KR102014554B1 - Fc 수용체 결합 단백질 - Google Patents

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Abstract

본 개시내용은 FcRn에 결합하는 항체 및 이 항체의 사용 방법에 관한 것이다.

Description

Fc 수용체 결합 단백질{FC RECEPTOR BINDING PROTEINS}
관련 출원
본원은 35 U.S.C. § 119 하에 2011년 6월 2일자에 출원된 미국 가출원 제61/492,617호 및 2011년 6월 17일자에 출원된 미국 가출원 제61/498,266호에 대한 우선권을 주장한다. 가출원 둘 다의 전체 내용은 참조문헌으로 그 전문이 본 명세서에 포함된다.
기술분야
본 발명의 분야는 Fc 수용체에 결합하는 단백질에 관한 것이다.
혈청 중에 가장 풍부한 항체 아이소타입은 IgG이고, 이것은 병원균에 대한 보호를 중재하고 조직, 점막 및 진피 표면에 대한 면역계 성분의 동원을 재촉하는 알레르기 및 염증성 반응을 중재하는 데 있어서 중요한 역할을 한다(Junghans, Immunologic Research 16(1):29 (1997)). 더구나, 이것은 또한 다양한 자가면역 질환의 중요한 성분이다. 정상 조건 하에, 혈청 중의 IgG의 반감기는 마우스에서는 5일 내지 7일 범위이고 인간에서는 22일 내지 23일 범위이고, 이는 다른 혈장 단백질의 혈청 반감기와 비교하여 연장된 기간이다. 부분적으로, 이는 신생아 FcRn 수용체(FcRn)가 분해성 리소좀으로부터 음세포작용된 IgG를 구조하고 이를 세포외 구획으로 다시 재순환시키기 때문에 발생한다(Junghans and Anderson, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:5512 (1996), Roopenian et al. J. Immunology 170:3528 (2003)).
FcRn은 IgG의 Fc 부분에 결합한다. IgG Fc 구역과 FcRn 사이의 상호작용은 pH 의존적이다. 유체상 엔도사이토시스에 의한 세포로의 진입시, IgG는 엔도솜으로 봉쇄되고 산성 pH(6 내지 6.5)에서 고친화도로 FcRn에 결합하고; IgG-FcRn 복합체가 혈장 막으로 순환할 때, IgG는 약간 염기성인 pH(약 7.4)에서 혈류에서 FcRn으로부터 신속히 해리한다. 이러한 수용체 매개 재순환 메커니즘에 의해, FcRn은 리소좀에서의 분해로부터 IgG를 효과적으로 구조하여, 순환 IgG의 반감기를 연장시킨다.
FcRn은 내피 및 상피 세포의 엔도솜에서 통상적으로 있는 비공유 헤테로다이머이다. 이것은 3개의 중쇄 알파 도메인(α1, α2 및 α3) 및 단일 가용성 경쇄 p2-마이크로글로불린(β2M) 도메인을 갖는 단일 통과 막관통을 갖는 막 결합 수용체이다. 구조상, 이것은 공통 경쇄로서 β2M을 갖는 1형 메이져 주조직 적합성 복합체 분자의 패밀리에 속한다. FcRn α 사슬은 α1, α2 및 α3 중쇄 도메인을 포함하는 세포외 도메인, 막관통 구역 및 비교적 짧은 세포질 꼬리로 이루어진 46kD 단백질이다(Burmeister et al. Nature 372:366 (1994)).
FcRn은 처음에 신생아 랫트 내장에서 확인되었고, 이는 모유로부터 IgG 항체의 흡수를 중재하도록 기능하고 순환계로 이의 전달을 수월하게 한다(Leach et al. J Immunol 157:3317 (1996)). FcRn은 또한 인간 태반으로부터 단리되었고, 이것은 또한 태아 순환으로 모체 IgG의 흡수 및 수송을 중재한다. 성인에서, FcRn은 폐, 장, 신장 및 비강, 질 및 담도 표면의 상피 조직을 포함하는 많은 조직에서 발현된다(미국 특허 제6,030,613호 및 제6,086,875호; Israel et al. Immunology 92:69 (1997); Kobayashi et al. Am J Physiol (2002); Renal Physiol 282:F358 (2002)).
IgG 항상성에 대한 FcRn의 공헌을 연구하기 위해, 이 단백질이 발현되지 않도록 β2M 및 FcRn 중쇄를 코딩하는 유전자의 적어도 일부가 "넛아웃"되도록 마우스를 조작한다(WO 02/43658; Junghans and Anderson, Proc Natl Acad Sci US 93:5512 (1996)). 이 마우스에서, IgG의 혈청 반감기 및 농도는 극적으로 감소하여, IgG 항상성에 대한 FcRn 의존적 메커니즘을 제시한다.
또한, 항-인간 FcRn 항체가 이 FcRn 넉아웃 마우스에서 생성될 수 있고 이 항체가 FcRn에 대한 IgG의 결합을 방지할 수 있다는 것이 제시되었다. 그러나, 이 항체는 생성되거나 시험되지 않았다(WO 02/43658).
FcRn에 대한 IgG 결합의 억제는 IgG 재순환을 방지하여 IgG 혈청 반감기를 부정적으로 변경시킨다. 이러한 원칙은 자가면역 피부홍반성 수포성 질환의 마우스 모델에서 치료학적으로 효과적인 것으로 나타났다(Li et al. J Clin Invest 115:3440-3450 (2005)). 따라서, 부적절하게 조절되는 IgG 항체의 존재를 특징으로 하는 자가면역 및 염증성 질환 또는 장애를 치료하거나 예방하는 방법에서 FcRn에 대한 IgG의 결합을 차단하거나 길항하는 물질을 사용할 수 있다. 길항 항-랫트 FcRn 단일클론 항체(mAb)1G3은 MG, SLE 및 ITP의 치료에 사용되는 정맥내 IgG(IVIG)보다 약 100배 낮은 30㎎/㎏의 용량에서 랫트 수동 모델에서 실험적 자가면역 중증 근무력증(Experimental Autoimmune Myasthenia Gravis: EAMG)을 성공적으로 예방한다. 추가로, 자가면역 질환, 예컨대 루푸스 또는 관절염을 발생시키는 것으로 유전적 소인이 있는 FcRn 결핍 마우스는 질환의 중증도가 상당히 감소하였다.
본 개시내용은 인간 Fc 수용체에 결합하는 단리된 항체, 이러한 항체를 코딩하는 핵산 및 FcRn의 존재를 검출하고, Fc 수용체 활성을 중재하고, 자가면역 질환을 치료하기 위한 이 항체의 사용 방법을 제공한다.
따라서, 본 개시내용의 일 양태는 인간 FcRn에 결합하는 단리된 항체를 특징으로 한다. 이 항-FcRn 항체는 VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3 구역을 포함하는 경쇄 가변 구역(VL)을 포함하고, VL CDR3 구역은 SSYAGSGIYV(서열 번호 12) 또는 ASYAGSGIYV(서열 번호 13)의 VL CDR3 구역과 적어도 85%(예를 들면, 90% 또는 95%)의 상동성을 갖는다. 임의로 항-FcRn 항체의 VL CDR1 및 VL CDR2는 각각 VL CDR1 구역 TGTGSDVGSYNLVS(서열 번호 14) 및 VL CDR2 구역 GDSQRPS(서열 번호 15)와 적어도 85%(예를 들면, 적어도 90% 또는 95%)의 상동성을 갖는다. 항-FcRn 항체는 적어도 하나의 CDR3 구역의 제1 위치, 예를 들면 적어도 하나의 VL CDR3 구역에서 시스테인을 갖지 않는다.
몇몇 실시양태에서, 상기 기재된 항-FcRn 항체는 TGTGSDVGSYNLVS(서열 번호 14)와 적어도 90%의 상동성을 갖는 VL CDR1, GDSQRPS(서열 번호 15)와 적어도 90%의 상동성을 갖는 VL CDR2 및/또는 SSYAGSGIYV(서열 번호 12) 또는 ASYAGSGIYV(서열 번호 13)와 적어도 90%의 상동성을 갖는 VL CDR3을 포함한다. 일례에서, 항-FcRn 항체는 VL CDR1 구역 TGTGSDVGSYNLVS(서열 번호 14), VL CDR2 구역 GDSQRPS(서열 번호 15) 및/또는 VL CDR3 구역 SSYAGSGIYV(서열 번호 12) 또는 ASYAGSGIYV(서열 번호 13)를 포함한다.
다른 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 단리된 항-FcRn 항체는 서열 번호 10 또는 서열 번호 11과 적어도 85%(예를 들면, 적어도 90%, 95% 또는 98%)의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일례에서, 단리된 항체의 VL은 서열 번호 10 또는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용의 다른 양태는 VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3 구역을 포함하는 경쇄 가변 구역(VL)을 포함하는 단리된 항-FcRn 항체를 특징으로 하고, VL CDR3 구역은 SSYAGSGIYV(서열 번호 12) 또는 ASYAGSGIYV(서열 번호 13)의 서열과 비교할 때 3개 이하의 아미노산 치환을 갖고, 단리된 항체는 적어도 하나의 CDR3 구역의 제1 위치, 예를 들면 적어도 하나의 VL CDR3 구역에서 시스테인을 갖지 않는다. 임의로 항-FcRn 항체의 VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3은 총체적으로 하기 서열과 비교할 때 10개 이하의 아미노산 치환을 갖는다:
(a) CDR1: TGTGSDVGSYNLVS(서열 번호 14)
(b) CDR2: GDSQRPS(서열 번호 15)
(c) CDR3: SSYAGSGIYV(서열 번호 12) 또는 ASYAGSGIYV(서열 번호 13).
상기 기재된 임의의 항-FcRn 항체는 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 구역(VH)을 추가로 포함할 수 있고, VH CDR3은 LAIGDSY(서열 번호 24)와 적어도 85%(예를 들면, 적어도 90% 또는 95%)의 상동성을 갖는다. 임의로 항-FcRn 항체의 VH CDR1 및 VH CDR2는 각각 EYAMG(서열 번호 22) 및 SIGSSGGQTKYADSVKG(서열 번호 23)와 적어도 85%(예를 들면, 적어도 90% 또는 95%)의 상동성을 갖는다.
몇몇 실시양태에서, 항-FcRn 항체는 EYAMG(서열 번호 22)와 적어도 90%의 상동성을 갖는 VH CDR1을 포함하고/하거나, VH CDR2는 SIGSSGGQTKYADSVKG(서열 번호 23)와 적어도 90%의 상동성을 갖고/갖거나, VH CDR3은 LAIGDSY(서열 번호 24)와 적어도 90%의 상동성을 갖는다. 일례에서, 항-FcRn 항체는 VH CDR1 구역 EYAMG(서열 번호 22), VH CDR2 구역 SIGSSGGQTKYADSVKG(서열 번호 23) 및/또는 VH CDR3 구역 LAIGDSY(서열 번호 24)를 포함한다.
다른 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 항-FcRn 항체는 서열 번호 9와 적어도 85%(예를 들면, 적어도 90%, 95% 또는 98%)의 서열 동일성을 공유하는 VH를 포함한다. 일례에서, 단리된 항체의 VH는 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 중쇄 가변 구역(VH) 및 중쇄 불변 구역을 포함하는 중쇄를 포함하는 단리된 항-FcRn 항체를 제공하고, VH는 LAIGDSY(서열 번호 24)와 적어도 85%(예를 들면, 적어도 90% 또는 95%)의 상동성을 갖는 CDR3 구역을 포함하고, 불변 구역은 서열 번호 17의 C 말단 라이신 잔기에 상응하는 위치에서 결실을 갖는다. 몇몇 예에서, 이 항-FcRn 항체의 중쇄 가변은 VH CDR1 및 VH CDR2를 추가로 포함하고, 이들은 각각 EYAMG(서열 번호 22) 및 SIGSSGGQTKYADSVKG(서열 번호 23)와 적어도 85%(예를 들면, 적어도 90% 또는 95%)의 상동성을 갖는다.
다른 예에서, 항-FcRn 항체의 중쇄 불변 구역은 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함한다.
상기 기재된 항-FcRn 항체는 DX-2504(CSYAGSGIYV; 서열 번호 25)와 적어도 85%(예를 들면, 적어도 90% 또는 95%) 동일한 VL CDR3 및 임의로 TGTGSDVGSYNLVS(서열 번호 14)와 적어도 85%(예를 들면, 적어도 90% 또는 95%) 동일한 VL CDR1 및 GDSQRPS(서열 번호 15)와 적어도 85%(예를 들면, 적어도 90% 또는 95%) 동일한 VL CDR2를 포함하는 경쇄 가변 구역(VL)을 추가로 포함할 수 있다. 일례에서, 항-FcRn 항체는 VL CDR1 구역 TGTGSDVGSYNLVS(서열 번호 14), VL CDR2 구역 GDSQRPS(서열 번호 15) 및/또는 VL CDR3 구역 CSYAGSGIYV(서열 번호 25), SSYAGSGIYV(서열 번호 12) 또는 ASYAGSGIYV(서열 번호 13)를 포함한다. 다른 예에서, 항-FcRn 항체의 VL은 서열 번호 8, 서열 번호 10 또는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함한다.
상기 기재된 임의의 항-FcRn 항체는 10nM 미만의 해리 상수(KD)로 인간 FcRn에 결합할 수 있다. 본 개시내용에 제공된 항-FcRn 항체는 인간 또는 인간화 항체이거나, 인간에서 비면역원성일 수 있다. 예를 들면, 이것은 인간 항체 프레임워크(framework) 구역을 포함할 수 있다. 대안적으로, 항-FcRn 항체는 쥣과 항체일 수 있다. 다른 예에서, 이것은 키메라 항체일 수 있다.
몇몇 실시양태에서, 본 명세서에서 제공된 항-FcRn 항체는 (Fc 도메인을 포함하는) 전장 항체이다. 대안적으로, 이것은 항원 결합 단편, 예컨대 Fab, F(ab)'2, Fv 또는 ScFv일 수 있다. 원하는 경우, 항-FcRn 항체는 단일클론 항체이다.
(ⅰ) 본 명세서에 기재된 임의의 항체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물, (ⅱ) 본 명세서에 제공된 임의의 항체를 코딩하는 서열을 포함하는 단리된 핵산, (ⅲ) 본 명세서에 제공된 임의의 항체를 코딩하는 서열을 포함하는 임의의 핵산을 포함하는 벡터 및 (ⅳ) 본 명세서에 제공된 임의의 항체를 코딩하는 서열을 포함하는 임의의 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포가 본 명세서에 또한 개시되어 있다.
생체내 또는 실험실내 FcRn의 존재를 검출하거나 FcRn의 활성을 중재하기 위해 본 명세서에 기재된 임의의 항-FcRn 항체를 사용할 수 있다.
일 양태에서, 샘플에서 FcRn을 검출하는 방법으로서, 샘플을 본 명세서에 제공된 임의의 항체와 접촉시키는 단계 및 항체와 존재하는 경우 FcRn 사이의 상호작용을 검출하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에 제공된다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 피험체에서 FcRn을 검출하는 방법으로서, 검출 가능한 분자, 예컨대 영상화 표지(형광성 또는 방사성)와 접합될 수 있는 본 명세서에 제공된 임의의 항체를 피험체에게 투여하는 단계 및 항체와 존재하는 경우 FcRn 사이의 상호작용을 검출하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 FcRn 활성을 중재하는 방법으로서, FcRn을 본 명세서에 제공된 임의의 항체와 접촉시켜 FcRn의 활성을 중재하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 피험체에서 자가면역 질환을 치료하거나 순환 IgG의 반감기/수치를 중재하는 방법으로서, 피험체에서 자가면역 질환을 치료하거나 순환 IgG의 반감기/수치를 중재하기 위한 유효량으로 본 명세서에 제공된 임의의 항체를 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.
본 개시내용의 범위 내에 (a) 이를 필요로 하는 피험체에서 FcRn의 활성을 중재하고/하거나, 순환 IgG의 반감기/수치를 중재하고/하거나, 자가면역 질환을 치료하는 데 사용하기 위한 약제학적 조성물(상기 약제학적 조성물은 각각 본 명세서에 기재된 1종 이상의 항-FcRn 항체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함함), (b) 임의의 바로 언급된 목적을 위한 본 명세서에 기재된 임의의 항-FcRn 항체의 용도 및 (c) 피험체(예를 들면, 인간 환자)에서 FcRn의 활성을 중재하고/하거나, 순환 IgG의 반감기/수치를 중재하고/하거나, 자가면역 질환을 치료하기 위한 임의의 항-FcRn 항체의 용도가 또한 있다.
본 발명의 이런 및 다른 양태 및 실시양태는 하기 더 자세히 기재되어 있다.
본 발명의 각각의 제한은 본 발명의 다양한 실시양태를 포함할 수 있다. 따라서, 임의의 하나의 부재 또는 부재의 조합을 포함하는 본 발명의 각각의 제한이 본 발명의 각각의 양태에서 포함될 수 있는 것으로 예상된다. 본 발명은 하기 설명에 기술되거나 도면에 도시된 구성의 상세내용 및 구성성분의 배치로 본 출원에서 제한되지 않는다. 본 발명은 다른 실시양태가 가능하게 하고, 실행되거나, 다양한 방식으로 수행될 수 있다. 또한, 본 명세서에 사용된 어법 및 전문용어는 설명 목적을 위한 것이고 제한적인 것으로 고려되어서는 안 된다. 본 명세서에서의 "포함하는", "함유하는" 또는 "갖는", "포함", "함유" 및 이의 변형어의 사용은 하기 기재된 항목 및 이의 균등물, 및 추가의 항목을 포함하록 의도된다.
도면은 오직 예시적이고 본 명세서에 개시된 본 발명의 실행에 필요하지 않다.
도 1은 DX-2504, 532A-X53-C02 및 532A-X54-B03의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 분석을 도시한 도면;
도 2는 DX-2504, 532A-X53-C02 및 532A-X54- B03의 SDS-PAGE 분석을 도시한 도면;
도 3은 DX-2504, 532A-X53-C02 및 532A-X54- B03의 온도 안정성을 도시한 도면;
도 4는 DX-2504, 532A-X53-C02 및 532A-X54-B03의 pH 안정성을 도시한 도면;
도 5는 DX-2504, 532A-X53-C02 및 532A-X54- B03의 pH 8.3에서의 안정성을 도시한 도면;
도 6은 DX-2504, 532A-X53-C02 및 532A-X54-B03의 화학 변성에 대한 안정성을 도시한 도면;
도 7은 pH 6에서의 hFcRn과 부동화된 DX-2504, 532A-X53-C02 및 532A-X54-B03의 상호작용의 동력학 분석을 도시한 도면;
도 8은 pH 7.5에서의 hFcRn과 부동화된 DX-2504, 532A-X53-C02 및 532A-X54-B03의 상호작용의 동력학 분석을 도시한 도면;
도 9는 DX2504(서열 번호 8), 532A-X53-C02(서열 번호 10) 및 532A-X54-B03(서열 번호 11)의 서열을 도시한 도면;
도 10은 Fab-310 길이 분포에 대한 항-hFcRn H-CDR3을 도시한 도면;
도 11은 선택된 항-FcRn 결합 단백질의 여러 특성을 규명하는 2개의 그래프를 도시한 도면;
도 12는 TG32B 마우스에서 hIgG의 이화작용에 미치는 항-FcRn 항체의 효과를 도시한 도면;
도 13은 사이노몰거스 원숭이(cynomolgus monkey)에 투여된 DX-2504 및 DX-2507의 혈청 농도를 도시한 도면;
도 14는 DX-2504 및 DX-2507의 투여 후 사이노몰거스 원숭이에서 IgG 수치를 도시한 도면.
인간 FcRn에 결합할 수 있는 단리된 항체 및 FcRn의 존재를 검출하고/하거나, FcRn 활성을 중재하고/하거나, 순환 IgG의 반감기/수치를 조절하고/하거나, IgG 비정상과 관련된 장애, 예컨대 자가면역 장애(예를 들면, 다발성 경화증, 류마티스성 관절염, 루푸스, 면역 혈소판 감소증, 강직성 척추염 및 천포창) 및 염증성 장애, 예컨대 염증성 장 질환을 치료하기 위한 이의 방법이 본 명세서에 개시되어 있다. 바람직하게는, 이러한 항-FcRn 항체는 (a) FcRn-Fc 상호작용 부위에 대한 비특이적 인간 IgG/Fc 부분의 결합을 차단하고/하거나; (b) 인간 및 랫트 FcRn(가용성 및 세포) 둘 다에 결합하고/하거나; (c) pH 6에서 FcRn에 결합하고/하거나; (d) β2M에 배타적으로 결합하지 않을 수 있다.
정상 상황에서, FcRn은 순환 IgG의 반감기를 연장시킬 수 있다. 예를 들면, IgG와의 상호작용을 방지하여 FcRn 기능을 중재하기 위해 FcRn에 결합하는 항체를 사용할 수 있다. 특히, IgG 분자의 반감기를 감소시키기 위해 IgG와의 FcRn 상호작용을 차단하는 항체를 사용할 수 있다.
일 양태에서, 본 개시내용은 특히 자가면역 장애의 치료 및 IgG의 순환 수치의 감소에 이용 가능한 인간 길항 항-인간 FcRn 항체를 제공한다. 항원 결합 도메인을 통해 결합하고 IgG-Fc와 인간 FcRn 또는 랫트 FcRn 사이의 상호작용을 차단하는 능력을 갖는 고친화도 가용성 Fab(sFab)가 또한 개시되어 있다.
정의
용어 "결합 단백질"은 표적 분자와 상호작용할 수 있는 단백질을 의미한다. 이 용어는 "리간드"와 상호 교환되어 사용된다. "FcRn 결합 단백질" 또는 "FcRn 결합 리간드"는 FcRn와 상호작용할 수 있는 단백질을 의미하고, 특히 FcRn과 우선적으로 상호작용하는 단백질, 예를 들면 IgG를 포함한다.
본 명세서에 사용된 용어 "항체"는 적어도 하나의 면역글로불린 가변 도메인 또는 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하는 단백질을 포함한다. 예를 들면, 항체는 중쇄(H) 가변 구역(본 명세서에서 VH라 축약) 및 경쇄(L) 가변 구역(본 명세서에서 VL이라 축약)을 포함할 수 있다. 다른 예에서, 항체는 2개의 중쇄(H) 가변 구역 및 2개의 경쇄(L) 가변 구역을 포함한다. 용어 "항체"는 항체의 항원 결합 단편(예를 들면, 단쇄 항체, Fab 및 sFab 단편, F(ab')2, Fd 단편, Fv 단편, scFv 및 dAb 단편) 및 완전 항체(전장 항체)를 포함한다.
VH 및 VL 구역은 "프레임워크 구역"("framework region: FR")이라 칭하는 더 보존적인 구역과 배치된 "상보성 결정 구역"("complementarity determining region: CDR")이라 칭하는 초가변 구역으로 추가로 세분될 수 있다. 프레임워크 구역 및 CDR의 정도가 정확히 정의되어 있다(문헌[ Kabat, E.A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242, 및 Chothia, C. et al. (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917], 또한 http://www.hgmp.mrc.ac.uk 참조). 카밧 정의가 본 명세서에 사용된다. 각각의 VH 및 VL는 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4의 순서로 아미노 말단으로부터 카복시 말단으로 배치된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 통상적으로 구성된다.
본 명세서에 사용되는 전장 항체(또는 단순히 "항체 부분" 또는 "단편")의 용어 "항원 결합 단편"은 관심 대상의 표적에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 전장 항체의 하나 이상의 단편을 의미한다. 전장 항체의 용어 "항원 결합 단편" 내에 포함된 결합 단편의 예는 (ⅰ) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편인 Fab 단편; (ⅱ) 힌지 구역에서 이황화 결합에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (ⅲ) VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (ⅳ) 항체의 단일 암의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편; (ⅴ) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편(Ward et al., (1989) Nature 341:544-546); 및 (ⅵ) 기능성을 보유하는 단리된 상보성 결정 구역(CDR)을 포함한다. 더욱이, VL 및 VH인 Fv 단편의 2개의 도메인이 별개 유전자에 의해 코딩되더라도, VL 및 VH 구역이 단쇄 Fv(scFv)로 공지된 1가 분자를 형성하도록 쌍을 이루는 단일 단백질 사슬로 제조되게 하는 합성 링커에 의해 재조합 방법을 이용하여 이들이 연결될 수 있다. 예를 들면, 문헌[Bird et al. (1988) Science 242:423-426; 및 Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883]을 참조한다.
당해 분야의 당업자에게 공지된 종래의 기술을 포함하는 임의의 적절한 기술을 이용하여 항체 단편을 얻을 수 있다. 용어 "단일특이적 항체"는 에피토프와 같은 특정한 표적에 대한 단일 결합 특이성 및 친화도를 나타내는 항체를 의미한다. 이 용어는 단일 분자 조성물의 항체 또는 이의 단편의 제조의 언급에서 본 명세서에 사용되는 "단일클론 항체" 또는 "단일클론 항체 조성물"을 포함한다. 본 명세서에 사용되는 "아이소타입"은 중쇄 불변 구역 유전자에 의해 코딩된 항체 유형(예를 들면, IgM 또는 IgG1)을 의미한다.
본 명세서에 사용되는 "결합 친화도"는 겉보기 해리 상수 또는 Ka를 의미한다. Ka는 해리 상수(Kd)의 역수이다. 결합 단백질은, 예를 들면 특정한 표적 분자에 대해 적어도 10-5, 10-6, 10-7, 10-8, 10-9, 10-10 및 10-11M의 결합 친화도를 가질 수 있다. 제2 표적에 비해 제1 표적에 대한 결합 리간드의 더 높은 친화도 결합은 제2 표적의 결합에 대한 Ka(또는 숫자 값 Kd)보다 제1 표적의 결합에 대한 더 높은 Ka(또는 더 작은 숫자 값 Kd)로 표시될 수 있다. 이런 경우에, 결합 단백질은 제2 표적(예를 들면, 제2 입체형태의 동일한 단백질 또는 이의 모방체; 또는 제2 단백질)에 비해 제1 표적(예를 들면, 제1 입체형태의 단백질 또는 이의 모방체)에 대한 특이성을 갖는다. (예를 들면, 특이성 또는 다른 비교를 위한) 결합 친화도의 차이는 적어도 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 15배, 20배, 50배, 70배, 80배, 100배, 500배, 1000배 또는 105배일 수 있다.
평형 투석, 평형 결합, 겔 여과, ELISA, 표면 플라스몬 공명 또는 (예를 들면, 형광 검정을 이용하는) 분광학을 포함하는 다양한 방법에 의해 결합 친화도를 결정할 수 있다. 결합 친화도를 평가하기 위한 예시적인 조건은 30℃에서의 pH 7.2에서 PBS(인산염 완충 식염수)이다. 결합 단백질(또는 표적) 농도의 함수로서 결합 및 자유 결합 단백질의 농도를 측정하기 위해 이 기술을 이용할 수 있다. 결합된 결합 단백질의 농도([결합])는 자유 결합 단백질의 농도([자유]) 및 표적에서 결합 단백질에 대한 결합 부위의 농도와 관련되고, 여기서 (N)은 하기 방정식에 의해 표적 분자당 결합 부위의 수이다:
[결합] = N
Figure 112013119217010-pct00001
[자유] / ((1/Ka) + [자유]).
그러나, Ka를 정확히 결정하는 것이 항상 필요한 것은 아닌데, 왜냐하면 Ka가 때때로 예를 들면 ELISA 또는 FACS 분석과 같은 방법을 이용하여 결정되는 친화도의 정량적 측정을 얻기 위해 충분하기 때문이고, 상기 방법은 Ka에 비례하고, 따라서 친화도의 정량적 측정을 얻기 위해 또는 예를 들면 실험실내 또는 생체내 검정과 같은 기능성 검정에서 활성에 의해 친화도의 추론을 얻기 위해, 더 높은 친화도가 예를 들면 2배 이상인지를 결정하는 것과 같은 비교를 위해 사용될 수 있다.
용어 "동족 리간드"는 이의 천연 변이체(예를 들면, 스플라이스 변이체, 천연 돌연변이체 및 동형단백질)를 포함하는 FcRn의 천연 리간드를 의미한다.
"보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리가 당해 분야에 정의되어 있다. 이 패밀리는 염기성 측쇄(예를 들면, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들면, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전 극성 측쇄(예를 들면, 글라이신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 타이로신, 시스테인), 비극성 측쇄(예를 들면, 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타 측쇄(예를 들면, 트레오닌, 발린, 아이소류신) 및 방향족 측쇄(예를 들면, 타이로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다. 많은 프레임워크 및 CDR 아미노산 잔기가 하나 이상의 보존적 치환을 포함할 수 있다.
생물중합체에 대한 공통 서열은 다양한 아미노산 중에 변할 수 있는 위치를 포함할 수 있다. 예를 들면, 이러한 문맥 내에 기호 "X"는 일반적으로 임의의 아미노산(예를 들면, 임의의 20개의 천연 아미노산 또는 임의의 19개의 비시스테인 아미노산)을 의미한다. 다른 허용되는 아미노산은 또한 예를 들면 괄호 및 사선을 이용하여 표시될 수 있다. 예를 들면, "(A/W/F/N/Q)"는 알라닌, 트립토판, 페닐알라닌, 아스파라긴 및 글루타민이 특정한 위치에서 허용된다는 것을 의미한다.
"효과적인 인간" 면역글로불린 가변 구역은 면역글로불린 가변 구역이 정상 인간에서 면역원성 반응을 유발하지 않도록 충분한 수의 인간 프레임워크 아미노산 위치를 포함하는 면역글로불린 가변 구역이다. "효과적인 인간" 항체는 항체가 정상 인간에서 면역원성 반응을 유발하지 않도록 충분한 수의 인간 아미노산 위치를 포함하는 항체이다.
"에피토프"는 결합 단백질(예를 들면, 항체, 예컨대 Fab 또는 전장 항체)에 의해 결합된 표적 화합물 상의 부위를 의미한다. 표적 화합물이 단백질인 경우, 이 부위는 전부 아미노산 성분으로 이루어지거나, 전부 단백질의 아미노산의 화학 변형(예를 들면, 글라이코실 모이어티)으로 이루어지거나, 이들의 조합으로 이루어질 수 있다. 중첩 에피토프는 적어도 하나의 공통 아미노산 잔기를 포함한다.
2개의 서열 사이의 "상동성" 또는 "서열 동일성"(이 용어는 본 명세서에서 상호 교환되어 사용됨)의 계산을 하기 대로 수행한다. 서열을 최적 비교 목적을 위해 정렬한다(예를 들면, 갭을 제2 아미노산의 하나 또는 둘 다에서 도입할 수 있거나, 최적 정렬에 대한 핵산 서열 및 비상동성 서열을 비교 목적을 위해 버릴 수 있다). 12의 갭 패널티(gap penalty), 4의 갭 연장 패널티(gap extend penalty) 및 5의 프레임쉬프트 갭 패널티(frameshift gap penalty)를 갖는 블로섬(Blosum) 62 스코어링 매트릭스를 갖는 GCG 소프트웨어 패키지에서 GAP 프로그램을 사용하여 최고의 스코어로서 최적 정렬을 결정한다. 이후, 상응하는 아미노산 위치 또는 뉴클레오타이드 위치에서의 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드를 비교한다. 제1 서열에서의 위치가 제2 서열에서의 상응하는 위치와 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드에 의해 점유될 때, 이 분자는 그 위치에서 동일하다(본 명세서에 사용되는 아미노산 또는 핵산 "동일성"은 아미노산 또는 핵산 "상동성"과 동일하다). 2개의 서열 사이의 동일성(%)은 서열이 공유한 동일한 위치의 수의 함수이다.
일 실시양태에서, 비교 목적을 위해 정렬된 기준 서열의 길이는 기준 서열의 길이의 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 80%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98% 또는 100%이다. 예를 들면, 기준 서열은 면역글로불린 가변 도메인 서열의 길이일 수 있다.
"인간화" 면역글로불린 가변 구역은 면역글로불린 가변 구역이 정상 인간에서 면역원성 반응을 유발하지 않도록 충분한 수의 인간 프레임워크 아미노산 위치를 포함하도록 변형된 면역글로불린 가변 구역이다. "인간화" 면역글로불린의 설명은 예를 들면 미국 특허 제6,407,213호 및 미국 특허 제5,693,762호를 포함한다.
본 명세서에 사용된 용어 "낮은 엄격도, 중간 엄격도, 높은 엄격도 또는 매우 높은 엄격도 조건 하에 하이브리드화한다"는 하이브리드화 및 세척을 위한 조건을 기술한다. 하이브리드화 반응을 수행하는 가이드를 문헌[Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6](이는 참조문헌으로 포함됨)에서 확인할 수 있다. 수성 및 비수성 방법이 이 참조문헌에 기재되어 있고 사용될 수 있다. 본 명세서에서 언급된 구체적인 하이브리드화 조건은 하기와 같다: (1) 약 45℃에서 6X 염화나트륨/시트르산나트륨(SSC) 중의 낮은 엄격도 하이브리드화, 이어서 적어도 50℃에서 0.2X SSC, 0.1% SDS 중의 2회 세척(세척 온도는 낮은 엄격도 조건에 대해 55℃로 증가될 수 있음); (2) 약 45℃에서의 6X SSC 중의 중간 엄격도 하이브리드화 조건, 이어서 60℃에서 0.2X SSC, 0.1% SDS 중의 1회 이상의 세척; (3) 약 45℃에서의 6X SSC 중의 높은 엄격도 하이브리드화 조건, 이어서 65℃에서 0.2X SSC, 0.1% SDS 중의 1회 이상의 세척; 및 (4) 65℃에서 0.5M 인산나트륨, 7% SDS 중의 매우 높은 엄격도 하이브리드화 조건, 이어서 65℃에서 0.2X SSC, 1% SDS 중의 1회 이상의 세척. 매우 높은 엄격도 조건(4)이 바람직한 조건이고 달리 기재되지 않은 한 사용되어야 하는 조건이다. 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 핵산 또는 이의 보체, 예를 들면 본 명세서에 기재된 결합 단백질을 코딩하는 핵산에 낮은, 중간, 높은 또는 매우 높은 엄격도로 하이브리드화하는 핵산을 포함한다. 핵산은 동일한 길이일 수 있거나 기준 핵산의 길이의 30%, 20% 또는 10%일 수 있다. 핵산은 면역글로불린 가변 도메인 서열을 코딩하는 구역에 상응할 수 있다.
FcRn 결합 단백질은 단백질 기능에 실질적인 영향을 미치지 않는 본 명세서에 기재된 결합 단백질(예를 들면, 보존적 또는 비필수 아미노산 치환)에 비해 (예를 들면, 적어도 1개, 2개 또는 4개 및/또는 15개, 10개, 5개 또는 3개 미만의) 돌연변이를 가질 수 있다. 특정한 치환이 허용되든 되지않든, 즉 생물학적 특성에 부정적으로 영향을 미치든 미치지않든, 예를 들면 문헌[Bowie, et al. (1990) Science 247: 1306-1310]의 방법을 이용하여 예컨대 결합 활성이 예상될 수 있다.
"면역글로불린 도메인"은 면역글로불린 분자의 가변 또는 불변 도메인으로부터의 도메인을 의미한다. 면역글로불린 도메인은 통상적으로 약 7개의 β 가닥으로부터 형성된 2개의 β 시트 및 보존 이황화 결합을 포함한다(예를 들면, 문헌[A. F. Williams and A. N. Barclay 1988 Ann. Rev Immunol. 6:381-405] 참조).
본 명세서에 사용되는 "면역글로불린 가변 도메인 서열"은 하나 이상의 CDR 구역이 항원 결합 부위에 적합한 입체형태로 위치하도록 면역글로불린 가변 도메인의 구조를 형성할 수 있는 아미노산 서열을 의미한다. 예를 들면, 서열은 천연 가변 도메인의 아미노산 서열의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 예를 들면, 서열은 1개, 2개 이상의 N 또는 C 말단 아미노산이 생략될 수 있거나, 내부 아미노산은 하나 이상의 삽입 또는 추가의 말단 아미노산을 포함할 수 있거나, 다른 변형을 포함할 수 있다. 일 실시양태에서, 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하는 폴리펩타이드는 다른 면역글로불린 가변 도메인 서열과 회합되어 표적 결합 구조(또는 "항원 결합 부위"), 예를 들면 FcRn 구조와 우선적으로 상호작용하는 구조를 형성할 수 있다.
항체의 VH 또는 VL 사슬은 중쇄 또는 경쇄 불변 구역의 전부 또는 일부를 추가로 포함하여, 각각 중쇄 또는 경쇄 면역글로불린을 형성할 수 있다. 일 실시양태에서, 항체는 2개의 면역글로불린 중쇄 및 2개의 면역글로불린 경쇄의 사합체이고, 중쇄 및 경쇄 면역글로불린은 예를 들면 이황화 결합에 의해 상호 연결된다. 중쇄 불변 구역은 CH1, CH2 및 CH3의 3개의 도메인을 포함한다. 경쇄 불변 구역은 CL 도메인을 포함한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 구역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 포함한다. 항체의 불변 구역은 통상적으로 면역계의 다양한 세포(예를 들면, 이팩터 세포) 및 전통적인 보체 시스템의 제1 성분(Clq)을 포함하는 숙주 조직 또는 인자에 대한 항체의 결합을 중재한다. 용어 "항체"는 IgA, IgG, IgE, IgD, IgM 유형(및 이의 아형)의 온전한 면역글로불린을 포함한다. 면역글로불린의 경쇄는 카파 또는 람다 유형일 수 있다. 일 실시양태에서, 항체가 글라이코실화된다. 항체는 항체 의존적 세포독성 및/또는 보체 매개 세포독성에 기능할 수 있다.
항체의 하나 이상의 구역은 인간 또는 효과적인 인간일 수 있다. 예를 들면, 하나 이상의 가변 구역은 인간 또는 효과적인 인간일 수 있다. 예를 들면, 하나 이상의 CDR은 인간, 예를 들면 HC CDR1, HC CDR2, HC CDR3, LC CDR1, LC CDR2 및 LC CDR3일 수 있다. 각각의 경쇄 CDR은 인간일 수 있다. HC CDR3은 인간일 수 있다. 하나 이상의 프레임워크 구역은 인간, 예를 들면 HC 또는 LC의 FR1, FR2, FR3 및 FR4일 수 있다. 일 실시양태에서, 모든 프레임워크 구역은 예를 들면 인간 체세포, 예를 들면 면역글로불린을 생성하는 조혈 세포 또는 비조혈 세포 유래의 인간이다. 일 실시양태에서, 인간 서열은 예를 들면 생식선 핵산에 의해 코딩된 생식선 서열이다. 하나 이상의 불변 구역은 인간 또는 효과적인 인간일 수 있다. 일 실시양태에서, 항체의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95% 또는 98% 또는 이의 전부가 인간 또는 효과적인 인간일 수 있다.
항체의 전부 또는 일부는 면역글로불린 유전자 또는 이의 분절에 의해 코딩될 수 있다. 예시적인 인간 면역글로불린 유전자는 카파, 람다, 알파(IgA1 및 IgA2), 감마(IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), 델타, 엡실론 및 뮤 불변 구역 유전자 및 미리아드(myriad) 면역글로불린 가변 구역 유전자를 포함한다. 전장 면역글로불린 "경쇄"(약 25의 KDa 또는 214개의 아미노산)은 NH2 말단(약 110개의 아미노산)에서의 가변 구역 유전자 및 COOH- 말단에서의 카파 또는 람다 불변 구역 유전자에 의해 코딩된다. 전장 면역글로불린 "중쇄"(약 50의 KDa 또는 446개의 아미노산)은 가변 구역 유전자(약 116개의 아미노산) 및 다른 상기 언급된 불변 구역 유전자 중 하나, 예를 들면 감마(약 330개의 아미노산을 코딩)에 의해 유사하게 코딩된다.
"단리된 조성물"은 단리된 조성물이 얻어질 수 있는 천연 샘플의 적어도 하나의 성분의 적어도 90%가 제거된 조성물을 의미한다. 인공 또는 천연 제조된 조성물은 관심 대상의 종 또는 종 집단이 중량-중량 기준으로 적어도 5%, 10%, 25%, 50%, 75%, 80%, 90%, 92%, 95%, 98% 또는 99% 순수한 경우 특정 정도의 순도의 "적어도 하나의 조성물"일 수 있다.
FcRn 또는 이의 일부의 입체형태의 모방체의 문맥 내에서 용어 "모방체"는 천연 FcRn 또는 이의 일부에 비해 적어도 하나의 특정한 입체형태에 대한 편향을 갖는 변형 FcRn을 의미한다.
"비필수" 아미노산 잔기는 예를 들면 생물학적 활성을 파기하거나 실질적으로 변경함이 없이 항체와 같은 결합제의 야생형 서열로부터 변경될 수 있는 잔기인 반면, "필수" 아미노산 잔기는 이러한 변화를 발생시킨다.
본 명세서에 사용되는 구절 "비경구 투여" 및 "비경구로 투여한다"는 일반적으로 주사에 의한 장내 및 국소 투여 이외의 투여 방식을 의미하고, 제한함이 없이, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척추강내, 관절낭내, 안와내, 심장내, 진피내, 복강내, 경기관, 피하, 피내, 관절내, 피막밑, 지주막하, 척수내, 경막 및 흉골내 주사 및 점적을 포함한다.
용어 "폴리펩타이드" 또는 "펩타이드"(상호 교환되어 사용할 수 있음)는 펩타이드 결합에 의해 연결된 3개 이상의 아미노산, 예를 들면 3개 내지 30개, 12개 내지 60개 또는 30개 내지 300개 또는 300개 초과의 길이의 아미노산의 중합체를 의미한다. 폴리펩타이드는 하나 이상의 비천연 아미노산을 포함할 수 있다. 통상적으로, 폴리펩타이드는 유일한 천연 아미노산을 포함한다. "단백질"은 하나 이상의 폴리펩타이드 사슬을 포함할 수 있다. 따라서, 용어 "단백질"은 폴리펩타이드를 포함한다. 단백질 또는 폴리펩타이드는 또한 하나 이상의 변형, 예를 들면 글라이코실화, 아미드화, 인산화, 나이트로실화 등을 포함할 수 있다. 용어 "작은 펩타이드"는 3개 내지 30개의 길이의 아미노산, 예를 들면 8개 내지 24개의 길이의 아미노산인 폴리펩타이드를 기술하기 위해 사용될 수 있다.
"예방학적 유효량"은 원하는 예방학적 결과를 성취하기 위해 필요한 시간 동안 및 용량에서 효과적인 양을 의미한다. 통상적으로, 예방학적 용량이 질환의 초기 병기에 또는 그 이전에 피험체에서 사용되므로, 예방학적 유효량은 치료학적 유효량보다 적다.
본 명세서에 사용된 용어 "실질적으로 동일한"(또는 "실질적으로 상동성인")은 제1 및 제2 아미노산 또는 핵산 서열이 유사한 활성, 예를 들면 결합 활성, 결합 우선도 또는 생물학적 활성을 갖도록(또는 이들을 갖는 단백질을 코딩하도록) 제2 아미노산 또는 핵산 서열과 충분한 수의 동일하거나 균등한(예를 들면, 유사한 측쇄, 예를 들면 보존된 아미노산 치환을 갖는) 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드를 포함하는 제1 아미노산 또는 핵산 서열을 의미하기 위해 본 명세서에서 사용된다. 항체의 경우에, 제2 항체는 동일한 특이성을 갖고 동일한 항원에 비해 적어도 50%의 친화도를 갖는다.
본 명세서에 개시된 서열에 유사한 또는 상동성인(예를 들면, 적어도 약 85%의 서열 동일성) 서열은 또한 본 출원의 일부이다. 몇몇 실시양태에서, 서열 동일성은 약 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상일 수 있다. 또한, 핵산 분절이 가닥의 보체에 대한 선택적 하이브리드화 조건(예를 들면, 매우 엄격한 하이브리드화 조건) 하에 하이브리드화할 때 실질적인 동일성이 존재한다. 핵산은 전세포로, 세포 용해물로 또는 부분 정제된 형태로 또는 실질적으로 순수한 형태로 존재할 수 있다.
임의의 기술 공지 방법에 의해 통계 유의성을 결정할 수 있다. 예시적인 통계 시험은 스튜던츠 T 시험, 만 휘트니(Mann Whitney) U 비모수 시험 및 윌콕손(Wilcoxon) 비모수 통계 시험을 포함한다. 여러 통계학적으로 유의한 관계식은 0.05 또는 0.02 미만의 P 값을 갖는다. 특정한 결합 단백질은 예를 들면 통계학적으로 유의적인(예를 들면, 0.05 또는 0.02 미만의 P 값) 특이성 또는 결합의 차이를 나타낼 수 있다. 2개의 상태 사이의 구별 가능한 정성적 또는 정량적 차이를 나타내는 예를 들면 용어 "유도한다", "억제한다", "강화된다", "상승한다", "증가한다", "감소한다" 등은 예를 들면 2개의 상태 사이의 통계학적으로 유의적인 차이와 같은 차이를 의미할 수 있다.
"치료학적 유효량"은 비치료 피험체에 비해 측정 가능한 매개변수, 예를 들면 순환 IgG 항체의 수준을 통계학적으로 유의적인 정도로 또는 적어도 약 20%, 적어도 약 40%, 적어도 약 60% 또는 적어도 약 80%로 중재한다. 인간 자가면역 장애에서 효능을 예측하는 동물 모델 시스템에서 측정 가능한 매개변수, 예를 들면 자가면역을 중재하는 화합물의 능력을 평가할 수 있다. 대안적으로, 예를 들면 당업자에게 공지된 검정에 의해 실험실내 매개변수를 중재하는 화합물의 능력을 평가하여 조성물의 이 특성을 평가할 수 있다.
본 발명의 다른 특징 및 이점은 하기 상세한 설명 및 특허청구범위로부터 더 명확해진다. 본 발명의 실시양태는 본 명세서에 기재된 특징의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 어떠한 경우에도 용어 "실시양태"는 본 명세서에 개시된 하나 이상의 다른 특징을 배제하지 않는다.
FcRn 서열
하기 서열 정렬은 랫트 FcRn 알파 사슬 아미노산 서열을 갖는 인간 FcRn 알파 사슬 아미노산 서열이다. 예시적인 FcRn 단백질은 이 2개의 서열 또는 이의 단편, 예를 들면 신호 서열 없는 단편 중 하나를 포함할 수 있다:
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Figure 112013119217010-pct00003
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Figure 112013119217010-pct00007
Figure 112013119217010-pct00008
하기 서열 정렬은 랫트 β2 마이크로글로불린 아미노산 서열을 갖는 인간 β2 마이크로글로불린 아미노산 서열이다. 예시적인 FcRn 단백질은 이 2개의 서열 또는 이의 단편, 예를 들면 신호 서열 없는 단편 중 하나를 포함할 수 있다:
Figure 112013119217010-pct00009
Figure 112013119217010-pct00010
FcRn 단백질 알파 사슬을 코딩하는 예시적인 핵산 서열은 하기 서열을 포함할 수 있다:
FcRn 알파 뉴클레오타이드 서열(호모 사피엔스):
Figure 112013119217010-pct00011
예시적인 인간 FcRn의 핵산 서열(세포외 도메인) + GPI DNA 서열(소문자 볼드체)이 하기 기재되어 있다.
Figure 112013119217010-pct00012
베타-2-마이크로글로불린(β2M)을 포함하는 예시적인 핵산 서열은 하기 서열을 포함할 수 있다:
베타-2-마이크로글로불린(B2M) 뉴클레오타이드(호모 사피엔스):
Figure 112013119217010-pct00013
FcRn 결합 항체
DX2504는 WO2009/131702 및 미국 특허 출원 공개 제2009-0324614-A1호에 기재된 FcRn 결합 항체이다. WO2009/131702 및 특허 출원 공개 제2009-0324614-A1호 둘 다 그 전문이 본 출원에 참조문헌으로 포함된다. 표적으로서 FcRn 폴리펩타이드 또는 FcRn을 발현하는 세포를 사용하여 단일클론 항체 기술과 파지 디스플레이 실험의 조합에 의해 DX2504를 생성한다. 또한, DX2504의 서열은 더 낮은 면역원성으로 생성된다. DX2504 경쇄 및 중쇄의 서열이 하기 기술되어 있다:
경쇄 가변 구역(서열 번호 8):
Figure 112013119217010-pct00014
경쇄 전장(서열 번호 16; CL 밑줄):
Figure 112013119217010-pct00015
중쇄 가변 구역(서열 번호 9):
Figure 112013119217010-pct00016
중쇄 전장(서열 번호 17; CH 밑줄):
Figure 112013119217010-pct00017
결합 FcRn 이외에, DX2504 또는 전구체 항체는 FcRn 발현 세포에 대한 IgG-Fc의 결합을 차단하는 것으로 나타났다(WO2009/131702의 실시예 21). 더욱이, 마우스 FcRn이 인간 FcRn으로 대체된 마우스인 Tg32B 마우스에 DX2504를 투여하는 것은 이전에 마우스에 투여된 인간 IgG의 수준을 낮춘다(WO2009/131702의 실시예 27). 더구나, 사이노몰거스 원숭이에서 DX2504의 투여는 IgG 혈청 수준을 낮춘다(WO2009/131702의 실시예 27).
DX2504의 경쇄(예를 들면, 본 명세서에 기재된 시스테인 돌연변이체) 또는 중쇄의 불변 구역(예를 들면, 본 명세서에 기재된 결실 돌연변이체)의 CDR3을 변경하는 것은 DX2504와 비교할 때 특성이 개선된 FcRn 결합 항체를 생성시키는 것으로 본 명세서에서 예상치 못하게 발견되었다. 이러한 발견은 적어도 부분적으로 예상치 못했는데, 왜냐하면 일반적으로 추가의 돌연변이를 도입함으로써 DX2504와 같은 많은 횟수의 서열 최적화를 통과한 항체가 추가로 용이하게 최적화될 수 없기 때문이다.
시스테인 돌연변이체
본 명세서에 기재된 DX2504의 시스테인 돌연변이체는 적어도 하나의 CDR3의 제1 위치, 예를 들면 다른 아미노산 잔기, 예컨대 Ala, Ser 또는 이의 보존적 치환으로 대체된 DX2504의 VL CDR3의 제1 위치에서 시스테인 잔기가 결여된다. 예시적인 시스테인 돌연변이체는 (서열 번호 10에 기술된 VL을 갖는) 532A-X53-C02 및 (서열 번호 11에 기술된 VL을 갖는) 532A-X53-B03을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 이러한 돌연변이체는 FcRn 결합 활성, 예를 들면 일상적인 방법에 의해 결정될 수 있는 10nM 미만의 해리 상수(KD)로 인간 FcRn에 대한 결합을 보존한다. 몇몇 예에서, 시스테인 돌연변이체는 2개의 VL 사슬을 포함하고, 이들 중 하나 또는 둘 다는 VL CDR3 구역의 제1 위치에서 시스테인을 갖지 않는다.
본 명세서에 기재된 시스테인 돌연변이체는 CDR1, CDR2 및 CDR3이 DX2504의 VL CDR1 및 VL CDR2(각각 서열 번호 14 및 서열 번호 15; 532A-X53-C02 또는 532A-X53-B03에서의 것과 동일) 및 DX2504의 변경된 VL CDR3(서열 번호 12 또는 13, 532A-X53-C02 또는 532A-X53-B03의 VL CDR3)에 적어도 70%(예를 들면, 적어도 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%)의 서열 동일성을 공유하는 VL 사슬을 포함할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 하나 이상의 VL CDR은 532A-X53-C02 또는 532A-X53-B03의 상응하는 CDR(들)과 적어도 70%의 서열 동일성을 공유한다. 예를 들면, 시스테인 돌연변이체는 서열 SSYAGSGIYV(서열 번호 12) 또는 ASYAGSGIYV(서열 번호 13) 내에 VL CDR3 구역에서 적어도 70%(적어도 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%)의 상동성을 갖는다.
다른 실시양태에서, 조합된 시스테인 돌연변이체의 VL CDR은 조합된 532A-X53-C02 또는 532A-X53-B03과 적어도 70%의 서열 동일성을 공유한다. 예를 들면, 기준 CDR 서열과 CDR1, CDR2 및 CDR3 구역에서 적어도 90%의 상동성을 갖는 항체는 532A-X53-C02의 조합된 CDR1, CDR2 및 CDR3 구역에서 발견되는 아미노산과 동일한 조합된 CDR1, CDR2 및 CDR3 구역에서 매 10개의 아미노산 중 적어도 9개의 아미노산을 갖는 항체를 의미한다.
대안적으로, 항체는 서열 SSYAGSGIYV(서열 번호 12) 또는 ASYAGSGIYV(서열 번호 13)와 비교할 때 VL CDR3 구역에서 1개 이하, 이하 2개 이하, 3개 이하, 4개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 치환을 가질 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 시스테인 돌연변이체는 DX2504의 CDR3 구역과 비교할 때 VL CDR3 구역에서 3개 이하의 치환을 포함할 수 있다. 하나 이상의 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환일 수 있다.
더구나, 시스테인 돌연변이체 항체는 532A-X53-C02 또는 532A-X53-B03의 CDR1, CDR2 및 CDR3 구역의 서열과 비교할 때 CDR1, CDR2 및 CDR3 구역에서 1개 이하, 2개 이하, 3개 이하, 4개 이하, 5개 이하, 6개 이하, 7개 이하, 8개 이하, 9개 이하, 10개 이하 또는 15개 이하의 아미노산 치환을 가질 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 이것은 총체적으로 VL CDR1, CDR2 및 CDR3 구역에서 10개 이하의 치환을 포함할 수 있다. 일례에서, 하나 이상의 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다.
몇몇 실시양태에서, 시스테인 돌연변이체는 532A-X53-C02(서열 번호 10) 또는 532A-X53-B03(서열 번호 11)의 VL 서열과 적어도 70%(예를 들면, 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 98%)의 서열 동일성을 공유하는 VL 사슬을 포함한다. 일례에서, 시스테인 돌연변이체는 532A-X53-C02 또는 532A-X53-B03과 동일한 VL CDR3 구역 및 임의로 2개의 예시적인 돌연변이체와 동일한 VL CDR1 및 CDR2 구역을 포함한다.
칼린(Karlin) 및 알츌(Altschul)의 문헌[Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-77, 1993]에서 변형된 바대로, 칼린 및 알츌의 문헌[Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-68, 1990]의 알고리즘을 이용하여 2개의 아미노산 서열의 "동일성(%)"을 결정할 수 있다. 이러한 알고리즘은 문헌[Altschul, et al. J. Mol. Biol. 215:403-10, 1990]의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램(버전 2.0)으로 통합된다. 관심 대상의 단백질 분자에 상동성인 아미노산 서열을 얻기 위해 XBLAST 프로그램, 스코어 = 50, 워드길이 = 3으로 BLAST 단백질 조사를 수행할 수 있다. 2개의 서열 사이에 갭이 존재하는 경우, 문헌[Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402, 1997]에 기재된 바대로 갭드(Gapped) BLAST를 이용할 수 있다. BLAST 및 갭드 BLAST 프로그램을 이용할 때, 각각이 프로그램(예를 들면, XBLAST 및 NBLAST)의 디폴트 매개변수를 이용할 수 있다.
몇몇 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 시스테인 돌연변이체는 상기 기재되어 있고 하기 실시예 1에 기재된 2개의 예시적인 돌연변이체와 비교하여 프레임워크 구역(FR) 내에 하나 이상의 돌연변이(예를 들면, 보존적 아미노산 치환)를 포함할 수 있다. 당해 분야에 공지된 바대로, FR 구역 내의 돌연변이는 항체의 항원 결합 활성에 영향을 미치지 않을 것이다. 다른 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 시스테인 돌연변이체는 532A-X53-C02 또는 532A-X53-B03과 비교할 때 하나 이상의 CDR 구역 내에 하나 이상의 돌연변이(예를 들면, 1개, 2개 또는 3개의 돌연변이, 예컨대 보존적 아미노산 치환)를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 이러한 돌연변이체는 CDR 내에 부모, 예컨대 동일한 특이성 결정 잔기로서 항원 결합을 책임지는 동일한 구역/잔기를 보유한다.
일반적으로, 시스테인 잔기가 다른 시스테인과 공유 결합을 형성할 수 있으므로, 시스테인 잔기는 독특한 특성을 갖는 단백질을 제공한다. 시스테인의 돌연변이는 대개 상당히 변경된 특성을 갖는 단백질을 생성시킨다. 따라서, 예상치 못하게 세린(C54-C02) 또는 알라닌(X54-B03)으로 돌연변이된 경쇄의 CDR3에서 시스테인을 갖는 항체가 크기 배제 크로마토그래피(도 1) 및 SDS-PAGE 분석(도 2)에 의해 측정할 때 DX-2504보다 더 동종성인 것으로 밝혀졌다. 또한, 예상치 못하게 시스테인 돌연변이체가 37℃ 항온처리에서 30일 항온처리(도 3) 또는 이후 pH 8.3에서의 15일 항온처리(도 4) 후에 단량체 IgG 종(%)에 비해 더 안정한 것으로 밝혀졌다. 항체의 CDR의 돌연변이는 항원 결합의 친화도를 대개 감소시킨다. 따라서, 추가로 예상치 못하게 DX-2504의 경쇄의 CDR3에서의 시스테인의 돌연변이가 항원 결합의 친화도에 영향을 미치지 않는 것으로 밝혀졌다(도 7 및 도 8).
상기 기재된 임의의 시스테인 돌연변이체는 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3 구역을 포함하는 중쇄 가변 구역(VH)을 추가로 포함할 수 있다. VH는 DX2504(서열 번호 9) 또는 이의 기능성 변이체와 동일할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 기능성 변이체에서의 VH CDR은 DX2504(서열 번호 22, 서열 번호 23 및 서열 번호 24)와 적어도 70%(예를 들면, 적어도 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%)의 서열 동일성을 공유한다. 일례에서, 하나 이상의 VH CDR은 DX2504의 상응하는 VH CDR(들)과 적어도 70%의 서열 동일성을 공유하고, 예를 들면 서열 LAIGDSY(서열 번호 24)와 VH CDR3 구역에서 적어도 70%(적어도 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%)의 상동성을 갖는다.
다른 예에서, 조합된 기능성 변이체의 VH CDR은 조합된 DX2504와 적어도 70%의 서열 동일성을 공유한다. 예를 들면, 기준 CDR 서열과 CDR1, CDR2 및 CDR3 구역에서 적어도 90%의 상동성을 갖는 항체는 DX2504의 조합된 CDR1, CDR2 및 CDR3 구역에서 발견되는 아미노산과 동일한 조합된 CDR1, CDR2 및 CDR3 구역에서 매 10개의 아미노산 중 적어도 9개의 아미노산을 갖는 항체를 의미한다.
대안적으로, 기능성 돌연변이체는 DX2504의 CDR3 서열(LAIGDSY; 서열 번호 24)과 비교하여 CDR3 구역에서 1개 이하, 2개 이하, 3개 이하, 4개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 기능성 변이체는 DX2504의 CDR3 구역과 비교하여 VH CDR3 구역에서 3개 이하의 치환을 포함한다. 일례에서, 하나 이상의 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다.
더구나, 기능성 변이체는 DX2504의 CDR1, CDR2 및 CDR3 구역의 서열과 비교하여 CDR1, CDR2 및 CDR3 구역에서 1개 이하, 2개 이하, 3개 이하, 4개 이하, 5개 이하, 6개 이하, 7개 이하, 8개 이하, 9개 이하, 10개 이하, 11개 이하, 12개 이하, 13개 이하, 14개 이하 또는 15개 이하의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 이는 총체적으로 VH CDR1, CDR2 및 CDR3 구역에서 10개 이하의 치환을 포함한다. 일례에서, 하나 이상의 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다.
몇몇 실시양태에서, 기능성 변이체는 DX2504의 VH 서열(서열 번호 9)과 적어도 70%(예를 들면, 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 98%)의 서열 동일성을 공유하는 VH 사슬을 포함한다. 일례에서, 기능성 변이체는 DX2504와 동일한 VH CDR3 구역 및 임의로 DX2504와 동일한 VH CDR1 및 CDR2 구역을 포함한다.
원하는 경우, 본 명세서에 기재된 DX2504 중쇄의 기능성 변이체는 DX2504의 프레임워크 구역(FR) 내에 하나 이상의 돌연변이(예를 들면, 보존적 아미노산 치환)를 포함할 수 있다(상기 설명 참조). 당해 분야에 공지된 바대로, FR 구역 내의 돌연변이는 항체의 항원 결합 활성에 영향을 미치지 않는다. 다른 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 시스테인 돌연변이체는 DX2504와 비교할 때 하나 이상의 CDR 구역 내에 하나 이상의 돌연변이(예를 들면, 1개, 2개 또는 3개의 돌연변이, 예컨대 보존적 아미노산 치환)를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 이러한 돌연변이체는 CDR 내에 부모, 예컨대 동일한 특이성 결정 잔기로서 항원 결합을 책임지는 동일한 구역/잔기를 보유한다.
일례에서, 본 명세서에 기재된 DX2504의 시스테인 돌연변이체는 532A-X53-C02 또는 532A-X53-B03과 적어도 70%(예를 들면, 적어도 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%)의 상동성을 갖는 경쇄 및 DX2504와 동일한 CDR을 포함하는 중쇄(예를 들면, DX2504와 동일한 중쇄 가변 구역)를 포함한다. 다른 예에서, 돌연변이체는 532A-X53-C02 또는 532A-X53-B03과 동일한 VL 및 DX2504와 동일한 VH를 포함한다.
결실 돌연변이체
예상치 못하게, DX2504의 중쇄의 C 말단 라이신 잔기의 결실이 DX2504와 비교할 때 동물 모델에서 항체 보유가 증가하고 IgG의 감소가 더 큰 항-FcRn 항체(DX2507)를 생성시킨다는 것이 또한 발견되었다(도 13 및 도 14).
따라서, DX2504의 중쇄와 비교할 때 이의 중쇄에서 C 말단 라이신 잔기가 결여된 결실 돌연변이체가 또한 본 명세서에 기재되어 있다. 더 구체적으로, 본 명세서에 기재되어 있는 결실 돌연변이체의 중쇄는 DX2504의 중쇄(서열 번호 17) 또는, DX2504의 중쇄(서열 번호 17)에서 C 말단 라이신 잔기에 상응하는 아미노산 잔기의 결실을 제외하고, 상기 기재된 DX2504의 임의의 기능성 변이체의 중쇄와 달리 동일할 수 있다. 이러한 중쇄의 일례는 하기 실시예 2에 기재된 DX2507(서열 번호 19)이다.
상기 기재된 결실 돌연변이체는 DX2504의 VL 구역 또는 본 명세서에 기재된 임의의 시스테인 돌연변이체의 VL 구역을 포함할 수 있는 경쇄를 추가로 포함할 수 있다.
몇몇 예에서, 결실 돌연변이체는 DX2504, 532A-X53-C02 또는 532A-X53-B03과 동일한 VL CDR(예를 들면, DX2504, 532A-X53-C02 또는 532A-X53-B03과 동일한 VL)을 포함하는 경쇄, DX2504와 동일한 VH CDR(예를 들면, DX2504와 동일한 VH)를 포함하는 중쇄 및 DX2504의 중쇄의 C 말단 라이신 잔기에 상응하는 위치에서 결실을 갖는 중쇄 불변 구역을 포함한다.
본 명세서에 기재되어 있는 임의의 시스테인 및 결실 돌연변이체는 10nM 미만의 해리 상수(KD)로 인간 FcRn에 결합할 수 있다.
본 명세서에 기재된 아미노산 서열을 갖는 것 이외에, 본 명세서에 기재된 항-FcRn 항체는 임의의 구조 프레임워크를 가질 수 있다. 따라서, 예를 들면 상기 기재된 CDR1, CDR2 및 CDR3 구역은 "전통적인" 항체 프레임워크에 포함될 수 있거나, scFv 또는 Fab 프레임워크에 포함될 수 있다. 본 명세서에 기재된 항-FcRn 항체는 전장 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예를 들면 Fab, F(ab)'2, Fv 또는 ScFv 항체일 수 있다. 이것은 비인간 항체, 예컨대 쥣과 항체(예를 들면, 하이브리도마 세포주에 의해 제조된 단일클론 항체), 키메라 항체 또는 인간화 항체일 수 있다.
본 명세서에 기재된 임의의 항-FcRn 항체의 VH 및/또는 VL을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산(예를 들면, 임의의 시스테인 돌연변이체 또는 임의의 상기 기재된 결실 돌연변이체)이 본 개시내용의 범위 내에 또한 있다. 재조합 기술을 통해 항-FcRn 항체의 생성을 위해 적합한 숙주 세포(예를 들면, 박테리아 세포, 예컨대 이. 콜라이 세포, 효모 세포, 곤충 세포, 식물 세포 또는 포유동물 세포)에 도입될 수 있는 발현 벡터로 이러한 핵산 서열을 삽입할 수 있다.
마우스 단일클론 항체를 제조하는 방법
단일클론 항체를 제조하는 방법이 기재되어 있다(Harlow et al., Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1988)). 몇몇 경우에, 제1 단계로서, 설치류, 예를 들면 마우스를 항체 반응을 생성시키는 항원 폴리펩타이드로 면역화한다. FcRn이 편재하여 발현되고 종 사이의 높은 정도의 상동성을 나타내므로, 폴리펩타이드 면역화는 고친화도 FcRn 특이적 단일클론 항체 또는 FcRn 단일클론 차단 항체를 생성하는 데 있어서 성공적이지 않다. 이러한 문제를 해결하기 위해, DNA 백신접종을 수행할 수 있다(Castagliola et al., J. Immunology 160: 1458 (1998)). DNA 백신접종은 FcRn 또는 이의 단편을 코딩하는 cDNA 구성체로 마우스와 같은 설치류를 면역화하는 것을 수반한다. 근육내, 복강내, 피하로, 정맥내, 진피내 또는 직접적으로 림프절에 면역화를 투여할 수 있다. 일 실시양태에서, 근육내 면역화를 투여한다. 아쥬번트, 예를 들면 프로인트 완전 아쥬번트 또는 프로인트 불완전 아쥬번트와 함께 DNA 백신접종을 투여할 수 있다. 항체 역가를 증가시키기 위해 심장독의 투여에 의해 DNA 백신접종을 수행할 수 있다. 심장독의 투여는 투여된 DNA 백신의 세포 흡수를 증진시키는 세포 재생성 및 세포사를 발생시킨다. 심장독은 더 강건한 면역 반응을 발생시키는 염증을 또한 증가시킨다.
항체 분비 세포(B 세포)는 설치류로부터 단리된다. 통상적으로, B 세포는 설치류 비장으로부터 단리되고 골수종 세포주와 융합될 수 있다. 골수종 세포주는 항체를 생성하지 않는 불멸화 세포주이다. 골수종 세포주는 P3-X63Ag8, X63Ag8.653, Sp2/0-Ag14, FO, NSI/1-Ag4-1, NSO/1, FOX-NY, Y3-Ag 1.2.3, YB2/0 및 IR983F로부터 선택되지만, 이들로 제한되지는 않는다.
비장세포는 골수종 세포주와 융합되어 하이브리도마를 형성한다. 적절한 기간(예를 들면, 5분) 동안 2개의 세포 유형을 폴리에틸렌 글라이콜과 혼합하여 융합을 중재할 수 있다. 형성된 하이브리도마를 적절한 선택 배지(예를 들면, HAT)를 사용하여 세포 배양으로 성장시키고 FcRn에 대해 단일클론 항체를 생성하는 이의 능력에 대해 스크리닝한다. ELISA와 같은 공지된 면역학적 기술을 이용하여 스크리닝을 수행할 수 있다.
FcRn 특이적 단일클론 항체를 제조하는 다른 접근법은 형질전환 FcRn 넉아웃 마우스를 가용성 인간 FcRn으로 면역화하는 것이고, PCT 출원 WO 02/43658을 참조한다. WO 02/43658은 게놈이 이의 내인성 FcRn 유전자에서 동형성 파괴를 포함하는 형질전환 마우스를 기재하고, 상기 동형성 파괴는 기능성 FcRn 단백질의 발현을 방지한다. 게놈이 이의 내인성 FcRn 유전자에서 동형성 파괴를 포함하는 형질전환 마우스에서 본 발명의 단일클론 항체가 제조되지 않고, 상기 동형성 파괴는 기능성 FcRn 단백질의 발현을 방지한다. 본 발명의 단일클론 항체는 게놈이 이의 내인성 FcRn 유전자에서 동형성 파괴를 포함하는 형질전환 마우스 유래의 B 세포를 포함하지 않고, 상기 동형성 파괴는 기능성 FcRn 단백질의 발현을 방지한다.
인간화 항-FcRn 항체 디스플레이 라이브러리
FcRn에 결합하는 항체를 확인하기 위해 디스플레이 라이브러리를 사용할 수 있다. 디스플레이 라이브러리는 집합체의 수집이고; 각각의 집합체는 폴리펩타이드 성분을 코딩하거나 확인하는 회수 가능한 성분 및 접근 가능한 폴리펩타이드 성분을 포함한다. 상이한 아미노산 서열이 나타나도록 폴리펩타이드 성분이 변한다. 폴리펩타이드 성분은 예를 들면 3개의 아미노산 내지 300개 초과의 아미노산의 임의의 길이일 수 있다. 선택시, 라이브러리의 각각의 구성원의 폴리펩타이드 성분을 FcRn으로 프로빙하고, 폴리펩타이드 성분이 FcRn에 결합하는 경우, 통상적으로 지지체 상의 보유에 의해 디스플레이 라이브러리 구성원이 확인된다. 또한, 디스플레이 라이브러리 집합체는 1개 초과의 폴리펩타이드 성분, 예를 들면 sFab의 2개의 폴리펩타이드 사슬을 포함할 수 있다.
보유된 디스플레이 라이브러리 구성원을 지지체로부터 회수하고 분석한다. 분석은 유사 또는 비유사 조건 하에 증폭 및 후속 선택을 포함할 수 있다. 예를 들면, 양성 및 음성 선택이 교대될 수 있다. 분석은 상세한 규명을 위해 폴리펩타이드 성분의 아미노산 서열의 결정 및 폴리펩타이드 성분의 정제를 또한 포함할 수 있다.
디스플레이 라이브러리에 다양한 포맷을 사용할 수 있다. 예는 하기를 포함한다.
파지 디스플레이. 1개의 포맷은 바이러스, 특히 박테리오파지를 사용한다. 이 포맷을 "파지 디스플레이"라 칭한다. 단백질 성분은 통상적으로 박테리오파지 코트 단백질에 공유 결합된다. 코트 단백질에 융합된 단백질 성분을 코딩하는 핵산의 번역으로부터 결합이 생긴다. 결합은 중지 코돈의 억제의 결과로서 도입된 가요성 펩타이드 링커, 프로테아제 부위 또는 아미노산을 포함할 수 있다. 예를 들면, 미국 제5,223,409호; 문헌[Smith (1985) Science 228: 1315-1317]; WO 제92/18619호; WO 제91/17271호; WO 제92/20791호; WO 제92/15679호; WO 제93/01288호; WO 제92/01047호; WO 제92/09690호; WO 제90/02809; 문헌[de Haard et al. (1999) J. Biol. Chem 274: 18218-30; Hoogenboom et al. (1998) Immunotechnology 4: 1-20; Hoogenboom et al. (2000) Immunol Today 2:371-8; Fuchs et al. (1991) Bio/Technology 9: 1370-1372; Hay et al. (1992) Hum Antibod Hybridomas 3:81-85; Huse et al. (1989) Science 246: 1275-1281; Griffiths et al. (1993) EMBO J 12:725-734; Hawkins et al. (1992) J Mol Biol 226:889-896; Clackson et al. (1991) Nature 352:624-628; Gram et al. (1992) PNAS 89:3576-3580; Garrard et al. (1991) Bio/Technology 9: 1373-1377; 및 Hoogenboom et al. (1991) Nuc Acid Res 19:4133-4137]에 파지 디스플레이가 기재되어 있다.
섬사상 파지(파지 f1, fd 및 M13) 및 다른 박테리오파지를 위해 파지 디스플레이 시스템이 개발되었다. 섬사상 파지 디스플레이 시스템은 통상적으로 마이너 코트 단백질, 예컨대 유전자 III 단백질 및 유전자 VIII 단백질, 메이져 코트 단백질에 대한 융합을 이용하지만, 다른 코트 단백질, 예컨대 유전자 VI 단백질, 유전자 VII 단백질, 유전자 IX 단백질 또는 이의 도메인에 대한 융합을 또한 이용할 수 있다(예를 들면, WO 제00/71694호 참조). 일 실시양태에서, 융합은 유전자 III 단백질의 도메인, 예를 들면 앵커 도메인 또는 "스텀프(stump)"에 대한 것이다(예를 들면, 유전자 III 단백질 앵커 도메인의 설명을 위해 미국 특허 제5,658,727호 참조). 또한, 디스플레이되는 단백질을 비펩타이드 결합을 이용하여 코트에 물리적으로 회합시킬 수 있다.
성장 배지로부터의 PEG 침전과 같은 표준 파지 제조 방법을 이용하여 박테리오파지 디스플레이 단백질 성분을 성장시키고 수확할 수 있다. 각각의 디스플레이 파지의 선택 후, 선택된 단백질 성분을 코딩하는 핵산을 증폭 후 선택된 파지로 감염된 세포 또는 파지 그 자체로부터 단리할 수 있다. 각각의 콜로니 또는 플라크는 단리된 및 서열분석된 선발된 핵산일 수 있다.
다른 디스플레이 포맷. 다른 디스플레이 포맷은 세포 기반 디스플레이(예를 들면, WO 제03/029456호 참조), 단백질-핵산 융합(예를 들면, 미국 특허 제6,207,446호 참조) 및 리보솜 디스플레이(예를 들면, 문헌[Mattheakis et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:9022 및 Hanes et al. (2000) Nat Biotechnol. 18: 1287-92; Hanes et al. (2000) Methods Enzymol. 328:404-30; 및 Schaffitzel et al. (1999) J Immunol Methods. 231(1-2): 119-35] 참조)를 포함한다.
스캐폴드. 디스플레이를 위한 스캐폴드는 항체(예를 들면, Fab 단편, 단쇄 Fv 분자(scFV), 단일 도메인 항체, 카멜리드 항체 및 카멜리드화 항체); T 세포 수용체; MHC 단백질; 세포외 도메인(예를 들면, 피브로넥틴 Ⅲ형 반복부, EGF 반복부); 프로테아제 억제제(예를 들면, 쿠니츠(Kunitz) 도메인, 에코틴, BPTI 등); TPR 반복부; 트라이포일 구조; 아연 핑거 도메인; DNA 결합 단백질; 특히 단량체 DNA 결합 단백질; RNA 결합 단백질; 효소, 예를 들면 프로테아제(특히 불활성화 프로테아제), RNase; 샤페론, 예를 들면 티오레독신 및 열 충격 단백질; 세포내 신호전달 도메인(예컨대, SH2 및 SH3 도메인); 선형 및 구속 펩타이드; 및 선형 펩타이드 기질을 포함할 수 있다. 디스플레이 라이브러리는 합성 및/또는 천연 다양성을 포함할 수 있다. 예를 들면, 미국 특허 출원 공개 제2004-0005709호 참조.
표적의 특정한 에피토프에 결합하는 항체를 얻기 위해 디스플레이 기술을 또한 이용할 수 있다. 예를 들면, 특정한 에피토프가 결여되거나 에피토프 내에 예를 들면 알라닌으로 돌연변이된 경쟁 비표적 분자를 사용하여 이를 수행할 수 있다. 디스플레이 라이브러리를 표적에 결합시킬 때 경쟁 분자로서 또는 예를 들면 표적에 특이적이지 않은 디스플레이 라이브러리 구성원을 해리시키는 세척액에서 포획하기 위한 예비 용리제로서 하기 기재된 바대로 음성 선택 절차에서 이러한 비표적 분자를 사용할 수 있다.
반복 선택. 일 실시양태에서, 반복 방식으로 디스플레이 라이브러리 기술을 이용한다. 표적에 결합하는 하나 이상의 항체를 확인하기 위해 제1 디스플레이 라이브러리를 이용한다. 이후, 이 확인된 항체를 돌연변이유발 방법을 이용하여 변경하여 제2 디스플레이 라이브러리를 형성한다. 이후, 예를 들면 더 높은 엄격도 또는 더 경쟁적 결합 및 세척 조건을 이용하여 제2 라이브러리로부터 더 높은 친화도 항체를 선택한다.
여러 실행시, 돌연변이유발은 공지된 구역에 표적화되거나 결합 계면에 있을 것이다. 항체의 경우, 돌연변이유발은 본 명세서에 기재된 바와 같은 중쇄 또는 경쇄의 CDR 구역에 지정될 수 있다. 추가로, 돌연변이유발은 CDR에 인접하거나 근처의 프레임워크 구역에 지정될 수 있다. 항체의 경우, 돌연변이유발은 또한 예를 들면 정확한 단계별 개선을 만들기 위해 CDR 중 하나 또는 몇몇에 제한될 수 있다. 예시적인 돌연변이유발 기술은 실수 유발 PCR, 재조합, DNA 서플링(shuffling), 부위 지정 돌연변이유발 및 카세트 돌연변이유발을 포함한다.
반복 선택의 일례에서, 표적에 대한 적어도 최소 결합 특이성 또는 1nM, 10nM 또는 100nM 미만의 결합에 대해 최소 활성, 예를 들면 평형 해리 상수로 FcRn에 결합하는 디스플레이 라이브러리로부터 항체를 우선 확인하기 위해 본 명세서에 기재된 방법을 이용한다. 예를 들면, 초기 항체에 비해 증대된 특성(예를 들면, 결합 친화도, 동력학 또는 안정성)을 갖는 제2 항체를 확인하기 위해 변이의 도입을 위한 주형 핵산으로서 초기 확인된 항체를 코딩하는 핵산 서열을 사용한다.
오프 속도(Off-Rate) 선택. 느린 해리 속도가 특히 항체와 이의 표적 사이의 상호작용과 관련하여 고친화도를 예측할 수 있으므로, 표적에 대한 결합 상호작용을 위해 원하는(예를 들면, 감소된) 동력학적 해리 속도로 항체를 단리하기 위해 본 명세서에 기재된 방법을 이용할 수 있다.
디스플레이 라이브러리로부터 느리게 해리하는 항체를 선택하기 위해, 라이브러리를 부동화 표적과 접촉시킨다. 이후, 부동화 표적을 생물분자를 비특이적으로 제거하거나 이에 약하게 결합하는 제1 용액으로 세척한다. 이후, 포화량의 유리 표적 또는 표적 특이적 고친화도 경쟁 단일클론 항체, 즉 입자에 부착하지 않는 표적의 복제물을 포함하는 제2 용액으로 결합 항체를 용리시킨다. 유리 표적은 표적으로부터 해리되는 생물분자에 결합한다. 더 낮은 농도의 부동화 표적에 비해 포화량의 유리 표적에 의해 재결합은 효과적으로 방지된다.
제2 용액은 실질적으로 생리학적이거나 엄격한 용액 조건을 가질 수 있다. 통상적으로, 제2 용액의 용액 조건은 제1 용액의 용액 조건과 동일하다. 차후 분획으로부터 초기 구별하기 위해 제2 용액의 분획을 일시적으로 수집한다. 차후 분획은 초기 분획에서의 생물분자보다 더 느린 속도로 해리하는 생물분자를 포함한다.
추가로, 또한 연장된 항온처리 후에도 표적에 여전히 결합하는 디스플레이 라이브러리 구성원을 회수할 수 있다. 이를 무질서유발(chaotropic) 조건을 이용하여 해리하거나 표적에 부착한 채 증폭시킬 수 있다. 예를 들면, 표적에 결합된 파지를 박테리아 세포와 접촉시킬 수 있다.
특이성을 위한 선택 또는 스크리닝. 본 명세서에 기재된 디스플레이 라이브러리 스크리닝 방법은 비표적 분자에 결합하는 디스플레이 라이브러리 구성원을 버리는 선택 또는 스크리닝 공정을 포함할 수 있다. 비표적 분자의 예는 자기 비드 상의 스트렙타비딘, 차단제, 예컨대 소 혈청 알부민, 무지방 우유, 임의의 포획 또는 표적 부동화 단일클론 항체 또는 인간 FcRn 표적을 발현하지 않는 비형질감염 세포를 포함한다.
일 실행시, 표적과 연관 비표적 분자 및 연관되지만 명확한 비표적인 분자를 구별하기 위해 소위 "음성 선택" 단계를 이용한다. 디스플레이 라이브러리 또는 이의 풀을 비표적 분자와 접촉시킨다. 비표적에 결합하지 않는 샘플의 구성원을 수집하고 표적 분자에 대한 결합을 위해 또는 후속 음성 선택에서도 후속 선택시 사용한다. 표적 분자에 결합하는 라이브러리 구성원을 선택하기 전에 또는 후에 음성 선택 단계를 이용할 수 있다.
다른 실행시, 스크리닝 단계를 이용한다. 표적 분자에 대한 결합에 대해 디스플레이 라이브러리 구성원을 단리한 후, 비표적 분자(예를 들면, 상기 기재된 비표적)에 결합하는 이의 능력에 대해 각각의 단리된 라이브러리 구성원을 시험한다. 예를 들면, 이 데이터를 얻기 위해 고처리 ELISA 스크린을 이용할 수 있다. 표적에 대한 각각의 라이브러리 구성원의 결합 및 연관 표적 또는 표적의 아단위(예를 들면, 랫트 FcRn; β2 마이크로글로불린)에 대한 교차 종 반응성에 대해 및 또한 상이한 조건, 예컨대 pH 6 또는 pH 7.5 하에 정량적 데이터를 얻기 위해 ELISA 스크린을 또한 이용할 수 있다. 표적에 특이적으로 결합하는 라이브러리 구성원을 확인하기 위해(예를 들면, 컴퓨터 및 소프트웨어를 이용하여) 비표적 및 표적 결합 데이터를 비교한다.
다른 발현 라이브러리
예를 들면 항체(예를 들면, 문헌[De Wildt et al. (2000) Nat. Biotechnol. 18:989-994] 참조), 람다 gt11 라이브러리, 2개의 하이브리드 라이브러리 등의 단백질 어레이를 포함하는 특정한 특성(예를 들면, FcRn에 결합하는 능력 및/또는 FcRn을 중재하는 능력)을 갖는 단백질을 확인하기 위해 다른 유형의 단백질 수집(예를 들면, 발현 라이브러리)을 이용할 수 있다.
항체 라이브러리
일 실시양태에서, 라이브러리는 각각 면역글로불린 도메인, 예를 들면 면역글로불린 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드의 다양한 풀을 제시한다. 디스플레이 라이브러리는 예를 들면 인간 항원을 인식하는 인간 또는 "인간화" 항체를 확인하는 데 특히 유용하다. 자가면역 질환과 같은 인간 장애를 치료하기 위해 치료제로서 이러한 항체를 사용할 수 있다. 항체의 불변 및 프레임워크 구역이 인간이므로, 이러한 치료학적 항체는 항원으로서 인식되고 표적화되는 것 자체를 피할 수 있다. 불변 구역은 또한 인간 면역계의 이팩터 기능을 동원하기 위해 최적화될 수 있다. 실험실내 디스플레이 선택 과정은 자기 항원에 대해 항체를 생성하기 위한 정상 인간 면역계의 불능을 극복한다.
통상적인 항체 디스플레이 라이브러리는 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 폴리펩타이드를 디스플레이한다. "면역글로불린 도메인"은 면역글로불린 분자의 가변 또는 불변 도메인으로부터의 도메인을 의미한다. 면역글로불린 도메인은 통상적으로 약 7개의 β 가닥 및 보존적 이황화 결합으로 형성된 2개의 β 시트를 포함한다(예를 들면, 문헌[A. F. Williams and A. N. Barclay 1988 Ann. Rev Immunol. 6:381-405] 참조). 디스플레이 라이브러리는 (예를 들면, 2개의 폴리펩타이드 사슬을 사용하는) Fab 단편 또는 (예를 들면, 단일 폴리펩타이드 사슬을 사용하는) 단쇄 Fv로서 항체를 디스플레이할 수 있다. 다른 포맷을 또한 이용할 수 있다.
Fab 및 다른 포맷의 경우에서처럼, 디스플레이된 항체는 경쇄 및/또는 중쇄의 일부로서 하나 이상의 불변 구역을 포함할 수 있다. 일 실시양태에서, 각각의 사슬은 예를 들면 Fab의 경우에서처럼 1개의 불변 구역을 포함한다. 다른 실시양태에서, 추가의 불변 구역이 디스플레이된다.
많은 과정에 의해 항체 라이브러리를 구성할 수 있다(예를 들면, 문헌[de Haard et al., 1999, J. Biol. Chem. 274: 18218-30; Hoogenboom et al., 1998, Immunotechnology 4: 1-20; 및 Hoogenboom et al., 2000, Immunol. Today 21:371-378] 참조). 추가로, 각각의 과정의 구성요소는 다른 과정과 조합될 수 있다. 단일 면역글로불린 도메인(예를 들면, VH 또는 VL) 또는 다수의 면역글로불린 도메인(예를 들면, VH 및 VL)에 변이가 도입되도록 과정을 이용할 수 있다. 예를 들면, 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 중 어느 하나 및 둘 다의 이러한 구역을 의미하는 하나 이상의 CDR1, CDR2, CDR3, FR1, FR2, FR3 및 FR4의 구역에서 면역글로불린 가변 도메인으로 변이를 도입할 수 있다. 일 실시양태에서, 소정의 가변 도메인의 모든 3개의 CDR에 변이를 도입한다. 다른 실시양태에서, 예를 들면 중쇄 가변 도메인의 CDR1 및 CDR2에 변이를 도입한다. 임의의 조합이 실행 가능하다. 일 과정에서, 핵산의 상응하는 구역에 CDR을 코딩하는 다양한 올리고뉴클레오타이드를 삽입하여 항체 라이브러리를 구성한다. 단량체 뉴클레오타이드 또는 트라이뉴클레오타이드를 사용하여 올리고뉴클레오타이드를 합성할 수 있다. 예를 들면, 문헌[Knappik et al., 2000, J. Mol. Biol. 296:57-86]은 트라이뉴클레오타이드 합성을 이용하는 CDR 코딩 올리고뉴클레오타이드 및 올리고뉴클레오타이드를 수용하기 위한 조작된 제한 부위를 갖는 주형을 구성하는 방법을 기술한다.
다른 과정에서, 설치류와 같은 동물을 FcRn로 면역화한다. 반응을 추가로 자극하기 위해 동물을 임의로 항원으로 부스팅한다. 이후, 비장 세포를 동물로부터 단리하고, VH 및/또는 VL 도메인을 코딩하는 핵산을 증폭하고 디스플레이 라이브러리에서 발현을 클로닝한다.
또 다른 과정에서, 미접촉 생식선 면역글로불린 유전자로부터 증폭된 핵산으로부터 항체 라이브러리를 구성한다. 증폭된 핵산은 VH 및/또는 VL 도메인을 코딩하는 핵산을 포함한다. 면역글로불린 코딩 핵산의 공급원이 하기 기재되어 있다. 증폭은 예를 들면 보존된 불변 구역을 어닐링하는 프라이머에 의한 PCR 또는 다른 증폭 방법을 포함할 수 있다.
예를 들면 인간, 영장류, 마우스, 래빗, 카멜, 라마 또는 설치류의 면역 세포로부터 면역글로불린 도메인을 코딩하는 핵산을 얻을 수 있다. 일례에서, 특정한 특성에 세포가 선택된다. 성숙도의 다양한 단계에서의 B 세포를 선택할 수 있다. 다른 예에서, B 세포는 미접촉이다.
일 실시양태에서, 표면 결합 IgM, IgD 또는 IgG 분자를 발현하는 B 세포를 분류하기 위해 형광성 활성화 세포 분류(fluorescent-activated cell sorting: FACS)를 사용한다. 추가로, IgG의 상이한 아이소타입을 발현하는 B 세포를 단리할 수 있다. 다른 실시양태에서, B 또는 T 세포를 실험실내 배양한다. 예를 들면, 공급자 세포를 배양하거나 CD40, CD40 리간드 또는 CD20, 포르볼 미리스테이트 아세테이트, 박테리아 리포폴리사카라이드, 콘칸나발린 A, 피토헤마글루티닌 또는 포커위드 미토겐(pokeweed mitogen)에 대해 미토겐 또는 다른 조절 시약, 예컨대 항체를 첨가하여 세포를 실험실내 자극할 수 있다.
다른 일 실시양태에서, 자가면역 질환, 예를 들면 전신 홍반성 낭창(SLE), 류마티스성 관절염, 혈관염, 쇼그렌 증후군, 전신 경화증 또는 항인지질 증후군을 앓고 있는 피험체로부터 세포를 단리한다. 피험체는 인간 또는 동물, 예를 들면 인간 질환을 위한 동물 모델 또는 유사 장애를 갖는 동물일 수 있다. 다른 일 실시양태에서, 인간 면역글로불린 유전좌위를 포함하는 형질전환 비인간 동물로부터 세포를 단리한다.
일 실시양태에서, 세포는 체세포 초돌연변이의 프로그램을 활성화한다. 예를 들면, 항-면역글로불린, 항-CD40 및 항-CD38 항체에 의한 치료에 의해 면역글로불린 유전자의 체세포 돌연변이유발을 경험하도록 세포를 자극할 수 있다(예를 들면, 문헌[Bergthorsdottir et al., 2001, J. Immunol. 166:2228] 참조). 일 실시양태에서, 세포는 미접촉이다.
하기 예시적인 방법에 의해 천연 레파토리로부터 면역글로불린 가변 도메인을 코딩하는 핵산을 단리할 수 있다. 우선, 면역 세포로부터 RNA를 단리한다. 전장(즉, 캡핑된) mRNA를 (예를 들면, 비캡핑된 RNA를 소 창자 포스파타제로 분해함으로써) 분리한다. 이후, 캡을 토바코산 피로포스파타제로 제거하고 역전사를 이용하여 cDNA를 생성한다.
제1(안티센스) 가닥의 역전사를 임의의 적합한 프라이머로 임의의 방식으로 수행할 수 있다. 예를 들면, 문헌[de Haard et al., 1999, J. Biol. Chem. 274: 18218-30]을 참조한다. 예를 들면, 면역글로불린의 상이한 아이소타입을 역전사하기 위해 상이한 면역글로불린 중에서 프라이머 결합 구역은 일정할 수 있다. 프라이머 결합 구역은 면역글로불린의 특정한 아이소타입에 또한 특이적일 수 있다. 통상적으로, 프라이머는 적어도 하나의 CDR을 코딩하는 서열에 3'인 구역에 특이적이다. 일 실시양태에서, 폴리-dT 프라이머를 사용할 수 있다(그리고 중쇄 유전자에 바람직할 수 있다).
합성 서열은 역전사된 가닥의 3' 말단에 결찰될 수 있다. 역전사 후 PCR 증폭 동안 전방 프라이머의 결합을 위한 프라이머 결합 부위로서 합성 서열을 사용할 수 있다. 합성 서열의 사용은 이용 가능한 다양성을 완전히 포획하기 위해 상이한 전방 프라이머의 풀을 사용할 필요성을 제거할 수 있다.
이후, 예를 들면 하나 이상의 실행을 이용하여 가변 도메인 코딩 유전자를 증폭한다. 복수의 실행이 이용되는 경우, 정확도를 증가시키기 위해 네스티드(nested) 프라이머를 사용할 수 있다. 이후, 증폭된 핵산을 디스플레이 라이브러리 벡터로 클로닝한다.
제2 스크리닝 방법
표적에 결합하는 후보물질 라이브러리 구성원을 선택한 후, 예를 들면 표적에 대한 이의 결합 특성을 추가로 규명하기 위해 각각의 후보물질 라이브러리 구성원을 추가로 분석할 수 있다. 각각의 후보물질 라이브러리 구성원을 하나 이상의 제2 스크리닝 검정으로 처리할 수 있다. 결합 특성, 촉매 특성, 억제 특성, 생리학적 특성(예를 들면, 세포독성, 신장 청소률, 면역원성), 구조 특성(예를 들면, 안정성, 입체형태, 올리고화 상태) 또는 다른 기능성 특성에 대해 검정할 수 있다. 예를 들면, pH, 이온 또는 열 민감도를 결정하기 위해 조건을 변화시켜 반복적으로 동일한 검정을 이용할 수 있다.
적절한 경우, 검정은 직접적으로 디스플레이 라이브러리 구성원, 선택된 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산으로부터 제조된 재조합 폴리펩타이드 또는 선택된 폴리펩타이드의 서열에 기초하여 합성된 합성 펩타이드를 사용할 수 있다. 결합 특성을 위한 예시적인 검정은 하기를 포함한다.
ELISA. ELISA를 이용하여 결합 특성에 대해 발현 라이브러리로부터 선택된 항체를 또한 스크리닝할 수 있다. 예를 들면, 각각의 항체를 바닥 표면이 예를 들면 제한적인 양의 표적과 같은 표적으로 코팅된 마이크로역가 플레이트와 접촉시킨다. 플레이트를 완충제로 세척하여 비특이적 결합 폴리펩타이드를 제거한다. 이후, 시험 항체, 예를 들면 항체의 태그 또는 불변 부분을 인식할 수 있는 항체로 플레이트를 프로빙하여 플레이트에 결합된 항체의 양을 결정한다. 검출 항체는 적절한 기질이 제공될 때 비색 생성물을 생성하는 알칼리 포스파타제 또는 서양 고추냉이 퍼옥시다제(horse radish peroxidase: HRP)와 같은 효소에 결합된다.
디스플레이 라이브러리로부터의 항체의 경우에, 항체를 예를 들면 섬사상 박테리오파지 코트에 대한 융합으로서 세포로부터 정제하거나 디스플레이 라이브러리 포맷에서 검정할 수 있다. ELISA의 다른 버전에서, 마이크로역가 플레이트의 상이한 웰을 코팅하기 위해 발현 라이브러리에 선택된 각각의 항체를 사용한다. 이후, 각각의 웰을 질의(query)하기 위해 불변 표적 분자를 사용하여 ELISA를 진행한다.
동종성 결합 검정. 동종성 검정을 이용하여, 즉 검정의 모든 성분이 첨가되고, 추가의 유체 조작이 필요하지 않은 후, 후보물질 항체와 표적과의 결합 상호작용을 분석할 수 있다. 예를 들면, 동종성 검정으로서 형광 공명 에너지 전달(fluorescence resonance energy transfer: FRET)을 이용할 수 있다(예를 들면, 라코윅츠(Lakowicz) 등의 문헌, 미국 특허 제5,631,169호; 스타브리아노폴로스(Stavrianopoulos) 등의 문헌, 미국 특허 제4,868, 103호 참조). 제2 분자가 제1 분자에 인접한 경우 이의 방출된 형광성 에너지가 제2 분자(예를 들면, 표적)에서 형광성 표지에 의해 흡광될 수 있도록 제1 분자(예를 들면, 분획에서 확인된 분자)에서의 형광단 표지가 선택된다. 제2 분자에서의 형광성 표지는 이것이 전달된 에너지를 흡광할 때 형광한다. 표지 사이의 에너지 전달의 효율이 분자를 분리시키는 거리와 관련되므로, 분자 사이의 공간 관계식을 평가할 수 있다. 분자 사이에 결합이 발생하는 상황에서, 검정에서 '업섹터' 분자 표지의 형광 방출이 최대여야 한다. 당해 분야에 널리 공지된 표준 형광 검출 수단을 통해(예를 들면, 형광계를 사용하여) FRET에 의해 모니터링하기 위해 구성된 결합 사건을 편리하게 측정할 수 있다. 제1 또는 제2 결합 분자의 양을 적정하여, 평형 결합 상수를 평가하기 위해 결합 곡선을 생성할 수 있다.
동종성 검정의 다른 예는 알파스크린(ALPHASCREEN)(상표명)(미국 코네티컷주 메리덴에 소재하는 팩커드 바이오사이언스(Packard Bioscience))이다. 알파스크린(상표명)은 2개의 표지된 비드를 사용한다. 1개의 비드는 레이저에 의해 여기될 때 단일항 산소를 생성한다. 다른 비드는 단일항 산소가 제1 비드로부터 확산하고 이것과 충돌할 때 광 신호를 생성한다. 신호는 2개의 비드가 인접할 때 오직 생성된다. 1개의 비드가 디스플레이 라이브러리 구성원에 부착될 수 있고, 다른 비드가 표적에 부착될 수 있다. 결합 정도를 결정하기 위해 신호를 측정한다.
후보물질 폴리펩타이드가 디스플레이 라이브러리 비히클, 예를 들면 박테리오파지에 부착되면서 동종성 검정을 수행할 수 있다.
표면 플라스몬 공명(Surface Plasmon Resonance: SPR). SPR을 이용하여 발현 라이브러리으로부터 단리된 분자와 표적 사이의 결합 상호작용을 분석할 수 있다. SPR 또는 생물분자 상호작용 분석(BIA)은 임의의 상호작용물을 표지함이 없이 실시간으로 생물 특이적 상호작용을 검출한다. BIA 칩의 (결합 사건을 나타내는) 결합 표면에서의 질량 변화는 표면 근처의 광의 굴절률을 변경시킨다(표면 플라스몬 공명(SPR)의 광학 현상). 굴절률 변화는 생물학적 분자 사이의 실시간 반응의 표시로서 측정되는 검출 가능한 신호를 생성한다. SPR을 이용하는 방법이 예를 들면 미국 특허 제5,641,640호; 문헌[Raether, 1988, Surface Plasmons Springer Verlag; Sjolander and Urbaniczky, 1991, Anal. Chem. 63:2338-2345; Szabo et al., 1995, Curr. Opin. Struct. Biol. 5:699-705]에 기재되어 있고, 온라인 자료가 바이어코어 인터내셔널 에이비(BIAcore International AB)(스웨덴에 소재하는 웁살라(Uppsala))에 의해 제공된다.
표적에 대한 생물분자의 결합을 위해 Kon 및 Koff를 비롯한 동력학 매개변수 및 평형 해리 상수(Kd)의 정확하고 정량적인 측정을 제공하기 위해 SPR로부터의 정보를 이용할 수 있다. 상이한 생물분자를 비교하기 위해 이러한 데이터를 이용할 수 있다. 예를 들면, 표적에 고친화도를 갖거나 느린 Koff를 갖는 단백질을 확인하기 위해 발현 라이브러리로부터 선택된 단백질을 비교할 수 있다. 구조-활성 관계식(SAR)을 개발하기 위해 이 정보를 또한 이용할 수 있다. 예를 들면, 모 단백질의 성숙 버전의 동력학 및 평형 결합 매개변수를 모 단백질의 매개변수와 비교할 수 있다. 예를 들면, 고친화도 및 느린 Koff와 같은 특정한 결합 매개변수와 상관되는 소정의 위치에서의 변이체 아미노산을 확이할 수 있다. 이 정보를 (예를 들면, 상동성 모델링, 에너지 최소화 또는 X선 결정학 또는 NMR을 이용한 구조 결정) 구조 모델링과 합할 수 있다. 그 결과, 다른 설계 과정을 안내하기 위해 단백질 및 이의 표적 사이의 물리적 상호작용의 이해가 만들어지고 이용된다.
세포 검정. 세포 표면에서의 관심 대상의 표적을 일시적으로 또는 안정하게 발현하고 디스플레이하는 세포 상의 표적 결합에 대해 (예를 들면, 디스플레이 라이브러리 또는 그 밖에 이전에 확인된) 후보물질 항체의 라이브러리를 스크리닝할 수 있다. 키메라 표적 폴리펩타이드가 세포 내에 제조되거나, 세포로부터 분비되거나, 예를 들면 Fc와 같은 막 앵커링 단백질과의 융합으로 앵커를 통해 세포 표면에 부착하도록, 예를 들면 표적이 폴리펩타이드의 세포외 부분만을 코딩하는 분절을 포함하는 벡터 핵산 서열을 포함할 수 있다. FcRn에 결합하고 IgG-Fc의 결합을 차단하는 스크리닝 항체에 세포 표면 발현된 표적을 이용할 수 있다. 예를 들면, 비특이적 인간 IgG-Fc를 형광 표지하고, 예를 들면 FACS 기계와 같은 유세포분석기를 이용하여 형광 강도의 변화에 의해 길항 항체의 존재 또는 부재 하의 FcRn에 대한 이의 결합을 검출할 수 있다.
FcRn 결합 항체를 얻는 다른 방법
디스플레이 라이브러리의 용도 이외에, FcRn 결합 항체를 얻기 위해 다른 방법을 이용할 수 있다. 예를 들면, 설치류와 같은 비인간 동물에서 항원으로서 FcRn 단백질 또는 이의 구역을 이용할 수 있다.
일 실시양태에서, 비인간 동물은 인간 면역글로불린 유전자의 적어도 일부를 포함한다. 예를 들면, 인간 Ig 유전좌위의 큰 단편을 갖는 마우스 항체 생성이 결핍된 마우스 종류를 조작할 수 있다. 하이브리도마 기술을 이용하여, 원하는 특이성을 갖는 유전자로부터 유래된 항원 특이적 단일클론 항체(Mab)를 제조하고 선택할 수 있다. 예를 들면, 제노마우스(XENOMOUSE(상표명), 문헌[Green et al., 1994, Nat. Gen. 7: 13-21]; 미국 2003-0070185, WO 96/34096(1996년 10월 31일 공개) 및 PCT 출원 제PCT/US96/05928호(1996년 4월 29일 출원)을 참조한다.
일 실시양태에서, 단일클론 항체를 비인간 동물로부터 얻은 후, 변형하고, 예를 들면 인간화 또는 탈면역화한다. 윈터(Winter)는 인간화 항체를 제조하기 위해 이용할 수 있는 CDR 그래프팅 방법을 기술한다(1987년 3월 26일자에 출원된 영국 특허 출원 GB 2188638A; 미국 특허 제5,225,539호). 특정한 인간 항체의 CDR의 전부를 비인간 CDR의 적어도 일부로 대체할 수 있거나, CDR의 일부만을 비인간 CDR로 대체할 수 있다. 선결정된 항원에 대한 인간화 항체의 결합에 필요한 CDR의 수를 오직 대체할 필요가 있다.
Fv 항원 결합에 직접적으로 연관되지 않은 가변 구역의 서열을 인간 Fv 가변 구역으로부터 동등한 서열로 대체하여 인간화 항체를 생성할 수 있다. 인간화 항체를 생성하는 일반 방법은 문헌[모리슨 에스. 엘.(Morrison, S. L.)의 1985, Science 229: 1202-1207, 오이(Oi) 등의 1986, BioTechniques 4:214, 및 퀸(Queen) 등의 미국 특허 제5,585,089호, 미국 특허 제5,693,761호 및 미국 특허 제5,693,762호]에 의해 제공된다. 이 방법은 적어도 하나의 중쇄 또는 경쇄로부터 면역글로불린 Fv 가변 구역의 전부 또는 일부를 코딩하는 핵산 서열을 단리하고, 조작하고 발현시키는 것을 포함한다. 이러한 핵산 공급원은 당해 분야의 당업자에 널리 공지되어 있고, 예를 들면 상기 기재된 바대로 선결정된 표적에 대해 하이브리도마 생성 항체로부터 얻을 수 있다. 이후, 인간화 항체 또는 이의 단편을 코딩하는 재조합 DNA를 적절한 발현 벡터로 클로닝할 수 있다.
인간 T 세포 에피토프의 특이적 결실 또는 WO 제98/52976호 및 WO 제00/34317호에 개시된 방법(이의 내용은 구체적으로 본원에 참조문헌으로 포함됨)에 의한 "탈면역화"에 의해 FcRn 결합 항체를 또한 변형시킬 수 있다. 간단히 말하면, MHC II형에 결합하는 펩타이드에 대해 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 구역을 분석할 수 있고; 이 펩타이드는 (WO 제98/52976호 및 WO 제00/34317호에 정의된) 잠재적 T 세포 에피토프를 나타낸다. 잠재적 T 세포 에피토프의 검출을 위해, "펩타이드 트레이딩(threading)"이라 칭하는 컴퓨터 모델링 접근법을 이용할 수 있고, 또한 인간 MHC II형 결합 펩타이드의 데이터베이스가 WO 제98/52976호 및 WO 제00/34317호에 기재된 VH 및 VL 서열에 존재하는 모티프에 대해 조사될 수 있다. 이 모티프는 임의의 18개의 메이져 MHC II형 DR 동형이인자형에 결합하고, 따라서 잠재적 T 세포 에피토프를 구성한다. 가변 구역에서의 적은 수의 아미노산 잔기를 치환하거나 단일 아미노산 치환에 의해 검출된 잠재적 T 세포 에피토프를 제거할 수 있다. 가능한 보존적 치환이 이루어지는 한, 배타적인 아니라 대개, 인간 생식선 항체 서열에서의 이 위치에 흔한 아미노산을 사용할 수 있다. 인간 생식선 서열이 문헌[Tomlinson, LA. et al., 1992, J. Mol. Biol. 227:776-798; Cook, G. P. et al., 1995, Immunol. Today Vol. 16 (5): 237-242; Chothia, D. et al., 1992, J. Mol. Bio. 227:799-817]에 개시되어 있다. V BASE 디렉토리는 (톰린슨 엘에이.(Tomlinson, LA.) 등. 영국 켐브리지주에 소재하는 엠알씨 센터 포 프로테인 엔지니어링(MRC Centre for Protein Engineering)에 의해 편찬된) 인간 면역글로불린 가변 구역 서열의 포괄적 디렉토리를 제공한다. 탈면역화 변화를 확인한 후, 돌연변이유발 또는 다른 합성 방법(예를 들면, 신생(de novo) 합성, 카세트 대체 등)에 의해 VH 및 VL을 코딩하는 핵산을 구성할 수 있다. 돌연변이 유발된 가변 서열은 임의로 인간 불변 구역, 예를 들면 인간 IgG1 또는 κ 불변 구역에 융합될 수 있다.
몇몇 경우에, 잠재적 T 세포 에피토프는 항체 기능에 중요한 것으로 알려져 있거나 예상되는 잔기를 포함한다. 예를 들면, 잠재적 T 세포 에피토프는 CDR에 대해 일반적으로 편향된다. 또한, 항체 구조 및 결합에 중요한 프레임워크 잔기에서 잠재적 T 세포 에피토프가 발생할 수 있다. 예를 들면, 변화의 존재 또는 부재 하에 사슬을 만들고 시험하여 이러한 잠재적 에피토프를 제거하기 위한 변화는 몇몇 경우에 더한 정밀 조사를 요한다. 가능한 경우, CDR 외의 치환에 의해 CDR과 중첩되는 잠재적 T 세포 에피토프를 제거한다. 몇몇 경우에, CDR 내의 변화는 유일한 옵션이고, 따라서 이 치환을 갖는 변이체 및 이 치환을 갖지 않는 변이체를 시험해야 한다. 다른 경우에, 잠재적 T 세포 에피토프를 제거하는 데 필요한 치환은 항체 결합에 중요할 수 있는 프레임워크 내의 잔기 위치에서이다. 이런 경우에, 이 치환을 갖는 변이체 및 이 치환을 갖지 않는 변이체를 시험해야 한다. 따라서, 몇몇 경우에, 여러 변이체 탈면역화 중쇄 및 경쇄 가변 구역을 설계하고, 최적 탈면역화 항체를 확인하기 위해 다양한 중쇄/경쇄 조합을 시험한다. 이후, 탈면역화 정도, 즉 가변 구역에 남은 잠재적 T 세포 에피토프의 수와 함께 상이한 변이체의 결합 친화도를 고려하여 최종 탈면역화 항체를 선택할 수 있다. 비인간 서열, 예를 들면 합성 항체, 쥣과 항체 다른 비인간 단일클론 항체 또는 디스플레이 라이브러리로부터 단리된 항체를 포함하는 항체와 같은 임의의 항체를 변형하기 위해 탈면역화를 이용할 수 있다.
생식선 항체
IgG 매개 자가면역 질환을 치료하기 위해 사용되는 항체를 복수 투여에 사용할 수 있다. 치료학적 항체의 면역원성을 낮추는 예방책은 (예를 들면, 결합 특성이 실질적으로 보유되는 한) 프레임워크 구역에서의 하나 이상의 비생식선 아미노산을 항체(특히 Fab)의 상응하는 생식선 아미노산으로 복귀시키는 것을 포함한다.
하나 이상의 생식선 서열과 더 유사한 항체의 가변 구역을 만들기 위해 FcRn에 결합하는 항체, 예를 들면 본 명세서에 기재된 항체를 변형할 수 있다. 예를 들면, 항체는, 예를 들면 프레임워크, CDR 또는 불변 구역에서, 1개, 2개, 3개 이상의 아미노산 치환을 포함하여 이것이 기준 생식선 서열과 더 유사하게 만들 수 있다. 예시적인 하나의 생식선 방법은 단리된 항체의 서열과 유사한(예를 들면, 특정한 데이터베이스에서 가장 유사한) 하나 이상의 생식선 서열을 확인하는 것을 포함할 수 있다. 이후, 다른 돌연변이와 증가하여 또는 조합하여 단리된 항체에서 (아미노산 수준에서의) 돌연변이가 만들어질 수 있다. 예를 들면, 일부 또는 전부 가능한 생식선 돌연변이를 코딩하는 서열을 포함하는 핵산 라이브러리를 만든다. 이후, 예를 들면 단리된 항체에 비해 하나 이상의 추가의 생식선 잔기를 갖고 여전히 유용한(예를 들면, 기능성 활성을 갖는) 항체를 확인하기 위해 돌연변이된 항체를 평가한다. 일 실시양태에서, 많은 생식선 잔기가 가능한 단리된 항체에 도입된다.
일 실시양태에서, 하나 이상의 생식선 잔기를 프레임워크 및/또는 불변 구역으로 치환하거나 삽입하기 위해 돌연변이유발을 이용한다. 예를 들면, 생식선 프레임워크 및/또는 불변 구역 잔기는 변형시키고자 하는 비가변 구역에 유사한(예를 들면, 가장 유사한) 생식선 서열 유래일 수 있다. 돌연변이유발 후, 생식선 잔기 또는 잔기들이 내약성인지(즉, 활성을 없애지 않는지) 결정하기 위해 항체의 활성(예를 들면, 결합 또는 다른 기능성 활성)을 평가할 수 있다. 프레임워크 구역에서 유사한 돌연변이유발을 수행할 수 있다.
상이한 방식으로 생식선 서열의 선택을 수행할 수 있다. 선택도 또는 유사성, 예를 들면 적어도 특정한 동일성(%), 예를 들면 적어도 75%, 80%, 85%, 290%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99.5%의 동일성에 대한 선결정된 기준을 만족시키기 위해, 예를 들면 생식선 서열을 선택할 수 있다. 적어도 2개, 3개, 5개 또는 10개의 생식선 서열을 사용하여 선택을 수행할 수 있다. CDR1 및 CDR2의 경우, 유사한 생식선 서열의 확인은 이러한 1개의 서열의 선택을 포함할 수 있다. CDR3의 경우에, 유사한 생식선 서열의 확인은 이러한 1개의 서열의 선택을 포함할 수 있지만, 아미노 말단 부분 및 카복시 말단 부분에 별도로 기여하는 2개의 생식선 서열의 사용을 포함할 수 있다. 다른 실행에서, 예를 들면 공통 서열을 형성하기 위해 1개 또는 2개 초과의 생식선 서열을 사용한다.
일 실시양태에서, 특정한 기준 가변 도메인 서열, 예를 들면 본 명세서에 기재된 서열과 관련하여, 연관 가변 도메인 서열은 인간 생식선 서열(즉, 인간 생식선 핵산에 의해 코딩된 아미노산 서열)에서 상응하는 위치에서의 잔기와 동일한 잔기인 기준 CDR 서열에서의 잔기와 동일하지 않은 CDR 아미노산 위치의 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 100%를 갖는다.
일 실시양태에서, 특정한 기준 가변 도메인 서열, 예를 들면 본 명세서에 기재된 서열과 관련하여, 연관 가변 도메인 서열은 인간 생식선 서열, 예를 들면 기준 가변 도메인 서열과 관련된 생식선 서열로부터 FR 서열과 동일한 FR 구역의 적어도 30%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%를 갖는다.
따라서, 관심 대상의 소정의 항체에 유사한 활성을 갖지만, 하나 이상의 생식선 서열, 특히 하나 이상의 인간 생식선 서열과 더 유사한 항체를 단리할 수 있다. 예를 들면, 항체는 CDR(예를 들면, 프레임워크 구역)의 외부 구역에서 생식선 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99.5% 동일할 수 있다. 추가로, 항체는 CDR 구역에서 적어도 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 생식선 잔기를 포함할 수 있고, 생식선 잔기는 변형되는 가변 구역과 유사한(예를 들면, 가장 유사한) 생식선 서열 유래이다. 1차 관심 대상의 생식선 서열은 인간 생식선 서열이다. 항체의 활성(예를 들면, 결합 활성)은 원래 항체의 100, 10, 5, 2, 0.5, 0.1 및 0.001의 인자일 수 있다.
V카파를 위한 예시적인 생식선 기준 서열은 O12/O2, O18/O8, A20, A30, L14, L1, L15, L4/18a, L5/L19, L8, L23, L9, L24, L11, L12, O11/O1, A17, Al, A18, A2, A19/A3, A23, A27, A11, L2/L16, L6, L20, L25, B3, B2, A26/A10 및 A14를 포함한다. 예를 들면, 문헌[Tomlinson et al., 1995, EMBO J. 14(18):4628-3]을 참조한다.
HC 가변 도메인을 위한 생식선 기준 서열은 H1 및 H2 초가변 루프에서 특정한 정규 구조, 예를 들면 1차 내지 3차 구조를 갖는 서열에 기초할 수 있다. 문헌[Chothia et al., 1992, J. Mol. Biol. 227:799-817; Tomlinson et al., 1992, J. Mol. Biol. 227:776-798); 및 Tomlinson et al., 1995, EMBO J. 14(18):4628-38]에 기재된 바대로 이의 서열로부터 면역글로불린 가변 도메인의 초가변 루프의 정규 구조가 추론될 수 있다. 1차 내지 3차 구조를 갖는 예시적인 서열은 DP-1, DP-8, DP-12, DP-2, DP-25, DP-15, DP-7, DP-4, DP-31, DP-32, DP-33, DP-35, DP-40, 7-2, hv3005, hv3005f3, DP-46, DP-47, DP-58, DP-49, DP-50, DP-51, DP-53 및 DP-54를 포함한다.
리간드 제조
FcRn에 결합하는 항체를 발현하기 위해 표준 재조합 핵산 방법을 이용할 수 있다. 일반적으로, 핵산 서열 코딩 항체를 핵산 발현 벡터에 클로닝한다. 물론, 항체가 다수의 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 경우, 각각의 사슬을 발현 벡터, 예를 들면 동일한 또는 상이한 세포에서 발현되는 동일한 또는 상이한 벡터에 클로닝할 수 있다.
항체 생성. 박테리아 세포, 예를 들면 이. 콜라이 세포에서 일부 항체, 예를 들면 Fab를 생성할 수 있다. 예를 들면, 디스플레이 집합체와 박테리오파지 단백질(또는 이의 단편) 사이의 억제 가능한 중지 코돈을 포함하는 파지 디스플레이 벡터에서 서열에 의해 Fab를 코딩하는 경우, 중지 코돈을 억제할 수 없는 박테리아 세포에 벡터 핵산을 전달할 수 있다. 이런 경우에, Fab는 유전자 III 단백질과 융합되지 않고 주변세포질 및/또는 배지로 분비된다.
진핵 세포에서 항체를 또한 생성할 수 있다. 일 실시양태에서, 효모 세포, 예컨대 피치아(Pichia)(예를 들면, 문헌[Powers et al., 2001, J. Immunol. Methods. 251: 123-35] 참조), 한세울라(Hanseula) 또는 사카로마이세스(Saccharomyces)에서 항체(예를 들면, scFv)를 발현한다.
일 실시양태에서, 포유동물 세포에서 항체를 생성한다. 클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 발현하기 위한 포유동물 숙주 세포는 중국 햄스터 난소(CHO(Chinese Hamster Ovary) 세포)(예를 들면, 문헌[Kaufman and Sharp, 1982, Mol. Biol. 159:601 621]에 기재된 DHFR 선택 가능 마커와 사용되는 문헌[Urlaub and Chasin, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220]에 기재된 dhfr-CHO 세포 포함), 림프구성 세포주, 예를 들면 NS0 골수종 세포 및 SP2 세포, COS 세포 및 형질전환 동물, 예를 들면 형질전환 포유동물로부터의 세포를 포함한다. 예를 들면, 세포는 유방 상피 세포이다.
다양화된 면역글로불린 도메인을 코딩하는 핵산 서열 이외에, 재조합 발현 벡터는 추가의 서열, 예컨대 숙주 세포에서 벡터의 복제를 조절하는 서열(예를 들면, 복제 기원) 및 선택 가능 마커 유전자를 운반할 수 있다. 선택 가능 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포의 선택이 수월하게 한다(예를 들면, 미국 특허 제4,399,216호, 제4,634,665호 및 제5,179,017호 참조). 예를 들면, 통상적으로 선택 가능 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포에서 약물, 예컨대 G418, 하이그로마이신 또는 메토트렉세이트에 대한 내성을 부여한다. 선택 가능 마커 유전자는 (메토트렉세이트 선택/증폭을 갖는 dhfr 숙주 세포에서의 사용을 위해) 다이하이드로폴레이트 환원효소(DHFR) 유전자 및 (G418 선택을 위해) 네오 유전자를 포함한다.
항체 또는 이의 항원 결합 부분의 재조합 발현을 위한 예시적인 시스템에서, 항체 중쇄 및 항체 경쇄 둘 다를 코딩하는 재조합 발현 벡터를 칼슘 인산염 매개 형질감염에 의해 dhfr CHO 세포로 도입한다. 재조합 발현 벡터 내에, 항체 중쇄 및 경쇄 유전자를 유전자의 고수준의 전사를 구동하기 위해 각각 인핸서/프로모터 조절 구성요소(예를 들면, SV40, CMV, 아데노바이러스 등으로부터 유도된 것, 예컨대 CMV 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 구성요소 또는 SV40 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 구성요소)에 작동적으로 결합한다. 재조합 발현 벡터는 또한 메토트렉세이트 선택/증폭을 사용하여 벡터로 형질감염된 CHO 세포의 선택을 허용하는 DHFR 유전자를 운반한다. 선택된 형질전환체 숙주 세포를 항체 중쇄 및 경쇄의 발현을 허용하도록 배양하고 온전한 항체를 배양 배지로부터 회수한다. 재조합 발현 벡터를 제조하고, 숙주 세포를 형질감염시키고, 형질전환체를 선택하고, 숙주 세포를 배양하고, 배양 배지로부터 항체를 회수하기 위해 표준 분자 생물학 기술을 이용한다. 예를 들면, 단백질 A 또는 단백질 G 결합 기질로 친화도 크로마토그래피에 의해 일부 항체를 단리할 수 있다.
Fc 도메인을 포함하는 항체의 경우, 항체 생성 시스템은 Fc 구역이 글라이코실화되는 항체를 생성할 수 있다. 예를 들면, IgG 분자의 Fc 도메인은 CH2 도메인에서 297번 아스파라긴에서 글라이코실화된다. 이 아스파라긴은 바이안테너리(biantennary)형 올리고사카라이드에 의한 변형을 갖는 부위이다. Fcg 수용체 및 보체 Clq에 의해 중재되는 이팩터 기능에 이 글라이코실화가 필요한 것으로 입증되었다(Burton and Woof, 1992, Adv. Immunol. 51: 1-84; Jefferis et al., 1998, Immunol. Rev. 163:59-76). 일 실시양태에서, 297번 아스파라긴에 상응하는 잔기를 적절히 글라이코실화하는 포유동물 발현 시스템에서 Fc 도메인을 제조한다. Fc 도메인은 또한 다른 진핵 변역후 변형을 포함할 수 있다.
형질전환 동물에 의해 항체를 또한 제조할 수 있다. 예를 들면, 미국 특허 제5,849,992호는 형질전환 포유동물의 유선에서 항체를 발현하는 방법을 기술하고 있다. 젖 특이적 프로모터 및 관심 대상의 핵산 코딩 항체 및 분비에 대한 신호 서열을 포함하는 전이유전자를 구성한다. 이러한 형질전환 포유동물의 암컷에서 생성된 젖은 여기로 분비된 관심 대상의 항체를 포함한다. 항체를 젖으로부터 정제할 수 있거나, 여러 용도를 위해, 직접적으로 사용할 수 있다.
형질전환 마우스를 생성하는 하나의 방법을 하기와 같다. 간단히 말하면, 항체를 코딩하는 표적 구성체를 수태된 난모세포의 수컷 전핵에 미량주입한다. 난모세포를 생존 가능 새끼로 발생시키기 위해 가임신 양모의 자궁에 주입한다. 여러 자식이 전이유전자를 도입한다.
FcRn 후보물질 항체를 위한 검정 시스템
FcRn 또는 이의 단편에 대한 실험실내 또는 생체내 이의 조절 활성을 측정하기 위해 검정에서 FcRn 후보물질 항체를 추가로 규명할 수 있다. 예를 들면, FcRn을 FcRn과 기질의 반응을 허용하는 검정 조건 하에 알부민 또는 IgG의 비특이적 IgG 또는 Fc 일부와 같은 기질과 합할 수 있다. FcRn 후보물질 항체의 부재 하에 및 FcRn 후보물질 항체의 증가 농도의 존재 하에 검정을 수행한다. FcRn 활성(예를 들면, 기질에 대한 결합)의 50%가 후보물질 항체에 의해 억제되는 후보물질 항체의 농도는 그 항체에 대한 IC50 값(억제 농도 50%) 또는 EC50(유효 농도 50%) 값이다. 일련의 또는 그룹의 후보물질 항체 내에, IC50 또는 EC50 값이 더 낮은 것이 IC50 또는 EC50 값이 더 높은 항체보다 FcRn의 더 강력한 억제제로 생각된다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 IC50 값이 FcRn 활성의 억제를 위해 실험실내 검정에서 측정할 때 800nM, 400nM, 100nM, 25nM, 5nM, 1nM 미만이다.
FcRn에 대한 선택도를 위해 후보물질 항체를 또한 평가할 수 있다. 예를 들면, FcRn 및 세포 표면 수용체의 패널, 예컨대 β2M 도메인을 또한 사용하는 수용체에 대한 이의 효능에 대해 FcRn 후보물질 항체를 검정할 수 있고, 각각의 수용체 단백질에 대해 IC50 값 또는 EC50 값을 결정할 수 있다. 일 실시양태에서, 시험 패널(예를 들면, MHC I형 분자) 내에 FcRn에 대해 낮은 IC50 값 또는 EC50 값 및 다른 수용체에 대해 높은 IC50 값 또는 EC50 값을 나타내는 화합물은 FcRn에 대해 선택적인 것으로 생각된다.
상이한 pH 및 온도 조건 하에 후보물질 항체의 엔도사이토시스(endocytosis) 또는 트랜시스토시스(transcytosis)를 따르는 내인성 FcRn을 발현하는 생체외 내피 세포 또는 상피 세포를 사용한다. 다양한 화학물질의 존재 또는 부재 하에 및 세포내 수송 경로에 영향을 미치거나 영향을 주는 것으로 알려진 상이한 조건 하에 표지 항체를 따라 IgG 트랜시스토시스 또는 FcRn에 의한 순환을 측정할 수 있다.
혈청에서 이의 반감기를 결정하기 위해 pH 의존적 및 비의존적 FcRn 결합 항체로 랫트, 마우스 또는 원숭이에서의 약동학 연구를 수행한다. 마찬가지로, 표지된 IgG 또는 IgG의 표지된 Fc 부분의 존재 또는 부재 하에 항체를 주사하여 면역조절 치료에서 또는 구제(salvage) 면역치료로서 잠재적 사용에 대해 항체의 보호 효과를 생체내 평가할 수 있다. 후보물질 항체의 존재 하의 표지된 IgG/Fc의 반감기 감소는 항체의 치료 효율의 표시이다.
약제학적 조성물
다른 양태에서, 본 개시내용은 FcRn 결합 항체를 포함하는 약제학적으로 허용되는 조성물 또는 약제학적 조성물과 같은 조성물을 제공한다. FcRn 결합 항체를 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 제제화할 수 있다. 약제학적 조성물은 생체내 영상화를 위해 표지된 FcRn 결합 항체를 포함하는 조성물과 같은 치료학적 조성물 및 진단학적 조성물을 포함한다.
약제학적으로 허용되는 담체는 생리학적으로 상용성인 임의의 및 모든 용매, 분산 매체, 코팅, 항박테리아제 및 항진균제, 등장화제 및 흡수 지연제 등을 포함하다. 바람직하게는, 담체는 정맥내, 근육내, 피하, 비경구, 척추 또는 상피 투여(예를 들면, 주사 또는 점적에 의한)에 적합하다. 투여 경로에 따라, 화합물을 불활성화할 수 있는 산성 및 다른 중성 조건의 작용으로부터 화합물을 보호하는 재료에서 FcRn 결합 항체를 코팅할 수 있다.
약제학적으로 허용되는 염은 모 화합물의 원하는 생물학적 활성을 보유하고 임의의 원치않는 독성학적 효과를 부여하지 않는 염이다(예를 들면, 문헌[Berge, S.M., et al., 1977, J. Pharm. Sci. 66: 1-19] 참조). 이러한 염의 예는 산 부가염 및 염기 부가염을 포함한다. 산 부가염은 비독성 무기산, 예컨대 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬산, 요오드산, 인 등 및 비독성 유기산, 예컨대 지방족 모노- 및 다이카복실산, 페닐 치환 알칸산, 하이드록시 알칸산, 방향족 산, 지방족 및 방향족 설폰산 등으로부터 유도된 것을 포함한다. 염기 부가염은 알칼리 토금속, 예컨대 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘 등 및 비독성 유기 아민, 예컨대 N,N'-다이벤질에틸렌다이아민, N-메틸글루카민, 클로로프로카인, 콜린, 다이에탄올아민, 에틸렌다이아민, 프로카인 등으로부터 유도된 것을 포함한다.
조성물은 다양한 형태일 수 있다. 이는 예를 들면 액체, 반고체 및 고체 제형, 예컨대 액체 용액(예를 들면, 주사용 및 점적 용액), 분산액 또는 현탁액, 정제, 환제, 산제, 리포솜 및 좌제를 포함한다. 형태는 의도되는 투여 방식 및 치료 용도에 따라 달라질 수 있다. 많은 조성물은 주사용 또는 점적용 용액, 예컨대 항체에 의한 인간 투여에 사용되는 것과 유사한 조성물의 형태이다. 예시적인 투여 방식은 비경구(예를 들면, 정맥내, 피하, 복강내, 근육내)이다. 일 실시양태에서, 정맥내 점적 또는 주사에 의해 FcRn 결합 항체를 투여한다. 다른 실시양태에서, 근육내 또는 피하 주사에 의해 FcRn 결합 항체를 투여한다.
고 약물 농도에 적합한 용액, 마이크로에멀션, 분산액, 리포솜 또는 다른 질서 구조로서 조성물을 제제화할 수 있다. 상기 열거된 하나의 성분 또는 이의 조합을 필요한 만큼 적절한 용매와 필요한 양의 활성 화합물(즉, 리간드)을 도입한 후, 무균 여과시켜 무균 주사용 용액을 제조할 수 있다. 일반적으로, 염기성 분산 매체 및 상기 열거된 것으로부터 필요한 다른 성분을 포함하는 무균 비히클에 활성 화합물을 도입하여 분산액을 제조한다. 무균 주사용 용액의 제조를 위한 무균 분말의 경우에, 제조 방법은 이전에 무균 여과된 이의 용액으로부터 활성 성분과 임의의 추가의 원하는 성분의 분말을 생성시키는 진공 건조 및 동결 건조이다. 예를 들면, 레시틴과 같은 코팅의 사용에 의해, 분산액의 경우에 필요한 입자 크기의 유지에 의해 및 계면활성제의 사용에 의해 용액의 적절한 유동성을 유지할 수 있다. 모노스테아레이트 염 및 젤라틴과 같은 흡수를 지연시키는 물질을 조성물 중에 포함하여 주사용 조성물의 연장 흡수가 발생할 수 있다.
당해 분야에 공지된 다양한 방법에 의해 FcRn 결합 항체를 투여할 수 있지만, 많은 용도의 경우, 경로/투여 방식은 정맥내 주사 또는 점적이다. 예를 들면, 치료 용도의 경우, 약 1 내지 100㎎/㎡ 또는 7 내지 25㎎/㎡의 용량에 도달하기 위해 30, 20, 10, 5 또는 1㎎/분 미만의 속도로 FcRn 결합 항체를 정맥내 점적에 의해 투여할 수 있다. 경로 및/또는 투여 방식은 원하는 결과에 따라 달라진다. 특정한 실시양태에서, 임플란트 및 마이크로캡슐화 전달 시스템을 비롯한 제어 방출 제제와 같은 신속한 방출에 대해 화합물을 보호하는 담체와 활성 화합물을 제조할 수 있다. 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리언하이드라이드, 폴리글라이콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스터 및 폴리락트산과 같은 생체분해성, 생체적합성 중합체를 사용할 수 있다. 이러한 제제를 제조하기 위한 많은 방법이 특허받았거나 일반적으로 공지되어 있다. 예를 들면, 문헌[Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., 1978, Marcel Dekker, Inc., New York]을 참조한다.
특정한 실시양태에서, 예를 들면 불활성 희석제 또는 동화 가능한 섭취형 담체와 함께 항체를 경구로 투여할 수 있다. 화합물(및 원하는 경우 다른 성분)을 또한 경질 또는 연질 쉘 젤라틴 캡슐에 밀폐하거나, 정제로 압축하거나, 피험체의 식이에 직접적으로 도입할 수 있다. 경구의 치료 투여의 경우, 화합물 부형제와 함께 도입하고 삼킬 수 있는 정제, 구강정, 트로키, 캡슐, 엘릭시르제, 현탁액, 시럽, 와이퍼 등의 형태로 사용할 수 있다. 비경구 투여 이외에 본 명세서에 개시된 화합물을 투여하기 위해, 화합물을 이의 불활성화를 방지하는 재료로 코팅하거나, 이 화합물을 이 재료와 동시 투여하는 것이 필요할 수 있다.
당해 분야에 공지된 의학 장치에 의해 약제학적 조성물을 투여할 수 있다. 예를 들면, 일 실시양태에서, 무침형 피하 주사 장치, 펌프 또는 임플란트와 같은 장치로 본 명세서에 개시된 약제학적 조성물을 투여할 수 있다.
특정한 실시양태에서, 생체내 적절한 분포를 보장하기 위해 FcRn 결합 항체를 제제화할 수 있다. 예를 들면, 혈액-뇌 장벽(BBB)은 많은 고친수성 화합물을 배제한다. 본 명세서에 개시된 치료학적 화합물이 (원하는 경우) BBB를 횡단하도록 보장하기 위해, 예를 들면 리포솜으로 이것을 제제화할 수 있다. 리포솜을 제조하는 방법에 대해, 예를 들면 미국 특허 제4,522,811호; 제5,374,548호; 및 제5,399,331호를 참조한다. 리포솜은 특이적 세포 또는 장기로 선택적으로 수송되어, 표적 약물 전달을 증대시키는 하나 이상의 모이어티를 포함할 수 있다(예를 들면, 문헌[V.V. Ranade, 1989, J. Clin. Pharmacol. 29:685] 참조).
최적의 원하는 반응(예를 들면, 치료학적 반응)을 제공하기 위해 용량 섭생을 조정한다. 예를 들면, 단일 볼루스를 투여할 수 있거나, 여러 분할 용량을 시간에 걸쳐 투여할 수 있거나, 치료 상황의 긴급함으로 표시되는 바대로 용량을 비례하여 감소시키거나 증가시킬 수 있다. 투여 용이성 및 용량 균일성을 위해 단위 제형으로 비경구 조성물을 제제화하는 것이 특히 유리하다. 본 명세서에 사용되는 단위 제형은 치료하고자 하는 피험체의 단일 용량에 적합한 물리적으로 별개의 단위를 의미하고; 각각의 단위는 원하는 치료학적 효과를 생성하도록 계산된 선결정된 분량의 활성 화합물을 필요한 약제학적 담체와 회합하여 포함한다. 단위 제형에 대한 규격은 (a) 활성 화합물의 독특한 특성 및 성취하고자 하는 특정한 치료학적 효과 및 (b) 개인에서 과민증의 치료를 위해 이러한 활성 화합물을 배합하는 기술에 고유한 제한에 의해 구술되고 이에 직접적으로 의존할 수 있다.
본 명세서에 개시된 항체의 치료학적 또는 예방학적 유효량에 대한 예시적인 비제한적인 범위는 0.1 내지 20㎎/㎏ 또는 1 내지 10㎎/㎏이다. 약 1 내지 100㎎/㎡ 또는 약 5 내지 30㎎/㎡의 용량에 도달하기 위해, 예를 들면 30, 20, 2 2 10, 5 또는 1㎎/분 미만의 속도로, 예를 들면 정맥내 점적에 의해 항-FcRn 항체를 투여할 수 있다. 용량 값은 경감시키고자 하는 병증의 유형 및 중증도에 따라 변할 수 있다. 특정 피험체의 경우, 개인의 필요 및 투여 담당 주치의 또는 조성물의 투여를 감독자의 판단에 따라 시간에 따라 특정 용량 섭생을 조정할 수 있다.
본 명세서에 개시된 약제학적 조성물은 본 명세서에 개시된 FcRn 결합 항체의 치료학적 유효량 또는 예방학적 유효량을 포함할 수 있다. "치료학적 유효량"은 원하는 치료학적 결과를 성취하기 위해 필요한 시간 기간 동안 용량에서 효과적인 양을 의미한다. 개인의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중 및 개인에서 원하는 반응을 유발하기 위한 항체의 능력과 같은 인자에 따라 조성물의 치료학적 유효량이 변할 수 있다. 치료학적 유효량은 또한 치료학적으로 유리한 효과가 조성물의 임의의 독성 또는 해로운 효과를 능가하는 용량이다.
무균화 및 보유
일 실시양태에서, FcRn 결합 항체는 예를 들면 혈액, 혈청, 림프 또는 다른 조직에서 이의 무균화 및/또는 순환시 보유를 개선하는 모이어티와, 예를 들면 적어도 1.5, 2, 5, 10 또는 50배로 물리적으로 회합된다. 예를 들면, FcRn 결합 항체는 실질적으로 비항원 중합체, 예컨대 폴리알킬렌 옥사이드 또는 폴리에틸렌 옥사이드와 같은 중합체와 회합될 수 있다. 적합한 중합체는 중량이 실질적으로 변한다. 분자 수 평균 중량 범위가 약 200 내지 약 35,000(또는 약 1,000 내지 약 15,000 및 2,000 내지 약 12,500)인 중합체를 사용할 수 있다. 예를 들면, FcRn 결합 항체를 수용성 중합체, 예를 들면 친수성 폴리비닐 중합체, 예를 들면 폴리비닐알코올 및 폴리비닐피롤리돈에 접합할 수 있다. 이러한 중합체의 비제한적인 목록은 폴리알킬렌 옥사이드 호모중합체, 예컨대 폴리에틸렌 글라이콜(PEG) 또는 폴리프로필렌 글라이콜, 폴리옥시에틸렌화 폴리올, 이들의 공중합체 및 이들의 블록 공중합체를 포함하고, 단 블록 공중합체의 수 용해도는 유지된다.
키트
본 명세서에 기재된 FcRn 결합 항체는 예를 들면 키트 성분으로서 키트에 제공될 수 있다. 예를 들면, 키트는 (a) FcRn 결합 항체, 예를 들면 FcRn 결합 항체를 포함하는 조성물 및 임의로 (b) 정보 자료를 포함한다. 정보 자료는 본 명세서에 기재된 방법 및/또는 본 명세서에 기재된 방법에 대한 FcRn 결합 항체의 용도와 관련된 서술적, 지식적, 홍보적 또는 다른 자료일 수 있다.
키트의 정보 자료는 이의 형태에서 제한되지 않는다. 일 실시양태에서, 정보 자료는 화합물의 제조, 화합물의 분자량, 농도, 만료일, 뱃취 또는 제조 장소 정보 등에 관한 정보를 포함할 수 있다. 일 실시양태에서, 정보 자료는 자가면역 질환과 같은 본 명세서에 기재된 장애를 치료하거나, 예방하거나, 진단하기 위한 항체의 용도에 관한 것이다.
일 실시양태에서, 정보 자료는 본 명세서에 기재된 방법을 수행하기 위한 적합한 방식으로, 예를 들면 적합한 용량, 제형 또는 투여 방식(예를 들면, 본 명세서에 기재된 용량, 제형 또는 투여 방식)으로 FcRn 결합 항체를 투여하기 위한 설명서를 포함할 수 있다. 일 실시양태에서, 정보 자료는 자가면역 질환(예를 들면, 류마티스성 관절염 또는 전신 홍반성 낭창)을 앓고 있거나, 이의 위험을 갖는 인간과 같은 적합한 피험체에 FcRn 결합 항체를 투여하기 위한 설명서를 포함할 수 있다. 예를 들면, 상기 자료는 루푸스를 앓고 있는 환자 또는 다른 자가면역 질환을 앓고 있는 환자에게 FcRn 결합 항체를 투여하기 위한 설명서를 포함할 수 있다.
키트의 정보 자료는 이의 형태에서 제한되지 않는다. 많은 경우에, 정보 자료, 예를 들면 설명서는 인쇄물, 예를 들면 인쇄지, 도면 및/또는 사진, 예를 들면 라벨 또는 인쇄 시트로 제공된다. 그러나, 정보 자료는 또한 다른 포맷, 예컨대 컴퓨터 판독 가능한 자료, 비디오 기록 또는 오디오 기록으로 제공될 수 있다. 일 실시양태에서, 키트의 정보 자료는 의사 주소, 이메일 주소, 웹사이트 또는 전봐번호와 같은 연락 정보이고, 키트 사용자는 FcRn 결합 항체 및/또는 본 명세서에 기재된 방법에서의 이의 용도에 대한 실질적인 정보를 얻을 수 있다. 물론, 정보 자료는 또한 임의의 포맷의 조합으로 제공될 수 있다.
FcRn 결합 항체 이외에, 키트의 조성물은 다른 성분, 예컨대 용매 또는 완충제, 안정화제, 보존제, 착향료(예를 들면, 격렬한 길항제 또는 감미료), 항료 또는 다른 화장품 성분 및/또는 류마티스성 관절염 또는 전신 홍반성 낭창과 같은 본 명세서에 기재된 자가면역 질환을 치료하기 위한 제2 물질을 포함할 수 있다. 대안적으로, 다른 성분은 키트에 포함되지만, FcRn 결합 항체와 상이한 조성 또는 용기로 포함될 수 있다. 이러한 실시양태에서, 키트는 FcRn 결합 항체 및 다른 성분을 혼합하거나, 다른 성분과 함께 FcRn 결합 항체를 사용하기 위한 설명서를 포함할 수 있다.
FcRn 결합 항체는 액체, 건조 또는 동결 건조 형태와 같은 임의의 형태로 제공될 수 있다. FcRn 결합 항체가 실질적으로 순수하고/하거나, 무균인 것이 바람직하다. FcRn 결합 항체가 액체 용액로 제공될 때, 액체 용액은 바람직하게는 수용액이고, 무균 수용액이 바람직하다. FcRn 결합 항체가 건조 형태로 제공될 때, 재구성은 일반적으로 적합한 용매의 첨가에 의한다. 용매, 예를 들면 무균수 또는 완충제가 임의로 키트에 제공될 수 있다.
키트는 FcRn 결합 항체를 포함하는 조성물을 위한 하나 이상의 용기를 포함할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 키트는 조성물 및 정보 자료를 위한 별도의 용기, 분할기 또는 구획을 포함하다. 예를 들면, 조성물은 병, 바이알 또는 주사기에 포함될 수 있고, 정보 자료는 플라스틱 슬리브 또는 패킷(packet)에 포함될 수 있다. 다른 실시양태에서, 키트의 별개 부재가 단일 비분활 용기 내에 포함된다. 예를 들면, 조성물은 라벨 형태로 정보 자료가 부착된 병, 바이알 또는 주사기에 포함된다. 몇몇 실시양태에서, 키트는 각각의 용기를 복수(예를 들면, 팩)로 포함하고, 이들 각각은 FcRn 결합 항체의 하나 이상의 단위 제형(예를 들면, 본 명세서에 기재된 제형)을 포함한다. 예를 들면, 키트는 복수의 주사기, 앰플, 포일 패킷 또는 블리스터 팩을 포함하고, 이들 각각은 FcRn 결합 항체의 단일 제형을 포함한다. 키트의 용기는 기밀, 방수(예를 들면, 수분 변화 또는 증발에 불침투성) 및/또는 방광(light-tight)일 수 있다.
키트는 임의로 조성물 투여에 적합한 장치, 예를 들면 주사기, 흡입기, 피펫, 겸자, 측정 숟가락, 드롭퍼(예를 들면, 점안 드롭퍼), 면봉(예를 들면, 면으로 된 면봉 또는 나무로 된 면봉) 또는 임의의 이러한 전달 장치를 포함한다. 일 실시양태에서, 상기 장치는 항체의 계량 용량을 분배하는 이식형 장치이다. 본 개시내용은 또한 예를 들면 본 명세서에 기재된 성분을 배합함으로써 키트를 제공하는 방법을 특징으로 한다.
치료
FcRn에 결합하고 본 명세서에 기재되고/되거나 본 명세서에서 기술된 방법에 의해 확인된 항체는 치료학적 및 예방학적 유용성을 갖는다. 자가면역 질환을 비롯한 다양한 장애를 치료하고/하거나, 예방하고/하거나, 진단하기 위해 피험체에게 또는 심지어, 예를 들면 실험실내 또는 생체외 배양시 세포에 이 항체를 투여할 수 있다.
용어 "치료하는"는 통계학적으로 유의적인 정도로 또는 당해 분야의 당업자에게 검출 가능한 정도로 장애와 관련된 병증, 증상 또는 매개변수를 개선하거나 장애의 진행을 예방하는 데 효과적인 양, 방식 및/또는 모드로 치료제를 투여하는 것을 포함한다. 유효량, 방식 또는 모드는 피험체에 따라 변할 수 있고, 피험체에 맞춰질 수 있다. 피험체는 인간 또는 비인간 동물, 예를 들면 비인간 포유동물일 수 있다.
예를 들면, 피험체에게 단일 또는 복수 용량 투여시, 피험체가 자가면역 질환(예를 들면, 류마티스성 관절염 또는 전신 홍반성 낭창)과 같은 장애의 증상 또는 장애의 존재 또는 위험을 나타내는 매개변수의 경감을 나타내도록 FcRn 결합 항체를 치료학적 유효량으로 투여할 수 있다.
신체의 많은 장기 또는 국소 장기에 영향을 미치는 예시적인 장애는 다발성 경화증, 류마티스성 관절염, 염증성 장 질환(inflammatory bowel disease: IBD), 루푸스 및 강직성 척추염을 포함한다. 이들 장애 중 일부가 하기 기재되어 있다. 일 양태에서, 본 발명은 암의 치료 방법을 제공한다. FcRn 결합 항체를 사용하여 치료될 수 있는 또 다른 장애는 강피증, 쇼그렌 증후군, 굿파스튜어 증후군(Goodpasture's syndrome), 베게너 육아종증, 다발성 근육통, 측두동맥염/거대 세포 혈관염, 원형 탈모증, 강직성 척추염, 항인지질 증후군, 자가면역 애드슨병, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 자가면역 내이 질환, 자가면역 림프증식성 증후군(autoimmune lymphoproliferative syndrome: ALPS), 자가면역 혈소판 감소성 자반병(autoimmune thrombocytopenic purpura: ATP), 베체트병, 수포성 유천포창, 심근증, 비열대 스프루-피부염(celiac sprue-dermatitis), 만성 피로 증후군 면역 결핍증 증후군(chronic fatigue syndrome immune deficiency syndrome: CFIDS), 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 반흔성 유천포창, 한냉 응집소 질환, CREST 증후군, 크론씨병, 데고병(Dego's disease), 피부근염, 소아 피부근염, 원판상 루푸스, 필수 혼합 한냉글로불린혈증, 섬유근육통, 섬유근염, 그레이브스병(Grave's disease), 갈랑 바레 증후군(Guillain-Barre syndrome), 하시모토 갑상선염, 특발성 폐 섬유증, 특발성 혈소판 감소성 자반증(idiopathic thrombocytopenia purpura: ITP), IgA 신장병, 인슐린 의존성 당뇨병(I형), 청소년 관절염, 메니에르병, 혼합 연결 조직 질환, 중증 근무력증, 심상성 천포창, 낙엽상 천포창, 종양수반성 천포창, 악성 빈혈, 결절성 다발동맥염, 다연골염, 다분비성 증후군, 류마티스성 다발근육통, 다발성근염, 피부근염, 원발성 무감마글로불린혈증, 원발성 담즙성 간경변증, 건선, 레이노 현상(Raynaud's phenomenon), 라이터 증후군, 류마티스성 열, 유육종증, 근강직 증후군, 타카야수 혈관염(Takayasu arteritis), 궤양성 대장염, 포도막염, 혈관염, 백반증을 포함한다.
몇몇 실시양태에서, 혈류로부터 원치않는 치료학적 항체를 제거하기 위해 항-FcRn 결합 항체를 투여한다.
몇몇 실시양태에서, 항-HLA 항체의 수준을 억제하기 위해 항-FcRn 결합 항체를 투여한다. 몇몇 실시양태에서, 항-HLA 항체의 수준을 장기 이식과 관련되어 억제한다.
FcRn 결합 항체를 투여하는 방법이 "약제학적 조성물"에 기재되어 있다. 사용되는 분자의 적합한 용량은 피험체의 연령 및 체중 및 사용되는 특정 약물에 따라 달라진다. 예를 들면, 천연 물질 또는 병리학적 물질과 FcRn 사이의 바람직하지 않은 상호작용을 억제하거나 감소시키기 위해 경쟁제로서 항체를 사용할 수 있다.
유전자 치료 목적을 위해 내피 또는 상피로의 세포에 마크로 및 마이크로분자, 예를 들면 유전자를 전달하기 위해 FcRn 결합 항체를 사용할 수 있고 FcRn을 발현하는 조직만을 표적화할 수 있다. 치료학적 약물, 화합물 방출 방사선, 식물, 진균 또는 박테리아 기원의 분자, 생물학적 단백질 및 이들의 혼합물을 포함하는 다양한 세포독성 약물을 전달하기 위해 항체를 사용할 수 있다. 세포독성 약물은 세포독성 약물을 본 명세서에 기재된 바대로, 예를 들면 단거리 고에너지 α-에미터를 포함하는, 예컨대 단거리 방사선 에미터와 세포내 접촉시킬 수 있다.
폴리펩타이드 독소의 경우에, 번역 융합으로서 항체를 코딩하는 핵산 및 세포독소(또는 이의 폴리펩타이드 성분)를 구축하기 위해 재조합 핵산 기술을 이용할 수 있다. 이후, 재조합 핵산은 예를 들면 세포 및 단리된 코딩된 융합 폴리펩타이드에서 발현된다.
대안적으로, FcRn 결합 항체를 부위에서 국소화된 131I, γ-에미터와 같은 방사선동위원소와 같은 고에너지 방사선 에미터와 커플링하여, 여러 세포 직경을 사멸시킬 수 있다. 예를 들면, 문헌[S.E. Order, "Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy", Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy, R.W. Baldwin et al. (eds.), pp 303 316 (Academic Press 1985)]을 참조한다. 다른 적합한 방사선동위원소는 에미터, 예컨대 212Bi, 213Bi 및 211At 및 b 에미터, 예컨대 186Re 및 90Y를 포함한다. 더구나, 영상화제 및 세포독성제 둘 다로서 177Lu를 또한 사용할 수 있다.
131I, 90Y 및 177Lu로 표지된 항체를 사용하는 방사선 면역치료(RIT)는 집중적인 임상 조사 하에 있다. 이러한 3가지 핵종의 물리적 특징에 상당한 차이가 존재하고, 그 결과, 방사성핵종의 선택은 관심 대상의 조직에 최대 방사선 용량을 전달하는 데 매우 중요하다. 90Y의 더 높은 베타 에너지 입자는 벌키한 종양에 우수할 수 있다. 131I의 비교적 저에너지 베타 입자가 이상적이지만, 방사성 요도드화된 분자의 생체내 탈할로겐화는 항체를 내재화하는 중요한 단점이다. 반대로, 177Lu는 오직 0.2 내지 0.3㎜ 범위의 저에너지 베타 입자를 갖고, 90Y와 비교하여 골수에 훨씬 더 낮은 방사선 용량을 전달한다. 또한, (90Y와 비교하여) 더 긴 물리적 반감기로 인해, 잔류 시간이 더 길 수 있다. 그 결과, 더 높은 활성(더 많은 mCi 양)의 177Lu 표지된 물질을 골수에 비교적 적은 방사선 용량으로 투여할 수 있다. 다양한 암의 치료에 177Lu 표지된 항체의 사용을 조사한 몇몇 임상 연구가 존재한다. (Mulligan T et al., 1995, Clin. Cane. Res. 1: 1447-1454; Meredith RF, et al., 1996, J. Nucl. Med. 37: 1491-1496; Alvarez RD, et al., 1997, Gynecol. Oncol. 65: 94-101).
자가면역을 치료하기 위한 치료학적 방법의 사용은 많은 이점을 갖는다. 항체가 FcRn을 특이적으로 인식하므로, 다른 조직이 비축되고, 고수준의 물질을 치료가 필요한 때 그 부위에 직접 전달한다. 임상 매개변수로 치료를 효과적으로 모니터링할 수 있다. 대안적으로, 이 치료가 이용되어야 할 때를 표시하기 위해 이 매개변수를 이용할 수 있다.
정맥내 Ig 치료, 비스테로이드성 항염증성 약물(NSAID) 및 코르티코스테로이드; 및 항염증성 치료, 예컨대 사이클로스포린, 라파마이신 또는 아스코마이신 또는 이의 면역억제 유사체, 예를 들면 사이클로스포린 A, 사이클로스포린 G, FK-506, 라파마이신, 40-O-(2-하이드록시)에틸-라파마이신 등; 사이클로포스파마이드; 아자티오프렌; 메토트렉세이트; 브레퀴나르; FTY 720; 레플루노마이드; 미조리빈; 마이코페놀산; 마이코페놀레이트 모페틸; 15-데옥시스페르구알린; 면역억제 단일클론 항체, 예를 들면 단일클론 항체 내지 백혈구 수용체, 예를 들면 MHC, CD2, CD3, CD4, CD7, CD25, CD28, B7, CD45 또는 CD58 또는 이의 리간드; 또는 다른 면역조절 화합물, 예를 들면 CTLA4Ig 또는 다른 접착 분자 억제제, 예를 들면 mAb 또는 설렉틴 길항제 및 VLA-4 길항제를 포함하는 저분자량 억제제(이들로 제한되지는 않음)를 포함하는 자가면역 질환을 치료하기 위한 하나 이상의 기존 양상과 병용하여 FcRn 결합 항체를 투여할 수 있다. 이러한 병용 치료는 면역조절 섭생 또는 동종이식 또는 이종이식 급성 또는 만성 거부, 염증성 장애 또는 자가면역 장애의 치료 또는 예방을 위한 섭생의 일부일 수 있다.
다발성 경화증
다발성 경화증(MS)은 염증 및 미엘린 수초의 소실을 특징으로 하는 중추 신경계 질환이다.
MS를 앓고 있는 환자는 MS의 진단에 대한 워크샵에 의해 정의된 임상적으로 한정된 MS의 진단을 확인하는 기준으로 확인될 수 있다(Poser et al., Ann. Neurol. 13:227, 1983). MS는, 뇌척수액에서 IgG의 올리고클론 밴드 및 2의 공격의 근거에 의해 또는 뇌척수액에서 IgG의 올리고클론 밴드, 2개의 병소의 임상 근거 및 공격의 조합에 의해 또한 진단될 수 있다. MS를 진단하기 위해 맥도날드(McDonald) 기준을 또한 이용할 수 있다. 문헌[McDonald et al. (2001) Recommended diagnostic criteria for multiple sclerosis: guidelines from the International Panel on the Diagnosis of Multiple Sclerosis, Ann Neurol 50: 121-127]. 맥도날드 기준은 다수의 임상 공격의 부재 하에 MS의 진단에서 이용되는 시간에 따른 MRI 근거의 사용을 포함한다.
몇몇 상이한 방식으로 다발성 경화증의 효과적인 치료를 평가할 수 있다. 치료의 효과를 측정하기 위해 하기 매개변수를 이용할 수 있다. 2개의 예시적인 기준은 EDSS(extended disability status scale: 확장 장애 상태 척도) 및 MRI(자기 공명 영상화)에서의 병세악화의 외관을 포함한다. EDSS는 MS로 인한 임상 손상을 분류하기 위한 수단이다(Kurtzke, Neurology 33: 1444, 1983). 신경학적 손상의 유형 및 중증도에 8개의 기능성 시스템을 평가한다. 간단히 말하면, 치료 전에, 각추, 소뇌, 뇌간, 감각, 창자 및 방광, 시각, 뇌 등의 계에서의 손상에 대해 환자를 평가한다. 한정된 간격으로 추적관찰을 수행한다. 척도는 0(정상) 내지 10(MS로 인한 사망) 범위이다. 하나의 완전 단계의 감소는 효과적인 치료를 나타낼 수 있다(Kurtzke, Ann. Neurol. 36:573-79, 1994).
본 명세서에 기재된 방법으로 치료될 수 있는 다발성 경화증과 관련된 예시적인 증상은 시신경염, 복시, 안진, 안구운동조절이상(ocular dysmetria), 핵간성안근마비(internuclear ophthalmoplegia), 이동 및 충분한 안내섬광, 구심성 동공 장애, 부전마비, 하지부전마비, 반신부전마비, 편마비, 불완전 사지마비(quadraparesis), 마비, 대마비, 편측마비, 사지마비(tetraplegia), 사지 마비(quadraplegia), 경직, 구음장애, 근위축, 경련, 위경련(cramp), 저긴장, 간헐성경련, 근육간대경련(myoclonus), 섬유성 근간대경련, 하지 불안 증후군, 수족, 반사 기능장애(dysfunctional reflex), 감각이상, 마취, 신경통, 신경병 및 신경병성 통증, 레르미트(l'hermitte's), 고유감각 기능이상, 삼차 신경병증, 운동실조, 기도 진전, 운동측정장애, 평형 운동실조, 현기증, 언변 운동실조, 근육긴장이상, 교호운동기능장애, 빈뇨, 방광 경직, 이완성 방광, 배뇨 괄약근 실조, 발기 부전, 성흥분부전증, 불감증, 변비, 대변 절박증, 변실금, 우울증, 인지 장애, 치매, 기분 변화, 정서 불안정, 희열, 양극성 증후군, 불안, 실어증, 부전 실어증, 피로, 우토프 증상(uhthoff's symptom), 위식도 역류 및 수면 장애를 포함한다.
인간 연구 이외에 또는 전에, 2종의 물질의 사용의 효율을 평가하기 위해 동물 모델을 사용할 수 있다. 다발성 경화증을 위한 예시적인 동물 모델은 예를 들면 문헌(Tuohy et al.(J. Immunol. (1988) 141: 1126-1130), Sobel et al. (J. Immunol. (1984) 132: 2393-2401) 및 Traugott(Cell Immunol. (1989) 119: 114-129)에 기재된 실험적 자가면역 뇌염(experimental autoimmune encephalitis: EAE) 마우스 모델이다. EAE 유도 전에 마우스에 본 명세서에 기재된 제1 물질 및 제2 물질을 투여할 수 있다. 이후, 모델에서 2종의 물질을 사용하는 효율을 결정하기 위해 특징적인 기준에 대해 마우스를 평가한다.
염증성 장 질환
염증성 장 질환(IBD)은 일반적으로 만성 재발 장 염증을 포함한다. IBD는 크론씨병 및 궤양성 대장염(UC)의 2의 명확한 장애를 의미한다. IBD의 임상 증상은 간헐적 직장 출혈, 경련성 복부 통증, 체중 감량 및 설사를 포함한다. 궤양성 대장염에 대한 임상 활성 지수와 같은 IBD를 모니터링하기 위해 임상 지수를 또한 이용할 수 있다. 또한, 문헌[Walmsley et al. Gut. 1998 Jul;43(l):29-32 및 Jowett et al. (2003) Scand J Gastroenterol. 38(2): 164-71]을 참조한다. IBD의 적어도 하나의 증상의 경감시키거나 IBD의 임상 지수를 경감시키기 위해 FcRn 결합 항체를 사용할 수 있다.
류마티스성 관절염
류마티스성 관절염은 통증, 부종, 강직 및 관절에서의 기능 손실을 발생시키는 자가면역 염증성 질환이다. 류마티스성 관절염은 대게 대칭 패턴으로 나타난다. 이 질환은 손에 가장 가까운 손목 관절 및 손가락 관절에 영향을 미칠 수 있다. 이는 또한 관절 이외의 신체의 다른 부분에 영향을 미칠 수 있다. 또한, 류마티스성 관절염을 앓고 있는 사람은 피로, 때때로의 열 및 전신 불쾌감을 가질 수 있다. 류마티스성 관절염의 진단을 위한 양성 인자는 "류마티스성 인자" 혈액 항체 및 시트룰린 항체를 포함한다. FcRn 결합 항체는 류마티스성 관절염 또는 류마티스성 관절염의 하나 이상의 증상을 치료하거나, 예방하거나, 경감시키는 데 유용할 수 있다.
루푸스
전신 홍반성 낭창(SLE)은 염증 및 다양한 신체 조직에 대한 손상을 발생시키는 자가면역 질환이다. SLE는 그 자체의 DNA에 지정된 자기 항체에 의해 중재될 수 있다. 루푸스는 관절, 피부, 신장, 심장, 폐, 혈관 및 뇌를 포함하는 신체의 많은 부부에 영향을 미칠 수 있다. 다양한 증상이 존재할 수 있지만, 가장 흔한 것 중 일부는 극도의 피로, 통증이 있는 또는 부풀은 관절(관절염), 설명되지 않는 열, 피부 발진 및 신장 문제점을 포함한다. 루푸스의 예시적인 증상은 통증이 있는 또는 부풀은 관절, 설명되지 않는 열 및 극도의 피로를 포함한다. 코 및 뺨에 걸쳐 특징적인 홍조 피부 발진이 나타날 수 있다. 얼굴 및 귀, 상완, 어깨, 뺨 및 손에 발진이 또한 나타날 수 있다. 루푸스의 다른 증상은 가슴 통증, 탈모, 빈혈, 구강염 및 추위 및 스트레스로부터의 창백하거나 보랏빛인 손가락 및 발가락을 포함한다. 일부 사람은 또한 두통, 현기증, 우울증, 착란 또는 발작을 경험한다. SLE 진단에 대한 양성 인자는 순환 항-핵 항체, 항-DNA 항체 및 항-Sm 항체를 포함한다. FcRn 결합 항체는 SLE 또는 SLE의 하나 이상의 증상을 치료하거나, 예방하거나, 경감시키는 데 유용할 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 루푸스는 피부홍반성 루푸스 및 루푸스 신장염을 포함한다.
면역 혈소판감소증(ITP)
ITP는 말초 혈소판 파괴 증가의 질환이고, 환자가 특이적 혈소판 막 단백질에 결합하는 항체를 발생시킨다. 항-혈소판 항체는 혈소판을 옵소닌화하여, 마크로파지에 의한 파괴를 발생시킨다. ITP를 치료하기 위한 시도는 일반적으로 면역계를 억제하는 데 관여하고, 이는 혈소판 수준을 증가시킨다. FcRn 결합 항체는 ITP 또는 이의 하나 이상의 증상을 치료하거나, 예방하거나, 경감시키는 데 유용할 수 있다.
강직성 척추염
강직성 척추염은 척추에 영향을 미칠 뿐만 아니라, 골 및 관절 주의의 힘줄 및 인대에 염증이 생겨 통증 및 강직을 발생시키면서 엉덩이, 어깨 및 무릎에도 영향을 미칠 수 있는 자가면역 질환이다. 강직성 척추염은 후기청소년기 또는 성인초기에서 사람들에게 영향을 미치는 경향이 있다. FcRn 결합 항체는 강직성 척추염 또는 이의 하나 이상의 증상을 치료하거나, 예방하거나, 경감시키는 데 유용할 수 있다.
천포창
천포창은 점막 및 피부에 영향을 미치는 자가면역 질환이다. 이 질환은 데스모글레인에 대한 자기 항체의 생성을 특징으로 한다. 데스모글레인은 카데린 패밀리의 단백질이고, 데스모솜의 형성에 관여하여, 세포를 서로에 연결시킨다. 천포창은 이 질환의 가장 흔한 형태인 심상성 천포창(자기 항체가 데스모글레인 3을 포적화함)의 3가지 유형 중 하나로 분류될 수 있다. 낙엽상 천포창에서, 데스모글레인 1에 대한 자기 항체가 생성된다. 제3 유형이고 가장 덜 흔한 질환은 종양수반성 천포창(자기 항체가 데스모플라킨을 표적화하고 림프종과 같은 암과 관련됨)이다. 이 질환은 피부과 의사가 피부 외관으로 흔히 진단되고 데스모글레인에 대한 자기 항체의 검출에 의해 확인된다. 치료 방법은 스테로이드의 투여 및/또는 리툭시맙(리툭산(Rituxan))과 같은 CD20 항체의 투여를 포함한다.
암
본 명세서에 사용되는 "암"은 신체 장기 및 계의 정상 기능을 방해하는 세포의 비제어 성장을 의미한다. 원래 위치로부터 이동하여 중요 장기에 침투하는 암은 결국 이환 장기의 기능 악화를 통해 피험체가 사망하게 할 수 있다. 암종은 상피 세포로부터 발생하는 악성 암이고, 선암 및 편평 세포 암종을 포함한다. 육종은 연결 또는 지지 조직의 암이고, 골육종, 연골육종 및 위장 기질 종양을 포함한다. 조혈 암, 예컨대 백혈병은 피험체에서 정상 조혈 구획보다 우수히 작용하여, (빈혈, 혈소판 감소증 및 백혈구 감소증 형태의) 조혈 실패를 발생시켜 궁극적으로 사망시킨다. 당해 분야의 당업자는 육종, 암종 또는 조혈 암과 같은 암을 분류할 수 있다.
본 명세서에 사용된 암은 암, 유방암, 담관암; 방광암; 교모세포종 및 수모세포종을 포함하는 뇌암; 자궁암; 융모암; 대장암; 자궁내막암; 식도암; 위암; 급성 림프구성 및 골수성 백혈병을 포함하는 혈액학적 종양; T 세포 급성 림프구성 백혈병/림프종; 모발 세포 백혈병; 만성 골수성 백혈병, 다발성 골수종; AIDS 관련 백혈병 및 성인 T 세포 백혈병 림프종; 보웬병 및 파제트병을 포함하는 상피내암; 간암; 폐 암; 호치킨 질환 및 림프구성 림프종을 포함하는 림프종; 신경아세포종; 편평 세포 암종을 포함하는 구강암; 상피 세포, 기질 세포, 생식 세포 및 간충직 세포로부터 생기는 암을 포함하는 난소암; 췌장암; 전립선암; 직장암; 평활근육종, 횡문근육종, 지방육종, 섬유육종 및 골육종을 포함하는 육종; 흑색종, 카포시 육종, 바소세포암(basocellular cancer) 및 편평 세포 암을 포함하는 피부암; 생식선 종양, 예컨대 정상피종, 비정상피종(기형종, 융모암), 기질 종양 및 배세포 종양을 포함하는 고환암; 갑상선 선암 및 수양 암종을 포함하는 갑상선암; 및 선암 및 윌름스 종양을 포함하는 신장암의 유형을 포함한다. 다른 암이 당해 분야의 당업자에게 공지되어 있다.
태아의 치료
FcRn은 태아에 대한 상피 세포 장벽을 통과하여 모체 IgG의 수송을 중재한다. 자궁에서 태아에 마크로분자 약물, 예를 들면 항생제 및/또는 소분자를 전달하기 위해 본 명세서에 기재된 항체를 사용할 수 있다. 태아는 치료를 요하는 병증 또는 장애(예를 들면, 장내 감염 또는 대사 장애)로부터 고생할 수 있다. 병증 또는 장애를 치료하기 위한 약물 또는 분자를 FcRn 결합 항체에 접합할 수 있고, 자궁에서 치료를 필요로 하는 태아를 갖는 임신부에 투여할 수 있다. 접합된 FcRn 결합 항체는 FcRn에 결합하여, 태반을 통해 태아에 수송된다. 태아는 약물 또는 분자 치료를 받는다.
면역흡착
몇몇 실시양태에서, 본 발명은 개인으로부터 원치않는 치료학적 항체의 제거 방법을 제공하다. 몇몇 실시양태에서, 원치않는 치료학적 항체는 IgG 항체이다. 몇몇 실시양태에서 원치않는 치료학적 항체는 항-VLA4 항체, 예컨대 나탈리주맙(Tysabri, Biogen Idee/Elan), 에팔리주맙(Raptiva, Genentech), 베바시주맙(Avastin, Genentech) 및 Fc 융합 단백질, 예컨대 에타네르셉트(Enbrel, Amgen/Wyeth)이다. 나탈리주맙 단일클론 항체 치료는 진행성 다소성 백질뇌증(Progressive Multifocal Leukoencephalopathy: PML)과 관련된다. 혈류 및/또는 신체 나머지로부터의 치료학적 항체의 결핍은 PML의 진행을 변경시킬 수 있다.
몇몇 실시양태에서, 본 명세서에 제시된 치료 방법을 피험체의 혈류로부터 치료학적 항체를 제거하거나 부분적으로 제거하기 위한 방법과 조합할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 본 명세서에 제시된 항-FcRn 항체는 치료학적 항체에 결합할 수 있는 포획 단백질와 조합될 수 있고, 이러한 조합은 혈류로부터 치료학적 항체의 청소를 증가시킨다. 몇몇 실시양태에서, 피험체의 혈류로부터의 치료학적 항체의 제거 또는 부분 제거 방법은 혈장 교환(PLEX)이다. 몇몇 실시양태에서, 혈장 교환을 경험한 피험체에 항-FcRn 항체를 투여할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 혈장 교환 과정에서 FcRn에 대한 면역흡착제로서 항-FcRn 항체를 사용할 수 있다.
혈장 교환(채집술 또는 혈장교환술)에서, 혈액을 신체로부터 얻고, 콜레스테롤 또는 치료학적 항체와 같은 원치않는 물질을 포함하는 혈장을 세포 분리기에 의해 혈액으로부터 제거한다. 혈액을 뱃취에서 신체로부터 제거하거나, 이를 연속 흐름 방식으로 제거할 수 있고, 후자는 신체로 처리된 혈액가 재도입되게 한다. 원치않는 물질을 포함하는 제거된 혈장을 버릴 수 있고, 환자는 첨가된 단백질을 갖는 도너 혈장 또는 식염수를 대신에 받을 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 혈액으로부터 원치않는 물질을 제거하거나, 혈액에서의 원치않는 물질의 수준을 허용되는 수준으로 낮추기 위해 혈장 교환의 다수 실행이 필요할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 혈액을 환자에게 반환하기 전에, 혈액을 "여과"시키고, 원치않는 물질을 제거한다. 혈장 교환 방법이 당해 분야에 공지되어 있고, 예를 들면 미국 특허 제6,960,178호에 기재되어 있다.
혈장 교환은 피험체의 혈액에서의 치료학적 항체 수준 및 항상성의 복원을 감소시키는 것으로 나타났다(예를 들면, 문헌[Khatri et al; 2009; Neurology 72:402-409]을 참조한다).
혈액을 IgG의 Fc 구역에 결합하고 혈류로부터 IgG 항체를 제거하는 포획 단백질 스타필로코커스 단백질 A와 접촉시켜 혈액, 혈장 또는 혈청으로부터 IgG 기반 치료학적 항체(예컨대, 나탈리주맙)를 제거할 수 있다. 상이한 아이소타입 항체에 다른 포획 단백질을 사용할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 항-FcRn 항체를 혈장 교환 과정에서 포획 단백질로서 사용하여, 혈류로부터 FcRn을 제거시켜, "유리" 치료학적 항체의 양을 증가시킬 수 있다. 생성된 "유리" 치료학적 항체는 치료 전 존재하는 항체보다 짧은 반감기를 갖고/갖거나, 상이한 포획 단백질(예컨대, 단백질 A)과 혈액으로부터 더 용이하게 제거될 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 항-FcRn 항체를 혈장 교환 동안에 또는 전에 환자에게 투여한다. 몇몇 실시양태에서, 항-FcRn 항체를 부동화하고 컬럼에서 사용하여 FcRn을 결합시킬 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 치료학적 항체를 포함하는 환자의 혈액을 부동화 항-FcRn 항체 및 부동화 단백질 A 둘 다와 접촉시킨다.
몇몇 실시양태에서, 투여되고 부작용을 나타낸 치료학적 항체에 대한 "복구" 치료에서 본 명세서에 제시된 항-FcRn 항체를 사용할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 혈장 교환에 대한 대안으로서 항-FcRn 항체를 사용할 수 있다. 항-FcRn의 투여는 혈관 접근, 시트르산염 치료 및 도너 혈장 소싱(sourcing)과 같은 혈장교환술 및 혈장 교환과 관련된 위험 없이 치료학적 항체 결핍을 성취할 수 있다.
인간 백혈구 항원
인간 백혈구 항원(HLA)은 세포 외부에서 펩타이드 및 항원을 제시하여, 이후 T 세포에 의해 인식되어, 이의 차례에서 B 세포를 활성화할 수 있다. 이용 가능한 일련의 HLA 유전자는 각 사람에게 독특하다. "비자기"인 HLA를 디스플레이하는 임의의 세포는 면역 반응을 유도할 수 있다. 일반적으로, "비자기" HLA가 자기 HLA와 더 다를수록, 면역 반응이 더 강해진다. 예를 들면, 장기 이식의 경우에, 면역 반응을 최소화하기 위해 유사한 HLA 유전자를 갖는 피험체가 바람직하다. 도너 특이적 HLA 항체는 신장, 심장, 폐 및 간 이식에서 이식편 실패와 관련되는 것으로 밝혀졌다.
몇몇 실시양태에서, 본 발명은 개인에서 "비자기" HLA 항체의 수준을 감소시키는 방법을 제공한다. "비자기" HLA 항체의 수준 감소는 예를 들면 장기 이식 동안 면역 반응을 억제시킬 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 장기 이식을 받은 사람에게 항-FcRn 항체를 투여한다. 몇몇 실시양태에서, 장기 이식을 받은 사람에게 항-FcRn 항체를 투여한다. 몇몇 실시양태에서, 장기 이식을 받은 사람에게 항-FcRn 항체를 투여한다. HLA 항체의 수준을 측정하기 위한 검정이 당해 분야에 널리 공지되어 있다.
진단학적 용도
FcRn에 결합하고 본 명세서에 기재되고/되거나 본 명세서에서 기술된 방법에 의해 확인된 항체는 실험실내 및 생체내 진단학적 용도를 갖는다.
일 양태에서, 본 개시내용은 실험실내 및 생체내 FcRn의 존재를 검출하는 진단학적 방법(예를 들면, 피험체에서 생체내 영상화)을 제공한다. 상기 방법은 FcRn을 하위세포 위치, 예를 들면 엔도솜에 국소화하는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 (ⅰ) 샘플을 FcRn 결합 항체와 접촉시키는 단계; 및 (ⅱ) FcRn 결합 항체와 샘플 사이의 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 방법은 또한 기준 샘플(예를 들면, 대조군 샘플)을 항체와 접촉시키는 단계 및 항체와 샘플 사이의 복합체의 형성 정도를 기준 샘플에 대한 정도에 대해 결정하는 것을 포함할 수 있다. 대조군 샘플 또는 피험체와 비교하여 샘플 또는 피험체에서의 복합체의 형성에서의 통계학적 유의적 변화와 같은 변화는 샘플에서 FcRn의 존재를 나타낼 수 있다.
예시적인 다른 방법은 (ⅰ) 피험체에게 FcRn 결합 항체를 투여하는 단계; 및 (ⅲ) FcRn 결합 항체와 피험체 사이의 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함한다. 검출은 복합체의 형성의 위치 또는 시간을 결정하는 것을 포함할 수 있다.
FcRn 결합 항체를 검출 가능한 물질로 직접적으로 또는 간접적으로 표지하여 결합 또는 비결합 항체의 검출을 수월하게 할 수 있다. 적합한 검출 가능한 물질은 다양한 효소, 보결 분자단, 형광성 재료, 발광성 재료 및 방사성 재료를 포함한다.
FcRn에 결합한 항체 또는 비결합 항체를 측정하거나 가시화하기 위해 FcRn 결합 항체와 FcRn 사이의 복합체 형성을 검출할 수 있다. 효소 연결 면역흡착 검정(ELISA), 방사선 면역검정(RIA) 또는 조직 면역조직화학과 같은 종래의 검출 검정을 이용할 수 있다. FcRn 결합 항체를 표지하는 것 이외에, 검출 가능한 물질로 포지된 표준품 및 비표지된 FcRn 결합 항체를 이용하여 경쟁 면역검정에 의해 샘플에서 FcRn의 존재를 평가할 수 있다. 이 검정의 일례에서, 생물학적 샘플, 표지된 표준품 및 FcRn 결합 항체를 조합하고, 비표지된 항체에 결합된 표지된 표준품의 양을 결정한다. 샘플에서 FcRn의 양은 FcRn 결합 항체에 결합된 표지된 표준품의 양에 역비례한다.
형광단 및 발색단 표지 항체를 제조할 수 있다. 항체 및 다른 단백질이 파장이 약 310㎚ 이하인 광을 흡광하므로, 310㎚ 초과, 바람직하게는 400㎚ 초과의 파장에서 실질적인 흡수를 갖는 형광성 모이어티를 선택해야 한다. 다양한 적합한 형광물질 및 발색단이 문헌[Stryer,1968, Science 162:526 및 Brand, L. et al.,1972, Annu. Rev. Biochem. 41:843 868]에 기재되어 있다. 미국 특허 제3,940,475호, 제4,289,747호 및 제4,376,110호에 기재된 절차와 같은 종래의 절차에 의해 형광성 발색단 그룹으로 항체를 표지할 수 있다. 상기 기재된 바람직한 특성을 많이 갖는 형광물질 중 하나의 그룹은 플루오레세인 및 로다민을 포함하는 잔텐 염료이다. 형광성 화합물의 다른 그룹은 나프틸아민이다. 형광단 또는 발색단으로 일단 표지하면, 예를 들면 형광성 현미경검사(예컨대, 공초점 또는 디콘볼루션 현미경검사)를 이용하여 샘플에서 FcRn의 존재 또는 국재화를 검출하기 위해 항체를 사용할 수 있다.
조직학적 분석. 본 명세서에 기재된 항체를 사용하여 면역조직화학을 수행할 수 있다. 예를 들면, 항체를 표지(예컨대, 정제 또는 에피토프 태그)로 합성할 수 있거나, 예를 들면 표지 또는 표지-결합 그룹을 접합시켜 검출 가능하게 표지할 수 있다. 예를 들면, 킬레이터를 항체에 부착시킬 수 있다. 이후, 항체를 현미경 슬라이드 상의 고정 조직 절편과 같은 조직학적 제제와 접촉시킨다. 결합을 위한 항온처리 후, 비결합 항체를 제거하기 위해 제제를 세척한다. 이후, 항체가 제제에 결합하였는지를 확인하기 위해, 예를 들면 현미경검사를 이용하여 제제를 분석한다.
물론, 결합 시에 항체를 표지하지 않을 수 있다. 결합 및 세척 후, 항체가 검출 가능하도록 항체를 표지한다.
단백질 어레이. FcRn 결합 항체를 또한 단백질 어레이 상에 부동화할 수 있다. 예를 들면, 의학 샘플(예컨대, 단리된 세포, 혈액, 혈청, 생검 등)을 스크리닝하기 위한 진단학적 도구로서 단백질 어레이를 사용할 수 있다. 물론, 단백질 어레이는 또한 예를 들면 FcRn 또는 다른 표적 분자에 결합하는 다른 리간드를 포함할 수 있다.
폴리펩타이드 어레이의 제조 방법이, 예를 들면 문헌[De Wildt et al., 2000, Nat. Biotechnol. 18:989-994; Lueking et al., 1999, Anal. Biochem. 270: 103-111; Ge, 2000, Nucleic Acids Res. 28, e3, 1- VII; MacBeath and Schreiber, 2000, Science 289: 1760-1763]; WO 제01/40803호 및 WO 제99/51773A1호에 기재되어 있다. 예를 들면, 제네틱 마이크로시스템즈(Genetic MicroSystems) 또는 바이오로보틱스(BioRobotics)로부터의 상업적으로 구입 가능한 로봇 장치를 사용하여 어레이를 위한 폴리펩타이드를 고속으로 스폿팅할 수 있다. 어레이 기재는 예를 들면 나이트로셀룰로스, 플라스틱, 유리, 예를 들면 표면 개질 유리일 수 있다. 어레이는 또한 다공성 매트릭스, 예를 들면 아크릴아마이드, 아가로스 또는 다른 중합체를 포함할 수 있다.
예를 들면, 어레이는 예를 들면 상기 드 빌트(De Wildt)의 문헌에 기재된 항체의 어레이일 수 있다. 어레이된 포맷에서 필터 상에서 항체를 생성하는 세포를 성장시킬 수 있다. 항체 생성을 유도하고, 발현된 폴리펩타이드를 세포 위치에서 필터에 부동화한다. 항체 어레이를 표지된 표적과 접촉시켜 각각의 부동화 항체에 대한 표적의 결합 정도를 결정할 수 있다. 어레이의 각각의 주소에서의 결합 정도에 대한 정보를 예를 들면 컴퓨터 데이터베이스로 프로필로서 저장할 수 있다. 항체 어레이를 복제물로 제조하고, 예를 들면 표적 및 비표적의 결합 프로필을 비교하기 위해 사용할 수 있다.
FACS(형광 활성화 세포 분류). 샘플(예를 들면, 환자 샘플)에서 세포와 같은 세포를 표지하기 위해 FcRn 결합 항체를 사용할 수 있다. 항체를 또한 형광성 화합물에 부착(또는 부착 가능)할 수 있다. 이후, 형광 활성화 세포 분류기(예를 들면, 미국 캘리포니아주 산호세에 소재하는 벡톤 디킨슨 이뮤노사이토메트리 시스템즈(Becton Dickinson Immunocytometry Systems)로부터 구입 가능한 분류기 사용; 또한 미국 특허 제5,627,037호; 제5,030,002호; 및 제5,137,809호 참조)를 사용하여 세포를 분류할 수 있다. 세포가 분류기를 통과하면서, 레이저 빔이 형광성 화합물을 방출하는 반면, 검출기는 통과한 세포를 계수하고, 형광을 검출하여 형광성 화합물이 세포에 부착하는지를 결정한다. 각각의 세포에 결합된 표지의 양을 정량화하고 샘플을 규명하기 위해 분석할 수 있다.
분류기를 또한 세포를 편향시키고, 항체에 결합되지 않은 이 세포로부터 항체에 의해 결합된 세포를 분리시킬 수 있다. 분리된 세포를 배양하고/하거나, 규명할 수 있다.
생체내 영상화. 생체내 FcRn 발현 조직의 존재를 검출하는 방법을 또한 특징으로 한다. 상기 방법은 (ⅰ) 피험체(예를 들면 자가면역 질환을 앓고 있는 환자)에게 검출 가능한 마커와 접합된 항-FcRn 항체를 투여하는 단계; (ⅱ) 피험체를 FcRn 발현 조직 또는 세포에 대한 상기 검출 가능한 마커를 검출하기 위한 수단에 노출시키는 단계를 포함한다. 예를 들면, NMR 또는 다른 단층 촬영 수단 등에 의해 피험체를 영상화한다.
진단학적 영상화에 유용한 표지의 예는 131I, 111In, 123I, 99mTc, 32P, 125I, 3H, 14C 및 188Rh와 같은 방사성 동위원소, 플루오레세인 및 로다민과 같은 형광성 표지, 핵 자기 공명 활성 표지, 포지트론 방출 단층촬영("PET") 스캐너에 의해 검출 가능한 포지트론 방출 아이소타입, 형광발광제, 예컨대 루시퍼린 및 효소 마커, 예컨대 퍼옥시다제 또는 포스파타제를 포함한다. 단거리 검출기 프로브에 의해 검출 가능한 아이소타입과 같은 단거리 방사선 에미터를 또한 이용할 수 있다. 공지된 기술을 이용하여 항체를 이러한 시약으로 표지할 수 있다. 예를 들면, 항체의 방사선 표지에 관한 기술에 대해 문헌[Wensel and Meares, 1983, Radioimmunoimaging and Radioimmunotherapy, Elsevier, New York] 및 문헌[D. Colcher et al., 1986, Meth. Enzymol. 121: 802 816]을 참조한다.
실험실내 진단학적 시험에 방사성 표지된 항체를 또한 사용할 수 있다. 동위원소로 표지된 항체의 특이적 활성은 반감기, 방사성 표지의 동위원소 순도 및 표지가 항체에 어떻게 도입되는지에 따라 달라진다.
방사성 동위원소(예컨대, 14C, 3H, 35S, 125I, 32P, 131I)로 폴리펩타이드를 표지하는 절차는 일반적으로 공지되어 있다. 예를 들면, 트리튬 표지 절차는 미국 특허 제4,302,438호에 기재되어 있다. 예를 들면, 쥣과 단일클론 항체에 적용되는 요오드화, 트리튬 표지 및 35S 표지 절차가, 예를 들면 고딩 제이.더블유.(Goding, J.W.)의 문헌(Monoclonal antibodies : principles and practice : production and application of monoclonal antibodies in cell biology, biochemistry, and immunology 2nd ed. London ; Orlando : Academic Press, 1986. pp 124 126) 및 이에 인용된 문헌에 기재되어 있다. 항체와 같은 폴리펩타이드를 요오드화하는 다른 절차가 문헌[Hunter and Greenwood, 1962, Nature 144:945, David et al, 1974, Biochemistry 13: 1014 1021] 및 미국 특허 제3,867,517호 및 제4,376,110호에 기재되어 있다. 영상화에 유용한 방사성 동위원소 요소는, 예를 들면 123I, 131I, 111In 및 99mTc를 포함한다. 항체를 요오드화하는 절차가 문헌[Greenwood, F. et al., 1963, Biochem. J. 89: 114 123; Marchalonis, J., 1969, Biochem. J. 113:299 305; 및 Morrison, M. et al., 1971, Immunochemistry 289 297]에 기재되어 있다. 99mTc 표지에 대한 절차가 문헌[Rhodes, B. et al. in Burchiel, S. et al. (eds.), Tumor Imaging: The Radioimmuno chemical Detection of Cancer, New York: Masson 111 123 (1982)] 및 이에 인용된 문헌에 기재되어 있다. 111In 표지 항체에 적합한 절차가 문헌[Hnatowich, D.J. et al., 1983, J. Immunol. Methods, 65: 147 157, Hnatowich, D. et al., 1984, J. Applied Radiation, 35:554 557 및 Buckley, R. G. et al., 1984, F.E.B.S. 166:202 204]에 기재되어 있다.
방사성 표지된 항체의 경우에, 항체를 환자에게 투여하고, 예를 들면 감마 카메라를 사용하는 방사성 핵 주사 또는 방출 단층촬영과 같은 공지된 기술을 이용하여 항체가 반응하고, 검출되거나, 생체내 "영상화된" 항원을 보유하는 세포에 국소화한다. 예를 들면, 문헌[A.R. Bradwell et al., "Developments in Antibody Imaging", Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy, R.W. Baldwin et al., (eds.), pp 65 85 (Academic Press 1985)]을 참조한다. 대안적으로, 브룩해븐 내셔널 레버러토리(Brookhaven National Laboratory)에 위치한, 예컨대 Pet VI라 칭하는 포지트론 방출 횡단면 단층촬영 스캐너를 사용할 수 있고, 여기서 방사성 동위원소가 포지트론을 방출한다(예를 들면, 11C, 18F, 15O 및 13N).
MRI 조영제. 자기 공명 영상화(MRI)는 살아 있는 피험체의 내부 특징을 가시화하는 NMR을 이용하고, 예후, 진단, 치료 및 수술에 유용하다. 명확한 이점을 위해 방사성 트레이서 화합물 없이 MRI를 이용할 수 있다. 여러 MRI 기술이 EP-A-0 502 814에 요약되어 있다. 일반적으로, 영상을 생성하기 위해 상이한 환경에서 물 양성자의 이완 시간 상수 T1 및 T2와 관련된 차이가 이용한다. 그러나, 이러한 차이는 날카로운 고해상 영상을 제공하기에 불충분할 수 있다.
이 이완 시간 상수의 차이는 조영제에 의해 증대될 수 있다. 이러한 조영제의 예는 많은 자성 물질, (주로 T1을 변경하는) 상자성 물질 및 (주로 T2 반응을 변경하는) 강자성 또는 초상자성 물질을 포함한다. 여러 상자성 물질(예를 들면, Fe+3, Mn+2, Gd+3)을 부착하기 위해(그리고 이의 독성을 감소시키기 위해) 킬레이트(예를 들면, EDTA, DTPA 및 NTA 킬레이트)를 사용할 수 있다. 다른 물질은 직경이, 예를 들면 10㎜ 내지 약 10nM 미만인 입자 형태일 수 있다. 입자는 강자성, 반강자성 또는 초상자성 특성을 가질 수 있다. 입자는, 예를 들면 마그네타이트(Fe304), γ-Fe203, 페라이트 및 전이 원소의 다른 자기 광물 화합물을 포함할 수 있다. 자기 입자는 비자기 재료와 함께 및 이것 없이 하나 이상의 자기 결정을 포함할 수 있다. 비자기 재료는 합성 또는 천연 중합체(예컨대, 세파로스, 덱스트란, 덱스트린, 전분 등)을 포함할 수 있다.
(ⅰ) 실질적으로 모든 천연상 풍부한 불소 원자가 19F 동위원소이고, 따라서, 실질적으로 모든 불소 함유 화합물이 NMR 활성이고; (ⅰ) 많은 화학적으로 활성인 폴리플루오르화 화합물, 예컨대 트라이플루오로아세트산 무수물이 비교적 낮은 가격으로 상업적으로 구입 가능하며; (ⅲ) 헤모글로빈 대체로서 산소를 운반하도록 사용되는 퍼플루오르화 폴리에터와 같은 많은 플루오르화 화합물이 인간에서 사용하기에 의학적으로 허용되는 것으로 밝혀지는 한, NMR 활성 19F 원자 또는 복수의 이러한 원자로 이루어지는 표시 그룹으로 FcRn 결합 항체를 또한 표지할 수 있다. 항온처리를 위한 이러한 시간을 허용한 후, FcRn 발현 조직을 위치시키고 영상화하기 위해 문헌[Pykett, 1982, Sci. Am. 246:78 88]에 기재된 것과 같은 장치를 사용하여 전체 신체 MRI를 수행한다.
본 개시내용은 또한 FcRn에 결합하는 항체 및 예를 들면 자가면역 질환을 앓고 있는 환자로부터의 생검 또는 세포와 같은 샘플에서 실험실내 또는 예를 들면 피험체를 영상화함으로써 생체내 FcRn을 검출하기 위한 FcRn 결합 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도와 같은 진단학적 용도에 대한 설명서를 포함하는 키트를 특징으로 한다. 키트는 적어도 하나의 추가의 시약, 예컨대 표지 또는 추가의 진단학적 제제를 추가로 포함할 수 있다. 생체내 용도를 위해, 약제학적 조성물로서 항체를 제제화할 수 있다.
본 발명은 하기 실시예에 의해 추가로 예시되어 있고, 이는 어떠한 방식으로든 추가로 제한적인 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 명세서에 걸쳐 인용된 모든 참조문헌(문헌 참조문헌, 등록 특허, 공개 특허 출원 및 계류중인 특허 출원 포함)의 전체 내용은 특히 하기 언급된 교시를 위해 참조문헌으로 본 명세서에 명확히 포함된다.
실시예 1: DX2504 및 이의 시스테인 돌연변이체
DX-2504 항-FcRn 항체의 경쇄는 CDR3의 제1 위치에서 짝을 짖지 않은 시스테인을 갖는다. 이 시스테인은 경쇄의 FR1에서 시스테인과 짝을 지은 FR3에서의 시스테인에 인접한다. 본 발명자들은 CDR3에서의 시스테인을 세린 또는 알라닌으로 대체한 2개의 돌연변이체를 구성하였다. (하기 및 또한 도 9 참조).
돌연변이체
1) 532A-X53-C02: cys 대 ser 돌연변이체
2) 532A-X54-B03: cys 대 ala 돌연변이체
DX-2504(서열 번호 8), 532A-X53-C02(서열 번호 10), 및 532A-X54-B03(서열 번호 11)의 경쇄의 서열 정렬
Figure 112013119217010-pct00018
Figure 112013119217010-pct00019
DX-2504, 532A-X53-C02 및 532-X54-B03의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 분석
UV 검출을 갖는 워터스(Waters) 2695 HPLC 시스템 상에 0.2M 인산나트륨(pH 6.9)에서 평형화된 토쇼(Tosoh) G3000 SWXL 컬럼에 걸쳐 50㎍ 단백질을 주사하여 항체 순도를 평가하였다. 적분 피크 면적을 표 1에서 단량체(즉, 온전한 항체)(%), 고분자량 집합체(HMW)(%) 및 저분자중 종(LMW)(%)로 표시하였다. (또한 도 1 참조).
Figure 112013119217010-pct00020
DX-2504, 532A-X53-C02 및 532-X54-B03의 SDS-PAGE 분석
항체를 50mM N-에틸말레이미드, 이어서 SDS-PAGE 샘플 완충제로 처리하고, 겔 아티팩트를 생성시킬 수 있는 유리 티올을 차단하기 위해 72℃에서 10분 동안 가열하였다. 항체(4㎍)를 4 내지 12% 구배 NuPAGE 겔로 로딩하고, UVP 시스템을 이용하여 농도계 분석 전에 심플리 블루 세이프 스테인(Simply Blue Safe Stain)으로 염색하였다(표 2). (또한 도 2 참조)
Figure 112013119217010-pct00021
DX-2504, 532A-X53-C02 및 532-X54-B03의 온도 안정성
37℃에서 1달 동안 DX-2504, 532A-X53-C02 및 532-X54-B03_ 샘플을 항온처리하였다. 분석 SEC를 사용하여 분석에 대해 상이한 시점에서 샘플을 취했다. DX-2504 및 시스테인 돌연변이체의 온도 안정성이 단량체 변화(%)에 기초하여 제시된다. (도 3 참조).
DX-2504, 532A-X53-C02 및 532-X54-B03의 pH 안정성
실온에서 1달 동안 상이한 pH 조건으로 DX-2504, 532A-X53-C02 및 532-X54-B03 샘플을 항온처리하였다. 분석 SEC를 사용하여 분석에 대해 상이한 시점에서 샘플을 취했다. DX-2504 및 시스테인 돌연변이체의 pH 안정성이 단량체 변화(%)에 기초하여 제시된다. (도 4 참조).
pH 8.3에서의 DX-2504, 532A-X53-C02 및 532-X54-B03의 안정성
표 1 위의 문단에 기재된 SEC를 이용하여 안정성을 평가하였다. pH 8.3에서의 항체의 SEC 분석은 시험된 pH 조건에서 DX-2504에 걸쳐 시스테인 돌연변이체의 개선된 안정성을 나타내므로 나타났다. (도 5 참조).
DTNB에 의한 티올 적정
37℃에서 0.5시간 동안 변성 시약 6M 구아니딘 하이드로클로라이드의 존재 또는 부재 하에 10μΜ 항체를 10mM DTNB(엘만 시약, 또는 5,5'-다이티오-바이스(2-나이트로벤조산))와 반응시켜 정제된 항체 용액에서의 유리 시스테인 티올의 존재를 평가한 후, 412㎚에서의 반응의 흡광도(ε = 14,100M-1㎝-1)를 판독하였다. 티올의 농도를 항체의 농도로 나눠 티올의 몰/mAb의 몰을 얻었다. (하기 표 3 참조).
Figure 112013119217010-pct00022
화학 변성에 대한 DX-2504, 532A-X53-C02 및 532-X54-B03의 안정성.
화학 변성제 구아니딘 하이드로클로라이드(GuHCl) 농도의 함수로서 자체 형광을 모니터링함으로써 DX-2504 및 시스테인 돌연변이체의 단백질 안정성을 측정하고, GuHCl 1 내지 8M의 상이한 농도로부터 1㎎/㎕의 각각의 항체 생성물을 제조하였다. 형광을 측정하고 GuHCl 농도의 함수로서 360/330의 강도비를 작도하였다. 시스테인 돌연변이체는 변성제 시약에 대해 구조 입체형태 변화에 대한 더 우수한 안정성을 나타낸다. (도 6 참조).
부동화된 DX-2504, 532A-X53-C02 및 532-X54-B03과의 hFcRn의 상호작용의 표면 플라스몬 공명(SPR 또는 바이아코어) 동력학 분석.
바이아코어 3000을 사용하여 SPR 측정을 수행하였다. 약 220RU의 부동화 밀도에서 CM5 센서 칩 상에 아민 커플링에 의해 DX-2504, 532A-X53-C02 및 532-X54-B03을 부동화하였다. FcRn 분석물과의 DX-2504 상호작용의 동력학 매개변수를 측정하기 위해, 15분 해리 상으로 50ℓ/분에서 5분 동안 FcRn의 100nM으로부터 제조된 2배 연속 희석액을 2회 주사하였다. 75ℓ/분의 유속으로 10mM 글라이신(pH 1.5)의 30초 펄스, 이어서 완충제의 15초 펄스로 센서 칩 표면을 재생성하였다. 실행 완충제로서 HBS-P를 사용하여 25℃에서 측정을 수행하였다. 기준 유세포를 활성화하고 가짜 아민 커플링 반응에서 차단하였다. 비아에벌루션(Biaevalution) v.4.1 소프트웨어를 사용하여 데이터를 1:1 결합 모델로 맞췄다. (표 4, 도 7 및 도 8 참조).
Figure 112013119217010-pct00023
실시예 2: DX-2504의 결실 돌연변이체
DX-2504 항-FcRn 항체의 중쇄는 중쇄에서 마지막 위치(C 말단)에서 라이신을 포함한다. 돌연변이체 DX-2507(경쇄 서열 번호 18, 중쇄 서열 번호 19)은 DX-2504 및 DX-2504의 중쇄에서 C 말단 라이신 잔기를 결실시킴으로써 구축되는 돌연변이된 중쇄와 동일한 경쇄를 포함한다. DX-2504 중쇄의 C 말단 단편(서열 번호 20)과 DX-2507 중쇄의 C 말단 단편(서열 번호 21) 사이의 서열 정렬이 하기 도시되어 있다:
Figure 112013119217010-pct00024
사이노몰거스 원숭이에서의 DX-2504 및 DX-2507의 약리학적 프로필 및 약물독성동태 프로필
6마리의 미접촉 수컷 사이노몰거스 원숭이를 각각 3마리의 동물로 이루어지는 2개의 용량 그룹으로 배정하였다. 표 5는 연구 설계의 요약을 제공한다. 모든 동물에게 연구 0일 및 연구 7일에 1회 피하(SC) 주사를 통해 20mg/㎏의 시험 항체를 투약하였다. 그룹 1 동물에게 DX-2504를 투여하고 그룹 2 동물에게 DX-2507을 투여하였다. 0일(투약 전 및 투약 2시간 및 12시간 후), 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일(투약 전 및 투약 2시간 및 12시간 후), 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 17일, 21일, 24일, 28일, 31일 및 35일의 시점에서 모든 동물로부터 혈액을 수집하였다. 정량화된 ELISA 방법(DRD-910-029)을 이용하여 DX-2504 및 DX-2507의 약물독성동태에 대한 혈청 샘플을 분석하였다. 정량화된 ELISA 방법(DRD_910-033)을 이용하여 전체 사이노몰거스 원숭이 IgG 수치를 분석하였다.
Figure 112013119217010-pct00025
2마리의 동물에서 0일 내지 11일에 및 1마리의 동물에서 13일에 투약 후 2시간으로부터 DX-2504 혈청 농도를 검출하였다. 각각의 동물에서 0일 내지 11일, 12일 및 17일에 투약 후 2시간으로부터 DX-2507 혈청 농도를 검출하였다. 이렇게 얻은 결과는 DX-2507의 혈청 농도가 시험 동물에서 DX-2504보다 높다는 것을 나타내고, DX-2507이 DX-2504보다 생체내 더 안정하다는 것을 나타낸다. 도 13.
DX-2504 및 DX-2507 둘 다의 투여 후 사이노몰거스 원숭이 IgG 수치는 감소하였다(도 14). 0일 용량의 투여 후, 평균 전체 IgG 수치를 각각 DX-2504 및 DX- 2507 용량 그룹에서의 투약전 기준선 수준의 42% 및 33%로 감소시켰다. 7일 용량 전에, 평균 전체 IgG 수치를 동일한 치료 그룹에서 투약전 기준선 수준의 45% 및 37%로 증가시켰다. 7일 용량의 투여 후, 평균 전체 IgG 수치를 DX-2504 그룹에서 투약전 기준선 값의 42% 및 DX-2507 그룹에서 투약전 기준선 값의 30%로 감소시켰다. 전체 IgG 수치를 DX-2504 치료 동물에서 13일에 및 DX-2507 치료 동물에서 21일에 투약전 기준선 값으로 감소시켰다.
DX-2504 및 DX-2507에 대한 평균 약물독성동태 매개변수가 표 6에 요약되어 있다.
Figure 112013119217010-pct00026
DX-2504 및 DX-2507 둘 다에 대한 약물독성동태 매개변수는 0일 및 7일에 실질적으로 동일하였다. DX-2507의 전체 노출은 DX-2504에 관찰된 것보다 컸다. 0일 또는 7일에 DX-2507에 대한 평균 최대 농도(Cmax) 및 혈장/혈청 농도-시간 곡선(AUClast) 값은 DX-2504에 대해 계산된 상응하는 값보다 2배 내지 3배였다. 또한, DX-2504에 대한 상응하는 평균 겉보기 청소률(CL/F) 및 분포 용적(Vz/F) 값은 DX-2507보다 2배 내지 12배였다.
등가물
상기 기재된 명세서는 당해 분야의 당업자가 본 발명을 실행하도록 하기에 충분한 것으로 고려된다. 본 발명의 일 양태 및 다른 기능적 등가 실시양태의 단일 예시가 본 발명의 범위 내에 있으므로, 본 발명은 제공된 예에 의해 범위가 제한되지 않는다. 본 명세서에 도시되고 기재된 본 발명의 다양한 변형이 또한 상기 명세서로부터 당해 분야의 당업자에게 명확하고, 특허청구범위 내에 포함된다. 본 발명의 이점 및 목적은 본 발명의 각각의 실시양태에 의해 반드시 포함되는 것은 아니다.
본원에 걸쳐 인용된 모든 참조문헌, 특허 및 공개 특허 출원의 내용은 특히 본 명세서에 인용된 용도 또는 대상에 대해 그 전문이 본 명세서에서 참조문헌으로 포함된다.
SEQUENCE LISTING <110> Dyax Corp. <120> Fc RECEPTOR BINDING PROTEINS <130> WO2012/167039 <140> PCT/US2012/040409 <141> 2012-06-01 <150> US 61/492,617 <151> 2011-06-02 <150> US 61/498,266 <151> 2011-06-17 <160> 26 <170> PatentIn version 2.0 <210> 1 <211> 365 <212> PRT <213> H. sapiens <400> 1 Met Gly Val Pro Arg Pro Gln Pro Trp Ala Leu Gly Leu Leu Leu Phe 1 5 10 15 Leu Leu Pro Gly Ser Leu Gly Ala Glu Ser His Leu Ser Leu Leu Tyr 20 25 30 His Leu Thr Ala Val Ser Ser Pro Ala Pro Gly Thr Pro Ala Phe Trp 35 40 45 Val Ser Gly Trp Leu Gly Pro Gln Gln Tyr Leu Ser Tyr Asn Ser Leu 50 55 60 Arg Gly Glu Ala Glu Pro Cys Gly Ala Trp Val Trp Glu Asn Gln Val 65 70 75 80 Ser Trp Tyr Trp Glu Lys Glu Thr Thr Asp Leu Arg Ile Lys Glu Lys 85 90 95 Leu Phe Leu Glu Ala Phe Lys Ala Leu Gly Gly Lys Gly Pro Tyr Thr 100 105 110 Leu Gln Gly Leu Leu Gly Cys Glu Leu Gly Pro Asp Asn Thr Ser Val 115 120 125 Pro Thr Ala Lys Phe Ala Leu Asn Gly Glu Glu Phe Met Asn Phe Asp 130 135 140 Leu Lys Gln Gly Thr Trp Gly Gly Asp Trp Pro Glu Ala Leu Ala Ile 145 150 155 160 Ser Gln Arg Trp Gln Gln Gln Asp Lys Ala Ala Asn Lys Glu Leu Thr 165 170 175 Phe Leu Leu Phe Ser Cys Pro His Arg Leu Arg Glu His Leu Glu Arg 180 185 190 Gly Arg Gly Asn Leu Glu Trp Lys Glu Pro Pro Ser Met Arg Leu Lys 195 200 205 Ala Arg Pro Ser Ser Pro Gly Phe Ser Val Leu Thr Cys Ser Ala Phe 210 215 220 Ser Phe Tyr Pro Pro Glu Leu Gln Leu Arg Phe Leu Arg Asn Gly Leu 225 230 235 240 Ala Ala Gly Thr Gly Gln Gly Asp Phe Gly Pro Asn Ser Asp Gly Ser 245 250 255 Phe His Ala Ser Ser Ser Leu Thr Val Lys Ser Gly Asp Glu His His 260 265 270 Tyr Cys Cys Ile Val Gln His Ala Gly Leu Ala Gln Pro Leu Arg Val 275 280 285 Glu Leu Glu Ser Pro Ala Lys Ser Ser Val Leu Val Val Gly Ile Val 290 295 300 Ile Gly Val Leu Leu Leu Thr Ala Ala Ala Val Gly Gly Ala Leu Leu 305 310 315 320 Trp Arg Arg Met Arg Ser Gly Leu Pro Ala Pro Trp Ile Ser Leu Arg 325 330 335 Gly Asp Asp Thr Gly Val Leu Leu Pro Thr Pro Gly Glu Ala Gln Asp 340 345 350 Ala Asp Leu Lys Asp Val Asn Val Ile Pro Ala Thr Ala 355 360 365 <210> 2 <211> 366 <212> PRT <213> R. 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Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Ala Ile Gly Asp Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu 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Claims (44)

  1. 인간 FcRn에 결합하는 단리된 항체로서,
    상기 단리된 항체는 VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 구역(VL); 및 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 구역(VH)을 포함하되,
    상기 VL CDR1은 TGTGSDVGSYNLVS(서열 번호 14)의 아미노산 서열을 포함하고,
    상기 VL CDR2는 GDSQRPS(서열 번호 15)의 아미노산 서열을 포함하며,
    상기 VL CDR3은 SSYAGSGIYV(서열 번호 12) 또는 ASYAGSGIYV(서열 번호 13)의 아미노산 서열을 포함하고,
    상기 VH CDR1은 EYAMG(서열 번호 22)의 아미노산 서열을 포함하며,
    상기 VH CDR2는 SIGSSGGQTKYADSVKG(서열 번호 23)의 아미노산 서열을 포함하고,
    상기 VH CDR3은 LAIGDSY(서열 번호 24)의 아미노산 서열을 포함하는,
    단리된 항체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항체는 서열 번호 17의 C 말단 라이신 잔기에 상응하는 위치에서 결실을 갖는 중쇄 불변 구역을 추가로 포함하는 것인, 단리된 항체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 단리된 항체의 VL은 서열 번호 10 또는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 단리된 항체.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 단리된 항체의 VH는 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 단리된 항체.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체는 10nM 미만의 해리 상수(KD)로 인간 FcRn에 결합하는 것인, 단리된 항체.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체는 전장 항체인 것인, 단리된 항체.
  7. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체는 인간 또는 인간화 항체이거나, 인간에서 비면역원성인 것인, 단리된 항체.
  8. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체는 인간 항체 프레임워크(framework) 구역을 포함하는 것인, 단리된 항체.
  9. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체는 쥣과 항체인 것인, 단리된 항체.
  10. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체는 키메라인 것인, 단리된 항체.
  11. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체는 Fab, F(ab)'2, Fv 및 scFv로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 단리된 항체.
  12. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체는 단일클론 항체인 것인, 단리된 항체.
  13. 제1항 또는 제2항의 항체를 코딩하는 서열을 포함하는 단리된 핵산.
  14. 제13항의 핵산을 포함하는 벡터.
  15. 제14항의 벡터를 포함하는 단리된 숙주 세포.
  16. 샘플에서 FcRn을 검출하는 방법으로서, 상기 방법은
    상기 샘플을 제1항 또는 제2항의 항체와 접촉시키는 단계 및
    상기 항체와, 존재하는 경우, 상기 FcRn 사이의 상호작용을 검출하는 단계를 포함하는 것인, 샘플에서 FcRn을 검출하는 방법.
  17. 제1항 또는 제2항에 있어서, 피험체에서 FcRn을 검출하기 위한 것인, 단리된 항체.
  18. FcRn 활성을 조절하는 방법으로서, 상기 방법은
    FcRn을 제1항 또는 제2항의 항체와 접촉시켜 상기 FcRn의 활성을 조절하는 접촉 단계를 포함하며,
    상기 접촉 단계를 실험실내(in vitro)에서 수행하는 것인, FcRn 활성을 조절하는 방법.
  19. 피험체에서 자가면역 질환을 치료하기 위한 약제학적 조성물로서, 상기 약제학적 조성물은 제1항 또는 제2항의 항체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
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Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3348573B1 (en) * 2008-04-25 2020-04-22 Dyax Corp. Method of producing antibodies against fcrn and use thereof
CN103619353B (zh) 2011-06-02 2016-01-06 戴埃克斯有限公司 Fc受体结合蛋白
GB201208370D0 (en) 2012-05-14 2012-06-27 Ucb Pharma Sa Antibodies
GB201320066D0 (en) * 2013-11-13 2013-12-25 Ucb Pharma Sa Biological products
WO2015081073A2 (en) 2013-11-26 2015-06-04 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Compositions and methods for modulating an immune response
RS64542B1 (sr) 2014-04-30 2023-09-29 Hanall Biopharma Co Ltd Vezivanje antitela za fcrn za lečenje autoimunih bolesti
US10336825B2 (en) 2014-04-30 2019-07-02 Hanall Biopharma Co., Ltd. Antibody binding to FcRn for treating autoimmune diseases
SI3250610T1 (sl) 2015-01-30 2023-11-30 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Protitelesa fcrn in načini njihove uporabe
EP3448429B1 (en) * 2016-04-25 2021-01-13 Syntimmune Inc. Humanized affinity matured anti-fcrn antibodies
SG11201900813RA (en) 2016-07-29 2019-02-27 Momenta Pharmaceuticals Inc Fcrn antibodies and methods of use thereof
KR20190089941A (ko) 2016-12-01 2019-07-31 사빅 글로벌 테크놀러지스 비.브이. 하이브리드 복합 뒷문
US11773168B2 (en) * 2017-12-13 2023-10-03 Momenta Pharmaceuticals, Inc. FcRn antibodies and methods of use thereof
CA3106670A1 (en) * 2018-07-20 2020-01-23 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Fcrn antibody compositions
CN114867745B (zh) * 2019-07-23 2024-01-12 上海科技大学 Asic1通道拮抗剂抗体
CN115968302A (zh) 2020-06-17 2023-04-14 宾夕法尼亚州大学信托人 用于治疗基因疗法患者的组合物和方法
US11926669B2 (en) 2022-05-30 2024-03-12 Hanall Biopharma Co., Ltd. Anti-FcRn antibody or antigen binding fragment thereof with improved stability

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009131702A2 (en) * 2008-04-25 2009-10-29 Dyax Corp. Antibodies against fcrn and use thereof

Family Cites Families (65)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3940475A (en) 1970-06-11 1976-02-24 Biological Developments, Inc. Radioimmune method of assaying quantitatively for a hapten
US3867517A (en) 1971-12-21 1975-02-18 Abbott Lab Direct radioimmunoassay for antigens and their antibodies
US4289747A (en) 1978-12-26 1981-09-15 E-Y Laboratories, Inc. Immunological determination using lectin
DE2901218A1 (de) 1979-01-13 1980-07-17 Byk Gulden Lomberg Chem Fab Ung von theophyllin
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US5179017A (en) 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4376110A (en) 1980-08-04 1983-03-08 Hybritech, Incorporated Immunometric assays using monoclonal antibodies
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US5374548A (en) 1986-05-02 1994-12-20 Genentech, Inc. Methods and compositions for the attachment of proteins to liposomes using a glycophospholipid anchor
MX9203291A (es) 1985-06-26 1992-08-01 Liposome Co Inc Metodo para acoplamiento de liposomas.
US4868103A (en) 1986-02-19 1989-09-19 Enzo Biochem, Inc. Analyte detection by means of energy transfer
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
ES2035317T5 (es) 1987-11-09 1998-03-16 Becton Dickinson Co Metodo para analizar celulas hematopoyeticas en una muestra.
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
DE68927933T2 (de) 1988-09-02 1997-08-14 Dyax Corp Herstellung und auswahl von rekombinantproteinen mit verschiedenen bindestellen
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5030002A (en) 1989-08-11 1991-07-09 Becton, Dickinson And Company Method and apparatus for sorting particles with a moving catcher tube
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
JPH06508511A (ja) 1990-07-10 1994-09-29 ケンブリッジ　アンティボディー　テクノロジー　リミティド 特異的な結合ペアーの構成員の製造方法
IE76732B1 (en) 1990-08-07 1997-11-05 Becton Dickinson Co One step test for absolute counts
US5179107A (en) 1990-09-07 1993-01-12 Schering Corporation Antiviral quinolinone compounds
DE69129154T2 (de) 1990-12-03 1998-08-20 Genentech, Inc., South San Francisco, Calif. Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
US5370901A (en) 1991-02-15 1994-12-06 Bracco International B.V. Compositions for increasing the image contrast in diagnostic investigations of the digestive tract of patients
EP0575485A1 (en) 1991-03-01 1993-12-29 Dyax Corp. Process for the development of binding mini-proteins
JP3672306B2 (ja) 1991-04-10 2005-07-20 ザ スクリップス リサーチ インスティテュート ファージミドを使用するヘテロ二量体受容体ライブラリー
AU675916B2 (en) 1991-06-14 1997-02-27 Genentech Inc. Method for making humanized antibodies
DE4122599C2 (de) 1991-07-08 1993-11-11 Deutsches Krebsforsch Phagemid zum Screenen von Antikörpern
CA2087413A1 (en) 1992-01-17 1993-07-18 Joseph R. Lakowicz Fluorescent energy transfer immunoassay
SE9201984D0 (sv) 1992-06-29 1992-06-29 Pharmacia Biosensor Ab Improvement in optical assays
US5827690A (en) 1993-12-20 1998-10-27 Genzyme Transgenics Corporatiion Transgenic production of antibodies in milk
US6086875A (en) 1995-01-17 2000-07-11 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of immunogens
US6030613A (en) 1995-01-17 2000-02-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
ATE390933T1 (de) 1995-04-27 2008-04-15 Amgen Fremont Inc Aus immunisierten xenomäusen stammende menschliche antikörper gegen il-8
AU2466895A (en) 1995-04-28 1996-11-18 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
AU5702298A (en) 1996-12-03 1998-06-29 Abgenix, Inc. Transgenic mammals having human Ig loci including plural VH and VK regions nd antibodies produced therefrom
CN1238366C (zh) 1997-01-21 2006-01-25 综合医院公司 利用rna－蛋白融合体筛选蛋白
DE69833755T2 (de) 1997-05-21 2006-12-28 Biovation Ltd. Verfahren zur herstellung von nicht-immunogenen proteinen
JP2002510505A (ja) 1998-04-03 2002-04-09 フィロス インク． 位置特定可能な蛋白質アレイ
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
CN1202128C (zh) 1998-12-08 2005-05-18 拜奥威神有限公司 修饰蛋白的免疫原性
US6472147B1 (en) 1999-05-25 2002-10-29 The Scripps Research Institute Methods for display of heterodimeric proteins on filamentous phage using pVII and pIX, compositions, vectors and combinatorial libraries
GB9928787D0 (en) 1999-12-03 2000-02-02 Medical Res Council Direct screening method
US6960178B2 (en) 2000-02-02 2005-11-01 Xepmed, Inc. Apparatus for enhanced plasmapheresis and methods thereof
US6992234B2 (en) 2000-11-06 2006-01-31 The Jackson Laboratory FcRn-based therapeutics for the treatment of auto-immune disorders
PT1438400E (pt) 2001-10-01 2009-09-10 Dyax Corp Vectores de apresentação eucarióticos de cadeias múltiplas e suas utilizações
WO2003035842A2 (en) 2001-10-24 2003-05-01 Dyax Corporation Hybridization control of sequence variation
US7498414B2 (en) 2002-03-04 2009-03-03 Imclone Systems Incorporated Human antibodies specific to KDR and uses thereof
US7662928B2 (en) 2003-08-08 2010-02-16 The Research Foundation Of State University Of New York Anti-FcRn antibodies for treatment of auto/allo immune conditions
CA2534973A1 (en) 2003-08-08 2005-02-17 The Research Foundation Of State University Of New York Anti-fcrn antibodies for treatment of auto/allo immune conditions
JP2008538919A (ja) * 2005-04-29 2008-11-13 ザ ジャクソン ラボラトリー ＦｃＲｎ抗体およびその使用
WO2007087289A2 (en) 2006-01-25 2007-08-02 The Research Foundation Of State University Of New York Anti-fcrn antibodies for treatement of auto/allo immune conditions
US20070181136A1 (en) 2006-02-08 2007-08-09 Gelb Michael L Oral appliance
US8359965B2 (en) 2007-09-17 2013-01-29 Oxford J Craig Apparatus and method for broad spectrum radiation attenuation
ES2687808T3 (es) 2007-09-26 2018-10-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Región constante de anticuerpo modificado
AR068723A1 (es) * 2007-10-05 2009-12-02 Glaxo Group Ltd Proteina que se une a antigenos que se une a il-23 humana y sus usos
US8537763B2 (en) 2008-06-30 2013-09-17 Motorola Mobility Llc Frame allocation to support legacy wireless communication protocols on uplink transmission
JP5773650B2 (ja) * 2008-07-16 2015-09-02 株式会社医学生物学研究所 抗ヒトｃｌｃｐ１抗体とその用途
UY32341A (es) * 2008-12-19 2010-07-30 Glaxo Group Ltd Proteínas de unión antígeno novedosas
JP5717624B2 (ja) 2009-03-19 2015-05-13 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
CN103619353B (zh) 2011-06-02 2016-01-06 戴埃克斯有限公司 Fc受体结合蛋白
KR20200014379A (ko) 2017-06-05 2020-02-10 얀센 바이오테크 인코포레이티드 비대칭 ch2-ch3 영역 돌연변이를 갖는 조작된 다중특이성 항체 및 다른 다량체 단백질
BR112020025001A2 (pt) 2018-06-08 2021-03-23 Argenx Bvba composições e métodos para o tratamento da trombocitopenia imune

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009131702A2 (en) * 2008-04-25 2009-10-29 Dyax Corp. Antibodies against fcrn and use thereof

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