KR101991599B1 - 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 및 증식 촉진제 - Google Patents

줄기 세포의 미분화 상태 유지제 및 증식 촉진제 Download PDF

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유이치 하세베
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Abstract

본 발명은, 줄기 세포를, 미분화 상태를 유지시킨 채, 효율적으로 증식시킬 수 있는 새로운 물질을 알아내어, 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제로서 제공하는 것을 과제로 한다. 본 발명은 또한, 피부의 창상 치유 작용을 가지고, 피부 재생 의료 또는 미용 분야에서 간편하게 이용할 수 있고, 게다가 안전성이 높으며, 저렴한 창상 치유제를 제공하는 것을 과제로 한다. 본 발명은, 하기 일반식(I)로 나타내어지는 지방산 글리세라이드의 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 유효 성분으로서 함유하는, 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제, 또는 창상 치유제이다.
Figure 112017045680218-pct00020

(식 중, R1, R2, R3 중 적어도 1개는 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내고, 나머지는 포화 지방산 유래의 아실기 또는 수소 원자를 나타낸다.)

Description

줄기 세포의 미분화 상태 유지제 및 증식 촉진제{AGENT FOR MAINTAINING STEM CELLS IN UNDIFFERENTIATED STATE AND AGENT FOR PROMOTING GROWTH THEREOF}
본 발명은, 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제, 또는 창상 치유제, 및 줄기 세포의 증식 촉진 방법 및 미분화 상태 유지 방법에 관한 것이다.
척추 동물(특히 포유 동물)의 조직은, 상해 또는 질환, 또는 가령(加齡) 등에 수반하여 세포나 장기의 손상이 일어난 경우, 재생계가 작용하여, 세포나 장기의 손상을 회복하려고 한다. 이 작용에, 당해 조직에 구비되는 줄기 세포(조직 줄기 세포, 체성 줄기 세포)가 큰 역할을 하고 있다. 줄기 세포는, 어떠한 세포나 장기로도 분화되는 다능성을 가지고 있으며, 이 성질에 의해 세포나 장기의 손상부를 보충함으로써 회복으로 유도한다고 생각된다. 이러한 줄기 세포를 응용한, 차세대 의료인 재생 의료에 기대가 모이고 있다.
포유 동물에 있어서의 줄기 세포 연구에서 가장 진행되어 있는 조직은 골수이다. 골수에는 생체의 조혈 줄기 세포가 존재하고 있고, 모든 혈액 세포 재생의 근원임이 밝혀졌다. 또한 골수에는, 조혈 줄기 세포와는 별도로, 장기나 조직(예를 들어, 뼈, 연골, 근육, 지방 등)으로 분화 가능한 줄기 세포가 포함되어 있음이 보고되어 있다(비특허문헌 1 참조).
또한, 근년, 골수 이외에도, 피부, 간장, 췌장, 지방 등, 모든 장기나 조직에 줄기 세포가 존재하는 것이 밝혀져, 각 장기나 조직의 재생 및 항상성 유지를 담당하고 있음을 알게 되었다(비특허문헌 2 내지 5 참조). 또한, 각 장기나 조직에 존재하는 줄기 세포는 가소성이 우수하고, 지금까지 자기 복제가 불가능했던 장기나 조직의 재생에도 이용할 수 있을 가능성이 있다.
한편, 이들 줄기 세포 중 몇 개는, 가령과 함께 감소되는 것으로 알려져 있어, 각 조직의 항상성 유지를 위해 줄기 세포의 감소를 방지하는 기술의 연구가 적극적으로 행해지고 있다(비특허문헌 6). 또한, 근년, 줄기 세포의 능력(다능성)을 장기나 조직의 재생에 응용하기 위해서, 세포 이식 치료나 조직 공학(재생 의료나 재생 미용)의 분야에 있어서 줄기 세포를 생체 조직으로부터 분리한 후에 배양하여 증식시키는 기술의 개발이 진행되고 있다(비특허문헌 7, 8).
특히, 줄기 세포를 생체 외에서 배양할 경우, 줄기 세포의 능력인 다능성을 유지한 상태, 즉, 미분화 상태를 유지시킨 채 증식시키는 것이 매우 중요하다. 만일, 이 배양시에 줄기 세포의 미분화 상태가 유지되지 않아 분화 유도가 진행되어 버린 경우, 최종적으로 제조된 줄기 세포의 능력(다능성)은 상실되게 되어, 목적으로 하는 효과(장기나 조직의 재생 등)를 발휘할 수 없다.
이상으로부터, 줄기 세포를 세포 이식 치료나 조직 공학(재생 의료나 재생 미용)에 이용하여, 장기나 조직의 재생을 원하는 경우, 줄기 세포를 미분화 상태를 유지시킨 채 배양할 수 있어야만 한다.
현재까지, 줄기 세포를, 미분화 상태를 유지시킨 채 증식시키는 기술에 대해서, 몇 개 보고가 있지만, 아직 발전 중에 있다. 예를 들어, 배성 줄기 세포(ES 세포)나 조혈 줄기 세포는, 지지 세포(스트로마 세포 또는 피더 세포)와 공배양함으로써 미분화를 유지할 수 있다(특허문헌 1 및 비특허문헌 9 내지 11 참조). 그러나, 최근에는 피더 세포 유래의 내재성 바이러스에 의한 이종 동물간의 감염 예가 보고되고 있어(비특허문헌 12 참조), 지지 세포를 사용한 줄기 세포의 배양은, 의료 용도를 목적으로 한 줄기 세포의 배양에는 적합하지 않았다.
기타 방법으로, 사이토카인을 복잡하게 조합시킴으로써 줄기 세포의 미분화 상태를 유지시키는 방법이 있다. 예를 들어, 마우스 ES 세포는, LIF(백혈병 억제 인자(Leukemia Inhibitory Factor))를 배지에 첨가함으로써, 미분화성이 유지된다(특허문헌 2 및 비특허문헌 13 참조). 그 밖에, 초기 작용성 사이토카인 트롬보포이에틴(TPO), 인터류킨 6(IL-6), FLT-3 리간드 및 줄기 세포 인자(SCF)의 존재 하에, 미분화성을 유지시키는 것이 배성 줄기 세포, 체성 줄기 세포 등에서 보고되어 있다(특허문헌 3 및 비특허문헌 14 참조).
그러나, 사이토카인은 고가이며, 채취 원료나 보존성 등의 문제가 있어, 용이한 사용은 어렵다. 또한, LIF의 효과는 극히 특정 세포 계통에 한정적이며, 특히 영장류의 ES 세포나 체성 줄기 세포에 있어서는, LIF의 첨가만으로는 미분화 상태를 유지할 수 없는 것이 밝혀졌다(비특허문헌 10 참조).
이와 같이, 현재 보고되어 있는 줄기 세포의 미분화 상태의 유지 방법은 모두, 번잡한 조작을 필요로 하며, 또한 미분화 상태의 유지 효과가 낮다. 따라서, 줄기 세포를 재생 의료에 이용하기 위해서, 줄기 세포를, 미분화 상태를 유지한 채 증식시키는 기술이 요구되었다. 즉, 안전하면서도 간편하고 효율적으로 줄기 세포를, 미분화 상태를 유지시킨 채 증식시킬 수 있는 기술이 요구되었다.
근년, 당뇨병이나 동맥 경화증의 증가나 고령화에 수반하여, 피부 이식술만으로는 치료 곤란한 당뇨병성 하지 궤양이나 욕창 등의 만성 창상 환자가 증가하고 있다. 피부의 창상은, 창상부의 세정 등의 응급 처치를 실시한 후, 생체가 가지는 치유력에 의한 자연 치유를 기다리는 것이 일반적이다. 그러나, 창상의 정도에 따라서는 자연 치유에 장시간을 요하는 경우가 있고, 특히 고령자나 당뇨병 환자 등은 젊은이와 비교하여 자연 치유가 늦어, 창상 치유를 촉진시킬 필요가 있다. 피부의 창상 치유 촉진제로서는, 염화리소자임이나 솔코세릴 등이 알려져 있지만, 모두 창상 치유 촉진 작용이 충분하다고 하기는 어려운 것이었다. 피부의 창상 치유에서는, 조직의 재구축이 행해지기 때문에, 필요한 세포의 유주나 콜라겐 등의 세포 외 매트릭스의 생산이 촉진된다. 창상 치유의 초기에 주로 생산되어 조직의 재구축에 중요한 타입 3 콜라겐은, 창상 치유 촉진 효과가 있어, 창상 치유 촉진제로서 이용되고 있다(비특허문헌 15, 특허문헌 4). 또한, 줄기 세포의 증식 또는 분화를 자극하고, 창상 치유를 촉진시키는 물질로서, 서브스턴스 P(특허문헌 5) 등이 알려져 있다. 그러나, 이들 물질은 모두 단백질이므로, 비용이나 보존 안정성의 점에 있어서 문제가 있고, 치료 용도 등 단기간에 대량의 피부 재생 치료를 요할 경우에 적합하지 않다. 또한, 미용 및 안티에이징 의식의 고조로부터, 가령이나 자외선에 의한 주름이나 처짐, 색소 침착의 개선을 목적으로 피부 재생 미용에 대한 관심이 해마다 높아지고 있다. 따라서, 창상 치유 등의 피부 재생 의료 또는 피부 재생 미용을 위해서, 용이하게 입수할 수 있고, 또한 안전성이 높으며, 저렴한 물질이 요망되고 있다.
일본 특허 공개 제2004-24089호 공보 일본 특허 공표 제2002-525042호 공보 일본 특허 제3573354호 공보 일본 특허 공개 평7-17844호 공보 일본 특허 공개 제2006-124389호 공보
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본 발명은, 상술한 실정을 감안하여, 줄기 세포를, 미분화 상태를 유지시킨 채, 효율적으로 증식시킬 수 있는 새로운 물질을 알아내어, 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제로서 제공하는 것을 과제로 한다. 본 발명은 또한, 피부의 창상 치유 작용을 가지고, 피부 재생 의료 또는 미용 분야에서 간편하게 이용할 수 있으며, 게다가 안전성이 높고, 저렴한 창상 치유제를 제공하는 것을 과제로 한다.
본 발명자들은, 상기 과제를 해결하기 위해 예의 연구를 행한 결과, 식물 유지나 동물 유지 등의 주성분이며, 화장품이나 식품에 있어서 유화제나 식용유로서 널리 사용되고 있는, 특정 탄소수의 불포화 지방산 유래의 아실기를 갖는 지방산 글리세라이드가, 지금까지 알려져 있지 않았던 줄기 세포에 대한 우수한 미분화 상태 유지 효과 및 증식 촉진 효과, 또한 창상 치유 효과를 갖는 것을 알아내어, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
즉, 본 발명은 이하를 포함한다.
(1) 하기 일반식(I)로 나타내어지는 지방산 글리세라이드의 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 유효 성분으로서 함유하는, 줄기 세포의 미분화 상태 유지제.
Figure 112017045680218-pct00001
(식 중, R1, R2, R3 중 적어도 1개는 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내고, 나머지는 포화 지방산 유래의 아실기 또는 수소 원자를 나타낸다.)
(2) 하기 일반식(I)로 나타내어지는 지방산 글리세라이드의 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 유효 성분으로서 함유하는, 줄기 세포의 증식 촉진제.
Figure 112017045680218-pct00002
(식 중, R1, R2, R3 중 적어도 1개는 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내고, 나머지는 포화 지방산 유래의 아실기 또는 수소 원자를 나타낸다.)
(3) 하기 일반식(I)로 나타내어지는 지방산 글리세라이드의 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 유효 성분으로서 함유하는, 창상 치유제.
Figure 112017045680218-pct00003
(식 중, R1, R2, R3 중 적어도 1개는 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내고, 나머지는 포화 지방산 유래의 아실기 또는 수소 원자를 나타낸다.)
(4) 상기 불포화 지방산이, 도코사헥사엔산, 에이코사펜타엔산, 아라키돈산, α-리놀렌산, γ-리놀렌산, 리놀레산, 올레산으로 이루어지는 군에서 선택되는 불포화 지방산인, (1) 내지 (3) 중 어느 한 항에 기재된 제제.
(5) (1) 내지 (3) 중 어느 한 항에 기재된 제제를 포함하는, 화장품.
(6) (1) 내지 (3) 중 어느 한 항에 기재된 제제를 포함하는, 의약품 또는 의약부외품.
(7) (1) 내지 (3) 중 어느 한 항에 기재된 제제를 포함하는, 음식품.
(8) 줄기 세포를, 하기 일반식(I)로 나타내어지는 지방산 글리세라이드의 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 함유하는 배지에서 배양하는 공정을 포함하는, 줄기 세포의 제조 방법.
Figure 112017045680218-pct00004
(식 중, R1, R2, R3 중 적어도 1개는 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내고, 나머지는 포화 지방산 유래의 아실기 또는 수소 원자를 나타낸다.)
(9) 줄기 세포를, 하기 일반식(I)로 나타내어지는 지방산 글리세라이드의 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 함유하는 배지에서 배양하는 공정을 포함하는, 줄기 세포의 미분화 상태 유지 방법.
Figure 112017045680218-pct00005
(식 중, R1, R2, R3 중 적어도 1개는 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내고, 나머지는 포화 지방산 유래의 아실기 또는 수소 원자를 나타낸다.)
(10) 줄기 세포를, 하기 일반식(I)로 나타내어지는 지방산 글리세라이드의 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 함유하는 배지에서 배양하는 공정을 포함하는, 줄기 세포의 증식 촉진 방법.
Figure 112017045680218-pct00006
(식 중, R1, R2, R3 중 적어도 1개는 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내고, 나머지는 포화 지방산 유래의 아실기 또는 수소 원자를 나타낸다.)
(11) 상기 불포화 지방산이, 도코사헥사엔산, 에이코사펜타엔산, 아라키돈산, α-리놀렌산, γ-리놀렌산, 리놀레산, 올레산으로 이루어지는 군에서 선택되는 불포화 지방산인, (8) 내지 (10) 중 어느 한 항에 기재된 방법.
(12) (3)에 기재된 창상 치유제를 포유 동물에 유효량 투여하는 것을 특징으로 하는, 상기 포유 동물에서의 창상의 치료 방법.
(13) 창상의 치료에 사용하기 위한, 하기 일반식(I)로 나타내어지는 지방산 글리세라이드.
Figure 112017045680218-pct00007
(식 중, R1, R2, R3 중 적어도 1개는 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내고, 나머지는 포화 지방산 유래의 아실기 또는 수소 원자를 나타낸다.)
(14) 창상 치유제를 제조하기 위한, 하기 일반식(I)로 나타내어지는 지방산 글리세라이드의 용도.
Figure 112017045680218-pct00008
(식 중, R1, R2, R3 중 적어도 1개는 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내고, 나머지는 포화 지방산 유래의 아실기 또는 수소 원자를 나타낸다.)
본원은, 2014년 11월 6일에 출원된 일본 특허출원 2014-226389호의 우선권을 주장하는 것이며, 상기 특허출원의 명세서에 기재되는 내용을 포함한다.
본 발명에 따르면, 줄기 세포를, 미분화 상태를 유지한 채, 효율적으로 증식시킬 수 있다. 본 발명에 따르면 또한, 창상을 효과적으로 치유할 수 있다. 따라서, 본 발명은, 재생 의료나 재생 미용의 분야에 있어서 크게 공헌할 수 있는 것이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명에 따른 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제, 또는 창상 치유제는, 하기 일반식(I)로 나타내어지는 특정 탄소수의 불포화 지방산 유래의 아실기를 갖는 지방산 글리세라이드(이하, 간단히 「지방산 글리세라이드」라 함)로서 함유한다.
Figure 112017045680218-pct00009
(식 중, R1, R2, R3 중 적어도 1개는 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내고, 나머지는 포화 지방산 유래의 아실기 또는 수소 원자를 나타낸다.)
상기 아실기의 유래가 되는 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산은, 이중 결합의 수가 1 내지 6인 천연에 널리 분포하고 있는 지방산이며, 구체적으로는 팔미톨레산(9-헥사데센산), 올레산(cis-9-옥타데센산), 리놀레산(9Z,12Z-옥타데카디엔산), 박센산(11-옥타데센산), 공액 리놀레산(9Z,11E-옥타데카디엔산, 10Z,12E-옥타데카디엔산, 10E,12Z-옥타데카디엔산, 10Z,12Z-옥타데카디엔산), 디호모-γ-리놀렌산((8Z,11Z,14Z)-이코사-8,11,14-트리엔산), α-리놀렌산((9Z,12Z,15Z)-9,12,15-옥타데카트리엔산), γ-리놀렌산((6Z,9Z,12Z)-6,9,12-옥타데카트리엔산), 엘레오스테아르산((9E,11E,13E)-9,11,13-옥타데카트리엔산), 스테아리돈산((6Z,9Z,12Z,15Z)-옥타데카-6,9,12,15-테트라엔산), 아라키돈산((5Z,8Z,11Z,14Z)-이코사-5,8,11,14-테트라엔산), 에이코사펜타엔산((5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-이코사-5,8,11,14,17-펜타엔산), 도코사헥사엔산((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-도코사-4,7,10,13,16,19-헥사엔산), (n-6) 도코사펜타엔산((4Z,7Z,10Z,13Z,16Z)-4,7,10,13,16-도코사펜타엔산), (n-3) 도코사펜타엔산((7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-7,10,13,16,19-도코사펜타엔산) 등을 들 수 있다.
상기 불포화 지방산 중에서도 효과나 간편성의 면에서, 도코사헥사엔산, 에이코사펜타엔산, 아라키돈산, α-리놀렌산, γ-리놀렌산, 리놀레산, 올레산이 바람직하고, 리놀레산이 보다 바람직하다.
상기 아실기의 유래가 되는 포화 지방산으로서는, 직쇄상 또는 분지상의 포화 지방산 중 어느 것이어도 되고, 탄소수도 한정되지는 않지만, 탄소수 5 내지 22의 포화 지방산이 바람직하다. 구체적으로는 카프로산, 카프릴산, 카프르산, 라우르산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산, 아라키드산, 베헨산 등의 직쇄 포화 지방산, 2-에틸헥산산, 3,5,5-트리메틸헥산산, 이소트리데칸산, 2-헥실데칸산, 2-헥실도데칸산, 2-옥틸데칸산, 이소스테아르산, 2-옥틸도데칸산 등의 분지쇄 포화 지방산 등을 들 수 있다.
본 발명에 있어서 사용되는 지방산 글리세라이드는, 모노글리세라이드, 디글리세라이드, 트리글리세라이드 중 어느 것이어도 되지만, 디글리세라이드가 바람직하고, 글리세린의 1위치와 3위치에 상기 불포화 지방산이 결합한 1,3-디글리세라이드가 보다 바람직하고, 3위치에 리놀레산이 결합한 1,3-디글리세라이드가 더욱 바람직하다. 디글리세라이드, 트리글리세라이드의 경우, 글리세린의 1위치, 2위치 또는 3위치에 결합하는 불포화 지방산은 동일해도 상이해도 된다.
본 발명에 있어서 사용되는 지방산 글리세라이드는, 1종이어도 되지만, 2종 이상의 혼합물인 것이 바람직하다. 2종 이상의 지방산 글리세라이드를 병용함으로써, 줄기 세포의 미분화 상태 유지 작용, 줄기 세포의 증식 촉진 작용, 또는 창상 치유 작용이 증강된다. 2종 이상의 지방산 글리세라이드를 병용하는 경우, 그의 조합은 특별히 한정되지는 않고, 모노글리세라이드와 디글리세라이드, 모노글리세라이드와 트리글리세라이드, 디글리세라이드와 트리글리세라이드, 모노글리세라이드와 디글리세라이드와 트리글리세라이드 중 어느 것이어도 된다. 또한, 2종 이상의 지방산 글리세라이드를 병용하는 경우, 그의 비율은 특별히 한정되지 않고, 지방산 글리세라이드의 종류에 따라 적절하게 변경할 수 있지만, 예를 들어 2종의 디글리세라이드를 병용하는 경우에는, 10:90 내지 90:10을 예시할 수 있다. 또한, 본 발명의 지방산 글리세라이드에 더하여, 본 발명 이외의 지방산 글리세라이드를 병용해도 된다.
본 발명에 있어서 사용되는 지방산 글리세라이드는, 식물 원료나 동물 원료로부터 압착ㆍ추출ㆍ압출하는 방법, 효소법, 유기 합성법에 의해 얻을 수 있다. 또한, 상기 지방산 글리세라이드 중 모노글리세라이드 또는 디글리세라이드는, 유화제, 증점 안정제, 가소제로서 식품, 화장품, 의약품, 공업 화성품 등의 제조에 범용된다. 트리글리세라이드는 팜유, 카카오 버터, 야자유, 팜핵유 등의 식물성 유지, 유지, 우지, 돈유, 어유, 경유(鯨油) 등의 동물성 유지의 주성분이며, 주로 화장품이나 식품에 있어서 널리 사용되고 있다. 따라서, 본 발명에 있어서 사용되는 지방산 글리세라이드는 상기 제조 분야에서 일반적으로 사용되고 있는 시판품을 이용할 수도 있다.
지방산 글리세라이드를, 예를 들어 식물 원료(식물의 종자, 과실, 나무 껍질 등)로부터 추출하는 경우, 그 추출 방법은 특별히 한정되지 않고, 가열 추출 방법이어도 되고, 상온이나 냉장 추출 방법이어도 된다.
추출에 사용되는 용매로서는, 예를 들어 물, 저급 알코올류(메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 1-부탄올, 2-부탄올 등), 액상 다가 알코올류(1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 글리세린 등), 케톤류(아세톤, 메틸에틸케톤 등), 아세토니트릴, 에스테르류(아세트산에틸, 아세트산부틸 등), 탄화수소류(헥산, 헵탄, 유동 파라핀 등), 에테르류(에틸에테르, 테트라히드로푸란, 프로필에테르 등) 등을 들 수 있다. 이들 용매는 1종이어도 되고 2종 이상을 혼합하여 사용해도 된다. 바람직하게는, 물, 저급 알코올의 혼합액(함수 저급 알코올)이 좋고, 특히 바람직하게는, 물, 에탄올의 혼합액(함수 에탄올)이 좋고, 예를 들어 50 내지 90v/v％의 에탄올 수용액을 사용할 수도 있다. 또한, 상기 추출 용매에 산이나 알칼리를 첨가하여, pH 조정한 용매를 사용할 수도 있다.
추출 용매에 대한 식물 원료의 비율은, 예를 들어 1 내지 50％(w/w), 바람직하게는 5 내지 25％(w/w)를 들 수 있다. 예를 들어, 식물 원료의 건조물에 상기 용매를 첨가하고, 5 내지 80℃에 있어서의 추출을 행함으로써, 지방산 글리세라이드를 얻을 수 있다. 또는, 식물 원료의 건조물에 저급 알코올(예를 들어, 에탄올 등) 또는 액상 다가 알코올(예를 들어, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜 등)을 첨가하고, 상온(예를 들어 5 내지 35℃)에서 추출을 행함으로써, 지방산 글리세라이드를 얻을 수 있다.
용매 추출 후, 얻어진 용매상 자체를 지방산 글리세라이드 용액으로 할 수 있다. 또는, 필요에 따라서, 얻어진 용매상을, 농축(감압 농축, 막 농축 등에 의한 농축), 희석, 여과, 건조 등의 처리, 활성탄 등에 의한 탈색ㆍ탈취 처리 등에 제공하여, 얻어진 생성물을 지방산 글리세라이드 용액으로 할 수 있다. 또한, 정법의 정제법인, 크로마토그래피, 감압 증류, 결정화 등에 의해 정제하여 사용하는 것이 바람직하다. 또한, 추출한 용액을 농축 건고, 부형제와 함께, 농축 건고, 분무 건조, 동결 건조 등의 처리에 제공하여, 얻어진 건조물을 지방산 글리세라이드로서 사용할 수도 있다.
또한, 지방산 글리세라이드를, 동물 원료(예를 들어, 정어리나 다랑어 등의 어체(魚體)의 각 부분)로부터 추출하는 경우에는, 동물 원료를 압착시켜, 유분(油分)을 원심 분리에 제공하여 채유하고, 에틸알코올, 헥산, 아세트산에틸 또는 이들의 혼합 용매 등의 유기 용매에 의해 지방분을 추출하여, 지방산 글리세라이드를 얻을 수 있다. 또한, 용매 추출 후, 식물 재료의 경우와 동일한 방법으로, 크로마토그래피 등에 의한 정제 처리를 행해도 된다.
식물 원료 또는 동물 원료로부터 얻어진 지방산 글리세라이드의 구조는, 가수 분해하여 지방산을 동정함으로써 측쇄의 구조를 결정하고, 또한 결합 위치에 대해서는 핵자기 공명 분석에 의해 확인할 수 있다.
효소법으로서는, 리파아제를 사용하는 방법이 대표적이고, 유지의 가수 분해 반응, 유지 유래의 지방산과 글리세린의 에스테르화 반응, 유지와 글리세린의 에스테르 교환 반응(분자간 반응, 분자 내 반응, 산가수분해(acidolysis), 가알코올분해(alcoholysis))에 의한 방법 등을 들 수 있다. 여기서, 유지로서는, 식물 유지(유채씨유, 참기름, 대두유, 옥수수유, 해바라기유, 팜유, 팜핵유, 야자유, 홍화유, 아마인유, 면실유, 피마자유, 코코넛유 등), 동물 유지(우지, 돈지, 어유 등), 각종 식용유의 사용된 기름(폐식용유) 등 중 어느 것이어도 된다.
유기 합성법은, 상기와 동일한 반응을 효소 대신에 화학 촉매를 사용하여 행할 수 있다. 화학 촉매로서는, 예를 들어 알칼리 촉매(수산화나트륨, 수산화칼륨, 탄산나트륨, 탄산칼륨 등), 산 촉매(황산, 술폰산, 인산 등), 고체 산 촉매(복합 금속 화합물, 금속 황산염, 헤테로폴리산, 합성 제올라이트, 이온 교환 수지 등)를 사용할 수 있다. 또한, 유기 합성법의 정법인, 글리세린, 모노글리세라이드 또는 디글리세라이드에 지방산 클로라이드를 반응시키는 방법에 의해서도 제조할 수 있다. 이 지방산 글리세라이드도 상기 정제 처리를 행해도 된다.
이와 같이 하여 얻어진 지방산 글리세라이드는, 줄기 세포의 증식시에 분화가 진행되지 않고, 생체 레벨에서 또는 배양 레벨에서 미분화 상태를 유지시키면서 줄기 세포를 효율적으로 증식시키는 작용을 가지므로, 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제로서 사용할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제는, 줄기 세포를, 미분화 상태를 유지하면서 효율적으로 증식시키기 위한 세포 배양용 첨가제, 연구용 시약으로서도 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제를, 인간을 포함한 포유 동물의 줄기 세포에 적용함으로써, 줄기 세포의 미분화 상태를 유지하고, 또한 줄기 세포의 증식을 촉진시킬 수 있다. 본 발명에 따른 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제를 적용하는 줄기 세포로서는, 본 발명의 목적에 따른 것이라면 특별히 한정되지 않고 예를 들어 배성 줄기 세포(ES 세포); 골수, 혈액, 피부(표피, 진피, 피하 조직), 지방, 모낭, 뇌, 신경, 간장, 췌장, 신장, 근육이나 기타 조직에 존재하는 체성 줄기 세포; 유전자 도입 등에 의해 인공적으로 제작된 줄기 세포(인공 다능성 줄기 세포: iPS 세포)를 들 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제는, 골수, 혈액, 피부 또는 지방 조직 유래의 줄기 세포에 대하여 보다 효과를 발휘한다. ES 세포로서는, 예를 들어 착상 이전의 초기 배를 배양함으로써 수립된 ES 세포, 체세포의 핵을 핵 이식함으로써 제작된 초기 배를 배양함으로써 수립된 ES 세포, 및 이들 ES 세포의 염색체 상의 유전자를 유전자 공학의 방법을 사용하여 개변시킨 ES 세포를 들 수 있다. 이러한 ES 세포는, 예를 들어 자체 공지된 방법에 의해 제작할 수 있지만, 소정의 기관으로부터 입수할 수 있고, 나아가 시판품을 구입할 수도 있다. 또한, 이들 줄기 세포는, 초대 배양 세포, 계대 배양 세포 또는 동결 세포 중 어느 것이어도 된다.
또한, 본 발명에 따른 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제는, 줄기 세포의 분화 방향성 및 분화 과정 등에 대하여 동등한 특성을 가지고 있으면, 모든 포유 동물 유래의 줄기 세포에 응용이 가능하다. 예를 들어, 본 발명에 따른 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제는, 인간, 원숭이, 마우스, 래트, 모르모트, 토끼, 고양이, 개, 말, 소, 양, 염소, 돼지 등의 포유 동물의 줄기 세포에 대하여 효과를 발휘할 수 있다.
본 발명에 따른 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제의 줄기 세포에 대한 적용은, 생체 외라도 생체 내라도 되고, 모든 경우에 그 작용을 발휘할 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제는, 그의 유효량을 첨가한 줄기 세포 배양용 배지에서 줄기 세포를 배양함으로써, 또는 인간을 포함하는 포유 동물에 투여함으로써, 줄기 세포의 미분화 상태를 유지하고, 증식을 촉진시킬 수 있다.
본 발명에 따른 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제는, 유효 성분인 지방산 글리세라이드가 우수한 줄기 세포의 미분화 상태 유지 작용 및 증식 촉진 작용을 가지므로, 피부, 골아(骨芽), 연골, 근육, 신경, 지방, 간장 등의 생체 내의 조직 또는 장기의 줄기 세포에 작용하여 당해 조직 또는 장기의 장애 또는 손상을 치료, 개선 및 예방하는 데 유효하다. 또한, 줄기 세포는, 가령 등에 수반하여 감소 또는 기능 저하되는 점에서, 본 발명에 따른 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제는, 상기 생체 내의 조직 또는 장기의 줄기 세포의 감소나 기능 저하에 관련된 질환을 치료, 개선 및 예방하는 데 유효하다. 여기서, 조직 또는 장기의 장애 또는 손상, 줄기 세포의 감소나 기능 저하에 관련된 질환으로서는, 예를 들어 피부 관련으로는, 주름, 처짐, 기미, 잡티, 피부 거칠음, 피부 비후, 모공의 열림, 여드름 자국, 창상, 반흔, 켈로이드 등을 들 수 있고, 박모나 탈모 등의 두피나 모발의 손상도 포함된다. 또한, 뼈 관련으로는, 골다공증, 골절(척추 압박 골절, 대퇴골 경부 골절 등) 등, 연골 질환으로는, 변형성 관절증, 관절 류머티즘, 추간판 헤르니아 등, 신경 관련으로는, 척수 손상, 안면 신경 마비, 알츠하이머병, 근위축성 측색 경화증, 파킨슨병, 가령에 수반하는 기억 저하 등, 혈액 관련으로는, 재생 불량성 빈혈, 백혈병 등, 심혈관 관련으로는 심근 경색, 폐색성 동맥 경화증 등, 치과 관련으로는 치주병, 치조 농루에 의한 치조골 손상 등, 안과 관련으로는, 망막 색소 변성증, 노인성 황반 변성증, 녹내장 등, 간장ㆍ췌장 관련으로는 간염, 간경변, 당뇨병 등을 들 수 있지만, 이들로 한정되지 않는다.
상기 지방산 글리세라이드는 또한, 우수한 창상 치유 촉진 작용을 가지므로 창상 치유제로서 이용할 수 있고, 특히 피부의 표피 또는 진피의 손상인 피부 창상의 치유에 유효하다. 여기서, 피부 창상으로서는, 중상도나 심도는 특별히 한정되지는 않는다. 예를 들어, 절창, 열창, 할창, 찰과상, 좌멸창(挫滅創), 좌창, 자창(刺創), 교창 등의 일반적인 창상 외에도, 욕창, 열상(熱傷), 화상, 당뇨병성 궤양, 하지 궤양ㆍ하지 동맥류 등도 포함하는 것으로 한다.
본 발명에 따른 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제, 또는 창상 치유제에 있어서의 지방산 글리세라이드의 함유량은 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어 당해 약제 전량에 대하여, 건조물로 환산하여 0.00001 내지 10중량％인 것이 바람직하고, 0.0001 내지 1중량％로 하는 것이 보다 바람직하다. 0.00001중량％ 미만이면 효과가 충분히 발휘되기 어려운 경우가 있다.
본 발명에 따른 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제, 또는 창상 치유제를 생체 내에 투여하는 경우에는, 그대로 투여하는 것도 가능하지만, 본 발명의 효과를 손상시키지 않는 범위에서 적당한 첨가물과 함께 화장품, 의약부외품, 의약품, 음식품 등의 각종 조성물에 배합하여 제공할 수 있다. 또한, 본 발명의 의약품에는, 동물에 사용되는 약제, 즉 수의약도 포함되는 것으로 한다.
본 발명에 따른 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제, 또는 창상 치유제를 화장품이나 의약부외품에 배합하는 경우에는, 그의 제형은, 수용액계, 가용화계, 유화계, 분말계, 분말 분산계, 유액계, 겔계, 연고계, 에어로졸계, 물-기름 2층계, 또는 물-기름-분말 3층계 등의 어느 것이어도 된다. 또한, 당해 화장품이나 의약부외품은, 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제, 또는 창상 치유제와 함께, 피부 외용 조성물에 있어서 통상 사용되고 있는 각종 성분, 첨가제, 기제 등을 그 종류에 따라서 선택하여, 적절하게 배합하고, 당분야에서 공지된 방법을 따라서 제조할 수 있다. 그의 형태는, 액상, 유액상, 크림상, 겔상, 페이스트상, 스프레이상 등의 어느 것이어도 된다. 피부 외용 조성물의 배합 성분으로서는, 예를 들어 유지류(올리브유, 야자유, 달맞이꽃유, 호호바유, 피마자유, 경화 피마자유 등), 왁스류(라놀린, 밀랍, 카르나우바 왁스 등), 탄화수소류(유동 파라핀, 스쿠알렌, 스쿠알란, 바셀린 등), 지방산류(라우르산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산, 베헨산 등), 고급 알코올류(미리스틸알코올, 세탄올, 세토스테아릴알코올, 스테아릴알코올, 베헤닐알코올 등), 에스테르류(미리스트산이소프로필, 팔미트산이소프로필, 옥탄산세틸, 트리옥탄산글리세린, 미리스트산옥틸도데실, 스테아르산옥틸, 스테아르산스테아릴 등), 유기산류(시트르산, 락트산, α-히드록시아세트산, 피롤리돈카르복실산 등), 당류(말티톨, 소르비톨, 크실로비오스, N-아세틸-D-글루코사민 등), 단백질 및 단백질의 가수 분해물, 아미노산류 및 그의 염, 비타민류, 식물ㆍ동물 추출 성분, 다양한 계면 활성제, 보습제, 자외선 흡수제, 항산화제, 안정화제, 방부제, 살균제, 향료 등을 들 수 있다.
화장품이나 의약부외품의 종류로서는, 예를 들어 화장수, 유액, 겔, 미용액, 일반 크림, 썬크림, 팩, 마스크, 세안료, 화장 비누, 파운데이션, 분, 욕용제, 바디 로션, 바디 샴푸, 헤어 샴푸, 헤어 컨디셔너, 육모제 등을 들 수 있다.
본 발명에 따른 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제, 또는 창상 치유제를 의약품에 배합하는 경우에는, 약리학적 및 제제학적으로 허용될 수 있는 첨가물과 혼합하여, 환부에 적용하기에 적합한 제제 형태의 각종 제제로 제제화할 수 있다. 약리학적 및 제제학적으로 허용될 수 있는 첨가물로서는, 그의 제형, 용도에 따라서, 적절하게 선택한 제제용 기재나 담체, 부형제, 희석제, 결합제, 활택제, 코팅제, 붕괴제 또는 붕괴 보조제, 안정화제, 보존제, 방부제, 증량제, 분산제, 습윤화제, 완충제, 용해제 또는 용해 보조제, 등장화제, pH 조절제, 분사제, 착색제, 감미제, 교미제, 향료 등을 적절하게 첨가하여, 공지된 다양한 방법으로 경구 또는 비경구적으로 전신 또는 국소 투여할 수 있는 각종 제제 형태로 제조하면 된다. 본 발명의 의약품을 상기 각 형태로 제공하는 경우, 통상 당업자에게 사용되는 제법, 예를 들어 일본 약전의 제제 총칙 [2] 제제 각 조에 표시된 제법 등에 의해 제조할 수 있다.
본 발명의 의약품의 형태로서는, 특별히 제한되는 것은 아니지만, 예를 들어 정제, 당의정제, 캡슐제, 트로키제, 과립제, 산제, 액제, 환제, 유제, 시럽제, 현탁제, 엘릭시르제 등의 경구제, 주사제(예를 들어, 피하 주사제, 정맥 내 주사제, 근육 내 주사제, 복강 내 주사제), 점적제, 좌제, 연고제, 로션제, 점안제, 분무제, 경피 흡수제, 경점막 흡수제, 부착제 등의 비경구제 등을 들 수 있다. 또한, 사용할 때에 재용해시키는 건조 생성물로 해도 되고, 주사용 제제의 경우에는 단위 투여량 앰플 또는 다투여량 용기의 상태로 제공된다.
본 발명에 따른 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제, 또는 창상 치유제를, 상기 피부 관련의 손상이나 질환을 치료, 개선 및 예방하기 위한 의약품으로서 사용하는 경우에 적합한 형태는 외용 제제이며, 예를 들어 연고제, 크림제, 겔제, 액제, 부착제(퍼프제, 플라스터제), 폼제, 스프레이제, 분무제 등을 들 수 있다. 연고제는, 균질한 반고형상의 외용 제제를 말하고, 유지성 연고, 유제성 연고, 수용성 연고를 포함한다. 겔제는, 수불용성 성분의 포수(抱水) 화합물을 수성액에 현탁시킨 외용 제제를 말한다. 액제는, 액상의 외용 제제를 말하고, 로션제, 현탁제, 유제, 리니먼트제 등을 포함한다. 특히, 피부의 창상 치유제로서 사용하는 경우에는, 피부 창상 치유 효과와 사용 간편성으로부터, 연고제, 크림제, 액제, 스프레이제가 보다 바람직하다.
본 발명의 의약품은, 상기 질환의 발병을 억제하는 예방약으로서, 및/또는, 정상적인 상태로 개선시키는 치료약으로서 기능한다. 본 발명의 의약품의 유효 성분은, 천연물 유래이기 때문에 매우 안전성이 높고 부작용이 없으므로, 상술한 질환의 치료, 개선 및 예방용 의약으로서 사용하는 경우, 인간, 마우스, 래트, 토끼, 개, 고양이 등의 포유 동물에 대하여 넓은 범위의 투여량으로 경구적으로 또는 비경구적으로 투여할 수 있다.
본 발명의 화장품, 의약품, 의약부외품에 있어서의 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제, 또는 창상 치유제의 함유량은 특별히 한정되지 않지만, 제제(조성물) 전체 중량에 대하여, 지방산 글리세라이드의 건조 고형분으로 환산하여, 0.001 내지 30중량％가 바람직하고, 0.01 내지 10중량％가 보다 바람직하다. 0.001중량％ 미만이면 효과가 낮고, 또한 30중량％를 초과해도 효과에 큰 증강은 보기 어렵다. 상기 양은 어디까지나 예시이며, 조성물의 종류나 형태, 일반적인 사용량, 효능ㆍ효과 등을 고려하여 적절하게 설정ㆍ조정하면 된다. 또한, 제제화에 있어서의 유효 성분의 첨가법에 대해서는, 미리 첨가해두어도, 제조 도중에 첨가해도 되고, 작업성을 생각하여 적절하게 선택하면 된다.
또한, 본 발명에 따른 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제, 또는 창상 치유제는, 음식품에도 배합할 수 있다. 또한, 본 발명에 있어서, 음식품이란, 일반적인 음식품 외에, 의약품 이외에 건강의 유지나 증진을 목적으로 하여 섭취할 수 있는 식품, 예를 들어 건강 식품, 기능성 식품, 보건 기능 식품, 또는 특별 용도 식품을 포함하는 의미로 사용된다. 건강 식품에는, 영양 보조 식품, 건강 보조 식품, 서플리먼트 등의 명칭으로 제공되는 식품을 포함한다. 보건 기능 식품은 식품 위생법 또는 건강 증진법에 의해 정의되고, 특정 보건의 효과나 영양 성분의 기능, 질병 리스크의 저감 등을 나타낼 수 있는, 특정 보건용 식품 및 영양 기능 식품이 포함된다.
음식품의 형태는, 식용에 적합한 형태, 예를 들어 고형상, 액상, 과립상, 입상, 분말상, 캡슐상, 크림상, 페이스트상 중 어느 것이어도 된다. 특히, 상기 건강 식품 등의 경우의 형상으로서는, 예를 들어 정제상, 구상, 캡슐상, 분말상, 과립상, 세립상, 트로키상, 액상(시럽상, 유상, 현탁상을 포함함) 등이 바람직하다.
음식품의 종류로서는, 빵류, 면류, 과자류, 유제품, 수산ㆍ축산 가공 식품, 유지 및 유지 가공 식품, 조미료, 각종 음료(청량 음료, 탄산 음료, 미용 드링크, 영양 음료, 과실 음료, 유음료 등) 및 당해 음료의 농축 원액 및 조정용 분말 등을 들 수 있지만, 이들로 한정되지는 않는다.
본 발명의 음식품은, 그의 종류에 따라서 통상 사용되는 첨가물을 적절하게 배합해도 된다. 첨가물로서는, 식품 위생법상 허용될 수 있는 첨가물이라면 모두 사용할 수 있지만, 예를 들어 포도당, 자당, 과당, 이성화 액당, 아스파탐, 스테비아 등의 감미료; 시트르산, 말산, 타르타르산 등의 산미료; 덱스트린, 전분 등의 부형제; 결합제, 희석제, 향료, 착색료, 완충제, 증점제, 겔화제, 안정제, 보존제, 유화제, 분산제, 현탁화제, 방부제 등을 들 수 있다.
본 발명의 음식품이 일반적인 음식품인 경우에는, 그 음식품의 통상의 제조 공정에 있어서 지방산 글리세라이드를 첨가하는 공정을 포함함으로써 제조할 수 있다. 또한, 건강 식품의 경우에는, 상기 의약품의 제조 방법에 준하면 되고, 예를 들어 정제상의 서플리먼트이면, 지방산 글리세라이드에, 부형제 등의 첨가물을 첨가, 혼합하고, 타정기 등으로 압력을 가하여 성형함으로써 제조할 수 있다. 또한, 필요에 따라서 기타 재료(예를 들어, 비타민 C, 비타민 B2, 비타민 B6 등의 비타민류, 칼슘 등의 미네랄류, 식이 섬유 등)를 첨가할 수도 있다.
본 발명의 음식품에 있어서의 지방산 글리세라이드의 배합량은, 줄기 세포의 미분화 상태 유지 효과와 증식 촉진 효과, 및 창상 치유 효과를 발휘할 수 있는 양이면 되지만, 대상 음식품의 일반적인 섭취량, 음식품의 형태, 효능ㆍ효과, 정미성, 기호성 및 비용 등을 고려하여 적절하게 설정하면 된다.
본 발명은 또한, 줄기 세포를, 지방산 글리세라이드를 함유하는 배지에서 배양함으로써, 줄기 세포의 미분화 상태를 유지시킨 채, 줄기 세포 증식을 촉진시키는 방법에 관한 것이다. 바꾸어 말하면, 본 발명에 따른 방법은, 줄기 세포를, 지방산 글리세라이드를 함유하는 배지에서 배양하는 공정을 포함하는, 줄기 세포의 제조 방법, 줄기 세포의 미분화 상태 유지 방법, 또는 줄기 세포의 증식 촉진 방법이라고 할 수 있다.
본 발명에 따른 방법에 있어서, 줄기 세포의 배양에는, 줄기 세포의 미분화 상태 유지 및 증식을 위해 일반적으로 사용되고 있는 배지를 사용하면 된다. 예를 들어, 줄기 세포의 생존 및 증식에 필요한 성분(무기염, 탄수화물, 호르몬, 필수 아미노산, 비필수 아미노산, 비타민, 지방산)을 포함하는 기본 배지, 구체적으로는 Dulbecco's Modified Eagle Medium(D-MEM; 둘베코 변형 이글 배지), Minimum Essential Medium(MEM; 최소 필수 배지), RPMI 1640, Basal Medium Eagle(BME; 이글 기초 배지), Dulbecco's Modified Eagle Medium: Nutrient Mixture(영양소 혼합물) F-12(D-MEM/F-12), Glasgow Minimum Essential Medium(Glasgow MEM; 글라스고우 최소 필수 배지), 행크액(Hank's balanced salt solution) 등을 들 수 있다. 또한, 배지에, 증식 인자로서 염기성 섬유아세포 증식 인자(bFGF) 및/또는 백혈구 유주 저지 인자(LIF)를 첨가해도 된다. 또한, 필요에 따라서, 배지는, 상피 세포 증식 인자(EGF), 종양 괴사 인자(TNF), 비타민류, 인터류킨류, 인슐린, 트랜스페린, 헤파린, 헤파란황산, 콜라겐, 피브로넥틴, 프로게스테론, 셀레나이트, B27-서플리먼트, N2-서플리먼트, ITS-서플리먼트, 항생 물질 등을 함유해도 된다.
또한, 상기 성분 이외에는, 1 내지 20％의 함유율로 혈청이 배지에 포함되는 것이 바람직하다. 그러나, 혈청은 로트의 차이에 따라 성분이 상이하고, 그 효과에 변동이 있기 때문에, 로트 체크를 행한 후에 사용하는 것이 바람직하다.
시판품의 배지로서는, 인비트로젠 제조의 간엽계 줄기 세포 기초 배지나, 산코 쥰야꾸 제조의 간엽계 줄기 세포 기초 배지, TOYOBO사 제조의 MF 배지, Sigma사 제조의 행크액(Hank's balanced salt solution) 등을 사용할 수 있다.
줄기 세포의 배양에 사용되는 배양기는, 줄기 세포의 배양이 가능한 것이라면 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어 플라스크, 샤알레, 디쉬, 플레이트, 챔버 슬라이드, 튜브, 트레이, 배양 백, 롤러 보틀 등을 들 수 있다.
배양기는, 세포 비접착성이어도 접착성이어도 되고, 목적에 따라서 적절하게 선택된다. 세포 접착성 배양기는, 세포와의 접착성을 향상시킬 목적으로, 세포 외 매트릭스 등에 의한 세포 지지용 기질 등으로 처리한 것을 사용해도 된다. 세포 지지용 기질로서는, 예를 들어 콜라겐, 젤라틴, 폴리-L-리신, 폴리-D-리신, 라미닌, 피브로넥틴 등을 들 수 있다.
줄기 세포 배양에 사용되는 배지에 대한 지방산 글리세라이드의 첨가 농도는, 상술한 본 발명에 따른 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제에 있어서의 지방산 글리세라이드의 함유량에 준하여 적절하게 결정할 수 있지만, 예를 들어 0.1 내지 1000μg/mL, 바람직하게는 1 내지 100μg/mL의 농도를 들 수 있다. 또한, 줄기 세포의 배양 기간 중, 지방산 글리세라이드를, 정기적으로 배지에 첨가해도 된다.
줄기 세포의 배양 조건은, 줄기 세포의 배양에 사용되는 통상적인 조건에 따르면 되고, 특별한 제어가 필요하지는 않다. 예를 들어, 배양 온도는 특별히 한정되는 것은 아니지만, 약 30 내지 40℃, 바람직하게는 36 내지 37℃이다. CO2 가스 농도는, 예를 들어 약 1 내지 10％, 바람직하게는 약 2 내지 5％이다. 또한, 배지의 교환은 2 내지 3일에 1회 행하는 것이 바람직하고, 매일 행하는 것이 보다 바람직하다. 상기 배양 조건은, 줄기 세포가 생존 및 증식 가능한 범위에서 적절하게 변동시켜 설정할 수도 있다.
줄기 세포의 미분화 상태 유지는, 예를 들어 본 발명에 따른 줄기 세포의 미분화 상태 유지제의 비존재 하에서 배양한 줄기 세포와 비교하여, 본 발명에 따른 줄기 세포의 미분화 상태 유지제의 존재 하에서 배양한 상기 줄기 세포에 있어서 줄기 세포 미분화 마커 유전자의 발현 레벨이 mRNA 레벨 또는 단백질 레벨에서 배양 개시시의 발현 레벨과 동일한 정도의 레벨로 유의미하게 유지되고 있는지의 여부로 평가할 수 있다. 줄기 세포 미분화 마커 유전자로서는, 예를 들어 Nanog 유전자(Cell Res. 2007 Jan; 17(1):42-9. Review. Nanog and transcriptional networks in embryonic stem cell pluripotency. Pan G, Thomson JA.) 등을 들 수 있다.
줄기 세포 미분화 마커 유전자 발현 레벨의 측정 방법으로서는, mRNA 레벨에서는, 예를 들어 줄기 세포 미분화 마커 유전자에 특이적인 프라이머나 프로브를 사용한 RT-PCR, 정량 PCR이나 노던 블롯팅 등의 방법을 들 수 있고, 또한 단백질 레벨에서는, 예를 들어 줄기 세포 미분화 마커 유전자에 의해 코딩되는 단백질에 특이적인 항체를 사용한 ELISA, 유동 세포측정법, 웨스턴 블롯팅 등의 면역학적 방법을 들 수 있다.
발현 레벨의 측정 결과, 배양 개시시(100％ 미분화 상태)의 줄기 세포에 있어서의 줄기 세포 미분화 마커 유전자의 발현 레벨과 본 발명의 줄기 세포 미분화 상태 유지제의 존재 하에서 소정 시간 배양 후의 줄기 세포에 있어서의 줄기 세포 미분화 마커 유전자의 발현 레벨의 상대비가, 본 발명의 줄기 세포 미분화 상태 유지제의 비존재 하에서 배양했을 경우의 동 상대비(컨트롤)보다도 큰 경우에 줄기 세포의 미분화 상태가 유지되었다고 판정할 수 있다.
또한, 줄기 세포의 증식 촉진은, 예를 들어 본 발명에 따른 줄기 세포의 증식 촉진제의 비존재 하에서 배양한 줄기 세포와 비교하여, 본 발명에 따른 줄기 세포의 증식 촉진제의 존재 하에서 배양한 당해 줄기 세포의 세포수가 유의미하게 증가 되어 있는지의 여부로 평가할 수 있다. 세포수의 측정은, 예를 들어 MTT법이나 WST법 등에 의해, 시판되는 세포수 측정 키트를 사용하여 행할 수 있다. 측정 결과, 배양 개시시의 줄기 세포의 세포수와 본 발명의 줄기 세포 증식 촉진제의 존재 하에서 소정 시간 배양 후의 줄기 세포의 세포수의 상대비가, 본 발명의 줄기 세포 증식 촉진제의 비존재 하에서 배양한 경우의 동 상대비(컨트롤)보다도 큰 경우에 줄기 세포의 증식이 촉진되었다고 판정할 수 있다.
상기 본 발명에 따른 방법에 의해 제조된 줄기 세포는 이식 재료(세포 이식제)로서 사용할 수 있고, 종래의 골수 이식 또는 제대혈 이식과 동일한 방법으로 실시할 수 있다.
상기 본 발명에 따른 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제 또는 본 발명에 따른 방법에 준하여, 지방산 글리세라이드를, 단독으로, 또는 배지와 별도로 또는 배지와 혼합하여, 줄기 세포의 미분화 상태 유지 또는 증식 촉진을 위한 시약 키트로서 제공할 수도 있다. 상기 키트는, 필요에 따라서 취급 설명서 등을 포함할 수 있다. 또는, 지방산 글리세라이드를 배지와 혼합하여, 줄기 세포의 미분화 상태 유지 또는 증식 촉진용 배지로서 제공할 수도 있다.
실시예
이하, 실시예를 사용하여 본 발명을 보다 상세하게 설명하지만, 본 발명의 기술적 범위는 이들 실시예로 한정되는 것은 아니다.
실시예의 평가 시험에 사용한 지방산 글리세라이드와 그의 구조를 표 1에 나타낸다. 지방산 글리세라이드 1 내지 9, 비교예의 트리팔미틴, 팔미트산은, 이하의 시판품을 사용하든지, 또는 제조예에 나타내는 방법 또는 그에 준하는 방법에 의해 합성하였다.
지방산 글리세라이드 1: 와코 쥰야꾸 가부시키가이샤
지방산 글리세라이드 2: 인도파인 케미칼 컴퍼니
지방산 글리세라이드 3: NU-CHEK-PREP
지방산 글리세라이드 5: NU-CHEK-PREP
지방산 글리세라이드 6: MP 바이오메디칼즈
지방산 글리세라이드 8: 시그마-알드리치 가부시키가이샤
지방산 글리세라이드 9: 후나코시 가부시키가이샤
지방산 글리세라이드 4, 7: 하기 제조예에 의해 합성
트리팔미틴: 와코 쥰야꾸 가부시키가이샤
팔미트산: 와코 쥰야꾸 가부시키가이샤
(제조예) 디글리세라이드의 합성
빙냉시킨 1-모노올레인과 피리딘의 혼합물에, 리놀레산 클로라이드를 첨가하여 0℃에서 24시간 교반하였다. 반응 후, 디에틸에테르를 첨가하고, 0.5N의 염산으로 피리딘을 제거하고, 희탄산나트륨 수용액으로 추출하였다. 에테르 용액을 농축 건고시켜 조(粗) 디글리세라이드를 얻었다. 이것을 통상적인 방법의 실리카겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 지방산 글리세라이드 4를 얻었다. 또한, 1-모노올레인 대신에 2-모노리놀레인, 리놀레산 클로라이드 대신에 팔미트산 클로라이드를 사용하는 것 이외에는, 상기와 동일하게 하여 반응을 행하여, 지방산 글리세라이드 7을 얻었다.
Figure 112017045680218-pct00010
[실시예 1]
지방산 글리세라이드의 줄기 세포에 대한 미분화 상태 유지 효과 및 증식 촉진 효과의 평가
이하에, 지방산 글리세라이드 1 내지 9의 1종 또는 혼합물(지방산 글리세라이드 2+3, 지방산 글리세라이드 4+5)을 사용한, 줄기 세포에 대한 미분화 상태 유지 효과 및 증식 촉진 효과의 실험예와 그 결과를 나타낸다. 또한, 2종의 지방산 글리세라이드의 혼합물을 사용하는 경우, 그 비율은 1:1(중량비)로 하였다.
(실험예 1) 줄기 세포에 대한 미분화 상태 유지 효과의 평가
Dulbecco's Modified Eagle Medium 배양액(Gibco사제)에, 소태아 혈청(FBS, 15％, Sigma사 제조), 누클레오티드액(100배 희석, 다이니폰 세야쿠사 제조), 비필수 아미노산액(100배 희석, 다이니폰 세야쿠사 제조), β2-머캅토에탄올액(100배 희석, 다이니폰 세야쿠사 제조), L-글루타민액(100배 희석, 다이니폰 세야쿠사 제조), 페니실린(100unit/mL, Sigma사 제조)과 스트렙토마이신(100μg/mL, Sigma사 제조)을 첨가하여 제조한 배지를 사용하여, 마우스 배성 줄기 세포(마우스 ES 세포: 코스모 바이오사 제조)를 젤라틴(Sigma사 제조)으로 코팅한 6cm 디쉬에 5x105개 파종하고, 지방산 글리세라이드 1 내지 9의 1종 또는 혼합물을 최종 농도가 0.001％가 되도록 배지에 첨가하고, 3일간 배양을 계속하였다.
배양 3일 후에, 세포를 회수하고, PBS(-)로 2회 세정하여, Trizol Reagent(트리졸 시약) (Invitrogen)에 의해 세포로부터 RNA를 추출하였다. 2-STEP 리얼 타임 PCR 키트(Applied Biosystems)를 사용하여, 추출한 RNA를 cDNA로 역전사시킨 후, ABI7300(Applied Biosystems)에 의해, 하기 프라이머 세트를 사용하여 리얼 타임 PCR(95℃: 15초간, 60℃: 30초간, 40 사이클)을 실시하고, Nanog(미분화 마커: Cell Res. 2007 Jan; 17(1):42-9. Review. Nanog and transcriptional networks in embryonic stem cell pluripotency. Pan G, Thomson JA.)의 유전자 발현을 확인하였다. 기타 조작은 정해진 방법에 따라서 실시하였다.
Nanog(미분화 마커)용 프라이머 세트:
ATGCCTGCAGTTTTTCATCC(서열 번호 1)
GAGGCAGGTCTTCAGAGGAA(서열 번호 2)
Gapdh(내부 표준)용 프라이머 세트:
TGCACCACCAACTGCTTAGC(서열 번호 3)
TCTTCTGGGTGGCAGTGATG(서열 번호 4)
미분화 상태 유지 효과는, 배양 개시시의 마우스 ES 세포에 있어서의 Nanog mRNA의 발현량을 내부 표준인 Gapdh mRNA의 발현량에 대한 비율로서 산출한 Nanog의 유전자 상대 발현량(Nanog 유전자 발현량/Gapdh 유전자 발현량)의 값을 100％ 미분화 상태로 하고, 이에 대해, 배양 3일 후의 ES 세포에 있어서의 Nanog의 유전자 상대 발현량의 값을 산출하고, 평가하였다.
이 시험 결과를 이하의 표 2에 나타낸다.
Figure 112017045680218-pct00011
표 2에 나타낸 바와 같이, 지방산 글리세라이드 1 내지 9 모두에서, 현저한 줄기 세포의 미분화 상태 유지 효과가 확인되고, 또한 2종 이상의 지방산 글리세라이드를 병용함으로써 그 효과가 증강되었다. 이상으로부터, 지방산 글리세라이드의 매우 우수한 줄기 세포의 미분화 상태 유지 효과를 명확히 했다. 또한, 본 실험예에서 사용한 줄기 세포 이외에도, 체성 줄기 세포에 대해서도 동일한 시험을 행한 결과, 현저한 줄기 세포의 미분화 상태 유지 효과가 확인되었다.
(실험예 2) 줄기 세포에 대한 증식 촉진 효과의 평가
인간 줄기 세포 배양액(TOYOBO사 제조)을 사용하여 배양한 인간 체성 줄기 세포(DS 파마바이오메디칼사제)를 6cm 디쉬에 3x105개 파종하고, 지방산 글리세라이드 1 내지 9의 1종 또는 혼합물(지방산 글리세라이드 2+3, 지방산 글리세라이드 4+5)을, 최종 농도가 0.001％가 되도록 첨가하고, 3일간 배양을 계속하였다. 또한, 2종의 지방산 글리세라이드의 혼합물을 사용하는 경우, 그 비율은 1:1(중량비)로 하였다.
3일간의 배양 후, 세포를 PBS(-)로 3회 세정한 후, 러버 폴리스맨(rubber policeman)으로 모아서, 각각의 세포수를 카운팅하였다.
지방산 글리세라이드 미첨가시의 총 세포수를 컨트롤로 하고, 컨트롤을 100(％)로 한 경우의, 지방산 글리세라이드 첨가시의 세포수의 증감(％)을 산출하여, 줄기 세포 증식 촉진 효과의 평가를 행하였다.
이 시험 결과를 이하의 표 3에 나타낸다.
Figure 112017045680218-pct00012
표 3에 나타낸 바와 같이, 지방산 글리세라이드 1 내지 9 모두에서, 현저한 줄기 세포 증식 촉진 효과가 확인되었다. 또한, 2종 이상의 지방산 글리세라이드를 병용함으로써 그 효과가 증강되었다. 또한, 상술한 컨트롤의 값을 100％로 한 경우, 배양 개시시의 인간 체성 줄기 세포수는 25％이었다. 이상으로부터, 지방산 글리세라이드의 매우 우수한 줄기 세포 증식 촉진 효과를 명확히 했다. 또한, 본 실험예에서 사용한 줄기 세포 이외에도, 배성 줄기 세포(ES 세포)에 대해서도 동일한 시험을 행한 결과, 현저한 줄기 세포 증식 촉진 효과가 확인되었다.
[실시예 2]
생체 외 창상 치유 시험(스크래치 검정)
창상 치유를 촉진시키는 유효성의 평가 방법으로서, 일반적으로 실시되고 있는 스크래치 검정(일본 특허 공개 제2013-18756호 공보)을 행하였다. 구체적으로는, 인간 체성 줄기 세포를 3.5cm 디쉬에 5x105개 파종하고, 인간 줄기 세포 배양액을 사용하여 전면생장(confluent)이 될 때까지 배양한 후, 디쉬의 저면을 멸균 칩의 선단으로 긁어 내어, 세포 시트에 간극을 제작하였다. 그 후, 지방산 글리세라이드 1 내지 9의 1종 또는 혼합물(지방산 글리세라이드 2+3, 지방산 글리세라이드 4+5)을 최종 농도가 0.001％가 되도록 첨가한 배지로 치환하고, 48시간 후에 세포의 간극의 회복 비율을 평가하였다. 또한, 회복 전후의 화상을 취득할 때에 위상차 현미경 하에서 동일한 구역을 얻을 수 있도록, 상기 스크래치의 근방에, 기준점으로서 이용할 수 있는 표시를 붙였다.
48시간 후의 스크래치 영역은, [48시간 후의 스크래치 영역]=100×[48시간 시점의 스크래치 영역 면적]/[0시간 시점의 스크래치 영역 면적]으로 하여 시판되고 있는 화상 해석 소프트웨어를 사용하여 산출하였다. 이 시험 결과를 이하의 표 4에 나타내었다.
Figure 112017045680218-pct00013
표 4에 나타낸 바와 같이, 지방산 글리세라이드 모두에서, 현저한 생체 외 창상 치유 효과가 확인되었다. 또한, 2종 이상의 지방산 글리세라이드를 병용함으로써 그 효과가 증강되었다.
이상의 각 실험예에 나타낸 바와 같이, 지방산 글리세라이드를 줄기 세포에 적용함으로써, 종래 기술에 비해, 간편하면서도 효율적으로, 미분화 상태를 유지시킨 채 줄기 세포의 증식을 촉진시키는 것이 가능해졌다. 또한, 본 발명의 지방산 글리세라이드는, 매우 우수한 창상 치유 효과를 나타내었다.
[실시예 3]
제품의 처방예
지방산 글리세라이드 1 내지 9의 1종 또는 혼합물을 배합한 제품의 처방예를 이하에 나타내었다. 이하의 처방예에 있어서, 「지방산 글리세라이드」는, 지방산 글리세라이드 1 내지 9의 1종, 또는 지방산 글리세라이드 2와 3의 등량 혼합물, 지방산 글리세라이드 4와 5의 등량 혼합물 중 어느 것을 의미한다.
(처방예 1) 로션
처방 배합량(중량％)
1. 지방산 글리세라이드 0.1
2. 1,3-부틸렌글리콜 8.0
3. 글리세린 2.0
4. 크산탄검 0.02
5. 시트르산 0.01
6. 시트르산나트륨 0.1
7. 에탄올 5.0
8. 파라옥시벤조산메틸 0.1
9. 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유(40 E. O.) 0.1
10. 향료 0.1
11. 정제수 잔량
성분 2 내지 6 및 11과, 성분 1 및 7 내지 10을 각각 균일하게 용해시킨 후, 양자를 혼합해서 여과하고, 로션을 제조한다.
(처방예 2) 크림
처방 배합량(중량％)
1. 지방산 글리세라이드 0.1
2. 스쿠알란 5.5
3. 올리브유 3.0
4. 스테아르산 2.0
5. 밀랍 2.0
6. 미리스트산옥틸도데실 3.5
7. 폴리옥시에틸렌세틸에테르(20 E. O.) 3.0
8. 베헤닐알코올 1.5
9. 모노스테아르산글리세린 2.5
10. 향료 0.1
11. 파라옥시벤조산메틸 0.2
12. 파라옥시벤조산에틸 0.05
13. 1,3-부틸렌글리콜 8.5
14. 정제수 잔량
성분 1 내지 9를 가열 용해시켜 혼합하고, 70℃로 유지하여 유상으로 한다. 성분 11 내지 14를 가열 용해시켜 혼합하고, 75℃로 유지하여 수상으로 한다. 계속해서, 유상에 수상을 가하여 유화시키고, 뒤섞으면서 냉각시키며, 45℃에서 성분 10을 첨가하고, 추가로 30℃까지 냉각시켜 제품으로 한다.
(처방예 3) 유액
처방 배합량(중량％)
1. 지방산 글리세라이드 0.1
2. 스쿠알란 5.0
3. 올리브유 5.0
4. 호호바유 5.0
5. 세탄올 1.5
6. 모노스테아르산글리세린 2.0
7. 폴리옥시에틸렌세틸에테르(20 E. O.) 3.0
8. 폴리옥시에틸렌소르비탄모노올레에이트(20 E.0.) 2.0
9. 향료 0.1
10. 프로필렌글리콜 1.0
11. 글리세린 2.0
12. 파라옥시벤조산메틸 0.2
13. 정제수 잔량
성분 1 내지 8을 가열 용해시켜 혼합하고, 70℃로 유지하여 유상으로 한다. 성분 10 내지 13을 가열 용해시켜 혼합하고, 75℃로 유지하여 수상으로 한다. 유상에 수상을 가하여 유화시키고, 뒤섞으면서 냉각시키며, 45℃에서 성분 9를 첨가하고, 추가로 30℃까지 냉각시켜 제품으로 한다.
(처방예 4) 겔제
처방 배합량(중량％)
1. 지방산 글리세라이드 0.1
2. 에탄올 5.0
3. 파라옥시벤조산메틸 0.1
4. 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 0.1
5. 향료 적량
6. 1,3-부틸렌글리콜 5.0
7. 글리세린 5.0
8. 크산탄검 0.1
9. 카르복시비닐 중합체 0.2
10. 수산화칼륨 0.2
11. 정제수 잔량
성분 1 내지 5와, 성분 6 내지 11을 각각 균일하게 용해시키고, 양자를 혼합하여 제품으로 한다.
(처방예 5) 연고
처방 배합량(중량％)
1. 지방산 글리세라이드 2.0
2. 폴리옥시에틸렌세틸에테르(30 E. O.) 2.0
3. 모노스테아르산글리세린 10.0
4. 유동 파라핀 5.0
5. 세탄올 6.0
6. 파라옥시벤조산메틸 0.1
7. 프로필렌글리콜 10.0
8. 정제수 잔량
성분 1 내지 5를 가열 용해시켜 혼합하고, 70℃로 유지하여 유상으로 한다. 성분 6 내지 8을 가열 용해시켜 혼합하고, 75℃로 유지하여 수상으로 한다. 유상에 수상을 가하여 유화시키고, 뒤섞으면서 30℃까지 냉각시켜 제품으로 한다.
(처방예 6) 팩
처방 배합량(중량％)
1. 지방산 글리세라이드 0.1
2. 폴리비닐알코올 12.0
3. 에탄올 5.0
4. 1,3-부틸렌글리콜 8.0
5. 파라옥시벤조산메틸 0.2
6. 파라옥시에틸렌 경화 피마자유(20 E. O.) 0.5
7. 시트르산 0.1
8. 시트르산나트륨 0.3
9. 향료 적량
10. 정제수 잔량
성분 1 내지 10을 균일하게 용해시켜 제품으로 한다.
(처방예 7) 정제
처방 배합량(중량％)
1. 지방산 글리세라이드 1.0
2. 건조 옥수수 전분 25.0
3. 카르복시메틸셀룰로오스칼슘 20.0
4. 미결정 셀룰로오스 40.0
5. 폴리비닐피롤리돈 8.0
6. 탈크 6.0
성분 1 내지 5를 혼합하고, 계속해서 10％의 물을 결합제로서 첨가하여, 압출 조립(造粒) 후 건조시킨다. 성형한 과립에 성분 6을 첨가하여 혼합하여 타정한다. 1정 0.52g으로 한다.
(처방예 8) 음료
처방 배합량(중량％)
1. 지방산 글리세라이드 0.1
2. 스테비아 0.05
3. 말산 5.0
4. 향료 0.1
5. 정제수 잔량
성분 1 내지 4를 성분 5의 일부의 정제수에 교반 용해시킨다. 계속해서, 성분5의 나머지 정제수를 첨가하여 혼합하고, 90℃에서 가열하여 50mL의 유리병에 충전한다.
본 발명의 활용예로서, 재생 의료나 재생 미용에 대한 응용이 기대된다. 예를 들어, 본 발명을 이용함으로써, 재생 의료나 재생 미용에 사용되는 미분화 상태의 줄기 세포를 간편하게 효율적으로 제조하는 것이 가능해진다. 또한, 줄기 세포의 이식 후 또는 조직에 존재하는 줄기 세포에 대하여, 본 발명에 따른 지방산 글리세라이드를, 직접적으로 주입하든지 또는 경구 투여, 도포, 부착 등에 의해 적용함으로써, 상기 줄기 세포를, 미분화 상태를 유지시킨 채 증식시키는 것이 가능하다. 또한, 본 발명에 따른 지방산 글리세라이드는 우수한 창상 치유제로서의 이용이 가능하다.
즉, 본 발명은, 재생 의료나 재생 미용에 있어서의, 줄기 세포의 제조 방법 및/또는 줄기 세포의 미분화 상태 유지제 또는 증식 촉진제, 또는 창상 치유제로서의 이용이 가능하다.
본 명세서에서 인용한 모든 간행물, 특허 및 특허출원은 그대로 참고로서 본 명세서에 원용하는 것으로 한다.
SEQUENCE LISTING <110> Nippon Menard Cosmetic Co., Ltd. <120> An agent for maintaining undifferentiation status of stem cells and promoting proliferation of stem cells <130> PH-6364-PCT <150> JP 2014-226389 <151> 2014-11-06 <160> 4 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer <400> 1 atgcctgcag tttttcatcc 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer <400> 2 gaggcaggtc ttcagaggaa 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer <400> 3 tgcaccacca actgcttagc 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer <400> 4 tcttctgggt ggcagtgatg 20

Claims (12)

  1. 하기 일반식(I)로 나타내어지는 지방산 글리세라이드의 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 유효 성분으로서 함유하는, 줄기 세포의 미분화 상태 유지제.
    Figure 112017045680218-pct00014

    (식 중, R1, R2, R3 중 적어도 1개는 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내고, 나머지는 포화 지방산 유래의 아실기 또는 수소 원자를 나타낸다.)
  2. 하기 일반식(I)로 나타내어지는 지방산 글리세라이드의 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 유효 성분으로서 함유하는, 줄기 세포의 증식 촉진제.
    Figure 112017045680218-pct00015

    (식 중, R1, R2, R3 중 적어도 1개는 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내고, 나머지는 포화 지방산 유래의 아실기 또는 수소 원자를 나타낸다.)
  3. 하기 일반식(I)로 나타내어지는 지방산 디글리세라이드의 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 유효 성분으로서 함유하는, 창상 치유제.
    Figure 112018122500698-pct00016

    (식 중, R1, R2, R3 중 2개는 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내거나, 또는 포화 지방산 유래의 아실기 및 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내고, 나머지는 수소 원자를 나타낸다.)
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 불포화 지방산이, 도코사헥사엔산, 에이코사펜타엔산, 아라키돈산, α-리놀렌산, γ-리놀렌산, 리놀레산, 올레산으로 이루어지는 군에서 선택되는 불포화 지방산인, 제제.
  5. 하기 일반식(I)로 나타내어지는 지방산 디글리세라이드의 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 함유하는, 줄기 세포의 증식 촉진용 화장품 조성물.
    Figure 112018122500698-pct00021

    (식 중, R1, R2, R3 중 2개는 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내거나, 또는 포화 지방산 유래의 아실기 및 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내고, 나머지는 수소 원자를 나타낸다.)
  6. 하기 일반식(I)로 나타내어지는 지방산 디글리세라이드의 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 함유하는, 주름, 처짐, 기미, 잡티, 피부 거칠음, 피부 비후, 모공의 열림, 여드름 자국, 창상, 반흔, 켈로이드, 박모 또는 탈모의 치료, 개선 또는 예방을 위한 의약품 또는 의약부외품 조성물.
    Figure 112018122500698-pct00022

    (식 중, R1, R2, R3 중 2개는 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내거나, 또는 포화 지방산 유래의 아실기 및 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내고, 나머지는 수소 원자를 나타낸다.)
  7. 하기 일반식(I)로 나타내어지는 지방산 디글리세라이드의 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 함유하는, 줄기 세포의 증식 촉진용 음식품 조성물.
    Figure 112018122500698-pct00023

    (식 중, R1, R2, R3 중 2개는 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내거나, 또는 포화 지방산 유래의 아실기 및 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내고, 나머지는 수소 원자를 나타낸다.)
  8. 줄기 세포를, 하기 일반식(I)로 나타내어지는 지방산 글리세라이드의 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 함유하는 배지에서 배양하는 공정을 포함하는, 줄기 세포의 배양 방법.
    Figure 112018122500698-pct00017

    (식 중, R1, R2, R3 중 적어도 1개는 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내고, 나머지는 포화 지방산 유래의 아실기 또는 수소 원자를 나타낸다.)
  9. 줄기 세포를, 하기 일반식(I)로 나타내어지는 지방산 글리세라이드의 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 함유하는 배지에서 배양하는 공정을 포함하는, 줄기 세포의 미분화 상태 유지 방법.
    Figure 112017045680218-pct00018

    (식 중, R1, R2, R3 중 적어도 1개는 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내고, 나머지는 포화 지방산 유래의 아실기 또는 수소 원자를 나타낸다.)
  10. 줄기 세포를, 하기 일반식(I)로 나타내어지는 지방산 글리세라이드의 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 함유하는 배지에서 배양하는 공정을 포함하는, 줄기 세포의 증식 촉진 방법.
    Figure 112017045680218-pct00019

    (식 중, R1, R2, R3 중 적어도 1개는 탄소수 16 내지 22의 불포화 지방산 유래의 아실기를 나타내고, 나머지는 포화 지방산 유래의 아실기 또는 수소 원자를 나타낸다.)
  11. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 불포화 지방산이, 도코사헥사엔산, 에이코사펜타엔산, 아라키돈산, α-리놀렌산, γ-리놀렌산, 리놀레산, 올레산으로 이루어지는 군에서 선택되는 불포화 지방산인, 방법.
  12. 제5항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 불포화 지방산이, 도코사헥사엔산, 에이코사펜타엔산, 아라키돈산, α-리놀렌산, γ-리놀렌산, 리놀레산, 올레산으로 이루어지는 군에서 선택되는 불포화 지방산인, 조성물.
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