KR101984579B1 - 아토피 피부염의 예방 및 치료용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 아토피 피부염의 예방 및 치료의 효능이 우수하고 세포독성이 없어 부작용 없이 안전하게 사용할 수 있는 천연물 소재의 아토피 피부염의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 패모 추출물과 시호 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
Description
본 발명은 아토피 피부염의 예방 및 치료를 위한 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 아토피 피부염의 예방 및 치료의 효능이 우수하고 세포독성이 없어 부작용 없이 안전하게 사용할 수 있는 천연물 소재의 아토피 피부염의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.
아토피(Atopy) 피부염은 피부건조, 습진 등의 다양한 증상을 나타내는 소양감이 심한 재발성의 만성 피부염으로, 유전적 환경적 면역학적인 원인으로 인해 피부 가장 바깥에 있는 피부 보호벽인 각질층에 이상이 생긴 것으로 건조한 기후에서 더욱 심해지는 알레르기 질환이다. 아토피 피부염은 다양한 원인이 복잡하게 뒤엉켜 발병하고 완화와 재발을 반복한다. 아토피 피부염의 발생기전은 아직 명확하게 밝혀지지 않았으나, 피부 안의 염증반응(INSIDE)과 피부 바깥의 장벽 기능 이상(OUTSIDE)이 중요한 두 축을 이루면서 상호작용을 하는 것으로 보인다. 알레르기 반응은 거의 대부분 비만세포를 매개로 일어나는데, 히스타민, 프로스타글란딘, 종양괴사인자(TNF)를 포함한 화학 전달물질들이 알레르기 반응의 초기에 볼 수 있는 여러 가지 임상증상을 유발하는 원인물질들이다.
아토피 피부염은 상당히 많은 사람들이 앓고 있는데, 전 인구의 0.5~1%, 어린이의 경우 5~10%가 아토피 피부염으로 고통을 받고 있다. 환자의 50%는 두 돌 이내에 치유되나 25%는 청소년기까지 가며, 나머지 25%는 성인이 되어도 아토피 피부염이 없어지지 않고 계속된다.
아토피 피부염의 주요 증상은 심한 가려움증, 피부건조, 발진, 진물, 부스럼딱지, 비늘 같은 껍질이 있는 피부(인비늘) 등이다. 그 중 무엇보다도 심한 가려움증이 특징이다.
아토피 체질을 근본적으로 고칠 수 없으므로 아토피 피부염은 완치를 목표로 하기보다는 유발 인자를 피하고 적절한 치료를 통해 조절해나가는 질병이라고 할 수 있다. 아토피 피부염에 대한 처방은 스테로이드제, 항히스타민제, 항생제 등과 같은 약물요법이 주로 이루어지고 있다. 스테로이드제(부신피질호르몬제)는 크게 소염작용과 면역억제 작용이 있으며 효과가 우수하지만, 장기간 바르면 피부약화, 전신 호르몬증상, 중독성 등의 부작용이 나타날 수 있다. 항히스타민제는 비만세포에서 히스타민이 유리되지 못하도록 하여 가려운 증상을 경감시키나 임시방편으로 사용하는 것으로 장기간 복용 시 불면, 불안, 식욕감퇴 등의 부작용이 있을 수 있다. 항생제는 최근 슈퍼 박테리아의 출현으로 남용으로 인한 폐해가 심각하게 대두되고 있다. 따라서 아토피 피부염에 효과가 있으면서도 부작용이 없는 새로운 개념의 아토피 피부염 치료 조성물이 요구되고 있다.
패모(Fritillaria thunbergii)는 백합과(Lilaceae)에 속하는 식물로서, 패모의 구근(球根)은 종양 및 유방암과 같은 항암효과 및 고혈압 강하 작용을 가지고, 기침, 가래, 폐렴, 편도염, 인후동통, 기관지염, 구갈에 효과가 있으며, 베인 상처, 종기, 벌레 물린 데에 효과가 있어 한약재로 사용되어 왔다. 최근에는 패모에 함유된 페이미닌이 아토피 피부염과 관련된 신호 경로에 직접적으로 작용하여 항아토피 효과를 나타내는 것이 보고된 바 있다(공개특허 10-2017-0129636).
시호(Bupleuri Radix ; Bupleurum falcatum L.)는 한방에서는 진정효과와 발한제로 사용되며 고열성체질의 감기약을 지을 때 처방되고, 진통 해독제로 가슴이 답답한 심하번열, 한열왕래, 가슴과 옆구리가 결리는 증상에도 필수적으로 쓰며 두통, 간담열, 황달, 변비증, 악창, 제암, 늑막염, 해소 등에 쓰이는 중요한 약재로 보고되어 있다. 특히 흥분성 질환에는 가장 유효한 약재로 히스테리 증상에 효과를 볼 수 있고 고열을 수반하는 감기, 두통 증상에는 반드시 처방 배합되는 약초이다. 시호에는 사포닌이 3%이상 함유되어 있어 항산화 작용과 더불어 강심제나 이뇨제로서 강한 작용이 있어 옛날부터 한방약으로 사용되어 왔다.
본 발명은 부작용이 없고 안전하면서도 천연물 추출물의 상승작용에 의해 아토피 피부염에 대한 예방 및 치료효과가 우수한 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
전술한 목적을 달성하기 위한 본 발명은 패모 추출물과 시호 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
패모 추출물과 시호 추출물은 하기 실시예에서, 각질형성세포에서 아토피 요인에 의해 비정상적으로 발현이 증가하는 CCL17/TARC과 히스타민의 유리를 억제하였으며, 이들을 혼합 처리하는 경우 각각의 추출물을 처리한 것에 비해 그 효능이 현저하게 증가하였다. 이는 패모 추출물과 시호 추출물에 함유된 성분들이 혼합되었을 때, 예기치 않게 아토피 유발 경로를 저해하는 상승작용을 나타내는 것을 의미한다.
본 발명의 조성물에서 패모 추출물과 시호 추출물의 중량비는 1:5 ~ 5:1인 것이 바람직하였다. 하기 실시예에서는 특정 비율의 조성물에 대한 결과만을 도시하였으나, 상기 범위에서 패모 추출물과 시호 추출물을 혼합하였을 때 아토피 피부염에 대한 효능에 상승 작용을 나타내었다. 상기 범위를 벗어나는 경우 역시 아토피 피부염에 대한 효능은 나타내었으나, 상승 작용은 미약하여 각각의 추출물을 사용하는 경우의 효능과는 큰 차이를 나타내지 않았다.
상기 패모나 시호의 추출물은 당업계에서 천연물의 추출에 사용되는 방법 중 어느 것을 사용하여도 무방하며, 예를 들면 냉침, 열추출, 가압추출, 초음파추출 등을 사용할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 일 예로 상기 추출물은 C1~C4의 저급 알콜과 물 중 하나 또는 둘 이상의 혼합물을 사용하여 추출하여 제조할 수 있다. 추출은 단순히 용매에 침지하는 것에 의해 이루어질 수 있으나, 단시간 내에 추출 효율을 높일 수 있도록 초음파를 사용하거나 가온, 가압하며 추출할 수도 있다. 또한 추출이 더욱 효율적일 수 있도록 패모나 시호는 작은 조각으로 분쇄 또는 마쇄하여 추출할 수도 있다. 상기 추출 시 용매의 양은 패모 또는 시호 중량의 2~50배의 부피비로 사용할 수 있다. 용매의 사용량이 증가할수록 추출 효율이 증가하므로 50배보다 많은 용매를 사용한다고 해서 문제가 되는 것은 아니지만, 공정의 효율성이나 경제성을 고려한다면 용매의 양은 50배 이하인 것이 바람직하다. 또한 동일한 양의 용매를 사용하면서도 추출 효율을 증가시키기 위해서는 추출 횟수를 증가시키는 것이 좋다. 또한 패모 추출물과 시호 추출물의 혼합물은 패모와 시호를 각각 추출하여 혼합할 수도 있으나, 추출 시 패모와 시호를 혼합하여 한꺼번에 추출하여도 무방하다.
상기 방법에 의해 얻어진 추출물은 그 자체로 사용하거나, 혹은 유효성분의 함량을 더 높일 수 있도록 분획하여 사용할 수 있다. 유효성분의 함량이 높은 분획물은 다양한 용매를 사용한 반복실험에 의해 용이하게 제조할 수 있다. 또한, 상기 추출물 또는 분획물은 농축하거나 건조하여 사용할 수 있는데, 건조방법 역시 분무건조, 열건조, 동결건조 등 통상의 방법을 사용할 수 있음은 당연하다.
본 발명의 조성물은 치료용 약제로 이용하기 위해서 약제학적 분야에서 공지의 방법에 의하여 제조될 수 있으며, 그 자체 또는 약학적으로 허용되는 담체, 부형제, 희석제 등과 혼합하여 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구 투여용 제제로 제형화하여 아토피 피부염의 치료 및 예방제로 사용할 수 있다. 본 발명에 따른 유효성분의 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 제제의 형태, 환자의 연령 및 상태, 성별, 증상의 정도 등에 따라 적절히 선택될 수 있으며, 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 일반적인 투여량은 0.001mg/kg·일~10g/kg·일이다. 본 발명의 조성물은 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 처방 시에도 안심하고 사용할 수 있다.
또한 본 발명은 패모 추출물과 시호 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 증상 개선용 건강식품 조성물에 관한 것이다. 상기 식품 조성물은 건강식품으로서 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제 등의 형태로 제형화하여 사용할 수 있으며, 또는 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제의 첨가물로 사용할 수 있다. 상기 혼합물은 본 발명의 식품 조성물에 바람직하게는 0.01~100 중량%로 하여 첨가될 수 있다.
본 발명은 또한 패모 추출물과 시호 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 특히 아토피 피부염과 여드름과 같은 피부 염증을 예방 및 개선하는 화장료로 사용될 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물에는 상기 혼합물이 0.1~100 중량%의 비율로 함유될 수 있다. 상기 조성물은 화장품 분야에서 널리 사용되는 다른 첨가제와 함께 사용될 수 있으며, 스킨, 스킨로션, 스킨소프트너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 영양로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양크림, 마사지크림, 모이스쳐크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징 폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디클렌저, 바디로션, 샴푸, 유액, 파운데이션, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도우 등의 제형에 포함될 수 있다.
이상과 같이 본 발명의 조성물에 의하면 패모 추출물과 시호 추출물의 혼합에 의해 이들 각각이 나타내는 항아토피 효과가 상승작용을 나타내어 아토피 피부염의 예방 및 치료/증상 개선에 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 세포 독성을 나타내지 않아 안전하게 사용할 수 있으므로, 약학 조성물 뿐 아니라, 건강 보조 식품이나 식품 첨가물, 화장료 조성물로써 장기간 사용 시에도 안전하게 사용할 수 있으므로 아토피 피부염의 예방 및 치료/증상 개선에 효율적으로 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 추출물의 세포독성 평가 결과를 보여주는 그래프.
도 2는 본 발명의 추출물이 CCL17/TARC 발현에 미치는 영향을 보여주는 그래프.
도 3은 본 발명의 추출물이 히스타민 유리에 미치는 영향을 보여주는 그래프.
도 2는 본 발명의 추출물이 CCL17/TARC 발현에 미치는 영향을 보여주는 그래프.
도 3은 본 발명의 추출물이 히스타민 유리에 미치는 영향을 보여주는 그래프.
이하 첨부된 실시예를 들어 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 그러나 이러한 실시예는 본 발명의 기술적 사상의 내용과 범위를 쉽게 설명하기 위한 예시일 뿐, 이에 의해 본 발명의 기술적 범위가 한정되거나 변경되는 것은 아니다. 이러한 예시에 기초하여 본 발명의 기술적 사상의 범위 안에서 다양한 변형과 변경이 가능함은 당업자에게는 당연할 것이다.
[실시예]
실시예 1 : 추출물의 제조
1) 패모 추출물의 제조
패모는 대전 시내 한약방에서 구입하여 세척한 후 건조하였다. 건조된 패모에 5배(w/w)의 에탄올을 투입한 후 가압조건에서 121℃로 가열하여 30분간 가열하였다. 추출액을 냉각하여 여과한 후 여과액을 감압 농축기로 농축하고, 진공 동결건조하였다(수율 ~12%). 건조된 시료는 냉장 보관하며, 하기 실시예에 사용하였다.
2) 시호 추출물의 제조
시호는 대전 시내 한약방에서 구입하여 세척한 후 건조하였다. 건조된 시호에 5배(w/w)의 에탄올을 투입한 후 가압조건에서 121℃로 가열하여 30분간 가열하였다. 추출액을 냉각하여 여과한 후 여과액을 감압 농축기로 농축하고, 진공 동결건조하였다(수율 ~15%). 건조된 시료는 냉장 보관하며, 하기 실시예에 사용하였다.
실시예 2 : 세포독성 확인
각질세포인 HaCaT 세포는 한국 세포주 은행(Korean Cell Line Bank, KCLB)에서 구입하였으며, 10% 소태아혈청(FBS), 1% penicillin/streptomycin을 함유하는 DMEM 배지, 5% CO2, 37℃의 배양기에서 배양하였다.
HaCaT 세포를 96-웰 플레이트에 1×105 세포/웰의 농도로 접종한 후 24시간 배양하고 배지를 교체하였다. 각 웰에 실시예 1에서 준비한 패모 추출물 또는 시호 추출물 또는 이들의 1:1 혼합물(w/w)을 DMSO에 녹여 10 ㎍/㎖의 농도로 처리하였다. 음성 대조군으로는 용매인 DMSO(dimethyl sulfoxide)를 첨가하였다. 24시간 동안 37℃, 5% CO2 배양기에서 추가로 배양한 후, 세포 독성을 측정하기 위하여 2㎎/㎖ 농도의 MTT(USB, Cleveland, Ohio, USA) 용액 10㎍을 넣어주었다. 2시간 동안 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하고 MTT 용액을 제거한 후, DMSO 200㎕를 30분간 처리하였다. Biotek Synergy HT plate reader(Biotek, Winooski, VT, USA)를 이용하여 545nm에서 흡광도를 측정하여 세포 생존율을 측정하고, 그 결과를 도 1에 도시하였다.
도 1에서 확인할 수 있듯이, 패모 추출물과 시호 추출물 및 이들의 혼합물은 모두 세포 생존율에 영향을 미치지 않아 세포 독성을 나타내지 않는 것을 확인할 수 있었다.
실시예 3 : CCL17/TARC 발현에 대한 추출물의 영향 평가
TARC(thymus and activation-regulated chemokine) 단백질은 human T-cell line과 PBMCs(peripheral blood mononuclear cells)에서 발현되는 chemokine으로 CC chemokine receptor 4(CCR4)를 경유하여 염증부위로 세포의 이동과 침윤을 유도하는 것으로 알려져 있다. 아토피 피부염은 면역학적 요인에 의해 각질형성세포의 증식이 비정상적으로 일어나는 현상이라고 할 수 있는데, 각질형성세포를 IFN-γ(interferon-γ)나 TNF-α(tumor necrosis factor-α)에 노출시키면 CCL17/TARC의 발현이 비정상적으로 증가한다고 알려져 있다. 이에 CCL17/TRAC의 발현을 측정하는 것에 의해 추출물의 항아토피 효능을 검정하였다.
HaCaT 세포를 12 well에 분주하여 24시간 배양한 후 실시예 1에서 준비한 패모 추출물 또는 시호 추출물 또는 이들의 1:1 혼합물(w/w)을 10 ㎍/㎖의 농도로 1시간동안 전처리하였다. 1시간 후 TNF-α 10 ng/mL과 IFN-γ 10 ng/mL로 자극하여 24시간 배양하였다. 배양액을 원심분리하여 상층액을 취하고, human CCL17/TARC kit(R&D systems)를 사용하여 제조자의 매뉴얼에 따라 배양액 중 포함된 TARC의 함량을 측정하였다.
보다 구체적으로, Plate에 Assay Diluent RD1W를 100 μL를 넣고 Calibrator Diluent RD5-5를 이용하여 2000 pg/mL부터 단계적으로 희석한 standard와 세포 배양액을 각각 50 ㎕씩 넣고 상온에서 2시간 반응시켰다. Wash buffer를 이용하여 세척 후 Human TARC Conjugate 200 ㎕를 넣고 다시 상온에서 1시간 반응시키고 세척한 후 Color Reagents A와 B를 동등량 혼합한 substrate solution을 상온에서 차광하여 30분간 반응시켰다. 그 후 50 ㎕의 stop solution을 추가하고 microplate reader를 사용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.
도 2는 그 결과를 보여주는 그래프로, 도 2에서 C는 TNF-α/IFN-γ를 처리하지 않은 대조군, TNF-α/IFN-γ는 TNF-α와 IFN-γ를 처리한 후 추출물을 처리하지 않은 군, A는 패모 추출물의 처리군, B는 시호 추출물의 처리군, A+B는 패모 추출물과 시호 추출물의 혼합처리군을 의미한다. 도 2는 패모 추출물과 시호 추출물 각각이 CCL17/TARC의 발현을 억제하며, 이러한 억제능은 패모 추출물과 시호 추출물을 혼합하여 처리하는 경우 배가되는 것을 명확하게 보여준다. 이는 패모 추출물과 시호 추출물의 혼합 처리가 각각의 추출물의 처리보다 아토피 피부염의 치료에 현저한 효과를 나타냄을 시사한다.
실시예 4 : 추출물의 히스타민 억제능 평가
히스타민은 염증 유도 시 가장 빠르게 유리되는 화학 매개체로서 말초혈관에 대한 투과성 항진과 확장작용, 기관지 평활근에 대한 수축작용, 점막표면에 대한 선상세포의 분비항진 작용 등을 나타내어 과민반응 및 만성 염증반응을 일으킨다. 따라서 추출물의 histamine 유도 억제능을 평가하여 항염증 효과를 확인하였다.
실시예 2와 동일한 방법에 의해 추출물과 TNF-α 및 IFN-γ를 처리한 후 배양 상층액을 얻고, human histamine asssay kit (Abebio)를 사용하여 제조사의 매뉴얼에 따라 배양액 중 포함된 histamine의 함량을 측정하였다.
구체적으로는, Plate에 standard와 상층액 시료 100 μL를 넣고 37℃에서 2시간 배양한 뒤 3번 세척하였다. Biotin-conjugate를 100 ㎕ 처리하고 1시간동안 37℃에서 배양 후 3번 세척하였으며, streptavidin-HRP를 100 ㎕를 첨가하여 1시간동안 37℃에서 배양하여 표지하였다. 100 ㎕의 substrate solution을 첨가 후 37℃에서 15-20분간 배양한 뒤, 50 ㎕의 stop solution을 추가하고 microplate reader를 사용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다.
도 3은 그 결과를 보여주는 그래프로, 도 3의 각 군에 대한 설명은 도 2와 동일하다. 도 3은 패모 추출물 또는 시호 추출물도 히스타민의 유리를 억제하는 효능이 있으나, 이들을 혼합물로 처리하는 경우 그 효과가 훨씬 현저함을 보여준다. 이는 도 2의 결과와 일치하는 것으로, 이는 패모 추출물과 시호 추출물의 혼합 처리가 각각의 추출물의 처리보다 아토피 피부염의 치료에 현저한 효과를 나타냄을 시사한다.
Claims (5)
- 패모 추출물과 시호 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 치료용 약학 조성물.
- 제 1 항에 있어서,
상기 혼합물 중 패모 추출물과 시호 추출물의 중량비는 1:5 ~ 5:1인 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 치료용 약학 조성물.
- 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 패모 추출물 또는 시호 추출물은 물과 C1~C4의 저급알콜로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 또는 둘 이상의 혼합물을 용매로 사용하여 패모 또는 시호를 추출한 추출물 또는 그의 분획물인 것을 특징으로 하는 아토피 피부염 치료용 약학 조성물.
- 패모 추출물과 시호 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 증상 개선용 건강식품 조성물.
- 패모 추출물과 시호 추출물의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물.
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102107748B1 (ko) * | 2019-08-30 | 2020-05-08 | 주식회사 아제라바이오텍 | 불로화, 오미자, 시호의 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 가려움증 완화 및 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물 |
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| KR20170129636A (ko) | 2016-05-17 | 2017-11-27 | 경희대학교 산학협력단 | 페이미닌을 포함하는 아토피 피부염의 예방 및 치료용 조성물 |
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2017
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