KR102074672B1 - 새로운 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) 균주 및 이의 용도 - Google Patents

새로운 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) 균주 및 이의 용도 Download PDF

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신소희
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Abstract

새로운 락토바실러스 사케이 SP2 균주의 용도에 관한 것으로, 본 발명의 새로운 락토바실러스 사케이 SP2 균주는 우수한 섬유소 분해 활성과 병원성 균주들에 대한 항균활성을 가지므로, 이를 생균제 또는 사료첨가제로 유용하게 이용할 수 있다.

Description

새로운 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) 균주 및 이의 용도 {NOVEL LACTOBACILLUS SAKEI AND USES THEREOF}
본 발명은 새로운 락토바실러스 사케이 SP2 균주의 용도에 관한 것으로, 이의 섬유소 분해 활성을 이용한 사료 첨가제로의 용도에 관한 것이다.
과거에는 가축의 전염병 및 질병 예방과 성장 촉진을 위해 사료용 항생제(antibiotics)를 배합사료 내 첨가하였지만, 항생제 사용에 의한 내성 유발 등 안정성 측면에서 지속적인 문제가 제기됨에 따라 2011년 7월 1일부터는 배합사료 내 항생제 사용이 전면 중단됐다. 사료첨가용 항생제 사용이 전면 중단됨에 따라 가축의 면역력을 증강시킬 수 있는 항생제 대체재로써 유용 미생물군(effective microorganisms)을 배양하여 사료에 첨가하게 되었다.
생균제는 가축 및 농업에 사용되는 일반적인 사료 첨가제이다. 그러나 생균제의 생존율의 감소는 저장 중 품질에 영향을 줄 수 있다. 유화 및 압출 방법을 이용한 캡슐화는 열악한 환경에서의 생균제 보존 및 저항성을 증가시키는데 사용되고 코팅 원료로는 전분, 섬유, 알긴산염, 키토산, 껌, 우유와 같은 원료들이 있다. 국내의 동물자원 프로바이오틱스(생균제)는 주로 보조사료 또는 동물약품 형태로 판매되고 있는 실정으로, 보조사료 카테고리로 판매되고 있는 생균제의 규모는 2012년 기준으로 연간 32,000톤(약 900여억 원) 규모이며, 물량기준으로는 보조사료의 40-45% 수준으로서 가장 큰 비중을 차지하고 있다. 또한, 동물약품 형태로 판매되고 있는 생균제의 시장규모는 연 770억 원 규모에 달하며(주문용 사료첨가제의 15%로 추산), 이 외에도 국내 140여개의 농업기술센터에서 생산하는 생균제 규모는 700억 원 정도로 추산되고 있다. 즉, 동물자원 프로바이오틱스의 시장규모는 2,500억 원(2014년 기준)으로 추정되며, 향후에도 지속적으로 증가할 것으로 예상된다.
상기 생균제가 첨가된 가축용 배합사료를 소, 돼지, 닭, 개 등에 급여하여 기대 할 수 있는 생균제의 효과로는 다음과 같다. 소에게 급여할 경우 송아지 설사 예방, 젖소 유량, 유질 개선, 사료 효율 개선, 분뇨냄새 개선, 면역기능 강화, 생산수명 연장 등의 측면에서 긍정적이 효과가 있다. 돼지, 닭, 개에게 있어서는 육성돈 생산성 증가, 성장 촉진 및 사료 효율 개선, 분뇨의 악취제거, 장 개선 및 질병예방 효과, 산란율, 난질 개선, 소화율 향상, 면역기능 강화 등이 개선된다 (박승용, 응용축산미생물학, 유한문화사, 2006, p59). 다양한 미생물이 지구상에 존재하지만 유용 미생물로서 유산균과 효모균이 생균제로 가장 일반적으로 사용되고 있다. 유산균은 살아서 가축의 소장에 도달하여 젖산을 생산하여 장의 산도를 pH 3.0-4.0으로 낮춤으로써 잡균의 오염을 방지하며, 과산화수소 및 천연항생물질을 생산하여 병원성 미생물의 증식을 억제한다. 또한 유산균 발효 산물로 각종의 비타민, 아미노산, 핵산, 항균물질, 항암물질 등을 생산하여 가축 장내 미생물균총의 안정, 사료 효율 증가, 내병성 증대 등의 긍정적인 효과가 있을 뿐 아니라, 가축 분변의 암모니아, 황화수소가스 등 악취제거에도 효과가 있다. 효모균의 경우 균체 자체가 발효사료로써 우수한 단백질사료로 이용되고 있다. 효모는 아미노산의 조성이 우수하며, 발효 산물로 알코올, 글루탐산 등의 천연 향미물질을 생산하여 사료의 기호성을 증진시키고, 초산을 생산하여 지방합성 전구물질을 제공한다. 또한 효모는 산소와의 결합능력이 있어 장내 혐기성 박테리아의 활동을 도와준다 (박승용, 응용축산미생물학, 유한문화사, 2006, p54-55).
세계 미생물 산업의 시장 규모는 390억 달러 수준으로 추정되며 국내 미생물 시장 규모는 약 4조 2천억 원이다. 그 중에서도 바이오 식품산업은 32.9%를 차지하며 단일 판매제품으로는 사료첨가제의 규모가 6,942억 원으로 전체 바이오산업 중 16.5%의 비중을 차지하고 있다 (국내바이오산업 통계, 2016). 따라서, 발효종균 및 식품소재의 수입의존도를 낮추기 위한 국산 우수 종균의 자급화가 필요한 실정이다.
본 발명의 목적은 새로운 락토바실러스 사케이 SP2 균주를 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 목적은 새로운 락토바실러스 사케이 SP2 균주 또는 이의 배양액을 포함하는 생균제 조성물을 제공하는 것이다.
아울러, 본 발명의 목적은 새로운 락토바실러스 사케이 SP2 균주를 포함하는 사료조성물을 제공하는 것이다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 새로운 락토바실러스 사케이 SP2 균주를 제공한다.
또한, 본 발명은 새로운 락토바실러스 사케이 SP2 균주 또는 이의 배양액을 포함하는 생균제 조성물을 제공한다.
아울러, 본 발명은 새로운 락토바실러스 사케이 SP2 균주를 포함하는 사료조성물을 제공한다.
본 발명에 따르면, 본 발명의 새로운 락토바실러스 사케이 SP2 균주는 우수한 섬유소 분해 활성과 병원성 균주들에 대한 항균활성을 가지므로, 이를 생균제 또는 사료첨가제로 유용하게 이용할 수 있다.
도 1은 본 발명에서 천연물들로부터 분리한 새로운 균주들의 용혈 반응을 확인한 도이다.
도 2는 본 발명에서 천연물들로부터 분리한 새로운 균주들의 단백질, 전분, 지질 분해 효소 활성을 확인한 도이다.
도 3은 본 발명의 락토바실러스 사케이 SP2 균주의 그람 염색 결과와 용혈반응 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명의 락토바실러스 사케이 SP2 균주의 생육 온도에 따른 생육 특성을 확인한 도이다.
도 5는 본 발명의 락토바실러스 사케이 SP2 균주의 생육 pH에 따른 생육 특성을 확인한 도이다.
이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 구현예로 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 다만, 하기 구현예는 본 발명에 대한 예시로 제시되는 것으로, 당업자에게 주지 저명한 기술 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있고, 이에 의해 본 발명이 제한되지는 않는다. 본 발명은 후술하는 특허청구범위의 기재 및 그로부터 해석되는 균등 범주 내에서 다양한 변형 및 응용이 가능하다.
또한, 본 명세서에서 사용되는 용어(terminology)들은 본 발명의 바람직한 실시예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로서, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다. 따라서, 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 '%'는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (w/w) %, 고체/액체는 (w/v) %, 그리고 액체/액체는 (v/v) %이다.
일 측면에서, 본 발명은 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) SP2 (KACC92238P)에 관한 것이다.
일 구현예에서, 락토바실러스 사케이 SP2는 16S rRNA 서열번호 1의 염기서열을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 락토바실러스 사케이 SP2는 단백질 분해 효소 활성과 섬유소 분해 활성을 가질 수 있다.
일 구현예에서, 락토바실러스 사케이 SP2의 생육 최적 조건은 30 내지 35℃ 및 pH 7 내지 8일 수 있다.
일 측면에서, 본 발명은 본 발명의 락토바실러스 사케이 SP2 또는 이의 배양액을 포함하는 생균제 조성물에 관한 것이다.
일 구현예에서, 우수한 프로바이오틱 활성을 가지면서 면역활성 증강 및 항균작용이 뛰어난 프로바이오틱 미생물 혼합균을 추가로 포함하여 본 발명의 생균제의 효과를 더욱 증진시킬 수도 있다.
일 구현예에서, 본 발명의 락토바실러스 사케이 SP2와 함께 생균제로 이용 가능한 미생물 종균은 사람이나 동물이 섭취하기에 적합하고 섭취시 유해 병원성 유해세균을 억제하거나 포유동물 장관 내의 미생물 균형을 개선시킬 수 있는 프로바이오틱 활성을 갖는 것들이 바람직하다. 그러한 프로바이오틱 미생물의 예로는 사카로마이세스(Saccharomyces), 캔디다(Candida), 피치아(Pichia) 및 토루롭시스(Torulopsis)를 포함하는 효모(yeasts), 아스퍼질러스(Aspergillus), 라이조푸스(Rhizopus), 무코(Mucor), 페니실리움(Penicillium) 등과 같은 곰팡이 및 락토바실러스(Lactobacillus), 비피도박테리움(Bifidobacterium), 클로스트리디움(Clostridium), 류코노스톡 (Leuconostoc), 박테로이드(Bacteroides), 스타필로코커스(Staphylococcus), 락토코커스(Lactococcus), 바실러스(Bacillus), 스트렙토코커스(Streptococcus), 푸소박테리움(Fusobacterium), 프로피오니박테리움(Propionibacterium), 엔테로코커스 (Enterococcus), 페디오코커스(Pediococcus) 및 마이크로코커스(Micrococcus) 속 세균들이 있다.
일 구현예에서, 본 발명의 생균제는 사람 또는 동물에 투여될 수 있으며, 식품, 의약품, 동물약품, 사료 또는 건강보조식품과 함께 투여될 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명의 생균제는 가축용일 수 있다.
일 측면에서, 본 발명은 본 발명의 생균제를 포함하는 사료첨가제에 관한 것이다.
일 구현예에서, 사료첨가제는 사료 총 중량 기준 0.1~0.3%로 첨가할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
일 측면에서, 본 발명은 본 발명의 락토바실러스 사케이 SP2를 포함하는 생균제 및, 조사료, 농후사료 또는 풍미사료로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 사료를 포함하는, 사료조성물에 관한 것이다.
일 구현예에서, 상기 조사료는 사일리지일 수 있다.
본 발명에서“조사료”는 비교적 구조 탄수화물의 함량이 높고 부피가 큰 사료로서, 조섬유의 함량이 높고 거칠며 부피가 많은 반면에 값이 싼 편이고 가소화양분이 적게 들어 있는 사료를 말한다. 볏짚, 목초의 생·건초, 산야초의 생·건초, 목초를 포함한 풋베기 작물로 만든 엔실리지와 콩깍지 등의 거친 먹이가 이에 속한다. 건조 상태에서의 조사료는 18% 이상의 조섬유를 함유하고 있으며 소화율이 낮은 편이지만 각종 영양소의 공급원으로서 뿐만 아니라 소화기관의 정상적인 기능 유지를 위해서도 중요하다. 본 발명에서는 사료조성물에 첨가되는 조사료로 볏짚, 티모시, 사일리지를 사용할 수 있으며, 이러한 조사료는 전체 사료조성물에 대하여 30 ~ 65 중량% 범위에서 첨가될 수 있다.
본 발명에서“농후사료”는 부피가 작고 섬유소의 함량은 낮은 반면, 가용무질소물 등의 가소화양분의 함량이 많아서 가축의 성장이나 축산물의 생산효율을 높일 수 있는 사료를 총칭한다. 통상적으로 옥수수·수수·밀·보리 등의 곡식류, 식물성 기름을 짜고 남은 깻묵류나 쌀겨·보릿겨·밀기울 등과 같은 강피류, 어분 또는 이들을 일정한 비율로 섞어 만든 배합사료 등이 이에 속한다. 본 발명에서 농후사료는 바람직하게 옥수수, 소맥, 단백피, 대두박, 비타민, 광물질 등의 성분들을 포함할 수 있으며, 이러한 성분으로 한정되는 것은 아니며 반추동물의 사육 시 통상적으로 사용하는 농후사료라면 모두 사용할 수 있다. 이러한 농후사료는 전체 사료조성물에 대하여 35~70 중량% 범위에서 첨가될 수 있다.
하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 것일 뿐 이에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1, 사일리지 생산용 균주 분리 및 동정
1-1. 신규 균주 분리
하기 표 1의 발효음료, 전통발효식품 등에서 식품 유래 균주들 R2A, YPD 및 PDA 배지를 이용하여 수집하였다. 그 결과, 총 203종의 (고초균 118, 유산균 85) 신규 균주들을 분리하였다.
시 료 점수 지 역 시 료 점수 지 역
장류 고추장 4 익산(2), 정읍, 진안(1) 발효
식품
김치 10 익산(9), 전주(1)
된장 5 익산(2), 임실, 진안, 정읍(1) 장아찌 1 익산
간장 3 익산(2), 진안(1) 젓갈 1 부안
청국장 1 진안 요구르트 2 익산
1-2. 분리한 균주들의 특성 확인
상기 실시예 1-1에서 분리한 203종의 균주들의 특성을 확인하기 위해, 그람 염색을 수행한 결과, 하기 표 2와 같이 확인되었다. 또한, 균주들의 안전성을 확인하기 위하여, 용혈반응 및 대장균 등 6가지 균주에 대한 항균 특성을 확인하였다. 아울러, 16S rRNA 분석을 통해 각 균주의 종을 확인하였다.
구 분 그 람 염 색
양 성 음 성 -
분리균주(ea) 127 12 64
203
선발
균주
P. aeruginosa
(녹농균)
S. auereus
(황색포도상구균)
B. cereus
(세레우스균)
E.coli
(대장균)
Listeria spp.
(리스테리아균)
Salmonella spp.
(장티푸스균)
선발
균주
+ ++ +++ + ++ +++ + ++ +++ + ++ +++ + ++ +++ + ++ +++
고초균 - 24 6 - 17 3 - 11 4 - 6 3 - - - - 17 1
유산균 - 2 - - 2 - - - - - 3 - - 1 - - - -
- 26 6 - 19 3 - 11 4 - 9 3 - 1 - - 17 1
그 결과, 203개의 균주들은 각각 도 1과 같은 용혈반응 결과를 나타냈으며, 상기 표 3과 같은 항균 특성을 가지는 다양한 종의 고초균들 및 유산균들로 확인되었다. 이에, 이들 중 안전한 균주들로 확인된 155가지 균주를 선발하였다.
1-3. 효소 활성 우수 균주 선발
상기 실시예 1-2에서 선발한 155종의 균주의 분해 효소 특성을 확인하기 위해, 각 균주의 R2A, YPD 및 PDA 배지에 단백질 (skim milk), 전분 (가용성 전분) 및 지질 (Tributyrin)을 첨가한 후 페이퍼 디스크법을 이용하여, 각각의 분해 효소 활성을 분해환 크기를 통해 확인하였다 (도 2). 그 결과, 각 분해 효소 특성이 우수한 균주들 14종을 선발하였다 (표 4).
분해
활성
균주
종류
균주명 분해환 (㎝)
단백질 고초균 YS-3 7.2±0.2
JP-7 6.0±1.1
MP-6 5.7±2.2
BS-8 5.6±1.0
BS-7 3.9±0.4
S1 3.6±0.6
YP-1 2.7±0.4
BP-1 2.5±0.1
LS-1 1.7±0.0
YB-10 -
YP-4 -
유산균 SP-2 2.6±0.6
WRS-4 -
WOK-1 -
1-4. 섬유소 분해 활성 우수 균주 선발 및 동정
상기 실시예 1-3에서 각 효소 특성이 우수한 것으로 선발한 14종의 균주의 섬유소 분해 활성을 확인하기 위하여, 1% CMC(carboxymethyl cellulose) 또는 케나프 추출물 (3%)을 첨가한 배지에서 배양하고, 섬유소 분해 활성이 우수한 균주인 SP2를 선발하였다 (표 5).
균주명 CMC (cm) 케나프추출물 (cm)
SP2 1.5±0.7 3.1±0.3
상기 실시예를 통해 확인한 SP2 균주는 그람양성이며, 용혈반응을 나타내지 않았고, 서열번호 1의 16S rRNA를 이용해 확인한 바, 락토바실러스 사케이로 확인되었다 (도 3). 이에, 국립농업과학원 KACC에 기탁하였다 (KACC 92238P).
실시예 2, SP2 균주의 배양 조건 확인
2-1. 셀룰라아제 활성 확인
상기 실시예 1에서 선발한 SP2 균주의 셀룰라아제 활성을 확인하기 위하여, DNS 환원당 정량법으로 셀룰라아제 효소 활성을 확인하였다. 탄소원으로 1%CMC(carboxymethyl cellulose)를 함유한 100㎖ 액체배지에 선발균주들을 각각 1콜로니씩 접종하여 30℃, 150rpm, 24시간 동안 진탕 배양하여 seed culture액으로 사용하여 새로운 CMC 100㎖ 액체배지에 seed culture액을 3%(v/v)접종하여 동일 배양조건으로 24시간 진탕배양하여, 배양액을 4℃, 15,000rpm에서 10분 동안 원심분리한 후 상등액을 조효소로 사용하였다. 1% CMC 0.5㎖에 조효소액 0.5㎖을 첨가한 후 30℃에서 30분간 효소와 기질을 반응시킨 후, DNS용액 3㎖을 첨가하여 100℃에서 5분간 가열하여 반응을 정지시키고, 생성된 환원당의 양은 DNS 환원당 정량법을 이용하여 550nm 흡광도에서 측정하였다. 그 결과, SP2 균주는 1.88 mg/ml의 당함량을 나타내, 셀룰라아제 활성이 우수한 것으로 나타났다.
2-2. 최적 배양 온도 확인
상기 실시예 1에서 선발한 SP2 균주의 생육 온도에 따른 생육 특성을 확인하기 위하여, 20, 30, 37 또는 45℃에서 0 내지 72시간 동안 배양한 뒤, OD600nm에서의 값을 측정함으로써 균주의 생육 정도를 확인하였다. 그 결과, SP2 균주는 30 내지 35℃에서 생육이 가장 양호하였다 (도 4).
2-3. 최적 배양 pH 확인
상기 실시예 1에서 선발한 SP2 균주의 생육 pH에 따른 생육 특성을 확인하기 위하여, pH5, pH6, pH7, pH8, pH9 또는 pH10에서 0 내지 72시간 동안 배양한 뒤, OD600nm에서의 값을 측정함으로써 균주의 생육 정도를 확인하였다. 그 결과, SP2 균주는 pH7 내지 8에서 생육이 가장 좋게 나타났다 (도 5).
실시예 3, SP2 균주를 이용한 사일리지 제조
상기 실시예 1에서 선발한 SP2 균주를 이용하여 조사료별로 사일리지를 제조하여 이의 가치를 평가하였다. 구체적으로, 볏짚, 옥수수 및 케나프에 본 발명의 SP2 균주와 종래에 항균력이 우수한 것으로 알려진 사일리지 발효 균주인 청미락토를 대조군으로 접종하고, 60일 동안 발효하면서 조사료별 사일리지의 유기산 함량, 사료 등급, 단백질 함량, 향, pH를 확인하였다. 그 결과, 각 조사료를 이용한 사일리지는 하기 표 6과 같은 유기산 함량과 사료 가치를 가지는 것으로 나타났으며, 단백질 함량은 볏짚, 옥수수 및 케나프 각각에서 SP2 균주의 경우 4.94%, 7.75% 및 10.17%로 나타났고, 청미락토의 경우 4.75%, 8.29% 및 9.15%로 나타났다. 또한, 사일리지의 향은 하기 표 7과 같이 나타났다. 아울러, 사일리지의 pH는 표 8과 같이 나타났다. 이를 통해, 본 발명의 SP2 유산균주는 종래의 시판 균주 (청미락토)보다 사료 제조에 적용 시 더 우수한 효과를 나타내는 것을 알 수 있었다.
조사료 접종균주 단백질 회분 초산 낙산 젖산 ADF NDF TDN RFV 등급
볏짚 청미락토 4.75 13.39 0.00 0.00 2.06 32.23 55.28 63.44 107.35 2
SP2 4.94 12.34 0.00 0.00 2.87 28.76 47.33 66.18 130.69 1
옥수수 청미락토 8.29 10.72 0.00 0.00 13.36 27.41 46.05 67.25 136.45 1
SP2 7.75 10.28 0.00 0.00 11.64 28.72 46.98 66.21 131.73 1
케나프 청미락토 9.15 7.17 0.91 1.14 1.94 44.20 57.52 54.0 88.09 3
SP2 10.17 7.01 0.75 1.25 1.77 44.23 56.55 54.0 89.56 3
*ADF(산성세제불용성섬유)/NDF(중성세제불용성섬유)/TDN(가소화영양소총량)/RFV(상대적 사료가치)
조사료 균주
10일 20일 30일 40일 50일 60일
볏 짚 청미락토 +++*) +++ +++ +++ +++ +++
SP2 ++ ++ ++ +++ ++ ++
옥수수 청미락토 +++ +++ +++ +++ +++ +++
SP2 +++ +++ +++ +++ +++ +++
케나프 청미락토 +++ +++ +++ +++ ++ +++
SP2 +++ +++ +++ +++ +++ +++
*) 악취 냄새의 정도 : +(약),++(중),+++(강)
접종 균주별 사일리지 pH
볏 짚 옥수수 케나프
대조 청미락토 SP2 대조 청미락토 SP2 대조 청미락토 SP2
10 6.42 4.34 4.59 3.85 3.80 3.55 4.58 4.75 4.58
20 4.13 4.51 3.86 3.56 4.51 4.65
30 4.05 4.51 3.75 3.52 4.61 4.84
40 4.27 4.30 3.68 3.48 4.56 4.66
50 4.16 4.49 3.77 3.53 4.54 4.80
60 4.27 4.24 3.69 3.51 4.48 4.41
국립농업과학원 미생물은행 KACC KACC92238P 20181002
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Claims (8)

  1. 단백질 또는 섬유소 분해 활성을 갖는 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) SP2 (KACC92238P).
  2. 제 1항에 있어서, 상기 SP2 균주는 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 16S rRNA를 포함하는 것을 특징으로 하는, 락토바실러스 사케이 SP2.
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제 1항에 있어서, 생육 최적 조건은 30 내지 35℃ 및 pH 7 내지 8인 락토바실러스 사케이 SP2.
  6. 제 1항의 락토바실러스 사케이 SP2 또는 이의 배양액을 포함하는 생균제 조성물.
  7. 제 6항의 생균제 및, 조사료, 농후사료 또는 풍미사료로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 사료를 포함하는, 사료조성물.
  8. 제 7항에 있어서, 조사료는 사일리지인 사료조성물.
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