의 하부로 이동한 세포를 염색하였다. 염색된 세포는 ELISA 리더기(Bio-Rad, 미국)로 560 nm의 파장에서 흡광도를 측정해 이동 정도를 확인하였다.
그 결과, 도 5 및 6에 나타낸 바와 같이, 0.3 μM의 농도까지 SF1670의 농도 의존적으로 H6c7 세포의 생존률이 증가하였고, 0.5 μM의 농도까지 SF1670의 농도 의존적으로 H6c7 세포의 이동 정도가 증가하였다. 또한, 도 7 및 8에 나타낸 바와 같이, 0.5 μM의 농도까지 SF1670의 농도 의존적으로 AsPC-1, Capan-2 및 SNU-213 세포의 생존률 및 이동 정도가 증가하였으나, CFPAC-1, Panc-1 및 Miapaca-2 세포의 생존률 및 이동 정도는 감소하였다.
2-2. siRNA(small interfering RNA)에 의한 세포의 성장 및 이동 정도 변화
유사하게 siRNA를 이용해 PTEN 단백질 발현을 억제했을 때 정상췌장세포와 췌장암세포의 성장 및 이동 정도가 변하는지를 다음과 같은 방법으로 확인하였다.
구체적으로, 1x105개의 H6c7, AsPC-1, Capan-2, SNU-213, CFPAC-1, Panc-1 또는 Miapaca-2 세포를 6-웰 플레이트(well-plate)에 분주하고, 다음날 PTEN 유전자에 특이적으로 결합하는 올리고뉴클레오타이드(oligonucleotide, Santa Cruz Biotechnology, sc-29459), 또는 대조군인 스크램블드 컨트롤(scrambled control, Santa Cruz Biotechnology, sc-37007)을 리포펙타민(lipofectamine, invitrogen)을 이용해 제조사의 프로토콜에 따라 각 세포주에 형질주입(transfection)시켰다. 상기 형질주입된 세포를 FBS를 함유하지 않는 배지에서 72시간 동안 배양한 뒤 실험예 2-1과 동일한 방법으로 세포생존률을 측정하였으며, 또한, 상기 형질주입된 세포를 10%의 FBS가 함유된 배지에서 48시간 동안 배양한 후, FBS가 없는 배지로 교체해 밤새 15시간 동안 배양해 기아(starvation) 상태로 만든 뒤, 실험예 2-1과 동일한 방법으로 세포 이동 정도를 측정하였다.
그 결과, 도 9 및 10에 나타낸 바와 같이, siRNA를 이용해 PTEN 단백질 발현을 억제했을 때에도 SF1670을 처리한 경우와 유사하게, H6c7, AsPC-1, Capan-2 및 SNU-213 세포의 생존률 및 이동 정도가 증가하였으나, CFPAC-1, Panc-1 및 Miapaca-2 세포의 생존률 및 이동 정도는 감소하였다.
상기 결과로부터, 췌장암세포주는 PTEN 단백질을 억제했을 때 세포의 성장 및 전이에 대한 영향이 서로 다르게 나타나는 두 개의 그룹으로 분류될 수 있음을 알 수 있었다.
실험예 3. PTEN 단백질 억제에 의한 세포내 신호전달체계 변화 비교
PTEN 단백질 억제에 의한 정상췌장세포와 췌장암세포의 세포내 신호전달분자의 발현양상 변화를 웨스턴 블롯으로 조사하였다.
구체적으로, 정상췌장세포주인 H6c7 세포와, 췌장암세포주인 AsPC-1 또는 Panc-1 세포에 실험예 2-2와 동일한 방법으로 PTEN 단백질에 대한 siRNA를 형질주입하였고, 웨스턴 블롯을 수행해 HGFR(hepatocyte growth factor receptor), AKT(protein kinase B), phospho-AKT(Ser473), FAK(focal adhesion kinase), phospho-FAK(Y397), Src(proto-oncogene tyrosine-protein kinase), 또는 phospho-Src 단백질의 발현량을 확인하였다. 실험에 사용된 항-HGFR 항체(#3127), 항-AKT 항체(#9272), 항-phospho-AKT 항체(#9171), 항-FAK 항체(#3285), 항-phospho-FAK 항체(#3283), 항-Src 항체(#2108), 및 항-phospho-Src 항체(#2108)는 Cell signaling에서 구입하였다.
그 결과, 도 11에 나타낸 바와 같이, siRNA를 이용해 PTEN 단백질 발현을 억제했을 때, HGFR 단백질의 발현과 AKT, FAK 및 Src 단백질의 인산화가 H6c7 및 AsPC-1 세포에서 증가하였으나, Panc-1 세포에서는 감소하였다.
상기 결과는, 췌장암 세포주 종류에 따른 PTEN 단백질 억제에 의한 효과의 차이는 세포의 증식 및 이동에 관여하는 세포내 분자들의 활성화와 관련이 있음을 제시한다.
실험예 4. PLK1 단백질의 발현 비교
PLK1 단백질이 정상세포주와 췌장암세포주에서 다르게 발현되는지를 조사하였다.
4-1. PLK1 단백질의 발현 확인
정상세포주와 췌장암세포주에서 PLK1 단백질의 발현량을 웨스턴 블롯으로 확인하였다.
구체적으로, 정상췌장세포주인 H6c7 세포와, 췌장암세포주인 AsPC-1, Capna-2, CFPAC-1, Miapaca-2, Panc-1, 또는 SNU-213 세포에 대해 통상적인 공지의 방법으로 웨스턴 블롯을 수행해 PLK1 단백질의 발현량을 확인하고, GAPDH 단백질의 발현량과 비교한 상대적인 발현량을 계산하였다. 실험에 사용된 항체는 Cell Signaling Technology(미국)에서 구입하였다.
그 결과, 도 12 및 13에 나타낸 바와 같이, PLK1 단백질은 H6c7, AsPC-1, Capna-2 및 SNU-213 세포에 비해 CFPAC-1, Miapaca-2, Panc-1 세포에서 강하게 발현되었다.
4-2. PTEN 단백질 억제에 의한 PLK1 단백질의 발현 변화 확인
PTEN 단백질 억제에 의해 정상세포주와 췌장암세포주에서 PLK1 단백질의 발현량이 달라지는지를 웨스턴 블롯으로 확인하였다.
구체적으로, 정상췌장세포주인 H6c7 세포와, 췌장암세포주인 AsPC-1 또는 Panc-1 세포에 실험예 2-2와 동일한 방법으로 PTEN 단백질에 대한 siRNA를 형질주입하였고, 통상적인 공지의 방법으로 웨스턴 블롯을 수행해 PLK1 단백질의 발현량을 확인하였다.
그 결과, 도 14에 나타낸 바와 같이, siRNA를 이용해 PTEN 단백질 발현을 억제했을 때, PLK1 단백질의 발현량은 H6c7 및 AsPC-1 세포에서 변화가 없었으나, Panc-1 세포에서는 감소하였다.
PTEN 단백질을 억제하였을 때 항암 효과가 관찰되는 세포주에서 PLK1 단백질의 발현량은 높으며 또한 PTEN 억제에 의해 발현이 감소하는 바, 상기 결과는 PTEN 단백질이 PLK1 단백질 발현의 상위신호물질로 작용함을 제시한다.
실험예 5. PTEN 단백질 억제에 의한 항암 효과 확인
PTEN 단백질 억제에 의해 항암 효과가 나타나는지를 이종이식 모델(xenograft model)로 확인하였다.
구체적으로, 6 내지 8주령 BALB/c 누드마우스(Orient, 한국)의 오른쪽 옆구리에 1x107 개의 Panc-1 또는 AsPC-1 세포를 피하주사하고, 종양의 크기가 약 200 mm3가 되었을 때 3개의 그룹으로 나누어 대조군에는 PBS, 실험군에는 10 mg/kg 또는 30 mg/kg의 SF1670을 주입하였다. 주입 후, 28, 32, 35, 38 또는 40일째에 종양의 부피 및 무게를 측정하였다.
그 결과, 도 15 내지 18에 나타낸 바와 같이, SF1670에 의해 Panc-1 세포에서 항암 효과가 나타났으나, AsPC-1 세포에서는 항암 효과가 나타나지 않았다.
상기 결과는, PTEN 단백질을 억제했을 때 췌장암 세포주에 따라 달리 나타나는 생존능 및 전이 활성에 미치는 영향이 이종이식 모델을 통한 실험에서도 동일하게 재현됨을 제시한다.
실험예 6. PTEN 유전자 발현 정도에 따른 췌장암 환자의 예후 또는 PLK1 유전자의 발현 정도 분석
PTEN 유전자의 발현과 췌장암 환자의 예후, 또는 PLK1 유전자의 발현과의 상관성을 데이터베이스를 이용해 분석하였다.
구체적으로, 예후 정보가 포함된 PAAD-US-TCGA, GSE78229, GSE62452, PACA-AU(TNM: T=3), PACA-AU(Grade 2), GSE21501 데이터를 GEO로부터 다운로드 받아 각 프로브를 EntrezID로 변환하고, 같은 EntrezID에 해당하는 프로브들을 평균값으로 적용하였다. 실험을 수행하는 각 배치(batch)에 따른 영향을 제거하기 위해 모든 샘플에 Quantile-Quantile 표준화(normalization)를 적용하였다. PTEN 유전자 발현의 평균 수치를 기준으로 데이터를 두 군으로 나눈 후, 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism ver. 5, GraphPad, 미국)으로 Log-rank 시험을 수행하였다.
그 결과, 도 19 내지 23에 나타낸 바와 같이, PTEN 유전자가 높게 발현될수록 췌장암 환자의 예후가 안 좋은 그룹에서는, PTEN 유전자가 높게 발현되는 그룹에서 PLK1 유전자의 발현 또한 증가해 있었다. 반면, 도 24 내지 29에 나타낸 바와 같이, PTEN 유전자가 높게 발현될수록 췌장암 환자의 예후가 좋은 그룹에서는, PTEN 유전자가 높게 발현되는 그룹에서 PLK1 유전자의 발현이 감소하였다.
PTEN 유전자가 높게 발현될수록 췌장암 환자의 예후가 안 좋은 그룹의 경우, PTEN 억제에 의해 긍정적인 치료 효과가 있을 것임을 제시하며, 이 그룹에서는 PLK1의 발현이 증가해 있는 바, 상기 결과는 PLK1 단백질이 PTEN 억제제에 의한 치료 반응성을 예측할 수 있게 하는 동반마커임을 제시한다.
실험예 7. PLK1 단백질의 검출
PLK1 단백질이 혈액에서 검출 가능한지를 정상인의 혈액 또는 췌장암 환자의 혈액에 대해 웨스턴 블롯을 수행해 확인하였다.
구체적으로, 정상인 10명과 췌장암 환자 11명의 혈액을 채취해 각각 PBS 버퍼로 1:5의 비율로 희석하고, 상기 희석액과 Laemmli 샘플버퍼(Biorad, 미국)를 1:2의 비율로 혼합했다. 상기 혼합액을 SDS-PAGE에서 전기영동한 후 35V, 4℃에서 18시간 동안 트렌스퍼시켰고, 이를 4℃에서 밤새 5% 스킴 밀크(skim milk)를 포함하는 TBST로 블로킹하였다. 여기에 1차 항체로 항-PTEN 항체(Cell signaling, #9188)를 처리해 4℃에서 밤새 반응시키고, 이후 2차 항체로 항-토끼 IgG HRP항체를 처리해 상온에서 1시간 동안 반응시켜 현상하였다.
그 결과, 도 30에 나타낸 바와 같이, 정상인의 혈액에 비해 췌장암 환자의 혈액에서 가용성 PLK1 단백질의 함량이 높았고, 췌장암 환자 중 췌장암의 병기(stage)가 진행된 환자일수록 가용성 PLK1 단백질의 함량이 더 높았다.
이 결과는 혈액 내 PLK1 단백질 함량을 측정함으로써, PTEN 단백질 억제에 의한 항암 효과를 예측할 수 있고, 아울러 췌장암을 진단할 수 있음을 제시한다.
<110> CHO, Sung Eun <120> Biomarker for predicting therapeutic response of pancreatic cancer to PTEN inhibitor and use thereof <130> 2018P-05-060 <160> 4 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 603 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Ser Ala Ala Val Thr Ala Gly Lys Leu Ala Arg Ala Pro Ala Asp 1 5 10 15 Pro Gly Lys Ala Gly Val Pro Gly Val Ala Ala Pro Gly Ala Pro Ala 20 25 30 Ala Ala Pro Pro Ala Lys Glu Ile Pro Glu Val Leu Val Asp Pro Arg 35 40 45 Ser Arg Arg Arg Tyr Val Arg Gly Arg Phe Leu Gly Lys Gly Gly Phe 50 55 60 Ala Lys Cys Phe Glu Ile Ser Asp Ala Asp Thr Lys Glu Val Phe Ala 65 70 75 80 Gly Lys Ile Val Pro Lys Ser Leu Leu Leu Lys Pro His Gln Arg Glu 85 90 95 Lys Met Ser Met Glu Ile Ser Ile His Arg Ser Leu Ala His Gln His 100 105 110 Val Val Gly Phe His Gly Phe Phe Glu Asp Asn Asp Phe Val Phe Val 115 120 125 Val Leu Glu Leu Cys Arg Arg Arg Ser Leu Leu Glu Leu His Lys Arg 130 135 140 Arg Lys Ala Leu Thr Glu Pro Glu Ala Arg Tyr Tyr Leu Arg Gln Ile 145 150 155 160 Val Leu Gly Cys Gln Tyr Leu His Arg Asn Arg Val Ile His Arg Asp 165 170 175 Leu Lys Leu Gly Asn Leu Phe Leu Asn Glu Asp Leu Glu Val Lys Ile 180 185 190 Gly Asp Phe Gly Leu Ala Thr Lys Val Glu Tyr Asp Gly Glu Arg Lys 195 200 205 Lys Thr Leu Cys Gly Thr Pro Asn Tyr Ile Ala Pro Glu Val Leu Ser 210 215 220 Lys Lys Gly His Ser Phe Glu Val Asp Val Trp Ser Ile Gly Cys Ile 225 230 235 240 Met Tyr Thr Leu Leu Val Gly Lys Pro Pro Phe Glu Thr Ser Cys Leu 245 250 255 Lys Glu Thr Tyr Leu Arg Ile Lys Lys Asn Glu Tyr Ser Ile Pro Lys 260 265 270 His Ile Asn Pro Val Ala Ala Ser Leu Ile Gln Lys Met Leu Gln Thr 275 280 285 Asp Pro Thr Ala Arg Pro Thr Ile Asn Glu Leu Leu Asn Asp Glu Phe 290 295 300 Phe Thr Ser Gly Tyr Ile Pro Ala Arg Leu Pro Ile Thr Cys Leu Thr 305 310 315 320 Ile Pro Pro Arg Phe Ser Ile Ala Pro Ser Ser Leu Asp Pro Ser Asn 325 330 335 Arg Lys Pro Leu Thr Val Leu Asn Lys Gly Leu Glu Asn Pro Leu Pro 340 345 350 Glu Arg Pro Arg Glu Lys Glu Glu Pro Val Val Arg Glu Thr Gly Glu 355 360 365 Val Val Asp Cys His Leu Ser Asp Met Leu Gln Gln Leu His Ser Val 370 375 380 Asn Ala Ser Lys Pro Ser Glu Arg Gly Leu Val Arg Gln Glu Glu Ala 385 390 395 400 Glu Asp Pro Ala Cys Ile Pro Ile Phe Trp Val Ser Lys Trp Val Asp 405 410 415 Tyr Ser Asp Lys Tyr Gly Leu Gly Tyr Gln Leu Cys Asp Asn Ser Val 420 425 430 Gly Val Leu Phe Asn Asp Ser Thr Arg Leu Ile Leu Tyr Asn Asp Gly 435 440 445 Asp Ser Leu Gln Tyr Ile Glu Arg Asp Gly Thr Glu Ser Tyr Leu Thr 450 455 460 Val Ser Ser His Pro Asn Ser Leu Met Lys Lys Ile Thr Leu Leu Lys 465 470 475 480 Tyr Phe Arg Asn Tyr Met Ser Glu His Leu Leu Lys Ala Gly Ala Asn 485 490 495 Ile Thr Pro Arg Glu Gly Asp Glu Leu Ala Arg Leu Pro Tyr Leu Arg 500 505 510 Thr Trp Phe Arg Thr Arg Ser Ala Ile Ile Leu His Leu Ser Asn Gly 515 520 525 Ser Val Gln Ile Asn Phe Phe Gln Asp His Thr Lys Leu Ile Leu Cys 530 535 540 Pro Leu Met Ala Ala Val Thr Tyr Ile Asp Glu Lys Arg Asp Phe Arg 545 550 555 560 Thr Tyr Arg Leu Ser Leu Leu Glu Glu Tyr Gly Cys Cys Lys Glu Leu 565 570 575 Ala Ser Arg Leu Arg Tyr Ala Arg Thr Met Val Asp Lys Leu Leu Ser 580 585 590 Ser Arg Ser Ala Ser Asn Arg Leu Lys Ala Ser 595 600 <210> 2 <211> 1812 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 atgagtgctg cagtgactgc agggaagctg gcacgggcac cggccgaccc tgggaaagcc 60 ggggtccccg gagttgcagc tcccggagct ccggcggcgg ctccaccggc gaaagagatc 120 ccggaggtcc tagtggaccc acgcagccgg cggcgctatg tgcggggccg ctttttgggc 180 aagggcggct ttgccaagtg cttcgagatc tcggacgcgg acaccaagga ggtgttcgcg 240 ggcaagattg tgcctaagtc tctgctgctc aagccgcacc agagggagaa gatgtccatg 300 gaaatatcca ttcaccgcag cctcgcccac cagcacgtcg taggattcca cggctttttc 360 gaggacaacg acttcgtgtt cgtggtgttg gagctctgcc gccggaggtc tctcctggag 420 ctgcacaaga ggaggaaagc cctgactgag cctgaggccc gatactacct acggcaaatt 480 gtgcttggct gccagtacct gcaccgaaac cgagttattc atcgagacct caagctgggc 540 aaccttttcc tgaatgaaga tctggaggtg aaaatagggg attttggact ggcaaccaaa 600 gtcgaatatg acggggagag gaagaagacc ctgtgtggga ctcctaatta catagctccc 660 gaggtgctga gcaagaaagg gcacagtttc gaggtggatg tgtggtccat tgggtgtatc 720 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Lys 130 135 140 Phe Leu Lys Ala Gln Glu Ala Leu Asp Phe Tyr Gly Glu Val Arg Thr 145 150 155 160 Arg Asp Lys Lys Gly Val Thr Ile Pro Ser Gln Arg Arg Tyr Val Tyr 165 170 175 Tyr Tyr Ser Tyr Leu Leu Lys Asn His Leu Asp Tyr Arg Pro Val Ala 180 185 190 Leu Leu Phe His Lys Met Met Phe Glu Thr Ile Pro Met Phe Ser Gly 195 200 205 Gly Thr Cys Asn Pro Gln Phe Val Val Cys Gln Leu Lys Val Lys Ile 210 215 220 Tyr Ser Ser Asn Ser Gly Pro Thr Arg Arg Glu Asp Lys Phe Met Tyr 225 230 235 240 Phe Glu Phe Pro Gln Pro Leu Pro Val Cys Gly Asp Ile Lys Val Glu 245 250 255 Phe Phe His Lys Gln Asn Lys Met Leu Lys Lys Asp Lys Met Phe His 260 265 270 Phe Trp Val Asn Thr Phe Phe Ile Pro Gly Pro Glu Glu Thr Ser Glu 275 280 285 Lys Val Glu Asn Gly Ser Leu Cys Asp Gln Glu Ile Asp Ser Ile Cys 290 295 300 Ser Ile Glu Arg Ala Asp Asn Asp Lys Glu Tyr Leu Val Leu Thr Leu 305 310 315 320 Thr Lys Asn Asp Leu Asp Lys Ala Asn Lys Asp Lys Ala Asn Arg Tyr 325 330 335 Phe Ser Pro Asn Phe Lys Val Lys Leu Tyr Phe Thr Lys Thr Val Glu 340 345 350 Glu Pro Ser Asn Pro Glu Ala Ser Ser Ser Thr Ser Val Thr Pro Asp 355 360 365 Val Ser Asp Asn Glu Pro Asp His Tyr Arg Tyr Ser Asp Thr Thr Asp 370 375 380 Ser Asp Pro Glu Asn Glu Pro Phe Asp Glu Asp Gln His Thr Gln Ile 385 390 395 400 Thr Lys Val <210> 4 <211> 1212 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4 atgacagcca tcatcaaaga gatcgttagc agaaacaaaa ggagatatca agaggatgga 60 ttcgacttag acttgaccta tatttatcca aacattattg ctatgggatt tcctgcagaa 120 agacttgaag gcgtatacag gaacaatatt gatgatgtag taaggttttt ggattcaaag 180 cataaaaacc attacaagat atacaatctt tgtgctgaaa gacattatga caccgccaaa 240 tttaattgca gagttgcaca atatcctttt gaagaccata acccaccaca gctagaactt 300 atcaaaccct tttgtgaaga tcttgaccaa tggctaagtg aagatgacaa tcatgttgca 360 gcaattcact gtaaagctgg aaagggacga actggtgtaa tgatatgtgc atatttatta 420 catcggggca aatttttaaa ggcacaagag gccctagatt tctatgggga agtaaggacc 480 agagacaaaa agggagtaac tattcccagt cagaggcgct atgtgtatta ttatagctac 540 ctgttaaaga atcatctgga ttatagacca gtggcactgt tgtttcacaa 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Claims (16)

  1. PLK1(Polo-like kinase 1) 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합하는 검출시약을 포함하는 것을 특징으로하는, PTEN(phosphatase and tensin homologue) 억제제에 의해 치료되는 췌장암 예측용 조성물.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 PTEN 억제제는 PTEN유전자의 발현억제제 또는 PTEN 단백질의 활성억제제인 것을 특징으로 하는 PTEN(phosphatase and tensin homologue) 억제제에 의해 치료되는 췌장암 예측용 조성물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 PTEN 유전자 발현억제제는 siRNA, shRNA, antisense 또는 리보자임인 것을 특징으로하는 PTEN(phosphatase and tensin homologue) 억제제에 의해 치료되는 췌장암 예측용 조성물.
  4. 제 2항에 있어서, 상기 PTEN단백질 활성억제제는 PTEN 단백질을 구성하는 폴리펩티드에 상보적으로 결합하는 화합물, 펩티드, 펩티드 미메틱스(mimetics), 기질유사체, 앱타머(aptamer), 항체, 항체 단편, 앱타머(aptamer), 프라이머(primer), 프로브(probe) 또는 안티센스 뉴클레오티드(anti-sense nucleotide)인, 것을 특징으로 하는 PTEN(phosphatase and tensin homologue) 억제제에 의해 치료되는 췌장암 예측용 조성물.
  5. 제 1항의 조성물을 포함하는, PTEN 억제제에 의해 치료되는 췌장암 예측용 키트.
  6. 1) 췌장암에 걸린 개체로부터 분리된 시료로부터 PLK1 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현량을 측정하는 단계; 및
    2) 상기 단계 1)의 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현량을 정상 개체의 발현량과 비교하는 단계를 포함하는, PTEN 억제제에 의해 치료되는 췌장암 예측의 정보를 제공하기 위한 방법.
  7. 제 6항에 있어서, 단계 1)의 시료는 소변, 혈액, 혈청, 혈장 또는 조직인, PTEN 억제제에 의해 치료되는 췌장암 예측의 정보를 제공하기 위한 방법.
  8. 제 6항에 있어서, 췌장암에 걸린 개체로부터 분리된 시료에서 PLK1 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현량이 정상 개체의 발현량보다 높은 경우, PTEN 억제제에 의해 치료되는 췌장암인 것으로 예측하는 것인, PTEN 억제제에 의해 치료되는 췌장암 예측의 정보를 제공하기 위한 방법.
  9. 제 6항에 있어서, 단계 1)의 단백질 발현량은 효소면역분석법(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA), 방사능면역분석법(radioimmunoassays), 샌드위치 효소면역분석법, 웨스턴 블롯(Western blot), 면역침강법(immunoprecipitation), 면역조직화학염색법(immunohistochemistry) 및 형광면역법(fluoroimmunoassay)으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 방법으로 측정되는 것을 특징으로하는, PTEN 억제제에 의해 치료되는 췌장암 예측의 정보를 제공하기 위한 방법.
  10. 제 6항에 있어서, 단계 1)의 유전자 발현량은 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR), 경쟁적 역전사 중합효소 연쇄반응(competitive RT-PCR), 실시간 역전사 중합효소 연쇄반응(real-time RT-PCR), RNase 보호 분석법(RNase protection assay), 노던 블롯(Northern blot) 및 마이크로어레이(microarray)로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 방법으로 측정되는 것을 특징으로하는, PTEN 억제제에 의해 치료되는 췌장암 예측의 정보를 제공하기 위한 방법.
  11. 삭제
  12. 삭제
  13. 삭제
  14. 삭제
  15. 1) 혈액 시료로부터 PLK1 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현량을 측정하는 단계; 및
    2) 상기 단계 1)의 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현량을 정상 개체의 발현량과 비교하는 단계를 포함하는 것을 특징으로하는, PTEN 억제제에 의해 치료되는 췌장암 진단 정보를 제공하기 위한 방법.
  16. PLK1 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합하는 검출시약을 포함하는 것을 특징으로하는 PTEN 억제제에 의해 치료되는 췌장암 진단 키트.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Cancer Discov, 2011 Jul 1*
Cell Death Differ, 2017 Jul*
J Surg Res, 2013 Oct*
Mol Cancer Ther, 2004 May*

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