CN103858007B - 用于预测对癌症治疗的敏感性的生物标记 - Google Patents

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Abstract

本申请提供了用于预测对癌症治疗的敏感性的生物标记以及生物标记的组合。

Description

用于预测对癌症治疗的敏感性的生物标记
相关申请的交叉引用
本专利申请要求2011年4月1日提交的美国申请61/471,036的优先权，将其内容通过引用的方式并入本申请。
背景技术
当细胞具有最终赋予所述细胞生长优势的突变时，可产生癌症。体细胞突变包括例如核苷酸碱基替换、缺失、插入、扩增(amplification)和重排。癌症中发生的体细胞突变的鉴别提供了关于癌症发展的有价值的信息。所述信息也用于癌症中的诊断标记和治疗靶标的鉴定(参见例如Bamford et al.(2004)British Journal of Cancer91:355-358.)。已经证实与癌症相关的体细胞突变的鉴别在临床情况下是有价值的，例如在区分对具体疗法响应的患者群体方面是有价值的(参见例如Lynch et al.(2004)N.Engl.J.Med.350:2129-2139;O’Hare(2004)Blood104:2532-2539.)。因此，存在对于鉴别癌症中发生的体细胞突变的持续的需求。
种系变异或者多态性为存在于生物体基因组的遗传性变异。多态性包括限制性内切酶片段长度多态性(RFLPs)、短串联重复(STRs)和单核苷酸多态性(SNPs)。种系变异也可与对于某些疾病包括癌症的敏感性相关(参见例如Vierimaa et al.(2006)Science312:1228-1230;Landi et al.(2006)Science313:521-522;Zhu et al.(2004)CancerResearch64:2251-2257.)。因此，存在对于鉴别与癌症相关的多态性的持续的需求。
发明内容
本申请所述的本发明满足上述需求且提供其它益处。
申请人已经发现生物标记可预测AKT抑制剂在治疗过度增殖性疾病诸如癌症中的有效性。
申请人已经发现某些AKT突变可导致中断AKT PH结构域和激酶结构域之间的相互作用。由所述突变引起的这些区域之间的中断似乎可导致AKT的组成性磷酸化以及组成性AKT信号传导。这些作用也涉及细胞的转化。这些突变带来对PI3K和变构的Akt抑制剂的抗性。因此，所述突变的存在表明PI3K和变构的Akt抑制剂的有效剂量将会更高，且也表明还应当使用除了PI3K和/或者变构的Akt抑制剂之外的抑制剂，诸如ATP-竞争性Akt抑制剂。单独使用或者与本申请所述的其它生物标记组合使用的该生物标记用于预测肿瘤细胞生长对于AKT抑制剂的敏感性，所述AKT抑制剂单独给予或者与另外的治疗性化合物诸如5-FU、铂制剂(卡铂、顺铂、奥沙利铂等)、伊立替康、多西他赛、多柔比星、吉西他滨、SN-38、卡培他滨、替莫唑胺、厄洛替尼、PD-0325901、紫杉醇、贝伐单抗、培妥珠单抗(pertuzumab)、他莫昔芬、雷帕霉素、拉帕替尼、PLX-4032、MDV3100、阿比特龙和GDC-0973以及其它MEK抑制剂组合使用。
附图说明
图1描绘了AKT以及PH和激酶结构域的相互作用(1A和1B)，且还描绘了这些区域之间的相互作用的定位(1C)。
图2描绘了这样的结果，其表明被认为中断PH结构域与激酶结构域的相互作用的在位点的合成突变导致Akt的组成性磷酸化。
图3描绘了体细胞突变。
图4描绘了表明体细胞突变的结果，所述体细胞突变导致组成性Akt磷酸化、导致组成性Akt信号传导。
图5描绘了这样的结果，其表明Akt1突变体可使细胞转化。
图6描绘了这样的结果，其表明Akt1突变体带来对PI3K抑制剂和AKT变构抑制剂的抗性。
图7描绘了来自用GDC-0068治疗的患者的肿瘤中的pPRAS40T246变化。
图8描绘了具有活化的PI3K/AKT途径的肿瘤。
图9描绘了这样的结果，其表明高AKT活性分布预测了对GDC-0068的敏感性。
图10描绘了这样的结果，其证实了前列腺和卵巢细胞系中PTEN损失与对GDC-0068的敏感性的强的关联性。该结果为GDC-0068中标准化单一化合物剂量响应的结果。
图11描绘了这样的结果，其证实了PTEN损失和PIK3CA突变与体外GDC-0068单一药物敏感性之间的强的关联性。
图12A和12B描绘了在异种移植物模型中的GDC-0068单一药物活性(12A)以及体外细胞系筛选数据(12B)的结果，其表明最高百分比的肿瘤生长抑制也已经显示出通过PTEN损失或者PI3K突变的途径活化。在具有AKT途径活化(且不具有MEK途径活化)的模型中观察到强力的效果。
图13描绘了这样的结果，其表明各个细胞系的GDC-0068以及MEK抑制剂的单一药物敏感性之间的负相关。
图14描绘了这样的结果，其证实了在具有AKT途径活化(PTEN损失、PI3K突变)的细胞系中的强的协同作用。BLISS分析表明对于GDC-0068与MEK抑制剂(GDC-0973)的组合的宽的协同作用。
图15描绘了以下结果：GDC-0068与顺铂+5FU的组合作用与AKT途径活化相关。使用5FU/顺铂(FOLFOX)的组合筛选(combo screen)显示出累加效应。累加效应与以下途径活化相关：PTEN、pAKT、PI3K突变。
图16描绘了：PH-激酶结构域接触位点突变导致AKT活化。(A)稳定表达单独的空载体(empty vector,EV)、野生型(WT)、豆蔻酰化的(Myr)或者E17K AKT1或者它们与MEK1N3的组合的BaF3细胞的独立于IL-3的增殖。(B)AKT1与变构抑制剂(PDB Accession Code3O96)的络合物的PH和KD的“开卷(open book)”的描绘。(C)描绘用于评估AKT1PH-KD界面突变的作用的筛选的示意图。(D)PH-KD界面突变促进了BaF3细胞的独立于IL-3的增殖。(E)稳定表达空载体以及指定的AKT1结构的NIH3T3细胞的免疫印迹分析。
图17描绘了人类癌症的体细胞AKT突变。AKT家族成员中存在体细胞突变。水平的黑色条带表示保留在AKT1、2和3之间的残基。
具体实施方式
目前的结构研究表明具有抑制作用的区域间相互作用在调节AKT活化中起到关键作用。使用突变筛选，此时显示出AKT活化可由在PH-激酶结构域接触中涉及的残基的突变导致。此外，报道了在人类癌症中新的突变的鉴别，其中一些涉及在PH-KD界面的残基。
除了先前鉴别的突变E17K之外，在临床样品中鉴别的AKT1PH结构域突变体L52R和激酶结构域突变体D323H介导了细胞转化且在体内是致癌的。对全长AKT1的结构的考察显示出E17、L52和D323位于PH-KD界面且预测出在这些位置上的替换可干扰PH-KD结合。与此相一致的是，在2-杂交物测定中，L52R和D323H均使得PH-KD结合减弱。此前，E17K的活化机制已经归因于改变的脂质结合特异性。这些结果表明对区域间的相互作用的干扰为作为E17K活化基础的另外的机制。这些发现一起表明此处鉴别的AKT1PH-KD界面突变的致癌性源自于区域间接触的脱稳定化。
靶标PI3K-AKT途径成员(包括AKT)的抑制剂目前处于开发的各个阶段。先前的研究已经显示AKT变构抑制剂需要完整的PH-KD界面，由此所述抑制剂优先结合闭合的“PH-入”构象。与此相一致的是，优选打开的(“PH-出”)构象的AKT的突变显示出对变构的AKT抑制剂的降低的敏感性，尽管它们保留对ATP-竞争性抑制剂的敏感性。这表明AKT突变状态针对在临床上抑制剂的选择而言具有重要关联。尽管AKT突变可发挥作为初始肿瘤中的驱动器的功能，但是其也可由于对药物响应而在肿瘤中发生，所述药物靶向AKT途径的上游组分。
在某些实施方案中，B-Raf或者K-Ras突变的存在为负性预测因子(即禁忌的)且所述患者应当由接受AKT抑制剂诸如GDC-0068的治疗组选出。
GDC-0068以及相似的ATP竞争性抑制剂优先靶向活化的Akt且通过阻断脱磷酸化将Akt锁定为高度磷酸化而又失活状态。pAkt的增加可用作针对GDC-0068和相似的ATP竞争性抑制剂的作用的药效学生物标记(“PD生物标记”)。
在本发明的某些实施方案中，pGSK-3β或者PRAS40可用作针对AKT抑制剂诸如GDC-0068的药效学生物标记。此外，在某些实施方案中，化合物诸如GDC-0068的适当剂量可基于AKT途径的抑制使用PD生物标记例如pGSK-3β或者PRAS40进行确定和调整(参见图7)。
本申请还提出了GDC-0068以及相似的ATP竞争性抑制剂针对高度活化的Akt更具有活性。
活化的Akt的优先靶向可发挥与致癌基因加入相一致的作用以增加GDC-0068以及相似的ATP竞争性抑制剂对于肿瘤的治疗指数，其具有高度稳态水平的活化的Akt，包括由Akt突变、PTEN损失(半合子型或者纯合子型)、INPP4B功能损伤、PHLPP功能损伤、PP2A功能损伤、PI3K突变以及Her2和/或者Her3扩增引起的那些。
在无PTEN或者具有PI3K突变的肿瘤中例如在前列腺癌、乳腺癌和卵巢癌中预测GDC-0068有效性。
PTEN损失为在例如胰腺癌中的预测与MEK抑制剂的协同作用的生物标记。
因此，GDC-0068活性与AKT途径活化相关(例如选择性相关)。该关系的证据在细胞系以及异种移植物研究中被证实。
PTEN损失、PI3K激酶结构域突变以及高pAKT水平是重要的标记，其预测了化合物例如作为单一药物的活性；具有与化学治疗化合物的组合的累加效应，以及具有例如与MEK抑制剂的协同作用。有趣的是，与MEK抑制剂的协同作用观察到伴随有MEK途径活化。相反地，MEK途径活化(例如KRAS/BRAF)为针对单一药物活性(例如GDC-0068)的抗性的标记。化合物活性例如GDC-0068活性的其它潜在的预测因子包括RTK驱动途径活化(乳腺癌中的HER2，胃癌中的HER2和Met)、AKT1E17K突变、AKT2扩增、AKT3过表达以及PI3K扩增。
表A基于来自文献的报道，针对胃癌、前列腺癌以及胰腺癌的生物标记的普遍性的现行评估
针对解释本说明书的目的，将采用下述定义，且在适当时，以单数形式使用的术语也将包括复数形式，反之亦然。在如下阐述的任何定义与通过引用的方式并入本申请的任何文献相冲突的情况下，应当以如下阐述的定义为准。
本申请可互换使用的术语“多核苷酸”或者“核酸”是指具有任何长度的核苷酸的聚合物，包括DNA和RNA。所述核苷酸可为脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、经修饰的核苷酸或者碱基和/或者它们的类似物，或者可经DNA或者RNA聚合酶掺入至聚合物的任何底物。多核苷酸可包括经修饰的核苷酸诸如甲基化核苷酸以及它们的类似物。如果存在，在聚合物的装配之前或者之后可给予对核苷酸结构的修饰。核苷酸序列可被非核苷酸组分干扰。多核苷酸可在聚合后被进一步修饰，诸如通过与标记组分缀合。其它类型的修饰包括例如"封端(caps)"、将一个或者多个天然存在的核苷酸用类似物替代，以及核苷酸间的修饰，例如具有不荷电的连接键的那些(例如膦酸甲酯、磷酸三酯、磷酰胺、氨基甲酸酯等)以及具有荷电的连接键的那些(例如磷硫酰、二硫代磷酸酯等)、含有侧基部分的那些例如蛋白(例如核酸酶、毒素、抗体、信号肽、聚左旋赖氨酸等)、具有插入剂的那些(例如吖啶、补骨脂素等)、含有螯合剂的那些(例如金属、放射性金属、硼、氧化性金属等)、含有烷化剂的那些、具有修饰的连接键的那些(例如α差向异构核酸等)以及未修饰形式的多核苷酸。此外，通常存在于糖的任何羟基可被例如膦酸酯基团、磷酸酯基团替换，可由标准保护基团保护，或者被活化以制备与另外的核苷酸的另外的连接键，或者可缀合至固体载体。5'和3'末端OH可被磷酸化或者取代有氨基或者具有1-29个碳原子的有机封端基团部分。其它羟基也可被衍生为标准保护基团。多核苷酸也可含有相似形式的核糖或者脱氧核糖，其通常在本领域中已知，包括例如2'-O-甲基-2'-O-烯丙基、2'-氟-或者2'-叠氮基-核糖、碳环糖类似物、α-差向异构糖、差向异构形式(epimeric)的糖诸如阿拉伯糖、木糖或者来苏糖、吡喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖、非环状类似物以及脱碱基核苷类似物诸如甲基肌苷。一个或者多个磷酸二酯连接键可被可选择的连接基团替换。这些可选择的连接基团包括但不限于如下实施方案，其中磷酸酯被P(O)S("硫代膦酸酯")、P(S)S("二硫代膦酸酯")、"(O)NR2("酰胺化基团")、P(O)R、P(O)OR'、CO或者CH2("甲缩醛")替换，其中R或者R'各自独立为H或者经取代的或者未经取代的任选含有醚(-O-)连接键的烷基(1-20C)、芳基、烯基、环烷基、环烯基或者芳烷基。多核苷酸中并非需要所有连接键是相同的。先前的描述应用于本申请所涉及的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。
本申请使用的"寡核苷酸"是指短的、单链多核苷酸，其长度为至少约7个核苷酸且小于约250个核苷酸。寡核苷酸可为合成的。术语"寡核苷酸"和"多核苷酸"并非互相排斥。针对多核苷酸的上述描述可等价且完全应用于寡核苷酸。
术语“引物”是指单链的多核苷酸，其能够与核酸杂交且允许互补的核酸聚合，其通常提供游离的3’–OH基团。
术语“核苷酸变异”是指核苷酸序列相对于参比序列(例如野生型序列)的改变(例如一个或者多个核苷酸的插入、缺失、转化或者替换，诸如单一的核苷酸多态性(SNP))。术语也涵盖所述核苷酸序列互补的相应的改变，除非另作说明。核苷酸变异可为体细胞突变或者种系多态性。
术语“氨基酸变异”是指氨基酸序列相对于参比序列(例如野生型序列)的改变(例如一个或者多个氨基酸的插入、替换或者缺失，诸如内部缺失或者N-或者C-末端截断)。
术语"缺失"包括任何含义的缺失，包括直接和间接缺失。
本申请使用的术语"诊断"是指分子或者病理状态、疾病或者病症的鉴别或者分类。例如，“诊断”可指具体类型的癌症例如肺癌的鉴别。“诊断”也可指具体类型的癌症的分类，例如通过组织学(例如非小细胞肺癌)、分子特征(例如肺癌，其特征在于在具体基因或者蛋白中的核苷酸和/或者氨基酸变异)或者两者来分类。
本申请使用的术语"预后"是指预测癌症引起的死亡或者进程包括例如肿瘤性疾病诸如癌症的复发、转移性扩散以及药物抗性的可能性。
本申请使用的术语"预测"(以及变化形式诸如预告)是指患者会有利地或者不利地对药物或者一系列药物响应的可能性。在一个实施方案中，预测涉及那些响应的程度。在另外的实施方案中，预测涉及患者是否会在治疗(例如用具体的治疗剂治疗和/或者手术切除原发性肿瘤和/或者一定时间段的化学治疗而无癌症复发)后存活和/或者患者会在所述治疗后存活的可能性。本发明的预测方法可在临床上使用以通过针对任何特定患者选择最适当的治疗方式来作出治疗决定。本发明的预测方法在以下方面为有价值的工具：预测患者是否可能有利地对治疗方案诸如给定的治疗方案(包括例如给予给定的治疗剂或者组合、外科手术、化学治疗等)响应，或者预测患者是否在治疗方案后可能长期地存活。
术语“细胞增殖性疾病”和“增殖性疾病”是指与可测量程度的异常细胞增殖相关的疾病。在一个实施方案中，所述细胞增殖性疾病为癌症。
本申请使用的“肿瘤”是指所有赘生细胞生长和增殖(无论是恶性的还是良性的)以及所有癌变前的以及癌性细胞和组织。术语“癌症”、“癌性”、“细胞增殖性疾病”、“增殖性疾病”和“肿瘤”并非本申请所指的相互排斥。
术语“癌症”和“癌性”是指或者描述哺乳动物中的生理状况，其典型特征在于未调节的细胞生长和增殖。癌症的实例包括但不限于癌瘤、淋巴瘤(例如霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤)、母细胞瘤、肉瘤和白血病。癌症的更具体的实例包括鳞状上皮细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺的腺癌、肺的鳞状细胞癌、腹膜癌、肝细胞癌、肾细胞癌、胃肠癌、胃癌、食管癌、胰腺癌、神经胶质瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌(liver cancer)、膀胱癌、肝癌(hepatoma)、乳腺癌(例如内分泌耐药性乳腺癌)、结肠癌、直肠癌、肺癌、子宫内膜癌或者子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝脏癌、黑色素瘤、白血病和其它淋巴增生性障碍以及各种类型的头颈癌。
术语“肺肿瘤”是指任何肺的肿瘤，包括但不限于小细胞肺癌和非小细胞肺癌，后者包括但不限于腺癌、鳞状细胞癌和大细胞癌。
术语“赘生物”或者“赘生物细胞”是指相比于相应的正常组织或者细胞而言增殖更快且在移除引起生长的刺激物之后继续生长的异常组织或者细胞。
“肺肿瘤细胞”是指体内或者体外的肺肿瘤细胞，且涵盖源自原发性肺肿瘤或者转移性肺肿瘤的细胞，以及源自所述细胞的细胞系。
本申请使用的“治疗”(以及变化形式诸如“治疗(treat)”或者“治疗(treating)”)是指尝试改变待治疗的个体或者细胞的自然过程的临床介入，且可用于预防或者在临床病理学过程中来进行。治疗的所需作用包括预防疾病发生或者复发、缓解症状、减小疾病的任何直接或者间接的病理学结果、预防转移、减小疾病进展速率、改善或者缓和疾病状况以及缓和或者改善的预后。
“个体”、“受试者”或者“患者”为脊椎动物。在某些实施方案中，脊椎动物为哺乳动物。哺乳动物包括但不限于家畜(诸如牛)、运动动物、宠物(诸如猫、狗和马)、灵长类动物(包括人类和非人类灵长类动物)以及啮齿动物(例如小鼠和大鼠)。在某些实施方案中，哺乳动物为人类且可为男性或者女性。
"有效量"是指在所需的剂量以及时间段有效地实现预期治疗或者预防结果的量。
本发明物质/分子的“治疗有效量”可根据各种因素而改变，诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及所述物质/分子引发个体中的预期响应的能力。治疗有效量涵盖其中治疗上有益的效果强于物质/分子的任何毒性或者有害作用的量。"预防有效量"是指在所需的剂量以及时间段有效地实现预期预防结果的量。通常但不是必须的，由于在疾病前或者在疾病较早阶段在受试者中使用预防剂量，所以所述预防有效量应小于治疗有效量。
本申请使用的术语"长期"存活是指在治疗性处理后存活至少1年、5年、8年或者10年。
当根据本发明使用时，术语对具体治疗剂或者治疗选项的"增加的抗性"是指对标准药物剂量或者标准治疗方案的降低的响应。
当根据本发明使用时，术语对具体治疗剂或者治疗选项的"降低的敏感性"是指对标准药物剂量或者标准治疗方案的降低的响应，其中降低的响应可通过增加药物的剂量或者治疗的强度来补偿(至少部分补偿)。
"患者响应"可使用表示对患者的益处的任何终末点来评估，包括但不限于(1)对肿瘤生长的某种程度的抑制，包括减缓生长或者完全生长阻滞；(2)减少肿瘤细胞的数目；(3)减小肿瘤大小；(4)抑制(例如降低、减慢或者完全终止)肿瘤细胞向邻近外周器官和/或者组织的渗透；(5)抑制(例如降低、减慢或者完全终止)转移；(6)增强抗肿瘤免疫反应，其可能但是并非必须导致肿瘤的消退或者排斥；(7)某种程度减轻一种或者多种与肿瘤相关的症状；(8)增加治疗后存活的时长；和/或者(9)在治疗后的给定的时间点降低死亡率。
"抗体"(Abs)和"免疫球蛋白"(Igs)是指具有相似结构特征的糖蛋白。尽管抗体显示出对特异性抗原的结合特异性，但是免疫球蛋白包括通常缺乏抗原特异性的抗体以及其它抗体样分子。后者的多肽例如由淋巴系统以低水平产生且由骨髓瘤以增加的水平产生。
术语"抗体"和"免疫球蛋白"可以最广的意义互换使用且包括单克隆抗体(例如全长或者完整的单克隆抗体)、多克隆抗体、单价抗体、多价抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体，只要它们显示出于其的生物活性)且也可包括某些抗体片段(如在本申请中更详细地描述)。抗体可为嵌合的、人的、人源化的和/或者亲和力成熟的。
“FOXO3a”是指叉头/翼状螺旋盒类O蛋白(forkhead/winged helix box class Oprotein)，其为PI3K/AKT激酶信号转导途径的下游靶标。活化的AKT激酶通过磷酸化直接调控FOXO3a活性，这导致其易位至细胞质，在此其被14-3-3侣伴蛋白隔离。PI3K/AKT激酶的抑制导致FOXO3a的脱磷酸化以及细胞核定位，这导致其活化。FOXO3a的细胞核定位使得其用作转录因子以通过其关键靶标基因诸如p27Kip1和Bim的上调来诱导细胞周期停滞和/或者细胞凋亡。
“定位分布"是指给定分子在一个位点的量相比于其在第二位点的量。在一个实例中，FOXO3a定位分布是指FOXO3a在细胞核中的量相比于其在细胞质中的量。所述定位分布可用比例(例如FOXO3a在细胞核中的量除以FOXO3a在细胞质中的量)或者减法(例如FOXO3a在细胞核中的量减去FOXO3a在细胞质中的量)的方式来表示。“细胞核定位分布”是指确定为在细胞核中FOXO3a水平基本高于在细胞质中的FOXO3a水平的定位分布。在一个实例中，与在细胞质中相比，细胞核定位分布在细胞核中具有大于约50%FOXO3a。在其它实例中，与在细胞质中相比，细胞核定位分布在细胞核中具有大于约70%、可选择地大于约80%、可选择地大于约90%FOXO3a。“细胞质定位分布”是指确定为在细胞质中FOXO3a水平基本高于在细胞核中的FOXO3a水平的定位分布。在一个实例中，与在细胞核中相比，细胞质定位分布在细胞质中具有大于约50%FOXO3a。在其它实例中，与在细胞核中相比，细胞质定位分布在细胞质中具有大于约70%、可选择地大于约80%、可选择地大于约90%FOXO3a。
因此，一个方面包括肿瘤细胞生长对经AKT激酶途径抑制剂产生的抑制的敏感性的预测方法，包括：确定FOXO3a在肿瘤细胞中的定位分布，其中FOXO3a的细胞质定位分布与对经AKT激酶途径抑制剂产生的抑制的敏感性相关联，且FOXO3a的核定位分布与与对经AKT激酶途径抑制剂产生的抑制的抗性相关联。
“pAKT分布”是指在给定样品中AKT的活化或者磷酸化(“pAKT”)的水平相比于非活化或者非磷酸化的AKT水平。在一个实例中，所述样品为肿瘤细胞。pAKT分布可用比例(例如pAKT在肿瘤细胞中的量除以非磷酸化的AKT在相同类型的细胞或者在非肿瘤细胞中的量)或者减法(例如pAKT在肿瘤细胞中的量减去非磷酸化的AKT在相同类型的细胞或者在非肿瘤细胞中的量)的方式来表示。pAKT分布也可以如下方式来表示：通过测量AKT的磷酸化下游靶标(例如pGSK或者PRAS40)的量获得的活化途径的水平。“高pAKT分布”是指全部AKT在样品中的活化或者磷酸化水平高于基线值。在一个实例中，所述基线值为针对给定细胞类型的pAKT的基本水平。在其它实例中，所述基线值为在给定样品细胞群体中的pAKT的平均值或者平均水平。在其它实例中，“高pAKT分布”是指当相比于来自相同哺乳动物或者患者群体的相同类型的平均正常的、健康的(例如非肿瘤)细胞而言，过表达或者在细胞中具有增多的磷酸化或者活化的AKT的肿瘤细胞。在图9中显示的实例证实高pAKT分布预测了对AKT抑制剂例如GDC-0068的敏感性。pAKT分布也可用于与其它标记(例如PTEN损失、突变为PI3K、Kras或Braf激酶，或FOXO3定位分布)组合以预测某些AKT抑制剂的效能。
测量AKT活化水平以及pAKT在样品中的量的方法是本领域已知的。例如，可使用免疫沉淀测定诸如AKT活性测定试剂盒(购自,San Francisco,CA)。在其它实例中，可使用Western blot测定，诸如AKT Western Blot测定试剂盒(购自Cell SignalingTechnology,Danvers,MA)。已知用于测量pAKT水平的其它测定形式包括化学发光关联的免疫吸附测定，参见Cicenas,J,et.al.,“Increased level of phosphorylated aktmeasured by chemiluminescence-linked immunosorbent assay is a predictor ofpoor prognosis in primary breast cancer overexpressing ErbB-2,”BreastCan.Res.,7(4),R394,2005。可使用的其它测定为可获得的，例如获自AlphaScreenSureFire Akt1(p-Thr308)测定试剂盒(购自Perkin Elmer,Waltham,MA)。
确定PI3K突变的存在的方法在本领域中已知。例如，使用实时PCR针对在PIK3CA基因中特异性突变(外显子9和20以及H1047R或者H1047L突变)的检测的测定是已知的(购自Qiagen,Valencia,CA)。
核酸可为例如基因组DNA、由基因组DNA转录的RNA或者由RNA产生的cDNA。核酸可由脊椎动物例如哺乳动物获得。认为核酸“衍生自”具体来源，条件是其直接由该来源获得或者其为在该来源中发现的核酸副本。
核酸和氨基酸序列的变异可通过本领域技术人员已知的某些方法来检测。所述方法包括但不限于DNA序列测定；引物延伸测定，包括等位基因特异性核苷酸掺入测定以及等位基因特异性引物延伸测定(例如等位基因特异性PCR、等位基因特异性连接酶链反应(LCR)和gap-LCR)；等位基因特异性寡核苷酸杂交测定(例如寡核苷酸连接测定)；剪切保护测定，其中来自剪切剂的保护用于检测核酸双链体中错配的碱基；MutS蛋白结合分析；电泳分析法，其比较变异的以及野生型核酸分子的迁移率；变性梯度凝胶电泳法(DGGE，如在例如Myers et al.(1985)Nature313:495中)；在错配碱基对的RNase剪切的分析；异源双链体DNA的化学或者酶剪切的分析；质谱法(例如MALDI-TOF)；遗传咬合分析(GBA)；5'核酸酶测定(例如)；以及采用分子指示标记的测定。这些方法中的某些将在如下作进一步详细地讨论。
靶标核酸中变异的检测可通过使用本领域熟知的技术进行分子克隆以及靶标核酸序列测定来完成。可选择地，扩增技术诸如聚合酶链式反应(PCR)可用于直接由来自肿瘤组织的基因组DNA制备来扩增靶标核酸序列。然后可确定所述扩增序列的核酸序列并由此鉴别变异。扩增技术在本领域中是熟知的，例如聚合酶链式反应描述于Saiki et al.,Science239:487,1988；美国专利4,683,203和4,683,195。
本领域已知的连接酶链反应也可用于扩增靶标核酸序列。参见例如Wu et al.,Genomics4:560-569(1989)。此外，已知为等位基因特异性PCR的技术也可用于检测变异(例如替换)。参见例如Ruano and Kidd(1989)Nucleic Acids Research17:8392;McClay etal.(2002)Analytical Biochem.301:200-206。在该技术的某些实施方案中，使用等位基因特异性引物，其中所述引物的3’末端核苷酸与靶标核酸中的具体变异互补(即能够特异性碱基配对)。如果并未存在具体变异，则不能观察到扩增产物。扩增受阻突变体系(ARMS)也可用于检测变异(例如替换)。ARMS描述于例如欧洲专利申请公开0332435以及Newton etal.,Nucleic Acids Research,17:7,1989。
用于检测变异(例如替换)的其它方法包括但不限于(1)等位基因特异性核苷酸掺入测定，诸如单一碱基延伸测定(参见例如Chen et al.(2000)Genome Res.10:549-557;Fan et al.(2000)Genome Res.10:853-860;Pastinen et al.(1997)Genome Res.7:606-614;和Ye et al.(2001)Hum.Mut.17:305-316)；(2)等位基因特异性引物延伸测定(参见例如Ye et al.(2001)Hum.Mut.17:305-316;和Shen et al.Genetic Engineering News,vol.23,Mar.15,2003)，包括等位基因特异性PCR；(3)5’核酸酶测定(参见例如De La Vegaet al.(2002)BioTechniques32:S48-S54(描述测定);Ranade et al.(2001)Genome Res.11:1262-1268;和Shi(2001)Clin.Chem.47:164-172)；(4)采用分子指示标记的测定(参见例如Tyagi et al.(1998)Nature Biotech.16:49-53;和Mhlanga et al.(2001)Methods25:463-71)；以及(5)寡核苷酸连接测定(参见例如Grossman et al.(1994)Nuc.Acids Res.22:4527-4534;美国专利申请公开2003/0119004A1;PCT国际公开WO01/92579A2;以及美国专利6,027,889)。
也可通过错配检测方法来检测变异。错配为并非100%互补的杂交核酸双链体。总体互补的缺乏可能是由于缺失、插入、倒位(inversions)或者替换。错配检测方法的一个实例为错配修复检测(MRD)测定，其描述于例如Faham et al.,Proc.Natl Acad.Sci.USA102:14717-14722(2005)和Faham et al.,Hum.Mol.Genet.10:1657-1664(2001)中。错配剪切技术的另外的实例为RNase保护方法，其详细描述于Winter et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82:7575,1985和Myers et al.,Science230:1242,1985中。例如，本发明的方法可包括使用标记的核糖核酸探针，其与人类野生型靶标核酸互补。所述核糖核酸探针和来自组织样品的靶标核酸一起退火(杂交)且随后使用酶核糖核酸酶A消化，所述酶能够检测双链RNA结构的某些错配。如果由核糖核酸酶A检测到错配，则其在错配位点剪切。因此，当退火的RNA制品在电泳凝胶基质上分离时，如果已经检测到错配且由核糖核酸酶A剪切，则会观察到RNA产物，其小于针对核糖核酸探针的全长双链RNA以及mRNA或者DNA。核糖核酸探针不需要为所述靶标核酸的全长，但是可为靶标核酸的部分，条件是其涵盖可能具有变异的位置。
以相似的方式，DNA探针可用于检测错配，例如通过酶或者化学剪切，参见例如Cotton et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,85:4397,1988;和Shenk et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,72:989,1975。可选择地，错配可通过在错配的双链体相对于配对的双链体的电泳迁移率中的位移来检测，参见例如Cariello,Human Genetics,42:726,1988。使用核糖核酸探针或者DNA探针，被怀疑包括变异的所述靶标核酸可在杂交之前扩增。靶标核酸的变化也可使用Southern杂交来检测，特别是当所述变化为大片段重排(gross rearrangement)，诸如缺失和插入。
对于靶标核酸或者周围标记基因的限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)探针可用于检测变异例如插入或者缺失。插入和缺失也可通过靶标核酸的克隆、序列测定和扩增来检测。单链构象多态性(SSCP)分析也可用于检测等位基因的碱基变化变异。参见例如Orita et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:2766-2770,1989和Genomics,5:874-879,1989。
本发明也提供适用于进行本发明方法的各种组合物。例如，本发明提供了可在所述方法中使用的阵列。在一个实施方案中，本发明的阵列包括用于检测变异的单独的核酸分子或者核酸分子集合。例如，本发明的阵列可包括一系列分散放置的单独的等位基因特异性寡核苷酸或者等位基因特异性寡核苷酸组。用于将核酸附着于固体基质诸如载玻片上的若干技术在本领域中是熟知的。一种方法为将含有能够附着于固体基质上的反应性部分的修饰的碱基或者类似物掺入至合成的核酸分子中，所述反应性部分诸如氨基、氨基的衍生基团或者具有正电荷的另外的基团。然后使得合成的产物与固体基质接触，所述固体基质诸如涂覆有醛基或者其它反应基团的载玻片。所述醛基或者其它反应基团将形成与扩增产物上的反应性部分的共价连接，其将会共价附着于载玻片上。其它方法诸如使用氨基丙基甲硅烷表面化学的方法在本领域中也是已知的。
任何上述方法的生物样品可使用本领域技术人员已知的某些方法来获得。生物样品可由脊椎动物特别是哺乳动物获得。活组织检查通常用于获得肿瘤组织的代表性切片。可选择地，肿瘤细胞可间接地以已知的或者认为含有待研究的肿瘤细胞的组织或者液体的形式获得。例如，肺癌损伤的样品可通过切除术、支气管镜检查法、细针抽吸、支气管刷检获得或者由痰、胸膜液或者血液获得。靶标核酸(或者编码的多肽)的变异可由肿瘤样品或者其它本体样品诸如尿、痰或者血浆检测。癌细胞由肿瘤脱落且出现在上述本体样品中。通过筛选所述本体样品，可针对疾病诸如癌症实现简单的早期诊断。此外，治疗进程可通过针对靶标核酸(或者编码的多肽)中的变异来测试所述本体样品而更容易地监测。此外，用于使得针对肿瘤细胞的组织制品富集的方法在本领域中是已知的。例如，所述组织可由石蜡或者冷冻切片分离。癌细胞也可由正常细胞通过流式细胞术或者激光捕获显微解剖法分离。
AKT激酶抑制剂
某些AKT激酶抑制剂已知为ATP-竞争性抑制剂，这是因为它们与ATP竞争结合至AKT的活性位点的能力。已知为变构抑制剂的某些AKT激酶抑制剂不能结合至AKT的活性位点。同样，AKT激酶抑制剂可为泛-AKT抑制剂，其中所述抑制剂可抑制AKT-1、AKT-2和AKT-3中的两个或者多个的活性。AKT激酶抑制剂可为选择性AKT抑制剂，其中所述抑制剂可抑制AKT-1、AKT-2和AKT-3中的一个的活性，而不抑制另外两个的活性。
在一个实施方案中，所述AKT激酶抑制剂为ATP-竞争性抑制剂。在另外的实施方案中，所述ATP-竞争性抑制剂为泛-AKT抑制剂。例如，在某些实施方案中，所述AKT抑制剂为式I的ATP-竞争性、泛-AKT抑制剂：
及其互变异构体、拆分的对映异构体、拆分的非对映异构体、溶剂化物和盐，其中：
R1为H、Me、Et和CF3；
R2为H或者Me；
R5为H或者Me；
A为：
其中G为任选被一至四个R9基团取代的苯基或者任选被卤素取代的5-6元杂芳基；
R6和R7独立为H、OCH3、(C3-C6环烷基)-(CH2)、(C3-C6环烷基)-(CH2CH2)、V-(CH2)0-1，其中V为5-6元杂芳基；W-(CH2)1-2，其中W为任选取代有F、Cl、Br、I、OMe、CF3或者Me的苯基；任选取代有C1-C3烷基或者O(C1-C3烷基)的C3-C6-环烷基；羟基-(C3-C6-环烷基)；氟-(C3-C6-环烷基)；CH(CH3)CH(OH)苯基；任选取代有F、OH、C1-C3烷基、环丙基甲基或者C(=O)(C1-C3烷基)的4-6元杂环基；或者C1-C6-烷基，其任选取代有一个或者多个独立选自下述的基团：OH、氧代、O(C1-C6-烷基)、CN、F、NH2、NH(C1-C6-烷基)、N(C1-C6-烷基)2、环丙基、苯基、咪唑基、哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、四氢呋喃基、氧杂环丁烷基或者四氢吡喃基；或者R6和R7与它们连接的氮一起形成4-7元杂环，其任选取代有一个或者多个独立选自下述的基团：OH、卤素、氧代、CF3、CH2CF3、CH2CH2OH、O(C1-C3烷基)、C(=O)CH3、NH2、NHMe、N(Me)2、S(O)2CH3、环丙基甲基和C1-C3烷基；
Ra和Rb为H，或者Ra为H且Rb和R6与它们连接的原子一起形成具有一个或者两个环氮原子的5-6元杂环；
Rc和Rd为H或者Me，或者Rc和Rd与它们连接的原子一起形成环丙基环；
R8为H、Me、F或者OH，或者R8和R6与它们连接的原子一起形成具有一个或者两个环氮原子的5-6元杂环；
每个R9独立为卤素、C1-C6-烷基、C3-C6-环烷基、O-(C1-C6-烷基)、CF3、OCF3、S(C1-C6-烷基)、CN、OCH2-苯基、CH2O-苯基、NH2、NH-(C1-C6-烷基)、N-(C1-C6-烷基)2、哌啶基、吡咯烷基、CH2F、CHF2、OCH2F、OCHF2、OH、SO2(C1-C6-烷基)、C(O)NH2、C(O)NH(C1-C6-烷基)和C(O)N(C1-C6-烷基)2；
R10为H或者Me；且
m、n和p独立为0或者1。
另外的实施方案包括式I的AKT抑制剂，其中R1为甲基；R2、R5和R10为H；G为任选取代有1-3个R9的苯基；R9为卤素、C1-C3烷基、CN、CF3、OCF3、OCH3或者OCH2苯基；Rc和Rd为H或者甲基；m、n和p为0或者1；且R8为H或者甲基。
另外的实施方案包括式I的AKT抑制剂，其选自：
2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮二盐酸盐；
(R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-((S)-4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)丙-1-酮二盐酸盐；
(R)-2-氨基-3-(4-氯-3-氟苯基)-1-((S)-4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)丙-1-酮二盐酸盐；
(R)-2-氨基-3-(4-氯-3-氟苯基)-1-((S)-4-((5R,7R)-7-甲氧基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)丙-1-酮二盐酸盐；
(S)-3-氨基-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮二盐酸盐；
(R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-((S)-4-((S)-7-羟基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-氨基-3-(4-氯-3-氟苯基)-1-((S)-4-((S)-7-羟基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(2R)-2-氨基-3-(4-氯-3-氟苯基)-1-((3S)-4-((5R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-(7-羟基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-氨基-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-甲氧基苯基)丙-1-酮；
2-(4-氯苯基)-1-((S)-4-((R)-7-羟基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
2-(4-氯苯基)-1-(4-(7-羟基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮二盐酸盐；
2-(4-氯苯基)-3-(异丙基氨基)-1-(4-(7-甲氧基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
2-(4-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
2-(3,4-二氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(吡啶-3-基甲基氨基)丙-1-酮；
2-(2,4-二氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(戊-3-基氨基)丙-1-酮；
2-(4-氯苯基)-3-((1S,2R)-1-羟基-1-苯基丙-2-基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-((1R,4R)-4-羟基环己基氨基)丙-1-酮；
((3S,4R)-4-(3,4-二氯苯基)吡咯烷-3-基)(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)甲酮；
((3R,4S)-4-(3,4-二氯苯基)吡咯烷-3-基)(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)甲酮；
2-(4-氯苯基)-2-羟基-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
4-氨基-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-甲基戊-1-酮；
4-氨基-2-(3,4-二氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-甲基戊-1-酮；
(4-(4-氯-3-氟苯基)哌啶-4-基)(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)甲酮；
(3-(4-氯苯基)吡咯烷-3-基)(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)甲酮；
1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)-2-对甲苯基丙-1-酮；
1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)丙-1-酮；
3-(乙基氨基)-2-(4-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
2-(4-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(甲基氨基)丙-1-酮；
(S)-3-氨基-2-(3,4-二氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
2-(4-氯苯基)-3-(环丙基甲基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
2-(4-氯-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(吡咯烷-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
2-(4-氯苯基)-1-((S)-4-((S)-7-羟基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-((S)-4-((R)-7-羟基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-氨基-3-(4-氯-3-氟苯基)-1-((S)-4-((R)-7-羟基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)丙-1-酮；
2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R)-7-羟基-5,7-二甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(4-(3,4-二氯苯基)哌啶-4-基)(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)甲酮二盐酸盐；
4-(3,4-二氯苯基)吡咯烷-3-基)(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)甲酮二盐酸盐；
1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-甲氧基苯基)-3-(吡咯烷-1-基)丙-1-酮；
2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(2,2,2-三氟乙基氨基)丙-1-酮；
3-(叔丁基氨基)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(甲基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-3-(环丙基甲基氨基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(5-氯噻吩-2-基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)-2-(4-(三氟甲基)苯基)丙-1-酮；
4-(1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)-1-氧代丙-2-基)苄腈；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
3-(氮杂环丁烷-1-基)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)丙-1-酮；
2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(新戊基氨基)丙-1-酮；
2-(4-溴苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
2-(4-氯苯基)-3-(4-氟哌啶-1-基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
2-(4-氯苯基)-3-((S)-3-氟吡咯烷-1-基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
2-(4-氯苯基)-3-(乙基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基(甲基)氨基)丙-1-酮；
2-(4-氯苯基)-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
2-(4-氯苯基)-3-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
2-(4-溴-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(R)-2-氨基-3-(4-氟苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-氨基-3-(3,4-二氯苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-氨基-3-(3,4-二氟苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-3-(环丙基甲基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-3-(环丙基甲基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
2-(4-氯苯基)-3-((R)-3-氟吡咯烷-1-基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)-2-(4-(三氟甲氧基)苯基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-3-(环丙基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)丙-1-酮；
(R)-4-氨基-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-甲基戊-1-酮；
(S)-4-氨基-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-甲基戊-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-((R)-吡咯烷-3-基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-((S)-吡咯烷-3-基氨基)丙-1-酮；
(S)-3-((R)-1-乙酰基吡咯烷-3-基氨基)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-3-((S)-1-乙酰基吡咯烷-3-基氨基)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴苯基)-3-(环丙基甲基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(哌啶-4-基氨基)丙-1-酮；
(S)-3-(1-乙酰基哌啶-4-基氨基)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(2-甲氧基乙基氨基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-4-(二甲基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丁-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-((1r,4S)-4-羟基环己基氨基)丙-1-酮；
(S)-3-(氮杂环丁烷-1-基)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-3-(氮杂环丁烷-1-基)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
2-((S)-2-(4-氯苯基)-3-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基氨基)乙酰胺；
2-((S)-2-(4-氯苯基)-3-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基氨基)-N,N-二甲基乙酰胺；
2-((S)-2-(4-氯苯基)-3-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基氨基)-N-甲基乙酰胺；
(R)-2-(4-溴苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-(异丙基氨基)丁-1-酮；
(R)-2-(4-溴苯基)-4-(二甲基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丁-1-酮；
(R)-2-(4-溴苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-(异丁基氨基)丁-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)丁-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-(异丙基氨基)丁-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)丁-1-酮；
2-((R)-3-(4-溴苯基)-4-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁基氨基)-N,N-二甲基乙酰胺；
(R)-2-(4-溴苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-(2-羟基乙基氨基)丁-1-酮；
(2R)-2-(4-溴苯基)-4-(2-羟基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丁-1-酮；
(R)-2-氨基-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-碘苯基)丙-1-酮；
4-((R)-2-氨基-3-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)苄腈；
(R)-2-氨基-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)丙-1-酮；
(S)-3-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-3-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-3-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(甲基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-4-(环己基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丁-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丁-1-酮；
(2R)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-(2-羟基丙基氨基)丁-1-酮；
(2R)-2-(4-氯苯基)-4-(2-羟基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丁-1-酮；
(2R)-2-(4-氯苯基)-4-(2-羟基-1-苯基乙基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丁-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-3-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-溴苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-(2-甲氧基乙基氨基)丁-1-酮；
(2R)-2-(4-溴苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-(3,3,3-三氟-2-羟基丙基氨基)丁-1-酮；
(R)-2-(4-溴苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-((1-羟基环丙基)甲基氨基)丁-1-酮；
2-((R)-3-(4-溴苯基)-4-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁基氨基)乙酰胺；
(R)-2-(4-溴苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丁-1-酮；
(R)-4-(3-(1H-咪唑-1-基)丙基氨基)-2-(4-溴苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丁-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-吗啉代丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-吗啉代丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-3-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-3-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-硫吗啉代丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-硫吗啉代丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-3-(4-氟哌啶-1-基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-3-(4-氟哌啶-1-基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(3,4-二氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-3-(二甲基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(甲氧基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-甲氧基哌啶-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-甲氧基哌啶-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-羟基哌啶-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-羟基哌啶-1-基)丙-1-酮；
(S)-3-(4-氨基哌啶-1-基)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-3-(4-氨基哌啶-1-基)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(甲基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基(甲基)氨基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-(甲基氨基)哌啶-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-(甲基氨基)哌啶-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯-3-(三氟甲氧基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-3-(4-乙基哌嗪-1-基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-3-(4-乙基哌嗪-1-基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-异丙基哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-异丙基哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-3-((S)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-3-((S)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-((R)-四氢呋喃-3-基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-((R)-四氢呋喃-3-基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-3-(2-氟乙基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氟-3-(三氟甲氧基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(3,5-二(三氟甲基)苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
4-((R)-2-(4-氯苯基)-3-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-2-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-((R)-3-羟基吡咯烷-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-3-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-3-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(3-氯-5-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(3-溴-4-甲氧基苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(R)-3-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(哌啶-4-基氨基)丙-1-酮；
(R)-2-(1-乙酰基哌啶-4-基氨基)-3-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
2-((R)-3-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-1-氧代丙-2-基氨基)-N-异丙基乙酰胺；
(R)-3-(4-氯苯基)-2-(二甲基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-3-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-吗啉代乙基氨基)丙-1-酮；
(R)-3-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(R)-3-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(R)-3-(4-氯苯基)-1-((S)-4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)-2-(异丙基氨基)丙-1-酮；
2-((R)-3-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-1-氧代丙-2-基氨基)-N,N-二甲基乙酰胺；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(1,4-氧氮杂环庚烷-4-基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(1,4-氧氮杂环庚烷-4-基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(2-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-3-(环己基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-3-(环己基氨基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-甲氧基环己基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-((S)-四氢呋喃-3-基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(R)-3-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基氨基)丙-1-酮；
(R)-3-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3,3,3-三氟丙基氨基)丙-1-酮；
(R)-3-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基氨基)丙-1-酮；
(R)-3-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(异丙基(甲基)氨基)丙-1-酮；
(S)-3-(叔丁基氨基)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-3-(叔丁基氨基)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-羟基哌啶-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-吗啉代丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-羟基哌啶-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-3-(环丙基甲基氨基)-2-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-3-(环丙基甲基氨基)-2-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)-2-(4-(三氟甲基)苯基)丙-1-酮；
(S)-3-氨基-2-(4-溴苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-3-氨基-2-(4-氯-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
3-((S)-2-(4-氯苯基)-3-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基氨基)丙酰胺；
3-((S)-2-(4-氯苯基)-3-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基氨基)丙酰胺；
(4-(4-氯苯基)哌啶-4-基)(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)甲酮；
(S)-2-(4-溴苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-3-氨基-2-(4-氯-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-3-氨基-2-(4-溴苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(3,4-二氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(S)-3-氨基-2-(3,4-二氯苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(3,4-二氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-羟基哌啶-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(3,4-二氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-异丙基哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-羟基哌啶-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-羟基哌啶-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-异丙基哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(3,5-二氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-3-((R)-3-氨基吡咯烷-1-基)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-3-((R)-3-氨基吡咯烷-1-基)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-异丙基哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-吗啉代丙-1-酮；
(R)-2-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-吗啉代丙-1-酮；
(S)-3-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-3-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-3-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-3-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(3,4-二氯苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯-3-氟苯基)-3-(环丙基甲基氨基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-3-(二(环丙基甲基)氨基)-2-(4-氯-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴苯基)-3-(环丙基甲基氨基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴苯基)-3-((环丙基甲基)(甲基)氨基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯-3-氟苯基)-3-(环丙基甲基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-3-(环丙基甲基氨基)-2-(3,4-二氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)-2-(4-(三氟甲氧基)苯基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-3-((3S,5R)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-氯苯基)-3-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉代)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-3-((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉代)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-3-((3S,5R)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-羟基哌啶-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-羟基哌啶-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-异丙基哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-异丙基哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-3-(环丙基甲基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-(三氟甲氧基)苯基)丙-1-酮；
(S)-3-氨基-2-(4-溴-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-3-氨基-2-(4-溴-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(3,4-二氯苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴-3-氟苯基)-3-(环丙基甲基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴-3-氟苯基)-3-(环丙基甲基氨基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-异丙基哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-羟基哌啶-1-基)丙-1-酮；
(S)-3-(环丙基甲基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-(三氟甲基)苯基)丙-1-酮；
(S)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)-2-(4-(三氟甲基)苯基)丙-1-酮；
(S)-3-(环丙基甲基氨基)-2-(2-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(R)-2-(4-溴-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-羟基哌啶-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基(甲基)氨基)丙-1-酮；
(S)-3-氨基-2-(4-溴-2-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-3-氨基-2-(4-溴-2-氟苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基(甲基)氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴-2-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴-2-氟苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-3-氨基-2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
2-(4-氯苯基)-3-((3S,4R)-4-(二甲基氨基)-3-氟哌啶-1-基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴-2-氟苯基)-3-(环丙基甲基氨基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-3-(叔丁基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-(三氟甲基)苯基)丙-1-酮；
(S)-2-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯-2-氟苯基)-3-(环丙基甲基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴-2-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯-2-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(S)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)-2-(4-(三氟甲基)苯基)丙-1-酮；
(S)-3-(环丙基甲基氨基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-(三氟甲基)苯基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴苯基)-3-(叔丁基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯-3-氟苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丁基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯-3-氟苯基)-3-(环戊基甲基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯-3-氟苯基)-3-(环戊基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(2-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基(甲基)氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-((2-羟基乙基)(异丙基)氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(2-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(2-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(S)-3-氨基-2-(2-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-3-(环丙基甲基氨基)-2-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-3-(环丙基甲基氨基)-2-(3-氟-4-(三氟甲氧基)苯基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴苯基)-3-(4,4-二甲基环己基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-溴苯基)-3-(3,3-二甲基环己基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-3-(4,4-二甲基环己基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(4-氯苯基)-3-(3,3-二甲基环己基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)-2-(噻吩-2-基)丙-1-酮；
(S)-2-(5-溴噻吩-2-基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(5-溴噻吩-2-基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(5-溴噻吩-2-基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(R)-2-(5-溴吡啶-2-基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(5-溴吡啶-2-基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(5-溴噻吩-2-基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(5-溴噻吩-2-基)-3-(环丙基甲基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(5-氯噻吩-2-基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(5-氯噻吩-2-基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(5-氯噻吩-2-基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)丙-1-酮；
(S)-2-(5-氯噻吩-2-基)-3-(环丙基甲基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；
(S)-2-(5-氯噻吩-2-基)-3-(环丙基甲基氨基)-1-(4-((5R,7S)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮；以及
它们的盐。
另外的实施方案包括式I的AKT抑制剂，包括以下化合物：
；以及它们的盐。
式I化合物的制备
式I的化合物可根据美国专利公开2008/0051399(美国专利申请11/773,949，2007年7月5日提交，标题为“Hydroxylated and Methoxylated Pyrimidyl Cyclopentanes asAKT Protein Kinase Inhibitors”)中所述的方法来制备，针对所有目的将其通过引用的方式并入本申请。
式I的化合物可逐一制备或者作为包括至少2个例如5至1,000个化合物或者10至100个化合物的化合物库来制备。式I的化合物库可通过组合的'分离和混合'方法或者通过使用溶液相或者固相化学的多重并行合成法来制备。
针对示例说明的目的，方案1-4显示了用于制备式I的化合物以及关键中间体的一般方法。本领域技术人员将会认识到可使用其它合成途径。尽管具体起始物质和试剂描述于如下方案中并如下讨论，但是其它起始物质和试剂可容易地替换以提供多种衍生物和/或者反应条件。此外，由如下所述的方法制备的许多化合物可进一步根据本公开使用本领域技术人员熟知的常规化学方法来修饰。
方案1
方案1显示了制备式I的化合物10的方法，其中R1为H，R2为OH且R5为H。嘧啶2的形成可通过酮酸酯1与硫脲在碱(诸如KOH)的存在下在适当溶剂(诸如乙醇)中的反应来完成。在将化合物2的巯基在标准还原条件(例如兰尼镍和NH4OH)下还原得到化合物3后，可将羟基嘧啶3在标准条件(例如POCl3在DIEA/DCE中)下氯化得到化合物4。然后将化合物4在标准条件(例如MCPBA在适当溶剂诸如CHCl3中)下氧化得到嘧啶-氧化物5。将嘧啶-氧化物用乙酸酐处理得到重排产物6。化合物7通过使得化合物6与适当取代的哌啶在标准SNAr反应条件下反应得到化合物7来获得。将化合物7水解得到化合物8，然后将其脱保护得到中间体9。将哌嗪基环戊二烯并[d]嘧啶9用适当的氨基酸在偶联试剂(诸如HBTU)的存在下进行酰化，接着如果需要进行脱保护，得到式I的化合物10。
方案2
方案2显示了制备式I的化合物22、25和27的方法，其中R1、R2和R5为甲基。根据方案2，将(+)-番薄荷酮11用溴进行溴化得到二溴化物12。将二溴化物12用碱(诸如乙醇钠)处理得到番薄荷酸酯(pulegenate)13。将番薄荷酸酯13进行臭氧分解得到酮酯(keto ester)14。将酮酸酯14用硫脲在碱(诸如KOH)的存在下在乙醇中处理，接着将巯基在标准条件(例如兰尼镍催化剂在氨水中)下还原得到羟基嘧啶16。将羟基嘧啶16在标准条件(例如POCl3)下氯化得到4-氯嘧啶17。将4-氯嘧啶17用氧化剂(诸如MCPBA或者过氧化氢)氧化得到N-氧化物18。将N-氧化物18用乙酸酐重排得到中间体19。使得化合物19与预期的哌嗪根据在方案1中所述的操作反应得到化合物20(其中R5为H)和23(其中R5为Me)。使用HPLC(具有手性固定相)将化合物20和23进行手性分离，然后在用碱(诸如氢氧化锂)处理后进行水解分别得到化合物21和24。在脱保护后，使得化合物21和24分别与适当的氨基酸反应得到化合物22和25。
可选择地，可将化合物24的7-羟基用烷化剂(诸如烷基卤)在碱(诸如NaH或者KOH)的存在下进行烷基化得到化合物26，其中R2为Me。在脱保护后，使得化合物26与适当的氨基酸反应得到化合物27。
方案3
方案3显示制备化合物73和74的可选择方法。根据方案3，使用氨合成子将14氨化得到63。使用例如甲酸铵在甲酰胺的存在下在50℃-250℃和/或者高压形成嘧啶得到二环单元64。使用例如POCl3或者SOCl2活化64得到活化的嘧啶65。在0℃至150℃使用适当保护/取代的哌啶将该离去基团置换得到哌啶66。在-20℃至50℃使用例如间氯过氧苯甲酸(“MCPBA”或者“m-CPBA”)或者进行氧化得到N-氧化物67。用酰化剂(例如乙酸酐)处理、接着加热(40℃至200℃)引起重排得到68。在0℃至50℃使用例如LiOH或者NaOH进行水解得到醇69。使用例如Swern条件、MnO4或者吡啶-SO3络合物在适当温度进行氧化得到酮70。使用例如催化手性催化剂在氢、CBS催化剂或者硼氢化物还原剂的存在下在手性配体的存在下进行不对称还原得到(R)或者(S)立体化学的醇71或者72。可选择地，可使用非手性还原剂(例如H2、Pd/C)，使得环戊烷单元上的甲基提供面选择性(facial selectivity)以及最终的非对映立体选择性。如果还原得到较弱的非对映立体选择性，则非对映异构体可通过(例如)色谱法、重结晶或者衍生化来分离。最终，使用例如酸在0℃至50℃将Boc基团进行脱保护，使用适当官能化的氨基酸进行酰化，且最终将该氨基酸的胺进行官能化(例如移去任何保护基团、烷基化、还原氨化或者酰化以引入新的取代基)得到最终的化合物73和74。
方案4
将手性助剂(例如Evans噁唑烷酮等)引入至化合物(1)可通过标准酰化操作得到结合物(2)来完成。例如，将酸用活化剂(例如COCl2)处理或者在胺碱的存在下在-20℃-100℃形成混合酸酐(例如2,2-二甲基丙酰氯)，接着用适当的手性助剂(X)处理得到化合物(2)。手性助剂的立体化学和选择可确定新产生的手性中心的立体化学以及非对映立体选择性。将化合物(2)用路易斯酸(例如TiCl4)在低温(例如-20℃至-100℃)和胺碱(例如许尼希碱(Hunig’s base))处理，接着使用适当取代的亚铵离子前体(3)在低温处理，得到化合物(4)。可认为所述温度、路易斯酸和手性助剂均影响加成加合物的非对映立体选择性。最终，在温和条件(例如LiOH/H2O，在-10℃至30℃)下进行皂化得到预期的酸(5)。
在另外的实施方案中，AKT激酶抑制剂为式II的ATP-竞争性、泛-AKT抑制剂：
及其立体异构体、互变异构体或者药用盐，其中：
G为任选取代有一至三个Ra基团的苯基或者任选被卤素取代的5-6元杂芳基；
R1和R1a独立选自H、Me、CF3、CHF2或者CH2F；
R2为H、F或者–OH；
R2a为H；
R3为H；
R4为H或者任选取代有F、-OH或者-O(C1-C3烷基)的C1-C4烷基；
R5和R5a独立选自H和C1-C4烷基，或者R5和R5a与它们连接的原子一起形成5-6元环烷基或者5-6元杂环基，其中所述杂环基具有氧杂原子；
每个Ra独立为卤素、C1-C6-烷基、C3-C6-环烷基、-O-(C1-C6-烷基)、CF3、-OCF3、S(C1-C6-烷基)、CN、-OCH2-苯基、NH2、-NO2、-NH-(C1-C6-烷基)、-N-(C1-C6-烷基)2、哌啶基、吡咯烷基、CH2F、CHF2、-OCH2F、-OCHF2、-OH、-SO2(C1-C6-烷基)、C(O)NH2、C(O)NH(C1-C6-烷基)和C(O)N(C1-C6-烷基)2；且
j为1或者2。
另外的实施方案包括AKT抑制剂化合物，包括：
在一个实施方案中，所述AKT抑制剂为具有上式的选自GDC-0068的化合物。
式II的化合物可根据在WO2009006567中所述的方法来制备，针对所有目的将其通过引用的方式并入本申请。
在一个实施方案中，所述AKT抑制剂为式III的变构的AKT抑制剂：
其中R1和R2独立为氢、C1-C5烷基、羟基、C1-5烷氧基或者氨基；p为1至6的整数；A为5-14个碳的碳环、二环或者三环芳族或者杂芳族环，其可任选取代有卤素、OH、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基、C1-C6-烷基或者苯基，上述基团任选取代有卤素、OH、C1-C3烷基或者环丙基甲基；且在一个实施方案中A具有下述结构中的一个：
其中D和E独立为–CH或者N；
其中R3和R4各自独立为氢、卤素、OH、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基或者C1-C6-烷基，上述基团任选取代有卤素、OH、C1-C3烷基或者环丙基甲基；
R5为5或者6元芳族或者杂芳族环，其任选取代有卤素、OH、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基或者C1-C6-烷基，上述基团任选取代有卤素、OH、C1-C3烷基或者环丙基甲基；在一个实施方案中，R5为苯基；
B为芳族环、杂芳族环、碳环或者杂环，其具有下式：
其中Q、T、X和Y各自独立选自–CH、-CH2、C=O、N或者O；
Z为-CH、-CH2、C=O、N、O或者–C=C–；
R6和R7独立选自氢、卤素、羰基和5或者6元芳族或者杂芳族环，所述环任选取代有卤素、OH、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基或者C1-C6-烷基，上述基团任选取代有卤素、OH、C1-C3烷基或者环丙基甲基；在一个实施方案中，R6或者R7为吡啶基，或者R6和R7一起形成5-6元芳族环、杂芳族环、碳环或者杂环，其可任选取代有卤素、OH、氨基、二烷基氨基、单烷基氨基或者C1-C6-烷基，上述基团任选取代有卤素、OH、C1-C3烷基或者环丙基甲基；在一个实施方案中，B具有下述结构中的一种：
其中X、Y、Q、R6和R7如上所述，且X’、Q’和T’为-CH或者N。
另外的实施方案包括变构的AKT抑制剂，其具有下式：
其中a为0或者1；b为0或者1；m为0、1或者2；n为0、1或者2；p为0、1或者2；r为0或者1；s为0或者1；
Q选自-NR7R8、
R1独立选自(C=O)aObC1-C6烷基、(C=O)aOb芳基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、(C=O)aOb杂环基、(C=O)aObC3-C6环烷基、CO2H、卤素、CN、OH、ObC1-C6全氟烷基、Oa(C=O)bNR7R8、NRc(C=O)NR7R8、S(O)mRa、S(O)2NR7R8、NRcS(O)mRa、氧代、CHO、NO2、NRc(C=O)ObRa、O(C=O)ObC1-C6烷基、O(C=O)ObC3-C6环烷基、O(C=O)Ob芳基和O(C=O)Ob-杂环基、其中所述烷基、芳基、烯基、炔基、杂环基和环烷基任选取代有一个或者多个选自Rz的取代基；
R2独立选自C1-C6烷基、芳基、杂环基、CO2H、卤素、CN、OH和S(O)2NR7R8，其中所述烷基、芳基和杂环基任选取代有一个、两个或者三个选自Rz的取代基；
R7和R8独立选自H,(C=O)ObC1-C10烷基、(C=O)ObC3-C8环烷基、(C=O)Ob芳基、(C=O)Ob杂环基、C1-C10烷基、芳基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、杂环基、C3-C8环烷基、SO2Ra和(C=O)NRb 2，其中所述烷基、环烷基、芳基、杂环基、烯基和炔基任选取代有一个或者多个选自Rz的取代基，或者
R7和R8可与它们连接的氮一起形成单环或者二环杂环基，其在每个环具有5-个成员且任选含有除了氮之外的一个或者两个选自N、O和S的额外的杂原子，所述单环或者二环杂环基任选取代有一个或者多个选自Rz的取代基；
Rz选自：(C=O)rOs(C1-C10)烷基、Or(C1-C3)全氟烷基、(C0-C6)亚烷基-S(O)mRa、氧代、OH、卤素、CN、(C=O)rOs(C2-C10)烯基、(C=O)rOs(C2-C10)炔基、(C=O)rOs(C3-C6)环烷基、(C=O)rOs(C0-C6)亚烷基-芳基、(C=O)rOs(C0-C6)亚烷基-杂环基、(C=O)rOs(C0-C6)亚烷基-N(Rb)2、C(O)Ra、(C0-C6)亚烷基-CO2Ra、C(O)H、(C0-C6)亚烷基-CO2H、C(O)N(Rb)2、S(O)mRa和S(O)2N(Rb)2、NRc(C=O)ObRa、O(C=O)ObC1-C10烷基、O(C=O)ObC3-C8环烷基、O(C=O)Ob芳基和O(C=O)Ob-杂环基，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基和杂环基任选取代有至多三个选自Rb、OH、(C1-C6)烷氧基、卤素、CO2H、CN、O(C=O)C1-C6烷基、氧代和N(Rb)2的取代基；
Ra为(C1-C6)烷基、(C3-C6)环烷基、芳基或者杂环基；且
Rb为H、(C1-C6)烷基、芳基、杂环基、(C3-C6)环烷基、(C=O)OC1-C6烷基、(C=O)C1-C6烷基或者S(O)2Ra；
Rc选自：H、C1-C6烷基、芳基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、杂环基、C3-C8环烷基和C1-C6全氟烷基，其中所述烷基、环烷基、芳基、杂环基、烯基和炔基任选取代有一个或者多个选自Rz的取代基；
或者其药用盐或者立体异构体。
另外的实施方案包括变构的AKT抑制剂，其具有下式：
其中a为0或者1；b为0或者1；m为0、1或者2；n为0、1、2或者3；p为0、1或者2；r为0或者1；s为0或者1；u、v、w和x独立选自CH和N，条件是u、v、w和x中仅一个可为N；
Q选自-NR5R6，
R1独立选自(C=O)aObC1-C6烷基、(C=O)aOb芳基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、(C=O)aOb杂环基、(C=O)aObC3-C6环烷基、CO2H、卤素、CN、OH、ObC1-C6全氟烷基、Oa(C=O)bNR7R8、NRc(C=O)NR7R8、S(O)mRa、S(O)2NR7R8、NRcS(O)mRa、氧代、CHO、NO2、NRc(C=O)ObRa、O(C=O)ObC1-C6烷基、O(C=O)ObC3-C6环烷基、O(C=O)Ob芳基和O(C=O)Ob-杂环基，其中所述烷基、芳基、烯基、炔基、杂环基和环烷基任选取代有一个或者多个选自Rz的取代基；
R2独立选自C1-C6烷基、芳基、杂环基、CO2H、卤素、CN、OH和S(O)2NR7R8，其中所述烷基、芳基和杂环基任选取代有一个、两个或者三个选自Rz的取代基；
R7和R8独立选自H、(C=O)ObC1-C10烷基、(C=O)ObC3-C8环烷基、(C=O)Ob芳基、(C=O)Ob杂环基、C1-C10烷基、芳基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、杂环基、C3-C8环烷基、SO2Ra和(C=O)NRb 2，其中所述烷基、环烷基、芳基、杂环基、烯基和炔基任选取代有一个或者多个选自Rz的取代基，或者
R7和R8可与它们连接的氮一起形成单环或者二环杂环基，其在每个环具有5-7个成员且任选含有除了氮之外的一个或者两个选自N、O和S的额外的杂原子，所述单环或者二环杂环基任选取代有一个或者多个选自Rz的取代基；
Rz选自：(C=O)rOs(C1-C10)烷基、Or(C1-C3)全氟烷基、(C0-C6)亚烷基-S(O)mRa、氧代、OH、卤素、CN、(C=O)rOs(C2-C10)烯基、(C=O)rOs(C2-C10)炔基、(C=O)rOs(C3-C6)环烷基、(C=O)rOs(C0-C6)亚烷基-芳基、(C=O)rOs(C0-C6)亚烷基-杂环基、(C=O)rOs(C0-C6)亚烷基-N(Rb)2、C(O)Ra、(C0-C6)亚烷基-CO2Ra、C(O)H、(C0-C6)亚烷基-CO2H、C(O)N(Rb)2、S(O)mRa和S(O)2N(Rb)2、NRc(C=O)ObRa、O(C=O)ObC1-C10烷基、O(C=O)ObC3-C8环烷基、O(C=O)Ob芳基和O(C=O)Ob-杂环基，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基和杂环基任选取代有至多三个选自Rb、OH、(C1-C6)烷氧基、卤素、CO2H、CN、O(C=O)C1-C6烷基、氧代和N(Rb)2的取代基；
Ra为(C1-C6)烷基、(C3-C6)环烷基、芳基或者杂环基；且
Rb为H、(C1-C6)烷基、芳基、杂环基、(C3-C6)环烷基、(C=O)OC1-C6烷基、(C=O)C1-C6烷基或者S(O)2Ra；
Rc选自：H、C1-C6烷基、芳基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、杂环基、C3-C8环烷基和C1-C6全氟烷基，其中所述烷基、环烷基、芳基、杂环基、烯基和炔基任选取代有一个或者多个选自Rz的取代基；
或者其药用盐或者立体异构体。
另外的实施方案包括变构的AKT抑制剂，其具有下式：
其中a为0或者1；b为0或者1；m为0、1或者2；n为0、1、2或者3；p为0、1或者2；r为0或者1；s为0或者1；u、v和x独立选自CH和N；W为化学键、CH或者N；
Q选自-NR5R6、
R1独立选自(C=O)aObC1-C6烷基、(C=O)aOb芳基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、(C=O)aOb杂环基、(C=O)aObC3-C6环烷基、CO2H、卤素、CN、OH、ObC1-C6全氟烷基、Oa(C=O)bNR7R8、NRc(C=O)NR7R8、S(O)mRa、S(O)2NR7R8、NRcS(O)mRa、氧代、CHO、NO2、NRc(C=O)ObRa、O(C=O)ObC1-C6烷基、O(C=O)ObC3-C6环烷基、O(C=O)Ob芳基和O(C=O)Ob-杂环基，其中所述烷基、芳基、烯基、炔基、杂环基和环烷基任选取代有一个或者多个选自Rz的取代基；
R2独立选自C1-C6烷基、芳基、杂环基、CO2H、卤素、CN、OH和S(O)2NR7R8，其中所述烷基、芳基和杂环基任选取代有一个、两个或者三个选自Rz的取代基；
R7和R8独立选自H、(C=O)ObC1-C10烷基、(C=O)ObC3-C8环烷基、(C=O)Ob芳基、(C=O)Ob杂环基、C1-C10烷基、芳基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、杂环基、C3-C8环烷基、SO2Ra和(C=O)NRb 2，其中所述烷基、环烷基、芳基、杂环基、烯基和炔基任选取代有一个或者多个选自Rz的取代基，或者
R7和R8可与它们连接的氮一起形成单环或者二环杂环基，其在每个环具有5-7个成员且任选含有除了氮之外的一个或者两个选自N、O和S的额外的杂原子，所述单环或者二环杂环基任选取代有一个或者多个选自Rz的取代基；
Rz选自：(C=O)rOs(C1-C10)烷基、Or(C1-C3)全氟烷基、(C0-C6)亚烷基-S(O)mRa、氧代、OH、卤素、CN、(C=O)rOs(C2-C10)烯基、(C=O)rOs(C2-C10)炔基、(C=O)rOs(C3-C6)环烷基、(C=O)rOs(C0-C6)亚烷基-芳基、(C=O)rOs(C0-C6)亚烷基-杂环基、(C=O)rOs(C0-C6)亚烷基-N(Rb)2、C(O)Ra、(C0-C6)亚烷基-CO2Ra、C(O)H、(C0-C6)亚烷基-CO2H、C(O)N(Rb)2、S(O)mRa和S(O)2N(Rb)2、NRc(C=O)ObRa、O(C=O)ObC1-C10烷基、O(C=O)ObC3-C8环烷基、O(C=O)Ob芳基和O(C=O)Ob-杂环基，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基和杂环基任选取代有至多三个选自Rb、OH、(C1-C6)烷氧基、卤素、CO2H、CN、O(C=O)C1-C6烷基、氧代和N(Rb)2的取代基；
Ra为(C1-C6)烷基、(C3-C6)环烷基、芳基或者杂环基；且
Rb为H、(C1-C6)烷基、芳基、杂环基、(C3-C6)环烷基、(C=O)OC1-C6烷基、(C=O)C1-C6烷基或者S(O)2Ra；
Rc选自：H、C1-C6烷基、芳基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、杂环基、C3-C8环烷基和C1-C6全氟烷基，其中所述烷基、环烷基、芳基、杂环基、烯基和炔基任选取代有一个或者多个选自Rz的取代基；
或者其药用盐或者立体异构体。
另外的实施方案包括变构的AKT抑制剂，其选自：
以及它们的盐。
在一个实施方案中，所述激酶抑制剂为AKT-1选择性ATP-竞争性抑制剂，且其为式IV的化合物：
及其药用盐，其中
Ar选自芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基；
Q选自环烷基、取代的环烷基、环杂烷基、取代的环杂烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基；
R1和R2独立选自氢、烷基、取代的烷基、环烷基、取代的环烷基、杂环烷基、取代的杂环烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基；或者R1和R2与R1和R2所连接的氮一起形成选自环杂烷基、取代的环杂烷基、杂芳基和取代的杂芳基的环；
P选自2、3、4和5；且
q为0或者1。
式IV的化合物包括：
及其盐。
另外的实施方案包括AKT抑制剂，诸如具有下式的哌立福辛(perifosine)：
另外的实施方案包括AKT抑制剂，诸如抗-AKT抗体和抗-AKT DNA或者RNA。
另外的实施方案包括AKT抑制剂，其具有下式：
及其药用盐。
另外的实施方案包括AKT抑制剂，诸如寡核苷酸，包括反义寡核苷酸，其具有以下序列：5'ccagcccccaccagtccact3'(SEQ ID NO:1)、5'cgccaaggagatcatgcagc3'(SEQ IDNO:2)、5'gctgcatgatctccttggcg3'(SEQ ID NO:3)、5'agatagctggtgacagacag3'(SEQ IDNO:4)、5'cgtggagagatcatctgagg3'(SEQ ID NO:5)、5'tcgaaaaggtcaagtgctac3'(SEQ IDNO:6)、5'tggtgcagcggcagcggcag3'(SEQ ID NO:7)和5'ggcgcgagcgcgggcctagc3'(SEQ IDNO:8)。
本发明的某些实施方案将通过以下非限制性实施例来示例说明。
活化AKT1的突变
申请人已经发现某些AKT1突变可导致中断AKT1PH结构域和激酶结构域之间的相互作用。由所述突变引起的这些区域之间的中断似乎会导致AKT1的组成性磷酸化以及组成性AKT1信号传导。这些作用也允许细胞转化。这些突变带来对PI3K和变构的Akt抑制剂的抗性。因此，所述突变的存在表明PI3K和变构的Akt抑制剂的有效剂量将会更高，且也表明还应当使用除了PI3K和/或者变构的Akt抑制剂之外的抑制剂，诸如ATP-竞争性Akt抑制剂。
AKT以及PH和激酶结构域的相互作用描绘于图1A和1B中。申请人还在图1C中给出了PH和激酶结构域之间的相互作用位点。
图2中显示了这样的结果，其表明被认为中断PH结构域与激酶结构域的相互作用的在位点的合成突变导致Akt的组成性磷酸化。
图3中显示了在癌症患者中发现的体细胞突变。
申请人已经发现体细胞突变导致组成性Akt磷酸化、导致组成性Akt信号传导(参见图4)。
申请人还已经证实了Akt1突变体可使细胞转化(参见图5)。
有趣的是，Akt1突变体带来对PI3K抑制剂和AKT变构抑制剂的抗性。表明何种治疗方案会对具有生物标记的患者最有益的有关所述生物标记的该发现是有益的。因此，这些突变对于癌症诊断以及确定适当的治疗性治疗而言是重要的。
此外，Akt突变还影响Akt膜定位，其具有向质膜的最少的易位。
在某些实施方案中，本发明提供了核酸分子(例如DNA或者RNA分子)，其可被分离或者纯化且编码AKT突变体，且本发明提供所述AKT突变体的氨基酸序列。在某些实施方案中，本发明提供了使用所述突变体筛选潜在的AKT抑制剂化合物的方法。
导致AKT组成性活化的突变
蛋白激酶AKT为细胞存活和增殖的关键的调节剂，其在人类癌症中高度活化。分子内血小板-白细胞C激酶底物同源性(pleckstrin homology,PH)结构域-激酶结构域(KD)相互作用在保持非活化状态的AKT中是重要的。AKT活化在将PH由激酶结构域移出的构象变化之后开始。为了理解这些自我抑制相互作用，产生了在PH-KD界面的突变，且发现其大部分导致AKT的组成性活化。所述突变可能具有另外的机制，该机制使得活化可发生在人类癌症和其它疾病。为了证实这一点，发现在PH-KD界面的AKT1体细胞突变并非先前在人类癌症中有所描述。此外，所述AKT1体细胞突变体是组成性活化的，其导致致癌信号传导。此外，AKT1突变体并非有效地被变构的AKT抑制剂所抑制，这符合对于变构的抑制的完整的PH-KD界面的需求。这些结果对于在具有PH-KD界面的AKT突变的患者中进行治疗介入而言具有重要关联。
在该研究中，进行系统分析以理解干扰PH-KD相互作用对AKT活化的作用。通过使得PH-KD界面的残基突变而中断区域间接触会导致AKT活化。由此，对大量的人类肿瘤进行序列测定以观察所述在PH-KD接触位点的突变是否在癌症中发生。有趣的是，发现在这些位点带有AKT突变(表明PH-KD相互作用的中断)的人类肿瘤对于癌症中的AKT活化而言是重要的机制。测试这些肿瘤特异性体细胞突变的活性且已经显示它们是致癌的。同样，针对这些突变体测试了AKT抑制剂，且相比于变构的AKT抑制剂而言所述ATP-竞争性抑制剂是更有效的。
干扰PH–激酶结构域接触导致AKT活化
为了评估AKT的活化状态，开展这样的测定，其测量AKT促进IL-3-依赖性BaF3细胞的生长因子非依赖性存活的能力。通过致癌基因的强制表达使得BaF3前-B-细胞为生长因子非依赖性的。产生了表达野生型AKT1(WT AKT1)、豆蔻酰化(Myr)或者E17K AKT1突变体的BaF3细胞并且发现活化的AKT本身不能促进生长因子非依赖性。然而，Myr AKT1或者致癌的E17K AKT1以及活化形式的MAP2激酶MEK1(Mek1ΔN3,S218E,S222D)的共同表达促进了BaF3的因子非依赖性生长和存活。尽管WT AKT1与活化的MEK1(MEK1N3)的组合在该测定中显示了某种活性，但是其相比于突变体AKT1而言是活性较低的。
BaF3测定用于研究中断PH-KD相互作用的结果。使用最近公开的AKT1的全长结构(Wu et al.,(2010).PLoS One5,e12913)，在PH-KD界面鉴别了残基。将这些位点的突变设计为调和PH-KD相互作用，其通过除去良好的相互作用、增加空间容积或者逆转在区域间极性接触所涉及的侧链的电荷来实现。产生了35个所述AKT1突变体库(图16；表1)。在该库中还包括AKT1E17K突变体结构(用作活性的阳性对照)以及具有沉默突变的WTAKT1克隆(用作活性的阴性对照)。三种AKT突变体库用于衍生BaF3细胞库，其稳定地共同表达所述突变体以及MEK1N3。在不存在IL-3的情况下生长后，在IL-3撤销后的3天和4天对细胞库进行取样且使用下一代序列测定来确定该库中各种突变体相对于0小时输入的比例(图16C)。基于在给定时间点所观察的频率相对于输入频率的标准化比例对每种突变进行评分，然后将这些比例标准化为对于WT AKT1的比例。如所预期的，AKT1E17K比野生型更富集50倍。类似地，突变体诸如T81Y和D323A也是高度富集的(比WT更富集>15倍)，这表明这些突变导致AKT活化。其它突变体、R23A、N53A、F55Y、L78T、Q79E、W80A、E191A、T195I、V270A、V271A、L321A、D325A和R328A在该测定中显示了适度富集(在第3天或者第4天时间点比WT更富集2-6倍)，且可能是活化的(图16D，表1)。
表1-AKT1PH-KD突变及其作用的汇总
*残基鉴别为来自AKT1的结晶结构的区域间接触(Wu et al,Plos One,2010；PDBAccession Code3O96)nd=未确定
为了进一步理解PH-KD界面突变体的作用，产生稳定表达每种AKT1突变体的NIH3T3细胞系且评估T308和S473磷酸化状态(pT308和pS473)。与存活测定筛选一致的是，N53A、F55Y、L78T、Q79E、W80A、T81Y、E191A、T195I、L321A、D323A、D325A和R328A突变体显示了对T308和S473的增强的磷酸化(图16E)。此外，尽管AKT1突变体N54A、V83D、E114A、L202F、V320A、N324K和Y326A在存活筛选中仅显示了轻微富集(比WT更富集～1.5-2倍)，但是它们显示了升高水平的pT308和pS473。这些结果表明中断PH-KD接触导致AKT的组成性磷酸化。
AKT体细胞突变在癌症中的鉴别
考虑到干扰PH-KD界面会导致AKT活化，评估了所述突变是否在人类原发性肿瘤中发生。为了鉴别潜在的AKT突变，AKT1、2和3的所有编码外显子在总计394个人类原发性肿瘤样品中进行序列测定，所述样品由65个结肠直肠癌、51个乳腺癌、48个非小细胞肺癌(NSCLC)腺癌(adeno)、43个NSCLC(鳞状)、43个肾癌、37个黑色素瘤、33个胃癌、32个卵巢癌、15个食道癌、11个肝细胞癌(HCC)、10个小细胞肺癌(SCLC)和6个其它癌(5个大细胞肺癌和1个其他肺癌)样品构成。蛋白变更的体细胞AKT1突变存在于4%的乳腺癌(2/51)和1.5%的结肠癌(1/65)中。AKT2体细胞突变存在于～5%的NSCLC(腺癌；2/43)(图17)。
除了E17K突变之外，还存在密码子52、L52R的AKT1突变。L52在PH-KD界面且使得与V270、V271、Y326和激酶结构域中R328的亚甲基部分进行疏水性接触。尽管相比于WT而言L52A突变增加了AKT1磷酸化水平，但是其并未导致在BaF3测定中的存活率的增加。然而，L52R突变可能对PH-KD相互作用是有害的(且因此促进AKT1活性)，这是因为良好的疏水性相互作用将会缺失且引入与R328的不良的相互作用。类似地，在乳腺肿瘤中鉴别的D323H突变位于AKT1激酶结构域且邻近PH结构域的三个碱性残基(K14、R23和R25)(图1B,2B)。合成的突变体D323A是组成性活化的，这表明D323H也将是组成性活化的，这是因为组氨酸相比于丙氨酸而言可更易中断区域间接触(增加的空间体积；电荷逆转的潜力)。R96残基位于主要PH结构域螺旋结构中且远离激酶结构域界面，因此不可能通过中断PH-KD相互作用来促进活化。在全长AKT1结晶结构中对于残基K189至E198并未观察到电子密度。尽管该激酶结构域环可能邻近PH结构域螺旋结构的C-末端，但是与K189N突变相关的AKT1活性变化的基于结构的评估是不可能的。
表2:人类癌症中的AKT家族蛋白变更突变
AKT1体细胞突变体组成性信号传导且导致转化
为了评估AKT1体细胞突变的功能相关性，对预测会影响PH-KD相互作用的L52R和D323H突变体进行测试。此外，对在激酶结构域中发生的K189N突变进行测试。使用稳定表达N-末端FLAG-标记的AKT1WT、豆蔻酰化AKT1(Myr AKT1)或者突变体E17K、L52R、K189N和D323H的NIH3T3细胞来测试这些突变体对信号传导的作用。免疫印迹分析显示与转导的载体或者AKT1WT细胞不同的是，所有突变体(除了K189N)显示了pT308和pS473的增加，类似于Myr AKT1。与此相一致的是，相比于表达空载体、WT AKT1或者K189N AKT1突变体的细胞而言，申请人在表达Myr或者突变体AKT1的细胞中观察到AKT底物FOXO和S6核糖体蛋白质的磷酸化的伴随性增加。有趣的是，与Myr AKT或者L52R突变体不同的是，E17K或者D323H的表达并未导致AKT底物PRAS40的增强的磷酸化，这表明这些突变体可参与不同的下游效应器途径。
AKT1PH-激酶结构域突变体弱化区域间相互作用且显示受损的质膜易位
尽管癌症特异性AKT1突变L52R和D323H在预测会中断PH-KD相互作用的位点发生，但是所观察到的氨基酸替换不同于早先产生并分析的合成的突变体。为了直接测试这些体细胞突变是否会弱化区域间相互作用，使用与VP16活化域(VP16AD)和Gal4DNA结合域(Gal4DBD)分别融合的AKTPH和KD结构来进行哺乳动物2-杂合测定。使用萤光素酶报道分子测量相互作用的强度，其中所述萤光素酶活性与相互作用的强度成正比。L52R PH结构域/WT-KD和WT-PH/D323H KD组合显示相比于WT-PH/WT-KD或者E17K-PH/WT-KD而言50%的相互作用信号传导的降低，这证实了L52R和D323H突变体在PH-KD相互作用中是缺乏的。
为了进一步理解AKT突变体的活化机制，确定了它们的细胞定位。在静息细胞中，野生型AKT1扩散式地定位于细胞质和细胞核各处且响应于促有丝分裂刺激向质膜快速易位，这导致其活化。
针对亚细胞定位和膜易位使用GFP-AKT1PH结构域融合结构测试L52R PH结构域突变体。WT和E17K AKT1PH结构域GFP融合结构作为对照。在不存在生长因子刺激的条件下，尽管WT AKT1PH结构域遍布于细胞质和细胞核中，但是E17K AKT1PH结构域组成性定位于质膜。与E17KAKT1PH结构域相反的是，L52R AKT1PH结构域遍布于细胞质和细胞核中，其行为类似于WT AKT1PH结构域。然而，在生长因子刺激后，不同于WT AKT1PH结构域，所述突变体L52R PH结构域并未易位至质膜。这表明不同于E17K突变体(其对变更的脂质亲和性以及定位响应而活化)，所述L52R突变体最可能在细胞质中活化，这是因为不存在自我抑制相互作用。
AKT2和AKT3PH-KD相互作用的中断导致它们的活化
鉴于AKT家族成员的常见的结构域体系，对中断AKT2和AKT3的PH-KD相互作用是否会导致它们的活化进行了测试。针对测试，产生了AKT2突变体L52R和D324H以及AKT3突变体L51R和D320H(相当于AKT1L52R和D323H)，其均被预测为中断PH-KD相互作用。由于AKT3E17K突变可出现在黑色素瘤中，且已经报道了人类低血糖病中的AKT2E17K突变，所以产生了E17K AKT2和AKT3突变体以及已经在人类癌症中鉴别的另外的AKT2和AKT3体细胞突变。此外，产生Myr AKT2和Myr AKT3作为阳性对照。AKT2和AKT3突变体稳定表达在NIH3T3细胞中且评估了T308和S473的磷酸化状态。相比于表达WT AKT2或者AKT3的细胞，AKT2E17K、L52R和D324H以及AKT3E17K、L51R和D320H均显示了升高的pT308和pS473。与所述活化状态相一致的是，这些AKT2和AKT3突变体能够支持BaF3细胞与活化的MEK1的组合的生长因子非依赖性存活。有趣的是，在人类癌症中鉴别的AKT2突变体R371H也显示了升高的pT308和pS473，但其不能够促进BaF3的生长因子非依赖性存活。剩余的突变体(AKT2V90L和R101L以及AKT3Q124L和G171R)不能显示pT308和pS473的增加且不能够支持BaF3的生长因子非依赖性存活。对针对全长AKT2和AKT3产生的同源性模型的考察表明了这些突变均发生于外露表面环中且不邻近所述PH-KD界面。注意到即使AKT2V90L和AKT3Q124L出现在未以AKT1电子密度限定的环中，这些环的末端也不邻近所述PH-KD界面。因此，结构分析不能提供任何有关AKT2R371H如何能够提升磷酸化或者任何这些突变体如何能够成为针对癌症(在该癌症中鉴别了这些突变体)的驱动力的见解。
AKT1体细胞突变体促进体内肿瘤生成
先前的研究已经显示当植入小鼠时，BaF3细胞稳定表达的致癌基因促进了白血病样疾病，这导致了总体存活率的降低。由于AKT1突变体与活化的MEK1共同作用以促进BaF3细胞的因子非依赖性生长，所以该模型系统用于测试它们的体内致癌潜能。植入共同表达MEK1N3和Myr AKT1或者突变体AKT1E17K、L52R或者D323H的BaF3细胞的小鼠显示出19至20.5天的存活中值。相反地，接受共同表达MEK1N3和AKT1WT的BaF3细胞的小鼠具有显著较长的29天的存活中值。这与以下事实相一致：在活化的MEK1背景下的AKT1WT能够支持BaF3细胞的因子非依赖性存活，尽管该作用相比于AKT突变体而言是适度的。如所预期的那样，接受只表达MEK1N3的对照BaF3细胞的小鼠在55天研究周期结束时存活。尸体剖检在移植术后19天以每个治疗组3只小鼠的组进行来跟踪疾病进展。与降低的总体存活率相一致的是，相比于接受WT AKT1或者载体对照细胞的小鼠而言，在接受突变体AKT1的小鼠的骨髓和脾中发现较大比例的GFP标记的BaF3细胞。在表达突变体AKT1的小鼠中发现肝和脾的显著增大。苏木精和伊红(H&E)染色的肝、脾和骨髓切片的组织学检查显示以下事实：相比于接受载体对照或者WT AKT1细胞而言，在接受突变体AKT1的小鼠中的白血病胚细胞的浸润转导细胞。这些结构证实了体内AKT1突变体的转化潜能。
AKT1PH-KD相互作用缺陷的突变体对变构抑制剂的敏感性较弱
若干AKT的ATP-竞争性且变构的小分子抑制剂处于开发过程中和/或者进行临床试验(Mattmann et al.,(2011).Expert Opin Ther Pat.；Pal et al.,(2010).ExpertOpin Investig Drugs19,1355-1366)。先前的研究已经显示AKT的变构抑制剂针对它们的活性需要完整PH-KD界面的存在。鉴于某些AKT1体细胞突变体具有受损的PH-KD接触，预测出变构抑制剂可能在抑制这些突变体的活性方面效果较弱。两种ATP-竞争性抑制剂(GNE-692Bencsik et al.(2010).Bioorg Med Chem Lett20,7037-7041)和GSK690693(Rhodeset al.(2008).Cancer Res68,2366-2374)以及两种变构抑制剂(抑制剂VIII(Lindsley etal.,(2005).Bioorg Med Chem Lett15,761-764)和GNE-929的活性在重组的全长WT和突变体AKT1酶上进行了测试。也测试了所述抑制剂对表达WT或者AKT1突变体的NIH3T3细胞的增殖的作用。
在生物化学活性测定中，所述ATP-竞争性抑制剂GNE-692和GSK690693在阻断WTAKT1酶(GNE-692IC5024.3nM)以及突变体酶(E17K,L52R和D323H；GNE-692IC503.7-15.8nM)的活性方面是有效的。类似地，所述ATP-竞争性抑制剂在基于细胞的增殖测定中对抗WT和突变体AKT1方面是同等有效的。相反地，相比于WT AKT1(抑制剂VIII:IC50119.3nM；图6C)而言，所述变构抑制剂即抑制剂VIII和GNE-929对抗重组全长突变体酶(抑制剂VIII:IC50268.4nM，对于L52R；IC50>1μM，对于D323H)的效果较弱。与此相一致的是，在基于细胞的测定中，发现所述变构抑制剂即抑制剂VIII在阻断表达突变体AKT1的细胞增殖方面的效果至少50%低于WTAKT的效果。
为了证实突变体对变构抑制剂的降低的敏感性是由于受损的PH-KD相互作用，使用纯化的重组PH和激酶结构域进行体外生物化学重构测定。在该系统中，当仅针对AKT1激酶结构域测定时，变构抑制剂VIII不能阻断其活性。然而，当将纯化的WT PH结构域加入至激酶结构域且将酶重构时，抑制剂VIII能够阻断所述酶的活性，尽管相比于全长WT酶(IC5080.8nM)而言，针对重构酶的IC50有三倍增加(IC50238.8nM)。相反地，使用突变体PH结构域(L52R或者E17K)的重构进一步损伤抑制剂VIII阻断AKT1(L52RIC50713.5nM且E17KIC50>1μM)的能力。类似地，当WT PH结构域用突变体D323H激酶结构域重构时，抑制剂VIII显示无活性。经变构抑制剂的E17K抑制的缺失表明除了增加针对PIP2的亲和性之外，该突变还可影响PH-KD相互作用，这导致其活化。在基于细胞的2-杂合测定中，E17K突变体并未显示出PH-KD相互作用的缺陷，这表明E17K活化的确切机制需要进一步研究。这些数据证实完整的PH-KD界面对于AKT1变构抑制剂的重要性。
替代PD生物标记测定
在富含血小板血浆(PRP)中的磷酸-GSK-3b用作替代PD生物标记以测量在历时22天在不同时间点用GDC-0068治疗后的患者中Akt途径抑制。在含有38%枸橼酸作为抗凝血剂的Vacutainer中收集外周血。将血液在室温以200g旋转15分钟。将PRP层小心地由管中取出，然后在含有去污剂、蛋白酶和磷酸酶抑制剂的缓冲剂中裂解。在PRP裂解物中的磷酸化和总体GSK-3β水平使用磷酸-GSK3β/总体-GSK3β多途径MSD测定进行测量。pGSk-3β水平标准化为总体GSk-3β水平且pGSk-3β的给药后抑制表示为对于每个患者的给药前剂量的比例。证实了剂量-和时间-依赖性药理学响应，其中在≥200mg的剂量pGSK3β水平降低了≥75%。
反相蛋白阵列
将来自用GDCC0068治疗的患者的芯针肿瘤活组织检查样品在OCT中快速冷冻，且切为8um切片。将组织在含有TPER、300mM NaCl和磷酸酶抑制剂的RPPA裂解缓冲剂中裂解。该裂解物的磷蛋白特征使用反相蛋白阵列进行分析：将样品涂于硝酸纤维素切片上且用Sypro染色以确定总体蛋白浓度。将每个切皮用不同抗体在4℃染色过夜。然后将数据标准化为总体蛋白水平且使用Quadrant中值标准化除去空间效应。在每天400mg治疗的所有三名患者中出现60%–70%的pPRAS40降低以及～50%Cyclin D1降低(相比于基线)。对于RPPA的方法和综述，参见：Reverse phase protein microarrays advance to use in clinicaltrials,Molecular Oncology.2010Dec;4(6):461-81,Mueller C et al.。在某些实施方案中，本申请治疗的癌症包括AKT、PI3k、PTEN和HER2突变或者AKT、PI3k、PTEN或者HER2异常信号传导中的一个或者多个。在一个实例中，所述癌症为胃癌，其包括高pAKT活性以及PTEN低的或者无的状态。
在一个具体方面，本发明提供了用于治疗具有与PTEN突变或者表达缺失、AKT突变或者扩增、PI3K突变或者扩增或者Her2/ErbB2扩增相关的癌症的患者的方法，包括向所述患者给予本发明的组合。在另外的方面，本发明提供了用于鉴别具有可用本发明的组合治疗的癌症的患者的方法，包括确定所述患者的癌症是否与PTEN突变或者表达缺失、AKT突变或者扩增、PI3K突变或者扩增或者Her2/ErbB2扩增相关，其中所述患者的癌症与PTEN突变或者或者表达缺失、AKT突变或者扩增、PI3K突变或者扩增或者Her2/ErbB2扩增的相关性是可用本发明的组合治疗的癌症的标志。在另外的方面，本发明提供了进一步包括用本发明的组合治疗已鉴别的患者的方法。
在另外的实例中，待治疗的癌症与PTEN阳性、低的或者无的状态以及HER2阳性或者阴性状态的组合相关。实例包括胃癌，其为(i)PTEN阴性(HScore小于约10或者0)以及Her2阴性，(ii)PTEN低的(HScore小于约200)以及Her2阴性，(iii)PTEN阴性以及Her2阳性，或者(iv)PTEN阳性以及Her2阴性。在该实例中，所述癌症可用式I化合物例如GDC-0068或者其盐与FOLFOX的组合治疗。
本申请引用的所有文献通过引用的方式并入本申请。尽管针对示例说明的目的描述了本发明的某些实施方案且已经阐述了许多详细内容，但是可对某些详细内容进行改变而不偏离本发明的基本原则。
在描述本发明实施方案的背景下使用的术语“一个”、“一种”和“所述”以及类似术语应该理解为涵盖单数和复数形式，除非在本申请另作说明或者与上下文明显矛盾。术语“包含”、“具有”、“包括”和“含有”应该理解为开放式术语(即表示“包括但不限于”)，除非另作说明。本申请数值范围的描述仅意在作为对落入上述范围的每个独立数值单独描述的简略方法，除非在本申请中另作说明，每个独立数值被引入本说明书就如同其在本申请中被单独引用一样。除了本申请详述的顺序之外，本申请中描述的所有方法均可以按照适当的任意顺序完成，除非在本申请中另作说明或者与上下文明显矛盾。任何以及所有实施例的使用或者本申请所提供的示例性语言(例如“诸如”)仅仅是为了更好地阐述本发明的实施方案，而并非是对本发明范围构成限制，除非在权利要求中另作具体说明。说明书中的措辞不应该理解为表明任何未要求保护的要素对本发明的实施是必要的。

Claims (25)

1.预测肿瘤细胞生长对AKT抑制剂的敏感性的方法，包括确定AKT突变的存在，其中所述AKT突变的存在与所述细胞对AKT抑制剂的敏感性相关联，其中所述AKT抑制剂为(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮或者其药用盐，且其中所述突变对应于L52、K189或者D323或者与L52、K189或者D323对齐。
2.权利要求1的方法，其中所述细胞显示出对AKT抑制剂的增加的敏感性。
3.权利要求2的方法，其中所述AKT为AKT1、AKT2或者AKT3。
4.权利要求3的方法，其中所述AKT为AKT1。
5.权利要求1的方法，其中所述AKT突变中断了AKT的PH-结构域和激酶结构域之间的相互作用。
6.权利要求3的方法，其中所述AKT突变中断了AKT的PH-结构域和激酶结构域之间的相互作用。
7.权利要求5的方法，其中所述AKT突变增加了AKT的磷酸化。
8.权利要求7的方法，其中磷酸化的增加是由于组成性磷酸化。
9.权利要求6的方法，其中所述AKT突变增加了AKT的磷酸化。
10.权利要求9的方法，其中磷酸化的增加是由于组成性磷酸化。
11.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述方法进一步包括确定所述细胞的PTEN状态，其中PTEN损失与对所述抑制剂的增加的敏感性相关联。
12.权利要求11的方法，其中所述肿瘤细胞为卵巢癌或者前列腺癌肿瘤细胞。
13.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述方法进一步包括确定所述细胞的PI3K突变的存在，其中所述PI3K突变的存在与对经所述抑制剂产生的抑制的增加的敏感性相关联。
14.权利要求13的方法，其中所述PI3K突变为H1047R和H1047L中的一种或者两种。
15.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述方法进一步包括确定所述细胞的pAKT分布，其中pAKT的高活性分布与对经所述抑制剂产生的抑制的增加的敏感性相关联。
16.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述方法进一步包括确定所述细胞的pAKT分布，其中pAKT的低活性分布与对经所述抑制剂产生的抑制的降低的敏感性相关联。
17.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述方法进一步包括确定所述细胞的Her2和/或者Her3状态，其中所述细胞的Her2+和/或者Her3+状态与对经所述抑制剂产生的抑制的增加的敏感性相关联。
18.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述方法进一步包括确定所述细胞的Met激酶突变的存在，其中Met激酶突变的存在与所述细胞对AKT抑制剂的敏感性相关联。
19.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述方法进一步包括确定所述细胞的B-Raf或者K-Ras突变的存在，其中B-Raf或者K-Ras突变的存在与所述细胞对AKT抑制剂的敏感性降低相关联。
20.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述方法进一步包括确定FOXO3a在所述细胞的定位分布，其中FOXO3a的细胞质定位分布与所述细胞对经Akt抑制剂产生的抑制的敏感性相关联。
21.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述肿瘤细胞为前列腺癌细胞、卵巢癌细胞、乳腺癌细胞、胃癌细胞或者胰腺癌细胞。
22.权利要求21的方法，其中所述肿瘤细胞为内分泌耐药性乳腺癌细胞。
23.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述方法进一步包括确定所述细胞的INPP4B、PHLPP和/或者PP2A状态，其中INPP4B、PHLPP和/或者PP2A损失与对抑制剂的增加的敏感性相关联。
24.权利要求1-10中任一项的方法，进一步包括确定AKT突变在来自患者的生理学样品中的存在。
25.(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮或者其盐在制备用于治疗癌细胞的药物中的用途，所述癌细胞具有对应于L52、K189或者D323或者与L52、K189或者D323对齐的突变。
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