KR102012596B1

KR102012596B1 - 비교유전체 방법을 이용한 한우 및 홀스테인 품종 판별용 분자 마커 조성물

Info

Publication number: KR102012596B1
Application number: KR1020180096852A
Authority: KR
Inventors: 한규동; 박장호; 문세영; 신원석; 오동엽
Original assignee: 단국대학교 천안캠퍼스 산학협력단
Priority date: 2018-08-20
Filing date: 2018-08-20
Publication date: 2019-10-21

Abstract

본 발명은 비교유전체 방법을 이용한 한우 및 홀스테인 품종 판별용 분자 마커 조성물에 대한 것으로서, 이전의 연구보다 더 간편하고 짧은 시간 내에 한우와 홀스테인을 구별해 낼 수 있는 마커(marker)를 찾기 위해 최신 기법인 NGS를 이용하였다. 기존의 연구는 특정 유전자 내에서 단일 염기 다형성 분석 또는 복수체변이에 대한 연구가 대부분이었다면, 본 발명은 NGS를 이용하여 한우와 홀스테인의 전유전체를 비교함으로써 더 확실한 구조적 변이를 발견하는데 목적을 두었다. 또한, 본 발명의 NGS를 이용한 품종 판별 분자 마커 개발 방법을 공유함으로써 소 뿐만 아니라 다른 종(재래돼지 등)에서도 품종 판별 분자 마커 개발이 가능함으로, 축산 과학 연구를 위한 생물정보학적 기법을 제공하고 발전시킬 수 있는 계기가 될 수 있을 것이라 생각된다. 한편, 비교유전체 방법을 이용한 분자판별 방법은 많은 인력과 많은 비용이 드는 다른 분자 판별 방식보다 판별 검사 비용을 절감하고 시간과 인력 낭비를 방지할 수 있다.

Description

비교유전체 방법을 이용한 한우 및 홀스테인 품종 판별용 분자 마커 조성물{Molecular biomarker composition for identification of Korean native cattle and Holstein breeds through comparative genomics}

본 발명은 비교유전체 방법을 이용한 한우 및 홀스테인 품종 판별용 분자 마커 조성물에 대한 것이다.

소(Bos taurus)는 초식동물로, 기원전 7000 ~ 6000년경부터 중앙 아시아와 서아시아에서 사람에게 사육되기 시작하였고, 점차 그 영역이 넓어진 것으로 추정된다. 소는 과거에 주로 농경동물이나 이동수단으로써 이용되었으나, 현재에는 산업의 발달로 인하여 이러한 용도는 거의 사라지고 고기나 우유 등의 유제품을 생산하여 경제적으로 가치가 높아 세계 각지에서 사육되고 있다. 소는 육우로써 가치가 있는 품종, 우유 및 유제품 생산에 가치가 있는 품종 등 품종에 따라 서로 다른 형질을 가지고 있기 때문에, 국내외 많은 연구기관에서 우수한 품종을 보존하고 형질의 품종 개량을 위해 많은 노력을 하고 있는 추세이다.

이전까지의 연구에서 대부분의 품종 구별을 위한 유전학적 실험 방법으로는 단일 염기 다형성(Single Nucleotide Polymorphism; SNP)에 의존한 전유전체 Genotyping, 미소부수체(Microsattellite) 또는 복수체변이(copy number variation) 마커 개발에 노력을 기울이고 있다. 하지만, 이와 같은 방법으로는 개체별 다양한 유전적 변이로 인해 정확한 분자적 마커로써의 역할을 기대하기 힘들었다.

포유동물의 유전체 내에서 DNA 이중가닥 절단은 위험한 형태의 DNA 손상 중에 하나이다. 수선되지 않은 DNA 이중가닥 절단은 세포 사멸이나 노화를 일으키고 잘못 수선된 DNA 이중가닥 절단은 유전체 불안정성과 발암을 일으킬 수 있다. 일반적으로 DNA 이중가닥 절단이 발생하였을 때, 상동재조합(Homologous Recombination, HR)과 비상동말단연결(Non-Homologous End Joining, NHEJ)이라는 두 가지 기작에 의하여 DNA 이중가닥 절단의 복구가 진행된다. 상동재조합은 DNA 이중가닥 절단이 발생하였을 때, 상동성을 가진 서열을 주형가닥으로 이용하여 DNA 이중가닥 수선을 진행한다. 이와 달리, 비상동말단연결은 주로 1~4 bp 정도의 Microhomology라는 짧은 상동 DNA 서열을 이용하여 DNA 수선을 진행하기 때문에 비상동이라고 한다. 대부분 Microhomology는 이중가닥절단의 단일가닥 돌출부에 위치하고 있으며 돌출부가 정확히 맞아떨어질 경우, DNA 손상 부분을 수선한다. 비상동말단연결은 DNA를 수선할 때 상동성을 가진 주형가닥을 이용하지 않기 때문에 서열의 결실 또는 삽입이 발생하는 부정확한 수선이 발생할 수 있다. 오랜 기간 동안 한반도에 고립되어 서식한 한우의 경우 한반도의 기후와 환경에 적응하면서 발생한 DNA 손상을 수선하는 과정에서 외국 소 품종과 차이가 나는 변화를 유전체 내에서 겪었을 가능성이 높다.

현재 국내 고유 농/축산물 시장에서 한우는 외국 소 품종보다 육우로써 개량화를 시작한지 오래되지 않았음에도 불구하고 육우로서의 품질이 좋다. 특히, 마블링의 발달로 인한 한우 특유의 고소한 맛과 풍미가 뛰어나기 때문에 수요가 꾸준히 상승하고 있으며, 이러한 특성 때문에 외국 소 품종에 비해 가격이 높아 경제성이 높다. 또한, 생활수준의 향상과 식생활의 서구화로 인하여 고기의 소비가 전체적으로 증가하고 있으며, 한우의 소비 또한 점차 증가하는 추세이다.

결론적으로, 한우는 외국 소 품종과 비교되는 경쟁력 확보가 필수적이며, 축산 고유 유전자원 식별 방법, 종 보존, 우수 품종 개량을 위한 연구가 매우 요구되는 상황이다. 하지만, 기존의 품종 판별 방법은 단일 유전자에 제한된 염기서열 변이 분석으로 재현성이 매우 떨어져 현재 분자 마커의 이용 빈도가 매우 감소한 상태이며 축산 농가에 도입이 현저히 낮은 실정이다.

한국등록특허 제10-1823209호(2018.01.23 등록)

본 발명의 목적은 소 품종 판별용 DNA 마커 조성물 및 이를 이용한 소 품종 판별 방법을 제공하는데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1 또는 서열번호 2로 표시되는 소 품종 판별용 DNA 마커 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 서열번호 3 및 서열번호 4로 표시되는 소 품종 판별용 프라이머 세트를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 프라이머 세트를 포함하는 소 품종 판별용 키트를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 프라이머 세트를 이용한 소 품종 판별 방법을 제공한다.

도 1은 본 발명의 한우, 홀스테인 품종 판별을 위한 전체적인 실험 모식도를 나타낸다.
도 2는 국내 대표적인 품종인 한우와 젖소의 대표 품종인 홀스테인 내의 유전적 차이 및 다형성 패턴을 보여주는 결과이다.
도 3은 한우 특이적 유전체 삭제 변이를 나타낸다.

이에, 본 발명자들은 University of Maryland에서 구축한 소 참조 유전체(University of Maryland Bos_taurus_UMD_3.1.1) 지도와 미국 국립생물정보센터(National Center of Biotechnology Information : NCBI)에서 제공하는 Open source data인 Holstein 2두의 유전체 데이터를 바탕으로 한우 Re-sequencing data 12두와 다음과 같은 과정의 생명정보학적 분석을 활용하여 한우에만 특이적으로 삭제되어 있는 영역을 발견했다.

1. IlluQCPRLL.pl script of NGSQCToolkit(ver.2.3.3)을 이용하여 Q20 base content가 70% 이하인 DNA read는 걸러냈다. BWA-MEM algorithm of BWA(version 0.7.15)를 이용하여 reference data인 Bos taurus_UMD_3.1.1 유전체 지도에 각 각의 소 품종을 mapping 하였다.

2. SAMtools(ver 0.1.19)를 이용하여 sorting and de-duplicating을 진행하였다.

3. 마지막으로 Breakdancer(version 1.1)를 이용하여 Structure variation(SV)를 detection 하였고, Parsing Breakdancer result를 이용하여 SV collection을 진행하였다.

생명정보학적 분석을 통해 나타난 data를 바탕으로 프라이머를 제작하여 PCR(Polymerase Chain Reaction) 증폭을 진행하였고, 젤 전기영동을 통해 실제로 발생한 한우와 홀스테인을 구별하는 구조적 변이 후보군을 확인하였다. 한우와 홀스테인을 구별하는 확인된 구조적 변이 후보군을 생어 시퀀싱을 통하여 한우와 홀스테인 두 가지 소 품종의 유전적 차이를 확인하고 본 발명을 완성하였다. 따라서 본 발명은 회귀변이가 일어나지 않는 비상동말단연결(Non-Homologous End Joining, NHEJ)에 의한 한우 내 특이적인 삭제 영역을 간단한 중합효소연쇄반응 (PCR)을 통해 동정함으로써 한우와 홀스테인 육우를 식별 가능하다.

본 발명은 서열번호 1 또는 서열번호 2로 표시되는 소 품종 판별용 DNA 마커 조성물을 제공한다.

상세하게는, 상기 소 품종은 한우 또는 홀스테인 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

서열번호 1은 한우에서 증폭되는 310bp의 DNA 마커 염기서열이고, 서열번호 2는 홀스테인에서 증폭되는 680bp의 DNA 마커 염기서열이다.

본 발명에 있어서, “마커(marker)”는 유전적으로 불특정 연관된 유전자좌를 동정할 때 참고점으로 사용되는 염기서열을 말한다. 이 용어는 또한 마커 서열을 증폭할 수 있는 프라이머 세트로 사용되는 핵산과 같은 마커 서열에 상보적인 핵산 서열에도 적용된다. 분자마커(molecular marker)의 유전자 지도상의 위치는 유전자좌(genetic locus)로 일컬어진다.

본 발명에 있어서, "분자 마커", "DNA 마커" 또는 "DNA 바이오마커"는 소의 성장 환경이나 성장 시기에 영향을 받지 않고 신속하게 품종을 구별할 수 있으므로 유용하게 사용될 수 있다. 분자 마커 또는 DNA 마커는 유전현상의 본질인 DNA의 염기서열 차이를 대상으로 개체간 다형성(polymorphism)을 나타내는 방법으로, 주로 반복 단순 염기서열로 이루어진 마이크로새털라이트(microsatellite)나 유전자 염기 서열을 이용한 마커 또는 RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism) 프로브나 SCAR(Sequence Characterised Amplified Region) 마커가 이용되고 있다.

본 발명은 서열번호 3 및 서열번호 4로 표시되는 소 품종 판별용 프라이머 세트를 제공한다. 서열번호 3의 프라이머는 5'-CACCACTGTTCCTCTACTAC-3'이고, 서열번호 4의 프라이머는 5'-CAGCCATGAAATCAGAAGGC-3'이다.

본 발명에 있어서, "프라이머"는 증폭하려는 핵산 가닥에 상보적인 단일 가닥 올리고뉴클레오티드 서열을 말하며, 프라이머 연장 산물의 합성을 위한 개시점으로서 작용할 수 있다. 상기 프라이머의 길이 및 서열은 연장 산물의 합성을 시작하도록 허용해야 한다. 프라이머의 구체적인 길이 및 서열은 요구되는 DNA 또는 RNA 표적의 복합도(complexity) 뿐만 아니라 온도 및 이온 강도와 같은 프라이머 이용 조건에 의존할 것이다.

본 발명에 있어서, 프라이머로서 이용된 올리고뉴클레오티드는 또한 뉴클레오티드 유사체(analogue), 예를 들면, 포스포로티오에이트(phosphorothioate), 알킬포스포로티오에이트 또는 펩티드 핵산(peptide nucleic acid)를 포함할 수 있거나 또는 삽입 물질(intercalating agent)를 포함할 수 있다.

본 발명은 상기 프라이머 세트를 포함하는 소 품종 판별용 키트를 제공한다. 상세하게는, 상기 소 품종은 한우 또는 홀스테인 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기의 프라이머 세트 이외에, PCR 키트에 포함되는 통상적인 구성성분을 포함할 수 있다. 상기 키트에 포함되는 통상적인 구성성분은 반응완충액, 중합효소, dNTP(dATP, dCTP, dGTP 및 dTTP) 및 Mg2+와 같은 조인자 등일 수 있다. 다양한 DNA 중합효소가 본 발명의 증폭 단계에 이용될 수 있으며, E. coli DNA 중합효소 I의 클레나우 단편, 열안정성 DNA 중합효소 및 박테리오파아지 T7 DNA 중합효소를 포함한다. 바람직하게는, 중합효소는 다양한 박테리아 종으로부터 얻을 수 있는 열안정성 DNA 중합효소이다. 상기 중합효소 대부분은 박테리아 그 자체로부터 분리될 수 있고 또는 상업적으로 구입할 수 있다.

본 발명은 (1) 소에서 DNA를 분리하는 단계; (2) 상기 분리된 DNA를 주형으로 하고, 상기 프라이머 세트를 이용하여 PCR을 수행하는 단계; 및 (3) 상기 PCR 증폭 산물을 분석하는 단계를 포함하는 소 품종 판별 방법을 제공한다.

소에서 DNA를 분리하는 방법은 당업계에 공지된 방법을 이용할 수 있다. 또한, PCR이란 중합효소를 이용하여 표적 핵산에 특이적으로 결합하는 프라이머 세트로부터 표적 핵산을 증폭하는 방법이다. 이러한 PCR 방법은 당업계에 잘 알려져 있으며, 상업적으로 이용가능한 키트를 이용할 수도 있다.

본 발명의 방법은 상기 증폭 산물을 분석하는 단계를 포함한다. 상기 증폭 산물의 검출은 모세관 전기영동, DNA 칩, 젤 전기영동, 방사성 측정, 형광 측정 또는 인광 측정을 통해 수행될 수 있다. 증폭 산물을 검출하는 방법 중의 하나로서,모세관 전기영동을 수행할 수 있다. 모세관 전기영동은 예를 들면, ABI Sequencer를 이용할 수 있다. 또한, 젤 전기영동을 수행할 수 있으며, 젤 전기영동은 증폭 산물의 크기에 따라 아가로스 젤 전기영동 또는 아크릴아미드 젤 전기영동을 이용할 수 있다. 또한, 형광 측정 방법은 프라이머의 5'-말단에 Cy-5 또는 Cy-3를 표지하여 PCR을 수행하면 표적 서열이 검출 가능한 형광 표지 물질로 표지되며, 이렇게 표지된 형광은 형광 측정기를 이용하여 측정할 수 있다. 또한, 방사성 측정 방법은 PCR 수행 시 ³²P 또는 ³⁵S 등과 같은 방사성 동위원소를 PCR 반응액에 첨가하여 증폭 산물을 표지한 후, 방사성 측정기구, 예를 들면, 가이거 계수기(Geiger counter) 또는 액체섬광계수기(liquid scintillation counter)를 이용하여 방사성을 측정할 수 있다.

이하에서는, 본 발명을 한정하지 않는 실시예에 따라 본 발명을 상세히 설명한다. 본 발명의 하기 실시예는 본 발명을 구체화하기 위한 것일 뿐 본 발명의 권리범위를 제한하거나 한정하는 것이 아님은 물론이다. 따라서, 본 발명의 상세한 설명 및 실시예로부터 본 발명이 속하는 기술분야의 전문가가 용이하게 유추할 수 있는 것은 본 발명의 권리범위에 속하는 것으로 해석된다.

< 실험예 >

하기의 실험예들은 본 발명에 따른 각각의 실시예에 공통적으로 적용되는 실험예를 제공하기 위한 것이다.

1. Data 확보( UCSC genome database) 및 유전적 차이 영역 후보군 선별

본 발명은 University of Maryland에서 구축한 소 참조 유전체(University of Maryland Bos_taurus_UMD_3.1.1) 지도와 미국 국립생물정보센터(National Center of Biotechnology Information : NCBI)에서 제공하는 open data source인 Jersey, Angus, Holstein 3가지 소 품종 유전체 지도를 바탕으로 한우 Re-sequencing data 12두를 생물 정보학적 분석을 활용하여 선택적으로 한우에만 특이적으로 존재하는 영역인 마커 후보군들을 분류하였다. 이렇게 얻어진 영역의 양쪽 말단 2 Kb 이내의 측면 염기서열을 얻어냈다.

2. DNA 추출

상기의 과정을 완료한 다음 분자생물학적 분석을 위한 품종별 혈액 샘플(blood sample)들을 확보하여 사용하기 직전까지 4℃ 냉동고에 보관을 하고 각각의 DNA를 추출하였다. DNA 추출을 위해 상온에서 응고된 혈액을 voltexing하여 풀어준 뒤 원심분리기를 사용하여 적혈구와 혈장을 분리하고 혈장만을 채취하여 DNA 추출 kit를 사용하여 DNA를 확보하였다. 각 품종별 25개 이상의 DNA들을 추출한 후, 각 샘플마다 ID를 부여하고, 사용하기 직전까지 -20℃ 냉동고에 보관하게 된다.

3. 품종별 DNA 시료 정량 정성 분석

시료의 정성분석으로 흡광도(260/280 ratio, 260/230 ratio) 측정과 전기영동 패턴을 기준으로 하였고, 흡광도 측정은 Nano-spectrophotometer(Colibri) 기기를 사용하여 제조사의 가이드라인에 따라 진행하였다. 전기영동은 1% 아가로스 젤에 10-20ng 시료와 1 Kb 마커를 함께 로딩한 후, DNA gel imaging system(BioRAD)을 사용하여 이미지를 확인하여 sample의 정성분석을 실시하였다.

정성 분석의 기준은 다음과 같다.

흡광도 260/230 ratio가 1.6 이상, 260/ 280 ratio가 1.8~2.1의 범위의 sample들을 수합, 보관하였고, 젤 전기영동 결과 밴드가 뚜렷하게 보이는 것을 확인하였다. 이후, 정량 분석으로는 Nanodrop을 사용하여 실험에 필요한 정량의 DNA를 확인하였다.

4. 품종별 유전적 차이를 보이는 영역 확인 및 다형성 패턴을 분석하기 위한 프라이머 디자인 및 중합효소연쇄반응

얻어진 측면 염기서열을 기반으로 각각의 유전적 차이를 보이는 영역을 검출 할 수 있는 프라이머를 구축한 뒤 PCR 증폭을 진행하였다. PCR 조건은 다음과 같다: 95℃에서 5분으로 1회, 95℃에서 30초, 56℃에서 40초, 72℃에서 1분으로 35회 수행하였고 72℃에서 2분 수행하였다. 증폭된 PCR 산물을 1% 아가로스 젤을 이용하여 100ng 시료와 1 Kb 마커를 함께 100V에서 30분 동안 수행한 후, DNA gel imaging system(BioRAD)을 사용하여 자외선 빛 하에서 가시화되었다.

5. 생어 ( Sanger ) 염기서열 분석 시스템을 이용한 염기서열 분석

검출된 유전적 영역이 실제로 차이가 있는지 확인하기 위해 생어 염기 서열 분석 방법을 사용하여 각 품종별 유전적 차이를 입증하였다.

< 실시예 > 한우, 홀스테인 품종 내에서 차이가 있는 유전적 영역의 다형성 패턴을 확인

표 1은 비교유전학적 분석 방법을 통해 얻어진 한우와 홀스테인의 유전적 차이를 보이는 영역을 확인하기 위해 제작된 프라이머의 정보, 소 참조 유전체(University of Maryland Bos_taurus_UMD_3.1.1) 내에서의 위치, PCR 조건 및 PCR 산물의 크기를 각각의 품종별로 제시하였다.

해당 영역에 중합효소연쇄반응을 통해 한우와 홀스테인의 유전적 차이를 동정할 수 있으며 이를 통해 품종 구분이 가능하다.

유전체 위치 ( *Bos* *taurus* UMD 3.1.1)		Forward primer		Reverse primer
chr8:32,892,529-32,893,208		CACCACTGTTCCTCTACTAC(서열번호 3)		CAGCCATGAAATCAGAAGGC (서열번호 4)
품종	길이	Tm F	Tm R	Annealing	Extension
한우	Deletion: 310 bp Non-deletion: 680 bp	58.4℃	58.4℃	56℃	1 min
홀스테인	Non-deletion: 680 bp

중합효소연쇄반응 조건은 표 2와 같다.

	온도	시간
Pre denaturation	95℃	5분
Denaturation	95℃	30초	30 cycles
Annealing	56℃	40초
Extension	72℃	1분
Final extension	72℃	2분
Hold	8℃	∞

도 2는 기초 분자 분석 방법인 PCR을 통해 국내 대표적인 소 품종인 한우, 홀스테인 유전체 내에 차이가 나는 영역의 다형성 패턴을 보여주고 있다. 표 1 및 표 2에서 제시한 PCR 조건과 프라이머를 통해 얻어진 PCR 산물의 젤 전기영동 이미지를 통해 실제 품종별 유전적 차이 및 다형성을 통해 소 품종 판별용 분자 마커를 증명한 사진이다.

한우는 중합효소연쇄반응 결과에서 보이는 것과 같이 증폭된 영역(chr8: 32,892,529-32,893,208)에 680bp DNA 사이즈와 한우 특이적으로 370 bp가 삭제된 310 bp DNA 사이즈인 다형성을 보인 반면에, 홀스테인은 reference와 같은 680bp DNA 사이즈를 보인다.

한편, 유전체 내에 차이가 있는 영역을 확인하기 위한 생어 염기서열을 분석하여 품종 특이적 분자 마커를 입증하였다. 염기서열을 분석한 결과 한우 유전체 내에서만 해당 영역에 Deletion이 발생한 것을 확인할 수 있었으며, 홀스테인 유전체는 소 참조 유전체(University of Maryland Bos_taurus_UMD_3.1.1) 지도와 동일하게 나타났다.

<110> Dankook University Cheonan Campus Industry Academic Cooperation Foundation <120> Molecular biomarker composition for identification of Korean native cattle and Holstein breeds through comparative genomics <130> ADP-2018-0252 <160> 4 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 310 <212> DNA <213> Korean native cattle <400> 1 caccactgtt cctctactac tctggttctc tcagtaaaag atttttcata tattttgtga 60 ttgactgtcc tatcccttgc ttttccctcc ttgggaatct tgtccagcac cacagtttga 120 aggcatcaat tctttggcgc tctgccttct ttacagttca gctctcacac ttgtacacga 180 cctctgggaa gaccattgcc ttgactatat ggatctctgt tagcagagtg atgtctctgc 240 ttttcaacac atgtctatat ttgtcatagc tttcctgcca agaagaaact gccttctgat 300 ttcatggctg 310 <210> 2 <211> 680 <212> DNA <213> Holstein <400> 2 caccactgtt cctctactac tctggttctc tcagtaaaag atttttcata tattttgtga 60 ttgactgtcc tatcccttgc ttttccctcc aagacaaaat gtattgtttg gagataggat 120 agcctgctgt tgctgttcaa tcacccagct gtgttcaact ctttgcaacc ccatggactg 180 cagcacacca gggctccctg tccctcaccg tctcccaaag tatgtccaag ttcatgtcca 240 ctgcattggt gatgccatca gccatctcat ctgctgatgc tctcttctcc tctgccctca 300 atctttccta gcatcaggaa cttttccaac gagtcgactg ttttcatcag atgaccaaaa 360 tactgaagct tcagcttcag catcagtcct tccaatgagt attcagggtt gatttctctt 420 aagattgact agttttatct ctttgctgtg aaagggatac ttgggaatct tgtccagcac 480 cacagtttga agtcatcaat tctttggcgc tctgccttct ttacagttca gctctcacac 540 ttgtacacga cctctgggaa gaccattgcc ttgactatat ggatctctgt tagcagagtg 600 atgtctctgc ttttcaacac atgtctatat ttgtcatagc tttcctgcca agaagaaact 660 gccttctgat ttcatggctg 680 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 3 caccactgtt cctctactac 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 4 cagccatgaa atcagaaggc 20

Claims

삭제
삭제
서열번호 3 및 서열번호 4로 표시되는 한우 및 홀스테인 품종 판별용 프라이머 세트.
제3항에 따른 프라이머 세트를 포함하는 한우 및 홀스테인 품종 판별용 키트.
삭제
(1) 소에서 DNA를 분리하는 단계;
(2) 상기 분리된 DNA를 주형으로 하고, 제3항에 따른 프라이머 세트를 이용하여 PCR을 수행하는 단계; 및
(3) 상기 PCR 증폭 산물을 분석하는 단계를 포함하는 한우 및 홀스테인 품종 판별 방법.
제6항에 있어서, 상기 PCR 증폭 산물을 분석하는 단계는 젤 전기영동, 모세관 전기영동, DNA 칩, 방사성 측정, 형광 측정 또는 인광 측정을 통해 수행되는 것을 특징으로 하는 한우 및 홀스테인 품종 판별 방법.
삭제