BR112013025356B1 - Método in vitro de predição da sensibilidade do crescimento de uma célula tumoral para um inibidor de akt1 - Google Patents

Método in vitro de predição da sensibilidade do crescimento de uma célula tumoral para um inibidor de akt1 Download PDF

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Abstract

MÉTODO DE PREDIÇÃO DA SENSIBILIDADE DO CRESCIMENTO DE UMA CÉLULA TUMORAL PARA UM INIBIDOR DE AKT, MÉTODO DE TRATAMENTO DE UMA CÉLULA CANCERÍGENA E USO DE GDC-0 068 Trata-se de biomarcadores e combinações de biomarcadores para predição de sensibilidade a tratamentos contra câncer.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDO(S) RELACIONADO(S)
[001] Este pedido de patente reivindica o benefício de prioridade do pedido número de série U.S. 61/471.036, depositado no dia 01 de abril de 2011.
ANTECEDENTES
[002] O câncer pode surgir quando células têm mutações que conferem, em última análise, uma vantagem de crescimento às células. As mutações somáticas incluem, por exemplo, substituições, deleções, inserções, amplificações e redisposições de base de nucleotídeo. A identificação de mutações somáticas que ocorrem no câncer fornece informações valiosas referentes ao desenvolvimento de câncer. Tais informações também são úteis para a identificação de marcadores de diagnóstico e alvos terapêuticos no câncer. (consulte, por exemplo, Bamford et al. (2004) British Journal of Cancer 91:355 a 358.) A identificação de mutações somáticas associadas a câncer se provou valiosa em situações clínicas, por exemplo, em populações de pacientes distintas que seriam responsivas a uma terapia particular. (consulte, por exemplo, Lynch et al. (2004) N. Engl. J. Med. 350:2.129 a 2.139; O’Hare (2004) Blood 104:2.532 a 2.539.) Portanto, uma necessidade constante de identificar mutações somáticas que ocorrem no câncer.
[003] Variações de linhagem germinativa, ou polimorfismos, são variações herdáveis que estão presentes no genoma de um organismo. Os polimorfismos incluem polimorfismos de comprimento de fragmento de restrição (RFLPs), repetições curtas consecutivas (STRs) e polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs). As variações de linhagem germinativa também podem ser associadas à susceptibilidade a determinadas doenças, incluindo câncer.(consulte, por exemplo, Vierimaa et al. (2006) Science 312:1.228 a 1.230; Landi et al. (2006) Science 313:521 a 522; Zhu et al. (2004) Cancer Research 64:2.251 a 2.257.) Então, existe uma necessidade constante de identificar polimorfismos associados a câncer.
DESCRIÇÃO RESUMIDA DE DETERMINADAS REALIZAÇÕES DA INVENÇÃO
[004] As invenções descritas aqui satisfazem as necessidades descritas acima e fornecem outros benefícios.
[005] As requerentes descobriram que biomarcadores podem predizer a eficácia de inibidores de AKT no tratamento de distúrbios hiperproliferativos, tal como câncer.
[006] As requerentes constataram que determinadas mutações em AKT podem levar a interações interrompidas entre o domínio de PH de AKT e o domínio de quinase. Uma interrupção entre esses domínios, causada pela(s) mutação(ões), parece levar a fosforilação constitutiva de AKT e a sinalização de AKT constitutiva. Esses efeitos também permitem a transformação de células. Essas mutações conferem resistência a inibidores de Akt alostéricos e de PI3K. Em conformidade, a presença de tais mutações indica que a dosagem eficaz para inibidores de Akt alostéricos e de PI3K será superior, e também indica que inibidores diferentes dos inibidores de Akt alostéricos e/ou de PI3K devem ser usados, tais como inibidores de Akt de competitivo de ATP. O uso desse biomarcador, individualmente ou em combinação com outros biomarcadores descritos no presente documento, é útil para predizer a sensibilidade do crescimento de uma célula tumoral para um inibidor de AKT, administrado individualmente, ou em combinação com outro composto terapêutico, tais como 5-FU, um agente de platina (carboplatina, cisplatina, oxaliplatina, etc.) irinotecana, docetaxel, doxorrubicina, gencitabina, SN-38, capecitabina, temozolomida, erlotinibe, PD-0325901, paclitaxel, bevacizumabe, pertuzumabe, tamoxifeno, rapamicina, lapatinibe, PLX-4032, MDV3100, abiraterona e GDC-0973 e outros inibidores de MEK.
DESCRIÇÃO RESUMIDA DAS FIGURAS
[007] A Figura 1 retrata AKT e as interações do domínio de quinase e de PH (1A e 1B) e também retrata as localizações de interações entre aqueles domínios (1C).
[008] A Figura 2 retrata os resultados que indicam que as mutações sintéticas em sítios consideradas por interromper as interações de domínio de PH com o domínio de quinase levam à fosforilação constitutiva de Akt.
[009] A Figura 3 retrata mutações somáticas.
[010] A Figura 4 retrata os resultados que indicam que mutações somáticas, que levam a fosforilação de Akt constitutivo, levam a sinalização de Akt constitutivo.
[011] A Figura 5 retrata os resultados que indicam que mutantes de Akt1 podem transformar as células.
[012] A Figura 6 retrata os resultados que indicam que mutantes de Akt1 conferem resistência a inibidores de PI3K e a inibidores alostéricos de AKT.
[013] A Figura 7 retrata alterações em pPRAS40 T246 em tumores de pacientes tratados com GDC-0068.
[014] A Figura 8 retrata tumores com uma via de PI3K/AKT ativada.
[015] A Figura 9 retrata os resultados que indicam que um perfil de atividade de AKT elevada prediz a sensibilidade para GDC-0068.
[016] A Figura 10 retrata os resultados que demonstram uma correlação forte com perda de PTEN e sensibilidade para GDC-0068 em linhas de célula ovariana e prostática. Os resultados são de uma resposta de dose de composto único normalizada em GDC-0068.
[017] A Figura 11 retrata os resultados que demonstram que a perda de PTEN e mutações de PIK3CA estão fortemente correlacionadas com sensibilidade in vitro de agente único de GDC-0068.
[018] As Figuras 12A e 12B retratam os resultados de atividade de agente único de GDC-0068 em modelos de xenoenxerto (12A) e dados de triagem de linhagem celular in vitro (12B) que indicam que a porcentagem mais alta de inibição de crescimento de tumor também tem evidência de ativação de via através de perda de PTEN ou mutação de PI3K. A eficácia robusta é observada em modelos com ativação de via de AKT (e sem Ativação de Via de MEK).
[019] A Figura 13 retrata os resultados que indicam uma correlação negativa entre sensibilidade de agente único de inibidor de MEK e de GDC-0068 de uma variedade de linhas de célula.
[020] A Figura 14 retrata os resultados que demonstram uma sinergia forte em linhas de célula com ativação de via de AKT (perda de PTEN, mutações de PI3K). A análise de BLISS indica sinergia ampla para GDC-0068 em combinação com um inibidor de MEK (GDC-0973).
[021] A Figura 15 retrata os resultados que os efeitos de combinação de GDC-0068 com Cisplatina +5FU estão associados com a ativação de via de AKT. As triagens de combinação com 5FU/Cisplatina (FOLFOX) mostram a evidência de efeitos aditivos. Os efeitos aditivos estão associados com a ativação de via: mutação de PI3K, pAKT, PTEN.
[022] Figura 16. As mutações de sítio de contato de domínio de PH-quinase levam a ativação de AKT. (A) A proliferação independente de IL-3 de células de BaF3 que expressam de modo estável o vetor vazio (EV), o tipo selvagem (WT), miristoilado (Myr) ou E17K AKT1 individualmente ou em combinação com MEK1 N3. (B) Uma representação de “livro aberto” de PH e KD de AKT1 em complexo com um inibidor alostérico (Código de Acesso de PDB 3O96). (C) A representação esquemática da triagem usada para avaliar o efeito de mutações de interface de AKT1 PH-KD. (D) As mutações de interface de PH- KD promovem a proliferação independente de IL-3 de células de BaF3. (E) A análise de imunoblot de células de NIH3T3 que expressam de modo estável o vetor vazio e os construtos de AKT1 indicados.
[023] Figura 17. As mutações de AKT somáticas em câncer humano. As mutações somáticas em membros de família de AKT. As barras pretas horizontais indicam resíduos conservados através de AKT 1, 2 e 3.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[024] Os estudos estruturais recentes indicam que interações interdomínio inibidoras exercem um papel fundamental na regulação de ativação de AKT. Com o uso de uma triagem de mutação, é mostrado aqui que a ativação de AKT pode resultar a partir de mutações em resíduos envolvidos em contatos de domínio de PH-quinase. Ademais, a identificação de mutações inovadoras em cânceres humanos é relatada, alguns dos quais envolvem resíduos na interface de PH-KD.
[025] Além da mutação E17K anteriormente identificada, o mutante de domínio de AKT1 PH L52R e o mutante de domínio de quinase D323H identificados em amostras clínicas mediam transformação celular e são oncogênicos in vivo. A inspeção da estrutura de AKT1 integral revela que E17, L52 e D323 residem na interface de PH-KD e substituições dessas posições são previstas a perturbar a ligação de PH-KD. Consistente com isso, tanto L52R quanto D323H enfraquecem a ligação de PH-KD em ensaios de duplo híbrido. Anteriormente, o mecanismo de ativação de E17K foi atribuído a uma especificidade de ligação de lipídio alterada. Esses resultados indicam uma perturbação de interações interdomínio como sendo um mecanismo adicional subjacente à ativação de E17K. Em conjunto, essas descobertas sugerem que a oncogenicidade das mutações de interface de AKT1 PH-KD identificadas aqui se originam a partir da desestabilização de contatos de interdomínio.
[026] Os inibidores que têm como alvo os membros de via de PI3K-AKT que incluem AKT estão atualmente em vários estágios de desenvolvimento. Os estudos anteriores mostraram que os inibidores alostéricos de AKT exigem uma interface de PH-KD intacta à medida que tais inibidores preferencialmente ligam a conformação de “PH interno” fechada. Consistente com isso, as mutações em AKT que favorecem uma conformação (“PH externo”) aberta mostram sensibilidade reduzida aos inibidores de AKT alostéricos, embora os mesmos retenham sensibilidade a inibidores competitivos de ATP. Isso indica que a situação de mutação de AKT tem implicações importantes para a escolha de inibidor na clínica. As mutações de AKT, embora possam funcionar como drivers em tumores ingênuos, também podem surgir em tumores em resposta a agentes que têm como alvo os componentes a montante da via de AKT.
[027] Em determinadas realizações, a presença de mutações de K-Ras ou B-Raf são preditores negativos (isto é, contraindicados) e aqueles pacientes devem ser selecionados a partir do grupo de tratamento para receber os inibidores de AKT, tal como GDC-0068.
[028] GDC-0068, e inibidores competitivos de ATP similares, visam preferencialmente Akt ativa e travam a Akt em uma situação hiperfosforilado porém inativo bloqueando-se a defosforilação. Um aumento em pAkt pode ser usado como um biomarcador farmacodinâmico (“biomarcadores PD”) para os efeitos de GDC-0068 e inibidores competitivos de ATP similares.
[029] Em determinadas realizações da invenção, pGSK-3β ou PRAS40 podem ser usados como biomarcadores farmacodinâmicos para inibidores de AKT, tal como GDC-0068. Ademais, em determinadas realizações, a dosagem apropriada de um composto, tal como GDC-0068, pode ser determinada, e ajustada com base na inibição de uma via de AKT, com o uso de biomarcadores PD, por exemplo, pGSK-3β ou PRAS40 (consulte a Figura 7).
[030] É proposto também que GDC-0068 e inibidores competitivos de ATP similares são mais ativos contra a Akt hiperativado.
[031] Alvejar preferencialmente o Akt ativo pode atuar juntamente com a adição de oncogene para aumentar o índice terapêutico de GDC-0068 e inibidores competitivos de ATP similares para tumores, com níveis de situação estacionária altos de Akt ativa, incluindo aqueles causados por mutações de Akt, perda de PTEN (hemizigótico ou homozigótico), perda de função de INPP4B, perda de função de PHLPP, perda de função de PP2A, mutações de PI3K e amplificação de Her2 e/ou Her3.
[032] A eficácia de GDC-0068 é predita em tumores que são nulos em PTEN ou têm mutações de PI3k, por exemplo, em câncer de próstata, de mama e de ovário.
[033] A perda de PTEN é um biomarcador que prediz a sinergia com inibidores de MEK, por exemplo, em câncer pancreático.
[034] Em conformidade, a atividade de GDC-0068 é associada, por exemplo, associada de modo seletivo, com a ativação de via de AKT. A evidência para esse relacionamento foi demonstrada em linhas de célula e estudos de xenoenxerto.
[035] A perda de PTEN, mutações de domínio de quinase de PI3K e níveis de pAKT altos são marcadores importantes que predizem a atividade de um composto, por exemplo, como um agente único; com efeitos aditivos com combinações de compostos quimioterápicos, e com efeitos sinérgicos, por exemplo, com inibidores de MEK. Curiosamente, a sinergia com um inibidor de MEK é observada com ativação de via de MEK. Em contrapartida, a ativação de via de MEK (por exemplo, KRAS/BRAF) são marcadores de resistência para atividade de agente único (por exemplo, GDC-0068). Outros preditores potenciais da atividade de um composto, por exemplo, a atividade de GDC-0068, incluem ativação de via conduzida por RTK (HER2 em câncer de mama, HER2 e Met em câncer gástrico), mutações de AKT1 E17K, amplificações de AKT2, superexpressão de AKT3 e amplificações de PI3K.TABELA A ESTIMATIVAS ATUAIS DE PREVALÊNCIA DE BIOMARCADORES PARA CÂNCER GÁSTRICO, DE PRÓSTATA E PANCREÁTICO, COM BASE NOS RELATÓRIOS DA LITERATURA
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[036] Para propósitos de interpretação desse relatório descritivo, as definições a seguir se aplicarão e sempre que apropriado, os termos usados no singular incluirão também o plural e vice versa. No caso em que qualquer definição estabelecida abaixo entre em conflito com qualquer documento , a definição estabelecida abaixo deve controlar.
[037] O termo “polinucleotídeo” ou “ácido nucleico”, conforme usados de modo intercambiável no presente documento, referem-se a polímeros de nucleotídeos de qualquer comprimento, e incluem DNA e RNA. Os nucleotídeos podem ser desoxirribonucleótidos, ribonucleótidos, bases ou nucleotídeos modificados, e/ou os análogos dos mesmos, ou qualquer substrato que pode ser incorporado em um polímero por DNA ou RNA polimerase. Um polinucleotídeo pode compreender nucleotídeos modificados, tais como nucleotídeos desnaturados e os análogos dos mesmos. Se estiver presente, a modificação à estrutura de nucleotídeo pode ser transmitida antes ou após a montagem do polímero. A sequência de nucleotídeos pode ser interrompida por componentes não nucleotídeos. Um polinucleotídeo pode ser modificado adicionalmente após a polimerização, tal como através de conjugação com um componente de rotulagem. Outros tipos de modificações incluem, por exemplo, "tampões", a substituição de um ou mais dentre os nucleotídeos que ocorrem naturalmente com um análogo, as modificações internucleotídeo tais como, por exemplo, aquelas com ligações não carregadas (por exemplo, metil fosfonatos, fosfotriésteres, fosfoamidatos, cabamatos, etc.) e com ligações carregadas (por exemplo, fosforotioatos, fosforoditioatos, etc.), aquelas que contêm porções pendentes, tais como, por exemplo, proteínas (por exemplo, nucleases, toxinas, anticorpos, peptídeos sinal, poli-L-lisina, etc.), aquelas com intercaladores (por exemplo, acridina, psoraleno, etc.), aquelas que contêm agentes quelantes (por exemplo, metais, metais radioativos, boro, metais oxidativos, etc.), aquelas que contêm agentes alquilantes, aquelas com ligações modificadas (por exemplo, ácidos nucleicos anoméricos alfa, etc.), assim como formas não modificadas do(s) polinucleotídeo(s). Ademais, qualquer um dos grupos hidroxila presentes comumente nos açúcares pode ser substituído, por exemplo, por grupos fosfonato, grupos fosfato, protegidos por grupos de proteção padrão, ou ativados para preparar ligações adicionais para nucleotídeos adicionais, ou podem ser conjugados a suportes sólidos. O terminal OH de 5' e 3' pode ser fosforilado ou substituído por aminas ou porções de grupo de cobertura orgânicas de 1 a 20 átomos de carbono. Outras hidroxilas também podem ser derivadas para grupos de proteção padrão. Os polinucleotídeos também podem conter formas análogas de açúcares de ribose ou desoxirribose que são geralmente conhecidos na técnica, incluindo, por exemplo, 2'-O-metil-2'-O- alil, 2'-fluoro- ou 2'-azido-ribose, análogos de açúcar carbocíclicio, açúcares α- anoméricos, açúcares epiméricos tais como arabinose, xiloses ou lixoses, açúcares de piranose, açúcares de furanose, sedo-heptulose, análogos acíclicos e análogos de nucleosídeo abásico tal como metil ribosídeo. Uma ou mais ligações de fosfodiéster podem ser substituídas por grupos de ligação alternativos. Esses grupos de ligação alternativos incluem, mas sem limitação, as realizações em que o fosfato é substituído por P(O)S("tioato"), P(S)S ("ditioato"), "(O)NR 2 ("amidato"), P(O)R, P(O)OR', CO ou CH 2 ("formacetal"), em que cada R ou R' é independentemente H ou alquila substituída ou não substituída (1-20 C) opcionalmente contendo um ligação de éter (--O--), arila, alquenila, cicloalquila, cicloalquenila ou araldila. Nem todas as ligações em um polinucleotídeo precisam ser idênticas. A descrição anterior se aplica a todos os polinucleotídeos referidos no presente documento, incluindo RNA e DNA.
[038] O "oligonucleotídeo”, conforme usado no presente documento, refere-se a polinucleotídeos de fita única, curtos que são pelo menos aproximadamente sete nucleotídeos em comprimento e menos que aproximadamente 250 nucleotídeos em comprimento. Os oligonucleotídeos podem ser sintéticos. Os termos "oligonucleotídeo" e "polinucleotídeo" não são mutuamente exclusivos. A descrição acima para os polinucleotídeos é igual e completamente aplicável para oligonucleotídeos.
[039] O termo “iniciador” refere-se a um polinucleotídeo de fita única que tem capacidade para hibridizar a um ácido nucleico e permitir a polimerização de um ácido nucleico complementar, geralmente fornecendo-se um grupo 3’-OH livre.
[040] O termo “variação de nucleotídeo” refere-se a uma alteração em uma sequência de nucleotídeo (por exemplo, uma inserção, deleção, inversão, ou substituição de um ou mais nucleotídeos, tal como um polimorfismo de nucleotídeo único (SNP)) em relação a uma sequência de referência (por exemplo, uma sequência de tipo selvagem). O termo também engloba a alteração correspondente no complemento da sequência de nucleotídeo, a menos que indicado de outro modo. Uma variação de nucleotídeo pode ser uma mutação somática ou um polimorfismo de linhagem germinativa.
[041] O termo “variação de aminoácido” refere-se a uma alteração em uma sequência de aminoácido (por exemplo, uma inserção, substituição, ou deleção de um ou mais aminoácidos, tal como uma deleção interna ou um truncamento de terminal N- ou C) em relação a uma sequência de referência (por exemplo, uma sequência de tipo selvagem).
[042] O termo "detecção" inclui qualquer meio de detecção, incluindo detecção direta e indireta.
[043] O termo "diagnóstico" é usado no presente documento para referir-se à identificação ou classificação de uma condição, uma doença ou uma situação patológica ou molecular. Por exemplo, “diagnóstico” pode referir-se à identificação de um tipo particular de câncer, por exemplo, um câncer de pulmão. “Diagnóstico” também pode referir-se à classificação de um tipo particular de câncer, por exemplo, através de histologia (por exemplo, um carcinoma de pulmão de células não pequenas), através de recursos moleculares (por exemplo, um câncer de pulmão caracterizado por variação(ões) de aminoácido e/ou nucleotídeo em uma proteína ou gene particular), ou ambos.
[044] O termo "prognóstico" é usado no presente documento para referir-se à predição da probabilidade de progressão ou morte atribuível ao câncer, incluindo, por exemplo, recorrência, propagação metastática, e resistência ao fármaco, de uma doença neoplástica, tal como câncer.
[045] O termo "predição" ou (e variações tal como a predição) é usado no presente documento para referir-se à probabilidade que um paciente responderá de modo favorável ou desfavorável a um fármaco ou um conjunto de fármacos. Em uma realização, a predição refere-se à extensão dessas respostas. Em outra realização, a predição refere-se a se e/ou a probabilidade que um paciente sobreviverá seguindo o tratamento, por exemplo, o tratamento com um agente terapêutico particular e/ou remoção cirúrgica do tumor primário, e/ou quimioterapia por um determinado período de tempo sem recorrência de câncer. Os métodos preditivos da invenção podem ser usados clinicamente para tomar decisões de tratamento escolhendo-se as modalidades de tratamento mais apropriadas para qualquer paciente particular. Os métodos preditivos da presente invenção são ferramentas valiosas na predição se um paciente tem maior probabilidade de responder de modo favorável a um regime de tratamento, tal como um dado regime terapêutico, incluindo, por exemplo, administração de um dado agente terapêutico ou combinação, intervenção cirúrgica, quimioterapia, etc., ou se a sobrevivência a longo prazo do paciente, seguindo um regime terapêutico é provável.
[046] Os termos “distúrbio proliferativo de célula” e “distúrbio proliferativo” referem-se a distúrbios que estão associados com um grau mensurável de proliferação de célula anormal. Em uma realização, o distúrbio proliferativo de célula é câncer.
[047] “Tumor”, conforme usado no presente documento, refere-se a toda proliferação e crescimento de célula neoplástica, maligna ou benigna, e todos os tecidos e células cancerígenas e pré-cancerígenas. Os termos “câncer”, “cancerígeno”, “distúrbio proliferativo de célula”, “distúrbio proliferativo” e “tumor” não são mutuamente exclusivos conforme referido no presente documento.
[048] Os termos "câncer" e "cancerígeno" referem-se a ou descrevem a condição fisiológica em mamíferos que são caracterizados tipicamente por proliferação e crescimento de célula não regulados. Os exemplos de câncer incluem, mas sem limitação, carcinoma, linfoma (por exemplo, linfoma de Hodgkin e não Hodgkin), blastoma, sarcoma, e leucemia. Os exemplos mais particulares de cânceres incluem câncer de célula escamosa, câncer de pulmão de célula pequena, câncer de pulmão de célula não pequena, adenocarcinoma do pulmão, carcinoma escamoso do pulmão, câncer do peritônio, câncer hapatocelular, carcinoma de célula renal, câncer gastrointestinal, câncer gástrico, câncer de esôfago, câncer pancreático, glioma, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de fígado, câncer de bexiga, hepatoma, câncer de mama (por exemplo, câncer de mama de resistência endócrina), câncer de cólon, câncer retal, câncer de pulmão, carcinoma uterino ou de endométrio, carcinoma de glândula salivar, câncer renal, câncer no fígado, câncer de próstata, câncer de vulva, câncer de tiroide, carcinoma hepático, melanoma, leucemia e outros distúrbios linfoproliferativos, e vários tipos de câncer de cabeça e pescoço.
[049] O termo “tumor pulmonar” refere-se a qualquer tumor do pulmão, incluindo, mas sem limitação, carcinoma de pulmão de célula pequena e carcinoma de pulmão de célula não pequena, sendo que o último inclui, mas sem limitação, adenocarcinoma, carcinoma escamoso, e carcinoma de célula grande.
[050] O termo “neoplasma” ou “célula neoplástica” refere-se a uma célula ou tecido anormal que se prolifera mais rapidamente do que células ou tecidos normais correspondentes e continua a crescer após a remoção do estímulo que iniciou o crescimento.
[051] A “célula tumoral pulmonar” refere-se a uma célula tumoral pulmonar, in vivo ou in vitro, e engloba células derivadas de tumores pulmonares primários ou tumores pulmonares metastáticos, assim como as linhas de célula derivadas de tais células.
[052] Conforme usado no presente documento, “tratamento” (e variações tais como “tratar” ou “tratando”) referem-se à intervenção clínica em uma tentativa de alterar o curso natural do indivíduo ou da célula sendo tratada, e pode ser realizado para profilaxia ou durante o curso de patologia clínica. Os efeitos desejáveis de tratamento incluem impedir a ocorrência ou recorrência de doença, alívio de sintomas, diminuir de quaisquer consequências patológicas diretas ou indiretas da doença, impedir a metástase, reduzir a taxa de progressão de doença, melhoria ou paliação da situação da doença, e remissão ou prognóstico melhorado.
[053] Um “indivíduo”, “sujeito” ou “paciente” é um vertebrado. Em determinadas realizações, o vertebrado é um mamífero. Os mamíferos incluem, mas sem limitação, animais de exploração (tais como vacas), animais de esporte, animais de estimação (tais como gatos, cachorros e cavalos), primatas (incluindo primatas humanos e não humanos), e roedores (por exemplo, camundongos e ratos). Em determinadas realizações, um mamífero é um humano e pode ser um humano do sexo masculino ou feminino.
[054] Uma "quantidade eficaz" refere-se a uma quantidade eficaz, em dosagens e por períodos de tempo necessários, para alcançar o resultado profilático ou terapêutico desejado.
[055] Uma “quantidade terapeuticamente eficaz” de uma substância/molécula da invenção pode variar de acordo com fatores tais como a situação da doença, idade, sexo e peso do indivíduo, e a capacidade da substância/molécula, para obter uma resposta desejada no indivíduo. Uma quantidade terapeuticamente eficaz engloba uma quantidade em que quaisquer efeitos prejudiciais ou tóxicos da substância/molécula são compensados pelos efeitos terapeuticamente benéficos. Uma "quantidade profilaticamente eficaz" refere-se a uma quantidade eficaz, em dosagens e por períodos de tempo necessários, para alcançar o resultado profilático necessário. Tipicamente, mas não necessariamente, visto que uma dose profilática é usada em sujeitos antes de ou em um estágio anterior da doença, a quantidade profilaticamente eficaz pode ser menos do que a quantidade terapeuticamente eficaz.
[056] O termo sobrevivência "em longo prazo" é usado no presente documento para referir-se à sobrevivência por pelo menos 1 ano, 5 anos, 8 anos, ou 10 anos seguindo o tratamento terapêutico.
[057] O termo "resistência aumentada" a um agente terapêutico particular ou opção de tratamento, quando usado de acordo com a invenção, significa uma resposta diminuída a uma dose padrão do fármaco ou a um protocolo de tratamento padrão.
[058] O termo "sensibilidade diminuída" a um agente terapêutico particular ou opção de tratamento, quando usado de acordo com a invenção, significa uma resposta diminuída a uma dose padrão do agente ou a um protocolo de tratamento padrão, em que a resposta diminuída pode ser compensada (pelo menos parcialmente) aumentando-se a dose de agente, ou a intensidade de tratamento.
[059] A "resposta do paciente" pode ser avaliada com o uso de qualquer ponto de viragem que indica um benefício ao paciente, incluindo, sem limitação, (1) inibição, em parte, de crescimento de tumor, incluindo desaceleração ou suspensão de crescimento completa; (2) redução no número de células tumorais; (3) redução no tamanho de tumor; (4) inibição (por exemplo, redução, desaceleração ou interrupção completa) de infiltração de célula tumoral em tecidos e/ou órgãos periféricos adjacentes; (5) inibição (por exemplo, redução, desaceleração ou interrupção completa) de metástase; (6) intensificação de resposta imune antitumoral, que pode, mas não tem de, resultar na regressão ou rejeição do tumor; (7) alívio, em parte, de um ou mais sintomas associados com o tumor; (8) aumento na duração de sobrevivência seguindo o tratamento; e/ou (9) mortalidade reduzida em um dado momento seguindo o tratamento.
[060] Os "anticorpos" (Abs) e "imunoglobulinas" (Igs) referem-se a glicoproteínas que têm características estruturais similares. Enquanto os anticorpos exibem especificidade de ligação para um antígeno específico, imunoglobulinas incluem tanto anticorpos quanto outras moléculas similares a anticorpos que geralmente carecem de especificidade de antígeno. Os polipeptídeos do último tipo são produzidos, por exemplo, em níveis baixos pelo sistema linfático e em níveis elevados por mielomas.
[061] Os termos "anticorpo" e “imunoglobulina” são usados de modo intercambiável no sentido mais amplo e incluem anticorpos monoclonais (por exemplo, anticorpos monoclonais intactos ou de comprimento completo), anticorpos policlonais, anticorpos monovalentes, anticorpos multivalentes, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos desde que os mesmos exibam a atividade biológica desejada) e também podem incluir determinados fragmentos de anticorpo (conforme descrito em maiores detalhes no presente documento). Um anticorpo pode ser quimérico, humano, humanizado e/ou maturado por afinidade.
[062] “FOXO3a” refere-se a uma proteína de classe O de caixa de hélice alada/em cabeça de forquilha que é um alvo a jusante da via de sinalização de quinase PI3K/AKT. A Quinase de AKT ativada controla diretamente a atividade de FOXO3a através de fosforilação, levando a translocação do mesmo para o citoplasma, em que o mesmo é sequestrado pela proteína chaperone 14-3-3. A inibição de PI3K/AKT quinases leva a defosforilação e localização nuclear de FOXO3a, resultando na ativação do mesmo. A localização nuclear de FOXO3a possibilita que o mesmo atue como um fator de transcrição para induzir a apoptose e/ou suspensão de ciclo de célula através da regulação positiva dos genes alvo fundamentais do mesmo tal como p27Kip1 e Bim.
[063] O “perfil de localização" refere-se à quantidade de uma dada molécula em uma localização comparada à quantidade em uma segunda localização. Em um exemplo, um perfil de localização de FOXO3a refere-se à quantidade de FOXO3a no núcleo de célula comparada à quantidade no citoplasma de célula. O perfil de localização pode ser expresso em termos de uma razão (por exemplo, quantidade de FOXO3a no núcleo dividida pela quantidade de FOXO3a no citoplasma) ou uma subtração (por exemplo, quantidade de FOXO3a no núcleo menos a quantidade de FOXO3a no citoplasma). Um “perfil de localização nuclear” refere-se a um perfil de localização que é determinado como tendo níveis de FOXO3a que são substancialmente maiores no núcleo do que no citoplasma. Em um exemplo, um perfil de localização nuclear tem mais do que aproximadamente 50% de FOXO3a no núcleo do que no citoplasma. Em outros exemplos, um perfil de localização nuclear tem mais do que aproximadamente 70%, alternativamente mais do que aproximadamente 80%, alternativamente mais do que aproximadamente 90% de FOXO3a no núcleo do que no citoplasma. Um “perfil de localização citoplasmático” refere-se a um perfil de localização que é determinado como tendo níveis de FOXO3a que são substancialmente maiores no citoplasma do que no núcleo. Em um exemplo, um perfil de localização citoplasmático tem mais do que aproximadamente 50% de FOXO3a no citoplasma do que no núcleo. Em outros exemplos, um perfil de localização citoplasmático tem mais do que aproximadamente 70%, alternativamente mais do que aproximadamente 80%, alternativamente mais do que aproximadamente 90% de FOXO3a no citoplasma do que no núcleo.
[064] Portanto, um aspecto inclui um método de predição da sensibilidade de crescimento de célula tumoral a inibição através de um inibidor de via de quinase de AKT, que compreende: determinar o perfil de localização de FOXO3a em uma célula tumoral, em que um perfil de localização citoplasmático de FOXO3a se correlaciona com a sensibilidade a inibição através de um inibidor de quinase de AKT, e um perfil de localização nuclear de FOXO3a se correlaciona com a resistência a inibição através de um inibidor de quinase de AKT.
[065] O “perfil de pAKT" refere-se ao nível de ativação ou fosforilação de AKT (“pAKT”) comparado ao nível de AKT não fosforilado ou não ativado em uma dada amostra. Em um exemplo, a amostra é uma célula tumoral. O perfil de pAKT pode ser expresso em termos de uma razão (por exemplo, quantidade de pAKT em uma célula tumoral dividida pela quantidade de AKT não fosforilado na célula ou em uma célula não tumoral do mesmo tipo) ou uma subtração (por exemplo, a quantidade de pAKT em uma célula tumoral menos a quantidade de AKT não fosforilado na célula ou em uma célula não tumoral do mesmo tipo). O perfil de pAKT também pode ser expresso em termos do nível de ativação da via mensurando-se quantidades de alvos a jusante fosforilados de AKT (por exemplo, pGSK ou PRAS40). Um “perfil de pAKT elevado” refere- se a níveis de fosforilação ou ativação de AKT total na amostra que são maiores do que um valor de base de referência. Em um exemplo, o valor de base de referência é o nível basal de pAKT para um dado tipo de célula. Em outro exemplo, o valor de base de referência é nível médio ou de média de pAKT em uma dada população de células de amostra. Em outro exemplo, um “perfil de pAKT elevado” refere-se a uma célula tumoral que superexpresso ou tem AKT ativado ou fosforilado amplificado na célula, em comparação a uma média de células normais, saudáveis (por exemplo, não tumorais) do mesmo tipo do mesmo mamífero ou de uma população de paciente. Um exemplo é mostrado na Figura 9 que demonstra que um perfil de pAKT elevado prediz a sensibilidade a inibidores de AKT, por exemplo, GDC-0068. O perfil de pAKT também pode ser usado juntamente com outros marcadores (por exemplo, perda de PTEN, mutações para PI3K, quinases Kras ou Braf, ou perfis de localização de FOXO3) para predizer a eficácia de determinados inibidores de AKT.
[066] Os métodos de mensuração de níveis de ativação de AKT e quantidades de pAKT em uma amostra são conhecidos na técnica. Por exemplo, ensaios de imunoprecipitação podem ser usados, tais como o Kit de Ensaio de Atividade de AKT (disponível de Abcam®, San Francisco, CA). Em outro exemplo, ensaios de Western blot podem ser usados, tal como o Kit de Ensaio de Western Blot de AKT (disponível de Cell Signaling Technology, Danvers, MA). Outros formatos de ensaio conhecidos por mensurar níveis de pAKT incluem ensaios de imunoabsorção ligados por quimioluminescência, consulte Cicenas, J, et. al., “Increased level of phosphorylated akt measured by chemiluminescence-linked immunosorbent assay is a predictor of poor prognosis in primary breast cancer overexpressing ErbB-2”, Breast Can. Res., 7(4), R394, 2005. Outros ensaios estão disponíveis que podem ser usados, por exemplo, o Kit de Ensaio AlphaScreen SureFire Akt 1 (p-Thr308) (disponível de Perkin Elmer, Waltham, MA).
[067] Os métodos de determinação de presença de mutações de PI3K são conhecidos na técnica. Por exemplo, os ensaios para a detecção de mutações específicas no gene PIK3CA (em éxons 9 e 20, e também mutações H1047R ou H1047L), com o uso de PCR em tempo real são conhecidos (disponíveis de Qiagen, Valencia, CA).
[068] Um ácido nucleico pode ser, por exemplo, DNA genômico, RNA transcrito a partir de DNA genômico, ou cDNA gerado a partir de RNA. Um ácido nucleico pode ser derivado a partir de um vertebrado, por exemplo, um mamífero. Um ácido nucleico é dito como sendo “derivado de” uma fonte particular se o mesmo for obtido diretamente daquela fonte ou se o mesmo é uma cópia de um ácido nucleico encontrado naquela fonte.
[069] As variações em ácidos nucleicos e sequências de aminoácido podem ser detectadas por determinados métodos conhecidos àqueles indivíduos versados na técnica. Tais métodos incluem, mas sem limitação, sequenciamento de DNA; ensaios de extensão de iniciador, incluindo ensaios de incorporação de nucleotídeo alelo-específico e ensaios de extensão de iniciador alelo-específico (por exemplo, PCR alelo-específico, reação em cadeia de ligação alelo-específico (LCR), e gap-LCR); ensaios de hibridização de oligonucleotídeo alelo-específico (por exemplo, ensaios de ligação de oligonucleotídeo); ensaios de proteção contra clivagem em que a proteção contra agentes de clivagem é usada para detectar bases incompatíveis em dúplexes de ácido nucleico; análise de ligação de proteína MutS; análise eletroforética comparando a mobilidade de moléculas de ácido nucleico do tipo selvagem e variante; eletroforese em gel com gradiente de desnaturação (DGGE, como em, por exemplo, Myers et al. (1985) Nature 313:495); análise de clivagem de RNase em pares de base incompatíveis; análise de clivagem enzimática ou química de DNA heterodúplex; espectrometria de massa (por exemplo, MALDI-TOF); análise de bit genético (GBA); ensaios de 5' nuclease (por exemplo, TaqMan®); e ensaios que empregam sinais moleculares. Alguns desses métodos são discutidos em mais detalhes abaixo.
[070] A detecção de variações em ácidos nucleicos alvos pode ser realizada através de sequenciamento e clonagem molecular dos ácidos nucleicos alvos com o uso de conjuntos de procedimentos bem conhecidos na técnica. Alternativamente, conjuntos de procedimentos de amplificação tal como a reação em cadeia de polimerase (PCR) podem ser usados para amplificar sequências de ácido nucleico alvo diretamente a partir de uma preparação de DNA genômico a partir de tecido tumoral. A sequência de ácido nucleico das sequências amplificadas pode então ser determinada e as variações identificadas a partir das mesmas. Os conjuntos de procedimentos de amplificação são bem conhecidos na técnica, por exemplo, a reação em cadeia de polimerase está descrita em Saiki et al., Science 239:487, 1988; Patentes de nos U.S. 4.683,203 e 4.683.195.
[071] A reação em cadeia de ligase, que é conhecida na técnica, também pode ser usada para amplificar as sequências de ácido nucleico alvo. Consulte, por exemplo, Wu et al., Genomics 4:560 a 569 (1989). Além disso, um conjunto de procedimentos conhecido como PCR alelo-específico também pode ser usado para detectar as variações (por exemplo, substituições). Consulte, por exemplo, Ruano e Kidd (1989) Nucleic Acids Research 17:8392; McClay et al. (2002) Analytical Biochem. 301:200 a 206. Em determinadas realizações desse conjunto de procedimentos, um iniciador alelo-específico é usado em que o nucleotídeo de terminal 3’ do iniciador é complementar a (isto é, tem capacidade para, especificamente, formar par de bases com) uma variação particular no ácido nucleico alvo. Se a variação particular não estiver presente, um produto de amplificação não é observado. O Sistema de Mutação Refratário à Amplificação (ARMS) também pode ser usado para detectar as variações (por exemplo, substituições). O ARMS é descrito, por exemplo, na Publicação de Pedido de Patente Europeia no 0332435, e em Newton et al., Nucleic Acids Research, 17:7, 1989.
[072] Outros métodos úteis para a detecção de variações (por exemplo, substituições) incluem, mas sem limitação, (1) ensaios de incorporação de nucleotídeo alelo-específico, tais como ensaios de extensão de base simples (consulte, por exemplo, Chen et al. (2000) Genome Res. 10:549 a 557; Fan et al. (2000) Genome Res. 10:853 a 860; Pastinen et al. (1997) Genome Res. 7:606 a 614; e Ye et al. (2001) Hum. Mut. 17:305 a 316); (2) ensaios de extensão de iniciador alelo-específico (consulte, por exemplo, Ye et al. (2001) Hum. Mut. 17:305 a 316; e Shen et al. Genetic Engineering News, vol. 23, Mar. 15, 2003), incluindo PCR alelo-específico; (3) ensaios de 5’nuclease (consulte, por exemplo, De La Vega et al. (2002) BioTechniques 32:S48 a S54 (descrevendo o ensaio TaqMan®); Ranade et al. (2001) Genome Res. 11:1262 a 1268; e Shi (2001) Clin. Chem. 47:164 a 172); (4) ensaios que empregam sinais moleculares (consulte, por exemplo, Tyagi et al. (1998) Nature Biotech. 16:49 a 53; e Mhlanga et al. (2001) Methods 25:463-71); e (5) ensaios de ligação de oligonucleotídeo (consulte, por exemplo, Grossman et al. (1994) Nuc. Acids Res. 22:4527 a 4534; Publicação de Pedido de Patente no US 2003/0119004 A1; PublicaçãoInternacional PCT no WO 01/92579 A2; e Patente no U.S. 6.027.889).
[073] As variações também podem ser detectadas através de métodos de detecção de incompatibilidade. As incompatibilidades são hibridizadas a dúplexes de ácido nucleico que não são 100% complementares. A falta de complementaridade total pode ser devido a deleções, inserções, inversões, ou substituições. Um exemplo de um método de detecção de incompatibilidade é o ensaio de Detecção de Reparo de Incompatibilidade (MRD) descrito, por exemplo, em Faham et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA 102:14.717 a 14.722 (2005) e Faham et al., Hum. Mol. Genet. 10:1.657 a 1.664 (2001). Outro exemplo de um conjunto de procedimentos de clivagem de incompatibilidade é o método de proteção de RNase, que está descrito em detalhes em Winter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:7.575, 1985, e Myers et al., Science 230:1.242, 1985. Por exemplo, um método da invenção pode envolver o uso de uma ribossonda rotulada que é complementar ao ácido nucleico do tipo selvagem humano. A ribossonda e o ácido nucleico alvo derivados a partir da amostra de tecido são anelados (hibridizados) juntos e subsequentemente digeridos com a enzima RNase A que tem capacidade para detectar algumas incompatibilidades em uma estrutura de RNA dúplex. Se uma incompatibilidade for detectada por RNase A, a mesma cliva no sítio da incompatibilidade. Portanto, quando a preparação de RNA anelado é separada em uma matriz em gel eletroforético, se uma incompatibilidade foi detectada e clivada por RNase A, um produto de RNA será observado que é menor do que o RNA dúplex de comprimento total para a ribossonda e o mRNA ou DNA. A ribossonda não precisa ser o comprimento total do ácido nucleico alvo, mas pode ser uma porção do ácido nucleico alvo, contanto que a mesma englobe a posição suspeita de ter uma variação.
[074] De uma maneira similar, sondas de DNA podem ser usadas para detectar incompatibilidades, por exemplo, através de clivagem química ou enzimática. Consulte, por exemplo, Cotton et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85:4.397, 1988; e Shenk et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 72:989, 1975. Alternativamente, as incompatibilidades podem ser detectadas por shifts na mobilidade eletroforética de dúplexes incompatíveis em relação a dúplexes compatíveis. Consulte, por exemplo, Cariello, Human Genetics, 42:726, 1988. Com ribossondas ou sondas de DNA, o ácido nucleico alvo suspeito de compreender uma variação pode ser amplificado antes da hibridização. As alterações no ácido nucleico alvo também podem ser detectadas com o uso de hibridização de Southern, especialmente se as alterações são redisposições brutas, tais como deleções e inserções.
[075] As sondas de polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição (RFLP) para o ácido nucleico alvo ou genes de marcador circundantes podem ser usadas para detectar as variações, por exemplo, inserções ou deleções. As inserções e deleções também podem ser detectadas através de clonagem, sequenciamento e amplificação de um ácido nucleico alvo. A análise de polimorfismo de conformação de fita única (SSCP) também pode ser usada para detectar variantes de alteração de base de um alelo. Consulte, por exemplo, Orita et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:2.766 a 2.770, 1989, e Genomics, 5:874 a 879, 1989.
[076] A invenção fornece também uma variedade de composições adequadas para uso na realização de métodos da invenção. Por exemplo, a invenção fornece matrizes que podem ser usadas em tais métodos. Em uma realização, uma matriz da invenção compreende moléculas de ácido nucleico individuais ou em coleções úteis para a detecção de variações. Por exemplo, uma matriz da invenção pode compreender uma série de oligonucleotídeos alelo-específicos individuais colocados discretamente ou conjuntos de oligonucleotídeos alelo-específicos. Vários conjuntos de procedimentos são bem conhecidos na técnica para fixação de ácidos nucleicos a um substrato sólido tal como uma lâmina de vidro. Um método é incorporar análogos ou bases modificadas que contêm uma porção reativa que tem capacidade de se fixar a um substrato sólido, tal como um grupo amina, um derivado de um grupo amina, ou outro grupo com uma carga positiva, em moléculas de ácido nucleico que são sintetizadas. O produto sintetizado é colocado em contato, em seguida, com um substrato sólido, tal como uma lâmina de vidro revestida com um aldeído ou outro grupo reativo. O aldeído ou outro grupo reativo formará uma ligação covalente com a porção reativa no produto amplificado, que se tornará fixado de modo covalente à lâmina de vidro. Outros métodos, tal como aqueles que usam química de superfície de aminopropil sílica também são conhecidos na técnica.
[077] Uma amostra biológica, de acordo com qualquer um dos métodos acima, pode ser obtida com o uso de determinados métodos conhecidos àqueles indivíduos versados na técnica. As amostras biológicas podem ser obtidas a partir de animais vertebrados e, em particular, mamíferos. A biopsia de tecido é usada frequentemente para obter uma peça representativa de tecido tumoral. Alternativamente, as células tumorais podem ser obtidas indiretamente na forma de tecidos ou fluidos que são conhecidos ou considerados por conter as células tumorais de interesse. Por exemplo, as amostras de lesões de câncer de pulmão podem ser obtidas através de ressecção, broncoscopia, aspiração de agulha fina, pincelagem brônquica, ou de esputo, fluido pleural ou sangue. As variações em ácidos nucleicos alvos (ou polipeptídeos codificados) podem ser detectadas a partir de uma amostra tumoral ou a partir de outras amostras corpóreas tais como urina, esputo ou soro. As células de câncer são descascadas dos tumores e aparecem em tais amostras de corpo. Através da triagem de tais amostras de corpo, um diagnóstico precoce simples pode ser alcançado para doenças tal como câncer. Além disso, o progresso de terapia pode ser monitorado mais facilmente testando-se tais amostras de corpo para variações em ácidos nucleicos alvos (ou polipeptídeos codificados). Adicionalmente, os métodos para enriquecimento de uma preparação de tecido para células tumorais são conhecidos na técnica. Por exemplo, o tecido pode ser isolado a partir de seções de criostato ou parafina. As células de câncer também podem ser separadas das células normais através de citometria de fluxo ou microdissecção de captura a laser.
INIBIDORES DE AKT QUINASE
[078] Determinados inibidores de quinase de AKT são conhecidos como inibidores competitivos de ATP, pela capacidade dos mesmos de competir com ATP para a ligação ao sítio ativo de AKT. Determinados inibidores de quinase de AKT conhecidos como inibidores alostéricos não se ligam ao sítio ativo de AKT. Além disso, os inibidores de quinase de AKT podem ser inibidores de pan-AKT, em que o inibidor pode inibir a atividade de dois ou mais dentre AKT-1, AKT-2 e AKT-3. Os inibidores de quinase de AKT podem ser inibidores de AKT seletivos, em que o inibidor pode inibir a atividade de um dentre AKT-1, AKT-2 e AKT-3, sem inibir a atividade dos outros dois.
[079] Em uma realização, o inibidor de quinase de AKT é um inibidor competitivo de ATP. Em outra realização, o inibidor competitivo de ATP é um inibidor de pan-AKT. Por exemplo, em determinadas realizações, o inibidor de AKT é um inibidor de pan-AKT, competitivo de ATP de Fórmula I:
Figure img0002
e tautômeros, enantiômeros resolvidos, diasterômeros resolvidos, solvatos, e sais dos mesmos, em que, R1 é H, Me, Et e CF3; R2 é H ou Me; R5 é H ou Me; A é:
Figure img0003
em que G é fenila opcionalmente substituída por um a quatro grupos R9 ou uma heteroarila com 5 a 6 membros opcionalmente substituída por um halogênio; R6 e R7 são independentemente H, OCH3, (cicloalquila C3-C6)- (CH2), (cicloalquila C3-C6)-(CH2CH2), V-(CH2)0-1 em que V é uma heteroarila com 5 a 6 membros, W-(CH2)1-2 em que W é fenila opcionalmente substituída por F, Cl, Br, I, OMe, CF3 ou Me, cicloalquila C3-C6 opcionalmente substituída por cicloalquila C1-C3 ou O(cicloalquila C1-C3), hidroxi-(cicloalquila C3-C6), fluoro- (cicloalquila C3-C6), CH(CH3)CH(OH)fenila, heterociclo com 4 a 6 membros opcionalmente substituído por F, OH, cicloalquila C1-C3, ciclopropilmetila ou C(=O)(cicloalquila C1-C3), ou alquila C1-C6 opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados dentre OH, oxo, O(alquila C1-C6), CN, F, NH2, NH(alquila C1-C6), N(alquila C1-C6)2, ciclopropila, fenila, imidazolila, piperidinila, pirrolidinila, morfolinila, tetrahidrofuranila, oxetanila ou tetrahidropiranila, ou R6 e R7 juntamente com o nitrogênio ao qual os mesmos são fixados formam um anel heterocíclico com 4 a 7 membros opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados dentre OH, halogênio, oxo, CF3, CH2CF3, CH2CH2OH, O(cicloalquila C1-C3), C(=O)CH3, NH2, NHMe, N(Me)2, S(O)2CH3, ciclopropilmetila e cicloalquila C1-C3; Ra e Rb são H, ou Ra é H, e Rb e R6 juntamente com os átomos aos quais os mesmos são fixados formam um anel heterocíclico com 5 a 6 membros que tem um ou dois átomos de nitrogênio de anel; Rc e Rd são H ou Me, ou Rc e Rd juntamente com o átomo ao qual os mesmos são fixados foram um anel de ciclopropila; R8 é H, Me, F ou OH, ou R8 e R6 juntamente com os átomos aos quais os mesmos são fixados formam um anel heterocíclico com 5 a 6 membros que tem um ou dois átomos de nitrogênio de anel; cada R9 é independentemente halogênio, alquila C1-C6, cicloalquila C3-C6, O-(alquila C1-C6), CF3, OCF3, S(alquila C1-C6), CN, OCH2-fenil, CH2O- fenil, NH2, NH-(alquila C1-C6), N-(alquila C1-C6)2, piperidina, pirrolidina, CH2F, CHF2, OCH2F, OCHF2, OH, SO2(alquila C1-C6), C(O)NH2, C(O)NH(alquila C1C6), e C(O)N(alquila C1-C6)2; R10 é H ou Me; e m, n e p são independentemente 0 ou 1.
[080] Outra realização inclui inibidores de AKT de Fórmula I, em que R1 é metila; R2, R5 e R10 são H; G é fenila opcionalmente substituída por 1 a 3 R9; R9 é halogênio, cicloalquila C1-C3, CN, CF3, OCF3, OCH3 ou OCH2Fenil; Rc e Rd são H ou metila; m, n e p são 0 ou 1; e R8 é H ou metila.
[081] Outra realização inclui inibidores de AKT de Fórmula I, selecionados dentre: dicloridrato de 2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1- ona; dicloridrato de (R)-2-amino-3-(4-clorofenil)-1-((S)-4-((5R,7R)-7- hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)-3-metilpiperazin-1- il)propan-1-ona; dicloridrato de (R)-2-amino-3-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-((S)-4- ((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)-3- metilpiperazin-1-il)propan-1-ona; dicloridrato de (R)-2-amino-3-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-((S)-4- ((5R,7R)-7-metoxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)-3- metilpiperazin-1-il)propan-1-ona; dicloridrato de (S)-3-amino-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi- 5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (R)-2-amino-3-(4-clorofenil)-1-((S)-4-((S)-7-hidroxi-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)propan-1-ona; (R)-2-amino-3-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-((S)-4-((S)-7-hidroxi-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)propan-1-ona; (2R)-2-amino-3-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-((3S)-4-((5R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)propan-1- ona; (2R)-2-amino-3-(4-clorofenil)-1-(4-(7-hidroxi-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (R)-2-amino-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-metoxifenil)propan-1-ona; 2-(4-clorofenil)-1-((S)-4-((R)-7-hidroxi-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; dicloridrato de 2-(4-clorofenil)-1-(4-(7-hidroxi-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; 2-(4-clorofenil)-3-(isopropilamino)-1-(4-(7-metoxi-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; 2-(4-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; 2-(3,4-difluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; 2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(piridin-3-ilmetilamino)propan-1-ona; 2-(2,4-diclorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; 2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(pentan-3-ilamino)propan-1-ona; 2-(4-clorofenil)-3-((1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-ilamino)-1-(4- ((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; 2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-((1R,4R)-4- hidroxiciclohexilamino)propan-1-ona; ((3S,4R)-4-(3,4-diclorofenil)pirrolidin-3-il)(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)metanona; ((3R,4S)-4-(3,4-diclorofenil)pirrolidin-3-il)(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)metanona; 2-(4-clorofenil)-2-hidroxi-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; 4-amino-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-metilpentan-1-ona; 4-amino-2-(3,4-difluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-metilpentan-1-ona; (4-(4-cloro-3-fluorofenil)piperidin-4-il)(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil- 6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)metanona; (3-(4-clorofenil)pirrolidin-3-il)(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)metanona; 1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)-2-p-tolilpropan-1- ona; 1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)-2-(4- metoxifenil)propan-1-ona; 3-(etilamino)-2-(4-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; 2-(4-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(metilamino)propan-1-ona; (S)-3-amino-2-(3,4-diclorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; 2-(4-clorofenil)-3-(ciclopropilmetilamino)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; 2-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; 2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(pirrolidin-1-il)propan-1-ona; (R)-2-amino-3-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; 2-(4-clorofenil)-1-((S)-4-((S)-7-hidroxi-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; (R)-2-amino-3-(4-clorofenil)-1-((S)-4-((R)-7-hidroxi-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)propan-1-ona; (R)-2-amino-3-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-((S)-4-((R)-7-hidroxi-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)propan-1-ona; 2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R)-7-hidroxi-5,7-dimetil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; dicloridrato de (4-(3,4-diclorofenil)piperidin-4-il)(4-((5R,7R)-7- hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)metanona; dicloridrato de 4-(3,4-diclorofenil)pirrolidin-3-il)(4-((5R,7R)-7- hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)metanona; 1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-2-(4-metoxifenil)-3-(pirrolidin-1- il)propan-1-ona; 2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(2,2,2-trifluoroetilamino)propan-1- ona; 3-(ter-butilamino)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil- 6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4- il)amino)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-3-(ciclopropilmetilamino)-1-(4-((5R,7S)-7- hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1- ona; (S)-2-(5-clorotiofen-2-il)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; (R)-2-amino-3-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; 1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)-2-(4- (trifluorometil)fenil)propan-1-ona; 4-(1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)-1-oxopropan-2- il)benzonitrila; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; 3-(azetidin-1-il)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; 2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(3-hidroxiazetidin-1-il)propan-1-ona; 2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(neopentilamino)propan-1-ona; 2-(4-bromofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; 2-(4-clorofenil)-3-(4-fluoropiperidin-1-il)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; 2-(4-clorofenil)-3-((S)-3-fluoropirrolidin-1-il)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; 2-(4-clorofenil)-3-(etilamino)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; 2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropil(metil)amino)propan-1-ona; 2-(4-clorofenil)-3-(4,4-difluoropiperidin-1-il)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; 2-(4-clorofenil)-3-(3,3-difluoropirrolidin-1-il)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; 2-(4-bromo-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; (R)-2-amino-3-(4-fluorofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (R)-2-amino-3-(3,4-diclorofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (R)-2-amino-3-(3,4-difluorofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil- 6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-3-(ciclopropilmetilamino)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi- 5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-3-(ciclopropilmetilamino)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi- 5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; 2-(4-clorofenil)-3-((R)-3-fluoropirrolidin-1-il)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)-2-(4- (trifluorometoxi)fenil)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-3-(ciclopropilamino)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(3-hidroxiazetidin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(3-hidroxiazetidin-1-il)propan-1-ona; (R)-4-amino-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-metilpentan-1-ona; (S)-4-amino-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-metilpentan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-((R)-pirrolidin-3-ilamino)propan-1- ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-((S)-pirrolidin-3-ilamino)propan-1-ona; (S)-3-((R)-1-acetilpirrolidin-3-ilamino)-2-(4-clorofenil)-1-(4- ((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (S)-3-((S)-1-acetilpirrolidin-3-ilamino)-2-(4-clorofenil)-1-(4- ((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromofenil)-3-(ciclopropilmetilamino)-1-(4-((5R,7R)-7- hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(piperidin-4-ilamino)propan-1-ona; (S)-3-(1-acetilpiperidin-4-ilamino)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7- hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(2-metoxietilamino)propan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-4-(dimetilamino)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)butan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-4- ilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-((1r,4S)-4- hidroxiciclohexilamino)propan-1-ona; (S)-3-(azetidin-1-il)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil- 6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (R)-3-(azetidin-1-il)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil- 6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; 2-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-oxopropilamino)acetamida; 2-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-oxopropilamino)-N,N- dimetilacetamida; 2-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-oxopropilamino)-N- metilacetamida; (R)-2-(4-bromofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-(isopropilamino)butan-1-ona; (R)-2-(4-bromofenil)-4-(dimetilamino)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)butan-1-ona; (R)-2-(4-bromofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-(isobutilamino)butan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-((2-metoxietil)(metil)amino)butan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-(isopropilamino)butan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-(3-hidroxiazetidin-1-il)butan-1-ona; 2-((R)-3-(4-bromofenil)-4-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-oxobutilamino)-N,N- dimetilacetamida; (R)-2-(4-bromofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-(2-hidroxietilamino)butan-1-ona; (2R)-2-(4-bromofenil)-4-(2-hidroxi-1-(tetrahidro-2H-piran-4- il)etilamino)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin- 4-il)piperazin-1-il)butan-1-ona; (R)-2-amino-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-iodofenil)propan-1-ona; 4-((R)-2-amino-3-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-oxopropil)benzonitrila; (R)-2-amino-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-(trifluorometil)fenil)propan-1-ona; (S)-3-(4-acetilpiperazin-1-il)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (R)-3-(4-acetilpiperazin-1-il)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (R)-3-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-2-(metilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il)propan- 1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il)propan- 1-ona; 2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(3-metoxiazetidin-1-il)propan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-4-(ciclohexilamino)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)butan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-(tetrahidro-2H-piran-4-ilamino)butan- 1-ona; (2R)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-(2-hidroxipropilamino)butan- 1-ona; (2R)-2-(4-clorofenil)-4-(2-hidroxi-1-(tetrahidro-2H-piran-4- il)etilamino)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin- 4-il)piperazin-1-il)butan-1-ona; (2R)-2-(4-clorofenil)-4-(2-hidroxi-1-feniletilamino)-1-(4- ((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4- il)piperazin-1-il)butan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-3-(etil(tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-1-(4- ((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (R)-2-(4-bromofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-(2-metoxietilamino)butan-1- ona; (2R)-2-(4-bromofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-(3,3,3-trifluoro-2- hidroxipropilamino)butan-1-ona; (R)-2-(4-bromofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-((1- hidroxiciclopropil)metilamino)butan-1-ona; 2-((R)-3-(4-bromofenil)-4-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-oxobutilamino)acetamida; (R)-2-(4-bromofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-4-(tetrahidro-2H-piran-4-ilamino)butan- 1-ona; (R)-4-(3-(1H-imidazol-1-il)propilamino)-2-(4-bromofenil)-1-(4- ((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)butan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-morfolinopropan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-morfolinopropan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-metilpiperazin-1-il)propan- 1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-metilpiperazin-1-il)propan- 1-ona; (S)-3-(3-aminoazetidin-1-il)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7- hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (R)-3-(3-aminoazetidin-1-il)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-tiomorfolinopropan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(piperazin-1-il)propan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(piperazin-1-il)propan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-tiomorfolinopropan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-3-(4-fluoropiperidin-1-il)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-3-(4-fluoropiperidin-1-il)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(3-metoxiazetidin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(3-metoxiazetidin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(3,4-diclorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-3-(dimetilamino)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-fluoro-3-(trifluorometil)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3- (isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometil)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3- (isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(metoxiamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-metoxipiperidin-1-il)propan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-metoxipiperidin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-hidroxipiperidin-1-il)propan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-hidroxipiperidin-1-il)propan-1-ona; (S)-3-(4-aminopiperidin-1-il)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (R)-3-(4-aminopiperidin-1-il)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi- 5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-4- ilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(metil(tetrahidro-2H-piran-4- il)amino)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropil(metil)amino)propan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)propan- 1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-(metilamino)piperidin-1-il)propan- 1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-(metilamino)piperidin-1-il)propan- 1-ona; (S)-2-(4-cloro-3-(trifluorometoxi)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3- (isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometoxi)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3- (isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-cloro-3-(trifluorometil)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3- (isopropilamino)propan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-3-(4-etilpiperazin-1-il)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi- 5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-3-(4-etilpiperazin-1-il)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi- 5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-isopropilpiperazin-1-il)propan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-isopropilpiperazin-1-il)propan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-3-((S)-3-(dimetilamino)pirrolidin-1-il)-1-(4- ((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-3-((S)-3-(dimetilamino)pirrolidin-1-il)-1-(4- ((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-((R)-tetrahidrofuran-3-ilamino)propan- 1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-((R)-tetrahidrofuran-3-ilamino)propan- 1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-3-(2-fluoroetilamino)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-fluoro-3-(trifluorometoxi)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3- (isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil- 6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan- 1-ona; (S)-2-(3-fluoro-4-metoxifenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; 4-((R)-2-(4-clorofenil)-3-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-oxopropil)piperazin-2-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-((R)-3-hidroxipirrolidin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-3-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-1-(4-((5R,7R)-7- hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-3-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)-1-(4-((5R,7R)-7- hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(3-cloro-5-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(3-bromo-4-metoxifenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; (R)-3-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-2-(piperidin-4-ilamino)propan-1-ona; (R)-2-(1-acetilpiperidin-4-ilamino)-3-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7- hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; 2-((R)-3-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-1-oxopropan-2-ilamino)-N- isopropilacetamida; (R)-3-(4-clorofenil)-2-(dimetilamino)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (R)-3-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-2-(2-morfolinoetilamino)propan-1-ona; (R)-3-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-2-(isopropilamino)propan-1-ona; (R)-3-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-2-(tetrahidro-2H-piran-4- ilamino)propan-1-ona; (R)-3-(4-clorofenil)-1-((S)-4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-2-(isopropilamino)propan-1-ona; 2-((R)-3-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-1-oxopropan-2-ilamino)-N,N- dimetilacetamida; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(1,4-oxazepan-4-il)propan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(1,4-oxazepan-4-il)propan-1-ona; (R)-2-(4-cloro-2-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-cloro-2-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(2-fluoro-4-(trifluorometil)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3- (isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-3-(ciclohexilamino)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-3-(ciclohexilamino)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-metoxiciclohexilamino)propan-1-ona; (S)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometoxi)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H- piran-4-ilamino)propan-1-ona; (S)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometil)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H- piran-4-ilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-((S)-tetrahidrofuran-3-ilamino)propan- 1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-metiltetrahidro-2H-piran-4- ilamino)propan-1-ona; (R)-3-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-2-(2-(tetrahidro-2H-piran-4- il)etilamino)propan-1-ona; (R)-3-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-2-(3,3,3-trifluoropropilamino)propan-1-ona; (R)-3-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-2-((tetrahidro-2H-piran-4- il)metilamino)propan-1-ona; (R)-3-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-2-(isopropil(metil)amino)propan-1-ona; (S)-3-(ter-butilamino)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (R)-3-(ter-butilamino)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-metilpiperazin-1- il)propan-1-ona; (R)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-metilpiperazin-1- il)propan-1-ona; (S)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-hidroxipiperidin-1- il)propan-1-ona; (R)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-morfolinopropan-1-ona; (R)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-hidroxipiperidin-1- il)propan-1-ona; (S)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometoxi)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-metilpiperazin- 1-il)propan-1-ona; (R)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometoxi)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-metilpiperazin- 1-il)propan-1-ona; (S)-3-(ciclopropilmetilamino)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometil)fenil)-1-(4- ((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (S)-3-(ciclopropilmetilamino)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometoxi)fenil)-1- (4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-il)propan-1-ona; (S)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)-2-(4- (trifluorometil)fenil)propan-1-ona; (S)-3-amino-2-(4-bromofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-3-amino-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-4- ilamino)propan-1-ona; 3-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-oxopropilamino)propanamida; 3-((S)-2-(4-clorofenil)-3-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-oxopropilamino)propanamida; (4-(4-clorofenil)piperidin-4-il)(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)metanona; (S)-2-(4-bromofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; (S)-3-amino-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-3-amino-2-(4-bromofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-4- ilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-4- ilamino)propan-1-ona; (S)-2-(3,4-diclorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-4- ilamino)propan-1-ona; (S)-3-amino-2-(3,4-diclorofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (R)-2-(3,4-diclorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-hidroxipiperidin-1- il)propan-1-ona; (S)-2-(3,4-diclorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-isopropilpiperazin-1-il)propan- 1-ona; (S)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometoxi)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4- hidroxipiperidin-1-il)propan-1-ona; (R)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometoxi)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4- hidroxipiperidin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometoxi)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4- isopropilpiperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(3,5-difluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3- (isopropilamino)propan-1-ona; (S)-3-((R)-3-aminopirrolidin-1-il)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7- hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan- 1-ona; (R)-3-((R)-3-aminopirrolidin-1-il)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7- hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan- 1-ona; (S)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-isopropilpiperazin-1- il)propan-1-ona; (S)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometoxi)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-morfolinopropan- 1-ona; (R)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometoxi)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-morfolinopropan- 1-ona; (S)-3-(4-etilpiperazin-1-il)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometoxi)fenil)-1-(4- ((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (R)-3-(4-etilpiperazin-1-il)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometoxi)fenil)-1-(4- ((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (S)-3-(4-acetilpiperazin-1-il)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometoxi)fenil)-1- (4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-il)propan-1-ona; (R)-3-(4-acetilpiperazin-1-il)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometoxi)fenil)-1- (4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-il)propan-1-ona; (S)-2-(3,4-diclorofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-4- ilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1- ona; (S)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3- (isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-3-(ciclopropilmetilamino)-1-(4- ((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (S)-3-(bis(ciclopropilmetil)amino)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-(4- ((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromofenil)-3-(ciclopropilmetilamino)-1-(4-((5R,7S)-7- hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (S)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-4- ilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3- (isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromofenil)-3-((ciclopropilmetil)(metil)amino)-1-(4- ((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (S)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-3-(ciclopropilmetilamino)-1-(4- ((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (S)-3-(ciclopropilmetilamino)-2-(3,4-diclorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7- hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan- 1-ona; (S)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-ilamino)-2-(4- (trifluorometoxi)fenil)propan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-3-((3S,5R)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-1-(4- ((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (R)-2-(4-clorofenil)-3-((2S,6R)-2,6-dimetilmorpholino)-1-(4- ((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-3-((2S,6R)-2,6-dimetilmorpholino)-1-(4- ((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-3-((3S,5R)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-1-(4- ((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (S)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometil)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4- hidroxipiperidin-1-il)propan-1-ona; (R)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometil)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4- hidroxipiperidin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometil)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-metilpiperazin- 1-il)propan-1-ona; (R)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometil)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-metilpiperazin- 1-il)propan-1-ona; (S)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometil)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4- isopropilpiperazin-1-il)propan-1-ona; (R)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometil)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4- isopropilpiperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-3-(ciclopropilmetilamino)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-2-(4- (trifluorometoxi)fenil)propan-1-ona; (S)-3-amino-2-(4-bromo-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi- 5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-3-amino-2-(4-bromo-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi- 5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(3,4-diclorofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3- (isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromo-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromo-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromo-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-4- ilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromo-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-4- ilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromo-3-fluorofenil)-3-(ciclopropilmetilamino)-1-(4- ((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromo-3-fluorofenil)-3-(ciclopropilmetilamino)-1-(4- ((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (S)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometil)fenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3- (isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-isopropilpiperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-hidroxipiperidin-1-il)propan-1-ona; (S)-3-(ciclopropilmetilamino)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-2-(4- (trifluorometil)fenil)propan-1-ona; (S)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-ilamino)-2-(4- (trifluorometil)fenil)propan-1-ona; (S)-3-(ciclopropilmetilamino)-2-(2-fluoro-4-(trifluorometil)fenil)-1-(4- ((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (R)-2-(4-bromo-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(4-hidroxipiperidin-1- il)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropil(metil)amino)propan-1-ona; (S)-3-amino-2-(4-bromo-2-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-3-amino-2-(4-bromo-2-fluorofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropil(metil)amino)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromo-2-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromo-2-fluorofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; (S)-3-amino-2-(4-cloro-2-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; 2-(4-clorofenil)-3-((3S,4R)-4-(dimetilamino)-3-fluoropiperidin-1-il)- 1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4- il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromo-2-fluorofenil)-3-(ciclopropilmetilamino)-1-(4- ((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (S)-3-(ter-butilamino)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-2-(4-(trifluorometil)fenil)propan-1-ona; (S)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometoxi)fenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H- piran-4-ilamino)propan-1-ona; (S)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometil)fenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H- piran-4-ilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-cloro-2-fluorofenil)-3-(ciclopropilmetilamino)-1-(4-((5R,7R)-7- hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromo-2-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-ilamino)propan- 1-ona; (S)-2-(4-cloro-2-fluorofenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-ilamino)propan- 1-ona; (S)-2-(4-cloro-2-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-4- ilamino)propan-1-ona; (S)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-ilamino)-2-(4- (trifluorometil)fenil)propan-1-ona; (S)-3-(ciclopropilmetilamino)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-2-(4- (trifluorometil)fenil)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromofenil)-3-(ter-butilamino)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isobutilamino)propan-1-ona; (S)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-3-(ciclopentilmetilamino)-1-(4- ((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (S)-2-(4-cloro-3-fluorofenil)-3-(ciclopentilamino)-1-(4-((5R,7R)-7- hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(2-fluoro-4-(trifluorometil)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3- (isopropil(metil)amino)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H- ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-((2- hidroxietil)(isopropil)amino)propan-1-ona; (S)-2-(2-fluoro-4-(trifluorometil)fenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3- (isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(2-fluoro-4-(trifluorometil)fenil)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5- metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H- piran-4-ilamino)propan-1-ona; (S)-3-amino-2-(2-fluoro-4-(trifluorometil)fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi- 5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-3-(ciclopropilmetilamino)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometil)fenil)-1-(4- ((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1- il)propan-1-ona; (S)-3-(ciclopropilmetilamino)-2-(3-fluoro-4-(trifluorometoxi)fenil)-1- (4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromofenil)-3-(4,4-dimetilciclohexilamino)-1-(4-((5R,7R)-7- hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-bromofenil)-3-(3,3-dimetilciclohexilamino)-1-(4-((5R,7R)-7- hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-3-(4,4-dimetilciclohexilamino)-1-(4-((5R,7R)-7- hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(4-clorofenil)-3-(3,3-dimetilciclohexilamino)-1-(4-((5R,7R)-7- hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin- 4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)-2-(tiofen-2-il)propan-1-ona; (S)-2-(5-bromotiofen-2-il)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(5-bromotiofen-2-il)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(5-bromotiofen-2-il)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-4- ilamino)propan-1-ona; (R)-2-(5-bromopiridin-2-il)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3- (isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(5-bromopiridin-2-il)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(5-bromotiofen-2-il)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7- diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-4- ilamino)propan-1-ona; (S)-2-(5-bromotiofen-2-il)-3-(ciclopropilmetilamino)-1-(4- ((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4- il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(5-clorotiofen-2-il)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-4- ilamino)propan-1-ona; (S)-2-(5-clorotiofen-2-il)-1-(4-((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona; (S)-2-(5-clorotiofen-2-il)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro- 5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-4- ilamino)propan-1-ona; (S)-2-(5-clorotiofen-2-il)-3-(ciclopropilmetilamino)-1-(4- ((5R,7R)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4- il)piperazin-1-il)propan-1-ona; (S)-2-(5-clorotiofen-2-il)-3-(ciclopropilmetilamino)-1-(4- ((5R,7S)-7-hidroxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin- 1-il)propan-1-ona; e sais dos mesmos.
[082] Outra realização inclui inibidores de AKT de Fórmula I,incluindo os compostos:
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; e sais dos mesmos.
PREPARAÇÃO DE COMPOSTOS DE FÓRMULA I
[083] Os compostos de Fórmula I podem ser preparados de acordo com os métodos descritos na Publicação de Patente no U.S. 2008/0051399 (Pedido de Patente no de série U.S. 11/773.949, depositada em 5 de julho de 2007, intitulada “Hydroxylated e Methoxylated Pyrimidyl Cyclopentanes as AKT Protein Kinase Inhibitors”).
[084] Os compostos de Fórmula I podem ser preparados individualmente ou como bibliotecas de composto que compreendem pelo menos 2, por exemplo, 5 a 1.000 compostos, ou 10 a 100 compostos. As bibliotecas de compostos de Fórmula I podem ser preparadas através de uma abordagem de ‘mistura e divisão’ combinatória ou através de múltiplas sínteses paralelas com o uso de química de fase sólida ou de fase de solução.
[085] Para propósitos ilustrativos, os Esquemas 1 a 4 mostram um método geral para preparação dos compostos de Fórmula I assim como intermediários fundamentais. Aqueles indivíduos versados na técnica observarão que outras rotas sintéticas podem ser usadas. Embora reagentes e materiais de partida específicos sejam representados nos Esquemas e discutidos abaixo, outros reagentes e materiais de partida podem ser facilmente substituídos para fornecer uma variedade de condições de reação e/ou derivados. Além disso, muitos dos compostos preparados através dos métodos descritos abaixo podem ser modificados adicionalmente à luz desta revelação com o uso de química convencional bem conhecida àqueles indivíduos versados na técnica.
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ESQUEMA 1
[086] O Esquema 1 mostra um método de preparação do composto 10 de Fórmula I em que R1 é H, R2 é OH e R5 é H. A formação de 1.Acilação 2. HC1 primidina 2 pode ser realizada auavés da reação do ceto éster 1 com tioureia na presença de uma base tal como KOH em um solvente apropriado, tal como etanol. Após a redução do grupo mercapto do composto 2 sob condições de redução padrões (por exemplo, Ni de Raney e NH4OH) para fornecer o composto 3, a hidroxipirimidina 3 pode ser clorada sob condições padrões (por exemplo, POCl3 em DIEA/DCE) para fornecer o composto 4. Em seguida, o composto 4 é oxidado sob condições padrões (por exemplo, MCPBA em um solvente apropriado tal como CHCl3) para dar o óxido de óxido de pirimidina 5. O tratamento do óxido de pirimidina com anidrido acético dá o produto de redisposição 6. O composto 7 é obtido reagindo-se o composto 6 com uma piperidina apropriadamente substituída sob condições de reação de SNAr padrões para fornecer o composto 7. O composto 7 é hidrolisado para fornecer o composto 8, que é desprotegido, em seguida, para produzir o intermediário 9. A acilação da piperazinil ciclopenta[d]pirimidina 9 com um aminoácido apropriado na presença de um reagente de acoplamento tal como HBTU, seguida por desproteção se necessário, dá o composto 10 de Fórmula I.
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ESQUEMA 2
[087] O Esquema 2 mostra um método de preparação dos compostos 22, 25 e 27 de Fórmula I em que R1, R2 e R5 são metila. De acordo com o Esquema 2, a bromação de (+)-pulegona 11 com bromina dá o dibrometo 12. O tratamento do dibrometo 12 com uma base tal como etóxido de sódio fornece o pulegenato 13. A ozonólise do pulegenato 13 dá o cetoéster 14. O tratamento do ceto éster 14 com tioureia na presença de uma base tal como KOH em etanol, seguida por redução do grupo mercapto sob condições padrões (por exemplo, catalisador de Ni de Raney em amônia) fornece a hidroxipirimidina 16. A cloração da hidroxipirimidina 16 sob condições padrões (por exemplo, POCl3) fornece a 4-cloropirimidina 17. A oxidação da 4-cloropirimidina 17 com um agente oxidante tal como MCPBA ou peróxido de hidrogênio fornece o N- óxido 18. A redisposição do N-óxido 18 com o anidrido acético produz o intermediário 19. O composto 19 é reagido com a piperazina desejada de acordo com o procedimento descrito no Esquema 1 para fornecer o composto 20 em que R5 é H e 23 em que R5 é Me. Os compostos 20 e 23 são submetidos a separação quiral com o uso de HPLC com quiral estacionário e, em seguida, hidrolisados mediante tratamento com uma base tal como hidróxido de lítio para fornecer os compostos 21 e 24, respectivamente. Após desproteção, os compostos 21 e 24 são reagidos, em seguida, com o aminoácido apropriado para fornecer os compostos 22 e 25, respectivamente.
[088] Alternativamente, o grupo 7-hidróxi do composto 24 pode ser alquilado com reagente de alquilação tal como halogeneto de alquila na presença de uma base tal como NaH ou KOH para fornecer o composto 26 em que R2 é Me. Após a desproteção, o composto 26 é reagido, em seguida, com o aminoácido apropriado para fornecer o composto 27.
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ESQUEMA 3
[089] O Esquema 3 mostra um método alternativo de preparação dos compostos 73 e 74. De acordo com o Esquema 3, a aminação de 14 com o uso de um sínton de amônia dá 63. A formação de pirimidina com o uso de, por exemplo, formato de amônio na presença de formamida em 50 °C a 250 °C e/ou em pressão elevada dá a unidade bicíclica 64. A ativação de 64 com o uso de, por exemplo, POCl3 ou SOCl2 dá a pirimidina ativada 65. O deslocamento desse grupo de saída, com o uso de uma piperidina substituída/protegida adequada em 0 °C a 150 °C dá a piperidina 66. A oxidação, com o uso de, por exemplo, ácido m-cloroperoxibenzoico (“MCPBA” ou “m-CPBA”) ou Oxone® em -20 °C a 50 °C dá o N-óxido 67. O tratamento com um agente de acilação (por exemplo, anidrido acético) seguido por aquecimento (40 °C a 200 °C) causa a redisposição para dar 68. A hidrólise, com o uso de, por exemplo, LiOH ou NaOH em 0 °C a 50 °C dá o álcool 69. A oxidação, com o uso de, por exemplo, condições de Swern,complexo de piridina-SO3 ou MnO4 em temperaturas adequadas dá a cetona 70. A redução assimétrica com o uso de, por exemplo, um catalisador quiral catalítico na presença de hidrogênio, o catalisador de CBS ou um agente redutor de boroidreto na presença de um ligante quiral dá origem à estereoquímica (R) ou à (S) no álcool 71 ou 72. Alternativamente, um agente redutor não quiral podeser usado (por exemplo, H2, Pd/C), permitindo que o grupo metila na unidade de ciclopentano forneça seletividade facial e, finalmente, diastereosseletividade. Se a redução der uma diastereosseletividade inferior, os diastereômeros podem ser separados através de (por exemplo) cromatografia, cristalização ou derivatização. Finalmente, a desproteção do grupo Boc, com o uso de, por exemplo, ácido em 0 °C a 50 °C, a acilação com o uso de um aminoácido apropriadamente funcionalizado e funcionalização final da amina desse aminoácido (por exemplo, remoção de qualquer grupo de proteção, alquilação, acilação ou aminação redutiva para introduzir novos substituintes) dá origem aos compostos finais 73 e 74.
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ESQUEMA 4
[090] A introdução de um auxiliar quiral (por exemplo,oxazolidinona de Evans, etc.) ao composto (1) pode ser realizada através de procedimentos de acilação padrões para dar o conjugado (2). Por exemplo, o tratamento do ácido com um agente de ativação (por exemplo, COCl2) ou formação de anidrido misturado (por exemplo, cloreto de 2,2-dimetilpropanoil) na presença de uma base amina em -20 °C a 100 °C seguido pelo tratamento com o auxiliar quiral apropriado (X) dá o composto (2). A estereoquímica e escolha do auxiliar quiral pode determinar a estereoquímica do centro quiral recentemente criado e da diastereoseletividade. O tratamento do composto (2) com um ácido de Lewis (por exemplo, TiCl4) em temperatura baixa (por exemplo, -20 °C a -100 °C) e uma base amina (por exemplo, base de Hunig) seguido pelo uso de um precursor de íon de imínio apropriadamente substituído (3) em temperatura baixa dá origem, em seguida, ao composto (4). Pode-se esperar que todos dentre a temperatura, o ácido de Lewis e o auxiliar quiral influenciem a diastereoseletividade do aduto de adição. Finalmente, a saponificação sob condições moderadas (por exemplo, LiOH/H2O em -10 °C a 30 °C) dá origem ao ácido desejado (5).
[091] Em outra realização, o inibidor de quinase de AKT é inibidor de pan-AKT, competitivo de ATP, de Fórmula II:
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e estereoisômeros, tautômeros ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, em que: G é fenila opcionalmente substituída por um a três grupos Ra ou uma heteroarila com 5 a 6 membros opcionalmente substituída por um halogênio; R1 e R1a são independentemente selecionados dentre H, Me, CF3, CHF2 ou CH2F; R2 é H, F ou -OH; R2a é H; R3 é H; R4 é H, ou alquila C1-C4 opcionalmente substituída por F, -OH ou - O(cicloalquila C1-C3); R5 e R5a são independentemente selecionados dentre H e alquila C1-C4, ou R5 e R5a juntamente com o átomo ao qual os mesmos são fixados formam uma cicloalquila com 5 a 6 membros ou um heterociclo com 5 a 6 membros, em que o heterociclo tem um heteroátomo de oxigênio; cada Ra é independentemente halogênio, alquila C1-C6, cicloalquila C3-C6, -O-(alquila C1-C6), CF3, -OCF3, S(alquila C1-C6), CN, -OCH2-fenila, NH2, - NO2, -NH-(alquila C1-C6), -N-(alquila C1-C6)2, piperidina, pirrolidina, CH2F, CHF2, -OCH2F, -OCHF2, -OH, -SO2(alquila C1-C6), C(O)NH2, C(O)NH(alquila C1-C6), e C(O)N(alquila C1-C6)2; e j é 1 ou 2.
[092] Outra realização inclui compostos de inibidor de AKT, incluindo:
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[093] Em uma realização, o inibidor de AKT é um composto das fórmulas acima selecionado dentre GDC-0068.
[094] Os compostos de Fórmula II podem ser preparados de acordo com os métodos descritos no documento WO 2009006567, para todos os propósitos.
[095] Em uma realização, o inibidor de AKT é um inibidor de AKT alostérico de Fórmula III:
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em que, R1 e R2 são independentemente hidrogênio, alquila C1-C5, hidroxila, amina ou alcóxi C1-5; p é um número inteiro de 1 a 6; A é um anel heteroaromático ou aromático, tricíclico, bicíclico ou cíclico de 5 a 14 carbonos, que pode ser opcionalmente substituído por halogênio, OH, amino, dialquilamino, monoalquilamino, alquila C1-C6 ou fenila, que é opcionalmente substituído por halogênio, OH, cicloalquila C1-C3 ou ciclopropilmetila; e em uma realização A tem uma das estruturas a seguir:
Figure img0017
em que R3 e R4 são, cada um, independentemente hidrogênio, halogênio, OH, amino, dialquilamino, monoalquilamino ou alquila C1-C6, que é opcionalmente substituída por halogênio, ciclopropilmetila; opcionalmente substituído por halogênio, monoalquilamino ou alquila C1-C6, que é opcionalmente substituído por halogênio, OH, cicloalquila C1-C3 ou ciclopropilmetila; em uma realização R5 é fenila; B é um anel heterocíclico ou cíclico, heteroaromático, aromático que tem a fórmula:
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em que, Q, T, X e Y são, cada um, independentemente
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selecionados dentre o grupo que consiste em –CH, -CH2, C=O, N ou O; Z é -CH, -CH2, C=O, N, O ou –C=C–; R6 e R7 são independentemente selecionados dentre o grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, carbonila e um anel heteroaromático ou aromático com 5 a 6 membros opcionalmente substituído por halogênio, OH, amino, dialquilamino, monoalquilamino ou alquila C1-C6, que é opcionalmente substituído por halogênio, OH, cicloalquila C1-C3 ou ciclopropilmetila; em uma realização, R6 ou R7 é piridinila, ou R6 e R7 são tomados juntos para formar um anel heterocíclico ou cíclico, heteroaromático, aromático com 5 a 6 membros, que pode ser opcionalmente substituído por halogênio, OH, amino, dialquilamino, monoalquilamino ou alquila C1-C6, que é opcionalmente substituído por halogênio, OH, cicloalquila C1-C3 ou ciclopropilmetila; em uma realização, B tem uma das estruturas a seguir: em que X, Y, Q, R6 e R7 são conforme descrito acima, e X’, Q’ e T’ são -CH ou N.
[096] Outra realização inclui um inibidor de AKT alostérico que tem a fórmula:
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em que: a é 0 ou 1; b é 0 ou 1; m é 0, 1 ou 2; n é 0, 1 ou 2; p é 0, 1 ou 2; r é 0 ou 1; s é 0 ou 1; Q é selecionados dentre: --NR7R8,
Figure img0021
R1 é independentemente selecionado dentre (C=O)aObC1-C6 alquila, (C=O)aObarila, alquenila C2-C6, alquenila C2-C6, (C=O)aObheterociclila, (C=O)aObC3-C6 cicloalquila, CO2H, halogênio, CN, OH, ObC1-C6 perfluoroalquila, Oa(C=O)bNR7R8, NRc(C=O)NR7R8, S(O)mRa, S(O)2NR7R8, NRcS(O)mRa, oxo, CHO, NO2, NRc(C=O)ObRa, O(C=O)ObC1-C6 alquila, O(C=O)ObC3-C6 cicloalquila, O(C=O)Obarila, e O(C=O)Ob-heterociclo, em que as ditas alquila, arila, alquenila, alquinila, heterociclila e cicloalquila são opcionalmente substituídas com um ou mais substituintes selecionados dentre Rz; R2 é independentemente selecionado dentre alquila C1-C6, arila, heterociclila, CO2H, halo, CN, OH e S(O)2NR7R8, em que as ditas alquila, arila e heterociclila são opcionalmente substituídas com um, dois ou três substituintes selecionados dentre Rz; R7 e R8 são independentemente selecionados dentre H, (C=O)ObC1-C10 alquila, (C=O)ObC3-C8 cicloalquila, (C=O)Obarila, (C=O)Obheterociclila, alquila C1-C10, arila, alquenila C2-C10, alquenila C2-C10, heterociclila, cicloalquila C3-C8, SO2Ra e (C=O)NRb2, em que as ditas alquila, cicloalquila, arila, heterociclila, alquenila e alquinila são opcionalmente substituídas com um ou mais substituintes selecionados dentre Rz, ou R7 e R8 podem ser tomados juntamente com o nitrogênio ao qual os mesmos são fixados para formar um heterociclo bicíclico ou monocíclico com 5 a 7 membros em cada anel e contendo opcionalmente, além do nitrogênio, um ou dois heteroátomos adicionais selecionados dentre N, O e S, o dito heterociclo bicíclico ou monocíclico opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados dentre Rz; Rz é selecionado dentre: (C=O)rOs(C1-C10) alquila, Or(C1- C3)perfluoroalquila, (C0-C6)alquileno-S(O)mRa, oxo, OH, halo, CN, (C=O)rOs(C2- C10) alquenila, (C=O)rOs(C2-C10) alquinila, (C=O)rOs(C3-C6) cicloalquila, (C=O)rOs(C0-C6) alquileno-arila, (C=O)rOs(C0-C6) alquileno-heterociclila, (C=O)rOs(C0-C6) alquileno-N(Rb)2, C(O)Ra, (C0-C6)alquileno-CO2Ra, C(O)H, (C0- C6)alquileno-CO2H, C(O)N(Rb)2, S(O)mRa, e S(O)2N(Rb)2 NRc(C=O)ObRa, O(C=O)ObC1-C10 alquila, O(C=O)ObC3-C8 cicloalquila, O(C=O)Obarila, e O(C=O)Ob-heterociclo, em que as ditas alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila e heterociclila são opcionalmente substituídas com até três substituintes selecionados dentre Rb, OH, alcóxi (C1-C6), halogênio, CO2H, CN, O(C=O)C1-C6 alquila, oxo, e N(Rb)2; Ra é alquila C1-C6, cicloalquila C3-C6, arila ou heterociclila; e Rb é H, alquila C1-C6, arila, heterociclila, cicloalquila C3-C6, (C=O)OC1-C6 alquila, (C=O)C1-C6 alquila ou S(O)2Ra; Rc é selecionado dentre: H, alquila C1-C6, arila, alquenila C2-C6, alquenila C2-C6, heterociclila, cicloalquila C3-C8 e perfluoroalquila C1-C6, em que as ditas alquila, cicloalquila, arila, heterociclila, alquenila e alquinila são opcionalmente substituídas com um ou mais substituintes selecionados dentre Rz; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um estereoisômero dos mesmos.
[097] Outra realização inclui um inibidor de AKT alostérico que tem a fórmula:
Figure img0022
em que a é 0 ou 1; b é 0 ou 1; m é 0, 1 ou 2; n é 0, 1, 2 ou 3; p é 0, 1 ou 2; r é 0 ou 1; s é 0 ou 1; u, v, w e x são independentemente selecionados dentre: CH e N, contanto que somente um dentre u, v, w e x possa ser N; Q é selecionados dentre:--NR5R6,
Figure img0023
R1 é independentemente selecionado dentre (C=O)aObC1-C6 alquila, (C=O)aObarila, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, (C=O)aObheterociclila, (C=O)aObC3-C6 cicloalquila, CO2H, halogênio, CN, OH, ObC1-C6 perfluoroalquila, Oa(C=O)bNR7R8, NRc(C=O)NR7R8, S(O)mRa, S(O)2NR7R8, NRcS(O)mRa, oxo, CHO, NO2, NRc(C=O)ObRa, O(C=O)ObC1-C6 alquila, O(C=O)ObC3-C6 cicloalquila, O(C=O)Obarila, e O(C=O)Ob-heterociclo, em que as ditas alquila, arila, alquenila, alquinila, heterociclila e cicloalquila são opcionalmente substituídas com um ou mais substituintes selecionados dentre Rz; R2 é independentemente selecionado dentre alquila C1-C6, arila, heterociclila, CO2H, halo, CN, OH e S(O)2NR7R8, em que as ditas alquila, arila e heterociclila são opcionalmente substituídas com um, dois ou três substituintes selecionados dentre Rz; R7 e R8 são independentemente selecionados dentre H, (C=O)ObC1-C10 alquila, (C=O)ObC3-C8 cicloalquila, (C=O)Obarila, (C=O)Obheterociclila, alquila C1-C10, arila, alquenila C2-C10, alquenila C2-C10, heterociclila, cicloalquila C3-C8, SO2Ra e (C=O)NRb2, em que as ditas alquila, cicloalquila, arila, heterociclila, alquenila e alquinila são opcionalmente substituídas com um ou mais substituintes selecionados dentre Rz, ou R7 e R8 podem ser tomados juntamente com o nitrogênio ao qual os mesmos são fixados para formar um heterociclo bicíclico ou monocíclico com 5 a 7 membros em cada anel e contendo opcionalmente, além do nitrogênio, um ou dois heteroátomos adicionais selecionados dentre N, O e S, o dito heterociclo bicíclico ou monocíclico opcionalmente substituída por um ou mais substituintes selecionados dentre Rz; Rz é selecionado dentre: (C=O)rOs(C1-C10) alquila, Or(C1- C3)perfluoroalquila, (C0-C6)alquileno-S(O)mRa, oxo, OH, halo, CN, (C=O)rOs(C2- C10) alquenila, (C=O)rOs(C2-C10) alquinila, (C=O)rOs(C3-C6) cicloalquila, (C=O)rOs(C0-C6) alquileno-arila, (C=O)rOs(C0-C6) alquileno-heterociclila, (C=O)rOs(C0-C6) alquileno-N(Rb)2, C(O)Ra, (C0-C6)alquileno-CO2Ra, C(O)H, (C0- C6)alquileno-CO2H, C(O)N(Rb)2, S(O)mRa, e S(O)2N(Rb)2 NRc(C=O)ObRa, O(C=O)ObC1-C10 alquila, O(C=O)ObC3-C8 cicloalquila, O(C=O)Obarila, e O(C=O)Ob-heterociclo, em que as ditas alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila e heterociclila são opcionalmente substituídas com até três substituintes selecionados dentre Rb, OH, (C1-C6)alcoxi, halogênio, CO2H, CN, O(C=O)C1-C6 alquila, oxo, e N(Rb)2; Ra é alquila C1-C6, cicloalquila C3-C6, arila ou heterociclila; e Rb é H, alquila C1-C6, arila, heterociclila, cicloalquila C3-C6, (C=O)OC1-C6 alquila, (C=O)C1-C6 alquila ou S(O)2Ra; Rc é selecionado dentre: H, alquila C1-C6, arila, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, heterociclila, cicloalquila C3-C8 e perfluoroalquila C1-C6, em que as ditas alquila, cicloalquila, arila, heterociclila, alquenila e alquinila são opcionalmente substituídas com um ou mais substituintes selecionados dentre Rz; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um estereoisômero dos mesmos.
[098] Outra realização inclui um inibidor de AKT alostérico que tem a fórmula:
Figure img0024
em que a é 0 ou 1; b é 0 ou 1; m é 0, 1 ou 2; n é 0, 1, 2 ou 3; p é 0, 1 ou 2; r é 0 ou 1; s é 0 ou 1; u, v e x são independentemente selecionados dentre CH e N; W é uma ligação, CH ou N; Q é selecionado dentre:--NR5R6,
Figure img0025
R1 é independentemente selecionado dentre (C=O)aObC1-C6 alquila, (C=O)aObarila, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, (C=O)aObheterociclila, (C=O)aObC3-C6 cicloalquila, CO2H, halogênio, CN, OH, ObC1-C6 perfluoroalquila, Oa(C=O)bNR7R8, NRc(C=O)NR7R8, S(O)mRa, S(O)2NR7R8, NRcS(O)mRa, oxo, CHO, NO2, NRc(C=O)ObRa, O(C=O)ObC1-C6 alquila, O(C=O)ObC3-C6 cicloalquila, O(C=O)Obarila e O(C=O)Ob-heterociclo, em que as ditas alquila, arila, alquenila, alquinila, heterociclila e cicloalquila são opcionalmente substituídas com um ou mais substituintes selecionados dentre Rz; R2 é independentemente selecionados dentre alquila C1-C6, arila, heterociclila, CO2H, halo, CN, OH e S(O)2NR7R8, em que as ditas alquila, arila e heterociclila são opcionalmente substituídas com um, dois ou três substituintes selecionados dentre Rz; R7 e R8 são independentemente selecionados dentre H, (C=O)ObC1-C10 alquila, (C=O)ObC3-C8 cicloalquila, (C=O)Obarila, (C=O)Obheterociclila, alquila C1-C10, arila, alquenila C2-C10, alquenila C2-C10, heterociclila, cicloalquila C3-C8, SO2Ra e (C=O)NRb2, em que as ditas alquila, cicloalquila, arila, heterociclila, alquenila e alquinila são opcionalmente substituídas com um ou mais substituintes selecionados dentre Rz, ou R7 e R8 podem ser tomados juntamente com o nitrogênio ao qual os mesmos são fixados para formar um heterociclo bicíclico ou monocíclico com 5 a 7 membros em cada anel e contendo opcionalmente, além do nitrogênio, um ou dois heteroátomos adicionais selecionados dentre N, O e S, o dito heterociclo bicíclico ou monocíclico opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados dentre Rz; Rz é selecionado dentre: (C=O)rOs(C1-C10) alquila, Or(C1- C3)perfluoroalquila, (C0-C6)alquileno-S(O)mRa , oxo, OH, halo, CN, (C=O)rOs(C2- C10) alquenila, (C=O)rOs(C2-C10) alquinila, (C=O)rOs(C3-C6) cicloalquila, (C=O)rOs(C0-C6) alquileno-arila, (C=O)rOs(C0-C6) alquileno-heterociclila, (C=O)rOs(C0-C6) alquileno-N(Rb)2, C(O)Ra, (C0-C6)alquileno-CO2Ra, C(O)H, (C0- C6)alquileno-CO2H, C(O)N(Rb)2, S(O)mRa, e S(O)2N(Rb)2 NRc(C=O)ObRa, O(C=O)ObC1-C10 alquila, O(C=O)ObC3-C8 cicloalquila, O(C=O)Obarila e O(C=O)Ob-heterociclo, em que as ditas alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila e heterociclila são opcionalmente substituídas com até três substituintes selecionados dentre Rb, OH, (C1-C6)alcoxi, halogênio, CO2H, CN, O(C=O)C1-C6 alquila, oxo e N(Rb)2; Ra é alquila C1-C6, cicloalquila C3-C6, arila ou heterociclila; e Rb é H, alquila C1-C6, arila, heterociclila, cicloalquila C3-C6, (C=O)OC1-C6 alquila, (C=O)C1-C6 alquila ou S(O) 2Ra; Rc é selecionado dentre: H, alquila C1-C6, arila, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, heterociclila, cicloalquila C3-C8 e perfluoroalquila C1-C6, em que as ditas alquila, cicloalquila, arila, heterociclila, alquenila e alquinila são opcionalmente substituída por um ou mais substituintes selecionados dentre Rz; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou um estereoisômero dos mesmos.
[099] Outra realização inclui um inibidor de AKT alostérico selecionado dentre:
Figure img0026
e sais dos mesmos.
[0100] Em uma realização, o inibidor de quinase é um inibidor competitivo de ATP seletivo de AKT-1, e é um composto de Fórmula IV:
Figure img0027
IV e sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, em que Ar é selecionado dentre arila, arila substituída, heteroarila e heteroarila substituída; Q é selecionado dentre cicloalquila, cicloalquila substituída, cicloheteroalquila, cicloheteroalquila substituída, arila, arila substituída, heteroarila e heteroarila substituída; R1 e R2 são independentemente selecionados dentre hidrogênio, alquila, alquila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterocicloalquila, heterocicloalquila substituída, arila, arila substituída, heteroarila e heteroarila substituída; ou R1 e R2 juntamente com o nitrogênio ao qual R1 e R2 são fixados formam um anel escolhido dentre cicloheteroalquila, cicloheteroalquila substituída, heteroarila e heteroarila substituída; p é selecionado dentre 2, 3, 4, e 5; e q é 0 ou 1.
[0101] Os compostos de Fórmula IV incluem:
Figure img0028
, e sais dos mesmos.
[0102] Outra realização inclui os inibidores de AKT tal como perifosina que tem a fórmula:
Figure img0029
[0103] Outra realização inclui os inibidores de AKT tal como anticorpos anti-AKT e RNA ou DNA anti-AKT.
[0104] Outra realização inclui os inibidores de AKT que tem a fórmula:
Figure img0030
e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
[0105] Outra realização inclui inibidores de AKT tais como oligonucleotídeos, incluindo oligonucleotídeos antissenso que têm as sequências: 5' ccagcccccaccagtccact 3' (SEQ ID NO:1), 5' cgccaaggagatcatgcagc 3' (SEQ ID NO:2), 5' gctgcatgatctccttggcg 3' (SEQ ID NO:3), 5' agatagctggtgacagacag 3' (SEQ ID NO:4), 5' cgtggagagatcatctgagg 3' (SEQ ID NO:5), 5' tcgaaaaggtcaagtgctac 3' (SEQ ID NO:6), 5' tggtgcagcggcagcggcag 3' (SEQ ID NO:7)e 5' ggcgcgagcgcgggcctagc 3' (SEQ ID NO:8).
[0106] Algumas realizações da invenção serão ilustradas agora pelos Exemplos não limitantes a seguir.
ATIVAÇÃO DE MUTAÇÕES EM AKT1
[0107] As requerentes constataram que determinadas mutações em AKT1 podem levar a interações interrompidas entre o domínio de AKT1 PH e o domínio de quinase. Uma interrupção entre esses domínios, causada pela(s) mutação(ões), parece levar à fosforilação constitutiva de AKT1 e a sinalização de AKT1 constitutiva. Esses efeitos também permitem a transformação de células. Essas mutações conferem resistência a inibidores de Akt alostéricos e de PI3K. Em conformidade, a presença de tais mutações indica que a dosagem eficaz para inibidores de Akt alostéricos e de PI3K será superior e também indica que os inibidores diferentes dos inibidores de Akt alostéricos e/ou de PI3K devem ser usados, tal como inibidores competitivos de Akt.
[0108] AKT e as interações do domínio de quinase e de PH estão representadas nas Figuras 1A e 1B. As requerentes apresentam também as localizações de interações entre o domínio de quinase e de PH na Figura 1C.
[0109] Os resultados que indicam que as mutações sintéticas em sítios consideradas por interromper as interações de domínio de PH com o domínio de quinase levam à fosforilação constitutiva de Akt são mostrados em Figura 2.
[0110] As mutações somáticas encontrados em pacientes de câncer são mostradas na Figura 3.
[0111] As requerentes observaram que as mutações somáticas levam à fosforilação de Akt constitutivo e também levam à sinalização de Akt constitutivo (consulte a Figura 4).
[0112] As requerentes demonstraram também que os mutantes de Akt1 podem transformar as células (consulte a Figura 5).
[0113] Curiosamente, os mutantes de Akt1 conferem resistência a inibidores de PI3K e a inibidores alostéricos de AKT. Essa descoberta de um biomarcador que indica quais regimes de tratamento podem ser mais benéficos para um paciente que tem tal biomarcador, será benéfica. Em conformidade, essas mutações são importantes para o diagnóstico de câncer e para determinar o tratamento terapêutico apropriado.
[0114] Adicionalmente, as mutações de Akt também afetam a localização de membrana de Akt, com translocação mínima para a membrana de plasma.
[0115] Em determinadas realizações, a invenção fornece moléculas de ácido nucleico (por exemplo, moléculas de DNA ou RNA), que podem ser isoladas ou purificadas, que codificam os mutantes de AKT, e para as sequências de aminoácido dos mutantes de AKT. EM determinadas realizações, a invenção fornece métodos de uso de tais mutantes para triagem de compostos inibidores de AKT potenciais.
MUTAÇÕES QUE LEVAM À ATIVAÇÃO CONSTITUTIVA DE AKT
[0116] A proteína quinase AKT, um regulador fundamental de proliferação e sobrevivência celular, é frequentemente hiperativado em cânceres humanos. As interações de domínio quinase (KD)/domínio de homologia pleckstrina intramolecular (PH) são importantes na manutenção de AKT em uma situação inativa. A ativação de AKT procede seguindo uma alteração de conformação que desaloja a PH do domínio de quinase. A fim de entender essas interações autoinibidoras, as mutações na interface de PH-KD foram geradas, e foi observado que uma maioria das mesmas leva à ativação constitutiva de AKT. Tais mutações são provavelmente outro mecanismo através do qual a ativação pode ocorrer em cânceres humanos e outras doenças. Em suporte disso, as mutações somáticas em AKT1 na interface de PH-KD foram observadas que não foram anteriormente descritas em cânceres humanos. Ademais, os mutantes somáticos de AKT1 são ativos de modo constitutivo, levando à sinalização oncogênica. Adicionalmente, os mutantes de AKT1 não são inibidos efetivamente pelos inibidores de AKT alostéricos, consistente com a necessidade por uma interface de PH-KD intacta para a inibição alostérica. Esses resultados têm implicações importantes para a intervenção terapêutica em pacientes com mutações de AKT na interface de PH-KD.
[0117] Neste estudo, uma análise sistemática foi realizada para entender os efeitos de perturbação das interações de PH-KD na ativação de AKT. A interrupção de contatos de interdomínio através de resíduos de mutação na interface de PH-KD leva à ativação de AKT. Devido a isso, um grande número de tumores humanos foi sequenciado para observar se as mutações nos sítios de contato de PH-KD ocorrem em cânceres. Curiosamente, foi observado que tumores humanos que carregam mutações em AKT nesses sítios, indicando a interrupção das interações de PH-KD, são um mecanismo importante para a ativação de AKT em cânceres. Essas mutações somáticas específicas tumorais foram testadas para a atividade e foi mostrado que as mesmas são oncogênicas. Além disso, os inibidores de AKT foram testados contra esses mutantes, e os inibidores competitivos de ATP são mais eficazes em comparação aos inibidores de AKT alostéricos.
A PERTURBAÇÃO DE CONTATOS DE DOMÍNIO DE QUINASE-PH LEVA À ATIVAÇÃO DE AKT
[0118] Para avaliar a situação de ativação de AKT, um ensaio foi desenvolvido que mediu a capacidade de AKT para promover a sobrevivência independente de fator de crescimento de células de BaF3 dependentes de IL-3. As células pró-B de BaF3 podem ser tornadas independentes de fator de crescimento através de expressão forçada de oncogenes. As células de BaF3 que expressam AKT1 de tipo selvagem (WT AKT1), miristoiladas (Myr) ou o mutante de AKT1 E17K foram gerados e foi observado que o AKT ativado pelo mesmo foi inca az de promover independência de fator. Entretanto, a coexpresssão de AKT1 Myr ou o AKT1 E17K oncogênico e uma forma ativada do MEK1 de quinase MAP2 (Mek1 ΔN3, S218E, S222D) promoveu sobrevivência e crescimento independentes de fator de células de BaF3. Embora o AKT1 WT em combinação com o MEK1 ativo (MEK1 N3) tenha mostrado alguma atividade neste ensaio, o mesmo foi menos eficaz em comparação ao AKT1 mutante.
[0119] O ensaio de BaF3 foi usado para investigar a consequência de interrupção de interações de PH-KD. Com o uso da estrutura de comprimento total recentemente publicada de AKT1 (Wu et al., (2010). PLoS One 5, e12913), os resíduos foram identificados na interface de PH-KD. As mutações nesses sítios foram projetadas para comprometer a interação de PH-KD através da remoção de interações favoráveis, aumentando o volume estérico ou revertendo a carga de cadeias laterais envolvidas em contatos polares de interdomínio. Uma biblioteca de 35 tais mutantes de AKT1 foi gerada (Figura 16; Tabela 1). Além disso, foram incluídos na reunião um construto de mutante de AKT1 de E17K que serviu como um controle positivo e um clone de AKT1 WT com uma mutação silenciosa que serviu como um controle negativo para a atividade. Três bibliotecas de mutante de AKT foram usadas para derivar uma reunião de células de BaF3 que coexpressaram de modo estável os mutantes juntamente com MEK1 N3. Após permitir o crescimento na ausência de IL-3, a reunião de células foi amostrada em 3 dias e 4 dias pós retirada de IL-3 e a proporção de vários mutantes na reunião foi determinada em relação à entrada em 0 horas, com o uso de sequenciamento de próxima geração (Figura 16C). Cada mutação foi pontuada com base em uma razão normalizada de frequência observada em um dado momento em comparação à frequência de entrada e essas razões foram normalizadas, em seguida, às razões para AKT1 WT. Conforme esperado, AKT1 E17K foi mais do que 50 vezes enriquecido sobre o tipo selvagem. De modo similar, os mutantes tais como T81Y e D323A também foram profundamente enriquecidos (>15 vezes sobre WT) indicando que essas mutações levam à ativação de AKT. Outros mutantes, R23A, N53A, F55Y, L78T, Q79E, W80A, E191A, T195I, V270A, V271A, L321A, D325A e R328A mostraram enriquecimento moderado (2 a 6 vezes sobre WT no momento de 3 dias ou de 4 dias) no ensaio, e são provavelmente ativando (Figura 16D, Tabela 1).TABELA 1 - SUMÁRIO DE MUTAÇÕES DE PH-KD DE AKT1 E OS EFEITOS DAS MESMAS
Figure img0031
Figure img0032
Figure img0033
Figure img0034
Figure img0035
* Resíduos identificados como contatos interdomínio de estrutura de cristal de AKT1 (Wu et al, Plos One, 2010; PDB Código de Acesso 3O96) nd = não determinado
[0120] Para entender adicionalmente o efeito de mutantes de interface de PH-KD, as linhas de célula de NIH3T3 foram geradas através da expressão de modo estável de cada um dos mutantes de AKT1 e avaliou-se a situação de fosforilação de S473 e T308 (pT308 e pS473). Consistente com a triagem de ensaio de sobrevivência, os mutantes de N53A, F55Y, L78T, Q79E, W80A, T81Y, E191A, T195I, L321A, D323A, D325A e R328A mostraram fosforilação elevada em T308 e S473 (Figura 16E). Ademais, embora os mutantes de AKT1 N54A, V83D, E114A, L202F, V320A, N324K e Y326A tenham mostrado somente um enriquecimento moderado (~1,5 a 2 vezes sobre WT) na triagem de sobrevivência, os mesmos mostraram níveis elevados de pT308 e pS473. Esses resultados indicam que a interrupção dos contatos de PH-KD levam à fosforilação constitutiva de AKT.
IDENTIFICAÇÃO DE MUTAÇÕES DE SOMÁTICAS DE AKT EM CÂNCER
[0121] Dado que a perturbação da interface de PH-KD levou à ativação de AKT, foi avaliado se tais mutações ocorrem em tumores primários humanos. Para identificar as mutações de AKT potenciais, todos os éxons de codificação de AKT1, 2 e 3 foram sequenciados em um total de 394 amostras de tumor primário humano que consistem em 65 colorretais, 51 de mama, 48 adenocarcinoma (adeno)de pulmonar de célula não pequena (NSCLC), 43 de NSCLC (escamoso), 43 de carcinoma renal, 37 de melanoma, 33 gástricos, 32 de ovário, 15 de esôfago, 11 hepatocelular (HCC), 10 de câncer de pulmão de célula pequena (SCLC) e 6 outros (5 de célula grande de pulmão e 1 de outro câncer de pulmão). As mutações de AKT1 somáticas, de alteração de proteína, foram observadas em 4% de mama (2/51) e 1,5% de cólon (1/65). As mutações somáticas de AKT2 foram observadas em ~5% de NSCLC (adeno; 2/43) (Figura 17).
[0122] Além da mutação de E17K, há também uma mutação de AKT1 no códon 52, L52R. L52 está na interface de PH-KD e faz contatos hidrofóbicos com V270, V271, Y326 e a porção de metileno de R328 no domínio de quinase. Embora a mutação de L52A tenha aumentado o nível de fosforilação de AKT1 em comparação à WT, a mesma não levou a um aumento na sobrevivência no ensaio de BaF3. Entretanto, a mutação de L52R é mais provável de ser prejudicial para interações de PH-KD (e, portanto, promove a atividade de AKT1) visto que as interações hidrofóbicas favoráveis serão perdidas e uma interação desfavorável com R328 será introduzida. De modo similar, a mutação de D323H identificada em tumor de mama está localizada no domínio de quinase de AKT1 e é proximal a três resíduos básicos no domínio de PH (K14, R23 e R25) (Figura 1B, 2B). O mutante sintético D323A estava ativo de modo constitutivo, sugerindo que D323H também estará ativo de modo constitutivo visto que uma histidina seja ainda mais perturbadora para os contatos de interdomínio do que uma alanina (volume estérico aumentado; potencial para reversão de carga). O resíduo R96 está localizado na hélice de domínio de PH principal e está muito distante da interface de domínio de quinase e, portanto, o mesmo é improvável de promover a ativação através da interrupção de interações de PH-KD. A densidade de elétron não é observada para resíduos K189 a E198 na estrutura de cristal de AKT1 de comprimento total. Embora esse laço de domínio de quinase seja provavelmente proximal à extremidade de terminal C da hélice de domínio de PH, uma estimativa com base na estrutura de alterações de atividade de AKT1 associada com a mutação de K189N não é possível.TABELA 2: MUTAÇÕES DE ALTERAÇÃO DE PROTEÍNA DE FAMÍLIA AKT EM CÂNCERES HUMANOS
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SINAIS DE MUTANTES SOMÁTICOS DE AKT1 DE MODO CONSTITUTIVO E LEVAM À TRANSFORMAÇÃO
[0123] Para avaliar a relevância funcional das mutações somáticas de AKT1, os mutantes de L52R e D323H que são preditos por afetar as interações de PH-KD foram testados. Além disso, a mutação de K189N que ocorre no domínio de quinase foi testada. Esses mutantes foram testados quanto ao efeito dos mesmos na sinalização, com o uso de células de NIH3T3 que expressam de modo estável AKT1 WT etiquetado-FLAG de terminal N, AKT1 Miristoilado (Myr AKT1), ou os mutantes E17K, L52R, K189N e D323H. A análise de imunoblot mostrou que diferente do vetor transduzido ou as células AKT1 WT, todos os mutantes exceto por K189N, mostraram um aumento tanto em pT308 quanto pS473, similar ao Myr AKT1. Consistente com isso, observou-se um aumento concomitante na fosforilação dos substratos de AKT FOXO e proteína ribossômica S6 em células que expressam AKT1 mutante ou Myr em comparação a células que expressam o vetor vazio, WT AKT1, ou o mutante de K189N AKT1. Curiosamente, diferente do Myr AKT ou do mutante de L52R, a expressão de E17K ou D323H não resultou em fosforilação elevada do substrato de AKT PRAS40, sugerindo que esses mutantes podem engatar vias de efetor a jusante diferentes.
MUTANTES DE DOMÍNIO PH-QUINASE DE AKT1 ENFRAQUECEM AS INTERAÇÕES INTERDOMÍNIO E MOSTRAM TRANSLOCAÇÃO DE MEMBRANA DE PLASMA PREJUDICADA
[0124] Embora as mutações de AKT1 específicas de câncer, L52R e D323H, ocorram em posições preditas por interromper as interações PH-KD, as substituições de aminoácido observadas foram diferentes dos mutantes sintéticos gerados e analisados anteriormente. Para testar diretamente se essas mutações somáticas enfraquecem as interações interdomínio, um ensaio de 2 híbridos mamíferos foi realizado com o uso de construtos de AKT PH e KD fundidos ao domínio de ativação de VP16 (VP16 AD) e domínio de ligação de DNA de Gal4 (Gal4 DBD), respectivamente. A força da interação foi medida com o uso de um relator de luciferase em que a atividade de luciferase é proporcional à força da interação. O domínio de PH L52R /WT-KD e a combinação WT- PH/D323H KD mostraram uma redução de 50% no sinal de interação em comparação à WT-PH/WT-KD ou à E17K-PH/WT-KD, confirmando que os mutantes de L52R e D323H são deficientes na interação de PH-KD.
[0125] Para entender adicionalmente o mecanismo de ativação de mutantes de AKT, a localização celular do mesmo foi determinada. Em células em repouso, AKT1 de tipo selvagem está localizado de modo difuso ao longo de todo o citoplasma e núcleo e, em resposta ao estimulo mitogênico, é translocado rapidamente para a membrana de plasma, levando à ativação do mesmo.
[0126] O mutante de domínio de PH L52R foi testado quanto a localização subcelular e translocação de membrana com o uso de um construto de fusão de domínio GFP-AKT1 PH. Os construtos de fusão de GFP de domínio E17K AKT1 PH e WT serviram como controles. Na ausência de estímulo de fator de crescimento, enquanto o domínio de WT AKT1 PH foi distribuído ao longo de todo o citoplasma e núcleo, o domínio de E17K AKT1 PH foi localizado de modo constitutivo para a membrana de plasma. Em contraste ao domínio de E17K AKT1 PH, o domínio de L52R AKT1 PH foi distribuído ao longo do citoplasma e núcleo, comportando-se como o domínio de WT AKT1 PH. Entretanto, mediante estímulo de fator de crescimento, diferente do domínio de WT AKT1 PH, o domínio L52R PH mutante não se transloca para a membrana de plasma. Isso sugere que diferente do mutante de E17K que é ativado em resposta a localização e afinidade de lipídeo alterado, o mutante de L52R tem mais probabilidade de ser ativado no citoplasma, devido à ausência de interações autoinibidoras.
INTERRUPÇÃO DE INTERAÇÕES DE PH-KD AKT2 E AKT3 LEVA À ATIVAÇÃO DAS MESMAS
[0127] Considerando a arquitetura de domínio comum dos membros de família de AKT, se a interrupção das interações de PH-KD em AKT2 e AKT3 pode levar à ativação foi testado. Para testar isso, mutantes de AKT2 L52R e D324H e mutantes de AKT3 L51R e D320H (equivalente de AKT1 L52R e D323H) foram gerados, todos dos quais são preditos por interromper a interação de PH-KD. Visto que as mutações de AKT3 E17K podem ser observadas em melanoma, e a mutação de AKT2 E17K em hipoglicemina humana foi relatada, os mutantes de E17K AKT2 e AKT3 foram gerados, juntamente com mutações somáticas de AKT2 e AKT3 adicionais que foram identificadas em cânceres humanos. Além disso, Myr AKT2 e Myr AKT3 foram gerados como controles positivos. Os mutantes de AKT2 e AKT3 foram expressos de modo estável em células de NIH3T3 e a situação de fosforilação de T308 e S473 foi avaliado. AKT2 E17K, L52R e D324H, e AKT3 E17K, L51R e D320H, cada um, mostraram pT308 e pS473 elevados em comparação às células que expressam WT AKT2 ou AKT3. Consistente com a situação de ativação, esses mutantes de AKT2 e AKT3 tiveram capacidade de suportar a sobrevivência independente de fator de crescimento de células de BaF3 em combinação com MEK1 ativado. Curiosamente, o mutante de AKT2 R371H identificado em câncer humano também mostrou pT308 e pS473 elevado, mas não teve capacidade para promover a sobrevivência independente de fator de crescimento de BaF3. Os mutantes restantes (AKT2 V90L e R101L e AKT3 Q124L e G171R) não mostraram um aumento em pT308 e pS473 e não tiveram capacidade de suportar a sobrevivência independente de fator de crescimento de células de BaF3. A inspeção dos modelos de homologia gerados para AKT2 e AKT3 de comprimento total indica que essas mutações ocorrem, cada uma, em laços expostos à superfície e não são proximais à interface de PH-KD. Nota- se que embora AKT2 V90L e AKT3 Q124L estejam em laços não definidos na densidade de elétron de AKT1, as terminações desses laços não são proximais à interface de PH-KD. Portanto, a análise estrutural não oferece qualquer percepção em como AKT2 R371H tem capacidade para elevar a fosforilação, ou como quaisquer desses mutantes pode ser uma força de acionamento para os cânceres em que os mesmos foram identificados.
MUTANTES SOMÁTICOS DE AKT1 PROMOVEM ONCOGÊNESE IN VIVO
[0128] Os estudos anteriores mostraram que as células de BaF3 que expressam de modo estável oncogenes, quando implantadas em camundongos, promovem uma doença similar à leucemia, levando à redução em sobrevivência global. Visto que os mutantes de AKT1 cooperam com MEK1 ativo para promover crescimento independente de fator de células de BaF3, esse sistema modelo foi usado para testar o potencial tumorigênico das mesmas in vivo. Os camundongos implantados com as células de BaF3 que coexpressam MEK1 N3 e Myr AKT1 ou mutante AKT1 E17K, L52R ou D323H, mostraram uma sobrevivência mediana de 19 a 20,5 dias. Em contrapartida, os camundongos que receberam as células de BaF3 que coexpressam MEK1 N3 e AKT1 WT têm uma sobrevivência mediana significativamente mais longa de 29 dias. Isso é consistente com o fato de que AKT1 WT no contexto de MEK1 ativo teve capacidade para suportar sobrevivência independente de fator de células de BaF3, embora o efeito tenha sido modesto em comparação aos mutantes de AKT. Conforme esperado, os camundongos que receberam células de BaF3 de controle que expressaram MEK1 N3 individualmente estavam vivas no final do período de estudo de 55 dias. Necropsias foram realizadas em 19 dias pós- transplante, em uma coorte de 3 camundongos por grupo de tratamento para seguir a progressão de doença. Consistente com a sobrevivência global reduzida, uma proporção significativa de células de BaF3 etiquetadas com GFP foi observada na medula óssea e baços de camundongos que receberam AKT1 mutante, em comparação a camundongos que receberam WT AKT1 ou células de controle de vetor. Uma ampliação significativa do fígado e do baço em camundongos que expressam AKT1 mutante foi observada. O exame histológico de seções de medula óssea, baço e fígado corados com hematoxilina e eosina (H&E) mostrou a evidência de infiltração com blastos leucêmicos em camundongos que receberam células convertidas de AKT1 mutante em comparação àqueles que receberam o controle de vetor ou células de WT AKT1. Esses resultados confirmam o potencial de transformação dos mutantes de AKT1 in vivo.
MUTANTES DEFICIENTES DE INTERAÇÃO DE AKT1 PH-KD SÃO MENOS SENSÍVEIS A INIBIDORES ALOSTÉRICOS
[0129] Vários inibidores de AKT de molécula pequena alostéricos e competitivos de ATP estão em desenvolvimento e/ou experimentos clínicos (Mattmann et al., (2011). Expert Opin Ther Pat.; Pal et al., (2010). Expert Opin Investig Drugs 19, 1355 a 1366), Estudos anteriores mostraram que os inibidores alostéricos de AKT exigem a presença de uma interface de PH-KD intacta para a atividade dos mesmos. Considerando que alguns mutantes somáticos de AKT1 prejudicaram contatos de PH-KD, foi predito que inibidores alostéricos têm maior probabilidade de serem menos eficazes na inibição da atividade desses mutantes. A atividade de dois inibidores competitivos de ATP (GNE-692 Bencsik et al. (2010). Bioorg Med Chem Lett 20, 7037 a 7041) e GSK690693 (Rhodes et al. (2008). Cancer Res 68, 2366 a 2374) e dois inibidores alostéricos (Inibidor VIII (Lindsley et al., (2005). Bioorg Med Chem Lett 15, 761 a 764) e GNE-929 foram testados em enzimas de AKT1 mutante e WT de comprimento total recombinantes. O efeito dos inibidores na proliferação de células de NIH3T3 que expressam mutantes de WT ou AKT1 também foi testado.
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[0130] Em ensaios de atividade bioquímica, os inibidores competitivos de ATP GNE-692 e GSK690693 foram eficazes no bloqueio da atividade da enzima WT AKT1 (GNE-692 IC50 24,3 nM) assim como das enzimas mutantes(E17K, L52R e D323H; GNE-692 IC50 3,7 a 15,8 nM). De modo similar, os inibidores competitivos de ATP foram igualmente eficazes contra tanto WT quanto AKT1 mutante na célula com base no ensaio de proliferação. Em conformidade, os inibidores alostéricos, o Inibidor VIII e GNE-929 foram menos eficazes contra enzimas mutantes de comprimento total recombinantes (Inibidor VIII: IC50 268,4 nM para L52R; IC50>1 μM para D323H) em comparação a WT AKT1 (Inibidor VIII: IC50 119,3 nM; Figura 6C). Consistente com isso, em um ensaio com base na célula, o inibidor alostérico, o Inibidor VIII foi observado como sendo pelo menos 50% menos eficaz no bloqueio de proliferação de células que expressam AKT1 mutante em comparação a WT AKT.
[0131] Para confirmar que a sensibilidade reduzida dos mutantes aos inibidores alostéricos foi devido às interações de PH-KD prejudicadas, um ensaio de reconstituição bioquímico in vitro foi realizado com o uso de domínios de quinase e PH recombinantes purificados. Neste sistema, o Inibidor alostérico VIII quando ensaiado contra o domínio de quinase de AKT1, individualmente, foi incapaz de bloquear a atividade do mesmo. Entretanto, quando o domínio de WT PH purificado foi adicionado ao domínio de quinase e reconstituiu a enzima, o Inibidor VIII teve capacidade para bloquear a atividade da enzima, embora houvesse um aumento em três vezes em IC50 para a enzima reconstituída (IC50 238,8 nM) em comparação à enzima de WT de comprimento total (IC50 80,8 nM). Em contrapartida, a reconstituição com domínio de PH mutante (L52R ou E17K) prejudicou adicionalmente a capacidade do Inibidor VIII em bloquear AKT1 (L52R IC50 713,5 nM e E17K IC50 > 1μM). De modo similar, o Inibidor VIII não mostrou atividade quando o domínio de WT PH foi reconstituído com um domínio de quinase de D323H mutante. A falta de inibição de E17K por inibidores alostéricos sugere que além da afinidade aumentada para PIP2, essa mutação também pode afetar a interação de PH-KD que leva à ativação do mesmo. No ensaio de 2 híbridos com base na célula, o mutante de E17K não revelou um defeito na interação de PH-KD indicando que o mecanismo exato de ativação de E17K exige uma investigação adicional. Esses dados confirmam a importância de uma interface de PH-KD intacta para inibidores alostéricos de AKT1.
ENSAIOS DE BIOMARCADOR DE PD SUBSTITUTO
[0132] Phospho-GSK-3b em plasma rico em plaquetas (PRP) foi usado como um biomarcador de PD substituto para medir inibição de via de Akt em pacientes após o tratamento com GDC-0068 em momentos diferentes durante 22 dias. O sangue periférico foi coletado em tubo do tipo Vacutainer contendo 38% de citrato como um anticoagulante. O sangue foi girado em 200 g por 15 minutos em temperatura ambiente. A camada de PRP foi cuidadosamente retirada do tubo e, em seguida, lisada em um tampão contendo detergentes, inibidores de fosfatase e protease. Os níveis de GSK-3β totais e fosforilados em lisatos de PRP foram medidos com o uso de um ensaio de MSD multiplexado de phospho-GSK3 β /total-GSK3β. Os níveis de pGSk-3β foram normalizados para aos níveis de GSk-3β totais e a inibição pós-dose de pGSk-3β foi expressa como uma razão dos níveis de pré-dose para cada paciente. Uma resposta farmacológica dependente do tempo e da dose foi demonstrada, com uma diminuição no nível de pGSK3β de > 75% em doses > 200 mg.
MATRIZES DE PROTEÍNA DE FASE INVERSA
[0133] As biopsias de tumor por agulha grossa de pacientes tratados com GDCC0068 foram congeladas rapidamente em OCT e divididas em fatias de 8 um. O tecido foi lisado em tampão de lise de RPPA contendo TPER, 300 mM de NaCl e inibidores de fosfatase. As assinaturas de fosfoproteína dos lisatos foram analisadas com o uso de matriz de proteína de Fase Inversa: as amostras foram impressas em fatias de nitrocelulose e coradas com Sypro para determinar concentrações de proteína totais. Cada fatia foi corada com um anticorpo diferente em 4 °C durante a noite. Os dados foram normalizados, em seguida, para os níveis de proteína totais e efeitos espaciais foram removidos com o uso de normalização mediana de Quadrante. Diminuições de 60% a 70% em pPRAS40 e ~50% de diminuição em Ciclina D1 (em comparação com baselina) ocorreu em todos os 3 pacientes tratados em 400 mg diariamente. Para os métodos e visão geral de RPPA consulte: Reverse phase protein microarrays advance to use in clinical trials, Molecular Oncology. 2010 Dec;4(6):461 a 81, Mueller C et al. Em determinadas realizações, o câncer a ser tratado no presente documento compreende um ou mais dentre mutações de AKT, PI3k, PTEN e HER2 ou sinalização de aberrante AKT, PI3k, PTEN ou HER2. Em um exemplo, o câncer é câncer gástrico que compreende atividade de pAKT alta e situação nula ou baixa de PTEN.
[0134] Em um aspecto específico, a invenção fornece um método para tratamento de um paciente que tem um câncer que é associado com mutação de PTEN ou perda de expressão, amplificação ou mutação de AKT, mutação ou amplificação de PI3K, ou amplificação de Her2/ErbB2 que compreende administração de uma combinação da invenção ao paciente. Em outro aspecto, a invenção fornece um método para identificação de um paciente que tem um câncer que pode ser tratado com uma combinação da invenção que compreende determinar se o câncer do paciente está associado com a mutação de PTEN ou perda de expressão, a mutação ou amplificação de AKT, mutação ou amplificação de PI3K, ou amplificação de Her2/ErbB2, em que a associação do câncer do paciente com a mutação de PTEN ou perda de expressão, mutação ou amplificação de AKT, mutação ou amplificação de PI3K, ou amplificação de Her2/ErbB2 é indicativa de um câncer que pode ser tratado com uma combinação da invenção. Em um aspecto adicional, a invenção fornece um método que compreende adicionalmente o tratamento do paciente assim identificado com uma combinação da invenção.
[0135] Em outro exemplo, o câncer a ser tratado está associado com a situação nula, baixa ou positiva de PTEN, em combinação com a situação positiva ou negativa de HER2. Os exemplos incluem câncer gástrico que é (i) PTEN negativo (HScore menor do que aproximadamente 10, ou 0) e Her2 negativo, (ii) PTEN baixo (HScore menor do que aproximadamente 200) e Her2 negativo, (iii) PTEN negativo e Her2 positivo, ou (iv) PTEN positivo e Her2 negativo. Neste exemplo, o câncer pode ser tratado com uma combinação de um composto de fórmula I, por exemplo, GDC-0068 ou um sal do mesmo, e FOLFOX.
[0136] Embora determinadas realizações da invenção sejam descritas, e muitos detalhes tenham sido estabelecidos para propósitos de ilustração, alguns dos detalhes podem ser variados sem sair dos princípios básicos da invenção.
[0137] O uso dos termos “um”, “uma”, “o” e “a” e termos similares no contexto de descrição de realizações da invenção devem ser interpretados como cobrindo tanto o singular quanto o plural, a menos que indicado de outra forma no presente documento ou claramente contrariado pelo contexto. Os termos “compreendendo”, “tendo”, “incluindo”, e “contendo” devem ser interpretados como termos em aberto (isto é, significando “incluindo, mas sem limitação”) a menos que indicado de outra forma. A recitação de faixas de valores no presente documento é destinada meramente para servir como um método de taquigrafia de referir individualmente a cada valor separado que estão dentro da faixa, a menos que indicado de outra forma no presente documento, e cada valor separado é incorporado no relatório descritivo como se o mesmo fosse recitado individualmente no presente documento. Além da ordem detalhada no presente documento, os métodos descritos no presente documento podem ser realizados em qualquer ordem adequada a menos que indicado de outra forma no presente documento ou de outra forma contrariado claramente pelo contexto. O uso de quaisquer e todos os exemplos, ou linguagem exemplificativa (por exemplo, “tal como”) fornecido no presente documento, é destinado meramente para melhor esclarecer as realizações da invenção e não impõe necessariamente uma limitação no escopo da invenção a menos que recitado especificamente de outra forma nas reivindicações. Nenhuma linguagem no relatório descritivo deve ser interpretada como indicando que qualquer elemento não reivindicado é essencial para a prática da invenção.

Claims (13)

1. MÉTODO IN VITRO DE PREDIÇÃO DA SENSIBILIDADE DO CRESCIMENTO DE UMA CÉLULA TUMORAL PARA UM INIBIDOR DE AKT1, caracterizado por compreender determinar a presença de uma mutação de AKT1, em que a presença de uma mutação de AKT1 é correlacionada à sensibilidade da célula ao inibidor de AKT1; em que o inibidor AKT1 é (S)-2-(4- clorofenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidróxi-5-metil-6,7-diidro-5H-ciclopenta [d]pirimidin-4- il)piperazin-1-il)-3-(isopropilamino)propan-1-ona ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e em que a mutação corresponde a L52 ou Q79, e em que a mutação interrompe a interação entre o domínio PH e o domínio quinase de AKT.
2. MÉTODO IN VITRO, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pela mutação ainda corresponder a D323.
3. MÉTODO IN VITRO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizado pela mutação em L52 ser uma mutação L52R, a mutação na posição Q79 ser uma mutação Q79E e a mutação na posição D323 ser uma mutação D323H.
4. MÉTODO IN VITRO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pela mutação de AKT aumentar a fosforilação de AKT.
5. MÉTODO IN VITRO, de acordo com a reivindicação 4,caracterizado pelo aumento na fosforilação ser devido à fosforilação constitutiva.
6. MÉTODO IN VITRO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado por compreender, ainda, determinar a situação de PTEN da célula, em que perda de PTEN se correlaciona à sensibilidade intensificada ao inibidor.
7. MÉTODO IN VITRO, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pela célula tumoral ser uma célula tumoral de câncer de ovário ou próstata.
8. MÉTODO IN VITRO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado por compreender, ainda, determinar a presença de uma mutação de PI3K da célula, em que a presença de uma mutação de PI3K se correlaciona à sensibilidade intensificada à inibição pelo inibidor.
9. MÉTODO IN VITRO, de acordo com a reivindicação 8,caracterizado pelas ditas mutações de PI3K serem um dentre ou ambos H1047R e H1047L.
10. MÉTODO IN VITRO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado por compreender, ainda, determinar o perfil de pAKT da célula, em que um perfil de alta atividade para pAKT se correlaciona à sensibilidade intensificada à inibição pelo inibidor ou um perfil de baixa atividade para pAKT se correlaciona à sensibilidade diminuída à inibição pelo inibidor.
11. MÉTODO IN VITRO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado por compreender, ainda: (a) determinar a situação de Her2 e/ou Her3 da célula, em que uma situação de Her2+ e/ou Her3+ da célula se correlaciona à sensibilidade intensificada à inibição pelo inibidor, ou (b) determinar a presença de uma mutação de quinase Met da célula, em que a presença de uma mutação de quinase Met se correlaciona à sensibilidade da célula ao inibidor de AKT, ou (c) determinar a presença de uma mutação de B-Raf ou K-Ras da célula, em que a presença de uma mutação de B-Raf ou K-Ras se correlaciona a uma diminuição na sensibilidade da célula ao inibidor de AKT, ou (d) determinar o perfil de localização de FOXO3a na célula, em que um perfil de localização citoplasmático de FOXO3a se correlaciona à sensibilidade da célula à inibição pelo inibidor de AKT, ou (e) determinar a situação de INPP4B, PHLPP, e/ou PP2A da célula, em que a perda de INPP4B, PHLPP e/ou PP2A se correlaciona ao aumento da sensibilidade ao inibidor.
12. MÉTODO IN VITRO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 ou 8 a 11, caracterizado pela célula tumoral ser uma célula de câncer de próstata, de ovário, de mama, gástrico ou pancreático ou pela célula tumoral ser uma célula de câncer de mama resistente à terapia endócrina.
13. MÉTODO IN VITRO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado por compreender, ainda, informar a um paciente para quem a presença de uma mutação de AKT é determinada que um inibidor de AKT deve ser administrado ou informar a um paciente para quem a presença de uma mutação de AKT é determinada que um inibidor de AKT não deve ser administrado.
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