KR101974675B1

KR101974675B1 - 비알콜성 지방간염 및 비알콜성 지방간 질환의 치료를 위한 갈락토-람노갈락투로네이트 조성물

Info

Publication number: KR101974675B1
Application number: KR1020147009796A
Authority: KR
Inventors: 피터 지. 트래버; 엘리에제르 줌머; 아나톨 에이. 클리요소브
Original assignee: 갈렉틴 테라퓨틱스, 인크.
Priority date: 2011-09-16
Filing date: 2012-09-14
Publication date: 2019-05-02
Also published as: CA2848711A1; EP2755480B1; US20130171151A1; AU2012308491B2; BR112014006220A2; ES2869884T3; EP2755480A1; JP6185473B2; EP2755480A4; KR20140107180A; MX360979B; US8658787B2; AU2012308491A1; US20130259870A1; IL231512A0; JP2014526513A; CA2848711C; MX2014003213A; WO2013040316A1; IL231512B

Abstract

본 발명의 양상은 비알콜성 지방간염 및 연관된 간 섬유증의 치료 방법을 제공한다. 특히, 본 발명의 양상은 비알콜성 지방간염 및 연관된 간 섬유증의 치료를 위한 갈락토-람노갈락투로네이트 화합물을 포함하는 치료 제형의 용도에 관한 것이다.

Description

비알콜성 지방간염 및 비알콜성 지방간 질환의 치료를 위한 갈락토-람노갈락투로네이트 조성물{GALACTO-RHAMNOGALACTURONATE COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF NON-ALCOHOLIC STEATOHEPATITIS AND NON-ALCOHOLIC FATTY LIVER DISEASE}

관련 출원의 상호 참조( CROSS - REFERENCE TO RELATED APPLICATIONS)

본 출원은 각각의 전체 개시 내용이 본원에서 참고로서 그들의 전체가 인용된 2011년 9월 16일자 출원된 미국 가 출원 일련 번호 제61/535,655호 및 2012 년 6월 6일자 출원된 미국 가 출원 일련 번호 제61/656,288호를 우선권으로 주장한다.

발명의 배경

비알콜성 지방간 질환(NAFLD) 및 지방간염(NASH)은 미국에서 일반적인 간 장애이다. 조직병리학적으로, 이들 장애는 알콜성 간 질환과 유사하지만, 이들은 음주를 조금 하거나 또는 거의 하지 않는 사람들에게 나타난다. 간에서 병리학적 변화는 이것으로 제한되는 것은 아니지만, 간세포 내의 지방 축적, 간세포 변성, 염증 세포의 침윤, 과잉 섬유 조직의 침착, 간세포 결절 형성, 경화, 및 간세포 암종을 포함한다. 지금까지 이들 장애에 대한 구체적인 치료는 존재하지 않는다. 따라서, 간 섬유증과 연관되거나 또는 연관되지 않은 비알콜성 지방간염의 치료을 위한 방법을 제공할 필요가 있다.

발명의 요약

본 발명의 양상은 지방간, 비알콜성 지방간 질환(NALFD), 비알콜성 지방간염 (NASH), 간 섬유증이 있는 비알콜성 지방간염, 경화가 있는 비알콜성 지방간염, 또는 경화 및 간세포 암종이 있는 비알콜성 지방간염을 갖는 피험자에게, 비경구 또는 장내 투여를 위한 허용 가능한 약학적 담체 내에 갈락토오스 함유 폴리사카라이드 화합물을 포함하는 치료 조성물을 사용하는 치료 방법에 관한 것이다. 몇몇 양상에서, 본 발명은 지방간, NALFD, NASH, 간 섬유증이 있는 NASH, 경화가 있는 NASH, 또는 경화 및 간세포 암종이 있는 NASH의 치료를 위한 갈락토-람노갈락투로네이트 화합물을 갖는 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 다른 양상은 지방간, NALFD, NASH, 간 섬유증이 있는 NASH, 경화가 있는 NASH, 또는 경화 및 간세포 암종이 있는 NASH의 치료를 위한 약학 조성물의 제조에서 갈락토-람노갈락투로네이트 화합물의 용도에 관한 것이다. 몇몇 실시양태에서, 갈락토-람노갈락투로네이트 및 치료제를 갖는 혼합제는 지방간, NALFD, NASH, 간 섬유증이 있는 NASH, 경화가 있는 NASH, 또는 경화 및 간세포 암종이 있는 NASH의 치료를 위한 약학 조성물의 제조에서 또는 치료를 위해 사용될 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 갈락토오스 함유 폴리사카라이드 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트 또는 갈락토아라비노-람노갈락투로네이트이다.

몇몇 실시양태에서, 그 방법은 허용 가능한 약학적 담체 내에 갈락토-람노갈락투로네이트 화합물을 포함하는 비경구 또는 장내 투여용 조성물을 수득하는 단계; 비경구 투여를 위한 조성물의 유효 용량을 피험자에게 투여하는 단계를 포함하며, 피험자는 지방간, NALFD, NASH, 간 섬유증이 있는 NASH, 경화가 있는 NASH, 또는 경화 및 간세포 암종이 있는 NASH 중의 하나를 갖는다.

몇몇 실시양태에서, 조성물의 유효 용량은, 이를 필요로 하는 피험자에게 투여될 때, NALFD 또는 NASH의 중증도 그레이딩 스코어링 시스템(grading scoring system)에서 1 포인트 이상의 감소, NASH 활성의 혈청 마커 레벨의 감소, NASH 질환 활성의 감소 또는 NASH의 의학적 결과 감소를 유도할 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 조성물의 유효 용량은, 이를 필요로 하는 피험자에게 투여될 때, 간세포 내의 마이크로-소수포(micro-vesicular) 및 매크로-소수포(macro-vesicular) 지방 입자의 평가에 의해 또는 이것으로 제한되는 것은 아니지만 초음파 또는 자기 공명을 포함하는 비침습 영상 방법에 의해 간 조직학적 섹션으로부터 측정된 바의 간(지방증)에서 지방의 축적 감소를 유도할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 간에서 지방의 축적은 영상 분석에 의해 또는 NAFLD 그레이딩 시스템에 따른 등급 및 지방이 있는 간세포의 백분율로 평가하였을 때 10% 이상 감소 된다.

몇몇 실시양태에서, 조성물의 유효 용량은, 이를 필요로 하는 피험자에게 투여될 때, 독성 및 세포 부피 조절에 대한 불능성을 나타내는 간세포의 팽윤의 평가에 의해 간 조직학적 섹션으로부터 구하는 것으로서 간세포 팽창(hepatocyte ballooning)의 감소를 유도할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 간세포 팽창은 NAFLD 그레이딩 시스템에 따른 등급 및 팽윤 간세포의 백분율로 평가하였을 때 10% 이상 감소 된다.

몇몇 실시양태에서, 조성물의 유효 용량은, 이를 필요로 하는 피험자에게 투여될 때, 간 표본의 문맥(portal), 중심 및 소엽 부위에서 호중구 및 림프구의 수로 평가된 바로, 간 조직학적 표본에서 염증 세포의 침윤 감소를 유도할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 간조직학적 표본 내의 염증 세포의 침윤은 NAFLD 그레이딩 시스템을 사용하여 그레이딩된 염증 세포의 백분율로 평가하였을 때 적어도 10% 미만으로 감소 된다.

몇몇 실시양태에서, 조성물의 유효 용량은, 이를 필요로 하는 피험자에게 투여될 때, 간 조직학적 섹션의 시리우스 레드 염색(Sirius red staining)의 정량적 분석에 의해 구하여진 바로 서 간에서의 콜라겐의 축적 감소를 유도할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 간에서의 콜라겐의 축적의 감소는 콜라겐을 나타내는 시리우스 레드에 대한 간 조직 염색 포지티브의 백분율로 평가하였을 때 적어도 5% 미만으로 감소된다.

몇몇 실시양태에서, 조성물의 유효 용량은, 이를 필요로 하는 피험자에게 투여될 때, NASH 활성의 혈청 마커의 레벨 감소를 유도할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, NASH 활성의 혈청 마커는 이것으로 제한되는 것은 아니지만, 트랜스아미나제의 혈청 레벨, 환원 또는 산화된 코엔자임 Q의 혈청 레벨, 또는 공지의 NASH 활성의 기타 혈청 마커의 조합을 포함할 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 조성물의 유효 용량은, 이를 필요로 하는 피험자에게 투여될 때, 섬유증의 생화학 마커, 간 섬유증 또는 경화의 비침습 테스트 또는 섬유증 또는 경화의 간 조직학적 그레이딩의 레벨의 감소를 포함하는 증거를 기준으로 한 간 섬유증 또는 경화의 감소를 유도할 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 조성물의 유효 용량은, 이를 필요로 하는 피험자에게 투여될 때, 이것으로 제한되는 것은 아니지만 NASH 임상 연구 네트워크(National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases(NIDDK)에 의해 2002년에 설립)에 의해 제안된 널리 사용되는 스코어링 시스템인 NAFLD 활성 스코어(NAS)를 포함하는 NAFLD 또는 NASH의 중증도 그레이딩 스코어링 시스템에서 1 포인트 이상의 감소를 유도할 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 조성물의 유효 용량은, 이를 필요로 하는 피험자에게 투여될 때, 문맥 고혈압, 감소 된 간 단백질 합성, 고빌리루빈혈증, 또는 뇌병증과 같은 간 섬유증 또는 경화가 있는 NASH의 의학적 결과의 감소를 유도할 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 화합물은 폴리사카라이드이며 갈락토-람노갈락투로네이트(GA-RG)로서 화학적으로 정의될 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 갈락토-람노갈락투로네이트는 주로 1,4-β-D-갈락토오스(Gal)를 포함하는 임의의 수의 측쇄에 차례로 결합된, 교대 1,4-결합 GalA 및 1,2-결합 람노오스(Rha)의 작은 골격 조성을 갖는 1,4-결합된 갈락투론산(GalA) 부분을 주로 포함하는 골격을 갖는 선택적으로 탈중합된, 분지 헤테로중합체 이다. 몇몇 실시양태에서, 화합물은 주로 1,4-β-D-갈락토오스(Gal) 및 1,5-α-L-아라비노오스(Ara) 잔기를 포함하는 임의의 수의 측쇄에 차례로 결합된, 교대 1,4-결합 GalA 및 1,2-결합 람노오스(Rha)의 작은 골격 조성을 갖는 1,4-결합 갈락투론산(GalA) 부분을 주로 포함하는 골격을 갖는 갈락토아라비노-람노갈락투로네이트이다. 기타 측쇄 부 구성성분은 크실로오스(Xyl), 글루코오스(Glu), 및 푸코오스(Fuc)를 포함할 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 갈락토아라비노-람노갈락투로네이트는 2:1 또는 3:1비로 존재하는 1,4-β-D-갈락토오스 및 1,5-α-L-아라비노오스 잔기를 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 갈락토아라비노-람노갈락투로네이트는 총 몰 탄수화물의 10 몰% 이상을 나타내는 1,4-β-D-갈락토오스 잔기, 1,5-α-L-아라비노오스 잔기 또는 이의 조합을 포함한다.

몇몇 실시양태에서, 갈락토-람노갈락투로네이트 또는 갈락토아라비노-람노갈락투로네이트는 5 kDa 내지 55 kDa, 2 kDa 내지 80 kDa 또는 20 kDa 내지 70 kDa 범위의 평균 분자량을 갖는다.

몇몇 실시양태에서, 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트이며 치료제의 치료적 유효량과 조합하여 사용될 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 갈락토-람노갈락투로네이트는 혼합물로 사용될 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 화합물은 치료적 유효량의 시스테아민 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 시스타민 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염과 조합하여 사용된 갈락토-람노갈락투로네이트이다.

또 다른 실시양태에서, 화합물은 이것으로 제한되는 것은 아니지만 글리시리진, 쉬산드라, 아스코르브산, L-글루타티온, 실리마린, 리포산, 및 d-알파-토코페롤을 포함하는 비경구 또는 경구 투여의 조성물을 포함하는 다양한 항상화 화합물의 치료적 유효량과 조합하여 사용되는 갈락토-람노갈락투로네이트이다.

또 다른 실시양태에서, 화합물은 이것으로 제한되는 것은 아니지만 수용성 비타민 E 제제, 혼합 카로티노이드, 또는 셀레늄을 포함하는 비경구 또는 경구 투여의 조성물을 포함하는 다양한 항상화 화합물의 치료적 유효량과 조합하여 사용되는 갈락토-람노갈락투로네이트이다.

또 다른 실시양태에서, 화합물은 비경구 또는 경구 투여의 레시틴 또는 비타민 B 복합체의 치료적 유효량과 조합하여 사용되는 갈락토-람노갈락투로네이트이다.

또 다른 실시양태에서, 화합물은 이것으로 제한되는 것은 아니지만 우르소데옥시콜린산, 기타 자연 발생 또는 합성 담즙산 또는 담즙산 염의 케노데옥시콜린산을 포함하는 담즙염 제제의 치료적 유효량과 조합하여 사용되는 갈락토-람노갈락투로네이트이다.

또 다른 실시양태에서, 화합물은 칸나비노이드-1(CB1) 수용체의 길항제 및/또는 역작용제의 치료적 유효량과 조합하여 사용되는 갈락토-람노갈락투로네이트이다.

또 다른 실시양태에서, 화합물은 PPAR(퍼옥시좀 증식자-활성화 수용체) 활성 조절제의 치료적 유효량과 조합하여 사용되는 갈락토-람노갈락투로네이트이다.

또 다른 실시양태에서 화합물은 티오아미드 결합 및 사차 암모늄 치환기를 갖는 하기식에 의해 표시되는 벤조티아제핀 또는 벤조티에핀 화합물의 치료적 유효량과 조합하여 사용되는 갈락토-람노갈락투로네이트이다.

또 다른 실시양태에서 화합물은 단백질 티로신 포스파타제 PTPRU를 저해하는 RNA 안티센스 구조체의 치료적 유효량과 조합하여 사용되는 갈락토-람노갈락투로네이트이다.

또 다른 실시양태에서 화합물은 히스타민 H₃ 길항제로서 유용한 헤테로원자-결합 치환된 피페리딘 및 이의 유도체의 치료적 유효량과 조합하여 사용되는 갈락토-람노갈락투로네이트이다.

또 다른 실시양태에서 화합물은 스테아로일-코엔자임 알파 델타-9 불포화효소(desaturase)를 저해하는 아자시클로펜탄 유도체의 치료적 유효량과 조합하여 사용되는 갈락토-람노갈락투로네이트이다.

또 다른 실시양태에서 화합물은 아디포넥틴의 분비촉진제(secretagogue) 또는 유도인자 활성을 갖는 아실아미드 화합물의 치료적 유효량과 조합하여 사용되는 갈락토-람노갈락투로네이트이다.

또 다른 실시양태에서 화합물은 사차 암모늄 화합물의 치료적 유효량과 조합하여 사용되는 갈락토-람노갈락투로네이트이다.

또 다른 실시양태에서 화합물은 이소플라본 화합물의 치료적 유효량과 조합하여 사용되는 갈락토-람노갈락투로네이트이다.

또 다른 실시양태에서 화합물은 마크로라이드 항생제(macrolide antibiotic)의 치료적 유효량과 조합하여 사용되는 갈락토-람노갈락투로네이트이다.

또 다른 실시양태에서 화합물은 다발성 경화증의 치료에 현재 사용되는 면역조절 약물인 글라티라머 아세테이트 (Teva Pharmaceuticals에서 시판되는 Copolymer 1, Cop-1, 또는 Copaxone으로서도 공지됨)의 치료적 유효량과 조합하여 사용되는 갈락토-람노갈락투로네이트이다.

또 다른 실시양태에서, 화합물은 이것으로 제한되는 것은 아니지만 재조합 펜트락신-2를 포함하는 펜트락신 단백질의 치료적 유효량과 조합하여 사용되는 갈락토-람노갈락투로네이트이다.

또 다른 실시양태에서 화합물은 스타틴 예를 들어 이것으로 제한되는 것은 아니지만 아토르바스타틴 및 심바스타틴과 같은 HMG-CoA 리덕타제 저해제의 치료적 유효량과 조합하여 사용되는 갈락토-람노갈락투로네이트이다.

또 다른 실시양태에서 화합물은 n-아세틸 시스테인의 치료적 유효량과 조합하여 사용되는 갈락토-람노갈락투로네이트이다.

또 다른 실시양태에서 화합물은 이것으로 제한되는 것은 아니지만 갈렉틴, 단일클론 항체, RNA 저해제, 작은 결합 펩티드, 또는 단백질 저해제의 소형 유기 저해제를 포함하는 단일 갈렉틴 단백질 또는 한 세트의 갈렉틴 단백질을 저해할 수 있는 또 다른 갈렉틴 저해제의 치료적 유효량과 조합하여 사용되는 갈락토-람노갈락투로네이트이다.

또 다른 실시양태에서 화합물은 라이실 옥시다제(또는 콜라겐을 가교하는 기타 유사 효소)를 저해하는 모노클론 항체, 또는 결합 조직 성장 인자로의 모노클론 항체의 치료적 유효량과 조합하여 사용되는 갈락토-람노갈락투로네이트이다.

몇몇 실시양태에서, 비경구 투여용 조성물의 효능은 이것으로 제한되는 것은 아니지만 당뇨병이 되게 하고 고지방 규정식이 공급된 마우스에게 조성물을 투여하여 구하여질 수 있다. 몇몇 실시양태에서, NASH의 동물 모델에게 조성물의 투여는 형태학적 정량화에 의해 구하여진 바로 간세포 지방 축적에서 5% 이상 감소, 염증 세포의 간 침윤에서 5% 이상 감소, 또는 간 콜라겐 함량에서 5% 이상의 감소를 유도할 수 있다.

본 발명은 여러 도면에 걸쳐 같은 구조는 같은 숫자로 참조된, 첨부된 도면을 참고로 더 설명될 것이다. 도시된 도면은 비율에 따를 필요는 없으며, 강조하는 대신 일반적으로 본 발명의 원리를 설명하기 위해 게재한 것이다.
도 1은 지방간염의 STAM 마우스 모델에서 치료의 실험 설계을 나타낸다.
도 2A는 6-9 주에 치료 군에서 STAM 마우스의 체중 변화를 나타내는 그래프이다. 도 2B는 9-12 주에 치료 군에서 STAM 마우스의 체중 변화를 나타내는 그래프이다.
도 3A는 6-9 주에 치료 군에서 STAM 마우스의 전혈 글루코오스의 비교를 나타내는 그래프이다. 도 3B는 9-12 주에 치료 군에서 STAM 마우스의 전혈 글루코오스의 비교를 나타내는 그래프이다.
도 4는 헤마톡실린 및 에오신(H&E) 및 시리우스 레드로 염색된 정상 및 NASH 마우스 모델의 조직 검사(histology)를 나타낸다
도 5A는 비히클 치료된 및 GR-MD-02 치료된 NASH 마우스 모델의 조직 검사를 나타낸다. 도 5B는 STAM 마우스에서 치료군 간의 NFLD 활성 스코어의 비교를 나타내는 그래프이다.
도 6은 6-9 주 및 9-12 주에서 실험 군의 시리우스 레드 염색을 사용한 간 조직 검사를 나타낸다.
도 7A는 6-9 주에 실험 군 간의 간 조직 검사에서 시리우스 레드-포지티브 부위의 비교를 나타내는 그래프이다. 도 7B는 9-12 주에 실험 군 간의 간 조직 검사에서 시리우스 레드-포지티브 부위의 비교를 나타내는 그래프이다. 도 7C는 모든 동물에서 실험 군 간의 간 조직 검사에서 시리우스 레드-포지티브 부위의 비교를 나타내는 그래프이다.
도 8A 는 실험 군의 간 조직에서 알파-평활근 액틴(SMA)의 면역조직화학 염색을 나타낸다. 도 8B는 실험 군의 간 조직에서 알파-평활근 액틴(SMA)의 디지털 형태계측을 나타낸다.
도 9A는 실험 군의 간 조직에서 갈렉틴-3의 면역조직화학 염색을 나타낸다. 도 9B는 실험 군의 간 조직에서 갈렉틴-3의 디지털 형태계측을 나타낸다.

발명의 상세한 설명

본 발명의 상세한 실시양태가 여기에서 개시된다; 그러나, 개시된 실시양태는 다양한 형태로 포함될 수 있는 본 발명을 단지 예시하기 위한 것으로 이해되어야 한다. 또한, 본 발명의 다양한 실시양태와 관련하여 제공된 각각의 예는 예시적인 것이며 한정하는 것은 아닌 것으로 의도된다. 또한, 도면은 비율에 따를 필요는 없으며, 몇몇 특징은 특정 구성요소를 상세하게 나타내기 위하여 과장될 수 있다. 또한, 도면에 도시된 임의의 측정, 사양 등은 예시적인 것이며 제한하지 않고자 하는 의도이다. 따라서, 여기에서 개시된 특정 구조 및 기능적 세부 사항은 제한하는 것으로 해석되어 지는 것은 아니며, 단지 본 발명을 다양하게 실시하도록 당업자에게 교시하기 위한 대표적인 기초로서 해석되어야 한다.

달리 명시되지 않으면, 모든 백분율은 여기에서 중량/중량을 표시한다.

비알콜성 지방간 질환(NAFLD)의 주요 특징은 최소한의 염증으로 간세포 내에 지방 축적이다. 이들 환자는 일반적으로 혈청 내의 약간 상승된 간 트랜스아미나제 레벨 또는 컴퓨터 단층촬영법(computerized tomography) 또는 초음파와 같은 비침습적 테스트에서 지방간의 의혹으로 인해 수행된 간 생검을 기준으로 하여 식별된다.

NAFLD의 개인중 일부는 소엽, 중심 정맥 및 문맥 부위 내의 염증 세포 (이것으로 제한되는 것은 아니지만 호중구 또는 림프구 포함)의 침윤 전개 및 이것으로 제한되는 것은 아니지만 팽창 변성을 포함하는 간세포에 대한 손상의 증거가 추가된 지방간인 비알콜성 지방간염(NASH)을 갖는 것을 알아내었다. 이러한 NASH의 염증 상태는 이것으로 제한되는 것은 아니지만 경화, 결절 형성, 및 궁극적으로 간세포 암종을 초래할 수 있는 콜라겐을 포함하는 섬유 조직의 침착을 초래할 수 있다.

NASH가 있는 대부분의 사람들이 건강해 보이며 간 문제가 있는 것을 인식하지 못하므로 질환의 진행은 잠행성(insidious) 이다. 증상의 결여에도 불구 하고, NASH는 심각하게 될 수 있으며 및 심각한 흉터 및/또는 경화 및, 경우에 따라서는, 간세포 암종을 초래할 수 있는 간 내에 섬유증 물질의 침착을 초래할 수 있다. 따라서, NASH 초기 및 이후의 그의 진행을 식별할 수 있는 임상 테스트에 대한 필요성이 있다.

NAFLD 및 NASH는 일반적인 장애이다. 미국 국립 보건원은 미국인의 10-20% 가 NAFLD를 가지며 3-5%가 NASH를 갖는 것으로 보고하였다. 양자의 장애는 어린이 및 청소년을 포함하여 비만 및 당뇨병을 갖는 많은 수의 사람들 때문에 더 일반적이 되어 가고 있다. NASH가 경화로 진행될 수 있다는 사실은 이것이 주요 건강 문제가 된다는 것이다.

NASH는 더 일반적이 되어 가고 있으며, 그의 근본적인 원인은 아직 명백하지 않고, 그것은 과체중 또는 비만인 중년층에서 가장 자주 일어나며, 그들 중의 많은 수가 대사 증후군, 인슐린 내성, 또는 현성 당뇨병을 갖는다. 그러나, NASH는 단순히 간에 영향을 주는 비만은 아니다. NASH는 어린이 및 청소년에게 영향을 줄 수 있다.

NASH에서 간 손상의 근위(proximal) 원인은 알려지지 않았다. 다수의 이론이 제시되었다. 이들 이론 중의 몇몇은 인슐린의 작용에 내성인 간세포, 간을 손상하고 추가의 염증 세포를 모집하는 지방세포 및 기타 염증 세포에 의한 염증성 사이토카인의 생성 및 간 세포를 손상하고 염증을 유발하는 반응성 산소 라디칼의 생성과 함께 간세포 내의 산화 스트레스를 포함한다.

현재, NASH에 대한 구체적인 치료 요법은 존재하지 않으며 단지 일반적인 건강 권고가 현재 환자에게 제공된다. 이들은 체중 감소, 균형있고 건강한 규정식의 섭취, 신체 활동 증진, 및 알콜 및 불필요한 약물의 회피를 포함한다. 체중 감소는 몇몇 NASH 환자에서 혈청 간 테스트를 증진시킬 수 있으며 조직학적 간 손상의 증거를 개선할 수 있지만, 심각한 간 질환을 반전시키지는 않는다. 또한, 모든 NASH 환자가 과체중인 것은 아니다.

산화방지제, 예컨대 비타민 E, 셀레늄, 베타인, 및 메트포르민, 로시글리타존 및 피오글리타존을 포함하는 항당뇨병제의 사용을 포함하는 NASH 환자의 다양한 실험적 접근이 평가되었거나 또는 평가 중에 있다. 현재까지의 모든 임상 결과는 실망스러운 것이다.

갈렉틴-3 단백질은 최근 NASH의 발병기전에 연루되어 있음을 보여주고 있다. 갈렉틴(또한 갈랍틴 또는 S-렉틴으로도 알려짐)은 베타-갈락토시드를 결합하는 렉틴의 패밀리이다. 일반적 명칭으로서 갈렉틴은 동물 렉틴의 패밀리로 1994년에 제안되었다(Barondes, S.H., et al.: Galectins: a family of animal b-galactoside-binding lectins. Cell 76, 597-598, 1994). 이 패밀리는 베타-갈락토시드에 대한 친화성이 있는 하나 이상의 특성 탄수화물 인식 도메인(CRD)을 가지며 특정 서열 엘리먼트를 공유함으로 서 정의된다. 동일한 펩티드 사슬 내에, 몇몇 갈렉틴은 단지 약간의 추가의 아미노산과의 CRD를 가지며, 다른 것은 결합 펩티드에 의해 연결된 두 CRD를 갖고, 하나(갈렉틴-3)는 상이한 타입의 도메인에 연결된 하나의 CRD를 갖는다. 갈렉틴 탄수화물 인식 도메인(CRD)은 약 135 아미노산의 베타-샌드위치이다. 두 시이트는 오목면(concave side)을 형성하는 6 가닥 및 볼록면(convex side)을 형성하는 5 가락으로 약간 구부러져 있다. 오목면은 탄수화물이 결합된 홈(groove)을 형성한다(Leffler H, Carlsson S, Hedlund M, Qian Y, Poirier F (2004). "Introduction to Galectins". Glycoconj. J. 19 (7-9): 433-40).

광범위한 생물학적 현상이 갈렉틴, 예컨대, 발생, 분화, 형태 형성(morphogenesis), 종양의 전이, 세포 사멸, RNA 접합, 등과 관련되어 나타난다. 그러나, 특히 탄수화물 인식의 측면에서 갈렉틴이 이들 기능을 발휘함에 의한 메커니즘에 대하여 비교적 적게 알려져 있다.

일반적으로, 탄수화물 도메인은 당단백질과 연관된 갈락토오스 잔기에 결합한다. 적어도 15의 포유류 갈렉틴 단백질이 탠덤내에서 1 또는 2의 탄수화물 도메인을 갖는 것으로 식별되었다.

각각의 갈렉틴 단백질은 기타 갈렉틴 단백질이 동종- 또는 이종-이량체화를 허용하는 갈락토오스 바인딩 도메인 및 기타 도메인을 갖는다. 갈렉틴 단백질은 생리적 조건하에 낮은 레벨에서 광범위한 범위의 세포 및 조직으로 표현되며, 핵, 세포질에서 찾을 수 있고, 비전통적 분비 경로에 의해 세포외 공간으로 분비된다.

갈렉틴의 갈락토오스 바인딩 도메인은 세포 표면 상에 또는 세포 외 기질 단백질 상에 위치한 갈락토오스 함유 당단백질에 결합한다. 갈렉틴 상의 이량체화 도메인은 갈렉틴 단백질의 상호 작용을 촉진하며, 이에 따라 막 또는 기질 당단백질 간의 상호 작용을 생성한다. 이들 상호작용은 세포-세포, 세포-기질, 및 기질-기질 상호작용 및 세포내 신호전달의 조절 및 후속하는 사건으로 이어지는 세포 수용체 활성의 활성화, 비활성화, 또는 조절을 야기할 수 있는 막 수용체의 회합을 촉진한다.

특정 갈렉틴 단백질은 병리학적 상황에서 세포로부터 현저하게 상향 조절되고 다량 분비된다. 조직 염증 상태 및 보수 (섬유증, 흉터)에서 이것으로 제한되는 것은 아니지만 대식세포 및 림프구를 포함하는 여러 염증 세포는 갈렉틴, 특히 갈렉틴-1 및 갈렉틴-3을 발현한다.

갈렉틴-3 유전자가 결여된 마우스는 주요 요소로서 염증 및 섬유발생(fibrogenesis)을 포함하는 다수의 질환 상태에서 갈렉틴-3의 기능을 탐구하기 위하여 사용되었다. 이들 갈렉틴-3 녹아웃 마우스는 독소 투여, 폐 섬유발생, 및 신장 섬유발생으로 인하여 간 섬유발생에 내성이 있는 것으로 나타났다.

갈렉틴-3 녹아웃 마우스는 또한 NASH에서 갈렉틴-3의 중요성을 탐구하기 위해 사용되었다. 이들 실험에서, 마우스는 NAFLD 및 MASH의 전개를 유도하기 위해 고지방 규정식이 공급되었다. 정상 마우스는 지방간, 간에서의 염증성 침윤 및 간 섬유증이 순조롭게 전개된다. 완전히 대조적으로, 갈렉틴-3 녹아웃 마우스는 많은 지방간이 많이 전개되지 않았으며, 최소 염증성 침윤 및 섬유증을 갖는다. 이들 자료는 갈렉틴-3이 NASH의 치료를 위한 중요한 표적이 될 수 있다는 것을 시사하는 것이다.

갈렉틴-3의 저해는 본 발명에서 갈락토-람노갈락투로네이트의 효능을 기초로 한 하나의 잠재적인 메커니즘이다.

용어 "유효 용량"은 섬유증 또는 경화가 있는 NAFLD, NASH, 또는 NASH의 인간 또는 동물에게 비경구 용량으로 또는 경구 제형으로 투여될 때 5% 이상으로 콜라겐 부위의 백분율을 감소시키거나 또는 1 포인트 이상으로 NAS 스코어를 개선할 수 있는 갈락토-람노갈락투로네이트 또는 갈락토-람노갈락투로네이트와 조합한 기타 제제의 양을 의미한다.

몇몇 양상에서, 갈렉틴이 포함된 하나 또는 그 이상의 질환, 장애, 또는 상태의 치료 방법(예컨대, 제어, 완화, 개선, 경감, 또는 진행 둔화) 또는 예방 방법(예컨대, 전개의 위험을 감소 또는 발병을 지연)은 이를 필요로 하는 피험자에게 특별히 포함된다. 그 방법은 갈락토-람노갈락투로네이트 화합물, 또는 갈락토-람노갈락투로네이트 화합물을 포함하는 조성물의 유효량을, 지방간, NALFD, NASH, 간 섬유증이 있는 NASH, 경화가 있는 NASH, 또는 경화 및 간세포 암종이 있는 NASH 중의 하나를 갖는 피험자에게 투여하는 것을 포함한다.

용어 "약학적으로 허용 가능한 담체"는 생리학적으로 상용성인 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 예컨대, 인간 알부민 또는 가교 젤라틴 폴리펩티드, 코팅, 항균 및 항진균 화합물, 등장성 물질, 예컨대, 염화 나트륨 또는 글루타민산 나트륨, 및 흡수 지연 화합물 등을 의미한다. 약학적으로 활성인 물질을 위한 이러한 매질 및 화합물의 용도는 당업계에 공지되어 있다. 바람직하게는, 담체는 경구, 정맥, 근육내, 피하, 비경구, 척추 또는 경막외 투여(예컨대, 주사 또는 주입에 의해)에 적당하다. 투여 방식에 따라, 활성 화합물은 화합물을 불활성화할 수 있는 산 및 기타 자연 조건의 작용으로부터 화합물을 보호하기 위해 물질에 코팅될 수 있다.

용어 "효능" 은 몇몇 실시양태에서 NAS 스코어 또는 콜라겐 백분율에 의해 구하여진 바와 같이 NASH 또는 섬유증 또는 경화가 있는 NASH와 연관된 간 조직 검사 소견에서의 개선을 나타내는 것을 의미한다.

몇몇 실시양태에서, 치료 방법은 허용 가능한 약학적 담체 내에 화합물을 포함하는 비경구 또는 장내 투여를 위한 조성물을 수득하는 단계를 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 화합물은 폴리사카라이드이며, 주로 1,4-β-D-갈락토오스(Gal)를 포함하는 임의의 수의 측쇄에 차례로 결합된, 교대 1,4-결합 GalA 및 1,2-결합 람노오스(Rha)의 작은 골격 조성을 갖는 1,4-결합 갈락투론산(GalA) 부분을 주로 포함하는 골격을 갖는 선택적으로 탈중합된, 분지 헤테로중합체인 갈락토-람노갈락투로네이트로서 화학적으로 정의될 수 있다. 기타 측쇄 부 구성성분은 아라비노오스(Ara), 크실로오스(Xyl), 글루코오스(Glu), 및 푸코오스(Fuc)를 포함할 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 화합물은 폴리사카라이드이며, 주로 1,4-β-D-갈락토오스(Gal) 및 1,5 알파 L 아라비노오스(Ara) 잔기를 포함하는 임의의 수의 측쇄에 차례로 결합된, 교대 1,4-결합 GalA 및 1,2-결합 람노오스(Rha)의 작은 골격 조성을 갖는 1,4-결합 갈락투론산(GalA) 부분을 주로 포함하는 골격을 갖는 선택적으로 탈중합된 분지 헤테로중합체인 갈락토-람노갈락투로네이트의 하위 타입으로 칭하여지는 갈락토아라비노-람노갈락투로네이트로 화학적으로 정의될 수 있다. 기타 측쇄 부 구성성분은 크실로오스(Xyl), 글루코오스(Glu), 및 푸코오스(Fuc)를 포함할 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 갈락토-람노갈락투로네이트 화합물은 모든 목적을 위해 그의 전체가 참고로 인용된 발명의 명칭이 "Composition of Novel Carbohydrate Drug for Treatment of Human Diseases"인 국제 특허 출원 제PCT/US12/55311호 및 미국 일련 번호 제8,236,780호에 기술된 방법에 의해 제조될 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 화합물은 자연의, 고 분지된, 최소 가공된 및 8-12% 펙틴을 함유하는 사과박(apple pomace)으로부터 제조되는 것과 같은 고 메톡실화 USP 펙틴 유사 물질로부터 합성될 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 화합물은 풍부한 양의 1,4-β-D-Gal 및 1,5-α-L-Ara로 측쇄를 유지하면서 글리코시드-결합된 메톡시화 α-1,4-결합 GalA의 충분히 제어된 특이적 가수분해하에 합성될 수 있다. 1,4-β-D-Gal 및 1,5-α-L-Ara의 양은 GC-MS(가스 크로마토그래피-질량 분광법) 및 AELC-PAD(음이온 교환 액체 크로마토그래피-펄스 전류측정 검출기(pulsed amperometric detector)) 방법에 의해 정량적으로 구하여질 수 있다.

몇몇 실시양태에서 화합물은 1 내지 100mM에서 Cu⁺⁺와 같은 전이 금속 이온의 추가의 환원 형태의 존재 또는 부재하에 아스코르브산 및/또는 퍼옥시드로 부터 생성된 이온화된 OH^_의해 글리코시드 결합의 표적화된 과산화 절단에 의해 이화된(catabolized) 탈중합을 포함하는 공정에 의해 제조될 수 있다. Cu⁺⁺ 또는 Fe⁺⁺와 같은 기타 전이 금속도 또한 이 목적을 위해 사용될 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 탈중합된 화합물은 최대 87%의 초기 레벨과 비교하여 40 내지 70%의 메톡시화도를 갖는 탈중합된 화합물을 생성하기 위해 제한된 탈메톡시화의 조절을 개시하는 2 내지 60℃의 온도에서 10 내지 30분 동안 8 내지 10의 pH에 노출될 수 있으며 중간-메톡시화 화합물로서 언급될 수 있다. 갈락투론산의 완전한 메톡시화는 대략 DE 87%인 것으로 간주 된다.

몇몇 실시양태에서, 탈중합된 조성물은 잔류 엔도톡신, 구리 및 중금속, 농업 오염물질 및 기타 분술물을 제거하기 위해 뜨거운 산성 알콜(예컨대 30 내지 80℃ 범위의 온도)의 다수 세척에 노출될 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 화합물은 SEC-RI 및/또는 SEC-MALLS 방법에 의해 구하여진 바로 2,000 내지 80,000, 또는 20,000 내지 70,000, 또는 5,000 내지 55,000 달톤의 평균 분자량 분포를 갖는 분지된 헤테로중합체인 갈락토-람노갈락투로네이트 또는 갈락토아라비노-람노갈락투로네이트로서 화학적으로 정의된 폴리사카라이드이다.

몇몇 실시양태에서, 본 발명의 화합물 내의 1,5-α-L-Ara 잔기의 몰% 는 0일 수 있거나 또는 최대 1 %의 미량으로 있다.

몇몇 실시양태에서, 화합물은 각기 1:1 내지 3:1 범위의 대략적인 비를 갖는 총 몰 탄수화물의 10%를 초과할 수 있는 몰%의 1,4-β-D-Gal 및 1,5-α-L-Ara 잔기를 갖는 갈락토아라비노-람노갈락투로네이트이다.

몇몇 실시양태에서, 화합물은 이것으로 제한되는 것은 아니지만 정맥, 피하, 관절내, 흡입, 및 경구를 포함하는 경로를 통한 다원적 투여를 위해 치료 제형과 상용성이 되도록 예를 들어 약 2,000 내지 약 80,000D의 분자량 범위로 충분히 감소된 높은 가용성의 개질된 폴리사카라이드 일 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 화합물은 이것으로 제한되는 것은 아니지만, 감귤류(citrus fruits), 사과, 또는 비트(beet)를 포함하는 임의의 식물원으로부터 발생할 수 있는 천연의 고분지 된 최소 가공 및 고 메톡시화 USP 펙틴 등으로부터 합성될 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 화합물은 8-12% 펙틴을 함유하는 사과박으로부터 제조된 것과 같은 천연의 고분지 된 최소 가공 및 고 메톡시화 USP 펙틴 등으로부터 합성될 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 화합물은 풍부한 양의 1,4-β-D-Gal 및 1,5-α-L-Ara로 측쇄를 유지하면서 글리코시드-결합된 메톡시화 α-1,4-결합 GalA의 충분히 제어된 특이적 가수분해하에 합성될 수 있다. 1,4-β-D-Gal 및 1,5-α-L-Ara의 양은 GC-MS(가스 크로마토그래피-질량 분광법) 및 AELC-PAD(음이온 교환 액체 크로마토그래피-펄스 전류측정 검출기) 방법에 의해 정량적으로 구하여질 수 있다.

몇몇 실시양태에서 화합물은 1 내지 100mM에서 Cu⁺⁺와 같은 전이 금속 이온의 추가의 환원 형태의 존재 또는 부재하에 아스코르브산 및/또는 퍼옥시드로 부터 생성된 이온화된 OH^_에 의해 글리코시드 결합의 표적화된 과산화 절단에 의해 이화된 탈중합을 포함하는 공정에 의해 제조될 수 있다. Cu⁺⁺ 또는 Fe⁺⁺와 같은 기타 전이 금속도 또한 이 목적을 위해 사용될 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 탈중합된 화합물은 최대 87%의 초기 레벨과 비교하여 40 내지 70%의 메톡시화도를 갖는 탈중합된 화합물을 생성하기 위해 제한된 탈메톡시화의 조절을 개시하는 2 내지 30℃의 온도에서 10 내지 30분 동안 8 내지 10의 pH에 노출될 수 있으며 중간-메톡시화 화합물로서 언급될 수 있다. 갈락투론산의 완전한 메톡시화는 대략 DE 87%인 것으로 간주 된다.

몇몇 실시양태에서, 탈중합된 조성물은 잔류 엔도톡신, 구리 및 중금속, 농업 오염물질 및 기타 분술물을 제거하기 위해 뜨거운 산성 알콜(50-65℃)의 다수 세척에 노출될 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 화학적으로 변형된 가용성 갈락토-람노갈락투로네이트는 알킬화기를 감소시켜(탈메톡시화 또는 탈아세틸화), 원하는 범위의 분자량으로 감소 되도록 자연 발생 중합체를 개질 하여 제조된다. 화학 개질 전에, 천연 폴리사카라이드는 사카라이드의 다수 분지, 예컨대, 글루코오스, 아라비노오스, 갈락토오스 등의 1 내지 20의 모노사카라이드로 구성된 분지를 가지며, 이들 분지는 람노오스와 같은 중성 모노사카라이드를 통해 골격에 연결될 수 있는 약 40,000-1,000,000D의 분자량 범위를 가질 수 있다. 이들 분자는 적게는 약 2% 내지 많게는 약 70%가 에스테르화될 수 있는 우론산 사카라이드의 단일 골격 또는 이의 사슬을 더 포함할 수 있다. 그들 자신의 다수 분지는 사카라이드의 다수 분지를 가질 수 있으며, 다수 분지는 주로 소수성 실체를 생성하는 중성 사카라이드 및 중성 사카라이드 유도체를 임의로 포함한다.

몇몇 실시양태에서, 갈락토-람노갈락투로네이트 조성물은 이것으로 제한되는 것은 아니지만 이들 중의 몇몇은 USP 펙틴 물질로서 시판되는, 사과, 감귤류, 또는 비트 펙틴을 포함하는 임의의 식물원으로부터 펙틴 원료를 사용하여, 열, 높거나 낮은 pH, 다양한 형태의 분자량 배제 여과(또는 이들 방법의 조합)를 비롯한 다양한 처리에 의해 제조될 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 화합물은 그로부터 펜던트된 람노오스 잔기를 갖는 실질적으로 탈메톡시화된 폴리갈락투론산 골격을 포함하는 일반 부류 내에 속한다. 이러한 타입의 물질에서, 말단 갈락토오스 단위는 갈렉틴 단백질에 결합한 골격에 펜던트되는 것으로 여겨진다. 분자의 잔존 벌크는 면역 시스템 반응의 중재에서 화합물의 작용을 강화시킬 수 있다. 추론에 의해 한정하고자 하는 것은 아니지만, 분자의 잔존 벌크는 갈렉틴 단백질의 잔존 부분과 상호작용할 수 있거나 및/또는 거기에서 슈거 부분의 결합을 연장할 수 있을 것이다.

몇몇 실시양태에서, 치료 조성물은 경구, 정맥 주사, 피하 주사 또는 주입에 의해 투여될 수 있다.

상술한 논의는 주로 개질된 펙틴을 근거로 한 치료 물질에 관한 것이었지만, 본 발명이 이것으로 제한되는 것은 아님을 이해하여야 한다. 본 발명의 일반 원리에 부합하여, 갈렉틴과 상호 작용하고 차단할 수 있는 광범위한 부류의 화합물의 구성원이 사용될 수 있다. 한 실시 양태에서, 이들 물질은 탄수화물 물질을 포함하는데, 그 이유는 이러한 물질이 독성이 낮고 갈렉틴과 강한 상호작용을 나타내거나 또는 강한 항 염증성 효과를 나타내기 때문이다. 개질된 펙틴 물질은 특히 탄수화물 물질의 군을 포함한다. 마찬가지로, 그의 합성 및 반-합성 유사체 예컨대 폴리갈락투론산 물질이 유사하게 사용될 수 있다.

여전히 본 발명의 또 다른 부류의 물질은 단백질의 활성을 비활성화하거나 또는 그렇지않으면 완화하는 제 2 부분에 연결된, 전형적으로 탄수화물이며, 갈렉틴과 바인딩할 수 있는, 제 1 부분을 갖는 분자를 포함한다. 이러한 제 2 부분은 탄수화물일 필요는 없으며, 갈렉틴 단백질의 활성 부분, 또는 갈렉틴과 상호작용하는 또 다른 단백질의 활성 부분을 포함하는 단백질의 세그먼트를 가교 하거나 그렇지않으면 변성하는 물질을 포함할 수 있다. 이러한 물질은 활성종 예컨대 황 또는 기타 칼코겐 원소 단독 또는 티올, 설프히드릴 등과의 조합으로 포함된다. 기타 활성 종은 시아노기, 티오시아네이트, 알킬화제, 알데히드 등을 포함할 수 있다. 몇몇 활성종은 이것으로 제한되는 것은 아니지만 단일클론 항체를 포함하는 단백질 일 수 있다.

본 발명의 몇몇 양상은 NASH 또는 NALD의 치료에 적당한 또는 향상된 효능을 갖는 NASH 치료 제형에 관한 것이다. 몇몇 실시양태에서, NASH 치료 제형은 유효 용량의 갈락토-폴리사카라이드를 포함한다. 몇몇 실시양태에서, NASH 치료 제형은 단독으로 투여되거나 또는 유효 용량의 치료제와 혼합물 또는 식이요법으로 공동 투여될 수 있다. 분말 형태 또는 액체 형태인 제형은 추가의 NASH 치료제 또는 부형제를 더 포함할 수 있다.

또 다른 실시양태에서, 유효 용량의 갈락토오스 함유 폴리사카라이드는 경구 투여를 위한 제형으로 투여될 수 있다. 제형은 갈락토오스 함유 폴리사카라이드의 경구 흡수를 향상시키는 다양한 제제의 첨가 또는 화합물의 물리적 변경의 방법을 포함할 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 갈락토-람노갈락투로네이트는 혼합제(admixture)에 사용될 수 있다. 용어 "혼합제"는 하나 초과의 성분이 함께 혼합되어 조합을 형성하는 것을 의미한다. 본 발명의 목적을 위하여, "혼합제"는 투여 전 또는 후 또는 병용하여 언제든지 2 이상의 화합물의 혼합물을 의미한다.

몇몇 실시양태에서, 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트이며, 치료적 유효량의 시스테아민 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 시스타민 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염과 조합하여 사용될 수 있다.[모든 목적을 위해 명시적으로 참고로 인용된, 미국 특허 제7,994,226호 참조.]

몇몇 실시양태에서, 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트이며 이것으로 제한되는 것은 아니지만 글리시리진, 쉬산드라, 아스코르브산, L-글루타티온, 실리마린, 리포산, 및 d-알파-토코페롤을 포함하는 비경구 또는 경구 투여 조성물을 포함하는 치료적 유효량의 다양한 산화방지제 화합물과 조합하여 사용될 수 있다.[모든 목적을 위해 명시적으로 참고로 인용된, 미국 특허 제7,078,064호 참조.]

몇몇 실시양태에서, 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트이며, 이것으로 제한되는 것은 아니지만 수용성 비타민 E 제제, 혼합 카로티노이드, 또는 셀레늄을 포함하는 비경구 또는 경구 투여 조성물을 포함하는 치료적 유효량의 다양한 산화방지제 화합물과 조합하여 사용될 수 있다.[모든 목적을 위해 명시적으로 참고로 인용된, 미국 특허 제6,596,762호 참조.]

몇몇 실시양태에서, 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트이며, 레시틴 또는 비타민 B 복합체의 비경구 또는 경구 투여의 치료적 유효량과 조합하여 사용될 수 있다.[모든 목적을 위해 명시적으로 참고로 인용된, 미국 특허 제7,018,652호; 제 6,180,139호 참조.]

몇몇 실시양태에서, 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트이며, 이것으로 제한되는 것은 아니지만 우르소데옥시콜린산, 기타 자연 발생 또는 합성 담즙산 또는 담즙산 염의 케노데옥시콜린산을 포함하는 치료적 유효량의 담즙염 제제와 조합하여 사용될 수 있다.[모든 목적을 위해 명시적으로 참고로 인용된, 미국 특허 제6,297,229호 참조.]

몇몇 실시양태에서, 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트이며, 치료적 유효량의 칸나비노이드-1(CB1) 수용체의 길항제 및/또는 역작용제와 조합하여 사용될 수 있다.[모든 목적을 위해 명시적으로 참고로 인용된, 미국 특허 제7,999,107호; 제7,906,652호 참조.]

몇몇 실시양태에서, 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트이며, 치료적 유효량의 PPAR(퍼옥시좀 증식자-활성화 수용체) 활성 조절제와 조합하여 사용될 수 있다.[모든 목적을 위해 명시적으로 참고로 인용된, 미국 특허 제7,994,353호 참조.]

몇몇 실시양태에서, 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트이며, 티오아미드 결합 및 사차 암모늄 치환기를 갖는 하기식에 의해 표시되는 치료적 유효량의 벤조티아제핀 또는 벤조티에핀 화합물과 조합하여 사용될 수 있다.[모든 목적을 위해 명시적으로 참고로 인용된, 미국 특허 제7,973,030호 참조.]

몇몇 실시양태에서, 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트이며, 단백질 티로신 포스파타제 PTPRU를 저해하는 치료적 유효량의 RNA 안티센스 구조체와 조합하여 사용될 수 있다.[모든 목적을 위해 명시적으로 참고로 인용된, 미국 특허 제7,897,583호 참조.]

몇몇 실시양태에서, 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트이며, 히스타민 H₃ 길항제로서 유용한 치료적 유효량의 헤테로원자-결합된 치환 피페리딘 및 이의 유도체와 조합하여 사용될 수 있다.[모든 목적을 위해 명시적으로 참고로 인용된, 미국 특허 제7,846,946호 참조.]

몇몇 실시양태에서, 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트이며, 스테아로일-코엔자임 알파 델타-9 불포화효소를 저해하는 치료적 유효량의 아자시클로펜탄 유도체와 조합하여 사용될 수 있다.[모든 목적을 위해 명시적으로 참고로 인용된, 미국 특허 제7,754,745호 참조.]

몇몇 실시양태에서, 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트이며, 아디포넥틴의 분비촉진제 또는 유도인자 활성을 갖는 치료적 유효량의 아실아미드 화합물과 조합하여 사용될 수 있다.[모든 목적을 위해 명시적으로 참고로 인용된, 미국 특허 제7,732,637호 참조.]

몇몇 실시양태에서, 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트이며, 치료적 유효량의 사차 암모늄 화합물과 조합하여 사용될 수 있다.[모든 목적을 위해 명시적으로 참고로 인용된, 미국 특허 제7,312,208호 참조.]

몇몇 실시양태에서, 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트이며 치료적 유효량의 이소플라본 화합물과 조합하여 사용될 수 있다.[모든 목적을 위해 명시적으로 참고로 인용된, 미국 특허 제6,592,910호 참조.]

몇몇 실시양태에서, 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트이며, 치료적 유효량의 마크로라이드 항생제와 조합하여 사용될 수 있다.[모든 목적을 위해 명시적으로 참고로 인용된, 미국 특허 제5,760,010호 참조.]

몇몇 실시양태에서, 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트이며, 다발성 경화증의 치료를 위해 현재 사용되는 면역조절 약물인 치료적 유효량의 글라티라머 아세테이트(Teva Pharmaceuticals에서 판매되는 Copolymer 1, Cop-1, 또는 Copaxone-으로서도 공지됨)와 조합하여 사용될 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트이며, 치료적 유효량의 스타틴 예를 들어 이것으로 제한되는 것은 아니지만 아토르바스타틴 및 심바스타틴과 같은 HMG-CoA 리덕타제 저해제와 조합하여 사용될 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트이며, 치료적 유효량의 n-아세틸 시스테인과 조합하여 사용될 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트이며, 이것으로 제한되는 것은 아니지만 갈렉틴, 단일클론 항체, RNA 저해제, 작은 결합 펩티드, 또는 단백질 저해제의 소형 유기 저해제를 포함하는 단일 갈렉틴 단백질 또는 한 세트의 갈렉틴 단백질을 저해할 수 있는 또 다른 갈렉틴 저해제의 치료적 유효량과 조합하여 사용될 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트이며, 라이실 옥시다제를 저해하는 모노클론 항체, 또는 결합 조직 성장 인자에 바인딩하는 모노클론 항체의 치료적 유효량과 조합하여 사용될 수 있다.

또 다른 실시양태에서, 화합물은 갈락토-람노갈락투로네이트이며, 이것으로 제한되는 것은 아니지만 재조합 펜트락신-2를 포함하는 치료적 유효량의 펜트락신 단백질과 조합하여 사용될 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 갈락토-람노갈락투로네이트 및 기술된 기타 화합물은, 단독 치료 또는 상기 나열된 기타 화합물과의 조합 치료로서, 이것으로 제한되는 것은 아니 지만 페리-정현(peri-sinusoidal) 공간 내의 콜라겐 침착, 경화를 포함하는 간세포 지방 축적, 문맥 내 및 소엽 내 염증성 침윤, 및 섬유증의 개선 또는 역전의 방법으로서 인간 NASH를 위해 및 간세포 암종으로의 진행을 방지하기 위하여 제안된다. 더욱이, 간 질환 병리학에서의 이들 개선은 간세포 암종의 전개를 포함하는 간 섬유 및 경화의 합병증 감소에 의한 개인의 건강에 대하여 포지티브 효과를 유도할 것이라는 것이 제안되었다.

몇몇 실시양태에서, 갈락토오스 함유 폴리사카라이드의 유효 용량은 반복된 볼루스 주입 또는 지속적인 주입으로 제공된 정맥 주입, 피내 주사, 반복된 볼루스 주사 또는 지속적인 주입으로 제공된 피하를 통한 비경구, 또는 경구 투여를 포함하는 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다.

실험 동물에게 갈락토오스 함유 폴리사카라이드의 효과적인 비경구 용량(정맥, 복강내, 또는 피하로 제공됨)은 2 mg/kg 내지 160 mg/kg 체중의 범위 내, 또는 10 mg/kg, 또는 30 mg/kg, 또는 60 mg/kg, 또는 90 mg/kg, 또는 120 mg/kg 체중이다.

실험 동물에게 갈락토오스 함유 폴리사카라이드의 효과적인 비경구 용량(정맥내, 복강내, 또는 피하로 제공됨)은 매주 3회, 매주 2회, 매주 1회, 2주 마다 1회, 매달 1회, 또는 지속적인 주입으로서 투여될 수 있다.

인간 피험자에게 갈락토오스 함유 폴리사카라이드의 효과적인 비경구 용량(정맥으로 또는 피하로 제공됨)은 0.5 mg/kg 내지 25 mg/kg 체중의 범위 내, 또는 1 mg/kg, 또는 2 mg/kg, 또는 5 mg/kg, 또는 7.5 mg/kg, 또는 10 mg/kg 체중, 또는 15 mg/kg 체중이다.

인간 피험자에게 갈락토오스 함유 폴리사카라이드의 효과적인 비경구 용량(정맥으로 또는 피하로 제공됨)은 매주 3회, 매주 2회, 매주 1회, 2주 마다 1회, 매달 1회, 또는 지속적인 주입으로서 투여될 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 치료적으로 유효 용량은 이것으로 제한되는 것은 아니지만 히알루론산 및 콜라겐의 기타 분해 생성물, 시토케라틴-18 및 기타 세포골격 세포 단백질, 메탈로프로테아제 I 및 II의 조직 저해제 및 기타 간 유도된 콜라겐 및 기질 프로테아제를 포함하는 NASH의 혈청 바이오마커의 레벨로 10% 이상의 변화에 의해 평가될 수 있다. 이들 화합물 및 바이오마커는 면역분석을 사용하여 혈청 또는 간 조직에서 측정될 수 있으며, 레벨은 질환의 중증도 및 치료와 관련된다.

몇몇 실시양태에서, 치료적으로 유효 용량은 이것으로 제한되는 것은 아니지만 지질 또는 단백질 기원의 반응성 산소 생성물, 환원 또는 산화된 코엔자임 Q 형태, 및 지질 분자 또는 컨쥬게이트를 포함하는 NASH의 혈청 바이오마커에서 10% 이상의 변화에 의해 평가될 수 있다. 이들 바이오마커는 면역분석 및 전기영동을 포함하는 다양한 수단에 의해 측정될 수 있으며 그들의 레벨은 질환의 중증도 및 치료와 관련된다.

몇몇 실시양태에서, 치료 적으로 유효 용량은 이것으로 제한되는 것은 아니지만 TNF-알파, TGF-베타 또는 IL-8을 포함하는 사이토카인, 오스테오폰틴 또는 혈청 성분의 대사 프로파일을, 이것으로 제한되는 것은 아니지만, 포함하는 NASH의 혈청 바이오마커에서 10% 이상의 변화에 의해 평가될 수 있으며, 이것은 NASH 존재 또는 중증도(이들은 혈청 및 요(urine) 마커를 포함한다)를 나타낸다. 면역분석 또는 LC 질량 분광에 의한 프로테옴 평가(proteomic assessment)에 의해 측정된 바의 하나 이상의 이들 사이토카인의 프로파일은 질환의 활성의 평가 및 질환의 치료에 따르는 마커를 제공할 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 치료 적으로 유효 용량은 이것으로 제한되는 것은 아니지만 내-간세포 지방의 증거를 포함하는 간 생검, 이것으로 제한되는 것은 아니지만 초자체(hyaline bodies)를 포함하는 간세포 독성, 염증성 세포 침윤 (이것으로 제한되는 것은 아니지만 림프구 및 림프구 및 호중구의 다양한 서브셋 포함), 담관 세포의 변화, 내피 세포의 변화, 쿠퍼(Kupffer) 세포 대식세포의 수, 콜라겐 침착(이것으로 제한되는 것은 아니지만 페리-정현, 문맥 및 중심 콜라겐 침착 및 문맥에서 중심으로 브리지화하는 콜라겐 침착 포함), 일반 아키텍처를 왜곡한 간세포 결절, 악성 형질전환과 부합하는 간세포 이형성(atypia), 및 NASH의 중증도 그레이딩을 위한 다양한 관찰 셋을 조합한 다양한 스케일 및 방법에 대한 조직 병리학적 소견을 포함하는 NASH의 병리생리학적 스펙트럼에서 10% 이상의 변화에 의해 평가될 수 있다. 이러한 조직학적 평가는 NASH 진단의 필수요소이며, 따라서 통합적으로 치료의 평가에 관련된다.

몇몇 실시양태에서, 치료 적으로 유효 용량은 이것으로 제한되는 것은 아니지만 질환의 단계 및 중증도에 대한 임상 테스트, 질환의 임상적 징후 및 증상, 및 의학 합병증을 포함하는 NASH의 임상 소견에서 10% 이상의 변화에 의해 평가될 수 있다. NASH의 단계 및 중증도에 대한 임상 테스트는 이것으로 제한되는 것은 아니지만 혈액(hematologic) 테스트(이것으로 제한되는 것은 아니지만 적혈구 세포수 및 모폴로지(morphology), 백혈구 세포수 및 차이 및 모폴로지, 혈소판 수 및 모폴로지 포함), 이것으로 제한되는 것은 아니지만 트리글리세리드, 콜레스테롤, 지방산, 리포단백질 종 및 지질 과산화 종을 포함하는 혈청 또는 혈장 지질, 혈청 또는 혈장 효소(이것으로 제한되는 것은 아니지만 아스파르테이트 트랜스아미나제(AST), 알라닌 트랜스아미나제(ALT), 알칼리 포스파타제 (AP), 감마 글루타밀트랜스펩티다제(GGTP), 락테이트 디하이드로게나제(LDH) 및 이소 형태 포함), 간 합성능을 나타내는 혈청 또는 플라즈마 알부민 및 기타 단백질, 대사 부산물을 깨끗하게 하는 간의 능력을 나타내는 빌리루빈 또는 기타 화합물의 혈청 또는 혈장 레벨, 혈청 또는 혈장 전해질(이것으로 제한되는 것은 아니지만 나트륨, 칼륨, 클로라이드, 칼슘, 인 포함), 이것으로 제한되는 것은 아니지만 프로트롬빈 시간(PT), 부분 트로모플라스틴 시간(PTT), 특정 응고 인자 레벨, 출혈 시간 및 혈소판 기능을 포함하는 응고 프로파일을 포함한다. 임상 테스트는 또한 이것으로 한정되는 것은 아니지만 컴퓨터 단층촬영법 (CT 스캔), 초음파 (US), 초음파 탄성영상법(ultrasonic elastography)(이것으로 한정되는 것은 아니지만 FibroScan 포함) 또는 기타 간 조직의 탄성 측정, 자기 공명 주사 또는 분광법, 경피(percutaneous) 또는 스키니 니들 또는 경정맥경유(transjugular) 간 생검 및 조직학적 평가(이것으로 제한되는 것은 아니지만 염색 친화성 염료 또는 면역조직화학법을 사용한 상이한 성분을 위한 염색 포함), 간 문맥-정맥 쐐기 압력(wedge pressure) 구배의 측정을 포함하는 간의 아키텍처, 구조적 완전성 또는 기능을 평가하는 비침습적 및 침습적 테스트, 또는 간 조직에서 NASH의 중증도를 평가하기 위해 개발될 수 있는 기타 비침습적 또는 침습적 테스트를, 이것으로 한정되는 것은 아니지만, 포함한다.

몇몇 실시양태에서, 치료 적으로 유효 용량은 피로, 근육 중량 손실, 거미 혈관종(spider angiomata), 복통, 복부 팽창, 복수(ascites), 위장관 출혈, 기타 출혈 합병증, 타박상(easy bruising) 및 반상출혈, 말초 부종, 간비대(hepatomegaly), 결절성의 단단한 간(nodular firm liver), 졸음, 수면 장애, 및 혼수(coma)를 포함하는 질환의 임상적 징후 및 증상에서 10% 이상의 변화에 의해 평가될 수 있다. NASH의 의학적 합병증은 경화와 관련되며 복수, 말초 부종, 식도 및 기타 위장관 정맥류, 위장관 출혈, 기타 출혈 합병증, 쇠약 및 근육 소모, 간신 증후군, 및 간성 뇌병증을 포함한다. 경화와 관련된 NASH의 추가 합병증은 간 이식 리스트 상의 보증 배치 또는 간 이식을 받는 것으로 충분히 심각한 합병증의 전개이다.

몇몇 실시양태에서, 치료 적으로 유효 용량은 당뇨병 환자의 전혈 글루코오스 또는 상승된 혈청 지질을 갖는 환자의 혈청 지질에 대한 임의의 효과의 부재에서 NASH 간 질환 및/또는 섬유증에 대한 효과를 갖는 것이다.

몇몇 실시양태에서, 치료 적으로 유효 용량은 간 조직 또는 혈청 내의 갈렉틴-3 레벨에서 10% 이상의 변화에 의해 평가될 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 치료 적으로 유효 용량은 혈청 내의 갈렉틴-3 레벨의 변화에 의해 평가될 수 있다.

실시예 1 : 갈락토 - 람노갈락투로네이트 화합물의 제조 방법

하기는 본 발명을 제한하려는 것은 아니며 단지 치료제 폴리사카라이드의 제조에 대한 예시적인 실시예 이다. 이 경우에, 제조된 갈락토-람노갈락투로네이트는 본 출원에서 GR-MD-02로 표시하였다.

사과 펙틴 USP HM (50kg)은 35-85℃로 물에서 용해하고 가열하였다. 1M HCl 또는 NaOH는 pH 5-7로 용액의 pH를 조정하기 위하여 첨가되었으며 잘 혼합하였다. 혼합은 35-85℃ 설정 온도에서 2시간 동안 계속 수행되었다. 1M NaOH 또는 HCl은 pH 5 내지 7로 재조정하기 위한 필요에 따라 첨가되었다. 용액은 30℃로 냉각하였다. 30℃에서, pH는 5 내지 7로 조정되었다.

CuSO₄는 최종 1mM CuSO₄ 농도를 유도하기 위하여 pH-조정된 펙틴 용액에 첨가하였다. 1mM CuSO₄ 용액은 10℃ 내지 30℃의 온도에서 30분 동안 혼합하였다.

1mM CuSO₄ 혼합 단계의 30 분 후, 50g 아스코르브산 나트륨을 첨가하고(양은 원하는 MW를 달성하기 위하여 미리 교정되었다), 5 내지 20분 동안 혼합하였다. H₂O₂ 는 0.02로 시작하여 최대 1.0moles/kg 펙틴(초기 출발 펙틴 MW에 대하여 미리 교정되었다)으로 첨가되었으며, H₂O₂ 농도는 용액의 pH를 4 내지 7로 유지하면서 4시간 동안 유지되었다(정량 테스트를 사용하여, 시그마, 세인트-루이스).

5M NaOH는 수득한 용액의 pH가 8 내지 10이 되도록 용액에 첨가하였다. pH-조정된 용액은 10-30분 동안 혼합하였다. 농축 HCL은 그후 pH-조정된 용액에 첨가하여 용액의 pH를 4 내지 5로 조정하였다. 한번 pH 4 내지 5로 조정된 용액은 2℃ 내지 8℃에서 2 내지 24 시간 동안 혼합을 유지할 수 있다.

용액은 그후 30-180 분 동안 80℃로 가열하고, 1-5kg의 필터-에이드(Filter-Aid)를 용액에 첨가(셀라이트(Celite))하고, 첨가된 셀라이트가 있는 용액은 30분 동안 교반 하고 그후 여과하였다. 여과로부터 수득한 고체는 폐기하였다.

여액은 진공하에서 1.5-3X로 농축하였으며, 그후 3 내지 5로 pH를 조정하였다. 뜨거운 에탄올 또는 이소프로판올은 50중량%에 첨가하였다. 혼합물은 1-2 시간 교반하여 생성물을 침전시키고, 혼합물은 그후 여과하였다. 여액은 폐기하고, 백색 내지 황백색(off-white) 침전물을 남긴다.

차가운 96% EtOH을 용액에 첨가하고, 수득한 슬러리는 그후 30분 동안 교반하였다. 용액은 여과하고, 여액은 폐기하였다. 96% EtOH 슬러리 단계를 반복하고, 이어서 최종 여과하여 백색 내지 황백색 침전물을 회수한다.

실시예 2: 지방간염 마우스 모델의 치료 방법

이 실시예에서 사용된 실험 모델은 당뇨병을 유발시킨 마우스이며, 고지방 규정식을 투여하였고, 이 모델은 STAM 마우스로 칭한다. 도 1에서 나타낸 바와 같이, 당뇨병은 스트렙토조토신의 단일 주사로 탄생 후 즉시 유발시키며, 이어서 4 주후 마우스는 고지방 규정식을 시작한다. 이것은 마우스가 간세포 지방 축적, 간세포 독성의 증거, 문맥 및 소엽의 염증성 침윤, 페리-정현 섬유증, 결절 형성이 있는 진행 섬유증, 경화, 및 특정 비율의 동물에서 궁극적으로 간세포 암종을 갖는 NASH를 지속적으로 전개하는 입증된 모델이다.

질환 출연의 진행은 5주령의 지방간(FL), 7 주령의 지방간염(NASH), 9주령의 섬유증(Fib), 13주령의 결절 형성(N), 및 16주령의 몇몇 동물에서 전개하는 간세포 암종(HC)이다(도 1).

실시예 1 에서 기술된 바와 같이 제조된 GR-MD-02는 지시된 각각의 개시 시각에서 4 주 동안 매주 2회 정맥으로 60 mg/kg 용량을 제공하였다. 초기 치료는 6 주 내지 9주 동안 제공되었으며 후기 치료는 9 주 내지 12 주로 제공되었다.

초기 및 후기 치료기간 후 희생된 동물의 체중 변화는 도 2A-2B에 나타내었다. GR-MD-02로 치료된 동물과 비교시 비히클(생리식염수 단독)로 치료된 동물의 체중과는 차이가 없었다. 이것은 총 레벨에서 동물에 대한 치료의 독성 효과는 거의 없거나 또는 없으며, 감지된 변화는 동물의 전체 건강으로 인한 것이 아님을 나타낸다.

치료군 간의 전혈 글루코오스의 비교는 도 3A-3B에 나타낸다. 이것은 혈액 글루코오스 레벨이 비히클 대조 및 GR-MD-02 군 양자에서 통계적인 차이 없이 초기 또는 후기 치료 스케쥴에서 현저하게 상승 되었음을 나타낸다. 마우스에서 정상 혈액 글루코오스는 대략 100mg/dL 이었으며, STAM 동물에서 평균은 700 내지 800mg/dL 이었고, 따라서 모든 동물은 현성 당뇨병을 갖는다는 것을 나타낸다.

도 4는 정상 및 NASH 마우스에서 간의 조직 검사를 나타낸다. 헤마톡실린 및 에오신 (H&E)으로 염색된 간 섹션은 정상 간 및, 큰 지방이 채워진 간세포, 간세포의 팽창 변성 및 염증 세포의 침윤을 나타내는, NASH 간 사이에 현저한 차이를 나타낸다. 시리우스 레드로 염색된 간 섹션은 타입 I 콜라겐의 존재를 강조한다. 도 4는 정상 간에서 매우 작은 콜라겐을 나타내지만, NASH 간에서 페리-정현 스페이스 및 중심 정맥 부근에 국소화된 콜라겐의 증가를 나타낸다. 이 결과는 NASH의 병리학이 마우스 모델에서 달성되었음을 입증하는 것이다.

NFLD 활성 스코어는 간의 조직학적 섹션에서 간 질환의 중증도를 평가하기 위해 사용되며, 지방증(steatosis)(0 (<5%), 1 (5-33%), 2 (33-66%), 또는 3 (>66%)), 간세포 팽창(0 (없음), 1, (약간), 또는 3 (많음)), 및 소엽 염증 (0 (증식소 없음(no foci)), 1 (<2 증식소/200x필드), 2 (2-4 증식소/200x필드), 또는 3 (>4 증식소/200x필드))를 포함하는 NASH 병리학의 세 양상에 대하여 포인트를 제공한다. 포인트의 총 수는 NFLD 활성 스코어이다.

도 5B는 초기 치료 군에서 비히클 및 GR-MD-02 치료군간의 STAM 마우스에서 간 조직 검사에 대한 NFLD 활성 스코어의 비교를 나타낸다. 비히클 치료된 마우스에 대한 스코어는 평균 5이고, 이것은 NASH의 존재를 확인하는 것이다. 평균 스코어 3 및 비히클 동물과 비교하였을 때 0.01 미만의 p값을 갖는, GR-MD-02로 치료된 STAM 마우스의 군에서 NFLD 활성 스코어의 통계적으로 매우 유의한 감소가 있었다. 이들 자료는 GR-MD-02가 NASH와 연관된 간에서 병리학을 감소시킨다는 것을 나타낸다.

도 6은 6-9주 및 9-12주에서 비히클 및 GR-MD-02 치료군 간에 STAM 마우스의 간 생검에서 시리우스 레드-포지티브 부위의 비교를 나타낸다. 시리우스 레드는 그들을 적색으로 염색하는, 콜라겐 섬유에 대하여 특이적 친화성을 갖는 조직학적 염색이며, 따라서 간 생검에서 섬유증의 정도를 평가하기 위한 정량적인 도구이다. 초기 및 후기 치료군 양자에서, 비히클 대조에 비하여 GR-MD-02로 치료된 동물에서 시리우스 레드 염색에 대한 현저한 감소를 볼 수 있다.

각각의 세 치료 군으로부터 간 조직 병리학적 섹션에 대한 시리우스 레드 염색의 부위는 컴퓨터를 이용한 형태 계측 학적 분석을 사용하여 평가되었다. 도 7A, 7B 및 7C는 콜라겐% 부위가 두 군을 조합하여 평가하였을 때, 초기 및 후기 치료 군에서 현저하게 통계적으로 유의하게 감소 되었음을 나타낸다. 이들 결과는 GR-MD-02를 사용한 치료가 NASH의 활성 감소의 결과로서 NASH의 마우스에서 간 섬유증을 감소시킨다는 것을 입증한다. 더욱이, 후기 치료군은 GR-MD-02를 사용한 치료가 NASH 마우스에서 섬유증을 반전할 수 있다는 것을 나타낸다(도 7B).

자료는 테스트된 치료 화합물의 효능이 전혈 글루코오스에 대한 효과의 부재에서 NASH 간 질환 및 섬유증에 대한 효과를 갖는다는 것을 더 나타낸다. 혈액 글루코오스가 대조군에 대한 치료 군에서 감소 되지 않았다는 것은 간 질환이 당뇨병의 효과적인 치료 없이 치료될 수 있다는 것을 나타낸다.

간에서 콜라겐을 나오게 하는 일차 세포는 활성화된 성상세포이다. NASH에서 염증성 침윤은 활성 상태에서, 질환과 연관된 섬유 조직을 형성하는 콜라겐을 분비하는 정지 성상 세포를 활성화한다. 도 8A는 활성화된 성상 세포에 대한 마커인 단백질 알파-평활근 액틴에 대한 면역조직화학 염색을 나타낸다. GR-MD-02를 사용한 치료는 활성화된 성상 세포가 현저히 감소 된 것을 나타내는 알파-평활근 액틴의 현저한 감소를 야기한다(도 8B). 이것은 치료로 감소된 콜라겐 침착에 대한 메커니즘 중의 하나이다.

도 9A는 비히클 및 GR-MD-02 치료된 실험 군의 간 조직에서 갈렉틴-3 단백질의 면역조직화학 염색을 나타낸다. 비히클 치료된 동물의 대식세포에서 대부분 갈렉틴-3의 높은 레벨의 발현이 있었다. GR-MD-02를 사용한 치료는 질환의 개선된 병리학과 연관된 간 내에서 갈렉틴-3의 뚜렷한 감소를 유도한다(도 9B).

여기에서 기술된 실시예 및 실시양태는 단지 설명적인 목적을 위한 것이며 변화를 고려하여 다양한 변형이 첨부된 청구범위 및 본 출원의 사상 및 범위 내에 포함되는 것으로 이해된다. 여기에서 인용된 모든 공보, 특허 및 특허 출원은 모든 목적을 위해 그의 전체가 여기에서 참고로 인용된다.

Claims

지방간, 비알콜성 지방간 질환, 비알콜성 지방간염, 간 섬유증이 있는 비알콜성 지방간염, 간경화가 있는 비알콜성 지방간염, 또는 간경화 및 간세포 암종이 있는 비알콜성 지방간염의 치료를 위한, 약학적으로 허용 가능한 담체 내 갈락토-람노갈락투로네이트를 포함하는 약학 조성물로서,
상기 갈락토-람노갈락투로네이트는 α-1,2 결합 람노오스 및 α-1,4-결합 GalA 잔기의 교대 올리고머의 분지된 헤테로중합체에 결합된 1,4-결합 갈락투론산(GalA) 및 메틸 갈락투로네이트(MeGalA) 잔기 골격을 포함하고, 람노오스 잔기는 1,4-β-D-갈락토오스 잔기, 1,5-α-L-아라비노오스 잔기, 또는 이의 조합의 올리고머의 일차 분지를 지니며,
1,4-β-D-갈락토오스 잔기 및 1,5-α-L-아라비노오스 잔기는 총 몰 탄수화물의 10 몰% 이상을 나타내고,
1,4-β-D-갈락토오스 잔기 및 1,5-α-L-아라비노오스 잔기는 2:1 내지 3:1의 범위의 비로 존재하는 것인, 약학 조성물.
제1항에 있어서, 갈락토-람노갈락투로네이트는 크실로오스, 글루코오스, 푸코오스 잔기 또는 이의 조합을 더 포함하는 것인 약학 조성물.
제1항에 있어서, 상기 약학 조성물은 다른 치료제를 추가로 포함하거나 유효량의 치료제와 공동 투여되는 것인 약학 조성물.
제3항에 있어서, 치료제는 시스테아민 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 시스타민 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 항산화 화합물, 레시틴, 비타민 B 복합체, 담즙염 제제, 칸나비노이드-1(CB1) 수용체의 길항제, 칸나비노이드-1(CB1) 수용체의 역작용제, 퍼옥시좀 증식자-활성화 수용체 활성 조절제, 벤조티아제핀 또는 벤조티에핀 화합물, 단백질 티로신 포스파타제 PTPRU를 저해하는 RNA 안티센스 구조체, 헤테로원자-결합된 치환 피페리딘 및 이의 유도체, 아자시클로펜탄 유도체, 아디포넥틴의 분비촉진제(secretagogue) 또는 유도인자 활성을 갖는 아실아미드 화합물, 사차 암모늄 화합물, 글라티라머 아세테이트, 펜트락신 단백질, HMG-CoA 리덕타제 저해제, n-아세틸 시스테인, 이소플라본 화합물, 마크로라이드 항생제(macrolide antibiotic), 갈렉틴 저해제, 항체, 또는 상술한 것들의 임의 조합 중의 하나인 약학 조성물.
제4항에 있어서, 항산화 화합물은 수용성 비타민 E 제제, 혼합 카로티노이드, 셀레늄 또는 이의 조합을 포함하는 것인 약학 조성물.
제4항에 있어서, 담즙염 제제는 우르소데옥시콜린산, 자연 발생 담즙산 또는 담즙산 염의 케노데옥시콜린산, 합성 담즙산 또는 담즙산 염의 케노데옥시콜린산 또는 이의 조합을 포함하는 것인 약학 조성물.
제4항에 있어서, 펜트락신 단백질은 재조합 펜트락신-2인 약학 조성물.
제4항에 있어서, HMG-CoA 리덕타제 저해제는 아토르바스타틴, 심바스타틴 또는 이의 조합을 포함하는 것인 약학 조성물.
제4항에 있어서, 갈렉틴 저해제는 갈렉틴의 소형 유기 저해제, 단일클론 항체, RNA 저해제, 작은 결합 펩티드, 단백질 저해제 또는 이의 조합을 포함하는 것인 약학 조성물.
제4항에 있어서, 항체는 라이실 옥시다제에 대한 항체 또는 결합 조직 성장 인자에 대한 항체인 약학 조성물.
제1항에 있어서, 갈락토-람노갈락투로네이트는 20 kDa 내지 70 kDa 범위의 평균 분자량을 갖는 것인 약학 조성물.
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