KR101957033B1 - 인간 배아줄기세포에서 치계상피줄기세포로의 분화방법 및 이의 용도 - Google Patents
인간 배아줄기세포에서 치계상피줄기세포로의 분화방법 및 이의 용도 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 인간 배아줄기세포를 치계상피줄기세포로 분화시키는 방법, 상기 방법으로 분화된 치계상피줄기세포, 및 이의 용도에 관한 것이다. 본 발명에 따른 치계상피줄기세포로의 분화방법은 인간유래의 배아줄기세포주를 이용함으로써 안정적으로 인간유래의 치계상피줄기세포를 공급할 수 있으므로 치아 재생의학 분야에서 유용하게 이용될 것으로 기대된다.
Description
본 발명은 인간 배아줄기세포를 치계상피줄기세포로 분화시키는 방법, 상기 방법으로 분화된 치계상피줄기세포, 및 이의 용도에 관한 것이다.
치아는 재생이 되지 않는 특성과 복잡한 발생 과정으로 인해 아직까지 형성 및 재생에 대한 메커니즘이 정확히 규명되지 않은 장기이다. 그러나 중간엽줄기세포 및 상피줄기세포의 상호작용이 치아 발생에 있어서 주요한 역할을 차지하고 있음은 보고되어 있다. 따라서 치아재생에 관한 다양한 후속 연구를 위해 상기 두 세포를 안정적으로 다량 확보하는 것이 주요현안으로 여겨지고 있다. 이에 현재까지 많은 연구는 탈락된 유치나 영구치로부터 상기 세포를 확보하여 이루어지고 있으나 세포의 안정적인 확보 및 배양에는 기술적 어려움이 있는 실정이다. 특히, 치아상피줄기세포는 분리 및 확보가 어려워 중간엽줄기세포에 비해 연구가 많이 이루어지지 못하고 있으며, 기존 연구들은 인간이 아닌 동물유래의 상피줄기세포를 주로 사용하고 있고 인간 유래 상피줄기세포를 이용한 경우에도 초기 배양한 세포를 이용하여 실험에 균일하게 세포를 공급하지 못하는 문제점을 가지고 있다.
이러한 문제점을 해결하기 위해 인간유래의 전능성줄기세포를 이용해 치계세포로의 분화를 유도한 연구가 이루어지고 있으며, 최근 들어 유도만능줄기세포의 개발로 이를 이용한 연구가 속속 보고되면서 전능성줄기세포의 치계세포로의 분화 가능성이 대두되고 있다(Tissue Engineering Part A 18.15-16 (2012): 1677-1685). 그러나 인간 배아줄기세포를 이용해 치계상피줄기세포로의 분화에 성공한 연구결과는 아직까지 보고된바 없다.
상기와 같은 종래의 문제점을 해결하기 위하여, 본 발명자들은 확립된 치계상피줄기세포주를 지지세포로 이용하여 인간 배아줄기세포주를 치계상피줄기세포로 분화시켜 인간유래 치계상피줄기세포주를 안정적으로 공급할 수 있는 기술을 개발함으로써 본 발명을 완성하였다.
이에, 본 발명은 상기 배아줄기세포에서 치계상피줄기세포로의 분화방법 및 상기 분화방법에 의해 제조된 치계상피줄기세포를 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 상기 치계상피줄기세포를 포함하는, 치아 재생용 세포치료제를 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 배아줄기세포를 지지세포 위에 올리고 배양하되, 상기 지지세포는 치계상피줄기세포인 것을 특징으로 하는, 배아줄기세포에서 치계상피줄기세포로의 분화방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 분화방법에 의해 분화된, 치계상피줄기세포를 제공한다.
본 발명의 일구현예로, 상기 배아줄기세포는 인간 유래의 것일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 지지세포는 HERS/ERM(Hertwig’s Epithelial Root Sheath/Epithelial Rests of Malassez)일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 지지세포는 미토마이신 C(mitomycin C)가 처리된 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 배아줄기세포는 상기 지지세포 위에서 7일 내지 21일 동안 배양되는 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 분화방법은 배아줄기세포를 지지세포 위에서 배양한 후 계대배양하는 단계를 더 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 분화된 치계상피줄기세포를 포함하는, 치아 재생용 세포치료제를 제공한다.
본 발명자들은 종래 분리 및 확보가 어려운 치계상피줄기세포를 얻을 수 있는 새로운 방법으로써 치계상피줄기세포주를 지지세포로 이용하여 인간 배아줄기세포를 치계상피줄기세포로 분화시키는 기술을 확립하였고, 상기 방법을 통해 분화된 치계상피줄기세포를 수득하였다. 따라서 본 발명에 따른 치계상피줄기세포로의 분화방법은 인간유래의 배아줄기세포주를 이용함으로써 안정적으로 인간유래의 치계상피줄기세포를 공급할 수 있으므로 치아 재생의학 분야에서 유용하게 이용될 것으로 기대된다.
도 1은 인간 배아줄기세포주인 H9 세포로부터 치계상피줄기세포로의 분화 프로토콜, 및 상기 프로토콜에 따라 분화시킨 배아줄기세포(differentiated H9)와 이를 계대배양하여 얻은 상피유사세포(Epithelial-like cells)의 세포 형태를 보여주는 현미경 사진이다.
도 2는 상기 분화 프로토콜에 따라 분화시킨 상피유사세포의 특성을 보여주는 결과로서, 도 2a는 상기 프로토콜의 마지막 과정인 계대배양 전(Before subculture)과 후(After subculture) 상피유사세포의 형태를 비교한 현미경 사진이고, 도 2b는 분화된 상피유사세포(H9-derived Epi-like cell) 및 상기 프로토콜에서 지지세포로 이용한 상피줄기세포인 HERS-SV40에 대하여 PCR을 통해 상피줄기세포 관련 유전자(E-cadherin, ABCG2, EpCAM, Bmi1, p63, 및 p75) 및 줄기세포 관련 유전자(Oct4, Nanog, 및 Sox2)의 발현 양상을 비교한 결과이고, 도 2c는 상기 2가지 세포에 대하여 FACS 분석을 실시하여 중간엽줄기세포 표지인자(CD10 및 CD29), 혈관내피세포 표지인자(CD31), 조혈모세포 표지인자(CD45 및 HLA-DR), 및 인간 MHC 표지인자(HLA-1) 단백질의 발현수준을 비교하여 나타낸 결과이다.
도 2는 상기 분화 프로토콜에 따라 분화시킨 상피유사세포의 특성을 보여주는 결과로서, 도 2a는 상기 프로토콜의 마지막 과정인 계대배양 전(Before subculture)과 후(After subculture) 상피유사세포의 형태를 비교한 현미경 사진이고, 도 2b는 분화된 상피유사세포(H9-derived Epi-like cell) 및 상기 프로토콜에서 지지세포로 이용한 상피줄기세포인 HERS-SV40에 대하여 PCR을 통해 상피줄기세포 관련 유전자(E-cadherin, ABCG2, EpCAM, Bmi1, p63, 및 p75) 및 줄기세포 관련 유전자(Oct4, Nanog, 및 Sox2)의 발현 양상을 비교한 결과이고, 도 2c는 상기 2가지 세포에 대하여 FACS 분석을 실시하여 중간엽줄기세포 표지인자(CD10 및 CD29), 혈관내피세포 표지인자(CD31), 조혈모세포 표지인자(CD45 및 HLA-DR), 및 인간 MHC 표지인자(HLA-1) 단백질의 발현수준을 비교하여 나타낸 결과이다.
본 발명자들은 종래 분리 및 확보가 어려운 치계상피줄기세포를 얻을 수 있는 새로운 방법으로써 인간 배아줄기세포를 치계상피줄기세포로 분화시키는 기술을 확립함으로써 본 발명을 완성하였다.
이에, 본 발명은 배아줄기세포를 지지세포 위에 올리고 배양하되, 상기 지지세포는 치계상피줄기세포인 것을 특징으로 하는, 배아줄기세포에서 치계상피줄기세포로의 분화방법을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어, “분화(differentiation)”란 초기 단계의 미분화 상태의 줄기세포가 각 조직으로써의 특성을 갖게 되는 과정을 일컫는 것으로서, 본 발명의 목적상 전능성을 갖는 배아줄기세포가 치계상피줄기세포로서의 특성을 지니게 되는 것을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어, “치계상피줄기세포”란 치아 형성을 위한 법랑모세포 및/또는 치아모세포로 분화가 가능한 세포를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어, “배아줄기세포(embryonic stem cell; ESC)”란 수정한지 14일이 되지 않은 포배기 배아의 내세포괴(inner cell mass)를 배양하여 얻은 세포로써 모든 조직의 세포로 분화할 수 있는 전능성을 지니는 세포를 의미하며, 이론상으로는 무한대로 세포분열 할 수 있다. 이러한 특성을 이용하여 배아줄기세포를 원하는 조직으로 분화시켜 조직을 재생하기 위한 분야에서 연구되고 있다. 본 발명에서 이용한 배아줄기세포는 인간유래의 배아줄기세포주인 H9이나, 인간유래의 것이라면 배아줄기세포의 종류가 제한되지 않는다.
본 발명에서 사용되는 용어, “지지세포(feeder cells)”란, 배아줄기세포의 미분화 상태를 유지하는데 기여하는 영양인자들을 분비하고, 세포 접촉으로 매개되는 미분화 유지 기작과 연관되어 있다고 알려져 있다. 지지세포에서 분비되는 신호전달 물질들은 배아줄기세포의 미분화 유지 또는 분화 개시를 조절하는데 기여한다. 지지세포로부터 분비되는 물질들은 Wnt(Wingless-type MMTV integration site family), BMPs(Bone Morphogenetic Proteins), TGF-β(Transforming Growth Factor-beta), 및 세포외기질(extracellular matrix) 등이 있다. 마우스 또는 인간 유래 다양한 지지세포를 이용하여 배아줄기세포 또는 유도만능 줄기세포로 분화시킨 보고들이 있다. 본 발명에서는 본 발명자들이 이전 연구를 통해 확립한 인간 영구치유래 일차배양 치계상피줄기세포인 HERS/ERM를 불멸화시킨 세포주를 지지세포로 이용하였으며, 상기 배아줄기세포를 지지세포 위에서 배양하기 전 미토마이신 C(mitomycin C)를 처리한 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 있어서, 상기 배아줄기세포는 상기 지지세포 위에서 7일 내지 21일, 보다 바람직하게는 14일 동안 배양하여 상피유사세포로 분화될 수 있으며, 이후 계대배양하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명자들은 실시예를 통해 상기 분화방법에 따라 배아줄기세포에서 치계상피줄기세포로의 분화를 유도하였다.
본 발명의 일실시예에서는, 상기 분화방법에 따라 인간 배아줄기세포주인 H9 세포로부터 치계상피줄기세포로의 분화를 유도하였고(실시예 1 참조), 분화시켜 얻은 세포에 대하여 현미경을 통한 형태관찰, 유전자 및 단백질 발현 양상을 분석한 결과 상기 세포가 상피세포의 특성을 지니는 것을 확인하였다(실시예 2 참조).
상기 실시예 결과로부터, 본 발명에 따른 분화방법을 통해 인간 배아줄기세포로부터 치계상피줄기세포로의 분화가 잘 이루어졌음을 확인하였다.
이에, 본 발명의 다른 양태로서, 본 발명은 상기 분화방법에 의해 제조된 치계상피줄기세포를 제공한다.
본 발명의 또 다른 양태로서, 본 발명은 상기 제조된 치계상피줄기세포를 포함하는 치아 재생용 세포치료제를 제공한다.
상기 세포치료제가 이용될 수 있는 질환은 치과경조직 질환인 치아우식증(dental caries), 교모증(attrition), 마모증(abrasion), 및 침식증(erosion)이 있으며 그 외에 치주염(perioperis) 등이 있으나, 치아 재생이 필요한 질환이라면 그 종류가 제한되지 않는다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1. 인간 배아줄기세포로부터 치계상피줄기세포로의 분화 유도
본 발명자들은 인간 전능성세포를 치계상피줄기세포로 분화시키기 위하여, 인간 배아줄기세포주인 H9 세포를 이용해 치계상피줄기세포로의 분화를 유도하였다. 보다 구체적으로, 영구치유래 일차배양 상피줄기세포인 HERS/ERM 세포의 세포주 HERS-SV40에 10 μg/ml의 미토마이신 C(Mitomycin C; MMC)(Sigma Aldrich, MO, USA, M4287)를 1시간 30분 동안 처리하여 세포분열을 억제한 다음, Trypsin-EDTA(Gibco, CA, USA, 25200) 처리하여 단일세포로 분리한 후 35 mm 배양 접시에 1 X 106개씩 분주하여 배양하였다. 24시간 후 물리적 방법으로 떼어낸 미분화 상태의 H9 클럼프를 상기 배양된 지지세포층 위에 얹고 KGM-2(Lonza, MD, USA, CC-3107) 배지에서 14일 동안 공동배양하여 상피줄기세포로의 분화를 유도하였다. 이후 분화된 상피유사세포에 Accutase(Merck millipore, MA, USA, SCR005)를 처리하여 단일세포로 분리한 후 새로운 배양접시에 옮겨 계대배양(subculture)하였다.
실시예 2. 인간 배아줄기세포로부터 치계상피줄기세포로의 분화 확인
2-1. 세포 형태 관찰
상기 실시예 1의 방법에 따라 분화된 상피유사세포의 형태를 관찰하기 위해, 계대배양 전의 상피유사세포(Before subculture)와 계대배양 후의 상피유사세포(After subculture)를 각각 광학현미경으로 관찰한 결과, 도 2a에 나타낸 바와 같이 미분화 상태의 H9 클럼프가 상기 지지세포와의 공동배양을 통해 상피세포와 유사한 형태의 세포로 분화되었고, 계대배양 후에도 세포 형태가 유지되는 것을 확인하였다.
2-2. 분화된 상피유사세포의 유전자 발현 양상 분석
상기 실시예 2-1의 결과에 더하여, 실시예 1의 방법으로 분화된 상피유사세포가 상피세포의 특성을 갖는지 알아보기 위해 PCR(polymerase chain reaction)을 실시하여 유전자 발현 양상을 분석하고자 하였다. 이를 위해, HERS-SV40 지지세포 및 계대 후 14일 동안 배양한 분화된 상기 상피유사세포에 Trypsin-EDTA를 처리하여 세포를 떼어내고 RNeasy Mini Kit(Qiagen, Germany, 74106)를 이용하여 총 RNA를 추출하였다. 다음으로, 상기 추출한 RNA를 주형으로 amfiRivert cDNA Synthesis Platinum Master Mix (GenDEPOT, TX, USA, R5600)를 이용해 cDNA를 합성하였으며, 상기 cDNA에 대하여 하기 표 1에 나타낸 각 유전자, 구체적으로 상피줄기세포 관련 유전자(E-cadherin, ABCG2, EpCAM, Bmi1, p63, 및 p75) 및 줄기세포 관련 유전자(Oct4, Nanog, 및 Sox2)에 특이적인 프라이머를 사용하여 증폭시켰다. 증폭 과정은 PCR 장비(T100TM Thermal Cycler, Bio-Rad, CA, USA)를 이용하여 94℃ 2분, (94℃ 20초, Tm 15초, 72℃ 30초)x cycles, 72℃ 5분의 조건으로 각각 E-cadherin, p63, Nanog, 및 Sox2는 Tm=55℃에서 35 cycles, Oct4는 Tm=57℃에서 35 cycles, ABCG2, EpCAM, Bmi1, 및 p75는 Tm=60℃에서 40 cycles, GAPDH는 Tm=60℃에서 28 cycles로 실행하였다. 이후 PCR 증폭산물은 전기영동을 실시하여 전기영동 겔 기록장치(Bio-profil X-press zoom2000, Germany, Vilber Lourmat)에서 확인하였다.
| 유전자 | 방향 | 서열(5'-3') | 서열번호 |
| E-cadherin | Forward | TGC CCA GAA AAT GAA AAA GG | 1 |
| Reverse | GTG TAT GTG GCA ATG CGT TC | 2 | |
| ABCG2 | Forward | CCA CAG GTG GAG GCA AAT CT | 3 |
| Reverse | TCG CGG TGC TCC ATT TAT CA | 4 | |
| EpCAM | Forward | GCT GGC CGT AAA CTG CTT TG | 5 |
| Reverse | ACA TTT GGC AGC CAG CTT TG | 6 | |
| Bmi1 | Forward | CAG CCC AGC AGG AGG TAT TC | 7 |
| Reverse | GGA TGA GGA GAC TGC ACT GG | 8 | |
| p63 | Forward | ATG TTG TAC CTG GAA AAC AAT GC | 9 |
| Reverse | GTG ATG GAG AGA GAG CAT CGA A | 10 | |
| p75 | Forward | ACC GAG CTG GAA GTC GAG | 11 |
| Reverse | CTC ACC GCT GTG TGT GTA C | 12 | |
| Oct4 | Forward | ACC CCT GGT GCC GTG AA | 13 |
| Reverse | GGC TGA ATA CCT TCC CAA ATA | 14 | |
| Nanog | Forward | CCT ATG CCT GTG ATT TGT GG | 15 |
| Reverse | TTC TCT GCA GAA GTG GGT TG | 16 | |
| Sox2 | Forward | GAC TTC ACA TGT CCC AGC AC | 17 |
| Reverse | GGG TTT TCT CCA TGC TGT TT | 18 | |
| GAPDH | Forward | GAT GCT GGC GCT GAG TAC G | 19 |
| Reverse | GCT AAG CAG TTG GTG GTG C | 20 |
실험결과, 도 2b에 나타낸 바와 같이, HERS-SV40 세포주와 분화된 H9 세포유래 상피유사세포(H9-derived Epi-like cell)는 상피줄기세포 관련 유전자인 E-cadherin, ABCG2, EpCAM, Bmi1, p63, 및 p75와 줄기세포관련 유전자인 Oct4, Nanog, 및 Sox2에서 모두 비슷한 발현 패턴을 나타내는 것을 관찰하였다. 상기 결과를 통해 분화된 상피유사세포가 상피세포의 특성을 나타내는 것을 확인하였다.
2-3. 분화된 상피유사세포의 단백질 발현 양상 분석
상기 실시예 2-2의 유전자 발현 분석결과에 더하여 단백질 발현 양상을 분석하기 위해, FACS 분석을 실시하여 세포 표지인자의 발현수준을 관찰하고자 하였다. 이를 위해, 상기 실시예 2-2와 동일하게 HERS-SV40 세포주와 H9 세포유래 상피유사세포(H9-derived Epi-like cell)를 배양한 후 Trypsin-EDTA를 처리하여 단일세포로 분리한 후 1% 포름알데히드(Formaldehyde)(Junsei, Japan, 69360-0380)를 처리하고 10분간 상온에서 세포를 고정시켰다. 다음으로 각각 세포에 확인하고자 하는 단백질에 특이적인 항체를 넣고 4℃에서 30분 동안 반응시켰으며, 상기에서 이용한 항체 및 처리 비율은 다음과 같다: CD29-PE (BD Bioscience, CA, USA, 555443) 1:50, CD10-PE-Cy5 (BD Biosciences, 555376) 1:100, CD45-FITC (eBioscience, CA, USA, 11-0459-73) 1:100, HLA-DR-APC (BD Bioscience, 559866) 1:100, CD31-FITC (BD Bioscience, 555445) 1:100, HLA-I-FITC (eBioscience, 11-9983-42) 1:50. 이후 각 항체당 10,000개의 세포에 대하여 FACS Callibur(Becton Dicknson. CA, USA)를 이용해 세포표면항원 분석을 실시하였으며 BD CellQuest Pro 소프트웨어를 이용해 결과를 분석하였다.
분석 결과, 도 2c에 나타낸 바와 같이 상기 두 세포는 동일한 단백질 발현 패턴을 보였는데, 보다 상세하게 중간엽줄기세포 표지인자 중 CD29는 대부분 발현되었으나 CD10은 발현되지 않았고, 조혈모세포 표지인자인 CD45 및 HLA-DR과 혈관내피세포 표지인자인 CD31은 발현되지 않은 반면 인간 MHC 표지인자인 HLA-I는 대부분의 세포에서 발현되는 것을 관찰하였다. 상기 결과를 통해 분화된 상피유사세포가 상피세포의 특성을 나타내는 것을 확인하였다.
상기 진술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.
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<210> 10
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> p63_Reverse
<400> 10
gtgatggaga gagagcatcg aa 22
<210> 11
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> p75_Forward
<400> 11
accgagctgg aagtcgag 18
<210> 12
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> p75_Reverse
<400> 12
ctcaccgctg tgtgtgtac 19
<210> 13
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Oct4_Forward
<400> 13
acccctggtg ccgtgaa 17
<210> 14
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Oct4_Reverse
<400> 14
ggctgaatac cttcccaaat a 21
<210> 15
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nanog_Forward
<400> 15
cctatgcctg tgatttgtgg 20
<210> 16
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nanog_Reverse
<400> 16
ttctctgcag aagtgggttg 20
<210> 17
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Sox2_Forward
<400> 17
gacttcacat gtcccagcac 20
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Sox2_Reverse
<400> 18
gggttttctc catgctgttt 20
<210> 19
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GAPDH_Forward
<400> 19
gatgctggcg ctgagtacg 19
<210> 20
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GAPDH_Reverse
<400> 20
gctaagcagt tggtggtgc 19
Claims (8)
- 인간 유래 배아줄기세포를 지지세포 위에 올리고 배양하되, 상기 지지세포는 치계상피줄기세포인 것을 특징으로 하는, 배아줄기세포에서 치계상피줄기세포로의 분화방법.
- 삭제
- 제1항에 있어서,
상기 지지세포는 HERS/ERM(Hertwig’s Epithelial Root Sheath/Epithelial Rests of Malassez)인 것을 특징으로 하는, 분화방법.
- 제1항에 있어서,
상기 지지세포는 미토마이신 C(mitomycin C)가 처리된 것을 특징으로 하는, 분화방법.
- 제1항에 있어서,
상기 배아줄기세포는 상기 지지세포 위에서 7일 내지 21일 동안 배양되는 것을 특징으로 하는, 분화방법.
- 제1항에 있어서,
상기 분화방법은 상기 배아줄기세포를 지지세포 위에서 배양한 후 계대배양하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 분화방법.
- 삭제
- 삭제
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020170107229A KR101957033B1 (ko) | 2017-08-24 | 2017-08-24 | 인간 배아줄기세포에서 치계상피줄기세포로의 분화방법 및 이의 용도 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020170107229A KR101957033B1 (ko) | 2017-08-24 | 2017-08-24 | 인간 배아줄기세포에서 치계상피줄기세포로의 분화방법 및 이의 용도 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20190021866A KR20190021866A (ko) | 2019-03-06 |
| KR101957033B1 true KR101957033B1 (ko) | 2019-03-11 |
Family
ID=65758471
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020170107229A KR101957033B1 (ko) | 2017-08-24 | 2017-08-24 | 인간 배아줄기세포에서 치계상피줄기세포로의 분화방법 및 이의 용도 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR101957033B1 (ko) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20240036891A (ko) | 2022-09-14 | 2024-03-21 | 연세대학교 산학협력단 | 줄기세포의 치아 조직으로의 분화 방법 |
| KR20240036890A (ko) | 2022-09-14 | 2024-03-21 | 연세대학교 산학협력단 | 줄기세포의 경조직으로의 분화 방법 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20160000836A1 (en) | 2013-02-05 | 2016-01-07 | Guangzhou Institutes Of Biomedicine And Health, Chinese Academy Of Sciences | Preparing tooth-like structure using stem cell |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007013430A1 (ja) * | 2005-07-29 | 2007-02-01 | Matsumoto Dental University | 歯の再生方法 |
-
2017
- 2017-08-24 KR KR1020170107229A patent/KR101957033B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20160000836A1 (en) | 2013-02-05 | 2016-01-07 | Guangzhou Institutes Of Biomedicine And Health, Chinese Academy Of Sciences | Preparing tooth-like structure using stem cell |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Front Physiol. 5:36 (2014.02.04.)* |
| Mol Cells. 31(4):355-60(2011.04.)* |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20240036891A (ko) | 2022-09-14 | 2024-03-21 | 연세대학교 산학협력단 | 줄기세포의 치아 조직으로의 분화 방법 |
| KR20240036890A (ko) | 2022-09-14 | 2024-03-21 | 연세대학교 산학협력단 | 줄기세포의 경조직으로의 분화 방법 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20190021866A (ko) | 2019-03-06 |
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