KR101968118B1 - 신규한 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주를 이용한 γ-PGA의 생산방법 - Google Patents
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Abstract
본원은 신규한 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주를 이용한 γ-PGA의 생산방법, 특히 상기 균주에 최적화된 배지 조성을 이용한 γ-PGA 생산의 극대화 방법에 관한 것이다.
Description
본원은 신규한 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주를 이용한 γ-PGA의 생산방법, 특히 상기 균주에 최적화된 배지 조성을 이용한 γ-PGA 생산의 극대화 방법에 관한 것이다.
최근 환경문제의 심각성과 각종 환경 규제로 인해 친환경 생분해성 고분자에 대한 연구가 활발히 이루어지고 있다. 그 중에서도 미생물이 생산하는 폴리에스터계의 폴리히드록시알카노에이트(polyhydroxyalkanoates; PHA), 풀룰란(pullulan) 및 미생물 셀룰로오스(microbial cellulose) 등의 다당류 외에도 폴리펩타이드계의 폴리감마글루탐산 (poly-gamma-glutamic acid; γ-PGA) 등이 주목되고 있다. 이중 γ-PGA는 일본의 낫토 또는 한국의 청국장 등에서 관찰되는 점액물질로도 알려져 있으며, 글루탐산의 감마-카르복실산과 α-아미노기가 아미드 결합에 의해 연결되어 있는 거대한 중합체로서 그 분자량은 생산 균주에 따라 일반적으로 100 내지 1000 kDa 정도로 알려져 있다.
γ-PGA는 몇몇 바실러스 속 균주의 배양시 세포 밖으로 분비되고, 사람과 환경에 독성이 없고 수용성이며 생분해 가능한 고분자로 알려져 있다. 이러한 특징 때문에 γ-PGA는 침전농축장치, 습윤제, 동결방지제, 약물 담체 (drug carrier), 생분해성 섬유, 사료첨가제 등의 다양한 분야에서 이용이 가능하며, 이러한 이유로 식품, 화장품, 의약 등의 산업에서 많은 관심을 가지고 있는 고부가가치 바이오소재로 인식되고 있다.
γ-PGA 의 주요 생산 균주로는 바실러스속 (Bacillus sp.) 균주로서 B. 안트라시아(B. anthracis), B. 리케니포르미스 (B. licheniformis), B. 메가테리움 (B. megaterium) 및 B. 서브틸리스 등이 알려져 있다. 이들은 또한 γ-PGA의 생산에 주요 전구체인 글루탐산의 농도에 의존적인 미생물과 의존적이지 않은 미생물로 나뉜다.
일반적으로는 글루탐산의 농도에 의존적인 γ-PGA 미생물이 그렇지 않은 미생물에 비해 높은 γ-PGA의 생산을 나타내나, 각 미생물의 특성에 따라서, 그리고 동일 속의 미생물이라고 할지라도 각각의 균주 특성 및 배지 조건에 따라 γ-PGA의 생산량은 차이가 난다. 현재까지 보고된 γ-PGA의 최대 생산량은 균주의 생산조건 및 생산배지 조성 (포도당 및 효모 추출물)을 자체 개발하여 수득된, Bacillus subtilis ZJU-7 균주에 의한 101.1 g/L이다 (Huang et al. (2011), Eng. Life Sci., 11: 291-297).
이에 본원에서는, γ-PGA의 생산성이 특히 우수한 균주를 동정하고 이로부터 최대의 γ-PGA 생산성을 유도하는 배지 조성을 탐색함으로써, 다양한 분야에서 인체 및 환경 친화적으로 응용 가능한 생분해성 고분자 물질인 γ-PGA의 생산성을 극대화하고자 하였다.
그러나, 본원이 해결하고자 하는 과제는 이상에서 언급한 과제로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
본원 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함" 한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
본원 명세서 전체에서 사용되는 정도의 용어 "약", "실질적으로" 등은 언급된 의미에 고유한 제조 및 물질 허용오차가 제시될 때 그 수치에서 또는 그 수치에 근접한 의미로 사용되고, 본원의 이해를 돕기 위해 정확하거나 절대적인 수치가 언급된 개시 내용을 비양심적인 침해자가 부당하게 이용하는 것을 방지하기 위해 사용된다. 본원 명세서 전체에서 사용되는 정도의 용어 "~(하는) 단계" 또는 "~의 단계"는 "~ 를 위한 단계"를 의미하지 않는다.
본원 명세서 전체에서, 마쿠시 형식의 표현에 포함된 "이들의 조합"의 용어는 마쿠시 형식의 표현에 기재된 구성 요소들로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 혼합 또는 조합을 의미하는 것으로서, 상기 구성 요소들로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하는 것을 의미한다.
본원 명세서 전체에서, "A 및/또는 B" 의 기재는, "A, B, 또는, A 및 B" 를 의미한다.
이하, 본원의 γ-PGA 생산방법에 대하여 구현예 및 실시예와 도면을 참조하여 구체적으로 설명하도록 한다. 그러나, 본원이 이러한 구현예 및 실시예와 도면에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 측면은, 글루탐산 및 시트르산이 포함된 배지에서 수탁번호 KCTC 13486BP로 기탁된 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주를 배양하는 것을 포함하는, γ-PGA (poly-gamma-glutamic acid)의 생산방법에 관한 것이다. 상기 γ-PGA는 γ-PGA의 유도체를 포함한다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 배지가 포도당을 더 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있으며, 그 외에도 과당, 유당, 갈락토스 등의 탄소원을 포함할 수 있다. 그 외에도, 상기 배지는 통상의 탄소원 및 질소원을 더 포함할 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 배지가 NH4Cl, Na2HPO4, KH2PO4, K2HPO4, FeSO4·7H2O, MgSO4·7H2O, MnSO4·H2O, CaCl2 및 ZnCl2을 더 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 상기와 같은 배지의 구성성분은 특히 바실러스 서브틸리스 HB-31의 γ-PGA 생산량 증가와 관련된 것일 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법에 따른 γ-PGA의 생산량이 약 110 g/L 이상, 약 115 g/L 이상 또는 약 120 g/L 이상 일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 상기한 γ-PGA의 생산량은 바실러스 서브틸리스 HB-31의 γ-PGA 생산에 최적화된 배지 조성을 사용함으로써 더욱 용이하게 달성될 수 있으며, 그러한 γ-PGA의 생산량은 종래 알려진 균주를 이용해 종래 알려진 배지에서 생산되는 γ-PGA의 생산량에 비해 현저히 상승된 것이다.
본원의 일 구현예에 따르면, 생산되는 γ-PGA의 절대분자량이 약 6,000 kDa 이상, 약 6,500 kDa 이상, 또는 약 7,000 kDa일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. γ-PGA의 분자량이 상기와 같이 높을 경우, 더욱 우수한 흡습성, 보습성, Ca 용해성 및 흡수성과 같은 유리한 특성을 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 배양이 약 10 시간 내지 50 시간, 약 15 시간 내지 40 시간, 또는 약 20 시간 내지 30 시간 동안 수행되는 것일 수 있고, 상술한 배양 시간에서 가장 효율적인 γ-PGA 생산능을 기대할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 배지가 아래의 조성을 가지는 것일 수 있다:
상기 조성 외에 배지는 잔량의 멸균수를 포함할 수 있고, 또한 효모 추출물 및 비타민 용액을 포함하지 않을 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
상기 조성은 바실러스 서브틸리스 HB-31로부터의 γ-PGA 생산에 특히 최적화된 배지일 수 있다. 따라서 바실러스 서브틸리스 HB-31의 배양에 상기 조성을 가지는 배지를 사용하는 경우, 종래의 균주 및 배지를 이용한 경우에 비해 현저히 향상된 γ-PGA 생산량을 나타낼 수 있으며, 이에 의해 생산된 γ-PGA는 바람직하게는 약 6,000 kDa 이상, 약 6,500 kDa 이상, 또는 약 7,000 kDa의 큰 분자량을 가지는 것일 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 바람직하게는 상기 배지는 아래의 조성을 가지는 것일 수 있다:
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법은 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주의 배양으로부터 생성된 γ-PGA를 분리하는 것을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법은 a) 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주를 배지 내에서 30 내지 40℃의 온도에서 20 내지 28시간 동안 배양하고; b) 상기 배양으로부터 수득된 배양액의 pH를 2 내지 4로 조정한 후 원심분리하고; c) 상청액에 에탄올을 첨가하여 γ-PGA의 침전물을 형성시키고; 그리고 d) 침전물을 가열 및 건조하여 γ-PGA를 수득하는 것을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
상술한 과제 해결 수단은 단지 예시적인 것으로서, 본 발명을 제한하려는 의도로 해석되지 않아야 한다. 상술한 예시적인 구현예 외에도, 도면 및 발명의 상세한 설명에 기재된 추가적인 구현예 및 실시예가 존재할 수 있다.
γ-PGA와 그 유도체는 식품 산업에서는 습윤제, 침전제, 동결 방지제, 쓴맛 감소제 및 동물 사료첨가제 등에 이용될 수 있고, 화장품 분야에서는 보습제 등으로 각광받고 있고, 의료 분야에서는 약물 전달체, 의료용 접착제 및 상처 드레싱 겔 등에 이용될 수 있고, 수처리 분야에서는 금속 킬레이트, 흡수제, 생물응집제 및 폐수처리 응고제 등에 이용될 수 있으며, 기타 환경 분야에서는 생분해성 대체물질과 하이드로겔 등에 사용되는 등 다양한 분야에서 유용하게 사용되고 또한 활발한 연구가 이어지고 있다.
본원은 γ-PGA 생산능이 특히 우수한 균주를 동정하고, 상기 균주로부터 γ-PGA 생산성을 극대화시키는 배지 조성을 개발하여 사용함으로써, 종래 미생물 배양으로부터의 최대 생산량보다도 많은 양의 γ-PGA를 생산할 수 있는 γ-PGA 생산방법을 제공할 수 있다.
본원에 개시된 γ-PGA 생산용 배지 조성을 본원에 따른 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주의 배양에 사용시 γ-PGA 생성량이 특히 극대화될 뿐만 아니라, 이로부터 생성되는 γ-PGA의 평균 분자량은 통상적인 방법으로 미생물로부터 제조되는 γ-PGA의 분자량 (100 내지 1000 kDa)에 비해 현저히 크다 (약 7,000 kDa). 따라서, 본원의 방법에 따라 생성된 γ-PGA는 매우 우수한 흡습성, 보습성, Ca 용해성 및 흡수성과 같은 유리한 특성을 가져 다양한 용도의 고부가가치 신소재로 활용될 수 있다.
도 1은 γ-PGA 생산능에 따른 균주의 선정 기준, 및 이에 따른 균주의 γ-PGA 생산량을 비교하여 나타낸 이미지이다.
도 2는 배지 내 탄소원의 종류에 따른 균주들의 γ-PGA 생산량을 비교하여 나타낸 이미지이다.
도 3은 본원의 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주의 분자계통도를 나타낸 이미지이다.
도 4는 본원의 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주의 배지 조성에 따른 γ-PGA 생산량을 비교하여 나타낸 그래프이다.
도 5는 본원의 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주의 글루탐산 및 시트르산 농도에 따른 γ-PGA 생산량을 비교하여 나타낸 그래프이다.
도 6은 본원의 일 실시예에 따라 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주로부터 생성된 γ-PGA의 NMR 분석 결과이다.
도 2는 배지 내 탄소원의 종류에 따른 균주들의 γ-PGA 생산량을 비교하여 나타낸 이미지이다.
도 3은 본원의 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주의 분자계통도를 나타낸 이미지이다.
도 4는 본원의 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주의 배지 조성에 따른 γ-PGA 생산량을 비교하여 나타낸 그래프이다.
도 5는 본원의 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주의 글루탐산 및 시트르산 농도에 따른 γ-PGA 생산량을 비교하여 나타낸 그래프이다.
도 6은 본원의 일 실시예에 따라 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주로부터 생성된 γ-PGA의 NMR 분석 결과이다.
아래에서는 첨부한 도면을 참조하여 본원이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본원의 실시예를 상세히 설명한다. 그러나 본원은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다. 그리고 도면에서 본원을 명확하게 설명하기 위해서 설명과 관계없는 부분은 생략하였다.
[
실시예
]
1. 균주의 선정
균주의 선정은 다음과 같이 진행하였다: (1) 문헌상으로 γ-PGA를 생산하는 것으로 보고된 미생물을 대상으로, (2) γ-PGA 생산량에 따른 형태학적인 차이(Kang et al. Food Sci. Biotechnol. (2005) Vol.14 No.5 704-708)를 기본으로 하여 (도 1), (3) 실제 생산량의 차이를 비교하였다 (도 2).
균주의 선정을 위해서는 γ-PGA의 생산에 사용되는 가장 기본적인 배지인 Medium E (ME)배지를 사용하여 (Birrer et al. (1994). Int J Biol Macromol 16, 265-275.17.), 35℃에서 180 rpm으로 24 시간 동안 배양하였다.
γ-PGA의 생산량을 확인하기 위해서는 γ-PGA가 에탄올에 의하여 침전되어 클럼프 (clump)를 생산하는 특성을 활용하였다 (Chettri et al. Front Microbiol(2016) 7:971). 그 결과 가장 우수한 γ-PGA 생산 성능을 나타내는 균주 (㈜ 잇츠한불 균주번호 HB-31)를 동정하여, 이를 생물자원센터 (KCTC)에 2018년 2월 20일자로 수탁번호 KCTC 13486BP로 기탁하였다.
HB-31 균주의 염기서열은 국제 표준균주와 비교시 99.93%의 상동성으로 바실러스 서브틸리스 아종 인아쿠오소럼 (Bacillus subtilis subsp . inaquosorum)과 일치하였다. HB-31 균주의 자세한 분자계통도는 도 3에 나타나 있으며, 이의 16S 리보솜 RNA 유전자의 염기서열 (1503 bp)은 서열번호 1에 나타나 있다.
2. γ-PGA의 생산 및 정제
사용된 γ-PGA의 생산 및 정제 방법은 아래와 같다. 달리 표시되지 않는 한, 사용된 모든 시약은 시그마-알드리치 (sigma-aldrich)사의 것을 사용하였다.
1) HB-31 균주 스톡을 (stock) 복원
2) TSA (Tryptic soy agar), 35℃에서 2 번 연속 계대배양을 통해 활성 복원
3) 스타터 배양 (TSB (Tryptic soy broth), 35℃, 180 rpm, 18 시간) (배양기는 Jeiotech 또는 Hanbaek 제품 사용)
4) 접종 농도가 배지 최종 부피의 1~10% (v/v)가 되도록 γ-PGA 생산용 배지에 접종
5) γ-PGA 생산 (35℃, 250~350 rpm, 24 시간)
5) 배양액을 pH 3 (염산으로 조정)으로 조정된 멸균수에 1:3 로 희석 및 현탁
6) 고속 원심분리 (12000 rpm, 30 분)
7) 상층액만 한외여과 (M.W. 컷오프 100 KDa 또는 500 kDa)하고, 완충액을 H2SO4 용액 (pH 3.0)으로 교체
8) γ-PGA 배양액 정제 농축액 부피의 2 배의 95% 에탄올을 넣어 순수한 γ-PGA 획득
9) 가열건조 (85℃, 24 시간 또는 48 시간)
3. 배지 조성의 최적화
γ-PGA 생산을 위한 배지조성의 최적화를 위해, ME 배지에 추가적인 조성을 가감하여 HB-31 균주에 최적화된 각 조성물의 농도를 탐색하였다. 배지 조성의 최적화를 위한 균주의 배양 조건은 35℃에서 250~350 rpm이었으며, 균주의 최종 접종 농도는 배지의 1 내지 10%로 하였다. 또한, 접종 후 정확히 24 시간 후 배양을 종료함으로써 정확한 재현성을 확보하였다. 균주는 모든 실험에서 새로운 스톡 (passage 및 제작일자가 동일한 것만 사용)을 사용하였으며, 스톡을 복원한 후 2 회의 계대배양 (subculture)을 통해 활성을 복구한 후 TSB 배지에서 스타터로 12 시간 배양하여 접종에 사용하였다.
그 결과, HB-31 균주는 L-글루탐산 (glutamate)의 농도 및 시트르산 (citric acid)의 농도에 의존적으로 γ-PGA의 생산량이 증가되는 것을 확인할 수 있었다 (도 4 및 도 5). 도 4 및 도 5의 그래프들의 X 축의 식별번호 (ID)에 해당하는 구성성분의 농도 (배지 50 ml당 g으로 표시)들은 아래의 표 1에 정리되어 있다.
HB-31 균주를 이용한 γ-PGA의 생산에 최적화된 배지 조성은 아래의 표 2에 나타나 있다.
상기와 같이 최적화된 배지 조성을 이용한 HB-31 균주의 최고 γ-PGA 생산량은 121.75 g/L (건조중량)이었다 (아래의 표 3 참조). 이 수치는 미생물을 이용하여 현재까지 알려진 세계 최고의 γ-PGA 생산량인 101.1 g/L 보다 더 높은 수치에 해당한다. 이로부터 γ-PGA 생산을 위한 배지 조성의 최적화는 γ-PGA 생산량에 절대적인 비중을 차지하고 있다는 것을 알 수 있었으며, 세계 최고 수준을 상회하는 γ-PGA 생산을 가능하게 하는 본원의 배지조성은 그 자체로서 중요한 기술적 의의를 가진다고 볼 수 있다.
4. γ-PGA 구조 분석 및 절대분자량 측정
㈜잇츠한불의 국제특허균주인 바실러스 서브틸리스 HB-31와 자체 개발한 배지 조성을 사용하여 생산된 γ-PGA의 검증을 위하여 다양한 실험을 진행하였다. 먼저 NMR 분석결과, γ-PGA에 존재하는 α, β 및 γ 피크들이 뚜렷이 나타났으므로, 생산 물질이 전형적인 γ-PGA임을 확인하였다 (도 6). 도 6의 A는 γ-PGA 시료의 1H-NMR 스펙트럼 (600.23 MHz, D2O)이고, 도 6의 B는 13C-NMR 스펙트럼 (150.93 MHz, D2O)이다.
아울러, SEC/MALS (다각도 광산란)를 이용하여 절대분자량을 측정한 결과 γ-PGA의 절대분자량은 평균 6,975 kDa로 확인되었다 (표 3). 아래의 표 3은 γ-PGA를 생산하는 것으로 알려진 미생물의 글루탐산 의존성, γ-PGA 생산시간 및 생산량, 그리고 γ-PGA의 분자량을 측정하여 나타낸 것으로서, 본원에 따른 바실러스 서브틸리스 HB-31는 현재까지 학술자료를 통해 보고된 γ-PGA중 가장 큰 분자량을 가지는 것으로 확인되었다. 특히 바실러스 서브틸리스 HB-31는 24 시간이라는 짧은 배양시간 내에 최대 121.75 g/L의 γ-PGA를 생산하므로, 제조 인건비 및 원료 단가 절감이 가능하여 γ-PGA의 생산성 및 경제성을 현저히 향상시킬 수 있을 것으로 기대된다.
γ-PGA를 생산하는 미생물은 글루탐산 의존적 또는 비의존적으로 γ-PGA를 생산하며, 그에 따른 생산량과 분자량은 모두 상이하다. γ-PGA 생산량 역시 최적 생산배지의 조성 및 물리적인 조건에 따라 다르며, 분자량은 각 미생물의 특성에 기인한다. ㈜잇츠한불의 바실러스 서브틸리스 HB-31는 매우 큰 분자량을 가지는 γ-PGA를 생산할 수 있으며, 최적화된 배지 조성에서 현저하게 높은 γ-PGA 생산량을 나타내는바, 이러한 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주 및 이를 위한 최적 생산배지 조성은 학술적 및 산업적으로 가치가 매우 높다고 할 수 있다.
5. 종래
배지조성과의
차이점 분석
본원에 따른 γ-PGA 생산에 최적화된 배지조성을, 국내에서 γ-PGA 특허를 다수 가지고 있는 ㈜바이오리더스의 특허인 "초거대 분자량의 폴리감마글루탐산 및 그의 이용방법" (대한민국 등록특허 제 0399091 호, 등록일자 2003.09.09.)의 실시예에 기재된 리터당 배지조성과 비교하였다 (표 4).
본원의 배지 조성은 ㈜바이오리더스의 특허에 개시된 배지 조성과는 그 조성 비율 및 성분에서 확연한 차이가 있다. 특히, γ-PGA를 생산하는데 있어서 글루탐산은 전구체로서 사용되기 때문에 공통적으로 포함되어 있으나, 본원에서 사용된 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주는 γ-PGA 생산이 시트르산 농도에 의존적인 반면 ㈜바이오리더스의 특허에 따르면 γ-PGA 생산을 위한 배지 조성이 시트르산을 포함하지 않는다. 또한, ㈜바이오리더스의 특허에 따르면, 본원과 달리 γ-PGA 생산을 위해 추가적인 보조성장제인 비타민 용액이 필요하다. 이는 미생물의 차이에 따른 배지 조성의 차이에 의해 나타나는 현상이다. 즉, 본원에 따른 배지 조성은 ㈜바이오리더스의 특허를 비롯하여 종래 알려진 γ-PGA 생산용 배지 조성과 상이한 것이며, 본원에 따른 배지 조성과 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주를 이용한 γ-PGA 생산시 그 생산시간, 생산량 및 γ-PGA의 분자량 등의 측면에 있어서 종래 보고된 것보다 현저히 우수한 효과를 나타낼 수 있다.
전술한 본원의 설명은 예시를 위한 것이며, 본원이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본원의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며, 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.
본원의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본원의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
Claims (10)
- 글루탐산 및 시트르산이 포함된 배지에서 수탁번호 KCTC 13486BP로 기탁된 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주를 배양하는 것을 포함하되,
상기 배지가 아래의 조성을 가지는 것을 특징으로 하는, γ-PGA(poly-gamma-glutamic acid)의 생산방법.
- 삭제
- 삭제
- 제 1 항에 있어서,
γ-PGA의 생산량이 110 g/L 이상인, γ-PGA의 생산방법.
- 제 1 항에 있어서,
생산되는 γ-PGA의 절대분자량이 6,000 kDa 이상인, γ-PGA의 생산방법.
- 제 1 항에 있어서,
상기 배양이 10 시간 내지 50 시간 동안 수행되는 것인, γ-PGA의 생산방법.
- 삭제
- 제 1 항에 있어서,
상기 배지가 아래의 조성을 가지는 것인, γ-PGA의 생산방법:
- 제 1 항에 있어서,
바실러스 서브틸리스 HB-31 균주의 배양으로부터 생성된 γ-PGA를 분리하는 것을 포함하는, γ-PGA의 생산방법.
- 제 1 항에 있어서,
a) 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주를 배지 내에서 30 내지 40℃의 온도에서 20 내지 28 시간 동안 배양하고;
b) 상기 배양으로부터 수득된 배양액의 pH를 2 내지 4로 조정한 후 원심분리하고;
c) 상청액에 에탄올을 첨가하여 γ-PGA의 침전물을 형성시키고; 그리고
d) 침전물을 가열 및 건조하여 γ-PGA를 수득하는 것을 포함하는, γ-PGA의 생산방법.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020180064496A KR101968118B1 (ko) | 2018-06-04 | 2018-06-04 | 신규한 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주를 이용한 γ-PGA의 생산방법 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020180064496A KR101968118B1 (ko) | 2018-06-04 | 2018-06-04 | 신규한 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주를 이용한 γ-PGA의 생산방법 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR101968118B1 true KR101968118B1 (ko) | 2019-05-07 |
Family
ID=66656480
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020180064496A KR101968118B1 (ko) | 2018-06-04 | 2018-06-04 | 신규한 바실러스 서브틸리스 HB-31 균주를 이용한 γ-PGA의 생산방법 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR101968118B1 (ko) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117402767A (zh) * | 2023-02-01 | 2024-01-16 | 齐鲁工业大学(山东省科学院) | 一种复合微生物菌剂及在农作物种植和土壤改良中的应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100399091B1 (en) * | 2002-07-10 | 2003-09-22 | Bioleaders Corp | Macromolecular weight poly(gamma-glutamic acid) and its use |
-
2018
- 2018-06-04 KR KR1020180064496A patent/KR101968118B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (1)
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| KR100399091B1 (en) * | 2002-07-10 | 2003-09-22 | Bioleaders Corp | Macromolecular weight poly(gamma-glutamic acid) and its use |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117402767A (zh) * | 2023-02-01 | 2024-01-16 | 齐鲁工业大学(山东省科学院) | 一种复合微生物菌剂及在农作物种植和土壤改良中的应用 |
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