KR101930904B1

KR101930904B1 - 히알루로니다제를 포함하는 흑색종 예방 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR101930904B1
Application number: KR1020170057374A
Authority: KR
Inventors: 염창환; 이석찬; 노강산
Original assignee: 염창환
Priority date: 2017-05-08
Filing date: 2017-05-08
Publication date: 2018-12-19
Also published as: KR20180123322A

Abstract

히알루로니다제를 포함하는 흑색종의 예방 또는 치료를 위한 조성물에 관한 것으로, 일 양상에 따른 흑색종을 치료하기 위한 조성물에 의하면, 개체의 암 세포 증식과 암 전이를 억제하므로 흑색종을 효율적으로 치료하는데 사용될 수 있는 효과가 있다.

Description

히알루로니다제를 포함하는 흑색종 예방 또는 치료용 조성물{Composition for preventing or treating melanoma comprising hyaluronidase}

히알루로니다제를 포함하는 흑색종의 예방 또는 치료를 위한 조성물에 관한 것이다.

흑색종은 전체 피부암의 4%를 차지하나, 피부암으로 인한 사망의 80% 이상이 흑색종에 의한 것이다. 악성 흑색종은 림프관이나 혈관을 따라 뼈, 폐, 간 등 다른 장기들로 전이될 수 있으며, 전이성 흑색종 환자의 14%만이 5년 생존율을 나타낼 뿐이다. 흑생종은 국내에서도 인구 10만명 당, 1 내지 1.5명 정도의 환자수로 나타나며 해마다 증가하는 추세이다. 이와 같이 흑색종이 난치성을 나타내는 이유는 흑색종의 공격적인 성장과 전이를 촉진시키는 변화, 화학요법의 효과를 차단하는 메커니즘 때문인 것으로 알려져 있다.

흑색종의 치료법으로 지금까지 종양을 절제하는 수술, 항암화학요법, 방사선치료 등이 수행되어 왔고, 최근에 신체 스스로 암과 싸우도록 하는 치료제인 면역항암제가 사용되고 있으나 환자 생존율에는 큰 효과가 없는 실정이다.

이처럼, 흑색종은 조기에 발견하면 치료가 가능하지만 조기에 발견하지 못하면 임파선을 따라 급속하게 전이되며, 전이된 흑색종에 대한 치료방법이 없는 실정이다. 따라서, 흑색종의 효과적인 치료방법이 요구되고 있다

일 양상은 히알루로니다제(hyaluronidase)를 포함하는 흑색종의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

다른 양상은 히알루로니다제(hyaluronidase)를 포함하는 흑색종의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.

일 양상은 히알루로니다제(hyaluronidase)를 포함하는 흑색종의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에서 용어 "예방"은 상기 약학적 조성물의 투여에 의해 흑색종을 억제하거나 흑색종의 발병을 지연시키는 모든 행위를 말한다.

본 발명에서 용어 "치료"는 상기 약학적 조성물의 투여에 의해 흑색종의 증세가 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 말한다.

히알루로니다제(hyaluronidase)는 히알루론산을 가수분해하는 효소로서 탄수화물이나 글리코시드에 작용하여 글리코시드 결합을 가수분해하는 탄수화물 효소(carbohydrase)이다. 히알루로니다제는 뮤시나제(musinase)라고도 한다.

상기 히알루로니다제는 통상 포유류 동물 유래, 예를 들면 사람, 소, 양, 돼지 등에서 유래된 효소이거나, 포유류 유래 히알루로니다제를 미생물 또는 동물세포 또는 식물세포에 도입하여 발현된 재조합 히알루로니다제일 수도 있다. 재조합 히알루로니다제의 생산방법은 통상의 포유류 유전자의 재조합 방법에 따라 미생물 또는 동물세포 또는 식물세포에서 생산하는 방법과 동일하다. 또한 상기 히알루로니다제는 상업적으로 이용가능한 것일 수 있다.

흑색종(melanoma)은 멜라닌 색소를 만들어 내는 멜라닌 세포의 악성화로 생긴 종양으로서, 멜라닌세포가 존재하는 부위에서는 어디에서나 발생할 수 있고, 주요 발병 위치는 피부, 안구, 점막, 중추신경계이다. 흑색종은 피부암 중 전이를 가장 많이 일으키며 림프절, 뼈, 폐, 간, 비장 중추 신경계 등 어느 장기들로 전이될 수 있고, 주위 피부로 전이될 수도 있다. 　

본 발명에서 상기 흑색종은 악성 흑색종을 의미하는 것일 수 있으며, 예를 들면, 악성 흑색점 흑색종, 선단 흑자성 흑색종, 결절성 흑색종, 또는 표재 확장성 흑색종을 포함할 수 있다.

특정 이론에 제한됨이 없이, 상기 약학적 조성물은 암 세포의 증식을 억제하는 것이거나, 암의 전이를 억제하는 것일 수 있다. 일 구체예에서 히알루로니다제는 비멘틴, β-카테닌, 및 MMP9의 발현을 억제하고 E-카데린의 발현을 증가시키는 효과가 있음을 확인하였다. 상기 비멘틴, β-카테닌, E-카데린은 상피간엽이행 관련 단백질 마커로, 상피간엽이행은 상피세포의 성질로부터 간엽세포의 성질로의 전환을 뜻한다. 암이 진행됨에 따라 세포의 성질이 간엽세포로 변화하게 된다. 상피간엽이행에서 E-카데린의 발현은 상피세포 성질의 수준이 더 높음을 의미하고, 비멘틴, β-카테닌의 발현은 간엽세포 성질의 수준이 더 높음을 의미한다. 즉, E-카데린의 발현 증가는 정상 상태에 더 가깝다는 것을 의미하고 비멘틴, β-카테닌의 발현 감소는 정상 상태에 더 가깝다는 것을 의미한다. 따라서, 일 구체예에 따른 히알루로니다제는 암의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

상기 약학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 추가적으로 포함할 수 있다. 상기 희석제는 유당, 옥수수 전분, 대두유, 미정질 셀룰로오스, 또는 만니톨, 활택제로는 스테아린산 마그네슘, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 담체는 부형제, 붕해제, 결합제, 활택제, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 부형제는 미결정 셀룰로오즈, 유당, 저치환도 히드록시셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 붕해제는 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 전분글리콜산 나트륨, 무수인산일수소 칼슘, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 결합제는 폴리비닐피롤리돈, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈, 히드록시프로필셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 활택제는 스테아린산 마그네슘, 이산화규소, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다.

상기 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여 제형으로 제형화될 수 있다. 비경구 투여 제형은 주사제, 또는 피부외용제일 수 있다. 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제 및 캡슐제 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등을 포함하고, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 및 보존제 등이 포함될 수 있다. 경구 투여용 제형은 복용 단위당 약 0.1 ~ 1000 mg/체중kg, 0.1 ~ 800 mg/체중kg, 1 ~ 500 mg/체중kg 또는 100 ~ 300 mg/체중kg의 유효 성분을 포함할 수 있다. 이는 하루 1 내지 6회, 2 내지 5회, 3 내지 4회 투여될 수 있다.

상기 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르며, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 상기 약학적 조성물은 1일 0.0001 mg/kg 내지 10000 mg/kg의 양으로 투여할 수 있다. 상기 조성물의 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 또한 수 회 나누어 투여할 수도 있다.

상기 히알루로니다제는 당업계에 알려진 방법에 의하여 투여될 수 있다. 투여는 예를 들면, 복강내, 정맥내, 근육내, 경피 (transdermal), 점막, 코안 (intranasal), 기관내 (intratracheal) 또는 피하 투여와 같은 경로로, 임의의 수단에 의하여 개체로 직접적으로 투여될 수 있다. 상기 투여는 전신적으로 또는 국부적으로 투여될 수 있다.

다른 양상은 히알루로니다제(hyaluronidase)를 포함하는 흑색종의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.

상기 히알루로니다제를 포함하는 조성물, 및 흑색종에 대해서는 상기한 바와 같다.

상기 건강기능식품은 히알루로니다제 이외에 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적 (예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 명세서의 건강기능식품은 원료에 대하여 15 중량부 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 상기 건강기능식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 건강기능식품의 종류 중 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 건강기능식품 은 또한 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제, 또는 그 조합을 함유할 수 있다. 상기 건강기능식품물은 또한, 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육, 또는 그 조합을 함유할 수 있다.

다른 양상은 유효한 양의 상기 약학적 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 개체의 흑색종을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.

상기 약학적 조성물, 흑색종에 대해서는 상술한 바와 동일하다.

투여는 당업계에 알려진 방법에 의하여 투여될 수 있다. 투여는 예를 들면, 복강내, 정맥내, 근육내, 경피 (transdermal), 점막, 코안 (intranasal), 기관내 (intratracheal) 또는 피하 투여와 같은 경로로, 임의의 수단에 의하여 개체로 직접적으로 투여될 수 있다. 상기 투여는 전신적으로 또는 국부적으로 투여될 수 있다.

상기 개체는 포유동물, 예를 들면, 인간, 소, 말, 돼지, 개, 양, 염소, 또는 고양이일 수 있다.

상기 투여는 히알루로니다제를 개체당 0.1 mg 내지 1,000 mg, 예를 들면, 0.1 mg 내지 500 mg, 0.1 mg 내지 100 mg, 0.1 mg 내지 50 mg, 0.1 mg 내지 25 mg, 1 mg 내지 1,000 mg, 1 mg 내지 500 mg, 1 mg 내지 100 mg, 1 mg 내지 50 mg, 1 mg 내지 25 mg, 5mg 내지 1,000 mg, 5 mg 내지 500 mg, 5 mg 내지 100 mg, 5 mg 내지 50 mg, 5 mg 내지 25 mg, 10mg 내지 1,000 mg, 10 mg 내지 500 mg, 10 mg 내지 100 mg, 10 mg 내지 50 mg, 또는 10 mg 내지 25 mg을 투여하는 것일 수 있다.

일 양상에 따른 흑색종을 치료하기 위한 조성물에 의하면, 개체의 암 세포 증식과 암 전이를 억제하므로 흑색종을 효율적으로 치료하는데 사용될 수 있는 효과가 있다.

도 1은 히알루로니다제의 악성 흑색종 세포주 증식 억제 효과를 나타낸 사진이다.
도 2는 암을 이식한 마우스에서 히알루로니다제의 종양 부피 증가 억제 효과를 나타낸 사진과 그래프이다.
도 3은 암을 이식한 마우스에서 히알루로니다제의 암 전이 억제 효과를 나타낸 사진과 그래프이다.
도 4는 암을 이식한 마우스에 히알루로니다제를 투여한 후 헤마톡실린&에오신 염색을 통해 폐 조직의 병리적 상태를 관찰한 사진이다.
도 5는 암을 이식한 마우스에 히알루로니다제를 투여한 후 qRT-PCR을 통해 비멘틴의 발현 수준을 확인한 그래프이다.
도 6은 암을 이식한 마우스에 히알루로니다제를 투여한 후 qRT-PCR을 통해 E-카데린의 발현 수준을 확인한 그래프이다.
도 7은 암을 이식한 마우스에 히알루로니다제를 투여한 후 qRT-PCR을 통해 β-카테닌의 발현 수준을 확인한 그래프이다.
도 8은 암을 이식한 마우스에 히알루로니다제를 투여한 후 qRT-PCR을 통해 MMP9의 발현 수준을 확인한 그래프이다.

이하 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 하나 이상의 구체예를 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 히알루로니다제의 악성 흑색종 세포주 증식속도 억제 효과 확인

악성 흑색종 세포주인 B16F10 세포주를 한국 세포주 은행에서 분양 받았다. 분양 받은 B16F10 세포주를 10% Fetal Bovine Serum(FBS, Gibco BRL) 페니실린 1%를 첨가한 페놀레드 프리(phenol red free) Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM, JBI)를 배지로 하여 6 웰 플레이트에 1×10⁶ cells/well 농도로 분주하고 5% CO₂, 37℃의 습윤 배양기에서 배양하였다.

상기 세포주에 히알루로니다제(SHANGHAI LIANMIN BIOCHEMICAL CO., LTD)를 처리한 후 상처 치유 분석법(Wound healing assay)을 수행하여 0 시간, 6 시간, 24 시간, 48 시간 간격으로 B16F10 세포주의 증식속도를 관찰하였다. 구체적으로, 100 % 컨플루언시(confluency)로 깔려있는 세포 단층 위에 200μl 파이펫 팁을 사용하여 스크래치를 내었다. 1ml의 배양 배지를 이용해서 떠있는 잔여물과 스크래치 주변을 부드럽게 제거한 후, 2ml의 배지로 교체하였다. 스크래치 후 0 시간, 6 시간, 24 시간, 48 시간 간격으로 B16F10 세포주의 증식속도를 측정하는데, 측정 시에는 동일한 영역(field)을 측정하기 위해 관찰할 스크래치 부분과 가까운 영역을 플레이트 하단 바깥쪽에 마킹 (reference point) 하였다. Reference point를 마킹한 후 위상차현미경 하에서 세포를 관찰하고 원하는 스크래치 영역의 캡쳐 이미지를 얻었다. 첫 번째 캡쳐 이미지를 얻은 후, 플레이트를 다시 CO₂ 인큐베이터에서 배양하였다. 6시간 동안의 배양이 끝나면, 같은 방법으로 24 시간, 48 시간 후의 캡쳐 이미지를 얻었다. 이와 같이 관찰하여 얻은 이미지를 도 1에 나타내었다.

도 1에 나타낸 바와 같이, 히알루로니다제의 농도 의존적으로 악성 흑색종 세포주인 B16F10 세포주의 증식속도가 저하되는 것을 확인하였다. 따라서, 히알루로니다제는 악성 흑색종 세포주의 증식을 억제하는 효과가 있음을 확인하였다.

실시예 2. 히알루로니다제의 종양 성장 억제 효과 확인

히알루로니다제의 종양 성장 억제 효과를 확인하기 위해서, 하기와 같이 수행하였다.

B16F10 세포주 2.5×10⁵ 세포를 ICR 마우스(Dae Han Bio Link Co., Ltd., Korea)의 등에 상피주사하여 암을 이식하였다. 암 이식 1주차에 히알루로니다제 1500 IU를 마우스에 복강투여 하였다. 이 때 히알루로니다제 대신 PBS를 투여한 군을 대조군으로 하여 종양 부피를 측정하고 그 결과를 도 2에 나타내었다.

도 2에 나타낸 바와 같이, 히알루로니다제 투여군의 경우 히알루로니다제 투여 후부터 종양 부피가 증가하지 않은 반면 대조군의 경우 종양 부피가 계속 증가하는 것을 확인하였다. 암 이식 15일 후에는 대조군의 종양 부피가 히알루로니다제 투여군의 종양 부피에 비하여 5배 이상 증가하였다.

따라서, 히알루로니다제는 인 비보에서 종양 부피의 증가를 억제하므로 종양 성장을 억제하는 효과가 있음을 확인하였다.

실시예 3. 히알루로니다제의 암 전이 억제 효과 확인

히알루로니다제의 암 전이 억제 효과를 확인하기 위하여, 하기와 같이 수행하였다.

B16F10 세포주 2.5×10⁵ 세포를 ICR 마우스(Dae Han Bio Link Co., Ltd., Korea)의 꼬리에 정맥주사하여 암을 이식하였다. 암 이식 시점부터 히알루로니다제 1500 IU를 마우스에 복강투여 하였다(HYAL-처리군). 이 때 히알루로니다제 대신 PBS를 투여한 군을 대조군으로, B16F10 세포주를 이식하지 않은 군을 정상군으로 하여, 폐에 전이된 흑색종의 병소의 수를 측정하고 그 결과를 도 3에 나타내었다.

도 3에 나타낸 바와 같이, 꼬리에 주사한 B16F10세포주에 의해서 마우스의 폐에 암이 전이되었으며, 대조군의 폐에서 HYAL-처리군의 폐에 비하여 종양 수가 5배 이상으로 측정되었음을 확인하였다.

따라서, 히알루로니다제는 인 비보에서 암의 전이를 억제하는 효과가 있음을 확인하였다.

실시예 4. 히알루로니다제의 항암 효과 확인

히알루로니다제의 항암 효과를 확인하기 위하여, 하기와 같이 수행하였다.

B16F10 세포주 2.5×10⁵ 세포를 ICR 마우스(Dae Han Bio Link Co., Ltd., Korea)의 꼬리에 정맥주사하여 암을 이식하였다. 암 이식 시점부터 히알루로니다제 1500 IU를 마우스에 복강투여 하였다. 이 때 히알루로니다제 대신 PBS를 투여한 군을 대조군으로, B16F10 세포주를 이식하지 않은 군을 정상군으로 하였다. B16F10 세포주를 투여하고 2주 후 마우스의 폐 조직의 생검을 실시하였다. 헤마톡실린&에오신 염색을 통해 폐 조직에서 암의 병리적 상태를 관찰한 결과를 도 4에 나타내었다. 도 4A, 4B, 및 4C는 x100 배율로, 도 4D, 4E, 및 4F는 x200 배율로 관찰한 이미지이고, 도 4A와 도 4D는 정상군, 도 4B와 도 4E는 대조군, 도 4C와 도 4F는 히알루로니다제를 투여한 실험군이다.

도 4에 나타낸 바와 같이, B16F10 흑색종 세포주를 이식한 마우스의 폐 조직을 염색한 결과, 히알루로니다제를 투여한 마우스의 폐 조직에서 병리적 완화가 관찰되었음을 확인하였다.

또한, 상기와 같이 B16F10 세포주를 투여하고 2주 후에 마우스의RNA를 추출하고 정제하여 비멘틴, E-카데린, β-카테닌, 및 MMP9에 대한 qRT-PCR을 수행하였다. 구체적으로, 총 RNA는 마우스 폐 조직 시료를 액체질소 상에서 균질화하여 TRIzol 용액 (Molecular Research Center, Inc., USA)을 사용하여 정제하였다. 상기와 같이 정제한 총 RNA 3μg을 reverse transcription with M-MLV RTase (Bioneer, Korea)를 이용해 cDNA를 합성하였다. cDNA를 합성한 후 SYBR Premix Ex Taq (TaKaRa Bio Inc., Japan)을 사용하여 Rotor-Gene Q real-time PCR detection system (Qiagen, USA)에서 qRT-PCR을 수행하였다. 이 때 비멘틴, E-카데린, β-카테닌, 및 MMP9에 특이적인 프라이머를 사용하였고, 관심 유전자의 발현 수준을 보정하기 위하여 하우스키핑 유전자로 GAPDH를 사용하였다. 사용한 프라이머 서열을 하기 표 1에 나타내었다.

유전자	방향	서열
비멘틴	정방향	CAGATGCGTGAGATGGAAGA
비멘틴	역방향	TCCAGCAGCTTCCTGTAGGT
카데린	정방향	CAAGGACAGCCTTCTTTTCG
카데린	역방향	TGGACTTCAGCGTCACTTTG
β-카테닌	정방향	CCCTGAGACGCTAGATGAGG
β-카테닌	역방향	TGTCAGCTCAGGAATTGCAC
MMP9	정방향	AGTTGCCCCTACTGGAAGGTA
MMP9	역방향	ACACGGAGAATCTCTGAGCAA

각각의 qRT-PCR 수행 결과를 도 5 내지 8에 나타내었다.

도 5 및 도 7에 나타낸 바와 같이, 상피간엽이행(Epithelial-mesenchymal transition) 관련 단백질 마커인 비멘틴과 β-카테닌의 발현이 대조군에 비해서 히알루로니다제를 투여한 군에서 유의적으로 감소하였음을 확인하였다.

도 6에 나타낸 바와 같이, 상피간엽이행 관련 단백질 마커인 E-카데린의 발현이 대조군에 비해서 히알루로니다제를 투여한 군에서 증가하였음을 확인하였다.

도 8에 나타낸 바와 같이, 암 전이 마커인 MMP9(matrix metallopeptidase 9)의 발현이 대조군에 비해서 히알루로니다제를 투여한 군에서 유의적으로 감소하였음을 확인하였다.

따라서, 히알루로니다제는 상피간엽이행을 억제하며 암 세포가 본래 위치로부터 떨어지는 것을 방지하여 암의 전이를 억제하는 효과가 있음을 확인하였으므로, 우수한 항암 효과가 있음을 확인하였다.

Claims

히알루로니다제(hyaluronidase)를 유효성분으로 포함하는 흑색종의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 히알루로니다제는 암 세포의 증식을 억제하는 것인 약학적 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 히알루로니다제는 암 전이를 억제하는 것인 약학적 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 히알루로니다제는 비멘틴, β-카테닌, 및 MMP9의 발현을 억제하고 E-카데린의 발현을 증가시키는 것인 약학적 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 히알루로니다제는 복강내 투여용인 것인 흑색종의 약학적 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 흑색종은 악성 흑색종인 것인 약학적 조성물.
히알루로니다제(hyaluronidase)를 유효성분으로 포함하는 흑색종의 예방 또는 개선용 건강기능식품.
청구항 7에 있어서, 상기 히알루로니다제는 암 세포의 증식을 억제하는 것인 건강기능식품.
청구항 7에 있어서, 상기 히알루로니다제는 암 전이를 억제하는 것인 건강기능식품.
청구항 7에 있어서, 상기 히알루로니다제는 비멘틴, β-카테닌, 및 MMP9의 발현을 억제하고 E-카데린의 발현을 증가시키는 것인 건강기능식품.
삭제
청구항 7에 있어서, 상기 흑색종은 악성 흑색종인 것인 건강기능식품.